Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Роль парамиксовируса птиц второго серотипа в инфекционной патологии кур

На правах рукописи

--------------------УДК--619:616. 98: 578. 831: 616-036. 22: 636. 52/. 58

РОЛЬ ПАРАШКСОВИРУСА ПТИЦ ВТОРОГО СЕРОТИПА В ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ КУР

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

КОЗАКОВ СЕРГЕЙ ЛЬВОВИЧ

Покров, 1996

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии РАСХН.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный изобретатель Российской Федерации Лагуткин И. А. •

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук Куонир А.Т. (БНИИВВиЮ, кандидат биологических наук Калинина Т. А. (ПЗБ).

Ведущее учреждение - Всероссийский Государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветп-ре паратов (ВГНКИ ветпрепаратов).

Защита состоится 1 марта 1996 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д-120.61.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии РАСХН (601120, г. Покров, Владимирской области, ВНИИБВиМ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИБВиМ.

Автореферат разослан п2бп -1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук Г. П. Федоров

1-. ВВЕДЕНИЕ

актуальность те мы. ССОбвНКОСТЫО современного ПТИЦеВОДСТВл является веская концентрация птицы на ограниченных площадях, в связи о чем возросло значение инфекционных болезней (Баку-лов 1937), з том числе и обусловленных парамиксовирусами(ПНЕ). Вз если возбудитель ньякаслекой болезни (ПЫВ-1) и вызываемая им патология достаточно -полно изучены, разработаны меры борьбы и средства специфической профилактики. то сведений в отношен™ остальных идентифицированных 3 серотипов птичьих Ш.!Е весьма ограничены, хотя представители группы ПМЕ-" - ПШ-9 весьма широко распространены среди диких и домашних птиц зо всем мире и насчитывают множество штаммов с различной пато-геннсстьк [Alexander. 1SS53. Среди этих серотипов на сегодняшний день наибольсее. распространение икект штаммы паромиксовируса птиц второго серотипа'(ПЫЕ-2). Так. в ВеликЬбритании за 1920-81 г. г. было выделено Солее 60 изолятов, в т.ч. ПМВ-1 - 13, ШВ-2 -33, ПЫВ-3 - 9 и ШЕ-7 - один [Alexander и др. ,19323. В США от импортированных птиц ШВ-2 изолировали в 46 ~ случаев. ШВ-3 - в 34 и вирус гриппа А - в 20 т. случаев СЗепг.е и др., ]. Отмечено, что ПЫЕ-2 может бьггь причиной весьма значительных экономических потерь. Так, в Израиле ПМВ-2 - инфекция индюков сопровождалась 90% летальностью CLipkind и др. ,19793, а во Франции отмечали снижение яйценоскости индеек на 50 % CAndral и др.,19353, повышенный отход цыплят и индюшат наблюдали Е Ф. Исаченко и др. 1975, Bsnkowski и др. I960, Lang и др. 1975.

Однако, роль ПМВ-2 также, как и других серотипов птичьих ШВ, в инфекционной патологии птщ окончательно не выяснена и находится в стадии интенсивного изучения, о чем свидетельствует создание ассоциации ученых стран ЕЭС, Израиля, Японии и Судана.

В кашей стране данному вопросу не уделялось и не уделяется должного внимания, а имесщиеся отдельные публикации Жгзмер Е. ¡0. с сотр. 19S2, Цэисеенко ЕЯ. .с сотр. 1933, Ямниковой А. А. с сотр. 1932 касаются вирусоносительства ПМВ-2-среда диких птиц, установленного попутно при изучении экологии вируса гриппа человека. Хотя, как по-

казывак/г исследования Родина Ю. 3. и др. 1S92, Рукьвианикоьг 1994; Амдия Э, I.L 1935. ПЫЕ-2 циркулирует во многих птицевода ХОЗЯЙСТВАХ России. Вместе С ТёМ. ДО КаСТОЯ^еГО Времени КсТ у тельных данных 'о тропизма вируса к органам и тканям, динамике тедсобразовония. выделения вируса из организма птиц я ¿го влиян ».ясную продуктивность, о разработка средств специфической про<$ тики.

Таким образом, изучение болезни кур. обусловленной парамик

РУСОМ нТИЦ ST'-С^Г'-' vcpOTiiiici Я ОПССОба С Wh L'.'i'i KG'Л ПрофпЛЗК

является актуальным.

"ель я ?алачк исследований. Исследования по теме диссер проводились ^ ^гглыс и?у-.тнлк pv-ли ъ инфекционной пато

кур.

Ссковньми задачами исследований являлось; '

- изучение особенностей rp.iB-2 инфекции в крупных птицеводч комплексах.

- изучение тропизма IS.E-2 к отдельным органам, динамики об; ванил антител у инфицированных птиц и выделения вируса ими в ок< ицух среду;

- изучение влияния ГМВ-2 ка формирование поствакцинального \ нитета против ньгааслской болезни.

- выяснение влияния ШВ-2 на мясную продуктивность цкплят-i леров-.

- конетруировакяе лабораторных образцов инактивированных вг против ПМБ-2 инфекции бройлеров с использованием различных инг вантов и адьквантов и их испытание в промышленном птицеводстве.

ручная новизна работы заключается в том. что:

- определены апкзоотологические особенности' распростраи ШВ-2 инфекции среди кур;

- выявлены интерферирукдие свойства ШЕ-2 в отношении вя ныскаслской болезни in ovo:

- определен трог,',ism ГП.Ш-2 к различным органам цыплят-.

- изучена динамика образования антител у ШЕ-2 инфицированных птиц и диссекинация возбудителя в окружающую среду;

- экспериментально установлено отрицательное ВЛИЯНИе Ш2"2 на мяскув продуктивность птицы.----------

- впервые сконструирован лабораторный образец инактнвированной --эмульгированной амбриокалькой вакцины против ШВ-2 инфекция цып-лят-бройлероз.

ПС'огСТriЧ'ткая тъ. В результате исследований изучена. апп-

зоотологическая особенность распространения ПмЕ-2 инфекции з птицеводстве.

пгз лабораторная ■ ~тг г"л икактивиР'^ЗаппОй закцикы. кото * рая была испытана с положительным результатом в условиях хозяйства.

Разработано зремеккса наставление по применению' ИНЕАК в промышленном птицеводстве.

Апробация работы. Результаты основных научных исследований доложена на научной конференции ВНШШЕиМ, посвяп^нной итогам 12-й пятилетки (1'351). наглой конференции ШВГВВнМ 12-13 аг.реля 1992г. . научно- практической конференции "Профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями молодняка животных", Москва. 21-22 апреля 1993 г.

Публикации. 1Ь теме диссертации опубликовано 3 печатных работ.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

- апкзоотологические особенности Щ.Ш-2 инфекции среди кур;

- данные экспериментальных исследований по изучению интерферирующих свойств ШВ-2;

- результаты изучения некоторых аспектов ШВ-2 инфекции кур;

- результаты разработки лабораторного образца инактивированной эмульгированной эмбриональной вакцины ^ против ШВ-2 инфекции цып-лят-брейлеров.

Объем я структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах и включает введение, обзор литературы, собственные исследсва-

кия. обсуждение получекных результатов. выводы и практические пр. ложения. Fa6üT& иллястрирована 20 таблицами и 10 рисункам»?. Спи литературы содержит 136 источников, в тем числе Д23 иностранн. ПрИЛОДсКИе Н5 5 ЛИСТол.

2. СОБСТВЕННЫЕ 11ССЛЕДСВАЖЯ

2.1. Материалы и м£тоды

2.1.1. Материалы.

иИрУС oí. ЗпИ30\_'Т15ЧеСКИй UTTclKiW ííapaMiíKi.OS"ipyca ПТИЦ ВТОРОГО Ce

tots. ПЖ-2\курица\СССР\1'-36 о инфекционной активностью Б.25 SO.Vui получек из ЕГНКИ ветпрепаратоз. Из музея птаммов ЕНШШВиН получены.

- апизоотический штамм Еируса ньскаслской Селезни ПУВ-1\К5 ца\СССР\Т-53 с инфекционной активность» 9.37 le 31Щ 50/мл.

- вакцинный иггаш "Ла-Сота" вируса ньккас-лской болезни с ara ноетыс 9,СО lg ЭИД 50/т.

Еирусы размножали на 1С-дневных куриных амбриоках и в ра( использовали нативнув акстраамбриональну» вируссодержаа&х жид к;

(зад.

Сыворотки и диагностические наборы. Гипериммунная еыворот! параыиксовирусу птщ второго серотипа была получена на 30-дна] цыплятах по методу предложенному Alexander и Collins (1931). Сш фическая сыворотка, к вирусу ныскаслской болезни была взята из "Д ностического набора для идентификации вирусов болезни Ньгаас. гриппа птиц", изготовленного ГЬкровсккм заводом биопрепаратов. ' 46-21- 277-77.

В исследованиях также использовали разработанный и изготовле: во БШИЕВиК "Набор диагностический для обнаружения орто-'и п.

МИКСОБКруСОВ ПТИЦ ТВерДО$а»ным ИММУНО^ермеHTным МеТОДОМ С ПОМОЩЬЮ

моноклинальных антител".

Зксперткзный материал. С целью изучения распространения. тачания. зоэрастньк особенностей ШВ-2 инфекции нами были проведены вирусологические и серологические «следования 312 проб патматериала и 3133 образцов сывороток крови, доставленных в институт из 49 хозяйств. £3 краев v; областей Foccvm. а также из 9 хозяйств Молдовы. Узбекистана. Украины. Таджикистана.

Птиц-. Сггыты проводили .на 1С-7С~дкевкы>: цыплята* мясной и яичной пород и взрослы;-: кура:-;. Все подопытные птицы были свободны от анти-rеuarvле-тикинов к ГП.1Б-1 и ШВ-2. Кормление и содержание птиц соот-втт.-тзовало общепринятым коркам.

Куриные .эмбрионы. Э-10-дневные куриные эмбрионы (КЗ) поступали из ДО "Курс";! Петушинской инкубаторно-племенкой станции Владимирской области., благополучные в отношении инфекции, вызываемой парамиксови-русом птиц второго серотугпа.

Эсптрошгты. Использовали 0.7 7,- ную суспензкс зритроцитов. которые получали от петуха-до нора по общепринятой методике.

Питательные среды, растворы. Забуференный физиологический раствор (рН 7.2-7.4). нормальная лошадиная сыворотка. мясопептонный бульон, мясопептонный агар, среда Игла МЕН. среда СаСуро (бульон и агар).

Реактивы и препараты. Антибиотики; Сензилпенициллин натриевая (калиевая) соль., стрептомицина сульфат. Адъсвант гидроокись алши-ния, парфюмерное масло с 14 Г. ланолина, здысвант ВНИЯИ. Инактиванты: А-24 (теотропин), димерзтшккимин, глутаровый альдегид ("КвапаГ), медь сернокислая пятиводная, фенол, формалин, афир дизтиловый. Детергенты. твин-20 ("Serva"). твин-SO ("Serva")., тритон Х-100 ("Fluka AG"). Реактивы. 2,2-азинодп(35тилбензотиааолинсулъфоковой кислоты) диамсниевая соль ("Serva"), казеин ("térk"). натрий лимоннокислый трехзаме ¡ценный. натрий серноватистокисльй пятизодный. натрий хлористый, перекись водорода.

2.1.2. Ыетоды

Игльтивисовакке и титрование пасамикЕРвирУсов. Культигнровани ТНТрОЕаКИе парамиКСОВИРУСОВ С0УЛ.-тСТЗЛЯЛИ на 1С- ДНеВНЫХ куриных 5 рНОНаХ ПО ССЦсирг|пЛТОн МеТОДИКе.

ДЛЯ наКОПЛеКПЯ ПараМИКСОВПрУСОВ ('СХОДНЫЙ ВИрУССОДерДаЩКЙ Ма риг./, разводили 1.1СС0 з ЗСР (р.Ч Т.2-7.4) н взодгии в аллантоис ПОЛОСТЬ ГО 3 Объеме С." МЛ. Г^СЛ-; 370Г0 ОТВерСТИЯ В «еСТе ВЗеДсКИ

путе закрывали парафином.. и эмбрионы поме кали з термотат, где их

К/ ПрИ .5 С с ^ЯигДптВпип -^ВССКОПИеЛ. ТЧ^тЛЬ о г*,С/р "¡ОНО

ТгЧеККе ПгрВЫл 24 "ЛСОВ СЧПТаЛП НсСПеЦПфИЧеСКОЛ VI ИХ не ИСПОЛЬЗО ЛИ. Длитель

для ПМБ-1 (штамм Ла-Сота) и Г2-ГВ-2 - 72 часа., а для ПМБ-1\ку ца\СССРч-Т-БЗ - 56 'часов, П;;оле етого амбрионы охлаждали при т 16-13 часов. . дезинфицировали поверхность скорлупы, вскрывали и с рильно отбирали ЗЭК, которую проверяли в РГА ка наличие вируса, делали объединенный пул. который до использования в дальнейшей ра те хранили при температуре -40 С.

Для титрования вируса готовили последовательные 10-кратные р, ведения в пределах предполагаемого титра (до 1.10 млрд.). каждое которых в объеме 0.1 мл инокулировалк в аллактоисну» полость 4-х ] Также, как и при культивировании вирусов, эмбрионы погибши в пер; 24 часа, удаляли, т. к. гибель считал;! кеспецифнческой. а оставив - инкубировали от 56 до 72 часов в зависимости от штамма вируса, истечению срока инкубащгл эмбрионы охлаждали, отбирали ЗЭЖ и исс. довали их в РГД. Расчет инфекционной активности проводив по мете Еербера в модификации Ашмарина (1971) и выражали ее в ЭИД 50. или ЭЛД 50/мл.

I

Заражение подопытных птиц. Используемых в опытах цыплят и I

инфицировал: одним из следующих способов; для перорального - готовили на SCF ÇpH 7,2-7.4) требуемое разведение вируса. К полученному объему добавляли 1G ~ сухого молока и тщательно перемешивали. Эту смесь в объеме 5.С мл вводили в пишевод посредством шприца с резиновым шлангом. снабженного канйлей. При интраназальном заражении также готовили на GïF разведения вируса и необходимую догу пнокулирозали в ноадрс птицы э объеме С, 1 цл.

Стбоь проб патжтериала от домашних птиц. Стбор ¡¡роб проводили согласно (летсдическ.им указаниям по лабо раторно« диагностике гриппа и hi'icko'cjicrc'ïi болезни птиц". разработанных ео BHjuTEBhW и рекомендованных ГУВ CGC? в 197" году.

От б о' пгоб от полопытных птиц. Б процессе проведения експеримен-тоз от инфицированных птиц отбирали фарингиальные и клоачные мазки, пробы различных внутренних органов и крови для серологпческих 'исследований.

Фарингиальнке (глоточные) и клоачные мааки ползали в соответствии с " Временными методическими указаниями по отбору., консервирования и транспорт1фозке проб от перелетных пт!щ ¡га мест их обитания., для серологических и вирусологических исследований", разработанных Лагуткинкм Е А. с сотр. Г1939). Полученные с помощьг ватного тампона пробы помести в пенициллиновые флаконы, в которых находилось 5.0 мл среды Игла-UEU, содержащей 20 " нормальной лошадиной сыворотки, 10 тыс. ЕД пенициллина и 10 мг стрептомицина на 1 мл (Kida Е et al., 1932). Флаконы с содержимым помещали в кельвинатор, где и хранил;! до исследования при температуре -40 С.

Цри изучении тропизма ПЫВ-2 от убитых цыплят в отдельные флаконы отбирали мозг, трахее, легкие, печень, селезенку, почки, участки тонкого и толстого отделов кишечника, фабрициеву сумку и хранили при -40 С.

Для серологических исследований от птиц брали кровь из подкрыль-цовой вены, получали сыворотку по общепринятой методике, инактивиро-

вали ее при +Е6 С в течение 30 кинут и до исследования хранили npi -40 С.

3.5.6. Реиаодяиия ПМВ-2. Шлучеккь:е Фарингиальные и клоачиь« пробы разг-иражгШоЛ*', ватный Tawn^n откидали пинцетом и удалили. < кадосадочной жидкостью инфицировали эмбрионы (4 штуки на одну проСу).

Пробы внутренних органов птиц после оттаивания гомогенизировал:

N

в ступке со стерильным Псмелъчекпьм стекло«.*, добавляли содержа' еий з 1 мл. 10 тыс. ЕД пенициллина и 1С мг стрептомицина. Г.^лучекны^

С С "» Птг пс fi»» ».^оТсгВ Jul ЛЬ Ha t* ^ici^c» ItPfi ru.• гл'пrwT п п Тт pcvTУр^ * Ги^'«. Л»

Чс ГС ? Га rl КстДОСп.ДОл WZ аОЛЪЗСоАЛм ДЛЯ ВЫД<- К tin НИ'

Р yz

во вс с л слуполл в v у с g s ь». rl с- л «г п г • <9 проводили по 1днсвных дл

атого исследуемый материал вводили в аллантоиснук полость в объем. 0.2 мл. Эмбрионы инкубировали при +37.5 С 120 часов с ежедневно: овоскопией. По истечение указанного срока га охлаждали 15-13 часо при +4 С, отбирали аллантоиснус жидкость. которую затем исследовал в ?ГА. При наличии гемагглктинации проводили идентификаций вируса FT ГА со специфической сывороткой или с моноклональныш антителами ТС КФА. Если гемагглЕтинациЕ не обнаруживали, то делали еще кесколь ко дополнительных "слепых" пассажей.

Постановка реакции гемаггдргинашги и реакции торможения гемагг лотинации. Содержание и парамиксовирусов в ЗЭК., их идентификации наличие специфических антител к ним в сыворотках крови проводили i помощью микро-IT А и микро-РГГА (бета-вариант). которые выполняли : 96-луночных полистироловых планшетах с V-оСраэкым дном по общеприня тым методикам.

Выявление парамиксовирусов с помощью ТФ ИШ Идентификацию пара миксовирусов проводили в соответствии с "Методическими указаниями п выявлению специфических антигенов при орто- и парамиксовируеных ин фекциях птиц с использованием моноклинальных антител твердофазны иммуноферментным методом (ТС Ш0*\

Ккактквацпя вируса, В опытах использовали аллантоисную жидкость куриных эмбрионов, инфицированных вирусом кур;гца\СССР\36. с генагглктинирукцей активностью 3.5 г 0.5 1и§2. К вируссодержащей ал-лактонсной жидкости добавляли инактивакты в конечной концентрации: — А-24-(теотропин)-0,С5 п.1 г.. 0.5 глутаральдегид 0.1 О,Б ДЗИ (дамератиленикик) - 0,1 дизтйловый"зфир -—1- - - Б ■сульфат меди (5 и 10 гг,М). тайн-30 -1 фенол - 0.5 11 и формалин - '-Ьекпгзацда проводили при т4.т22 или +37 С от 3-:-: до 240

часоз. После этого, образцы исследовали на инфекционкость и купчие гемагглягиннка.

Г^пготсзлечуте опытных образцов вакцин против Д.Ш-2 .инфекции

птиц. В зависН'.'остп от природы пр-и^еняемого ад'ь^занта (гидроокись

алЕминкя '.тли масло) готовили сорбированные или эмульгированные лабо-

(

раторные экспериментальные вакцинные препараты.

Эмульгированную вакцину получали смешиванием равных обгемов инактявированной ШВ-2-содержащей ЗЭК и двухкомпонентного адъюванта ЕНКЯИ или парфюмерного масла с 14 Т. безводного ланолина. Смесь встряхивали вручную до образования однородной сметанообразной эмульсии.

Сорбированную вакц;шу готовили путем добавления к 9 частям инактивированного вирусного сырья 1 части 6 7,-кой суспензии гндроксала и последующего периодического щуттелирования при +4 С в течение 24 часов.

Готовые образцы вакцинных препаратов проверяли на стерильность, делая высевы на питательные среда (ША. ЫПБ, агар и бульон Сабуро) согласно ГССТу 23035-39.

Статистическая обработка результатов. Математическую обработку полученных экспериментальных данных, включающую определение средней арифметической и квадратичного отклонения, вычисление коэффициентов корреляция провод;ш1, • как описано Ашмариным И. П. с соавт. (1971). достоверность полученных данных определяли по 1-критерию Стьюдента.

2. 2. Результаты исследований

2.2.1. Зпиаоотологическке особенности инфекции. обусловленной

»1и

КеСятОТрЯ Hó ТО.. ЧТО ПараМИКСОБИР^С ПТИЦ ЬТOpCiV ^срОТИПЯ ВПсрЗ

был выделен от цыплят более 35 лет назад., до настоящего временя н достаточно полкой характеристики инфекции. обусловленной этим возб дителем. В связи с о т ¡ í г! квмИ было изучено распространение болез среди различных видов домашних и диких птиц,. о я о ^ с природпо'кдим типтсккми зеками. икшНЦ51ровстИ'-"-Ть птviцы в г*сгВг*1^ríí'f'j»-'гн uT ^е ьо раста и направления продуктивности. влияние Тс-хнологп»* о^ра^дивакип

"сЛсДизакнем cyB'jpoTvK кр«_-ви д^%*аитИл *■ тi "Ц -".таК'^зитН1-», ГИ.2-2 инфекция регистрируется, у кур-, перепелов, индеек vi уток, степень ее распространения среди атнх птиц *не одинакова. Если cneí. фтееские антитела к ПЖ-2 в диагностических титрах (1.16 и выке) í ли обнаружены у кур яичных и мясных пород в 1010 (37. S %.) из Zf. сывороток, а у перепелов з 120 из 240 проб шк 50 % , то у икдзохо; уток 5тя , показателя были 5 из 70 и 2 из 145 или 7,14 ~ и 1,3' соответственно. Be обнаружено антител к ГКБ-2 в сыворотках гусей цесарок. При атом ГЫВ-2 инфекция отмечалась в 31 из 40 обследован; хозяйств (77.5 %).

Кроме того, ка наличие антител к 15.3-2 были исследованы сывор. ки беломорских моржей, байкальские нерп и морских чаек, но антиге] агглютинины к атому вирусу (в титре от 1.16 до Í;64) обнаруж только у последних.

При вирусологическом исследовании патматериала было выдел всего 6 изолятов ШВ-2. причем только от кур. Б материалах от уто

индюков выявить STOT вирус ке удалось.

i

Установлено, что распространение ПМБ-2 инфекции ке ' связан

географическим месторасположением хозяйства. По серологическим данным предполагается.. что вирус циркулирует у птиц во всех природно-климатических зеках России (Краснодарский и Ставропольский края. Еолгогродская. Еоронеяская. Липецкая, Московская.. Пензенская. Рязанская. Тамбовская я др. области.. Республика Коми). Екрус выделен из патматериала. доставленного из" Краснодарского края, -Липецкой.. Московской и Оренбургской областей. Как правило . возбудстель удаза-лось выделить в стадах, где был высокий титр антител к ПУЕ-2. дости-ГаяЛС'й значек>тя 1.123 и более.

Следует такле от'^етгггь тот факт, -то ГЗпЕ-2 пк^^кипей поражается, главным образом, цыплята и куры мясных пород. 42.. 4 < % сывороток крови.. полученных от ких содержали, ектг1гемагглст*гк*1кы к ГП»(Е-2 и только в 3.И Z сывороток от кур яичного направления. Максимальный титр антител к ШВ-2 у птиц мясного направления достга'ал значения, равного 1:4096. в то время, как у кур яичных пород он не превышал значения 1:64.

При анализе данных серологических исследований 2313 куриных сывороток... поступивших из 31 птицефабрики, неблагополучных по ПМВ-2 инфекции. окезалось. что сыворотки крови от цыплят в возрасте до 20 дней в 12.9-17.6 Z случаев содержат специфические антитела в диагностическом титре, что объясняется., прежде всего, наличием трансоза-риальных антител. Количество положительно реагирующих гггяц 31-60 дневного возраста увеличивалось до 47,1 - 43,3 причем основная "масса сывороток в атом возрастном периоде получена от бройлеров, находящиеся на откорме, тогда, как число сывороток (с титром 1.16 и Солее) от ремонтного молодняка даже в возрасте 61-120 дней не превышало 26.1-33,3 Птица Солее старших возрастов содержала антитела к 1ШВ-2 в сыворотках крови в 62.4-71,6 Z случаев.

Процентное соотношение величин титра антител к ШВ-2 в исследованных сыворотках крови в зависимости от возраста птиц было следующее. У цыплят до 30 дней наиболее часто встречается (5.37-3,96 7.)

1 г*

диагностическим титром сыворотки является 1.15. а максимальный ур вень антигемагглктикинов достигал значения, равного '.512. Б во расте 31-45 и 45-60 дней среди положительных титров антител превод руст разведения 1.32 (14,55 и 1.123 (12.42 ") соответственно, 'п максимальном титре 1.1024 и 1.4С9Б. Сыворотки от ремонтного молоди ка (51 - 120 дней) имеет наиболький титр 1.12S, а среди значимы;: преобладает 1.16 и 1,32 или 13.3-3 ~ и 14.51 Z . Характерной особе ностьй сывороток. полученных от U1-13C-дневных -птиц, является т что они з 34,5 ~ случаев содержат актигемаггл&тпкикы в разведен» от 1. iдо i.. 4Gi5o. j ч.-Т' '-Тер-Лт 1 с0 дней большинство сыворот (13.60- ¿5.5.'- -в) имеот титр -знтится í, . а максимальное их значен 1.1024- 1. 4С35 обнаруживает только в 0.39-0,52 ~ проб.

Пр-оведенное нами серологическое обследование бройлеров выявил-: то, что специфические анчэтемаггльтинины к îu.!É-2 в т'.ггре 5,0 lo--' Солее обнаруживали только у цыплят, выращиваемых напольно. При кл; точном содержании птицы с ре дке ге о мет р -.тчес кий титр антител к ПМЕ-2 превьпвал 2,15 1о?2, хотя у отдельны:! особей он достигал 3,0 - . 1с=2. Это, по всей видимости, объясняется тем, что инфицирова! птицы происходит, главным образом, через желудочно-кишечный тракт.

2.2.2. Экспериментальное из-учение некоторых биологически: свойств ШВ-2 и вызываемой им инфекции in ovo и in vivo Интерферирующие свойства ШВ-2. Способность ШБ-2 к интерфер. ции изучали в опытах с ШВ-1 втамм Ла-Сота. Биологическая исход! активность атих вирусов была равна 3.25 ЭВД 50/мл. 9,0 lg : БО/мл соответственно. В шахматном порядка смешивали равные объ разведений ШВ-2 (с 1:10 до 1:1 млн.) и ШВ-1 (с 1.10 до 1; 10 млн, затем смесью вирусов по 0,2 мл инфицировали КЗ и инкубировали их +37,5 С в течение 96 часов. После охлаждения эмбрионов проводили дикацис вирусов посредством РГГЛ.

Как показали исследования, вакцинный штамм Ла-Сота репродущ

вален в КЗ в присутствии ПУЕ-2 липа тогда., когда инф^цируицая доза первого вируса (Ла-Сота) была болык в 562,4 раза и Солее, чем вируса второго серотипа. Если же концентрация вакцинного вируса Сыла больие концентрации IIME-S в 5,6 раза, то. наблюдалось параллельное размножение-о6оих_. вирусов. При меньших концентрациях ПМВ-1 отмечалось полное подавление его репродукции. "" " --------

Таким образом, ГП,1В-2 обладает интерферируемй активностью в КЗ в отношении вакцинного ¡¡¡гамма ÍIME-1 (Лп-Сота). что необходимо учитывать изготовлении ембриокалькой вакцины против ныскаслской болезни.

■•д---цекпе влияния HMG-2 на образование антител к ПМВ-1. Учитывая высокуи иктерферирукцуг, активность ГЕЛЕ-2 з отношении ПЗЛЕ-1 Сзтада Ла-Сота) на к,грикьгх амбрионах. можно было предположить, что пара-микссзирус птиц второго серотипа Судет оказывать негативное воздействие на икдукцис антител против вируса ньскаслской болезни у цыплят, вакцинированных штаммом Ла-Сота, Для получения ответа на атот вопрос были выполнены следующие исследования.

Из цыплят-бройлеров были сформированы группы (по 5-9 голов), а которых птиц икокулировали по схе&»й;

Группа 1 - вакцинированы ПНБ-1 штамм Ла-Сота.

Группа II - инфицированы ШВ-2\курица\СССР\1\Зб.

Группа III - вакцинированы и инфицированы одновременно обоими вирусами.

Группа IV - вакцинированы ШВ-1, через 24 часа инфицированы ПНЕ-2.

Группа V - инфицированы ШВ-2, через 24 часа вакцинированы ШВ-1.

Группа VI - интактные цыплята - служила контролем.

Цыплят прививали вакциной из штамма Ла-Сота и заражали ШВ-2 интраназально, в дозах 6,5 ЗИД 50/гол и 7,5 1ё ЭЭД 50/гол соответственно. На 7. 14. 21, 23 и 35 день брали образца крови, получали

сыворотки и исследовали их a FITA на наличие антител к ПМЕ-1 i

Г»4 ТО-*-*

1 üñ£S о.

На 7 день опыта в группе I средний геометрический титр антител ; ГС.®-1 составил 4,22 ±0.56 1оё2, а в группах ИГ.. IV, V он колеб лется от 3,53 + 0.47 1с=2 до 5..СО + 0.22 1с?2. Ка 35 день эти вели чины составили для группы I - 7.00 + 0.29 1ог2 и для групп III. IV

V - 6,29 г 0..43 - 7.33 ± 0.23 Ioí2. Из этого следует... что ка все протяжении опыта при сравнении средних геометрических значений тит pos антител к ШЕ-1 з группе I с титрами антител в группах III, IV

V достоверно значимого различия кет. Содержание а сыворотках кров цыплят гемагглютинин-ингибкторов к TS-IB-2 через неделя после начал .эксперимента з группе И составило 3,20 + П.. 33 1с-'2. а в групп; III. IV. V - 4,63 + 0,63 - S.5G Т 1,04 1о*2. Через Е недель эти пс каг&телп соответственно были 5,50 + 0,54 1о?2 и 5,11 + 0.99 - 6,75 0,53 1ог2, что говорит об отсутствии достоверного различия в уровкг антигемагглютиника к ШВ-2 в группе II и группах III, IV, V.

В группе VI цыплята не имели специфических антител ни к ПИВ-: ни к ШВ-2.

Аналогичные результаты были получены и при пероральком cnocoi вакцинации и инфицировании цыплят этими вирусами.

Таким образом, нами получено экспериментально обоснованное док; аательство, что парамнксовирус птиц второго серотипа ir. vívo не ок; зывает отрицательного влияния на формирование поствакцинального и мунитета к вирусу болезни Ньюкасла, хотя интерференция его чет прослеживается в опытах на ГО.

Изучение тропизма ШВ-2 к органам цыплят. Одной из состава частей диагностики инфекционных болезней является выявление атиол гического агента.

Опыты по изучению тропизма прамиксовируса птиц второго сероти проводили на цыплятах-бройлерах 45-дневного возраста. Птиц инфицир -вали ШВ-2\курица\СССР\1\Зб в дозе 8,0 1« ЭИД 50/гол орально и ин

- 1Б -

раназально и убивали по 3 головы из каждой группы на 2, 4. 5 и 3 день после заражения, отбирали пробы внутренних органов; головной мозг, трахей, легкие, печень, почки, селезенку, тонкий и толстый отделы кпше-'к;гка. фобрициеву су^ку и проводили вирусовнделение.

"" ~"ТТри"пнтраяазальном-заралгнип 1MB-2 выделяли из трахеи, легких и бурсы включительно по 3. Z и 4 день соответственно, а в кикечнпке -возбудитггль парy.-vrп толь'r/j по о день. птиц, икфицпривак'лы/ перорально. зпрус изолировали us трахеи, легких и бурсы г;с б, 4 и Б Дггь'о '^сстг—т..тке^р'с. з ги»иечнг'ке г^ра^пксовпрус присутствовал 4 3 день. При обоих способа/ заряжении з печс'пи. селезенке, почках TTl^S-обпагуз^глелн только на 2 день, нипусовьщеление из тканей мозга

СЫЛ'_/ Ссог^-ПтЕПЬЫМ.

'¡з приведенных данных следует, что для диагностики ПМЗ-2 инфек-<

ции цыплят для вирусовыделекия необходимо отбирать трахеи, легкие; фаСрициеву сумку, тонкий и толстый отделы кишечника.

. Выделение ПЖ-2 инфицированными цыплятами и курами. Исследования по данному вопросу выполнены на 35-дневных цыплятах яйценоской породы и курах исходы белкй леггорн, которых инфицировали оральк^ и нктраназалько з дозах от 2.0 до 3,0 1= Э1Ц 50/гол. Наличие вируса в клоачных и фарикгиальных мазках определяли на протяжении 9 дней.

При оральном инфицировании цыплят в дозе 2,0 Э!!Д 50 /гол выделить вирус не удалось ни из клоачных, ни из фарингиалькых мазков, что свидетельствует, по-видимому, о недостаточности такой дозы. Увеличение инфицирующей дозы ШЕ-2 до 4,0-3,0 1гг ЭИД 50/гол икдуцирова-ло стойкое выделение вируса с фекалиями с 4-го по 9 день включительно (срок наблюдения). В фарингиальных образцах вирус обнаруживали со 2-го по 5-6 день после заражения. У инфицированных взрослых кур вирус выделяли из клоачных и фарингиальных мазков только до 5 и 6-го дня соответственно. Это говорит о том, что взрослая птица менее восприимчива к ПМВ-2. и вирус быстрее элиминирует из организма.

Результаты интраназального заражения птиц отличаются от инфицирования per сз. Во-первых, инфицируется доза, равная 2,0 1е ЭИД

50/гол для 35-дневных цыплят, при зтом способе заражения индуцир; приживление вируса в носоглотке. Бо-вторых, если при оральном икс цирозании П3.1Е-2 выделяли как из клоачньсс. так и фаркнгиалъных обр; цоз. то при интраказальном заражении вирус обнаруживали тольк,: мазках из глотки, за исключением одного случая, когда при максима, ной инфицирущгй дозе (3.0 1? 311Д 50/гол) вирус был выделен из к. ачного мазка на 9 сутки. Б фарикгиалькых мазках от взрослых кур : рус обнаруживали до 7 дня тогда, как во всех остальных опытных гр; пах цыплят его обнаруживали до 9 дня опыта (срок наблюдения), также может служить доказательством возрастной устойчивости к ИМ инфекции.

1 ' " i 1..ц. — ^ Г ^ ~ т^ "" '■ . ,гт» ~ .. .... п .лм ... г — т. ^ . .

¿лигтгг^пгд у^/ц'аочрсгппл ог1д/нс.. * гу ^ м игии.пх ■ мпшг'ипци'осьп

ГРЖ-2. Процесс образования постинфекционных антител изучали на дневных цыплятах, кЛторым инокулировали иктраназально или перорал П!пВ-2\курпца\СССР\1\3б в дозах от 2,0 до 3,0 1« ЭВД 50/гол. Куры ли заражены аналогичкыми способами в дозе 3,0 1« Э1Щ- 50/гол. У п через 3, 6. 9, 12, 15, 13, 25 и 36 дней брали кровь и исследов подученные сыворотки на наличие антигемагглюгиникоз к ПУВ-2.

Пак показали исследования, пероральное заражение цыплят в р 4.0-3,0 31Щ 50/гол вызывает образование специфических антите! титре 1.16 и выв». При атом на 6 день опыта титр антигемаггдотинг у всех птиц не превышал значения 2,00 + 0,42 1ов2. Достоверно знг мое различие в содержании антител наблюдалось только ка 9 день с та; 4.30 + 0,44 1се2 при инфицирущей дозе 8,0 ЭВД БО/гол и ; Ч 0,49 10^2, 2,80 + 0,54 1од2 при дозах 4,0 и 6,0 ЗИД Б0> соответственно (Р < 0,025). С атого дня отмечается подъем антит; образования, максимум которого достигал на 15 день - 6,49 + ( 1о?2 - б. 75 + 0,55 10^2. Пэсле этого их уровень постепенно енихг ' и к концу опыта составил 3,75 + 0,41 1с£2 - 5,25 + 0,55 1ое2. № цировакие цыплят в дозе 2,0 Э1Щ 50/гол не индуцирует практич. образование гуморальных антител.

При интраназальном введении ПЬЮ-2 для достижения диагностиче»

го титра антител (1.16 и визе) требовалось увеличение инфицирующей дозы вируса до 6.0-8,0 3»!Д 50-'гол. На 9 день после заражения среднегеометрическое значение титра антител составляло 4.00 + б, 75 -4,22 т 0.44 10*2, достигая капСсль пей величины 7,40 + 0,45 - 7.60 + 0,45 10р2 через 15 дней (с момента инфицирования) с последующим сни-ЖККёМ ДО 4,40 г 0,45 - 4.50 + 0,25 1о?2"к"35~ДК1С. -

Динамика образования ант^ггсл у взрослых кур является сходной с таковой у цыплят ;; отражает ?аконо!-крность достижения максимального рлаЧсппл титров антител 15 днзс< при пес«^ральнс.м и интраназальк^м

НК'^иЩИрОЗ&пИП Р, 50 21 о с гг ч - г .со + 0,42 1о«2 соответственно

К*_/ Т р о.т 3 съТ с1 М медлен; пмЛзЛИиЪ м через 21 день достигали средкеге

гЛ<г'Т р г I*-1 г; к, КС Г Т гГТрс»., .------- 1 !гг\ г 0,2-0 г1 о, ОО ■ и.ои

Проведенные исследования показали, что а нт иг е маг г лет и к ин ы к ГГ-ГВ-Е в крови появляется через 5 дней и максимального уровня достигает на 15 день после инфицирования независимо от дозы заражения, пути попадания вируса в организм и возраста птиц.

Влияние ГЗ.15-2 на ¡.¡яентт, продуктивность цыплят. Опыт проведен на 37-дкеЕннх цыплятах яйценоской породы. Птиц произвольно разделили на 4 группы по и голиВ в КодДий п ккц/.щириваля рег* оз ШВ-2\курица\ СССРМ\26 з дозах от 2 до 3 1« ЭИД 50/гол. Сставкихся 1С цыплят использовали в качестве иктактного контроля. Цыплят всех групп взвешивали до опыта, на 12 и 25 дни эксперимента, вычисляли средняя величину привеса.

Через 12 дней после заражения средний прирост массы тела цыплят в- группах 1-4 был 23,75 + 6,00 - 34,75 + 2,94 г или в 2,72-3.-29 раза меньше, чем у неинфицированных птиц. За 26 дней опыта привес цышшт контрольной группы составил 140,5 + 3,11 г, в первой группе 59,00 + 3,54 г, во второй - 43,23 + 5,57 г, в третьей - 16,00 + 3,69 г, а в четвертой наблюдали отвес на 20. 5 + 1,15 г - уменьшение массы тела по сравнение с первоначальной, т.е. отмечается доза-эффект, и при инфицирующей дозе, равной 3,0 ЭЙД БО/гол, рост цыплят прекращается.

2.2.3. Разработка ^активированной вакцины против ПЖ-2 и* ции птиц

Доказано отрицательное влияние ШЕ-2 на мясную и яичную прс тявность птиц, однако средств специфической профилактики ИМЕН фекции до настоящего временя ни у нал:, ни за рубежом не разрабс С учетом изложенного целью исследований явилось конструирован» бораторного образца инактизировакной вакгргны для иммунизацга Ц1 -бройлеров против ШВ-2.

Получение вирусного сырья. Проведены исследования по изу влияния температурного режима инкубации ГМЗ-2 инфицированных накопление гемагглютинина в акстраамбриональной жидкости. Для 1С-дкезкые куриные а*£рисны инфицировали ПЖ-2 штамм курица\СС 36 и инкубировали при температурах +34, +37,5. +39 и +41 С в те 72 часов.

Достоверного влияния температурного фактора на накопление агглютинина ке отмечено, однако, при +41.0 С наблюдалась повьш гибель инфицированных эмбрионов (10 из 15) тогда, как при 1 +37.5 или +39,0 С число погибших га было незначительным. Пс ШВ-2 птиц предпочтительнее культивировать на при температут +34.0 С до +33,0 С.

Выбор икактиванта и режима инактивации. Установлено, что об] ка инфекционной адлантоисной жидкости глутаровым альдегидом во проверяемых концентрациях и температурных режимах полностью по, да икфекционую и гемагглюпширугадув активность ШВ-2 за 3 часа

Инкубация вируссодержаа^й ЭЭЖ с 0.5 7. препарата А-24 при приводила к утрате инфекционных и гемагглюгинирующих свойств через 3 часа тогда, как 10-кратное уменьшение концентрации А-понижение температуры до +4 С увеличивало длительность разр ' гемагглютинина до 24 часов.

Дизтшгавый зфир в конечной концентрации 5-10 * полностью дял 1шфекционность вируса после 3-х часовой . обработки при +£

сохранением гемагглстикирусаэй активности. Увеличение же времени инкубации до 24 часов такде не приводило к снижению гемагглюгинирукщих свойств.

Воздействие 0,1 "-него ДЗИ на вирус, как при +22 С. так и при +37 С в течение 43 час о а сопровождалось полкой инактивацией вируса — тогда., как его гемагглктгаирусг^я активность не снижалась на протяжении 72 '-„сов Г срок наблюдения).

Икк-гбация вирусного сырья с 5 гг.М сульфата меда при +37 С инакти-аир.овала П)-!В-2 через 240 часов. С "«"величением концентрации зтого ве-до 10 г.М вгемя. необходимое для подавления инФекционности вируса, сокращалось до 7?, часов. Гемагглитинирун^я активность ШЕ-2 в сбои:-: случаях через 24 часа понижалась с 3.5 1сг2 до 2.0' 1с?2 и оставалась на атом »овне до окончания опыта.

Действие 1 ~-ного твина-30 на ШЕ-2 при +22 С сопровождалось повышением генагглютинирущей активности вируса с 8.5 1о^2 после 3 часов обработки до 13.0 \с-?2 к 30 часу эксперимента. Изменение температурного режима с +22 С на +37 С приводило к резкому росту титр«, гемагглстинина от 13. 5 1о?2 после 3-х часового контакта с детергентом до хс.О-^о.о к и-«.4 часам, после чего к 30 ЧоСоМ Ур^Б-гКЬ гемагглктинина понижался до 14.0 1о?2. Независимо от температурных условий инактивации, на протяжении 30 часов вирус продолжал оставаться инфекционным.

При обработке ПЫВ-2 0..5 %-ным фенолом при +37 С в течение 24 часов вирус оставался инфекционным, и только продление срока инкубации до 43 часов приводило к его инактивации. Гемагглюгинирутоцие свойства вируса при атом сохранялись на протяжен™ 72 часов (срок наблюдения) . С повышением содержания фенола до 1'7. - инактивация вируса в аллаитоисной жидкости наступала через 24 часа, но титр гемагглктини-на по-прежнему оставался неизменным, равным 3,0 1од2.

Воздействие на вирусный материал 0,06 7. формалина в течение 24 часов сопровождалось потерей как инфекционных ,так и гемагглктиниру-пцизс свойств ПЫВ-2.

Таким образом, инактивирующим действием в отношении парамиксов; руса птиц второго се рот ипа обладали все (за исключением твина-2( изученные нами препараты. Однако, вследствие неблагоприятного во; действия на гемагглктикик А-24, глутарового альдегида, формалга названные вещества в производстве вакцины использованы быть не м гут.

Быбос адгюванта. Одним из важнейших условий обеспечения высок иммуногеккссти инактивироваккых вакцин является выбор высокоэффе тивного адъюзанта. Наш при конструировании инактивированной вакцп (1ШБДК) против парамиксовируса птиц второго серотипа были кспытз ГС А. масляный адгювант БНЯЯИ и парфюмерное масло. Для этого к е русноьу сырью. «пакетированному 0.1 Z ДЭИ или 5-1С ivii сульфата ди, или 1.0 7. фенола, добавляли указанные выге адъюванты и готов: ■ опытные лабораторные образцы вакцин. .

Плученные ГСА-вакцины представляли собой прозрачные жидкости рыхлым осадком., при встряхивают которых образовывалась равномер: бьктрооседающая взвесь, что существенно осложняло применение а препаратов.

При применении адгюванта ВШИЛ, несмотря на продолжительное реме ¡лизание, вакцины расслаивались на водную и масляную фазы, н атому при использовании их необходимо было периодически встряхват

Вакцина с парфюмерным маслом при испольэованш в качестве ин; тивантов 5-10 iril сульфата меди или 1 " фенола были сметанссбраг консистенции, устойчивыми при хранении при +4 С в течение 4-х ме цев (срок наблюдения). Однако, вакцина из вирусного сырья, инакт! рованного 0,1 X ДЭН, была не стабильна и расслаивалась на 12 ; после эмульгирования. Поэтому перед применением ее требова. взбалтывать.

Образцы вакцин проверяли в экспериментальном хозяйстве. ' российского научно-исследовательского -и технологического иисти птицеводства (ЭХ ЕНИТИП) на 13-дневных цыплятах-бройлерах, свобо от антигеиагглютишшов к ПЫВ-2; препараты вводили подкожн

дорсальную область зги в дозе 0.5 мл однократно или двукратно с 2-х недельным интервалом. На 14 и 22 дни после первой и на 14 день после второй вакцинации от цыплят брали кровь, получали сыворотки и исследовали в ГТГА на наличие антчгемагглктгнниноз.

--------Результаты последоззний показали.-что -через 14 днеVI после одно- ,

крвткой вакцинации. наибольший титр антигемагглютининов к ПЗ^Е-2 5.33 г 0.33 - 5.20 V "-33 был выявлен в сыворотках крови цыплят, V1 г."ли>о\ 1 р^'пппI п. о пт *//ц. вакцинированных пр^иЬра-тылп ', г.д!:Х'ВапТСг1 "Н^^И.! и насфюмеоним маслом. титры антител Сули соответственно 2.20 г о.3-3 - 4.20 £ С.33 1с*2 и 4.40 + 0.54 - 5.40 г

о -'2

На 23 день после вакцинации в сыворотках крови бройлеров, привитых ГСА-вакцинами. содержанке антигемагглктининсз снижалось до 3.60 + 0,56 -.5,20 + 0.95 1Сс2. У цыплят, иммунизированных образцами вакцин, содержащих парфюмерное ¡-гасло.. к 23 дню также отмечалось достоверное снижение уровня специфических антител до 2,66 + 0,27 - 4,75 + 0,41 1о«2. Напротив, величина титра антител к ШВ-2 у птиц, привитых ТШВлК. ВК-15иЧ»!Сш11т#' 3 »-сСЯ (лДТХВо нт БТЕШ. была выше на 23, чем на 14 день после прививки и составляла 4.СО + 0,47 - 5.30 + 0.37 1оё2.

После двукратного применения вакцин в сыворотке крови цыплят всех групп отмечалось повышение уровня аятигемагглютининов к ПМВ-2 до 4,00 т 0,79 - 6,50 + 0,56 1ос2.

Таким образом, испытанные образцы вакцин близки по своей иммуно-гённости, однако вакцины с парфюмерным маслом сохраняли однородность при 4-х месячном хранении, что исключало неточность в дозировке из-за неравномерного распределения антигена.

Сценка эффективности применения экспериментального образца вакцины в условиях птицефабрики. Эффективность применения разработанной нами кнактивированной сульфатом меди эмульгированной вакцины против парамиксовируса птиц второго серотипа оценивали иммунизацией 3 тысяч 12-дневных цыплят-бройлеров в ЭК ВШТТИП.

Еакцнку вводили подопытным цыплятам подкожно в дорсальную с ласть шеи в дозе 0.5 мл двукратно с интервалом в 14 дней. Контро; служили 16 тысяч 14-дневных бройлеров.

Спыткзя и контрольная птица содержались каполько с идектст; кормлением я уходом. Периодически (через 14 дней) проводили выбор.: ное взвешивание по 50 голов и отбирали образцы крови для сероло1 ческого исследования. Количество павших цыплят регистрировали еж, невно.

Полученные результаты свидетельствуемо том. что в первые 4 не, ли выращивания бройлеров различие з смертности цыплят опытно контрольной группы было минимальным и составляло около 1 при первая иммунизация цыплят не вызывала поствзкцинальной реакции, дальнейшем сортность резко возросла, что обусловлено возникновен у бройлеров колибактериоза (из патматериала выделен па^ьгеккый шт Е. colt). За пятую неделю выращивания, гибель опытных и контроль цыплят достигла 11.43 и 10.46 Т. соответственно. ЬЬксимальный о i птицы. наблвдали в 6- и 7-недельном возрасте., в это время пало сс ветственно 24.00 и 22.977. опытных цыплят, а также 37.С5 и 35.60 контрольных. К концу 3 недели смертность понизилась среди вакцин! ванного поголовья до 17.39 Z тогда, как у неиммунизированного -составила 29.93 7. .

За весь период выращивания среди привитых пало 61.70 * цыпл а в контроле -. 77,30 Т.. т.е. на 16,20 7. больше.

Кивая масса цыплят опытной и контрольной грзгпп на день вакц ции составляла соответственно 169,0 г/гол и 193.0 г/гол. Чёре; дней этот показатель был на уровне 507.0 и 505.0 г/гол т.е. пря массы составил 333.0 г/гол в первой группе и 312.0 г/гол во вто

-Спустя 2 недели после второй прививки взветшание показало,

\ 1

• средняя масса опытного цыпленка достигла 973.0 г. а контрольног 940,0 г, т.е. она в последнем случае была ниже на 33,0 г/гол. На вершающем атапе выраа$гваяия вакцинированные цыплята_ весили по 11 г/гол, а невакцинированные - 1120,0 г/гол.

Титр специфических антигемагглвтинпнов к парамиксовирусу птиц второго серотипа у опытных и контрольных цыплят до вакцинации были разкы 2.5 и 2.V 1о?2. После первой иммунизации титгч антител к ГМВ-2 достигали 7.2 1с?2 и оставались, не смотря на второе введение вакцины. близкими по значению к предыдущим (7.3 есе 2 недели, затем титр актигемагглвтиников снижался до 5.2 io?2. У цыплят" контрольной " группы вследствие ПМВ-2 инфекции отмечено увеличение титсз спецп^п-че.-кил cvnT 'г гг т ™ . Д l ■. - ■*".

TóK.n;.; сбг5зсм. испытание лабораторного образца инактивированной e^tyЗаг-цПны i*в инфекции на ба?т о¡v ВН»ГТ/ГГ[ п^-

ка?ало. -то nir.mоакиикы снижает пядея сг-еди бройлеров иа 15.2 -я ¡три ysTviii'-ir-ri/i/i с^тДн^ги шлтлят на ¡0.0 г- гол и велич-тны

их привеса на 30,0 г/гол по сравнен;® с aнелогичккул показателями у птиц контрольной группы.

3. ВЫЮДЫ

1. Инфекция, обусловленная пара>,(иксовирусоч птиц второго серотипа. зарсгГИиТрнроЕана з большинстве пр11р.~ДпО-клпмат11ческих зон Fe с ~ ста. от Республики Коми до Г^аснодарского края, возбудитель циркулирует среди кур... перепелоЕ и чаек. При атом антигемагглгтинины к ПУВ-2 обнаруживали у 42,47 Z кур мясного направления, тогда как у птицы яичной породы атот показатель не превышая 3,03

2. Единственным патогномичным признаком у цыплят-бройлеров при П5.ГВ-2 инфекции является отставание в росте и развитии, обусловливас-шие снижение мясной продуктивности до 27,4 Z, поэтому ПМВ-2 может быть отнесен к одному из агентов, вызывающих "синдром плохой адсорбции корма".

3. Парамнксовирус птиц второго серотипа интерферирует размножение вакцинного шташа ПтВ-1 („Ча-Сста) только-in ovo, в организме цыплят ШВ'2 ке сказывает отрицательного действия на формирование поствакцинального иммунитета к вирусу ньксаслской боле а ни.

4. При диагностике ПНВ-2 инфекции для выделения вируса от убитых

- 24 - •

я паваих цыплят следует отбирать трахея, легкие, ф-абрициеву сум тонкий и толстый отделы кишечника, суспензией из которых икокулир; куриные эмбрионы. Идентификаций в.фуса приводят в РТГА или ТФ И1Ц.

Б. В производстве вакцины для инактивации ШВ-2 целессобра. использовать 0.1 % ДЗИ, 5.0-10.0 п-М сернокислую медь или 0.5-1,1 фенол, а в качестве адтхзакта - ГОД. парфюмерное масло либо масля адтявант ЕНИЯЛ.

6. Применение инактпвпрованной эмульгированной вакцины про ПМЗ-2 инфекции цыплят-бройлероз индуцирует образование специфичес антител в титре 7.2-7,3 1о.~2, увеличивает сохранность птицы на 1 * , а ее привесы - на 6.3 ~ по сравнений с группой контрольных и лят в условиях неблагополучного по атому заболевание хозяйства.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЯСШКЯ . ,

1. Сконструирована инактивированная амульг;грованная амбрионг кая вакцина против ПУВ-2 инфекцшг цыплят-бройлеров.

2. Разработано временное наставление по применение икакгив; ванной эмульгированной амбриональной вакцины против ПНВ-2 инфе! цыплят-бройлеров.

5. СПИСОК РАЕСТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ИЗ ТЕЫЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Козаков С. Л. Влияние парашксовируса птиц 2-го серотипа репродукции вакцинного штамма "Ла Сота" в куриных эмбрионах // росы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии; и риалы науч. конф. ЕШШВВиН, 13-13 апр. 1992 г. - Покров. 1992. -г С. 155-156.

2. Лагуткин Н. А., Козаков С. Л. Влияние парамгксовируса птиц серотипа на образование антител к ньскаслской болезни // Вопрось теринарной вирусологии. микробиологии и эпизоотологии ; Натер; науч. конф. ВНШШЕиН, 13-13 апр. 1932 г. - Ш кров. 1992. - 4.1.

3. Козаков С. Л. Динамика образования антител к ПМЕ-2 у кто и цыплят // Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии : Материалы науч. - практ. конф. ЕШШЕВпМ " Классическая чума свиней - нестлолнь» проблемы науки и практики ". - Покров, 1S95- - С. 159-160.

» v i о tt г» -v ■•<ггк mr^n-fun гт«л г" «-л 1 тэ *» п сз —

-4. jа. '.ча^-с^ггьаспжхт X pwmxomci ьd ¿iuuluu

pGT III I ^ v IIÍílxl- ~) У ЦЫПЛЯТ /-' Р-КТУЗЛ! Hní ЁСПрССЫ 28TG p/IHSpKCít вирусе-

лсглл : Материалы науч. - практ. конф. ЕНИИЕЕиМ " Классическая чума сзиней - неотложные проблема науки и практик;: ". - Покров, 1995. -С. 160.

5. Разработка ;; ис;;ытак;:л инзктивисованкой вакцины против пара-мкксовпруса пт;щ второго серотипа 1. Еыбор инактиванта и режима ина:-гг:12ацин ••' С. Л. Козаков. Н. L Лагуткин. KJ. Ф. Калантаекко, Б. IL Истерев/-' Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии : Материалы науч.-.йракт. конф. ЕНИИЕЕиЫ " Классическая чума свиней - неотложные проблемы науки и практики ". - Покров, 1995. - С. 160-161.

6. Разработка и испытания инактивированной вакцины против пара-миксовируса птиц второго серстипа 2. Еыбор адъюванта и оценка иыму-ксгенных свойств / С. л. Козаков, К. А. Лагуткин, Я Ф. Калантаекко, В. IL Жгстэрэв // Актуальные Еспрсса ветеринарной вирусологии : Материалы науч. - практ. конф. ЕНИИЕЕий " Классическая чума свиней - неотложные проблемы науки и практик;!". - Покров, 1995. - С. 151-162.

7. Козаков С. Л. , Лагуткин Е А. Иммукогенность парамиксовируса птиц второго серотипа (ПЫЕ-2), инактивированного глутаровым альдегидом (ГЛА)..*Л/ Вирусные болезни сельскохозяйственных животных: Тез. докл. Есерос. науч. - практ. конф., 17-21 апр. 1995 г. - Владимир, 1995. - С. 282.

8. Распространение инфекционных болезней в птицеводческих хозяйствах по данным лабораторной экспертизы / H.A. Лагуткин, RH. Смирнов, R2. Белоусов, С.Л. Козаков, С.А. Горячева// Вирусные болезни сельскохозяйственных животных: Тез. докл. Есерос. науч.-практ. кокф.; 17-21 апр. 1995 г. - Владимир, 1995. - С. 288.