Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Роль парамиксовируса птиц второго серотипа в инфекционной патологии кур

На правах рукописи УДК 619:616. 98: 578. 831: 616-036. 22: 636. 52/. 58

Р Г Б Ой

• . :>ЕВ «335

КОЗАКОВ СЕРГЕЙ ЛЬВОВИЧ

РОЛЬ ПАРАШКСОВИРУСА ПТИЦ ВТОРОГО СЕРОТИПА В ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ КУР

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Покров, 1996

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии РАСХН.-

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный изобретатель Российской Федерации Лагуткин Н. А.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Куинир А. Т. (ВНИИВВиЮ,

кандидат биологических наук Калинина Т. А. (ГОБ).

Ведущее учреждение - Всероссийский Государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветп-репаратов ( ВГНКИ ветпрепаратов).

Заищта состоится 1 марта 1996 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д-120.61.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии РАСХН (601120, г. Покров, Владимирской области, ВНИИВВиЮ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИВВиМ.

Автореферат разослан 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

Г. П. Федоров

1-. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Особенностью современного птицеводства является высокая концентрация птицы на ограниченных площадях. в связи с чем возросло значение инфекционных болезней (Бакулов 1937). в том числе и обусловленных парамиксовирусами (1MB). Но если возбудитель ньюкаслской болезни (ПМЕ-1) и вызываемая им патология достаточно полно изучены, разработаны меры борьбы и средства специфической профилактики, то сведений в отношении остальных идентифицированных 3 серотипов птичьих ШЕЕ весьма ограничены, хотя представители группы ШВ-2 - ffiE-9 весьма широко распространены среди диких и домашних птиц во всем мире и насчитывают множество штаммов с различней пато-геккостьк [Alexander. 1SS6L Среди зтих серотипов на сегодняшний день наибольсее распространение имеют атаммы паромиксовируса птщ второго серотипа' (ШВ-2). Так. в Великобритании за 1930-81 г. г. было выделено более 60 изолятсв. в т.ч. ПМВ-1 - 13, ПЫВ-2 - 33, ПМВ-3 - 9 и ШБ-7 - один [ Alexander и др... 1932]. В США от импортированных птщ ШВ-2 изолировали в 46 ~ случаев;. ПМВ-3 - в 34 и вирус гриппа А - в 20 ~ случаев СЗеппе и др. ,1. Отмечено, что ПУВ-2 может бьггь причиной весьма значительных экономических потерь. Так. в Израиле ПЫВ-2 - инфекция индюков сопровождалась 907. летальностьс CLipkind и др. ,1979]. а во Франции отмечали снижение яйценоскости индеек на 50 % СAr.dral и др. .19351. повышенный отход цыплят и индюшат наблюдали ЕФ. Исаченко и др. 1975. BsnkGwski и др. I960. Lsn? и др. 1975.

Однако, роль ПНВ-2 также., как и других серотипов птичьих HUB, в инфекционной патологии птщ окончательно не выяснена и находится в стадют интенсивного изучения, о чем свидетельствует создание ассоциации ученых стран ЕЭС, Израиля, Японии и Судана.

В нашей стране данному вопросу не уделялось и не уделяется должного внимания, а имеющиеся отдельные публикации Жезмер ЕЮ. с сотр. 19S2, Изиееенко Е Е . с сотр. 1933. Ямниковой А. А. с сотр. 19S2 касаются вирусоносительства ПМВ-2 среди диких птщ, установленного попутно при изучении экологии вируса гриппа человека. Хотя, как по-

казывакуг исследования Родина Ю. В. и др. 1992, Рукавианико] 1994. Авдия Э. Î.L 19S5. ПМЕ-2 циркулирует во многих птицево; лОЗЯЙСТВЬХ России. EWiCTç С ТёМ, ДО НаСТОЯ^еГО ВрёКеНИ Не? ТёЛЬНЬК ДЗННЫл О "РОПИЗМе BiipyCS К Органам И ТК5НЯМ, ДИНоМИКё ТеЛООСраЗОБзНИЯ. ВЫДеЛёНИИ ВИРУС5 ИЗ ОрГаНИЗМа ПТИЦ И с ГС В ЛИЯ

КЯСНУК продуктивность, с разработке средств специфической прс тики.

Tc'S'i.'i' О С Г о C- J !•{. île /'-"'г г'',''-} СОЛёсНИ Кур: СС "С ЛОЗЛеННСЙ ПараМИ

.-----и - - - — г» -- ---- i*7 - -- - -Г ■ гтг-^'гт---t. -Л г-.».

^^■-•-'М HJiflLi, ûl'J^l'.' С J-'v-/К »HIC* lt ТТ UUCli,ll'A.ïl4'T,_ÎVJri

ЯЗЛЯтТ'-л SKT * аЛЬКЫМ.

Не ЛЬ И ЗЯЛ5ЧК tMC ЛеД.'ВаНПД. г!ССДгД-~ЗаНКЯ ПО ТеМс ДИССё] ПРОВОДИЛИСЬ С Цг; ЛЬ м НЗуЧтНПК ¡"---ЛИ ГП-ПЗ-П з ИпфеКЦПСКНСи ПаГЧ кур.

! i

ССКОВпЬГтЛ ЗоДоЧатг! НС С ЛеДОВаНП fi ЯВЛЯЛОСЬ". '

- изучение особенностей Г2.ГВ-2 инфекции в крупных птицевод!

КОМПЛЕКСал ;

- изучение тропизма ЖВ-2 к отдельным органам, динамики оС ванил антятел у инфицированных птиц я выделения вируса ими в ок вдув среду;

- изучение влияния ГМЗ-2 на формирование поствакцинального кктета протта ныскаслской болезни,

- выяснение влияния ПМВ-2 на мясную продуктивность цыплят-/

ЛёрОВ;

- конструирование лабораторных образцов инакгивирозанных вг против ПШ-2 инфекции бройлеров с использованием различных инг вантов и адысвантов и их испытание в промышленном птицеводстве.

Научная новизна работы заключается в том. что; г определены апизостологические особенности распростраи ШВ-2 инфекции среди кур;

- выявлены интерферируйте свойства ШЕ-2 в отнесении ви ныскаслской болезни in ovo.

- определен тропизм ПЫЕ-2 к различным органам цыплят.

- изучена динамика образования антител 7 ГС-5Е-2 инфицированных птиц и диссекинация возбудителя а окружающую среду..

- эксперт,ментально установлено отрицательное влияние ПМЕ-2 на мяскук продуктивность птицы,

- впервые сконструирован лабораторный образец икактивированной эмульгированной эмбриокаль но Я вакцины против ГЕ.Е-2 ИнфеКЦИИ ЦЫПЛЯТ" СроЯле роз.

Пс'ог-ТгГ^-'с-Кол зноЧгУг-^ость. В результате исследований изучена аПП" зоотсдогическая особенность распространения ПМВ-2 инфекции з птицеводстве.

ПрпГ'.'Т^плепа лабораторная *,^»*л ннактизир-озанной вакцины. к^то-р*ая была ЦоПоТгаНа с Положительным результатом э условиях Хозяйства.

Разработано временное наставление по применению' ИНВАК в промышленном птицеводстве.

Апробация работы. Результаты основных научных исследований доложена на научной конференция ЕНШЕВиМ. посвященной итогам 12-й пятилетки (1951). научной конференции ВШИБЕиМ 12-13 апреля 1992г. . научно-практической конференции "Профилактика н меры борьбы с инфекционными болезнями молодняка животных", Москва, 21-22 апреля 1993 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 печатных работ.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту.

- зпкзоотологические особенности ШВ-2 инфекции среди кур:

- данные экспериментальных исследований по изучение интерферирующих свойств ШЕ-2:

- результаты изучения некоторых аспектов ШВ-2 инфекции кур;.

- результаты разработки лабораторного образца ^активированной эмульгированной эмбриональной вакцины против ШВ-2 инфекции цыплят-бройлеров.

Объем и структура диссертация. Диссертация изложена на 137 страницах и включает введение, обзор литературы, собственные исследова-

кия. обсуждение полученных результатов, выводы и практические i ложения. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 10 рисунками. Сг литературы содержит 136 источк'.гков. в тем числе 123 икостра! Приложение на 5 листах".

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИИ

2.1. Материалы и методы

2.1.1. Материалы.

Рирууы. Эпизоотический стамм парам»1™.овируса птиц второго с типа ПМЕ-2\;-:ур;ща\СССГ\Г-об с инфекционной активностью S.25 1г БС.'ил получек из BTHKJI ветпрепаратов.

Из музея штаммов ЕНИИЕЕиМ получены.

- эпизоотический аггамм вируса кьскаслской болезни ИВ-1\к ца\ССС?\Т-53 с инфекционной активностью 9.27 It ЗИД 50/мл.

- вакцинный пггамм "Ла-Сота" вируса нъъкаслской Селезни с ак ностыс 9,00 I? ЗИД БО/мд.

Еирусы размножали на 10-дневных куриных амбриоках и в ра использовали нативнуто акстразмбрионалънус вируссодержап&х жидк (ЗЭЗЕ).

Сыворотки и диагностические наборы. Гипериммунная сыворот парашксовирусу птиц второго серотипа была получена на 30-дне цыплятах по методу предложенному Alexander и Collins (1931). Сп фическая сыворотка к вирусу ныскаслской болезни была взята из "Д ностического набора для идентификации вирусов болезни Ныасас, гриппа птиц", изготовленного Покровским заводом биопрепаратов. 46-21- 277-77.

В исследованиях также использовали разработанный и изготовле: во ВШВШВиЫ "Набор диагностический для обнаружения орто-'и п;

миксовкрусов птиц твердофазным иммуноферментным методом с помощью моноклональных антител".

Зкспертизный материал, С целью изучения распространения, течения, возрастных особенностей ШВ-2 инфекции нами были проведены вирусологические и серологические «следования 312 проб патматериала и 3133 образцов сывороток крови, доставленных в институт из 49 хозяйств. 23 краеа и областей России, а также из 9 хозяйств Молдовы, Узбекистана. Украины. Таджикистана.

Птица. Опыты проводили ка 1С-70-дневных цыплятах (.ясной и яичной пород и взрослых курах. Б:-е подопытные птицы были свободны от анти-гемагглктикинов к ПЗ.Е-1 и ГП-Е-2. Кормление и содержание птиц соответствовало ибПугПриклТым нормам.

";т;гпые .эмбрионы. 9-10-дкевные куриные эмбрионы (КЗ) поступали из АС "КурС'и Петушинской инкубаторно-племенной станции Владимирской области, благополучные в отношении инфекции, вызываемой пэрамиксови-

-русом-птиц-второго -серотипа.___________

Эритроциты. Использовали 0,7 ную суспензию эритроцитов, которые получали от петуха-донора по общепринятой методике.

Питательные среды, растворы. Забуференный физиологический раствор (pH 7.2-7,4), нормальная лошадиная сыворотка, мясопептонный бульон, мясопептонный агар, среда Игла НЕМ. среда Сабуро (бульон и агар).

Реактивы и препараты. Антибиотики; Сензилпеницшшга натриевая (калиевая) соль, стрептомицина сульфат. Адъювант гидроокись алюминия. парфюмерное масло с 14 Т. ланолина, адъсвант ВНИЯИ. Инактиванты; А-24 (теотрспик), дпмерзтиленимин, глутаровый альдегид ("Reanal"), медь сернокислая пятиводная, фенол, формалин, зфир диатиловый. Детергенты; твин-20 ("Serva").. твин-SO ("Serva"), тритон Х-100 ("Fluka AG"). Реактивы. 2,2-азиноди(35Тилбензотиазолинсульфоновой кислоты) диамониевая соль ("Serva"), казеин ("Merk"), . натрий лимоннокислый трехзвмещенный, натрий серноватистокислый пятиводный, натрий хлористый, перекись водорода.

2.1.2. 1/сГСДЫ

Кгльтивиговакие и титрований пасамиксовис-усов. Культивирован титрование пэрамиксовирусов осуществляли на 1С- дневных куриных рионах по общепринятой методике.

Для накопления парамиксовнрусов исходный вируссодеряаиучй м риал разводили 1.1СС0 в 3<ЕР (рН 7.2-7.4; и вводили в аллантои полость ГО з объеме 0.2 мл. После атого отверстия з ;.;есте введен пуге закрывали парафином, я эмбрионы пометали з тег-мотат.. где их К/бпр'оВаля при .5 С о г*дедпс-вк^»й оВоСКоЛЯ'гм. РяСт-ль о»юк течение первых 4 че^ев ^читали кесптцпфичссхог! я их не яспольз ля. Длительность инк.» бации инфицированных е-г-йриоков Сыла различ для ТМЗ-1 (кггаым Да-Сот а) и ГС®-2 - 72 часа, а для ПМВ-Г-к ца\0ССР\Т-53 - 56 часов. Песле атого- эмбрионы охлаждали при 16-13 часов. . дезинфицировали поверхность скорлупы, вскрывали и рильно отбирали ЗЗЖ, которую проверяли в РГА на наличие вируса делали объединенный пул. который до использования в дальнейшей р те хранили при температуре -40 С.

Для титрования вируса готовили последовательные 10-кратные ведения в пределах предполагаемого титра (до 1.10 млрд.}, каждо которых в объеме 0.1 мл инокулировали в аллантоиснус полость 4-х Также, как и при культивировании вирусов, эмбрионы погибшие в пе 24 часа, удаляли, т. к. гибель считали неспецифической, а оставп; - инкубировали от 56 до 72 часов в зависимости от штамма вируса, истечению срока инкубации эмбрионы охлаждали, отбирали ЗЗЗБ и ис довали их в РГА. Расчет инфекционной активности проводили по ме Еербера в модификации Ашмарина (1971) и выражали ее в ЭВД 5 или ЭЛД 50/мл.

Заражение подопытных птиц. Используемых в опытах цыплят и

инфицировал« одним из следующих способов: для перорального - готовили на SSP (рН 7.2-7.4) требуемое разведение вируса. К полученному объему добавляли 1С % сухого молока и тщательно перемешивали. Эту смесь в объеме 5. С мл вводили в ггсщзвод посредством шприца с резиновым шлангом. снабженного канюлей. При интраназальном заражении также готовили на 3IF разведения вируса и необходимую дозу инокулировали в ноздря птицы в объеме 0.1 мл.

Отбор проб патматериала от домашних птиц. Стбор проб проводили согласно методическим указаниям по лабо раторной диагностике гР'Ппгга и ныекад-Л'-Кой болезни птиц'. разработанных в^ ВНИЯВВпМ и ртКоь^пДо-вакнкх Г/В СССР в 197S году.

Стбог/ пгоб от подопытных птиц. В процессе проведения експеримен-тов от инфицированных птиц отбирали фарингиальные и клоачные мазки, пробы различных внутренних органов и крови для серологических исследований.

Фарингиальные (глоточные) и клоачные мазки получали в соответствии с " Временными методическими указаниями по отбору, консервированию и транспортировке проб от перелетных птиц из мест их обитания, для серологических и вирусологических исследований". разработанных Лагуткинкм Е А. с сотр. (1939). Полученные с помощью ватного тампона пробы поме!цали в пенициллиновые флаконы, в которых находилось 5,0 мл среды Игла-МЕН. содержащей 20 Z нормальной лошадиной сыворотки, 10 тыс. ЕД пенициллина и 10 мг стрептомищша на 1 мл (Kída Н. et al., 1932). Флаконы с содержимым поменяли в кельвинатор, где и хранили до исследования при температуре -40 С.

фи изучении тропизма ШВ-2 от убитых цыплят в отдельные флаконы отбирали мозг, трахею, легкие, печень, селезенку, почки, участки тонкого я толстого отделов кишечника, фаСрициеву сумку и хранили при -40 С.

Для серологических исследований от птиц брали кровь из подкрыль-цовой вены." получали сыворотку по общепринятой 1летодмке. шакгивиро-

вали ее npvi тЕ5 с в течение 30 минут и до исследования хранили -40 С.

3. Е. 6. Реиаоляция ШВ-2. Полученные фарпнгиальнке и клоач пробы Р'оЗг-юроЖжГвали, ватный тампок отлсптолп пинцетом н удаляли, надосадочной жидкостью инфицировали эмбрионы (4 отупи на одну nj Су).

ИТ-осы гнут;^КгГ»1л оргякоз птиц пocxz оттжз&кмя гсмог^кмзиров-;

В CT'TIrvf 00 СТсрИЛЪКЫМ »IS г»'«т ЛЬ s<r пКЬ'М СТЕКЛО*«»'. Д С С Я В Лл ЛИ 3CF. С/Дср/ 1шт 3 1 MJI. 10 Tbi<-. ¿Д Псnrlii/iwUIiinci Я 1С МГ СТГгПТ«./к»И11пНа. £0 С * С Птт К? Я1« С С Т о В ЛЛ Л ii На Чои ci ИГ**! КС- t'lnr^T KG n Тг- ^(П<т рЯТ УТ"^ • ЧсГО И/С Цт n nci ДО С "м-* .¿ЦГЯ аКЛ^ КпЛ г

руса.

Во всех случаях вирусозыделенке проводили на i0-дневных its. } атого исследуемый материал вводили в аллантоиснук полость в объ; 0.2 мл. Эмбрионы инкубировали при +37.Б С 120 часов с ежеднев? овоскспией. По истечению указанного срока КЗ охлаждали 16-13 час при +4 С, отбирали аллактоискуя жидкость. которую затем исс.чедов= в ?ГА. При наличии геьйггльтинации проводили >щекглфикацж вируса FITA со специфической сывороткой пли с моноклинальными антителами ТС КФА. Если гемагглзстгаацис не обнаруживали, то делали еще нескол ко дополнительных "слепых" пассажей.

Постановка реакции гемагглктинашги и реакции торможения гемаг ЛОТ1ТК5ЦИП. Содержание и парамиксовирусов в ЗЭК, те идентификаци наличие специфических ' антител к ним в сыворотках крови проводили поизщьс микро-РГА и микро-ИГА (бета-вариант). которые выполнял! 96-луночных полистироловых планшетах с V-обрззным дном по общеприн: тым методикам.

Выявление парамиксовирусов с помощьс ТФ ТТФИ. Идентификацию пар; миксовирусов проводили в соответствии с "Штодическими указаниями i выявление специфических антигенов при орто- и парамиксовирусных и фекциях'птиц с использованием моноклинальных антител твердефааш иммуноферментным методом (ТС IKCMV'.

Инактивация вируса. В опытах использовали аллантоискую жидкость куриных эмбрионов. инфицированных вирусом ПЗ.!В-2Ч.кур;!ца\СССР\Г-36. с геиагглктинкрукцей активностью 3.5 + 0.5 1од2. К вируссодержащей ал-лактопской жидкости добавляли икактивакты в конечной концентрации; А-24 (теотропин)-0,05 0.1 Т.. 0,5 %, глутаралъдегид 0,1 Т., 0,5 ДЗИ (димерзтиленимик) - 0,1 Z. дизтиловый эфир - I Б X. 10 т.. • сульфат меди (5 и 10 n;M), твин-30 -1 фенол - 0,5 1" и формалин - О.ГР. Инактивацию проводили при т4. т?_2 или +37 С от 3-х до 240 часов. После st . образцы исследовали на инфекдионяость и наличие гекагглетинина.

Поэтотовление опытных образцов вакцин против П*?В-2 .и^Еекции

ПТЬц. и ссВ»!«. »1 'jT ГТр

ироды применяемого адъюванта (гидроокись алсмккпя ;;ли кйсло' готовили сорбированные или эмульгированные лабо-

I

раторные экспериментальные вакцинные препараты.

Эмульгированную вакцину получали смешиванием равных объемов -инактивированной ШЕ-2-содержа:цей ЗЭК и двухкомпонентного адъюванта ЕНПЯП или парфюмерного масла с 14 I безводного ланолина. Смесь встряхивали вручную до образования однородной сметанообразной эмульсии.

Сорбированную вакцину готовили путем добавления к 9 частям инак-тивировакного вирусного сырья 1 части 6 i-ной суспензии гидроксала и последующего периодического шуттелирования при +4 С в течение 24 часов.

Готовые образцы вакцинных препаратов проверяли на стерильность, делая высевы на питательные среды (ША. НПБ, агар и бульон Сабуро) согласно ГССТу 23035-39.

Статистическая обработка результатов, {¿тематическую обработку полученных экспериментальных данных, включающую определение средней арифметической и квадратичного отклонения, вычисление коэффициентов корреляции проводили, как описано Ашмариным И. П. с соавт. (1971). Достоверность полученных данных определял}! по t-критерию Стыодента.

2. 2. РезуЛЬТаТЫ ИССЛедОВаКИй

2.2,1. Зпизоотологпческие особенности инфекции. обусловленной

Несмотря на 'го, что iiapcíKíriKCOBrip^с г.тнц STOpoiv ._ерст;:па впе£ был выделен от цыплят более 35 лет назад, до настоящего временя достаточно полкой характеристики икфекц^ги. обусловленной этим вое дителен. В сьяз'н с stiím иеми было изучено рсн-'лростракекие бол-í среди различных видов дог^зких и диких птиц. ~.onoí; с прир^дно-кл; тпческ'лми зонами, икфпциров^ккость n'rviiici з ce i

раста и направления при^уктивниити. влияние оЫраш^ВаК»

исследованием ^ызир^т^к кр^-вп домашни.*. йт.'Ц ТоК^з'1tH*_i , П1.Е-2 инфекция регистрируется, у кур, перепелов, индеек и уток, степень ее распространения среди зтлх птиц не оДгтакова. Если сп» фнчеекпе антитела к ГО.Ш-2 в диагностических титрах (1.1G и выае) ли обнаружены у кур яичных и мясных пород в 1010 (37.3 S) из ! сывороток, а у перепелов в 120 из 2-10 проб или 50 Z . то у индзок уток ати показатели были 5 из 70 и 2 из 145 га 7,14 " и 1,: соответственно. Ее обнаружено антител к ГЕЛЕ-2 а сыворотках гусе цесарок. При атом ГЫБ-2 инфекция отмечалась в 31 из 40 обследоза хозяйств (77.5 т.).

Кроме того, ка наличие антител к IE.3-2 были исследованы сыво ки беломорских моржей, байкальских нерп и морских чаек, но антиг агглютинины к атому вирусу (в титре от 1.16 до 1:64) обнару только у последних.

При вирусологическом исследовании патматериала было выде всего 6 изолятов ШВ-2. причем только от кур. Е материалах от ут индсков выявить 5тот вирус не удалось.

Установлено, что распространение ПМБ-2 инфекции ке ' связг

географическим месторасположением хозяйства. По серологическим данным предполагается, что вирус циркулирует у птиц во всех природно-климатических зонах России (Краснодарский и Ставропольский края. Волгоградская. Воронежская. Липецкая, иосковская, Пензенская. Рязанская, Тамбовская и др. области, Республика "¿ми). Вирус выделен из патматериала. доставленного из Краснодарского края, Липецкой, 'мзсксвсксй и Оренбургской областей. Как правило , возбудитель удавалось выделить в стадах, где был высокий титр антител к ПМЕ-2. дости-

Следует так:?е отметить тот факт, -.то пиЕ-" инфекцией поражается, главным образом, цыплята и куры мясных пор-од. Л' ^ сывор'оток крови, по луче нныл от кпх содержали, актигекйгглятикнкы к ГП-!В-2 и только в З.С1 * сывороток от кур. яичного направления, Максимальный титр антител к ПМЗ-2 у птиц мясного направления достигал значения, равного 1; 4096, в то время, как у кур яичных пород он не превышал значения -l.E4.-_____

При анализе данных серологических исследований 2313 куриньк сывороток, поступивших из 31 птицефабрики, неблагополучных по ИВ-2 инфекции, оказалось, что сыворотки крози от цыплят в возрасте до 30 дней в 12,9-17.6 X случаев содержат специфические антитела в диагностическом титре, что объясняется, прежде всего, наличием трансова-риальных антител. Еол1гсество положительно реагирующих птиц 31-60 дневного возраста увеличивалось до 47,1 - 43,3 причем основная 'масса сывороток в атом возрастном периоде получена от бройлеров, находящихся на откорме, тогда, как число сывороток (с титром 1.16 с Солее) от ремонтного молодняка даже в возрасте 61-120 дней не превышало 26.1-33,3 Птица более старших возрастов содержала антитела I ШВ-2 в сыворотках крови в 62,4-71,6 I случаев.

Процентное соотношение величин титра антител к ПМВ-2 в исследованных сыворотках крови в зависимости от возраста птиц было следую п^е. " цыплят до 30 дней наиболее часто встречающимся (5.37-3,96 Т.

диагностическим титром сыворотки является 1.15. а максимальный вень антнгеыаггльтининов достигал значения, равного 1.51". Б расте 31--15 и 45-60 дней среди положительных титров антител npei рут/г разведения 1.32 ( 14.55 и 1-.123 (12.42 Z) соответственно, максимальном титре 1.1024 и 1.4055. Сыворотки от ремонтного моле ка (61 - 120 дней) имеет наибольший титр 1.123, а среди значив преобладают 1.16 и 1.32 или 13.33 и 14.61 Z . ларактерной осс костью сывороток, полученных от 121-130-дневных -птиц, являете? что они з 34,6 ~ случаев содержат актигемагглютинины в развеДс от 1,123 до 1.4036. j кур, стерве 1с0 дней большинство сь»зо£ (lo.60- ¿.5.б-*- rnv^rítjT титр антител i. З-*-. а мокспмальнее их зка« 1.1024" 1. 4С56 обнаруживают только з ~ лро6.

Пр-ОотД-тНИОт* нами серологические обследование бройлеров выяв» то, что специфические актшч1«гглютинккы к Ш-СБ-г в титре 5,0 1с более обнаруживали только у цыплят, выращиваемых наполъно. При v точном содержании птицы среднегеометрический титр антител к ПЫЕ-превьшал 2,15 10р2, хотя у отдельных особей он достигал 3,0 -lci'2. Это, по всей видимости, объясняется тем, что инфициро! птицы происходит, главным образом, через желудочно-кишечный тра;-

2.2.2. Экспериментальное изучение некоторых Сиологичес^ свойств ПМВ-2 и вызываемой им инфекции ir. ovo и ir. vivo ^терферируюш^е свойства ПМЗ-2. Способность ШЕ-2 к интерфе ции изучали в опытах с ШВ-1 штамм Ла-Сота. Биологическая исхс ' активность атих вирусов была равна 3,25 Э1Щ 50/мл, 9,0 50/мл соответственно. В шахматном порядке смешивали равные об разведений ПМВ-2 (с 1:10 до 1:1 млн.) к ПМВ-1 (с 1.10 до 1:10 мл i затем смесью вирусов по 0,2 мл инфицировали КЗ и инкубировали га +37,5 С в течение 96 часов. После охлаждения эмбрионов проводили дикацию вирусов посредством FITA.

Как Показали исследования, вакцинный штамм Ла-Сота репродуи

. - 13 - ■ ~

\

ввлса в КЭ в присутствии ПМЕ-2 Л}шш тог Дек. rvkj" До Кпч>»Гц1»ру1иЩрл доза, первого вируса (Ла-Сота) Сыла больве в 562.4 раза и Солее, чем вируса второго серотипа. Если де концентрация вакцинного вируса Сыла больше концентрации ПМЕ-2 з Е.б раза., то. наблюдалось параллельное размножение обоих вирусов. При меньших концентрациях ГСАВ-1 отмечалось полное подавление его репродукции.

Таким образом. ПЖ-2 обладает интерферирующей активностью в КЗ а отношении вакцинного srrsMW» ПМВ-1 (Ла-Сота). что необходимо учитывать при изготовлении змбриональкой вакцины протиз ныскаслскоЛ болезни.

1?з"чен;;е злияния ГГМБ-2 на образование антител к ПМЗ-1. Учитывал высокуй пктерферпрукудую активность ПМЕ-2 з отношении ПЛ8-1 (зтамм Ла-С ОТci) Ь'сг К.гТ'ЯКЫл З^ОрПОНол. МОЖНО было предположить, что пара-миксозирус птиц второго серотипа будет оказывать негативное воздействие на индукцию антител против вируса ныскаслской болезни у цыплят. вакцинированных штаммом Ла-Сота. Ддя получения ответа на атст вопрос были выполнены следующие исследования.

Из цыплят-бройлеров были сформированы группы (по 5-9 голов), а которых птиц шскулировали по схеме;

Группа I - вакцинированы ПНВ-1 пггамм Ла-Сота.

Группа II - инфицированы ШВ-2\курица\СССР\1\5б.

Группа III - вакцинированы и инфицированы одновременно обоими вирусами.

Группа IV - вакцинированы ПМВ-1, через 24 часа инфицированы ПНЕ-2.

Группа V - инфицированы ПНВ-2. через 24 часа вакцинированы ШВ-1.

Группа VI - иктактные цыплята - служила контролем.

Цыплят прививали вакциной из штамма Ла-Сота и заражали ШВ-2 интраяазально. в дозах. 6,5 ЭИД 50/гол и 7.5 ЭЯД 50/гол соответственно. На 7. 14. 21. 23 и 35 день брали образцы крови, получали

- 14 - •

сыворотки и исследовали их в РГГА ка наличие антител к ПЫВ-1

пив-г.

На 7 день опыта в группе I средний геометрический титр антител ПЫЗ-1 составил 4,22 г 0.56 1о=2, а в группах III. IV. V он колес лете я от 2.63 г 0.47 1с='2 до Б. СО + 0.22 1о?2. На 25 день эти вели чины составили для группы I - 7.00 + 0.29 1о«2 и для групп III. IV

V - 6.29 i 0.43 - 7.33 т 0.23 1cí2. Из атого следует... что на все протяжении опыта при сравнения средних геометрических значений тит ров антител к ПЖ-t в группе I с титрами антител в группах III, IV

V достоверно значимого различия кет. Содержание 8 сыворотках кров цыплят гемагглют;гкин-икгкСиторов к ПМЕ-2 через неделю после начал эксперимента в группе II составило 3. >сО + П. 33 а в группа III. IV. V - 4,63 V 0,63 - 5,50 т 1,04 1о-:2. Через 5 недель эти по каз&тели соответственно Были 5,60 + 0,54 1о?2 и 5,11 т 0,99 - 6,75 0,53 1с?2, что говорит об отсутствии достоверного различия в уровня акт иге маг г лет ини на к ПЫВ-2 е группе II и группах III, IV, V.

В группе VI цыплята не имели специфических антител ни к ШВ-1 ни к ПИВ-2.

Аналогичные результаты были получены и при пероральном способ вакцинации и инфицировании цыплят атими вирусами.

Таким образом, нами получено экспериментально обоснованное дока зательство, что парамиксовирус птиц второго серотипа ir. vivo не ока зывает отрицательного влияния на формирование поотвакцинального им мунитета к вирусу болезни Ньюкасла, хотя интерференция его четю прослеживается в опытах на КЗ.

Изучение тропизма ШВ-2 к органам цыплят. Одной из составны частей диагностики инфекционных болезней является выявление атиоло гического агента.

Спиты по изучению тропизма прамиксовируса птиц второго серотип; проводили на цыплятах-бройлерах 45-дневного .возраста. Птиц инфицировали ПЫВ-2\курица\СССРМ\36 в дозе 3,0 1* ЭИД БО/гол орально и инт-

раназально и убивали по 3 головы из каждой группы на 2, 4. 5 я 3 день после заражения, отбирали пробы внутренних органов: головной мозг, трахей, легкие, печень, почки, селезенку, тонкий и толстый отделы кншечн;гка. фабрициеву сумку и проводили вкрусовыделение.

пнтрзказальноы заражении ПМЕ-2 выделяли из трахеи, легких и бурсы включительно по 3, 5 и 4 день соответственно, а в кишечнике возбудитель был обнаружен только ка 3 день. У птиц, инфицированных пероралько. вирус изолировали из трахеи, легких и бурсы по 6, 4 и 5 день соответственно, з гагаечкике пчрамиксовпрус присутствовал с 4 по 3 день. При обеих способах заражения в печени, селезенке, почках TIME-';- обнаруживали только на 2 день, зипусовыделение из тканей мозга

бЫЛи б«тЗ * ^ПтШНЫМ.

Из приведенных данных следует, что для диагностики ПМЗ-2 инфекции цыплят для вирусоаыделеккя необходимо отбирать трахею, легкие/ фабрициеву сумку, тонкий и толстый отделы кишечника.

Еыделение ШБ-2 инфицированными цыплятами и курами. Исследования по данному вопросу выполнены ка 35-дневных цыплятах яйценоской породы и курах породы белый леггорн, которых инфицировали оралько и иктраказально в дозах от 2,0 до 3,0 1е ЭТЦ 50/гол. Наличие вируса з клоачных и фарингиальных мазках определяли на протяжении 9 дней.

фи оральном инфицировании цыплят в дозе 2.0 lg ЭИД 50 /гол выделить вирус не удалось ни из клоачных, ни из фарингиальных мазков, что свидетельствует, по-видиюму. о недостаточности такой дозы. Увеличение инфицирующей дозы ПНВ-2 до 4,0-3,0 lg ЭИД 50/гол индуцировало стойкое выделение вируса с фекалиями с 4-го по 9 день включительно (срок наблюдения). В фарингиальных образцах Birpyc обнаруживали со 2-го по 5-6 день после заражения. У инфицированных взрослых кур вирус выделяли из клоачных и фарингиальных мазков только до 5 и 6-го

i

дня соответственно. Это говорит о том, что взрослая птица менее восприимчива к ПНВ-2. и вирус быстрее элиминирует из организма.

Результаты интраназального заражения птиц отличаются от инфицирования per cs. Во-первьос, инфицирующая доза, равная 2,0 ЭИД

50/гол для 35-дневных цыплят., при этом способе заражения индуцируеч приживление вируса в носоглотке. Ео-вторых, если при оральном инфицировании ПМЕ-2 выделяли как из клоачных, так и фарингиальных образцов.. то при интраназальном заражении вирус обнаруживали только I мазках из глотки., за исключением одного случая, когда при максимальной инфицирующей дозе (3.0 1р ЭИД 50/гол) вирус был выделен из клоачного мазка на 9 сутки. Е фарикгиальных мазках от взрослых кур зи-рус обнаруживали до 7 дня тогда, как во всех остальных опытных труппах цыплят тГо обкаруж^тзалп до 9 дня опыта (»-р^к наблюдения).. такяе может служить доказательством возрастной устойчивости к ПЫЕ-1 пкфе кц'г'И.

оброз1-' ооппя онтг.тел * г*" ' 1.' >1 игхч.ят . мпо'г'ц«1ц'1'ре1пкы

ПЬ1В-2. Процесс образования постикфекционных антител изучали на 35 дкеаных цыплятах. кАторым инокулировали интраказально или пероральн ПлВ-2\курица\СССР\1 \36 в дозах от 2.0 до 3.0 ЗИД 50/гол. Куры бы ли заражены аналогичными способами в дозе 3.0 ЗИД-50/гол. У пти через 3. 8. 9. 12. 15. 13. 25 и 36 дней брали кровь и исследовал полученные сыворотки на наличие антигемагглюткникоз к ПУБ-2.

Как показали исследования, пероральное заражение цыплят в доз 4,0-3.0 1й ЭИД 50/гол вызывает образование специфических антител титре 1.16 и выше. При атом на 6 день опыта титр антигемагглотининс у всех птиц не превышал значения 2,00 + 0,42 1о£2. Достоверно значи мое различие в содержании антител наблюдалось только на 9 день опь та. 4,30 т 0,44 1с£2 при инфицирующей дозе 3,0 Ц- ЭИД 50/гол и 2,С '+ 0,49 1о£2, 2,30 + 0,54 1од2 при дозах 4,0 и 6,0 1е ЭЯД БО/гс соответственно (Р < 0,025). С атого дня отмечается подъем антителе образования, максимум которого достигал на 15 день - 6.49 + 0,2 1о?2 - 6,75 + 0,55 1оё2. Шсле этого их уровень постепенно снижал«: и к концу опыта составил 3,75 + 0,41 1о£2 - 5,25 + 0,55 1ог2. Инф; цирование цыплят в дозе. 2,0 ЭИД 50/гол не индуцирует практичен образование гуморальных антител.

При интраназальном введении ПМВ-2 для достижения диагностически

го титра антител (1.16 и въше) требовалось увеличение инфицируютVI дозы вируса до 6.0-3.0 Ц- ЗВД 50/гол. На 9 день после заражения среднегеометрическое значение титра антител составляло 4.00 ± 0.75 -4.22 т 0.44 1о?2. достигая наибольшей величины 7.40 + 0.45 - 7.60 * 0.. 46 10р2 через 15 дней (с момента инфицирования) с последущим снижением ДО 4.40 т 0.45 - 4.50 £ 0.25 1с?2 к 35 дня.

Динамика образования антител у взрослых кур является сходной с таковой у цыплят и отражает закономерность достижения максимального значения титров антител к 15 дню при ПсроральК'.-м и интраказальном инфицировании 5.50 ¿0,55 1-;~2 и 5,СО + 0,42 1о«'2 соответственно, которые затем медленно снижались и через 21 день достигали среднеге-^МсгТриЧ'гСкоги титра, разного 4,50 ^ 0,30 1о?2 и 3,о0 0,53'

Проведенные исследования показали, что антигемагглютиникы к ТГгЗВ-2 в крови появляются через 5 дней и максимального уровня достигают на 15 день после инфицирования независимо от дозы заражения, пути попадания вируса в организм и возраста птиц.

Влияние ШВ-2 на продуктивность цыплят. Стол проведен на

37-дневных цыплятах яйценоской породы. Птиц произвольно разделили на 4 группы по 5 голов з каждой и пнф;гцировали рег сз ШВ-2\курица\ СССБ\1\36 в дозах от 2 до 3 1« Э11Д 50/гол. Сставсихся 1С цыплят использовали в качестве интактного контроля. Цыплят всех групп взвешивали до опыта, на 12 и 26 дни эксперимента, вычисляли среднюю величину привеса.

Через 12 дней после заражения средний прирост массы тела цыплят В- группах 1-4 был 23.75 + 6,00 - 34,75 + 2,94 г или в 2,72-3,29 раза меньше, чем у неинфицированньсс птиц. За 26 дней опыта привес цыплят контрольной группы составил 140,5 + 3,11 г, в первой группе 59,00 + 3,64 г, во второй - 43,23 + Б,57 г, в третьей - 16,00 + 3,69 г, а в четвертой наблюдали отвес ка 20.5 + 1,15 г - уменьшение массы тела по сравнению с первоначальной, т. е. отмечается доза-зффект, и при инфицирующей дозе, равной 3,0 ЭИД 50/гол, рост цыплят прекрапрет-ся.

2.2.3. Разработка икактивированной вакцины против ПМЕ-2 ик ции птиц

Доказано отрицательное влияние ШЕ-2 на мясную и яичную про; тивность птиц, однако средств специфической профилактики ШЕ-2 фекции до настоящего времени ни у нас, ни за рубежом не разработ: С учетом изложенного целью исследований явилось конструирование бораторного образца инактивироваккой закщгаы для иммунизации цы -бройлеров против ШВ-2.

Получение впГ'>опоГо сырья, ир-ов^дсны исследования по нзуч влияния температурного режима инкубации ШЕ-2 инфицированных Е накопление гемагглютинина в акстраамбриональной жидкости. Для ; 1С-дневные куриные амбрионы инфицировали ШБ-2 итамм курица\СС( 36 и инкубировали при температурах +34. +37,5. тЗЭ и +41 С в те! 72 часов.

i

Достоверного влияния температурного фактора на накопление агглютинина не отмечено, однако, при +41,0 С наблюдалась повьшь гибель инфицированных амбрионов (10 из 15) тогда, как при +: +37,5 или +39.0 С число погибших КЗ было незначительным. По. ШЕ-2 птиц предпочтительнее культивировать на КЗ при температур +34,0 С до +39,0 С.

Выбор инактивакта и режима инактивации. Установлено. что обр ка инфекционной аллантоисной жидкости глутаровым альдегидом во проверяемых концентрациях и температурных режимах полностью по? ла шфекционую и гемагглюпгшфусщую активность ШВ-2 за 3 часа.

Инкубация вируссодержашрй ЗЭЕ с 0,5 X препарата А-24 при н приводила к утрате инфекционных и гемагглпгинируидих свойств i через 3 часа тогда, как 10-кратное уменьшение концентрации А-5 понижение температуры до +4 С увеличивало длительность разр; гемагглсгинина до 24 часов.

Дизтшгавый зфир в конечной концентрации 5-10 * полностью i лял инфс-кционнссть вируса после 3-х часовой обработки при +3'

- 1У -

сохранением гемагглютинируодей активности. Увеличение же времени инкубации до 24 часов также не приводило к снижению гемагглюгинирующих свойств.

Воздействие 0,1 %-ного ДЗЯ'на вирус. как при -¡-22 С. так и при +37 С в течение 43 часов сопровождалось полкой инактивацией вируса тогда, как его гемагглитгинирутацая активность не снижалась на протяжении 72 часов (срок наблюдения).

Инкубация вирусного сырья с Б п;М сульфата меди при +37 С инакти-аировала П-Е-2 через 240 часов. С увеличением концентрации зтого вещества до 10 1г,и время. необходимое для подавления инфекционности вирусе. сокращалось до 72 часов. Гемагглютинируюп^я активность ПМЕ-2 в обоих случаях через 24 часа понижалась с 3.5 1с?2 до 3,0' 1о?2 и оставалась на зтом уровне до окончания опыта.

Действие 1 "-ного твина-80 на ПМВ-2 при +22 С сопровождалось повышением гемагглютинирукщей активности вируса с 8.5 1о§2 после 3 часов обработки до 13.0 1ср2 к 30 часу эксперимента. Изменение температурного режима с +22 С на +37 С приводило к резкому росту титра гемагглотшияа от 13.5 1о?2 после 3-х часового контакта с детергентом до 16,0-16,5 1о?2 к 6-24 часам, после чего к 30 часам уровень гемагглктинина понижался до 14,0 1с~2. Независимо от температурных условий инактивации, на протяжении 30 часов вирус продолжал оставаться инфекционным.

При обработке ПМВ-2 0.5 "-ным фенолом при +37 С в течение 24 часов вирус оставался инфекционным, и только продление срока инкубации до 43 часов приводило к его инактивации. Гемагглюгинирущие свойства вируса при атом сохранялись на протяжении 72 часов (срок наблюдения). С повышением содержания фенола до 1 7. - инактивация вируса в аллантоисной жадности наступала через 24 часа, но титр гемагглктинина по-прежнему оставался неизменным, равным 3,0 1о?2.

Воздействие на вирусный материал 0,06 7. формалина в течение. 24 часов сопровождалось потерей как инфекционных ,так и гемагглютиниру-юцих свойств ШВ-2.

Таким образом, инактивирующим действием в отношении парамиксов руса птиц второго серотипа обладали все (за исключением твина-2 изучекные нами препараты. Однако, вследствие неблагоприятного вс действия на гемагглютинин А-24, глутарового альдегида. формал>: названные вещества в производстве вакцины использованы быть не к гут.

Выбор адъюванта. Одним из важнейших условий обеспечения высо^ иммуногенности инактнвирсвакных вакцин является выбор высокоафф* тивного адтюванта. Нами при конструировании инактквированкой вакц; (ИНВАК) против парамикссвируса птиц второго серотипа были пспыт; ГСА. масляный адгювант ЕВСТГ и парфюмерное масло. Для этого к i русному сырью, инактивированному 0.1 * ДЭИ или 5-1С ¡>>!ъ сульфата 1 ди, или 1,0 ~ фенола, добавлял;! указанные зыке адъкванты и готов • опытные лабораторные образцы вакцин. .

Изученные ГСА-вакцины представляли собой прозрачные жидкости рыхлым осадком, при встряхивании которых образовывалась равномер быстрооседающая взвесь, что существенно осложняло применение а препаратов.

При применении адъюванта ШШ. несмотря на продолжительное реме шив ание, вакцины расслаивались на водную и масляную фазы,, и атому при использовании их необходимо было периодически встряхват

Вакщша с парфюмерным маслом при использовании в качестве инг тивантов 5-10 mit сульфата меди или 1 Z фенола были сметанообраг консистенции, устойчивыми при хранении при +4 С в течение 4-х ш дев (срок наблюдения). Однако, вакщша из вирусного сырья, инакп рованного 0,1 * ДЭН, была не стабильна и расслаивалась на 12 ) после амульгирования. Шатому перед применением ее требова: взбалтывать.

Образцы вакцин проверяли в зкспериментальном хозяйстве ] российского научно-исследовательского и технологического инстн птицеводства (ЭХ ННИТИП) на 13-дневных цыплятах-бройлерах, свобо, от антигемагглктининов к ПМБ-2. препараты вводили подкож»

дорсолькуь область пен в дозе 0,5 мл однократно или двукратно с 2-х недельным интерзалом. На 14 и 23 дни посла первой и на 14 день после второй вакцинации от цыплят брали кровь, получали сыворотки и исследовали з РТГА на наличие антчгемагглктининоз.

Результаты исследований показали, что через 14 дней после однократной вакцинаций, наибольший титр антигемагглютининов к ПМВ-2 5,33 г 0.33 - 5.20 т 0.33 1с-?2 Ьыл выявлен в сыворотках крови цыплят. имм> низироваккых Г'-А-вакциной. У птиц, вакцинированных препаратами с адъювантом РРТта' ;; парфюмерным маслом, титра антител были соответственно 2.20 * 0.33 - 4.20 £ 0,3-3 1с~2 и 4,40 £ 0,54 - 5,40 +

П СС 1- -п О,

На 23 день после вакцинации в сыворотках крови бройлеров, привитых ГОД-вакцинам;!, содержанке антигемагглютининсз снижалось до 3,50 £ 0,55 -.5,20 + о,9б 1Ск2. V цыплят, иммунизированных образцами вакцин, содержащих парфюмерное касло, к 23 дню также отмечалось достоверное снилгние уровня специфических антител до 2,66 + 0,27 - 4,75 + 0,41 1о=2. Напротив, величина титра антител к ШВ-2 у птиц, привитых ИНВАК, включающими в себя адгевант ЕТШВД, была выше на 23, чем ка 14 день после прививки и составляла 4.00 + 0,47 - 5,30 + 0,37 1од2.

После двукратного применения вакцин в сыворотке крови цыплят всех групп отмечалось повышение уровня антигемагглютининов к ПМЗ-2 до 4,00 + 0,79 - 6.Б0 т 0,56 1С£2.

Таким образом, испытанные образцы вакцин близки по своей иммуно-генности, однако вакцины с парфюмерным маслом сохраняли однородность при 4-х месячном хранении, что исключало неточность в дозировке из-за неравномерного распределения антигена.

Сценка аффективности применения экспериментального образца вакцины в условиях птицефабрики. Эффективность применения разработанной нами кнактивирсваннсй сульфатом меди эмульгированной вакцины против параииксовируса птиц второго серотипа оценивали иммунизацией 8 тысяч 12-дневных цыплят-бройлеров в ЭХ ЕШТИП.

Вакцину вводили подопытным цыплятам подкожно б дорсальную 0( ласть иен в дозе 0,5 мл двукратно с интервалом в 14 дней. Контрол. служили 16 тысяч 14-дневных бройлеров.

Опытная и контрольная птица 'содержались напольно с идектичн] кормлением и уходом. Периодически (через 14 дней) проводили выборе ное взвешивание по 50 голов и отбирали образцы крови для серолог ческого исследования. Количество павших цыплят регистрггровали еже невно.

Полученные результаты свидетельствуото том. что в первые'4 кед ля выращивания бройлеров различие в смертности цыплят опытной контрольной группы было минимальным и составляло около 1 \. прпч первая иммунизация цыплят не вызывала псствакцикальной реакции, дальнейшем смертность резко возросла, что обусловлено возкпкнозекг у бройлеров колибактериоза (из патматериала выделен патогенный штг Е. col i). За пятую неделю выращивания, гибель опытных и контроль! цыплят достигла 11,43 и 10,45 7. соответственно. Максимальный от: птицы наблюдали в б- и 7-недельном возрасте, в ато время пало сос ветственно 24,00 и 22,97~ опытных цыплят, а также 37.05 и 35.60 ' контрольных. К концу 3 недели смертность понизилась среди вакцини] ванного поголовья до 17,39 7. тогда, как у неиммунизированного - • составила 29,93 7. .

За весь период выращивания среди привитых пало 61,70 * цыпля1 а в контроле -. 77,90 т., т.е. на 16,20 7. больше.

Кивая масса цыплят опытной и контрольной групп на день вакци ция составляла соответственно 169,0 г/гол и 193,0 г/гол. Чэрез дней этот показатель был на уровне 507,0 и 505,0 г/гол т.е. прир массы составил 333,0 г/гол в первой группе и 312,0 г/гол во втор Спустя 2 недели после второй прививки взвешивание показало, -средняя масса опытного цыпленка достигла 973,0 г, а контрольного •940,0 г, т.е. она в последнем случае была ниже на 33,0 г/гол. На вериающем этапе выращивания вакцинированные цыплята весили по 11? г/гол. а невакцйнированные - 1120,0 г/гол.

- гз -

Титр специфически:-: антигемагглютининов к парамиксовирусу птиц второго серотипа у опытны;: и контрольны:-: цыплят до вакцинации были равны 2,5 и 2,7 1о?2., Писле первой иммунизации титгч антител к ПТ.(В-2 достигали 7.2 ;г оставались, не смотря на второе введение вакцины, близкими по значении к предыдущим (7,3 1сг2) ес,е 2 недели, затем титр актигемагглвтикиков снижался до 5,2 1о?2. У цыплят контрольной группы вследствие ПМВ-2 инфекции отмечено увеличение титра специфи-

f т " - ' '»Г-«* — —IT .»П - TT ^ * 1 . <0

ЧС'.ГЛЛ cvrii,iiT4l О .

1 оХ/''-i <„'0раЗиМ. и^нЫтанпт лаб^ратирног*-' '.-бг-озцсу инакп^эири'Вакчой аму ль г про ганке й вакцины против ПМВ-2 инфекции на базе Зл ВНУШИТ показало. что прижненпе ?акинкы снижает паде:ч среди бройлеров на 15.2 ~ при увеличении средней .siBoft массы цыплят на 70.С г> гол и величины их привеса на г/гсл по сравнен*по с анолстнчнг^ми показателями у птиц контрольной группы.

3. ЕЬЕСДЫ

1. Инфекция, обусловленная парамиксовирусоч птиц второго сероти-па, зарегистрирована в большинстве природно-климатпческих зон России. от Республики Яомк до Краснодарского края. Возбудитель циркулирует среди кур, перепелоЕ и чаек. При атом антигемагглютишшы к ШВ-2 обнаруживали у 42,47 X кур мясного направления, тогда как у птицы яичной породы этот показатель не превышал 3,03 Z.

2. Единственным патогномичным признаком у цыплят-бройлеров при ПИВ-2 инфекции является отставание в росте и развитии, обусловливающее снижение мясной продуктивности до 27,4 Z, поэтому ШВ-2 может быть отнесен к одному из агентов, вызывающих "синдром плохой адсорбции корма".

3. Парамикссвирус птиц второго серотипа _интерферирует размноже-

I 1

ние вакцинного штамма ПУВ-1 (Ла-Сста) только in ovo, в организм* цыплят ПМВ-2 не оказывает отрицательного действия на формировали, поствакцикального иммунитета к вирусу ньскаслской болезни.

4. При диагностике ПМВ-2 инфекции для выделен;«! вируса от убиты

;i павших цыплят следует отбирать трахея, легкие. фабрициеву cyi тонкий и толстый отделы кишечника, суспензией из которых инокулщ куриные эмбрионы. Идентификацию вируса проводят в РТГА или Т5 1Ш

5. В производстве вакщгны для инактивации 13.03-2 целесообрг использовать 0.1 « ДЭИ, 5.0-10.0 п;Ч сернокислую медь или 0.5-1. фенол, а в качестве адгюванта - ГСА. парфюмерное масло либо маел? адъювант ВКИЯЯ

6. Применение инактизированкой эмульгированной вакцины прс П143-2 инфекции цыплят-бройлеров индуцирует образование специфичес антител в титре 7.2-7,3 1о«2. увеличивает сохранность птицы на 1 X . а ее привесы - на 6.3 * по сравнению с группой контрольных i лят з условиях неблагополучного по этому заболеванию хозяйства.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Сконструирована инактивировакная амульгированная амбрион; кая вакцина против ТЫВ-2 инфекции цыплят-бройлеров.

2. Разработано временное наставление по применению инактивз ванной эмульгированной эмбриональной вакцины против ПУВ-2 raiet цыплят-бройлеров.

5. СПИСОК РАЕСТ. СШ'ЕЛИКСВАННЫХ ПС ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Козаков С. JL Влияние параыиксовируса птиц 2-го серотипа репродукцию вакцинного штамма "Ла Сота" в куриных эмбрионах // 1 росы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии; Vi риалы науч. "конф. ВНИИВВиМ, 13-13 апр. 1S92 г. - Покров, 1992. - ' - С. 155-156.

2. Лагуткин Е А., Козаков С. JL Влияние парамиксовируса птиц 5

серотипа на образование антител к ньюкаслской болезни // Вопросы,

терикарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии : Матери'

науч. кокф. БНШШВиМ. 13-13 апр. 1992 г. - Шкров.1992. - 4.1. ■ 1Б6-1Б7.

3. Казахов С. Л. Дпяаинка образования антител к ШЕ-2 у кур '.', цыплят // Актуальные запросы ветеринарной Еирусологни : Материалы науч. - практ. конф. E-CCÍEEIÍÍ " Классическая чума свиней - неотложные проблемы науки и практики ". - Покров, 19S5. - С. 159-150.

4. Кизаков С. JL Определение тропизма парамиксозпруса второго ое-ротпна С ПЫЕ-2) у цыплят // Актуальные вопросы ветеринарией вирусологии : Материалы науч. - практ. кенф. ЕНШГЕЕиМ " Классическая чума сз'.шй - неотложные прсблеьщ науки и практики - Шкроз, 1395. -С. ieo.

5. Разработка и испытания ккактизпровакной вакцины против аага-мкксовируса птиц второго серотипа 1. Выбор икактиванта и режима инакгтации / С. .1 Козаков. H.A. Лагуткин. ¡0. Ф. Калантаекко, Б. IL дотерев//' Актуальные вопросы ветеринаркой вирусология : Материалы науч. - 'практ. конф. ЕНИИЕЕиЫ " Классическая чума свиней - неотложные проблемы науки и практики ". - Покров, 1995. - С. 160-161.

6. Разработка и испытания инактивированней вакцины против пара-миксовируса лт;ец второго сёротипа 2. Выбор адъеванта и оценка ишу-ногенньк свойств / С. Л. Козаков, ЕА. Лагуткин, Ю.Ф. Калантаенко, В. И. Жэстерэв // Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии : Материалы науч.- практ. конф. ЕНИИЕЕиЫ " Классическая чума евшей - неотложные проблемы науки и практики". - Покров, 1995. - С. 151-162.

7. Козаков С. Л., Лагуткин Е А. Кммукогенность парамиксовируса птиц второго серотипа (ПМВ-2), инактивированного глутаровым альдегидом (ГЛА) // Вирусные болезни сельскохозяйственных животных: Тез. докл. Есерос. науч. - практ. конф., 17-21 апр. 1995 г. - Владимир, 1995. - С. 282.

S. Распространение инфекционных болезней в птицеводческих хозяйствах по данным лабораторной экспертизы / Е'А. Лагуткин, Е Е Смирнов, ЕЕ. Белоусов, С.Л. Козаков, С.А. Горячева // Вирусные болезни сельскохозяйственных животных: Тез. докл. Есерос. ' науч. -практ. конф., 17-21 апр. 1995 г. - Владимир, 1995. - С. 2£8.