Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Профилактика и лечение диареи новорожденных телят поливалентным бактериофагом

МОСКОВСКАЯ ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАДОШ им. К.И.СКРЯБИНА

На правах рукописи КАМШТДШСВ ФА РИД ЕНУСОВИЧ

профилактика и лечение диареи новорожденных телят поливалентным бактериофагом

16.00-03 - ветеринарная микробиология, вирусология, апизоотология, микология и имцунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1992

Работа выполнена в Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии имени К.И.Скрябина ,,

!

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Воронин Е.С.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Бурлаков В.А.

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Ленев C.B.

Ведущая организация: Ульяновский сельскохозяйственный институт

Защита диссертации состоится /l?-*) 1992 г.

в J О часов на заседании специализированно совета К - 120.36.05 по защите диссертации на соискание ученой степени кандидата наук в Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии имени К.И.Скрябина /109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23. Тел. 377-93-83/.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке академии.

Автореферат разослан

«/<?" ^¿//лип 1992 г. / ' /

Ученый секретарь специализированного совета

Федосеева Т.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность теш. В деле дальнейшего повышения продуктивности и увеличения поголовья скота большое значение имеет борьба с заболеваниями и падежем молодняка сельскохозяйственных животных.

Наблюдения показывают, что отдельные хозяйства и даже целые районы несут весьма значительные потери молодняка, достигающие 20-ЗСР? ст числа родившихся телят. В целом по СССР, как сообщает И.И.Л}кашев (1969), отход молодняка колеблется в пределах 6-9%, что составляет 15-20 млн.голов ежегодно, а в мировом масштабе - 10-12^.

Известно, что у здоровых телят в желудке располагаются грамположительные и молочно-кислые бактерии; в тонком отделе кишечника - смешанная микрофлора; в толстом - грамотрицательная (колиформные, гнилостные, анаэробные микроорганизмы). Нарушение этого порядка в любую сторону приводит к изменению функций организма и, как следствие, к диарее.

Современное промышленное животноводство неизбежно сопровождается, согласно технологии, высокой концентрацией животных, из-за чего увеличивается заболеваемость молодняка инфекционными болезнями, вызванными условно-патогенной микрофлорой, в том числе и энтеробактериями родов £ со/г , Ръог^вих, ,

ЗтНеуьАу/осоес&я .

Разнообразие энтеробактерий и источников инфицирования характеризуется быстрым изменением этиологической ситуации, что создает трудности при профилактике и лечении этих заболеваний.

Бактериофаги, воздействуя на бактерии, отличаются высокой специфичностью по отношению к ним, что, безусловно, привлекло к ним интерес специалистов для профилактики и терапии заболеваний, вызванных условно-патогенной мокрофлорой, что особенно ценно в условиях "привыкания" бактерий к антибиотикам и нитрофурановым препаратам. Кроме того, они безвредны в любых дозах, не вызывают дисбактериоза, аллергических реакций и угнатения естественной резистентности организма новорожденных животных.

До сих пор изучались воздействия отдельных бактериофагов на отдельно взятые виды бактерий. В практике, как правило, встречаются ассоциации энтеробактерий, что требует комплексного применения различных фагов (поливалентных).

За основу ш взяли ассоциацию наиболее часто встречающихся у больных телят бактерий из родов £. с о А, Ръа^еиз, АУе/з/-е£1а, Ицательный подбор соответствующих фагов, с

учетом их биологии и бактерий-хозяев, а также их взаимодействия друг с другом., позволяет создать поливалентный препарат из бактериофагов с возможными профилактическими и лечебными свойствами, которые еще остаются малоизученными, несмотря на длительный опыт применения бактериофагов в медицинской и ветеринарной практике отечественных и зарубежных авторов.

Цель и задачи исследований. Основной целью работы было конструирование поливалентного бактериофага на основе наиболее часто выделяемых энтеропатогенных бактерий и лизирущих их фагов, как средства фагопрофилактики и фаготерапии диареи новорожденных телят в промышленном животноводстве.

Для достижения цели нашей работы мы решали следующие задачи:

1. Изучить микрофлору кишечника больных диареей телят.

2. Еыделить из сточных вод неблагополучного хозяйства ли-зируюдие бактериофаги.

3. Селекционировать выделенные лизогенные бактериофаги до производственных штаммов.

. 4. Сконструировать из селекционированных штаммов поливалентный бактериофаг и испытать его профилактическую и.лечебную эффективность. •

Научная новизна. Из выделенных бактериофагов селекционированы производственные штаммы лиэогенных фагов эшерихии коли,-протея, клебсиеллы и стафилококка, из которых получены поливалентный бактериофаг против желудочно-кишечных болезней телят и поросят, а также стафилококковый бактериофаг против желудочно-кишечной инфекции телят и поросят.

Практическая ценность работы. "Поливалентный бактериофаг против желудочно-кишечных болезней телят и поросят" изготовляется на Омутнинском заводе биопрепаратов в объеме 50 тонн в год.

Утверждены инструкция по изготовлению, технические условия, временное наставление по применений поливалентного бактериофага против диареи телят.

Апробация работы. Материалы по диссертации доложенны и получили положетельные отзывы:

- на 98 научно-практической профессорско-преподавательской конференции Банкирского сельхозинститута (1990 г.);

- на 99 НПК Башсельхозинститута (1990 г.);

- на научной коференции молодых ученых МВА им.К.И.Скрябина (1991 г.);

- на Всесоюзной научно-практической конференции "Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных животных" (г.Воронеж, 1991 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликованы две статьи.

Объем и структура диссертации. Работа содержит 90 страниц текста, I гр фик, 8 таблиц.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы. Предварительно проведенные бактериологические исследования телят, больных диареей, показали высокий процент выделения культур условно-патогенной микрофлоры /35-4СЙ/, /Ъо/ее* /20-23?/, Ме^сеМа /10-1&Я/, /8-10%/, /5-8^/, которые обладали токсичными и ад-

гезивными свойствами. Исходя из этого в эксперимент были включены штаммы культур: К99, 0114;. 021 и А'/е^теМа .

Культивирование бактерий проводили на средах Эндо, Плоски-рева, ЕЙ-ом кровяном агаре, МРС-2, Блаурока, 1%-ом селенитовом бульоне, висмут-сульфитном агаре и других. Для количественной оценки бактерий использовали метод Р.В.Энштейн-Литвак и Ф.Л. Вильшанской (1969), в модификации К.Я.Соколовой (1972). Дифференциацию бактерий Проводили по методам СИБ (системы индикаторных бумаг) и ПБДЕ (пластины биохимические дифференциирущие энтеробактерии). Лиэирущув активность бактериофагов определяли по Аппельману.

Опыт был организован в изолированных боксох вивария Бел. НИИЭВ им.С.Н.Выяелесского, куда привозили новорожденных телят из хозяйств. Всего в опыте было использовано 29 телят, из которых 14 были контрольные и 15 - опытные. Телят заражали монокультурами энтеробактерий ( £со/г\ /*ге>/е&1, | и в ассоциации для экспериментального воспроизведения диареи (количество вносимых культур - по 20 млрд.м.т. каждой).

В ходе опыта было организовано 4 экспериментальных группы, которые включали по 4 опытных и 5 контрольных групп телят (табл.1)

В опыте использовали производственные итрммы бактериофагов (коли-протейный и клебсиеллезныЯ) и их смесь (поливалентный).

Предварительно их исследовали на лизиругацую активность к соответствующим бактериям (фагочувствительность - ++++,100%) и задавали орально телятам сразу после рождения (до первого кормления) в дозе по 100 мл на голову. Спустя 3-4 часа теленку выпаивали I л раствора сухого молока (индивидуально).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Наблюдения телят в опыте проводили в течение 10 дней. Ежедневный общий клинический осмотр животных, а также бактериологический анализ проб фекалий на видовой и количественный состав микрофлоры позволили проследить динамику развития экспериментальной диареи, вызванной внесенными патогенными штаммами энтеро-бактерий, и ее терапии у опытных телят.

Общий клинический осмотр телят в контрольных группах показал, что они заболевали на 2-3 день после орального введения им взвеси энтеропатогенных энтеробактерий. У них отмечалось резкое ухудшение общего состояния, угнетение, одышка, повышение температуры тела на 1.0-1.5°С (но не выходя за верхнюю границу нормальных физиологических показателей), начиналась диарея. Клиническая картина не менялась до самой смерти телят (все контрольные телята пали на 6, 7 и 9 день).

Клиническая картина в опытных группах была.аналогичной после заражения телят, но она была слабо выраженной и резко менялась .по мере дачи телятам соответствующих бактериофагов. Общее состояние удовлетворительное, аппетит сохранен, температура тела колебалась в пределах 38.0-38.9°С, диареи либо не было, либо она прекращалась в течение суток.

В течение всего опыта, на 3, 7 и 10 день жизни телят, проводили бактериологические исследования проб фекалий, от павших телят отбирали содержимое кишечника и органы для паталого-ана-томического исследования (в первый час после смерти).

К третьему дню после заражения в контрольных группах и в некоторых опытных у телят отмечали клинические симптомы диареи, этим и объясняется периодичность бактериологических исследований. Седьмой и 10 дни анализа позволяли проследить динамику размножения культур в кишечнике у телят. Результатами установлено, что штаммы культур, введенные в организм телят в дозе 20 млрд.м.т., размножались и выделялись с высоким титром, ко-

Таблица I

Схема экспериментального воспроизведения диареи у новорожденных телят ЭПЭ-ми и ее фагопрофилактика

№ ! серии! опыта I Группы телят !Кол-во! !телят,! 1гол. Культура заражения [Концентрация культуры, I млрд/мл I (доза зараж.) Шактериофаги ¡для профилактики

I опыт 3 . ЮТ,0114 20 Коли-протейный

контроль 3 «•"«в 20 -

Л опыт 5 021 20 Коли-протейный

контроль 3 20 -

а опыт 3 20 Клебсиеллезкый

контроль 2 —"и 20 -

1У о ахи: 3 К99.0П4 + 20 Коли-протейный Кяебсиеллезный

контроль 3 о»*-» 20 -

У контроль 4 - - -

торый сохранялся или возрастал в контрольных группах, и резко снижался в опытных уже на третий день дачи бактериофагов.

Таким образом, проведенные исследования показали возможность воспроизведения диарей у телят как moho-, так и смешанными патогенными культурами (эшерихии, протея, клебсиеллы), а также эффективность при этих болезнях как moho-, так и поливалентных фагов.

Полученные нами данные послужили предпосылкой и основанием для проверки эффективности поливалентного бактериофага в производственных условиях.

Опыт был поставлен в совхозе "Большевик" Серпуховского района Московской области. Для этой цели использовали новорожденных телят в условиях данного хозяйства, с сохранением технологии содержания и кормления.

Предварительно в хозяйстве были проведены бактериологические исследовании проб фекалий для определения видового состава выделяемых телятами энтеробактерий и их соотношения. До 30% проб показали присутствие патогенных эшерихии (К99 - 5%), 20% -протей, 25t - стафилококков, 1575 - цитробактер, 553 - клебсиеллы 1% - псевдомонас и около Ъ% сальмонеллы.

Кроме того, регулярно проводились клинические осмотры телят - общий осмотр, состояние видимых слизистых оболочек, шерстного покрова, общее состояние организма, наличие или отсутствие аппептита; температура тела.

В. эксперименте участвовало 44 теленка, 31 опытный теленок .получал поливалентный бактериофаг (коли-протейный, клебсиеллез-ный, стафилококковый - по 50 мл каждого) с момента рождения за 20-30 мин. до выпойки первой порции молозива, 3 раза в день, 3-4 дня. В контрольной группе было 13 телят. К ним были применены меры профилактики и терапии, используемые в совхозе "БОЛЬШЕВИК"' (антибиотики, фуразолидон и колипротектант).

Опыт показал, что после перорального введения новорожден-• ным телятам полифага они не заболевали диареей. Необходимо отметить, что только у четырех телят опытной группы отмечалось слабое расстройство пищеварения из-за нарушений норм выпойки молозива, которое прекратилось на вторые сутки после дачи полифага ( коли—протейный,- клебсиеллезний, стафилококковый) в двухкратной дозе;

В контрольной группе з&болело б телят, выздоровело 5, вы-

нуиденно забит I. Кроме того, двое телят в контрольной группе болели диареей в течение двух недель. Телят изолировали, и, после продолжительного лечения, была предпринята попытка фаготерапии, но безрезультатно (предположительно из-за значительного срока применения антибиотиков). У телят при бактериологическом исследовании выделили энтеропатогенные штамм эшерихий (К99). Один из телят был забит. У больных телят контрольной группы имели место все симптомы диареи - угнетенное состояние; отсутствие а петита, блеска шерстного покрова; бледность видимых слизистых оболочек; температура тела колебалась в пределах 38.5-39,0°С, в отдельных случаях опускалась за нижние границы нормального физиологического состояния; наблюдалась дисфункция кишечника (понос)(табл.2).

У телят, заболевших диареей, в опытной и контрольной группах провели бактериологические исследования, котор^ повторялись на 3, 7 и 10 день жизни телят. При этом энтеробактерии в пробах выделялись в различном соотношении (тэбл.З).

Необходимо отметить, что у телят опытной группы в пробах не встречались бактерии клебсиелл и стафилококк.

Исследуемые в эксперименте штаммы знтеробактерий показали низкую антибиотикочувствительность или ее полное отсутствие к ряду антибиотиков из используемого нами набора (табл.4).

Проверка выделенных нами культур на фагочувствительнссть до и после опыта показала низкую лизабельность бактериофагов в группах больных телят, которых лечили в хозяйстве и животных контрольных групп (Ю^-Ю-^). Фагочувствительность культур в опытной группе телят была выше (10~^-10~^).

Необходимо отметить, что в опытной группе не вьщеляли штаммы культур клебсиелл и стафилококков в результате профилактики телят клебсиеллезнкм и стафилококковым бактериофагом. Титр эшерихий и протей снижался. В целом, проведенные опыты подтвердили результаты эксперимента, проведенного в Белорусском НИИ экспериментальной ветеринарии.

Несмотря на достаточно высокую эффективность полнфага при профилактике диареи новорожденных телят в совхозе "Большевик", лабораторные исследования установило все-таки невысокую лизабельность используемых нами в опыте производственных штм/мов бактериофагов (титр

Опыт по повышению лизогенной активности фаго мн поставили

' Профилактическая эффективность полифегов ' при диарее 4 вкспериментальных телят

Таблица 2

!^Гво! **>»«» ¡Выздоровело j Пало j^Sf

_. _ - - iroSfi&iOI 11 ¥Л 1111 Kí 1111IL _ ____i___*____

Опытная 31 4 12,8 4 100 I 87,1

(полифаг)

Контрольная 13 6 46,1 4 83 I 17 9 53,9

Таблица 3

Состав микрофлоры в пробах фекалий от больных телят в эксперименте

Группы ' 'Номера 'ЭшеРихи'"Протей Шротей !Клебсиелм1 Дитробактер! Стафило-! Синегно телят ! телят } (1^льгар- |микробиль-! | |кокии ¡к|«очка

II! ! 1 I ! 1

Контрольная 5100 + . + + _

• 5122 + * ♦ - + - +

5101 + ' - + -

5136 + - - - ♦

756' - - - - -

757 - - - - -

Опыт ' 5110 + _ + _ _

770 - - - - -

5184 - + - - - -

5177 ♦ + - - - - -

ю

Таблица 4

АнтибиотикочувстЕительность энтеробактерий, вьщеленных в совхозе "Большевик" Серпуховского района Московской области

Выделенные культуры я =г 1 а 1 X § к X се Н X ч> с- X Я О я! Ш Ч О X X о а <ц 2 Ж ч о к г- 1 1 Оксациллин 1 1 1 ¡Стрептомицин [ 1Мономицин 1 1 1 ¡Левомицетин { X з: ч ч я Я" X X Щ ъ 3 ]Новобиомицин [ ■ • X я я 3 о X * - 1 1 Метициллин 1 1 1 ■ 1 1 Тетрациклин 1 I 1 | Ампициллин [ |— | > Эритромицин ] 1 1

Зшерихии 18 20 16 12 - - 18 - 13 12 - - - - 14

Протеи 21 22 - - - 14 19 20 17 18 - - - - 12

плебсиеллы 19 19 II - - . - 16 - II 13 - - - - 15

Стафилококки - 20 - 7 - 10 16 - - 10 - - - - -

Цифрами показаны диаметры зоны лизиса культур вокруг дисков с соответстцующими антибиотиками (мм)

на базе Киргизского НИВИ и биокомбината в городе Фрунзе (Бишкек).

В колхозе "Дружба" Московского района Киргизии для бактериологических исследований на состав микрофлоры были отобраны 10 проб фекалий от больных телят и 3 смыва с полов и стенок клеток, где содержались новорожденные животные.

Выделенные нами культуры были чувствительны лишь к гента-мицину, канамицину, полимиксину; умерено чувствительны к стрептомицину, мономицину, левомицетину, карбенициллину; слабо чувствительны к эритромицину. В отношении к другим антибиотикам энтеробактерии были невосприимчивы.

После постановки короткого ряда по Аппельману на определение фагочувствительности культур мы установили, что эшерихии и протеи слабо лизировались (+) коли-протейным промышленным фагом лишь в разведении- Ю-1. Это говорит о практически нефагочувст-витедьности знтеробактерий в колхозе "Друдба" к промышленному фагу, выпускаемому Фрунзенским биокомбннатом. Дальнейшая наша работа была направлена на повышение титра лизабельности маточных бактериофагов на биокомбинате.

С этой целью мы отобрали 5 проб сточных вод из трех отделений колхоза "Дружба". 20 грамм от каждой пробы подвергли центрифугированию при 8 тыс. об./сек. в течение 10-15 минут для отделения крупных инородных частиц, находящихся в сточных водах.

В опыте использовались штаммы культур знтеробактерий 5эгае-рихии и протеи), выделенных от больных телят в колхозе "Дружба" и имевших низкий титр фагочувствительности (10""*).

В результате выделения фагов из сточных вод и их культивирования титр лизабельности возрос в маточном растворе до 10~® -10"^ как в отношении эшерихий, так и протеев.

Таким образом, исследования, проведенные нами в хозяйстве ' Киргизии, показали эффективность и необходимость метода повышения литической активности бактериофагов к нелизирувщимся и сла-болизиругацимся штаммам с помощью фатов, выделенных из сточных вод конкретного хозяйства.

Культивированные маточные фаги были переданы Фрунзенскому биокомбинату' для производства серийных препаратой.

' ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХ

Литературные данные свидетельствуют о широком распростране-

нии диареи новорожденных телят во всех странах мира и значительном экономическом ущербе, наносимом ею (В.П.Урбан, 1984, Е.Майер, 1986).

Наши исследования подтвердили это. Так, заболевания желудочно-кишечного тракта у телят совхоза "Большевик" Серпуховского района Московской области составили 84% от всех болещих телят, а в колхозе "Дружба" Московского района Киргизии - 82%.

Таким образом, региональные различия мест получения и выращивания телят существенно не влияют на частоту диарей новорожденных телят и являются проблемой для всех хозяйственников в одинаковой мере.

Приступая к нашей работе, мы ориентировались на материалы отечественных и зарубежных авторов (М.Адаме, 1961, И.Н.Блохина, 1979, И.П.Ревенко, 1978), а также на данные практической деятельности научно-исследйвательской лаборатории болезней молодняка Московской ветеринарной академии им.К.И.Скрябина (Л.С. Блакева, 1990, Е.С.Воронин и др., 1990), которые указывали на ведущую роль в этиологии диареи новорожденных телят условно-патогенной микрофлоры, особо отмечая эшерихий, протеев, клеб-сиелл, стафилококки и т.д.

Так, установлено, что их количество в толстом отделе кишечника при диарее может доходить до 10^-10® кл./мл и выше в содержимом кишечника, тогда как у здоровых телят оно не превышает Ю3-Ю4 кл./мл (И.Н.Блохина, 1983). ' 1

Кроме того, продемонстрированы данные о превалировании энтеробактерий в микробном пейзаже у больных диареей телят над другими микроорганизмами. Чаще всего выделяли такие культуры, как зшерихия (35-40%), протей (20-25%), клебсиелла (10-15%).

Проведенные нами бактериологические исследования дали аналогичные результаты. В совхозе "Большевик" Серпуховского района Московской области до ЗОЙ проб показали присутствие патогенных ашерихий, 20% - протеев, 23? - стафилококков, 15% -цитробактер, 5% - клебсиеллы, 1% - псевдомонас и около 5% сальмонеллы. В колхозе "Дружба" Московского района Киргизии мы .выделили от больных телят эшерихии - 85%, протеи - 62%, клебсиеллы - 30%, стафилококки - 23%.

Этиологическая роль энтеробактерий в возникновении диареи новорожденных телят подтверждена при экспериментальном заражении подопытных 'кивотных п Белорусском НИИЭВ им.С. Н.Вшелеского, где испольяопали как монокультуры энтеробактерий (эшерихии,

протеи, клебсиеллы), так и их ассоциации в концентрации 20 млрд. м.т. Культуры обладали адгезивными, токсичными и патогенными свойствами.

К третьему дню после заражения в контрольных группах у телят проявлялся весь симптомокомплекс диареи.

Выбирая путь профилактики и лечения диареи, мы основывались на данных о низкой эффективности на современном этапе методов антибиотико- и химиотерапии (И.Н.Блохина, 1979,1983; Е.С. Воронин, 1990). Так, выделенные культуры были чувствительны к гентамицину; канамицину, полимексину; умеренно чувствительны к стрептомицину,' мономицину, левомицетинй, карбенициллину; слабо лизировались эритромицином. Другими антибиотиками энтеробакте-рии не лизировались. В используемом нами наборе было 15 видов антибиотиков.

Необходимо отметить; что утвервдения теории о привыкании бактерий к средствам химиотерапии (И.П.Ревенко, 1978, Т.Г.Ча-нишвили, 1987) имели место и в наших подопытных хозяйствах, так как из-за ограниченности поставок препаратов на протяжении целого ряда лет, из года в год, ветврачи применяли одни и те же лекарства. Как правило, это - стрептомицин, левомицетин и препараты тетрациклинового ряда.

Кроме того, использование химиопрепар&тов не безвредно для животных и опосредовано для человека.

Об эффективном применении в ветеринарной практике фагов свидетельствуют работы многих отечественных и зарубежных авторов, но из? материал основывается, как правило, на монобактериофагах. В практике же энтеробактерии при диареях телят всегда выступают в ассоциациях, что требует применения целого комплекса фагов.

Однако о применении поливалентных фаговых препаратов литературные данные отсутствуют, что же касается выпускаемых в настоящее время в нашей стране бактериофагов против пуллороза и тифа птиц, а также против паратифа и колибактериоза телят и поросят, то они малоэффективны, так как используются без учета фагочувствительности культур в местах йх применения.

Исходя из вышеизложенного, мы поставили перед собой задачу, направленную на конструирование поливалентного бактериофага, против наиболее часто вртречапдихся возбудителей при диареях телят.

Результаты опыта, пройденного на базе Бел.НИИЭЗ иы.С.Н.

Вышелеского в г.Минске, показали высокую эффективность поливалентного бактериофага (коли-протей-клебсиеллезного) при фаго-чувствительности культур - ЮОТ(++++). В опытной группе, где с целью профилактики использовали полифаг, телята, практически, не болели. При незначительном растройстве пищеварения у телят его удавалось ликведировать после 1-2-разовой повторной дачи бактериофага. В контрольной же группе зараженные телята пали. Летальный исход в этой группе пришелся на 4, 5 и 9 день после рождения телят.

Таким образом, мы установили, что бактериофаги культивированные на энтеропатогенных штаммах культур (£. К99,0П4, Рво&иъ 021 и Л!¿e¿s¿e¿¿a ) лизируют их, не нанося ущерба микрофлоре кишечника телят. Что подтверждает данные авторов о высокой специфичности бактериофагов по отношению к бактериям (И.М. Габрилович, 1973, Т.Г.Чанишвили, 1987).

Проведенные впервые нами испытания коли-протейного и клеб-сиеллезного фагов, а также их смеси для профилактики диареи новорожденных телят, показали высокую эффективность, при значительной антибиотикоустойчивости культур, против патогенных

со/с К99.0Н4, РъоЪии 021 и .

В связи с этим был проведен опыт применения поливалентного препарата для фагопрофилактики и фаготерапии в производственных условиях совхоза "Большевик" Серпуховского района Московской области. Опыт показал, что после дачи полифага'новорожденным телятам они не заболевали диареей, в отличие от телят контрольной группы, где заболело 6 телят из 13, выздоровело 5 из них, один был вынужденно забит. Кроме того, у двоих телят контрольной труппы диарея приняла затяжной характер и длилась две недели.

Профилактическая эффективность поливалентного бактериофага в опытной группе составила 87.1^, эффективность же в контрольной группе телят - 53.975.

Возможно, эффективность поливалентного бактериофага была бы выше, если бы составляпцие его промышленные штаммы проявили лизогенную активность выше, чем при титре Такой вы-

вод мы сделали с учетом результатов исследований Я'.Г.Кишко (1981).

На основании этого вывода мы выделяли бактериофаги из сточных вод на ферме совхоза ."Большевик". Предварительные исследо-ввния показал» увеличение титра лизабельности фагов. Выделенные

фаги были направлены в Горьковский НИИ микробиологии и эпидемиологии для пополнения музея маточных рас промышленных бактериофагов.

Опыт работы с бактериофагами в производственных условиях показал необходимость постоянного контроля фагочувствительнос-ти культур, выделенных в чистом виде.

Кроме того, было установлено, что постоянное применение бактериофагов на одних и тех же животных не снижает их активности, а, напротив, повышает их лизогенность при неоднократном пассажировании через организм заболевших телят.

Эти выводы были проверены нами в Киргизии. Выделенные фаги из нескольких отделений хозяйства имели невысокую лиэогеннуга активность. После выращивания их на культурах, полученных в чистом виде из тех же отделений от больных диареей телят, титр лизабельности маточных фагов возрос до 10~®-10~®, что говорит об эффективности и необходимости используемого нами метода для повышения литической активности бактериофагов, выделенных из сточных вод.

ВЫВОДЫ

1. Впервые в ветеринарной практике эффективно использовались при диарее новорожденных телят бактериофаги - коли-протей-ный, клебсиеллезный, стафилококковый и их смесь.

Испытание поливалентного бактериофага в производственных условиях показало профилактическую эффективность - 87.1%, тогда как в контрольной группе она была 53.9%.

2. Установлена высокая антибиотикоустойчивость у культур энтеробактерий, выделенных от телят, болеющих диареей. Из .15 испытанных антибиотиков, лишь гентаыицин, канамицин и полимик-син обладали активностью к энтеробактериям; умерено лизировали -стрептомицин, мономицин, левомицетин, карбенициллин; слабо ли-эировал эритромицин. К другим антибиотикам энтеробактерии были не чувствительны.

3. Была установлена высокая профилактическая эффективность промышленных моно- и полифагов, приготовленных на энтеропато-генных штаммах'бактерий ( £eo/¿ K99,0II4, 021,

Ste¿¿a ), при экспериментальной диарее телят. Энтеробакте-. рии обладали адгезивными, токсичными и патогенными свойствами.

4. Практически показана зависимость фагочувствительности

культур энтеропатогенных бактерий к моно- и полифагам от региона использования препарата. Конструирование маточных рас бактериофагов должно включать штаммы фагов из разных регионов страны. Чем больше штаммов фагов в маточных расах, тем эффективней использование бактериофагов.

5. Наиболее лизабельные бактериофаги выделяются из окружающей среды в хозяйствах с широким распространением диареи новорожденных телят.

СВЗДЕНШ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Утверждена научно-техническая документация на поливалентный бактериофаг: инструкция по изготовлению и контролю, утвержденная Главным управлением ветеринарии при Госкомиссии Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам; технические условия и временное наставление.

2. Начато производство поливалентного бактериофага против желудочно-кишечных болезней телят и поросят на Омутнинском биопредприятии в объеме 50 тонн в год.

3. Даны рекомендации обдастным и районным ветеринарным лабораториям' по выделению бактериофагов из окружающей среды в хозяйствах, бактериологическим исследованиям телят, больных диареей, определению фагочувствительности выделенных энтеробактерий, для наиболее эффективного применения моно- и полифагов.

4. Методы фагопрофилактики и фаготерапии, использованные в диссертационной работе, рекомендованы для включения в учебный процесс студентов Московской ветеринарной академии и других вузов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ■

1. Камалутдинов Ф.Ю. Профилактика и лечение диареи новорожденных телят поливалентным бактериофагом//Новое в диагностике, лечении г профилактике болезней молодняка сельскохозяйственных животных: Межвед.сб.науч.тр.ЛЬск.вет.акад. им. К.И.Скрябина, I99I.-C.20.

2. Камалутдинов Ф.Ю. Повышение лизируюдей активности баитерио-флгов//Тгп. док.1. Всес. научно-технической конфер. "Профилактика и лечение болезней уолодня^а сельскохозяйственных животных"; 9-10 окт.

г. - Ворэим. - М.: 19Э1. - С. 149.