Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Применение штаммов Bacillus subtilis в профилактике и лечении послеродовых эндометритов у коров

На правах руки шеи

ТАТАРИНОВА Саргылана Степановна

ПРИМЕНЕНИЕ ШТАММОВ BACILLUS SUBTILIS В ПРОФИЛАКТИКЕ И ЛЕЧЕНИИ ПОСЛЕРОДОВЫХ ЭНДОМЕТРИТОВ У КОРОВ

16 00 03 пс и;рштрпая микробиолопта, вирусолог ия, лито юлог ия, миколо! ия смико iоксиколо! иеи и иммуполошя

Автореферат диссермции па соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Якугск 2007

003069977

Рабо 1 а выполнена в ГНУ Яку юкии иаучно-исследова гельскии инети 1ут сельскоюхозяжпва Россельхо ¡академии

Научный руководитель док гор ветеринарных паук, про(])ессор

Неустроев Михаил Петрович

Научный копсультан г ) [ок гор вегерипар! 1ых паук,

сгаршии научный софудник Тарабукина Надежда Петровна

Официальные от юней I ы док 1 ор ве гсринлрпых паук, про<)хххор

Павлова Александра Иннокентьевна

кандида1 вс1срипариых паук, старший научный сснрудпик Степанов Константин Максимович

Ведущая ор1 апизация ГНУ Инешту г 'жеиеримешалъпои

ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхотака; 1емии

Защи [а сосюи юя «_»_2007 I в_часов па ¡аседании

дисссрыционною совеы К 220 071 01 при ФГОУ НПО «Якуюкая государственная сельскохо шгывенная академия» (677007, г Якутск, ул Красильпикова, 15)

С диссер тцнеи можно о л [акоми п>ся в библио кже ФГОУ Н ПО \<Яку1ская 1 осударст венная сельскохозяйственная академия»

Лвторе(1>ераг раюслап «_»_2007 г

Ученый секре I арь диссертационно! о сове 1а 15 Ф Бу 1ковскни

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Успешное развитие скотоводства во многом зависит от воспроизводительной функции коров и максимальной сохранности новорожденных телят Основными причинами возникновения акушерских и гинекологических болезней у коров являются несбалансированное кормление (дефицит в рационах витаминов, макро- и микроэлементов, белка и углеводов), скармливание недоброкачественных кормов, пораженных грибами, содержащих афлатоксины, нитри ш, соли тяжелых металлов, неправильное содержание (полное о гсутствие или 01 раниченныи моцион, недостаточность ультрафиолетовог о облучения, помещений для коров в сухостойный период, сменных родильных отделений, нарушение правил машинного доения, преждевременное использование молодых животных) Все эти неблагоприятные факторы вызывают нарушение обмена веществ, эндокринную недостаточность, I ормональные расстройства Вследствие этого снижается резистентность организма, что создает благоприятные условия для развития условно-патогенной и патогенной, а также неспецифической микрофлоры, которая в нормальных условиях не причиняет вреда (И Ф Заянчковский, 1964,ВС Шипилов, 1977,НН Михайлов,ИЯ Чистяков, 1987, ТЕ Григорьева, 1988, А С Терешенков и др, 1990, В Ф Воскобойник, Г Г Козлов, 1991,ВТ Самохин, 1994,Л П Студенцовссоавт,2000)

Большинство применяемых в настоящее время способов и методов терапии и профилактики бесплодия, маститов предусматривают широкое использование антимикробных препаратов Применение вышеперечисленных методов можег привес ги к неблагоприятным последствиям снижению качества животноводческой продукции (молока и мяса), появлению лекарственно устойчивых штаммов микроорганизмов, аллергических реакций и дисбактериозов у животных и человека Поиску эффективных средств для лечения и профилактики гинекологических болезней животных, посвящены многочисленные исследования, но отдельные аспекты данной проблемы до конца не решены (А Г Нежданов, 1994, С Н Слипченко.Л Д Тимченко, 1994, А И Кузин и др , 2002, А В Андреева, 2003)

В последнее время в ветеринарии ведутся исследования по изысканию и разрабо гее нового поколения экологически безопасных препаратов на основе эубиотических микроорг анизмов, способных занять свое место в системе мероприятии по обеспечению сохранения здоровья и повышения продуктивности животных (ПИ Жданов, В М Мешков, Л И Лепский, 2000, ИН Зюбин, 2001, А И Кузин, Г В Борисова, Д В Губанов, 2002, А В Андреева, 2002,0 Н Преображенскии, 2002, Г А Ноздрин и соавт, 2005)

В условиях Крайнего Севера экстремальные климатические условия ведения животноводства обуславливают часто гу и тяжесть болезней органов воспроизводства, сдерживающих увеличение поголовья и способствующих

снижению качества продукции животноводства Поиск безопасных и эффективных средств, ме годов профилактики и лечения болезней органов воспроизводства остается актуальной задачей ветеринарной медицины

Цель п задачи исследований. Целью исследовании является разработка мер профилактики послеродовых осложнений коров в условиях Республики Саха (Якугая) с использованием эубиотических микроорганизмов Для достижения цели ставились следующие задачи

анализ акушерско-гинекологических болезней крупно! о рогатою скота в Республике Саха (Якутия) за последние 10 лет,

изучение микрофлоры влагалищно-цервикальной слизи коров с нормальным течением родов и с послеродовыми осложнениями,

изучение влияния пробиотика «Сахабактисубтил» и культуралыюй жидкости штамма бактерий Bacillus subtihs «ТНП-3» на течение послеродового периода коров в условиях Якутии,

разработка схемы применения пробиотика «Сахабактисубтил» и культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtihs «ТНП-3» для нормализации микробиоценоза половых органов у коров

Научная новизна. Впервые в условиях Республики Саха (Якутия) изучен видовой состав микро^шоры влаг алища коров при нормальном течении отела и послеродовых патологиях Доказано, что парентеральное введение культуралыюй жидкости штамма бактерии Bacillus subtilis «ТНП-3» не т олько повышает иммунобиоло1ическую реактивность, но и корректирует вагинальный и кишечный микробиоценоз, тем самым способствует профилактике послеродовых осложнении Определены оптимальные дозы и схемы применения пробиотика «Сахабактисубтил» и культуралыюй жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» для профилактики послеродовых патологий коров Впервые предложен метод инфракрасной сушки для одновременного сочетания обезвоживания и сохранения концентрации микробных клеток в пробиотике «Сахабактисубтил» на сорбенте-носителе Подготовлены и представлены в Федеральный институ i промышленной собственности заявки на патент «Способ профилактики послеродовых осложнений коров» с приоритет ом от 23 03 2006 за № 2006109303, «Способ профилактики эндометритов коров», «Способ лечения эндометритов коров» Практическая значимость. Разработаны и опубликованы методические рекомендации «Штаммы Bacillus subtilis в профилактике послеродовых осложнений коров», угвераденные Ученым Советом ГНУ ЯНИИСХ РЛСХН Предложены способы профилак гики нарушений микробиоцепоза у коров с применением про биотика «Сахабактисуб тил» и культуралыюй жидкост и штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3», которые повышают иммунобиологическую реактивность организма, корректируют вагинальный и кишечный состав микрофлоры стельных коров, тем самым способствуют предотвращению послеродовых гинекологических осложнений

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на заседаниях Ученого Совета Якутского НИИСХ РАСХН (2003-2006), ежегодных аспирантских чтениях, совете молодых ученых и сотрудников института (2004-2006), научной конференции молодых ученых СО РАСХН «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых» (Новосибирск, 2004), Сибирском международном ветеринарном кошресее «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005), на республиканской научно-практической конференции «Безопасность жизнедеятельности в Республике Саха (Якутия)» (Якутск, 2006)

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 5 работв сборниках научных трудов ГНУ ЯНИИСХ РАСХН, материалах республиканских, российских и международных научных конференции, в журнале «Зоотехния»

Объем н структура диссертации. Диссертация изложена на 136 страницах Состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения резуль гатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения Иллюстрирована 25 таблицами и 1 i рафиком Список использованной литературы включает227 источников, в том числе 33 - иностранной ли гературы

Основные вопросы, выносимые на защиту:

-результаты изучения вагинального микробиоценоза коров с нормальным течением отела и с послеродовыми осложнениями,

- результаты изучения влияния пробиотика «Сахабактисубтил» и кулыуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtihs «ТНП-3» на течение послеродового периода коров в условиях Якутии,

- материалы по разработке схемы применения культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subülis и пробиотика «Сахабактисубтил» для коррекции микробиоценоза 1 ениталий у коров в Республике Саха (Якутия)

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы

Диссертационная работа выполнена в 2004-2006 тт на базе лаборатории по разработке микробных препаратов Якутского научно-исследовательского института сельского хозяйства Россельхозакадсмии Опыты проведены на стельных коровах в опытно-производственном хозяйстве «Покровское», СХПК «Хагасское» Животные были подобраны по принципу аналогов, содержались в типовых коровниках

Анализ ста гистических данных по акушерско-гинекологическим болезням коров по Республике Саха (Якутия) составлен по отчетным данным

Депар гамента ветеринарии МСХ PC (Я) с 1995 по 2005 год

От отелившихся коров взяты пробы крови, влагалищно-цервикальная слизь и фекалии для гематологических и микробиологических иеследова1 шй Слизь из влагалищно-цервикальиого канала коров для бактериологического исследования взята по методике Н Н Михайлова с соавт (1967) и доставлялась в лабораторию в течение 3-х часов

При микробиоло1 ическом исследовании использованы общепринятые методы Родовая и видовая идентификация выделенных микроорганизмов проводилась согласно «Справочнику но микробиологическим и вирусологическим методам исизедований» (1982), «Определителю зоонатогешплх микроорганизмов» (1995), «Определителю бактерий Берджи» (1997) Для вирусологических исследований материал доставлялся в Якутскую республиканскую ветеринарно-испытательную лабораторию При микологических исследованиях грибов, выделе! шых из влагалигщю-цервикалыюй слизи, использованы «Методы исследования в ветеринарной микологии» (В В Курасова, J1C Малиновская, 1971), «Лабораторная диагностика микотоксикозов» (Л Ф Кузнецов, М Г Ковальская, Е Н Софронов, 1989)

При исследовании вагина;шого микробиоценоза использоваг¡ы питательные среды, приготовлешшгс по общепринятому ГОСТ-у MRS для лактобактерий, ГМС для учета бифидобактерий, среда с азидом натрия для эн герококков, среда Байрд-Паркера для учета стафилококков, среда для псевдомонасов, среда с бромтимоловым синим для иерсиний, скошенный МПА для выделения протея по Щукевичу Выделение микроскопических i рибов проведено ме годом непосредственного посева в агаровую среду, в качестве которой использованы среды Сабуро и Чапека Для спорообразуюгцих бактерий (после прогрева до 80°С в течение 15 минут) использован МПА При посеве применен метод разведений Подсчет выросших коло; мй проводился в счетчике колоний, окраску мазков проводили по Граму Учет резуль гатов посева проведен через 18 - 24 часа для бактерий, а для грибов до 5 суток

Для выделения чистых куш. 1урисполкзован метод непосредстве!шого пересева Определение количества гемоьчобина, эритроцитов, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови проводили согласно методическим рекомендациям, разработанными МП Неустроевым, В И Малышевой (1995), а также использовали методики, разработанные П Н Никаноровым (1979), ПА Емельяненкоссоавг,(1980),П Н Смирновым с соавт, (1989)

Биохимические исследования на содержание общего белка и его фракции, каротина, кальция, фос(]юра, магния проводились в лаборатории биохимии и массового анализа ЯНИИСХ Анализы проведены на спектральном анализаторе NIRSCANER model LCE 4250, производства США

В опытах использован пробиотический препарат «Сахабактисубтил», изготовленный на основе штаммов бактерий Вас subtüis «ТНП-3» и Вас subtihs «ТНП-5», согласно ТУ 9384-003-00670203-06

Культуральная жидкость из штамма бактерий Вас subtilis «ТНП-3» напучена следующим путем культивирование на мясо-пептонном бульоне при температуре 37°С в течение 5-7 суток, за гем центрифугирование при 7000 об/ мин в течение 15 мин и фильтрация

Полирибонат применяли соптсно «Наставлению по применению полирибоната в ветеринарии в качестве иммуномодулятора» (утвержден Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ № 13^-03/0060 от26 04 01 г) Изучение антагонистических свойств микроорганизмов проведено методом диффузии в ai ар, антибио гикоустойчивость - методом дисков

Экономическую эффективность предлагаемого способа профилактики послеродовых патологий рассчитывали по «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий», утвержденной Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 21 февраля 1997 г

Экспериментальные данные подвергли статистической обработке с помощью критерия Стыодепта-Фишера (1988)

В экспериментальной работе использовано 786 коров, 950 проб влагалищно-цервикалыюй слизи от опытных и кон грольных групп животных, 180 проб крови и 280 проб фекалий Проведено 1410 бактериолог ических, микологических, микроскопических, гематоло1 ических и биохимических исследований

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Анализ акушерско-гинекологических болезней коров в Республике Саха (Якутия)

По отчетным данным Департамента ветеринарии МСХ РС (Я) с 1995-2005 п по акушерско-гинекологическимзаболеваниям у коров регистрируются гипофункция, гипотрофия, атрофия, кисты яичников, задержание последа, эндометриты

Изучение эпизоотологических датшых показывает, что из инфекционных болезней, проявляющихся поражением половых органов (абортами) крупного рогатого скота, спорадически регистрируются инфекционный ринотрахеит, респират орно-синцитиальная инфекция и хламидиоз

Заболеваемость крупного рогатого ско i а инфекциошгым ринотрахеитом с каждым годом идет к уменьшению, так как улучшаются лабораторная диагностика, ветеринарно-профилакгаческие мероприятия По результатам исследований Якутской ветеринарно-испытательной лаборатории, заболеваемость респираторно-сшщитиалыюй инфекцией крупного рогатого скота имеет тенденцию к распространению Положительно реагирующие животные регистрируются в количестве 0,09 - 9% от числа исследованных Неблагополучная эпизоотологическая си гуация по республике была по

хламидиозному a6opiy коров, но в последние i оды количество положительно реагирующих животных уменьшилось от 66,6% до 7,7%

В послед! see десятилетие от общего маточного поголовья коров по peci iy блике огел составляет в среднем 70,9±3,51%, при этом гинекологической диспансеризацией охватывается только 22,0+1,73% коров Ежегодно с гинекологическими заболеваниями в послеродовом периоде выявляется, в среднем 6498,1 ±36,9 больных коров, ч го составляет 24,16±2,03% от о гела О г общего количества гинекологических больных самый высокий ироцет приходится на задержание последа с последующим разви тем эндометрита—65,0±3,6%

Также, но данным Якутской ветерттарнсьиспьггатеяьной лаборатории в 20042005гг при микологическом исследовании 127проб абортированных плодов выявленытоксигепныегрибы родов Aspergillus (71,0%) и Mucor(39,0%)

Таким образом, анализ статистических данных по акушерско-гинекологическим заболеваниям коров по Республике Саха (Якутия) за последнее десятилетие показывает, что основное место среди акушерско-гинекологических заболеваний занимают послеродовые гинекологические осложнения, как задержание последа с последующим развитием эндометритов

2. Результаты изучения влагалищного микробиоценоза коров в условиях Якутии

2.1. Микрофлора влагалищно-цервикальной слизи коров с нормальным течением отела

В период массового отела нами проведены исследования вагинальной микрофлоры коров в ОПХ «Покровское», СХПК «Хатасское» Для исследований были отобраны коровы с нормальным течением родов в период инволюции

Результаты проведенных исследований показали, что у клинически здоровых коров с нормальным течением родов, в основном, в количественном отношении преобладают спорообразующие аэробные бактерии рода Bacillus (до 33092,0±109,50 м к в 1 мл слизи), заметно уступают им лактобактсрии (до222,7±] 5,2 м к ), также энтерококки (до208,3±8,3 м к) Спервыхднеи после отела в небольшом количестве peiисгрируются бифидобактерии Отмечено постоянное присутствие представителей условно-патогенной микрофлоры протея и стафилококков (до 597,0±5,5 м к ) В первые три дня после отела во влагалищной ели зи коров регистрируются дрожжеподобные грибы, также следует указать, что с десятого дня во влагалищном секрете отмечено единичное присутствие колоний плесневых грибов рода Aspergillus Таким образом, в условиях Якутии у здоровых коров с нормальным теча шем родов в первые три для после отела во влагалищном секре те преобладают бактерии рода Bacillus, заметно им уступают лакго- и бифидобактерии, отмечено

присутствие дрожжеподобных грибов рода Candida ипредставителей условно-патогенной микрофлоры (протеи, непатогенные стафилококки)

2.2. Микрофлора влагалищно-цервикальной слизи коров с послеродовыми осложнениями

Изучение микрофлоры влагалищно-цервикальной слизи коров с послеродовыми осложнениями проводилось также в период массового отела в ОПХ «Покровское» и СХПК«Хатасское»

Животные содержались в типовых коровниках Условия содержания и кормления были одинаковыми Диагноз на эвдометритставился на основании анамнестических данных и клинических симптомов болезни, которые проявлялись чаще всего па 5-7-ой день после отела

В вапшалыюи микро(|июре коров с послеродовыми осложнениями, также доминируютспорообразующие аэробные бактерии (до 3050,0±150,0м к в 1 мл слизи), хотя и количественном отношении их в 10 раз меньше, чем в микрофлоре здоровых коров Отмечено очень малое количество бифидо- и лактобак герии (15,0±5,0 м к в 1 мл слизи), энтерококков (670,0±23,0 м к), увеличение количества условно-патогенных микроорганизмов, особенно патогенных стафилококков (до 3210,0±255,5 м к), эшерихий (147,93±1,12 м к), присутствие иерсш шй и протея Следует отметить, ч го в отличие от микрофлоры коров с нормальным отелом, у коров с послеродовыми осложнениями с первых дней присутхпвуют несколько видов токсигенных грибов рода Aspergillus и Mucor A fumigaius,A flavus,A mger,MucorHRhizopus

Таким образом, при микробиологическом исследовании влагалшцно-цервикалыюго секрет д коров с послеродовыми осложнениями установлено явление дисбакгериоза увеличение количества эшерихий, патогенных стафилококков, наличие токсигенных грибов Aspergillus, присутствие иерсиний, протея В то же время наблюдается снижение содержания количества бифидобактфий, лаю обактерий и спорообразующих аэробных бактерий

2.3. Микологические исследования влагалищно-цервикальной слизи коров с послеродовыми осложнениями

В результате микологических исследований выделены микроскопические грибы, 01несенныек2 типам Ascomicota и Zygomicota, 5 родам, 4 видам

От коров с нормальным течением послеродового периода были выделены грибы рода Aspergillus, Mucor, Candida, которые встречаются по одному виду A flavus,iuraM racemocus, или Candida albicans У коров с послеродовыми осложнениями встречаются ассоциация нескольких видов грибов - М. racemosus, М ramosissimus, Rhizopus microsporum varrhi^opodiformus, A fumigatus Fresenius, A nidulans,A flavusLmk,A nigcr Полученные данные указывают па роль грибов как возбудителен вагинальных инфекций

2.4. Идентификация видов бактерий рода Bacillus, выделенных из микрофлоры влагалища коров

Нами проведена идентификация спорообразующих аэробных бактерий, которые доминируют в количественном отношении в микробиоценох- половых органов коров в условиях Якутии Получены чистые культуры спорообразующих аэробных бактерий, выделенных из влагал ищпо-цервикалыгой слизи коров в норме и с послеродовыми осложнениями Всего выделено 19 штаммов В основу схемы идентификационных признаков положены принципы, изложенные в работах R Gordon (1973), ав гора систематики бактерий рода Bacillus в послод ви изданиях «Определителя бакгерии Bergey»

Все 19 штаммов бактерий рода Bacillus - палочковидные бактерии, аэробы, которые образуют споры, положи тельно окрашиваются по Граму Все ш гаммы подвижны, продуцируют каталазу, при росте на МП А почти все выдерживают присутствие хлористого натрия до 7%, не образуют лецитиназу и несколько отличаю гся по гидролизу крахмала, разложению казеина, образованию оксидазы и ацетилметилкарбинола и по разложению ряда Сахаров На основании результатов изучения физиолого-биохимических свойств определены до видов Известно, что виды бактерий рода Bacillus распределены в три морфологические группы От коров с нормальным течением родового и послеродового периода выделены Вас megaterium, Вас pumihs, Вас coagulans, Вас firmus, Вас laterosporus, Вас brevis, Вас alvei Из них 52,6% относятся к I группе, а 42,1 % к II группе

От коров с послеродовыми осложнениями выделены Вас coagulans, Вас pumihs, Вас laterosporus, Вас alvei, Вас stearothermophilus Из них -11,4% относятся к II группе, 14,2% к I группе

Обобщеггие полученных данных показывает, что от здоровых коров выделены бактерии рода Bacillus (в количественном отношении) в основном относящиеся к I группе (52,6%), а от больных - к II группе (71,4%)

Следует отметить, что идентификация спорообразующих аэробных бактерий не показывает существенной разницы в видовом составе бактерий рода Bacillus в микрофлоре половых путей здоровых и больных эндометритами коров в условиях Якутии

2.5. Антибнотикоустойчивость бактерий рода Bacillus, выде пенных из влагалищно-цервикальной слизи коров в норме и с послеродовыми осложнениями

В опытах по изучению аптибиотикоустойчивосги испытали чувствительность 19 штаммов бактерий рода Bacillus, выделенных из влагалищно-цервикальной слизи коров, к разным видам антибиотиков, относящихся к группе полипептиды (полимиксин), аминогликозиды (канамицин, неомицин), цефалоспорины (пефоперазон, цефуроксин), нитрофураны (фурадоштн),тетрациклины (тетрациклин)

Штаммы спорообразующих аэробных бактерий, выделенные из микро([шоры влагалища коров с нормальным течением отела и послеродового периода, в основном 72,7%-100% антибиогикоустойчивы, наиболее чувствительны к неомиципу Штаммы, выделенные о i коров с послеродовыми осложнениями, более чувствительны к воздействию антибиотиков из группы амшюгликозидов и цефалоспоринов

Следует схюбо отмстить устой1 швссгьшорообра^опдк бактерий, вьвделехшьк из половых путей коров к тетрациклину и фурадонину, которые наиболее часто применяются при акушерско-шнеколог ических заболеваниях в скотоводческих хозяйствах Якутии Таким образом, полученные результаты исследований необходимо у1 штывать при лечении послеродовых осложнений коров

2.6. Антагонистические свойства спорообразующих аэробных бактерий рода Bacillus, выделенных из вагинальной микрофлоры

Изучена ан iai онистическая активность спорообразующих аэробных бактерий Вас megatenum, Вас pumilis, Вас brevis, выделенных, из вагинальной микрофлоры огздоровых коров, но отношению к токсигепным грибам рода Aspergillus, которые часто регистрируются в вагинальной микрофлоре коров с послеродовыми осложнениями

Антагонистическую активность штаммов бактерий Bacillus определяли методом диффузии в ai ар на средах Чапека и МПА В качестве тест-культур использованы плесневые грибы рода Aspergillus, выделенные из вагинальной мшфсх|торы коров Длясравне1шяа1паг01шстичеа<0йактив110сгавь1шеуказа1ц1ь1х штаммов использованы паспортизированные в ВГНКИ ветпрепаратов (2000) природные штаммы Вас subtilis «ТНП-3» и Вас subtilis «ТНП-5»

Как показали результаты проведенных опытов, штаммы Вас megatenum, Вас pumilis, Вас brevis, выделенные из ваг иналыюй микрофлоры, обладаю i слабыми антагонистическими свойствами по отношению к токсигепным 1рибамА niger,A flavus,A fumigatus, по сравнению с паспортизированными штаммами бактерий Вас subtilis «ТНП-3» и Вас subtilis «ТНП-5»

На основании проведенных исследований при разработке мер профилактики и лечения послеродовых осложнений целесообразнее применение штаммов бактерий Вас subtilis «ТНП-3» и Вас subtilis «ТНП-5», как наиболее эффективных по отношению к токсигепным грибам, присутствующим в вагинальной микрофлоре коров с эндометритами

3. Разработка способов профилактики послеродовых осложнений коров

3.1. Испытание культуральной жидкости штамма бактерий Вас. subtilis «ТНП-3» и иммуностимулирующего препарата полирибоната стельным коровам в целях профилактики послеродовых осложнений

С целыо профилактики послеродовых осложнений стельных коров был

испьп ая ш гамм бактерий Вас subtilis «ТНП-3» (культу ра льная жидкость), для сравни 1ия с шм - полирибонат

Производственный опыт проведен в СХПК «Хатасское» на стельных коровах за 40 -60 дней до отела Животных делили на 3 группы

Первая группа состояла из 41 коровы, ко i орой вводили полирибонат вну гримышечно по 1,5 мл, через каждые 10 дней, 3 раза в месяц

Вторая группа - из 38 коров, которым вводили культуралъную жидкость штамма бактерии Вас subtilis «ТНП-3» подкожно, по 2 мл через каждые 10 дней, 3 раза в месяц

Контрольная группа - из 36 коров, которые пренара г не получали За животными установили ежедневное наблюдение, исследованы кровь, вагинально - цервикальная слизь на 2-4-ый день после о гелов

По результатам проведенных исследований, в первой опытной ipynne (41 гол ), где вну гримышечно вводился полирибонат, наблюдались единичные аборты -1 гол (2,4%), задержание последа -11 ол (2,4%), эндометриты -1 гол (2,4%) У второй опытной группы животных (38 гол ), получавшей культуралъную жидкостыптаммов бактерий Вас subtilis «ТНП-3», аборты и послеродовые осложнения не отмечены В контрольной группе (36 юл ) наблюдались аборты - 2 гол (5,5%), задержание последа - 3 гол (8,3%), эндометриты - 4 гол (11,0%)

Наиболее оптимальный вагинальный микробиоценоз о гмечен во второй опьш1ойфуппеживот!пзк,которымвводилику]1ьтуральну1ожидкост1) штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» Так, количество представителей нормальной микрофлоры бифидо-и, особенно, лактобактерий (3430 м к в 1 мл слизи) больше, чем в первой опытной группе - в 34,3 раза, а в сравнении с контрольной - в 80,5 раз Также отмечено снижение содержания условно-патогенных микроорганизмов (эшерихий, стафилококков), о!сутствие токсигенных грибов, наличие которых наблюдалось в первой опытной и контрольной группах животных

Выраженный дисбактериоз вагинальной микрофлоры отмечается у контрольной группы животных очень малое количество представителей нормофлоры, превалирование условно-па югенных микроорганизмов (протеи, эшерихии), патогенных стафилококков (до 10620 мк в 1 мл слизи), разновидностей токсигенных грибов рода Aspergillus Резко увеличены количество спорообразующих аэробных бактерий (до 26500 м к в 1 мл слизи), что в 4,07раза больше, чем во в горой и в 1,6 раз - чем в первой опьгшых группах По результатам гематологических исследований установлено, что у коров обработанных полирибонатом и во в горой опытной группе, обработанных культуральной жидкостью штамма бактерий Вас subtilis «ТНП-3» достоверно повысилось количество лейкоцитов, эритроцитов, гемоглобина, а также бактерицидной и лизоцимнои активности по сравнению с контрольной группой Анализируя результаты проведенных опытов, можно заключить, что

парен гсральиое введение кулътуралыюй жидкости штамма бактерии Bacillus subtilis «ТНП-3» стельным коровам не только способствует повышению резистентности орг анизма, по и создает благоприятные условия для развития нормальной микрофлоры и предо гвращает дисбактериоз половых путей, тем самым способствует профилакт ике абортов и послеродовых осложнений

Введение полирибоната стельным коровам показало, что его применение повышает иммунобиологический статус, по не коррек шруе г микробиоценоз животных и недостаточно эффективно в профилактике послеродовых патологий На основании результа гов проведенных опытов приходим к выводу, что наиболее оффек гавпым для профилактики послеродовых осложнений у коров является парентеральное введение культуральнои жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3»

3.2. Производственное испытание культуральнои жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» для профилактики послеродовых осложнений коров

Проведены производственные испытания по применению культуральной лсидкосш штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» в СХПК«Хатасское» за 1,5-Змесяцадоотелаиа250стсиып)1хкоров Живошыхразделилина2группы опытная (137 гол) и коп грольная (113 гол) Коровам опытной группы до отела подкожно вводили кулшуральиую жидкость ш гамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» по 2 мл1 разв10дней,трехкратно,3разавмесяц Контрольной группе не вводили Для исследовании взята кровь, влагалишно-цервикальная слизь, фекалии после отела Прииашедова11швапшаш>ногомикробиоценозапосяеотеяаукоровотлтаои группы выявлено преобладание представителей нормальной микрофлоры лактобактерии (53,03±0,51 тыс м к) в 3,87 раз, бифидобактериипа 3 порядка, спорообразующих аэробных бактерий (1,40±0,07 тыс м к ) в 1,52 раза больше, в то же время потенциальных энтсропатогснов лактозонегативных (7,31 ±0,36 тыс м к) в 1,49 раз, энгерококков (0,35±0,024тыс м к) в 1,2 раза, стафилококков (0,17±0,025 тыс м к)- в 2 раза ниже по сравнению сконгролыюй группой Также у коров опы гной группы по сравнению с кон грольной группой количество видов токсиг енных грибов заметно меньше

Следова 1ельно, применение культуральнои жидкости ш гамма бактерии Bacillus subtilis «ТНП-3» стельным коровам способствует нормализации ваг инальной микроом оры повышает содержание лакто- и бифидобактерий, спорообразующих аэробных бактерии, снижает количество энтеробактерий, стафилококков, энтерококков и патогенных грибов

Также, подкожное введение культуральной жидкости штамма бактерий Baallas subtilis «ТНП-3» способствуе г устранению дисбактериоза кишечника увеличению содержания лактобактерий (833,3 м к в 1 мл слизи), когда как у контрольных они отсутст вуют Количество эшерихий у опытных животных (81,33±2,47 м к ) меньше в 1,81 раз, чем у контрольных, эшерококков

(47,5±2,47 м к ) ниже в 2,49 раз, а спорообразуюгцих аэробных бактерий у опытных коров (2913,5±65,32 м к) в 2,83 раза больше, чем у контрольных У контрольных животных присутствуют стафилококки (110,1 ±6,80 м к ), а у опытных они не обнаружены Количество видов гоксигенных грибов меньше у опытных коров Из этого можно сделать вывод, чго применение культуральной жидкости штамма бакгерий Bacillus subtilis «ТНП-3» коровам до отела положительно влияет на кишечный микробиоценоз

Результаты производственных испытании показали, чго введение культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3 предотвращает послеродовые осложнения у 9 5,7% обработанных животных Таким образом, проведенные производственные испытания подтвердили эффективность применения культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» для профилактики послеродовых осложнений коров По результатам испытаний культуральной жидкости ш гамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» для профилактики послеродовых осложнений у коров подготовлена и представлена в Федеральный институт промышленной собственности заявка на патент «Способ профилактики послеродовых осложнении коров» с приоритст ом о г 23 03 2006г за № 2006109303

3.3. Разработка способа инфракрасной сушки пробиотика на сорбентах-носителях

В практике скотоводства довольно трудоемко пероралыюе применение животным жидких препаратов, по этому одной из задач наших исследований являлась апробация инфракрасной сушки (ИК-с) для обезвоживания пробиотика «Сахабактисубтил», адсорбированного на носителях, с одновременным сохранением исходного количества микробных клеток

В опытах использован иробиотический препарат «Сахабактисубтил» Препарат изготовлен на основе штаммов бак герии Вас subtilis «ТНП-3» и Вас subtilis «ТНП-5», выделенных из мерзлотных почв Якутии (ТУ 9384003-00670203-06), инструкция по его применению для профилактики и лечения дисбактериозов новорожденных телят и поросят у1верждена Россельхознадзоромот14 11 2006 г

В опытах использовали ИК-с марки МИК-2 В качестве сорбентов-носителей пробиотика «Сахабактисубгал» испытали стерильный цеолит (фракции мука), высушенный сапропель, комбикорм На первых же этапах исследований был исключен сапропель, как не обладающий адсорбирующими свойствами

В ходе опыта установили, что 20 г цеолита адсорбирует 20 мл концентрированного препара га «Сахабактисубтил» (40 доз), а 20 г комбикорма адсорбирует 30 мл или 60 доз препарата

В результате опы t ов установлено, что при ИК-с при темпера iype 90°С и экспозиции 15 минут сохранение микробных клеток в пробиот ике - на цеолите только до 55,3%, а в комбикорме до 70,5% от исходно! о содержания

И i э roí о следует, что наиболее предпочтительнее, в качестве сорбеш а-носителя, комбикорм Проведены опыты по разработке режимов ИК-с, обеспечивающих обезвоживание пробиотикана комбикорме смаксимальным сохранением исходного содержания микробных клеток в пробио гике

ИК-с применяли при температурах -45°, 60°, 65°, 75°, 80°С при экспозициях 15, 30 минут, но одновременное сочетание обезвоживания и сохранения содержаг шя микроб11ых клеток в пробиотике «Сахабактисубтил» на комбикорме дос1 ишу ю при ИК-с с температурой 75°С и экспозиции 30 минут

Для бактерий рода Bacillus гемперааура до 80°С не являе гея губительной, а, наоборот, оптимальной и используется при предпосевной обработке для дифференциации от других микроорганизмов

Полученный в результате ИК-с пробиотик «Сахабактисубтил» на комбикорме в 1 г содержит 150 млрд м к (или 3 дозы препарата)

3.4. Результаты изучения перорального применения пробиотика «Сахабактисубтил» стетьным коровам

Опыт был проведен на 47 стельных коровах за 3-4 месяца до огела, принадлежащих ОПХ «Покровское», в период зимнего стойлового содержания с декабря по март месяц

Пробиотик «Сахабактисубтил» для перорального применения стельным коровам использовали после ИК-сушки Коровам опытной группы (25 гол ) индивидуально давали препарат (150 млрд м к ) перорально, с комбикормом по 5 г, 1 раз в день, в течение 10 дней каждого месяца Применяли 3 месяца подряд до огела Коровам контрольной группы (22 гол) не давали препарат За животными вели наблюдение После опы га у отелившихся коров опытной и кон грольной групп брали влагалищно-цервикальную слизь, кровь, кал

В опы той группе эвдометритрегисгрировалсяу 1 гол (4%), в контрольной группе у 3 гол (13,6%) В опы гной группе сервис - период составил 67,8 дней, сокра шлея на 8,4 дня по сравнению с контрольной группой - 76 Д дня

При исследовании вагинально-цервикалыюй слизи у коров, не принимавших препарат, зарегистрировапыявления дисбактериоза отсутствие лакт о- и бифидобак герий, присутствие токсигенных грибов, как A mger, А fumigalus, A llavus, Л nidulans, патогенных стафилококков (600,0±12,0тыс м к в 1 мл слизи), увеличение количества эшерихий(14,02±0,67тыс м к.) в 1,31 раз, энтерококков (3,65±0,33 тыс м к) в 3,92 раза Укоров,принимавших препара г, зарегистрирован наиболее оптимальный микробиоценоз отмечено отсутствие вышеперечисленных токсигенных грибов, кроме Candida paraplilosus, повышается количество спорообразующих бактерий (19,37±0,93 тыс м к )в2,28раз,появляютсябифидо-имолочнокислыебактерии(1,6±0,03 гыс м к ),стафилококки отсутствуют

У коров опытной группы при пероралыюм применении пробиотика «Сахабактисубтил» в кишечном микробиоценозе заметно увеличиваются

представители нормофлоргл количестволактобактерии(2,59±0,005тыс мк в 1 г фекалий), что в 3 тысячи раз больше, бифидобактерий также -на 2 порядка выше,чемв контроле Также повышается количество спорообразуюшдабактфий (35,33±2,15тыс мк)в4раза,лакгоюположигелы1ыхг)шерихии(63,51±0,26тыс м к ) в 6 раз выше, чем у контрольных Токсигенных грибов меньше в опытной группе Следует отметить значительное снижение потенциальных энтеропатогенов-лактозонегативныхэшерихий(9,20±0,13тыс м к )в 1,5раза По резуль гатам гематологических исследований животных под влиянием препарата у коров опытной группы, получавших пробиотик «Сахабакгисубтил», достоверно повышаются лейкоциты, эритроциты, гемоглобин, а также бакгерицидная акшвность сыворотки крови, по сравнению с контрольной группой, 4i о связано с влиянием препарата на неснецифические факторы иммунитета

Также вели наблюдение за телятами, полученными отопы шыхи кон грольпых групп коров Брали фекалии для исследова! шя па кишечныи микробиоце! юз

Результа гы исследования кишечной микрофлоры новорожденных телят (12 гол.), полученных от опытных коров, принимавших до отела перорально препарат «Сахабакгисубтил», показываю г, что содержание лактобактерий (1875±4,71 тыс мк в 1 г фекалий) выше в 101,35 раз, увеличивается количество бифидобактерии и спорообразуюших бактерий (49,1610,38 тыс м к ) в 9,83 раза, чем у гслят контрольной группы (12 гол ) Отмечено снижение количества токешенныхтрибов,эшерихий(150±5 гыс м к )в28,57раза, энтерококков (1750±6,5 тыс м к) 18,24 раза ниже, по сравнению с контрольной группой телят Не были отмечены признаки желудочно-кишечных раостройств у телят, полученных от коров, принимавших до отела пробиотик «Сахабактисубтил», в отличие от телят контрольной группы, у которых наблюдалась диарея у 8 голов, чт о составляет 66,6%

Следовательно, перора пьное применение пробиотика «Сахабактисуб тл» до отела с комбикормом повышает иммунобиологическую реак гивнос i ь организма стельных коров, предотвращает дисбактериозы вагинально! о и кишечного тракта, тем самым способст вуе г профилактике послеродовых осложнений и получению здоровых телят По результатам работы подана заявка на патент РФ «Способ профилактики эндометритов у коров»

Таким образом, с целью профилак гики послеродовых осложнении коров в условиях Якутии научно-обоснованы и разработаны эффективные способы сприменением(пероралыюеилипаренгеральное)штаммовбактерийВас111и^ subtilis «ТНП-3» и «ТНП-5», выделенных из мерзлотных почв

Разработанные методы профилактики послеродовых эндометритов коров с применением парен гералыюш и перорального применения штаммов бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» и Bacillus subtilis «ТНП-5» (i (робиотика «Стхабакшсубтил» и культуральной жидкости) являются эко1 юмически обосл юваш швы и составляют на 1 голову 372 и 286 руб илина1рубльзаграт5,16и1,79руб (соответствсшю)

4. Применение пробиотика «Сахабактисубтил» и культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» в лечении послеродовых эндометритов коров

4.1. Интравагинальное применение пробиотика «Сахабактисубтил» при лечении послеродовых эндометритов

С целью изучения терапевтической эффективности пробиотика «Сахабактисубтил» при лечении послеродовых эндометритов были поставлены производственные опыты в период массового отела с февраля по май в ОПХ «Покровское» и СХПК «Хатасское»

Всего в опыте было 48 коров с послеродовыми эндометри гами Диагноз послеродовый эндомс трит ст явился с учетом клинических признаков, данных вагинального и ректального исследования животных Были созданы 3 группы 2 опы шыс 1 руины коров и 1 - контрольная, все животные в возрасте 3-8 лет В контрольной группе (16 гол ) для лечения применяли схему, принятую в хозяйствах антибиотик бициллин-3 (внутримышечно) и фуразолидоновые палочки (интраваг ииально) 1 раз в день в течение 5 дней В первой опытной группе (16 гол ) интравагиналыю вводили пробиотик «Сахабактисубтил», предварительно удалив из полости рогов матки экссудат, в дозе 10 мл (50 млрд м к ) в день один раз в течение 3 дней подряд Во второй опытной группе (16 гол) - в дозе 5 мл (25 млрд м к) в той же кратности Исследован вагинальный микробиоцепоз в динамике (на 1,2,3,30 день после лечения) У животных опытных групп, в огличие от контрольной, в первые два дня отмечались обильные выделения В течение срока наблюдения (15 дней) в группе коров, получавших пробиотик «Сахабактисубтил», сроки выздоровления сокращаются на 2-3 дня (5-6 дней) по сравнению с контрольной группой животных (8-9 дней) При изучении результатов осеменения коров установлено, что сервис-период (период до оплодотворения) в опы гной группе коров составляет 68 дней, а в контрольной группе - 116 дней Яловость соответственно составляет 3,4% и 21,4%

После введения пробиотика «Сахабактисубтил» в дозе 10 мл (50 млрд м к) в вагинальной микрофлоре увеличивается содержание лакто- и бифидобак герий Если в первый день введения количество лактобактерий составляло 0,43±0,01 тыс м к в 1 мл слизи, на второй день их количество увеличилось до 0,72±0 05 тыс мк , на третий день до 1,1+0,1 тыс мк , через 30 дней содержание лактобактерий 0,7±0,05 тыс м к Количество спорообразующих аэробных бактерий в первый день 590,0± 18,1 тыс м к , на 2 день 634,0±16,2 тыс м к , на 3 день 1000,0±20,1 тыс м к Установлено присутствие протея в первый день, затем, начиная со в горого дня, постепенно исчезает Количество стафилококков в первый день 1,8±0,23 тыс мк ,на второй день количество уменьшается до 0,6±0,02 тыс м к и не выявляется Содержание токсигенных грибов в динамике уменьшается, вплоть до

исчезновения У коров опытной группы, в отличие от контрольной, псевдомонасы и иерсинии отсутствуют

Во второй опытной группе, где пробиотик «Сахабактисубтил» вводился интравагинально в дозе 5 мл (25 млрд м к ), в первый день лактобактерии отсутствуют, появляются на второй день 0,7±0,01 тыс м к , на третии день количество увеличивается 1,1 ±0,01 тыс мк Количество энтеробактерий в первый день составляе г 9,3±0,4 т ыс м к , затем на 2 день уменьшается 1,98± 0,2тыс мк,наЗденьдо0,5±002тыс мк Бифидобактериирегистрируются с первого дня, на 2-3 день их количество увеличивается Количество спорообразующих аэробных бактерий в первый день 41,0± 1,2 тыс м к , на 2 день 43,0± 1,4 тыс мк ,на3день55,0±3,2тыс мк Количество стафилококков в первый день 15,0±0,4 тыс м к , на 2 день 2,6±0,01 тыс м к , на 3 день не выявляются Псевдомонасы, иерсинии, протеи отсутствуют Отмечено присутствие токсигешшх грибов Исходя из результатов исследований вагинальной микрофлоры, наиболее эффективно применение пробиотика «Сахабактисубтил» в дозе 10 мл (50 млрд м к )

Результаты исследований особенно заметны по сравнению с контрольной группой, при лечении которой применялся антибиотик бициллин-3 (внутримьшк?шо) и фуразошщоновыепалочки (внутриматочно) В контрольной группе после применения схемы лечения регистрируется явный дисбактериоз угнетение, исчезновение из вагинальной микрофлоры представителей нормального биоценоза, преобладание условно-пато1 енных и на toi енных микроорганизмов, в том числе иерсиний и токсигенных грибов рода Aspergillus Так, в контрольной группе в динамике исследований количество молочнокислых бактерий в первый день 2,7±0,3 тыс м к , на 2-3 дни не выявлены Количество эптеробак ¡ерий в первый день 4,0±0,01 тыс м к , на 2 день 3,2±0,016 тыс мк, на 3 день 3,4±0,11 тыс мк Бифидобактерии присутствуют, но их количество заметно меньше, по сравнению с опытной i руппои Присутствуют постоянно про гей и токсигенные грибы Количество стафилококков в контрольной труппе в первый день 50,0±1 2 тыс мк ,иа второй день 21Д ± 1,03 тыс м к, на 3 день 11,2±0,4 тыс м к Спорообразующие аэробные бактерии на первый день 570,0+14,3 тыс мк.на 2 день 500,0+15,1 тыс м к , на 3 день уменьшается до 45,0±0,12 тыс м к

Исследование вагинальной микрофлоры через 30 дней после введения пробиотика «Сахабактисубтил» показало, что у коров опытной г руппы при интравагинальном введении пробиотика «Сахабак гисубтил» в дозе 10 мл (50 млрд м к ), повысилось содержание лактобактсрий (0,7±0,05 тыс м к ) в 2,12 раз, чем во второй опытной группе, где интравагинально вводили в дозе 5 мл (25 млрд мк ), спорообразующих аэробных бактерий (2,10±0,'086 тыс мк)в 10,52 раза, энтеробактерий (4,56±0,10 тыс мк ) в 1,14 раз Протеи, токсигенные грибы, иерсинии, псевдомонасы отсутствуют, стафилококки снижаются в двух опыт! 1ых т руппах

При исследовании через 30 дней в контрольной группе по-прежнему регистрируется стойкий дисбактериоз половых путей лакто- и бифидобактерии отсутствуют, количество спорообразующих аэробных бактерий составляет(3,75±0,12тыс мк в 1 мл слизи), высокое содержание условно-патогенных микроорганизмов, особенно эгнерихий (150,4±1,4 тыс м к ), стафилококков до (8,0±0,32 гыс м к ), отмечено присутствие токсигенных грибов, которые определены до видов Л niger,A fumigatus,A flavus, A mdulans Следовательно, полученные результаты исследований показывают эффективность лечения эндометритов пробиотиком «Сахабактисубтил» по сравнению с бициллином-З и фуразолидоновыми палочками

Таким образом, интравагипальпое введение пробиотика «Сахабактисубтил» в разовой дозе 10 мл (50 млрд м к ) при послеродовых эндометритах способствует снижению сроков заболевания, нормальному течению послеродового периода, оптимизации микробиоценоза половых путей (повышение содержания лакто- и бифидобактерий, уменьшение количества условно-паioi енных бактерий и токешенных грибов) На основе полученных данных подана заявка на патент РФ «Способ лечения зндометритов»

4 2. Сочетание парентерального применения культуральной жидкости штамма бактерий Вас. subtilis «ТНП-3» к интравагинального введения пробнот пка «Сахабактисубтил» при лечении эндометритов

Испытано сочетание парен гералыюго введения культуральной жидкости штамма бактерии Вас subtilis «ТНП-3» и интравагинального введения пробиотика «Сахабактисубтил» при лечении эндометритов у 17 коров, принадлежащих частному сектору с Модут Намскот о улуса По анамнезу лечение эндометритов с применением антибиотика бициллин-3 и фуразолидоновых палочек не улучшило состояние животных

Нами проведено исследование влагалищной микрофлоры Полученные результаты исследований позволили предположить, что первопричиной эндометрит ов в хозяйстве являются токсигенные грибы рода Aspergillus По наблюдениям ветеринарпо! оврача хозяйства, в последние годы резко возросла пораженное гь кормов плесневыми грибами У животных после лечения химиопрепаратами (бициллин-3, фуразолидоновые палочки) регистрируется дисбактериоз полового трак га о гсут ствуют лакто- и бифидобактерии

Рекомендовано лечение с применением пробиотика «Сахабактисубтил» в дозе 10 мл (50 млрд м к ) ин гравагинально 1 раз в день до выздоровления, подкожное введение куль гуральной жидкости штамма бактерии Вас subUllis «ТНП-3» по 2 мл Лечение проводилось 5 дней При осмотре через 11 дней, отмечено клиническое выздоровление живо гных Взяты смывы влагалищной слизи для бактериоло1 ических исследований, при этом отмечено появление

бифидобактерий, отсутствие протея и уменьшение токсигепных грибов (присутствует Mucor racemosus)

Полученные результаты исследований еще раз доказывают не эффективносп> при эндометритах антибиотиков широкого спектра действия, в данном случае бициллина-З, а также фуразолидоновых палочек, взятых без учета механизма деисгвия, применение ко горых явилось причиной развития дисбактериоза половых путей

Таким образом, установлена терапевтическая эффективность пробиот ика «Сахабактисубтил» при интравагинальпом применении в разовой дозе 10 мл (50 млрд м к ) в сочетании с парентеральным введением культуральной жидкости штамма бактерии Вас subtilis «ТНП-3»

Проведенные опыты показали, в отличие от вышеуказанных препаратов, высокую терапевтическую эффхжтивность препаратов из ш гаммов Вас subtüis (пробиотика и культуральной жидкости) при лечении послеродовых осложнений у коров, в основном эндометритов, вызванных токсигенными грибами рода Aspergillus Штаммы Вас subtilis не только обладают выраженным антагонистическим действием в отношении грибов рода Aspergillus и условно-патогенных микроорганизмов, но и, устраняя дисбактериоз, корректирую г вагинальный микробиоценоз и способствуют выздоровлению коров

ВЫВОДЫ:

1 Установлено значительное распространение акушерско-гинекологических болезней крупного рогатого скота в Республике Саха (Яку гия) Так, в среднем (1995-2005 гг) ежегодно заболеваемость составляет 24,16%, из них 65,0% приходится на эндомстри ты

2 Во влаг алищно-маточнои микрофлоре коров с нормальным течением родовог о акта с первых дней после отела выявлено преобладание бактерий рода Bacillus (до 33092,0±109,5 м к в 1 мл слизи), заметно уступают им лактобактерии(до222,7±15,2м к в 1 мл слизи), регистрируются в небольшом количестве бифидобактерии, также присутствуют условно-патогенные микроорганизмы (протеи, стафилококки)

3 У коров с послеродовыми осложнениями per истрируется дисбактериоз половых путей увеличение количества лнерихий, иерсиний, патогенных стафилококков, рост грибов рода Aspergillus Втожсврсмянаблюдаетсязаметнсе уменьшение представителей нормальной микрофлоры спорообразующих аэробных бактерий, бифидобактерий и отсутствие лактобактсрий

4 Одной из причин эндометритов коров в условиях Якутии является развитие условно-патогенных бактерий и токсигенных грибов A niger, А fumigatus, A flavus, A mdulans

5 Из спорообразующих аэробных бактерий, доминирующих в влагалищной микрофлоре коров в условиях Якутии, выделены Вас megaterium, Вас pumilis, Вас coagulans, Вас firm us, Вас laterosporus, Вас brevis, Вас alvei, Вас stearothermophilus

6 Парентеральное или пероральное введение штаммов бактерий Bacillus subtilrs «ТНП-3» и Bacillus subtihs«THn-5» стельным коровам до отела повышает иммунобиологическую реактивность организма, предо пзращает дисбактериоз, нормализует вагинальный и кишечный микробиоценоз, тем самым способствует профилактике послеродовых осложнений и получению здоровых телят

7 У телят, полученных от коров, принимавших пробно тик «Сахабактисубтил», в кишечнои микрофлоре повышается содержание преде гавителей нормальной микрофлоры - лактобактсрий в 10 раз, бифидобактерии на 2 порядка, не отмечаются желудочно-кишечные расстройства, по сравнению с контрольной группой

8 Установлена терапевтическая эффективность шправагинального применения пробиотика «Сахабак шеубтил» в разовой дозе 50 млрд м к при эндометритах в сочетании с парентеральным введением культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3»

9 Разработан эфс}х:к швный режим инфракрасной сушки (при температуре 75°С и экспозиции 30 минут), обеспечивающий одновременное сочетание обезвоживания и сохранения содержания микробных клеток в пробиотике «Сахабактисубтил», адсорбированном на комбикорме

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материалы диссерт ации вошли в мет одические рекомендации «Ш i аммы Bacillus subtilis в профилактике послеродовых осложнении коров» (Якутск, 2006), которые утверждены Ученым совет ом ГНУ ЯНИИСХ (протокол №2 от22 февраля 2006 г ) и предложены для внедрения в производство

Заявка на патент РФ «Способ профилактики послеродовых осложнении коров» с приоритетом от23 03 2006 за №2006109303

Заявка на патент РФ «Способ профилактики эндоме гритов коров»

Заявка на патент РФ «Способ лечения эндоме гритов коров»

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1 Татаринова, С.С. Проблемы профилактики органов воспроизводства / С.С. Татаринова, М П Неусгроев // Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых тр конф мол ученых СО РАСХН (15-16 ноября 20041 ,пос Краснообск) —Новосибирск, 2004 —С 270271

2 Татаринова, С.С. Изучение вагинального микробиоценоза коров в условиях Якутии/С.С.Татарннова, Н П Тарабукина, М П Неусгроев, С И Парникова // Актуальные вопросы ветеринарной медицины маг Сиб междунар ветеринарного конгресса (3-4 марта 2005 г , Новосибирск) — Новосибирск, 2005 —С 133-135

3 Тарабукина, Н П Знание микробной экологии - одна из основ безопасности жизни/Н П Тарабукина, С И Парникова, МП Федорова, А А Былгаева, А А Ефимова, С.С. Татарннова //Безопасность жизнедеятельности в Республике Саха (Якутия) Mai респ пауч -практ конф —Якутск Изд-во ЯГУ, 2006 —С 17-18

4 Неусгроев,МП Применениепробиотика«Сахабактисубтил»стельным коровам/МП Неусгроев, С.С. Татаринова //Зоотехния —2006 —№12 — С 21-23

5 Тарабукина, Н П Штаммы Bacillus subtilis в профилактике послеродовых осложнений коров ме i одические рекомендации/Н П Тарабукина, М П Неусгроев, СИ Парникова, С.С. Татаринова/РАСХН, сиб отд-ние ГНУ Якут НИИСХ —Якутск,2006 —12с

Подписано к печлш 20 04 2007 г Формат 60x84 1/32 Гаршпура limes Нечап> трлфдрешдя Уел печ л 1,5 1ирлж 100 Ж! № 227

Onn.4,uaiioi¡n 1УЯ11ИИСХСХ)РЛСХ11 г Яку1ск,ул К,таи ирпшвшш, 5 ieri 36-40-76

Актуальность темы: Успешное развитие скотоводства во многом зависит от воспроизводительной функции коров и максимальной сохранности новорожденных телят. Основными причинами возникновения акушерских и гинекологических болезней у коров являются: несбалансированное кормление (дефицит в рационах витаминов, макро-и микроэлементов, белка и углеводов); скармливание недоброкачественных кормов, пораженных грибами, содержащих афлатоксины, нитриты, соли тяжелых металлов; неправильное содержание (полное отсутствие или ограниченный моцион, недостаточность ультрафиолетового облучения, помещений для коров в сухостойный период, сменных родильных отделений, нарушение правил машинного доения, преждевременное использование молодых животных). Все эти неблагоприятные факторы вызывают нарушение обмена веществ, эндокринную недостаточность, гормональные расстройства. Вследствие этого снижается резистентность организма, что создает благоприятные условия для развития условно-патогенной, патогенной, а также неспецифической микрофлоры, которая в нормальных условиях не причиняет вреда (И.Ф. Заянчковский 1964; B.C. Шипилов 1977; Н.Н. Михайлов; И.Я. Чистяков 1987; Т.Е. Григорьева 1988; А.С. Терешенков и др, 1990; В.Ф. Воскобойник, Г.Г. Козлов, 1991; В.Т. Самохин, 1994; А.П. Студенцов с соавт. 2000).

Большинство применяемых в настоящее время способов и методов терапии и профилактики бесплодия, маститов предусматривают широкое использование антимикробных препаратов. Применение вышеперечисленных методов может привести к неблагоприятным последствиям: снижению качества животноводческой продукции (молока и мяса), появлению лекарственно устойчивых штаммов микроорганизмов, аллергических реакций и дисбактериозов у животных и человека. Поиску эффективных средств для лечения и профилактики гинекологических болезней животных, посвящены многочисленные исследования, но отдельные аспекты данной проблемы до конца не решены (А.Г. Нежданов, 1994; С.Н. Слипченко, Л.Д. Тимченко, 1994; А.И. Кузин и др., 2002; А.В. Андреева, 2003).

В последнее время в ветеринарии ведутся исследования по изысканию и разработке нового поколения экологически безопасных препаратов на основе эубиотических микроорганизмов, способных занять свое место в системе мероприятий по обеспечению сохранения здоровья и повышения продуктивности животных (П.И. Жданов, В.М. Мешков, А.И. Лепский, 2000; И.Н. Зюбин, 2001; О.Н. Преображенский, 2002; А.И. Кузин, Г.В. Борисова, Д.В. Губанов, 2002; А.В. Андреева, 2002; Г.А. Ноздрин и соавт., 2005).

В условиях Крайнего Севера экстремальные климатические условия введения животноводства обуславливают частоту и тяжесть болезней органов воспроизводства, сдерживающих увеличение поголовья и способствующих снижению качества продукции животноводства. Поиск безопасных и эффективных средств, методов профилактики и лечения болезней органов воспроизводства остается актуальной задачей ветеринарной медицины.

Цель и задачи исследований. Разработка мер профилактики послеродовых осложнений коров в условиях Республики Саха (Якутия) с использованием эубиотических микроорганизмов.

Для достижения этой цели ставились следующие задачи:

1. анализ акушерско-гинекологических болезней крупного рогатого скота в Республике Саха (Якутия);

2. изучение микрофлоры влагалищно-цервикальной слизи коров с нормальным течением родов и с послеродовыми осложнениями;

3. изучение влияния пробиотика «Сахабактисубтил» и культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» на течение послеродового периода коров в условиях Якутии;

4. разработка схемы применения пробиотика «Сахабактисубтил» и культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» для нормализации микробиоценоза половых органов у коров.

Научная новизна. Впервые в условиях Республики Саха (Якутия) изучен видовой состав микрофлоры влагалища коров при нормальном течении отела и послеродовых патологиях. Доказано, что парентеральное введение культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» не только повышает иммунобиологическую реактивность, но и корректирует вагинальный и кишечный микробиоценоз, тем самым способствует профилактике послеродовых осложнений. Определены оптимальные дозы и схемы применения пробиотика «Сахабактисубтил» и культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» для профилактики послеродовых патологий коров. Впервые предложен метод инфракрасной сушки для одновременного сочетания обезвоживания и сохранения концентрации микробных клеток в пробиотике «Сахабактисубтил» на сорбенте-носителе.

Представлены в Федеральный институт промышленной собственности заявки на патент «Способ профилактики послеродовых осложнений коров» с приоритетом от 23.03.2006 за № 2006109303, «Способ профилактики эндометритов коров», «Способ лечения эндометритов коров».

Практическая значимость работы. Разработаны и опубликованы методические рекомендации «Штаммы Bacillus subtilis в профилактике послеродовых осложнений коров», утвержденные Ученым советом ГНУ ЯНИИСХ РАСХН (протокол №2 от 22 февраля 2006 г.). Предложены способы профилактики нарушений микробиоценоза у коров с применением пробиотика «Сахабактисубтил» и культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3», которые повышают иммунобиологическую реактивность организма, корректируют вагинальный и кишечный микробиоценоз стельных коров, тем самым способствуют предотвращению послеродовых гинекологических осложнений.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на заседаниях Ученого Совета Якутского НИИСХ РАСХН (2003-2006), ежегодных аспирантских чтениях, совете молодых ученых и сотрудников института (2004-2006), научной конференции молодых ученых СО РАСХН "Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых" (Новосибирск, 2004), Сибирском международном ветеринарном конгрессе "Актуальные вопросы ветеринарной медицины" (Новосибирск, 2005), на республиканской научно-практической конференции "Безопасность жизнедеятельности в Республике Саха (Якутия) "(Якутск, 2006).

Публикации. Основные научные результаты по теме диссертации опубликованы в пяти печатных работах. В том числе, одна статья в рецензируемом журнале «Зоотехния».

Положения, выносимые на защиту.

- результаты изучения вагинального микробиоценоза коров с нормальным течением отела и с послеродовыми осложнениями;

- результаты изучения влияния пробиотика «Сахабактисубтил» и культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» на течение послеродового периода коров в условиях Якутии;

- материалы по разработке схемы применения культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» и пробиотика «Сахабактисубтил» для коррекции микробиоценоза гениталий у коров в Республике Саха (Якутия).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 136 страницах. Состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Иллюстрирована 25 таблицами и 1 графиком. Список использованной литературы включает 227 источников, в том числе 33 -иностранной литературы.

ВЫВОДЫ:

1. Установлено значительное распространение акушерско-гинекологических болезней крупного рогатого скота в Республике Саха (Якутия). Так, в среднем (1995-2005 гг) ежегодно заболеваемость составляет 24,16%, из них 65,0% приходится на эндометриты.

2. Во влагалищно-маточной микрофлоре коров с нормальным течением родового акта с первых дней после отела выявлено преобладание бактерий рода Bacillus (до 33092,0±109,5 м.к. в 1 мл слизи), заметно уступают им лактобактерии (до 222,7±15,2 м.к. в 1 мл слизи), регистрируются в небольшом количестве бифидобактерии, также присутствуют условно-патогенные микроорганизмы (протеи, стафилококки).

3. У коров с послеродовыми осложнениями регистрируется дисбактериоз половых путей: увеличение количества эшерихий, иерсиний, патогенных стафилококков, рост грибов рода Aspergillus. В то же время наблюдается заметное уменьшение представителей нормальной микрофлоры: спорообразующих аэробных бактерий, бифидобактерий и отсутствие лактобактерий.

4. Одной из причин эндометритов коров в условиях Якутии является развитие условно-патогенных бактерий и токсигенных грибов A. niger, А. fumigatus, A. flavus, A. nidulans.

5. Из спорообразующих аэробных бактерий, доминирующих в влагалищной микрофлоре коров в условиях Якутии, выделены Вас. megaterium, Вас. pumilis, Вас. coagulans, Вас. firmus, Вас. laterosporus, Вас. brevis, Вас. alvei, Bac.stearothermophilus.

6. Парентеральное или пероральное введение штаммов бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» и Bacillus subtilis «ТНП-5» стельным коровам до отела повышает иммунобиологическую реактивность организма, предотвращает дисбактериозы, нормализует вагинальный и кишечный микробиоценозы, тем самым способствует профилактике послеродовых осложнений и получению здоровых телят.

7. У телят, полученных от коров, принимавших пробиотик «Сахабактисубтил», в кишечной микрофлоре повышается содержание представителей нормальной микрофлоры - лактобактерий в 10 раз, бифидобактерии на 2 порядка, не отмечаются желудочно-кишечные расстройства, по сравнению с контрольной группой.

8. Установлена терапевтическая эффективность интравагинального применения пробиотика «Сахабактисубтил» в разовой дозе 50 млрд. м.к. при эндометритах в сочетании с парентеральным введением культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis «ТНП-3» (2 мл, однократно).

9. Разработан эффективный режим инфракрасной сушки (при температуре 75°С и экспозиции 30 минут), обеспечивающий одновременное сочетание обезвоживания и сохранения содержания микробных клеток в пробиотике Сахабактисубтил адсорбированном на комбикорме.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материалы диссертации вошли в методические рекомендации «Штаммы Bacillus subtilis в профилактике послеродовых осложнений коров» (Якутск, 2006), которые утверждены Ученым советом ГНУ ЯНИИСХ (протокол №2 от 22 февраля 2006 г.) и предложены для внедрения в производство.

Заявка на патент РФ «Способ профилактики послеродовых осложнений коров» с приоритетом от 23.03.2006 за № 2006109303.

Заявка на патент РФ «Способ профилактики эндометритов коров».

Заявка на патент РФ «Способ лечения эндометритов коров».