Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Роль микробов рода Proteus в этиологии желудочно-кишечных болезней телят

. ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАЩЙЯ ИМ.К.И.СКРЯБИНА

На правах рукописи

Блахева-Цонева Лидия Стоянова

РОЛЬ МИКРОБОВ РОДА PROTEUS В ЭТИОЛОГИИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ БСШЕЗНЙ ТЕЛЯТ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, 0Ш53ООТОДОГИЯ, микология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1990

Работа выполнена в Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии им.К.И, Скрябина.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор ВОРОНИН Е.С.

Официальные оппоненты:

1. Доктор биологических наук, профессор Притулин П.И.

2. Доктор ветеринарных наук, профессор Сидоров М.А.

Ведущая организация:

Всесоюзный ордена Трудового Красного Знамени государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов

9 У/ /О

Защита состоится ^ ' 1990 г. в 4 " часов

на заседании специализированном совета Д-120.36,02 по защите диссертаций на сосикание ученой степени доктора наук при Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии им. К.И.Скрябина (109472, Москва, ул.Академика Скрябина, £3, тел.377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии. Автореферат разослан " ^^ " У . 1990 г.

Ученый секретарь специализированного совета

Федосеева Т.Н.

I. ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. С развитием промышленного животноводства широкое распространение получили острые кишечные заболевания /ОКЗ/ телят. Биологические возможности репродукции крупного рогатого скота позволяют выращивать не менее 96% всего количества телят, родившихся жизнеспособными /В.В.Митшин, 1989/. С рождения у телят происходят сложные процессы адаптации их организма к новым условиям внешней среда. Дальнейшее их развитие во многом определяется уровнем резистентности и реактивности организма.

По данным А.Д.Третьякова /1977/ около 7254 отхода скота приходится на молодняк животных. Диарея новорожденных телят, как правило, возникает под действием комплекса этиологических факторов, причем они могут сочетаться в различных вариантах. Одни исследователи считают, что в комплексе этиологических факторов ведущуи роль играет неполноценное кормление стельных коров, а остальные факторы, в том числе и условно-патогенная микрофлора играет вторичную роль / D.Beit Sch.ev и др. I960; Шевцова И.Н., 1987; В.Н.Симонович, Н.В.Пилаева, 1988/.

По мнению других авторов основную роль в развитии заболевания играет условно-патогенная микрофлора /А.П.Кудрявцев, 1980; Рзакулиев Г.Ч,, Багиров Ю.Т., 1988/. Однако, условно-патогенная микрофлора по данным этих авторов может приводить к развитию болезни лишь при наличии других факторов.

В последнее время четко установлено, что одной из причин диареи телят является условно-патогенная микрофлора /Воронин Е.С. и сотр., 1907/. Доследованиями установлено изменение микробного пейзажа при кишечных инфекциях: наряду с сальмонеллами, энтеропатоген-ными эшерихиями этиологическую роль в возникновении диареии молодняка стали играть протеи, клебсиеллы, цитобактер, стафилококки, псевдоманады и др. Поэто^ важно изучение этиологической роли этих микроорганизмов, в частности рода Proteus в возник-

новении диареи телят. Используемые в настоящее время антибиотики при острых кишечных заболеваниях телят часто не приносят желаемых результатов. Это связано с высокой резистентностью протея к применяемым антибиотикам. Кроме того, антибиотики при широком применении вызывают дисбактериозы и иммунодепрессюо у животных. Поэтому необходим поиск новых лекарственных препаратов, не обладающих отрицательными качествами, характерными для антибиотиков.

-г -

В этом аспекте заслуживают внимание специфические фаги и, в частности, протейный препарат.

Бактериофаги'строго специфичны и не наносят ущерба здоровью животных.

Задачи исследований:

1. Изучить микробный пейзаж при диареях телят.

2. Изучить патогенные, адгезивные свойства и серотипы выделенных штаммов протея при диареях телят.

3. Изучить ангибиотико- и фагочувствительность выделенных микроорганизмов рода Prot»«» при диареях телят.

4. Экспериментально воспроизвести диареи телят с помощью микробов рода Proteus

5. Проверить эффективность протейного бактериофага в экспериментальных условиях на телятах.

6. Проверить эффективность полифага с протейным компонентом в производственных условиях.

Научная новизна.

1. В результате проведенных исследований установлена этиологическая роль микробов рода Proteus при диареях телят.

2. Изучена чувствительность различных штаммов протея к специфическим бактериофагам.

3. Предложен протейный компонент для конструирования поливалентного бактериофага против кишечных инфекций телят.

4. Впервые экспериментально произведена диарея с помощью микробов рода Proteus

5. Установлена эффективность протейного бактериофага в экспериментальных условиях на телятах.

6. Показана профилактическая эффективность полифага с протейным компонентом в производственных условиях.

Практическая значимость. Полученные результаты могут слежить исходными данными для разработки новых методов лечения и профилактики диареи телят. Протейный компонент может быть использован при создании поливалентных бактериофагов.

Научные положения, вынесенные на защиту;

1. Этиологическая роль микробов рода Proteus при диареях телят.

2. Экспериментально воспроизведенная протейная инфекция на телятах.

3. Эффективность протейного бактериофага при экспериментальных диареях телят.

Апробация работы» Материалы диссертации доложены на конференции молодых ученых Московской ветеринарной академии (Москва, 1987, 1988, 1989).

Публикации. По-материалам диссертации опубликовано две статьи.

Объем и структура диссертации.

Работа изложена на 115 страницах машинописного текла, и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований и обсуяздения, выводов, практических предложений, списка литературы (включает 157 источника, в том числе 37 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 23 таблицами.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Работа выполнена в научно-исследовательской лаборатории болезней молодняка Московской ветеринарной академии им. К.И.Скрябина, БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского г. Минска, в 4-х хозяйствах Московской области (учхоз "Леоновское", "Память Ильича", "Рамейское", "Барвиха") и в.колхозе им. Ленина Новомосковского района Тульской области.

В работе использовано 177 выделенных культур рода Proteus и 140 телят.

Питательные среды. Для выделения микробов использовали плотные дифференциально-диагностические и селективные среды Эндо, Плос-кирева, 5% кровяной агар, желточно-солевой агар, а также.селективные среды МРС-2 и Блаурока. С целью выявления патогенных микроорганизмов посев исходного материала проводили на среду обогащения - магниевую или селенитовую с последующим высевом на среду Плоскирева и висмут-сульфитный агар. Определение видовой принадлежности микроорганизмов проводили в соответствии с методическими рекомендациями, IX издания "Определение бактерий Берги (1984)", Руководства энтеробактерий под редакцией В.Ч.Покровского (1984), "Применение систем индикаторных бумажных для идентификации энтеробактерий" (1982 г. Горький).

С целью выделения чистой культуры рода Proteus , исследованию подвергли фекалии больных телят, пробы молозива, клинически здоровых и маститных коров, содержимое влагалищ,'смывы с объектов

внешней среды, патологический материал погибших от диареи телят.

Для идентификации микроорганизмов семейства Enterabacte-riacese: рода Protau» применяли СИБ.

Системы индикаторные бумажные (СИБ) представляют собой диски или полоски хроматографической бумаги, содержащие определенные количества субстрата, в сочетании с соответствующим индикатором, стабилизированные пленкообразующим покрытием - поливиниловым спиртом, а также диски из фотопленки с желатиной.

В СИВ, предназначенные для идентификации микроорганизмов семейства E»*8!>obscteri»c«ee входят в состав 2-х наборов - набор "А" для межродовой дифференциации из 9 тестов и набор "Б" для идентификации энтеробактерий до вида по 28 биохимическим свойствам.

Способы применения. Основные требования, предъявляемые при работе с (Ж:

- исследования проводят с чистой культурой, а также с отдельными колониями непосредственно с чашек с дифференциально-диагностическими средами Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агаром;

- в опытные пробирки с рекомендуемыми средами вносят целую петлю суточной агаровой исследуемой культуры;

- погружение дисков в пробирки производят обожженным пинцетом.

Патогенное свойство культур изучали на белых мышах массой

13-15 г,' путем внутрибрюшинного заражения бульонной культуры в дозах 50Q0 илимикробных тел. Всех погибших мышей исследовали бактериологически.

Наличие адгезивных антигенов у выделенных культур определяли микрометодом в РГА с 1% взвесью эритроцитов морской свинки как с добавлением 1% Д- маннозы, так и в отсутствии ее.

Для серологической идентификации использовали сухие адсорбированные 0, а также моновалентные Н сыворотки, согласно Международной антигенно-диагностической схеме Кауфмана и Перч, в реакции агглютинации на стекле.

Для определения антибиотикочувствительности выделенных культур использовали метод диффузии в агаре с применением стандартных дискоса, содержащих антибиотики. Для этого питательную среду разливали по 20 мл в стерильные чашки Петри. На поверхность среды наливали I мл одномилли'ардной, взвеси (в 0,ЭД-ном растворе Ned ) агаровой культуры микроба. Легким покачиванием чашки культуру равномерно распределяли по питательной среде,, излишек жидкости отсасы-

вали стерильной пастеровской пипеткой. Чашки подсушивали в термостате 15 мин. /37°С/ или при комнатной температуре 30-40 мин. Затем на повехность засеянной среды стерильным пинцетом накладывали стандартные бумажные диски с разными антибиотиками на расстоянии 2 см от края и друг от друга, один диск - в центре чашки. После наложения каждого диска пинцет следует обжигать на пламени горелки. Сначала чашки выдерживали при комнатной температуре /2 часа/, затем, перевернув их вверх дном, помещали в термостат на 16-18 ч. /37°С/.

Оценку результатов проводили с учетом наличия или отсутствия зоны задержки роста, размера зоны вокруг диска с антибиотиками. Отсутствие зоны задержки роста бактерии, свидетельствовало о резистентности их к данному препарату. Если проявлялась зона задержки роста ее измеряли по диаметру /включая диаметр диска/ с помощью линейки. Зона задержки до 15 мм является показателем малой чувствительности,' зона в 15-26 мм указывала на достаточную чувствительность испытуемой бактериальной культуры. В данной работе использовали 16 стандартных дисков, содержащих антибиотики.

Определение активности фагов было проведено методой Аппельмана

Титрование фага по Аппельману /жидкой среде/.

В рад стерильных.пробирок из нейтрального стекла одинакового диаметра наливали по 4,5 мл стерильного бульона. В первую пробирку вносили 0,5 мл испытуемого фага. Затем делали последовательные разведения, перенося отдельными пипетками из пробирки в пробирку по 0,5 мл фагн. Обычно использовали 10 пробирок, из последней пробирки лишние 0,5 мл выливали, затем во все пробирки вносили по одной капле /0,05 мл/ смыв с суточной агаровой культуры. 11-я и 12-я пробирки были контрольными в первой из них находился бульон и культура /без фага/ во второй - фаг и бульон/ контроль на стерильность фага/. Все 12 пробирок помещали в термостат , при 37°С на 18-20 ч, после чего учитывали результат фильтрования.

Учет результатов начинали с контролей.

При правильной, постановке опыта в контрольной пробирке, в ре- ■ зультате размножения бактерий наблюдалось помутнение. Этот контроль позволял сделать вывод о том, что взятая в опыт культура жизнеспособна и питательная среда обеспечивает ее рост в данных условиях опыта. Если в опытных пробирках МПБ оставался стерильным,

то это означало, что культура лизировалась фагом.

Жидкость в пробирке с контролем фага должна остаться прозрачной. Этот контроль -позволяет сделать вывод, что посуда, бульон и фаг стерильны.

При правильных результатах в контролях регистрируют характер изменений в первых 10 пробирках.

Рост культуры в пробирках и "опытного" ряда говорит об отсутствии или недостаточности количества в них фага. Титр фага устанавливали по его наибольшей разведении, при котором произошел лизис культуры /содержимое пробирки прозрачно/. Титр обозначали степенью разведения фага с обратным знаком, что- соответствовало порядковому номеру пробирки.

Экспериментальное воспроизведение диареи с помодью Рг. уц1-каг1а было проведено на 3 клинически здоровых новорожденных телятах черно-пестрой породы, живой массой 30-32 кг. Инфицирование осущесавляли путем однократной дачи через рот суточных агаровых культур протея в дозе 20 млрд. микробных тел сразу после рождения. Для экспериментального заражения использовали Рг. ги1ваг1д се-ровар 021, выделенный.из фекалий, больного диареей теленка. Предварительно культуру, используемую для заражения проверяли на вирулентные и адгезивные свойства. Вирулентные свойства были проверены путем внутрибрюшинного введения разных доз живой культуры белым мышам, адгезивные - путем Д-маннозного теста.

Отбор проб фекалий для бактериологических исследований осуществляли через 2,7 дней после заражения. Опытных животных кормили цельным молоком 3 раза в день.

Изучение профилактической эффективности протейного бактериофага. В опыте использованы 9 безмолозивных телят суточного возраста, которые распределены по принципу аналогов на 3 группы.

1- группа - опытная. Сразу после рождения телята получали

протейный бактериофаг в дозе 50 мл через 4 часа после дачи бактериофага телят заражали Рг. \ruigaris в дозе 20 млрд. микробных тел 20 мл.

2- группа - контрольная. 3 телят заражали культурой протея, как описано вышн.

3- группа - контрольная без заражения /3 животные/.

Испытание профилактической эффективности поливалентного фага

в экспериментальных условиях. Работу проводили совместно с аспи-

рантом Ф.Камалутдиновым. В опыте использованы 9 безмолозивных телят суточного возраста, которые распределены по принципу аналогов на 3 группы,

1- груша - опытная профилактика бактериофагом. С целью профилактики диареи сразу после рождения до кормления, телята получали о* 200 мл полифага (колипротейный, клебсилезный, стафилококковый по 50 мл кавдого. Бактериофаг смешивали непосредственно перед выпаиванием через 4 часа.после дачи фага телят заражали смесью бактериальных культур е.-coli серовар 0114 с адгезивным антигеном К 99, Pr„ vulgaris (серовар 021), id.prseeaoniaa (не-титруемая имеющимися сыворотками) и st. aureus , которые были вьщелены из фекалий больных диареей телят и патологического материала от павших телят. Заражающая доза Ю млрд микробных тел каждой культуры, которую смешивали перед введением (итого 40 млрд. микробных тел).

2- группа - контрольная зараженная. 3 теленка заражали культурами как описано выше.

3- группа - контрольная без заражения (чистые животные).

В производственных условиях поливалентный бактериофаг с протейным компонентом со дня профилактики выпаивали телятам с момента рождения I раз в день в объеме 200 мл в течение 5-6 дней.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Этиологическая структура микроорганизмов при диареях телят.

Бактериологически обследовано 30 проб молока от коров, 140 проб фекалий от больных диареей телят, 30 проб содержимого влагалищ, 15 проб смывов с объектов внешней среды, 25 проб патологического материала, погибших от диареи телят.

В результате проведенных бактериологических исследований выделено 681 культура, принадлежащих к семейству Enterobacteriacase, Micrococcacea» , Pseudoatonadsceae

Из числа 681 идентифицированных культур (34,5$) относились к роду Eeehericbi» , (25,9%) к роду Proteus , (12,8$) к роду Stspbylococcue , (12,3$) к роду Klebsiella , (9,455) к роду Citrobacter , (4,9$) к роду Enterobacter , (1,8$) к роду Ente гас occue f (0,2$) К роду Serratia. , (0,2$) К роду Pseudo-■onadacese .

Исследования проб молозива от коров, полученных через 1-2

дня после отела показало, что микрофлора представлена от стафилококка и кишечной палочки. В 30 пробах молозива (50$) были выявлены бактерии рода Preten» в значительных количествах (10 -Ю8 кл/мл) •

Микрофлора влагалищного секрета коров исследованных сразу после отела представлена была Е» coll (100$), Proteus (100%), Citrobacter (66,7$), Ewfcerobacter (66,6%), Serratia (3,3$).

В отобранных с объектов внешней среды (стенки клеток, соски, пол, подстилка) смывах идентифицировано 46 культур. Из них 32,6$ были отнесены к роду Escherichia , 30,4$ к роду Proteus , 10,9$ к роду Klebsiella , 10,9$ к роду Citrobacter .

Бактериологическое исследование микрофлоры фекалий больных диареей телят в возрастном аспекте показало, что уже с 2-3-дневного возраста происходят существенные нарушения микробиоценоза кишечника, повышается число эшерихий, в том числе знтеропатогенных (до Ю7-Ю^ кл/г), протеев (до Юб-Ю® кл/г), клебсиелл (10 кг/г) по сравнению со здоровыми телятами аналогичного возраста.

У здоровых телят бактерии рода Proteus и Klebelall« обнаруживали лишь к 5-7 дню жизни в количестве не более Ю^ кл/г или лишь после выращивания на среде обогащения.

В результате проведенных исследований в колхозе им. Ленина, Тульской области от 28 больных диареей телят идентифицировано 64 штамма, принадлежащих к семейству Ewterobacteriaceae , Mlcro-coccacaae , Pseud oeonaceae . Среди условно патогенных энте-робактерий у 28 больных диареей телят в возрасте от 2-14 дней были выделены культуры Е- coll (100$), Proteus (62,5$), Klebsiella (36,9$), Citrobacter (2,9$), Pseudosoeaceea (1,4$). При бактериологическом исследовании фекалий 34 больных диареей телят в учхозе "Леоновское", Московской области, 2-4-дневного возраста была выявлена 91 культура - е» coll (100$), Protaue (56,0$), Citrobacter (25,8$).

Бактериологическое исследование 18 проб фекалий телят больных диареей в племенном хозяйстве Барвиха, Московской области, выявило, что с 2-3 дневного возраста среди условно-патогенных энтеро-бактерий чаще других выделялись' бактерии рода Proteus (83,8$) в количестве 10 -10 кл/г.

Бактериологическое исследование 28 проб фекалий телят больных диареей в колхозе "Память Ильича" Московской области, выяви-

ли, что среди условно-патогенных энтеробактерий, бактерий рода Proteus выделялись в 53,5% случаев.

При бактериологическом исследовании проб фекалий больных диареей телят в колхозе "Раменское" и колхозе "Серпуховской", бактерии рода Preten» выделялись соответственно в 28,5% и 25,0% случаев.

2.2.2. Биохимические свойства выделенных культур

рода Proteus.

Бактерии рода Proteus являются аэробами и иногда факультативными анаэробами. Однако рост в анаэробных условиях если и происходит, то он очень скуден, а ферментативная активность подавляется. На плотных средах бактерии рода Proteus образовывали характерный сливающийся рост. Для выделения и идентификации протея предложена среда Плоскирева. Наблюдали два вида колоний: s -формы - гладкие и r - формы - шероховатые. На среде Плоскирева колонии имели диаметр 2-3 мм, прозрачные или полупрозрачные, слегка выпуклые с желтовато—розовым перламутровым оттенком, вокруг колонии - желтоватый ореол. На среде Эндо бактерии проявляли способность к роению,, давали сливной рост, другие виды образовывали колонии, сходные с сальмонеллами и шигеллами. На висмут-сульфит агаре через 48 часов роста, колонии -влажные грязно коричневого цвета, после их снятия на среде оставалась темно-коричневая редукционная зона. Биохимические свойства варьировали в зависимости от вида. Протей разжижал желатину, гидролизовал мочевину, непостоянно образовывал индол и Hgs , не разлагал лактозу и маннит.

2.2.3. Определение патогенных свойств микробов рода Proteus . Определение патогенных свойств выделенных микробов рода Proteus

Изучение патогенных свойств 120 культур рода Proteus на 360 белых мышах, весом 15 г показало, что все выделенные культуры вызывали гибель мышей в течение 1-2 суток после их заражения. При вскрытии всех мышей отмечали картину геморрагического энтерита, выявлены множественные точечные кровоизлияния по эндо и эпикарду. При бактериологическом исследовании внутренних органов и тканей павших мышей выделяли культуру рода Proteus

2.2.4. Изучение антигенной структуры выделенных культур рода Proteus

Проведено 48 бактериологических анализов, включая исследова-

ния фекалий больных диареей телят в возрасте 2-14 дней (32), проб молозива клинически здоровых и маститных коров (4), содержимое влагалищ (4), смывов с объектов внешней среды (4), патологический материал от 4-х павших от диареи телят.

Были изучены 42 культуры рода Proteus . Из них 25 культур Рг- obrabllls (59,5%) и I? культур Pr» vulgaris (40,5%).

При серологической идентификации по 0 - Н-антигену били выявлены 5 сероваров протея (Ojg:Hj; OjgiHj; Ojg'.Hr,; OgjtHj; OgQtHj), при этом II культур (26,2$) не была установлена антигенная структура имеющимися сыворотками. Наиболее часто среди сероваров протея выделяли культуры, имеющие антигенную формулу OggrHj (47,6%). Затем 021:% СИ»9?б> и (9,5$). При этом из молозива, содержимого влагалищ коров, смывов с объектов внешней среды ввделяли только серовар Ooq:Hj. Из патологического материала павших животных в разных количествах выделяли серовары Ogj:Hj и OgQiHj. Среди выделе) ных культур протеев преобладали в основном штаммы Pr. eirabilis с антигенной формулой Oqq:Hj (47,3%), тогда как штаммы с антигенной формулой 0i3:Hj; Ojg:Hj; Ojg:Hr,; 0£j:Hj встречались реже. Следует отметить, что один и тот же серовар выделялся как из фекалий и патологического материала павших от диареи телят, так и из молозива, содержимого влагалища коров через 1-2 дня после отела, а также смывов с сосков в данном хозяйстве, что свидетельствует об этиологической роли Pr. eirabilis серовара OßQ'.Hj в возникновении диареи телят.

2.2.5. Изучение адгезивных свойств выделенных культур

рода Proteus

В реакции деманнозорезистентной гемагглютинации, характеризующую адгезивные свойства энтеробактерий установили, что бактерии рода Proteus , выделенные из фекалий больных диареей телят были маннозорезистентными: Pr» «irabilis в 76,0% случаев, Pr» vulgaris в 64,7% случаев, из патологического материала в 100? случаев.

Наличие у большинства штаммов адгезинов также является подтверждением об этиологической роли.протея в возникновении диареи новорожденных телят.

2.2.6, Экспериментальное воспроизведение протейной

инфекции у телят.

Клинические наблюдения показали, что у всех подопытных телят

через 24 часа после введения возбудителя отмечали признаки (снижение аппетита, угнетенное состояние). На 2-3 день у всех телят наблюдали профузный понос, фекалии были водянистые, темно-зеленого цвета, аппетит отсутствовал. Общее состояние было угнетенное. Смерть наступала у животных на 7-8 день после заражения.

В период развернутых клинических проявлений диареи (3-4 день) при бактериологическом исследовании фекальных проб устанавливали дисбактериоз, который характеризовался отсутствием бифидобактерий и молочно-кислой флоры, высоким содержанием бактерий рода протея. В последующие дни заболевания телят (5-7 день) отмечалось дальнейшее повышение количества протея, что свидетельствует об интенсивном их размножении. Так, количество микроорганизмов рода Proteus в I г фекалий на 7 день достиг 10*® кл/г.

Таким образом, представленные данные подтверждают возможность экспериментального воспроизведения диарей при пероральном заражении новорожденных телят энтеропатогеннкш бактериями рода протея, что подтверждают наши данные об этиологической роли их в возникновении острых желудочно-кишечных болезней у новорожденных телят в естественных условиях.

2.2.7. Определение антибиотикочувствительности выделенных культур рода Proteus

С помощью стандартных бумажных дисков проверена чувствительность 85 культур протея, выделенных при диареях животных к 16 антибиотикам. В работе использовались следующие диски антибиотиков: ампициллин, мономицин, стрептомицин, неомицин, олеандсмицин, кар-бинилциллин, левомицетин, бензилпенициллин, полимексин, эритромицин, канамицин, линкомицин, тетрациклин, оксациляин, гентамицин, ристомицин.

Изучение чувствительности к 16 антибиотикам культур рода Protaus , выделенных от телят больных диареей показало, что все они в различной степени были резистентны?«! к. препаратам. Единственно активным антибиотиком оказался гентамицин. Так, выявлено, что наибольшая чувствительность протея мирабилис отмечалась к гентамицину - 64,4%-, умеренная к карбонилциллину, неомицину, мономицину - 22,2$. К остальным антибиотикам проявлена полная резистентность. При этом 35,6% культур оказались устойчивы ко всем 16 антибиотикам, в том числе к гентамицину.

Данные по отношению Rr« vulgaris, показывают, что чувстви-

тельность к гвнтамицину высокая - 75$, слабая к карбонилциллину и неомицину - 12,5$. 25$ культур Pr» vulgaris оказались устойчивы ко всей 16 антибиотикам.

2.2.8. Определение активности фага и фагочувствительность выделенных культур рода Proteus

Нами была изучена фагочувствительность•177 культур рода Pretens , выделенных как из фекалий телят больных диареей, так и другого клинического материала из 7 различных хозяйств Московской и Тульской областей.

Так, из 177 исследованных культур 29,4$ оказались чувствительны к специфическому фагу. ■ При этом более высокая активность фага выявлена к отношении Prv »irabilis - 34,1$, Активность фага по отношению Pr- vulgaris установлена 19,2$.

В результате проведенных исследований установлена неодинаковая фаговая чувствительность культур к протейному фагу от больных диареей телят из различных-хозяйств. Выделена высокая степень ли-зируемости культур, выделенных от больных диареей зверей из зверосовхоза "Салтыковский" (33,3$), совхоз им. В.И.Ленина (31,7$), опытное хозяйство Барвиха (29,2$) и несколько ниже в других хозяйствах.

Для разработки высокоактивных бактериофагов необходим постоянный отбор новых штаммов рода Prataus , выделенных от больных телят острыми кишечными инфекциями.

Для повышения активности бактериофага были сделаны два последовательных пассажа фага на чувствительных культурах. В результате двух последовательных пассажей'титры фага усилились. Так, титр фага на I культуре достиг I0"7, на 5 культурах 10~® и на 5 культурах 10~®. Кроме того, увеличился диапазон их литического действия в отношении культур, которые до пассажей были резистентны к исходному бактериофагу. Так, при адаптации фага ко второму пассажу 6 резистентных культур уже приобрели способность лизиро-ваться в титре

Таким образом, проверка 177 культур протея на чувствительность к протечному бактериофагу показало, что первоначально лишь. 29,4$ культур лизировались препаратом, а после 2 последовательных пассажей уже 32,7$ культур протеи.

Полученные данные показывают о перспективности получения протейного фага. Однако, для получения активного препарата необ-

ходимо: постоянное выделение -резистентных к фагу культур протея, изоляция для них фагов из сточных вод, неоднократные пассажи с целью увеличения вирулентности препарата и спектра действия.

2.2.9. Изучение профилактической эффективности протейного бактериофага -в экспериментальных условиях.

Опыт проводился на базе БелНШЭВ им., С.Н.Вышелесского г. Минска. В опыте использованы 9 безмолозивных телят суточного возраста, которых распределили по принципу аналогов на 3 группы.

3 телятам опытной группы сразу после рождения вводили per сэ протейный бактериофаг в дозе 50 мл. Через 4 часа после дачи бактериофага телят заражали рг„ vulgaris в дозе 20 млрд. микробных тел в объеме 20 мл. Для экспериментального заражения использовали Рг.. vulgaris серовар 021, выделенный из фекалий больного диареей теленка. Предварительно культуру, используемую для заражения проверяли на вирулентные и адгезивные свойства. Вирулентные свойства были проверены путем внутрибрюшинного введения разных доз живой культуры белым„мышам через 1-2 суток после их заражения в дозе 0,2 мл и была Д-маннозорезистентной. Средняя продолжительность жизни телят опытной группы составила 9,6 дней, а профилактическая эффективность протейного фага составила 66,6%.

2 группа - контрольная. Средняя продолжительность жизни этой группы составила 5 дней.

3 группа - контрольная без заражения. Средняя продолжительность жизни этой группы телят составила 5,6 дней.

Микробный пейзаж желудочно-кишечного тракта у подопытных животных показан в таблице I.

2.2.10, Испытание профилактической эффективности поливалентного фага в экспериментальных и производственных условиях.

Для этой цели были сформированы 3 группы телят, в которые входили по 3 гол. животных.

1-я группа - профилактика бактериофагом

2-я группа - контрольная зараженная

3-я группа - контрольная без заражения.

Во 2-й и 3-й группах все телята заболели, а в опытной 33,3%. Средняя продолжительность*заболевания животных в опытной группе 3,5 суток, в контрольной зараженной - 4 суток, а в контрольной

Таблица I

Микробный пейзаж желудочно-кишечного тракта у подопытных животных

|Йсследуемая ; Количество микроорганизмов в I г фекалий, через

пл. j группа ! 3 дня ! 7 дней ! 10 дней

.1. Опытно-зараженная E^.coll Pr» vulg. 1,6.10® 1,2.10® E. coll . 2.0.I07 Pr. vtdg. 4.0.I08 толст, отд. кишеч, Е. coli I,3.I08 Pr. vutLg4,6.I0S

2. E..coll Pr. vulg. 2,6.IQ9 3,0.10s E^.coli I.3.I08 Pr. vulg. 3,5.I0S E. coli I,4.I08 Pr.vulg. 2,0.i07

3. Е..colt Pr. vulg. I,6.I08 2,0.10® E.-coll 2,8.10® Pr. vulg. 4,0.I0S E. coli.I,5.I07 Pr.vulg. 2,0,I07

4. Контрольная Е».coll Pr. vulg. 3,6.10® 2,4.10 толст.отд.кишеч. E.coli 3,8.10® Pr. vulg.. 4,3.I08

5. E.. cell Pr. vulg. 4,2.10® 3,6.IO8 •толст, отд. кишеч. E..colt 4,0.10® Pr. vulg. 4,3.I08

6. •J*«. E..coll Pr. vulg. 3,9.10® 2,6.10® •толст, отд.кишеч. E. . call . 3,6.10® Pr. vulg. 3,2.IO8

7. Контрольная Е» coll без заражения Pr.vulg, 1,2.10® 1,2.10® ■то лет. отд. кишеч. E. call . I,2.I08 Pr. vulg. 1,2.10®

8. E.coll Pr. vulg. 1,3.10® 1,7.10® •толст.отд.кишеч. E..coll 1,2.10® Pr. vulg. 1,9.10®

9. E. coll Pr. vulg. 1,2.10® I,5.I05 ■толст.отд.кишеч. e. colt 1,2.10® Pr. vulg. I,5.I05

без заражения - 5 суток.

Телят контрольной группы профилактировали от диареи согласно схеме, используемой в хозяйстве с применением антибиотиков.

Применение поливалентного бактериофага, в состав которого входил протейный компонент, в производственных условиях показал профилактическую эффективность препарата 71,855.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об определенной эффективности поливалентного фага, а также об этиологической роли условно-патогенной микрофлоры при диареях телят.

ВЫВОДЫ

1. Установлена этиологическая роль микробов протея при диареях новорожденных телят. Подтверждением этоцу служит высокая концентрация бактерий до 10^-10® микробных клеток на I г фекалий, наличие у них адгезивных и токсигенных свойств и экспериментальное воспроизведение на телятах протейной инфекции.

2. Среди выделенных культур протеев при диареях телят преобладали в основном штаммы Рг. в£гаЬ111з с антигенной формулой ®30:^1 (47,3%). Один и тот же серовар выделен как из фекалий больных телят, павших телят, так и из молозива, содержимого влагалища коров через 1-2 дня после отела, а также смывов с сосков в данном хозяйстве, что демонстрирует этиологическую роль Рг. вХгаЫНо серовара Од0:Н| в возникновении диареи телят.

3. В экспериментальных условиях испытан протейный бактериофаг на телятах. В опытной группе заболевания не наблюдалось, в контрольной животные пали на 4-9 день после заражения микробами протея.

4. Применение поливалентного бактериофага, в состав которого входил протейный компонент, в полевых условиях продемонстрировало профилактическую эффективность препарата, составляющую 71,8%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Республиканским, областным и районным бактериологическим лабораториям при постановки диагноза при желудочно-кишечных заболеваниях телят учитывать этиологическую роль микробов протея и давать соответствующие рекомендации.

2. При создании поливалентных бактериофагов для профилактики и лечения диареи телят необходимо включение в препараты протейного компонента.

-16 -

3. Полученные данные необходимо включить в практические занятия студентов, изучающих микробиологию и, в частности, кишечную микрофлору при желудочно-кишечных заболеваниях телят.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Биологические препараты для профилактики диареи телят, вызванных условно-патогенными микроорганизмами. Л.Я.Ставцева, Т.Н.Грязнева, Л.С.Блажева, З.Ы.Бедоева // Современные аспекты профилактики инфекционных болезней молодняка : Межвузовский сб.науч. тр./ Кишиневский с.-х. кн-т им. М.В.Фрунзе.- 1989.- С. 27.

2. Этиология и профилактика желудочно-кишечных заболеваний телят. £.С.Воронин, Д.А.Девршов, Л.С. Блажева-Цонева // Вестник с.-х. науки.-1989.9.-С.397.

Заказ 174у. Объем 1,0п.л. Тираж ЮОэкз. Типография Минстанкопрома СССР.