Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Применение молочно-кислых бактерий - галлиферма и энтероцида при колибактериозе цыплят

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ имени К.И. СКРЯБИНА

Р Го

г ' и

ОД На правах рукописи

НОЯ т*

ДОНКОР ДЖОЗЕФ ХИКСОН

ПРИМЕНЕНИЕ ЫОЛОЧНО-КИСЛЫХ БАКТЕРИЙ - ГАЛЛИФЕРМА И ЭНТЕРОЦИДА ПРИ К0ЛИЕАКТЕРИ03Е ЦЫПЛЯТ

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, микология, эпизоотология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1995.

Работа выполнена в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, заслуженный деятель науки Российской Федерации, профессор Бессарабов Б.Ф.

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор Бурлаков В.А.

2. Кандидат ветеринарных наук, доцент Дьяконова Е.В.

Ведущая организация:

Московская государственная академия прикладной биотехнологии

Защита состоится "——" ——1995 г. в часов

на заседании дяссертацисшного совета К 120.36.05 по защите .диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина (109472 Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел. 377-93-83).

С .диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан " " 1995 г.

Ученый секретарь •диссертационного совета

Меньшикова З.Н.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

I.I. Актуальность темы. Цря расмотрении способов борьбы с многим инфекционными болезнями бактериальной этиология чаще сосредоточивают основное внимание на патогенных микроорганизмах - возбудителях этих заболеваний, реже обращают внимание на сопутствующую обычную микрофлору желудочно- кишечного тракта. Но в ряде случаев именно обычная микрофлора приобретает большое значение в возникновении или развитии болезни, способствуя либо препятствуя её проявлению. Иногда обычная микрофлора становится источником тех патогенных или условно-патогенных инфекционных агентов, которые обуславливают эндогенное инфицирование, проявление секунд, жнх инфекций.

В тоже время многие исследователи (H.A. Радчук, 1975, 1990; С.А. Артемьева, 1977; Г.А. Грошева, 1979; Б.Ф. Бессарабов, 1985; Н.В. Кожемяка, 1991; R. Gordon, 1961; L. Meszaros, J. Stipaivit3, 1966)считают, что высокая концентрации поголовья на ограниченных площадях, максимальная механизация и автоматизация роизводственных процессов в условиях искусственного микроклимата способствуют возникновению болезней, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами .

Есть и еще ряд моментов в технологии, неизбежно вызывающих кипечние дисбэктериозы даже при полном соблюдении ветеринарно— санитарных мероприятий. Кишечная микрофлора - чуткий индикатор, реагурующий на стресс, вызываемый вакцинаций, сменой корма и другими причинами. Чрезмерная гигиена на птицефабрике приводит к уничтожению всей микрофлоры, в том числе и полезной.

3 последние годы участились случаи колибактериозов, сальмо-неллезов, а также хронических дисбактериозов птиц, вызыванных условно-патогенной микрофлорой. Использование антибиотиков и хятлп-ческих препаратов для лечения и профилактики кишечных инфекций иногда не дает положительных результатов, кроме того антибиотико-терапия препятствует получению экологически чистой продукции (В.И. Eso_, 1970; В.Ф. Ковалев, 1986). Многие исследователи из различных стран обратили внимание на роль и значение нормальной кишечной крофлоры в поддержании здорового мякробиоцеяозэ, з таете на механизм действия антибиотиков и его последствия для кишечной микрофлоры (В.Н. Красноголсвец, I9S4; З.А. Антипов, 1981; 0.3. Чахчзза г

Др., 1982; B.C. Гостев, 1982; К. Ducluzean, Р. Raibant, 1985).

В ветеринаркой практике разных стран появились препараты, действие которых направлено на конкурентное снижение числа энтеро-патогенных бактерий за счет увеличения количества представителей нормальной микрофлоры. Эти препараты получили название "пробиотики" ( W.B. Wren, 1987; S.K. Pox, 1988).

Под термином пробиотики подразумеваются препараты, в состав которых входят живые бактерии - представители нормальной кишечной микрофлоры и их метаболиты (Г.И. Гончарова и др., 1987).

Механизм действия пробиотиков противоположен механизму действия антибиотиков; он основан на заселении нормальной кишечной мие крофлорой и на четырех принципах в кормлении сельско-хозяйственных животных и птицы : кислотность, ферменты, бактерии и дрожжи.

Пробиотики используют для профилактики и лечения дисбактерио-зов молодняка сельско-хозяйственных животных и птицы, исправления микробного "пейзажа" кишечника при терапии антибиотиками и химическими препаратами, для стимуляции привесов и повышения естественной резистентности организма (А. Панин, Н. Серых, 1992; т. Sef-ton, 1990; V. Bottazzi, 1993; C.V. Reddy, 1994).

Вопросу борьбы с колибактериозом птиц посвящено много работ, О.днако до настоящего времени нет надежных средств и методов борьбы с этим заболеванием. В связи с этим разработка способов повышения резистентности птицы и профилактики этой болезни является актуальной задачей.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явилось сравнительное изучение профилактического действия к коли-бактериозу двух пробиотиков - галлиферма и энтероцида (СБА), а также их влияние на резистентность организма цыплят.

В связи с этим перед нами были поставлены следуюте задачи :

1. Изучить в опытах in vitro антагонистическое действие пробиотиков к эпизоотическим и музейным штаммам Е. coll.

2. Определить оптимальные дозы и схемы применения галлиферма и энтероцида, а также их влияние на морфологии внутренних органов при профилактике холибактеркоза цыплят.

3. Определить лечебное действие галлиферма и энтероцида при

- 3 -

введении тест-микроба Е. соц.

4. Производственное испытание галлиферма и энтероцида в условиях Красногорской птицефабрики. •

1.3. Научная новизна. Впервые изучено сравнительное действие двух прооиотиков - галлиферма и энтероцида на рост и развитие цыплят, ы также на некоторые показатели естественной резистентности. Определена чувствительность эпизоотического и музейных штаммов Е. coli к галлиферму и энтерсцкду. Определена оптимальная лечебная и профилактическая доза к схема применения галлиферма и энтероцида при колибактериозе цыплят. Проведено производственное испытание этих пробиотиков, в котором . .¡тановлено, что микроорганизм, входящие в состав препаратов галлиферма и энтероцида обладают антагонистическим действием по отношению Е, coll. Это подтверждается данными микробного клиренса, морфологическими изменениями внутренних органов.

1.4. Практическая и теоретическая значимость работы. Разработаны схема применения и лечебная и профилактическая дозы галлиферма и энтероцида для предупреждения колибактериоэа. Данные схемы и доза применения пробиотиков внедрены в условиях Красногорской птицефабрики Красногорского района Московской области.

Разработаны методические рекомендации но применению пробиотиков галлиферма и энтероцида в птицеводстве.

1.5. Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены на учебно-методической конференции по обмену опытом в подготовке специалистов по ветеринарной медицине для зарубежных стран (февраль 1994 г.), специалистам ветеринарной и зоотехнической служб Красногорской птицефабрики Московской области (октябрь 1994 . .), сотрудникам кафедры птицеводства и болезнен птиц.

1.6. Публикация результатов. По теме диссертационной работы опу'-иковакк две научные статьи, две находятся в печати.

1.7. Основные положения диссертации, выносите на защиту.

I. Исследование по определению антагонистического действия

галлиферма л энтгроцядз к эпизоотических: :: г>:узейнж: r-avos;.: 3. ce:.

2. Лечебное действие препаратов галлиферма и энтероцида при колибактеряозе цыплят.

3. Разработка оптимальных доз и схем применения галлиферма и энтероцида.

4. Влияние галлиферма и энтероцида на некоторые показатели естестврь'ной резистентности и морфологию внутренних органов цыплят.

5. Производственное испытание пробиотиков галлиферма и энтероцида .

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 184 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения, выводов, предложений для методической практики и производства. Диссертация иллюстрирована 27 таблицами и 44 рисунками. Список использованной литературы включает 254 работ, в том числе 144 зарубежных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материал и методы исследований. Исследования по изучению эффективности применения пробиотиков - галлиферм и энтероцид (СБА) в кормлении цыплят с целью профилактики колибактериоза проводились в 1992 - 1993г.г. на Красногорской птицефабрике Красногорского района Московской области и лаборатории кафедры птицеводства и болезней птиц Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина. В опытах была использована птица кросса. "Беларусь-9".

С целью определения оптимальных доз и схем применения при сравнительной оценки биостимулирутацего действия пробиотиков - галлиферм и энтероцид на цыплятах :в условиях производства, в период с декабря 1992г. по август 1993г. проводился эксперимент в цехе выращивания цыплят '¿35. В опыте использовано 700 голов цыплят суточного возраста. За цыплятами вели наблюдение в течение 60 дней. Схема опыта представлена в таблице I.

Во второй серии опыта ш прово,цили производственное испытание отработанных доз и схем применения галлиферма и энтероцида,

таблица 2.

Условия кормления исодержания цыплят были одинаковыми и отвечали принятым нормам, утвержденным ВНИТИП и РАСХН.

Галлиферм - Это однородный порошок от кремового до светло-коричневого цвета с характерным запахом. В 1г. препарата содержится 25,0^5,0 млрд жизнеспособных клеток композиции штаммов молочко-кислых бактерий, выращенных на питательной среде, содержащей фер— ментолизатк кукурузной муки и БВХ. Исходные культуры streptococcus faecium. Lactobacillus easel И Lactobacillus acidophilus. Наставление по применению препарат . разработано совместно институтом биотехнологии и сотрудниками кафедры птицеводства и болезней птиц, утверждено 2S марта 1990г.

Энтероцид - Это однородный порошок кремового цвета со'слабым специфическим запахом, комплексный бактериальный препарат, содержащей молочно-кислых бактерий^и ацидофильные палочки. Энтероцид выпускают в виде стандартного препарата, содержащего в 1г не менее 3,5 Млрд клеток. Исходные культуры Streptococcus faecium, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium bifidip.Наставление по применению в ветеринарки разработано ВНИИ незаразных болезней кивотных, Воронежским СХИ, Санкт-Петербурским (Ленинградским ) ветеринарным институтом и ВНИИ биотехнологии, утверждено 20 фезраль 1991г.

3 процессе эксперимента проводили исследования зоотехнические, гематологические, биохимические, иммунобиологические, микробиологические и гистологические.

Ллнамика живой массы цыплят определялась подекадно путем индивидуального взвешивания по 10 голов из каждой группы методом случайной пыборта. Сохранение поголовья Определялось путем ежедневного учета падета и выбраковки цыплят. Концентрацию гемоглобина определяли по методу дервица Г.В. и Воробьева А.И. в модификации Григорьевой Х.О. и Канпенельсона Н.Н. (1972). Количество эритроцитов определяли по методу Воробьева А.И. и др. (1959). Определение общего белка в сыворотке крови проводили рёфрактометртгчеекпт.' методом по Рейссу (Хонярахин И.Л. а .др., 1955), а белковые фракции сыворотки крови определяли экспресс-метопом по Олл и Ракорду, б у.о-

Таблица I.

Зхема опыта по определению оптимальных доз и схем применения пробиотиков - галлиферм и энтероцид на цыплятах.

.Группа додопыт— | Количество ¡д0за препарата ]СР0КИ дачи препарата НКХ ЦЫПЛЯТ. ( ЦЫПЛЯТ (гол); Ош).

Контрольная

100

Галлиферм на одного цыпленка,г.

Опытная I 100 0,01 I - 10

0,10 31 - 40

Опытная- 2 100 0,03 I _ 10

0,30 31 - 40

Опытная 3 100 0,05 I — 10

0,50 31. - 40

Энтероцид % к

массе корма.

Опытная 4 100 1,0 (0,01г) I - 10

- и - 21 - 30

— П — 41 - 50

'Опытная 5 100 1,5 (0,15г) I _ 10

~ 1» 21 - 30

И 41 - 50

Опытная 6 100 2,0 (0,20г) I - 10

я 21 — 30

•* * * 41 - 50

Таблица 2.

Схема производственного опыта.

Группа подопытных цыплят.

Количество

цыплят (гол)!

( 1

I Доза препарата.! Сроки дачи препа-

1 рата (дни).

Контрольная Опытная I

Опытная 2

12000 12000

12000

Галлиферм на 1-го цыпленка (г.). 0,03 0,30 Зааероцкд в %.

1,5 (0,15г)

I

31

10 40

1-50

дификации Карпюка С.А. Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по методу Смирновой О.В. и Кузьминой Т.А. в модификации сотрудников кафедры птицеводства и болезней птиц МГАВУМ5 (1987). Количество лизоцкш в сыворотке крови определяли турбодиметричес-ким методом по Дорофейчук Д.Г. (1968) в модификации сотрудников кафедры птицеводства и болезней птиц, 1987. Количество содергания лиэосомальяо-кагионных белков(ЛХБ) устанавливали по методу определения бактерицидной активности гранулоцатов крови птиц (Колабская Л.С. и др., 1987). Для выделения и серологической типизации культур Е. coli использовали питательные среды Эндо, Симонса, Олькениц-кого, мясо-пеггтончнй агар, мг о-пептонный бульон, моновалентные и поливалентные сыворотки, реакция агллютивации (РА) нэ стекле и в пробирке. Для идентификации и дифференциации Е. coli от других кишечных бактерий использовали Зятеро-Тесты I и 2. Патогенность выделенных культур Е. coli определяли путем постановки биопробы на 3 цыплятах 4 недельного возраста. Доза культуры I млрд. микробных тел. Внутрибршинно. При изучении in vitro антагонистического действия галлиферма и энтероцида к эпизоотическому и музейным штаммам Е. coli использовали метод диффузии в агар. Использовали эпизоотический штамм 02 выделенный нага и музейные штаммы 01 и 078, полученные кз ВПЖИ,

Лечебное действие препаратов галлиферма и энтероцида с использованием микробного клиренса определяли по методике предложенной Г. Зон (1992). Для выяснения лечебного действия галлиферма и знтеро-Еида при колибактериозе использовали 60 голов цыплят в возрасте 30 дней. Через 6 часов после заражения суточной культурой Е. coli цыплятам давали с кормом галлиферм и энтероцид в разных дозах в течение 7 суток. Всего было 6 групп. В первой группе цыпжтт не зара»а-

лч и ке давали пробиотики. Во второй группе цшллт заражали, но не применяли пробиотики. Схема опыта представлена в таблице 3. .

С целью определения количественного и качественного состава микрофлоры желудочно-кишечного тракта цыплят проводили исследования проб содержимого кишечного тракта по общепринятой методике. При изучения биологической активности галлиферма и энтероцида использовали метод определения количества жизнеспособных клеток бактерий в одной дозе препарата.

Таблица 3.

Схема опыта лечебного действия галлиферыа и энтероцида.

Подопытные 'Количество ! Доза 'Сроки иссле ! Доза Метод •

группы. 'цыплят(гол), ! !препара-!дований кро-!та. ¡ви. ! зара-! жения. •заражения. !

Контрольная I 10 - Через 6ч.,24ч, до 7 дней. , - -

Контрольная 2 10 Галлиферм г/голову. ЮОмлн. микробн. кл. в I мл/кг. Внутрибрю-. шшно.

Опытная 3 10 0,03 п -

Опытная 4 10 сут 0,06 - „ - Энтероцид % к •очному рациону *" и **

Опытная 5 10 1,5 (0,15г) - — - « -

Опытная 6 10 3,0 (0,30г) - „- - - — П

Для гистологического исследования брали кусочки органов печени, селезенки, мыпечного желудка и тонкой кипки от цыплят, получавших галлиферм и эитероцкд в течение опыта в возрасте 50 дней. Кусочки органов фиксировали в 10? растворе нейтрального формалина. Заливку проводили в целлоидине. Толцину срезов производили от 5 до 10 микрон. Срезы окрашивали гекатоксилпн-эозином.

Б процессе эксперимента было клинически исследованно 36700 голов. Подвергнуто патологоанатомпческому вскрытию - 245 трупов, бактериологическому исследованию 8 трупов цыплят, исследовано 1575 проб крови.

Экспериментальные данные обработаны методом вариационной статистики согласно методических указаний "Применение программируемых микрокалькуляторов для биометрических расчетов" (Баюн В.К., 1939);

- 9 -

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1. Антагонистическое действие микроорганизмов, входящих

в состав галлиферма и энтероцида к эпизоотическим и музейным штаммам Е. coli в опнтэх in vitro.

Нами установлены антагонистические свойства галлиферма л энтероцида по отношении я возбудителям колкбактериоза птиц. С этой целью использовали эпизоотический штамм 02 выделенный нами из пат-.мат^риала Красногорской тгнцефаСрпкп н музейные штаммн 31 и 078, подученные 23 ЗГЕХЛ.

Исследования показали, что препараты га.тли^ер?.: п энтероцяд ¿¿ладах! четко щрагангзг: a:-:r".rozzoTztccr™~ сесЯггзя'т тельно S. coli. Зона задержки роста Е. coli при подсеве антагониста к 24, 48, 72 - часовой культуре составила при применении галлиферма - 14-15, 27-30 и 39-44мм, а при'энтероцкде - 10-12, 18-23,я 31-36мм соответственно.' При этом, зона задержки роста Е. coli при применении галлиферма бслызе на 3-5, 7-9 и 7-9мм по сравнению с энтероцпдом.

2.2.2. „Те-збгсо дг*~7т:-я ттрспзрптсг: галлиферма 2 энтероетдз

с использованием какроСного чляренс?..

,Г;лл изучения лечебного действия гэллн^?р.'.:а и унтеропидь. при ч-.-'лба.'.герзозе брали крокь от исследуемой птицы через 6 ч&сиа, а тчк*е через 1,2,3,5 я 7 суток -осле заражекгя, делали r.ccess аа cpe'iy ли\о в чажах Петри и пнкубироэаля в теркостаге яра температуре 37°С в течение 18 часов г определяли количество колоний й. со

Ii з каждой группе согласно схе.\:е лсслеаованлй (таблица 3).

В нерво.; контрольно.; группе зо все стюгл лсслегог-энлй в пробах крови ке была выделена Е. coli. Зо второй контрольной группе через 6 ".асов после заражения обнаружено 198,5 колоний, а в 3-й, 4-й, 5-3 и >"-й группах от 2С1,3-214,5 колоний, разница между группами не значительна.

Через 24 часа' после введения Е. coli, во 2-й, 3-й, 4-й, 5-й я 6-й группах яайлзпдается увеличение колоний кишечной палочки по ерз-нениг с перзам исследование:,-. Сггустя 2 суток во второй группе продолжается увеличение числа колоний килечной палочки. По сравнения с первисследование?.: (.через 6 часов) увеличивается в 2,36

раз и со вторым (через 24 часа) в 1,1 раз и равняется 468,7*12,2. 3 опытных группах 3-й, 4-2, 5-й и 6-й наблюдается снижение колоний кишечной палочки на 34,8; 75,7; 28,6; 37,1 соответственно.

Через 3 и 5 суток тенденция снижения количества кишечной палочки во всех опытных группах продолжается. В 3-й и 4-й группах количество колоний составило 89,3 и 24,5 т.е. в сравнении со второй группой - это ь 3,34 и 12,19 раз меньше соответственно. В 5-й и 6-й группах оно равнялось 120,2 и 81,3 колоний и в 2,48 и 3,67 раз меньше контрольной. Достоверность показателей при Вг0,001.

В конце опыта на 7 день наблюдения количество колоний в опытных группах не превышает 45, а в 4-й группе отмечаются единичные колонии, в пределах 6,4. В тоже время в контрольной группе наблюдается медленное снижение количества колоний в составило 166,6.

При изучении лечебного действия препаратов галлиферма' и эн-тероцида мы определяли изменение количества общей микрофлоры и кишечной палочки в желудочно-кишечном тракте цыплят. Согласно нашим данным количество общей микрофлоры и кишечной палочки в первой группе, где не проводили заражение цыплят и не давали пробиотики составило 147,6±?,3 млн/г и 97,2±5,7 млн/г до опита, а в конце опыта (через 7 суток) - 143,9*6,1 и 95,1±4,8 млн/г, т.е. не изменилось.

Через 7 дней после заражения цыплят в помете количество общей микрофлоры и кишечной палочки было меньше в опытных группах по сравнению с контролем (2-я группа). У цыплят, опитных групп количество общей микрофлоры и кишечной палочки составило 133,9-191,6 млн/г и 81,9-112,5 млн/г, а в контрольной группе - 331,6 и 241,5 млн/г, Р<0,001.

Таким образом, применение галлиферма и энтероцида в течение 7 дней после'введения £. сои предотвращает развитие патогенной шкрофлоры кишечной палочки, способствует быстрому освобождению организма от этих микробов и выздоровлению цыплят. НэйОольжий ле-чебний эффект мы наблюдали при применении галлиферма в дозе 0,06г на голову и энтероцида - О.ЗОг (3,0? к массе корма).

2.2.3, Определенна оптимальных доз и схем применения галлифврма и эптерощш.

Изучений вляяипе пробзоткков - галлиферма а знтероцида на рост и развитие цыплят проводили в условиях Красногорской птицефабрика на цыплятах кросса "Беларусь-9" согласно схеме исследовзшй таблица I.

Контрольное ззвзшшниа подопытных цыплят непосредственно перед переводом в сдеаупкую возрастную группу (ремонтный молодняк) па 60 лень наблюдений показало, что яивая масса цыплят оантннх групп при применении галлиферма на 69,8г (13,28%)- Р<0,05; 120.От (22.82?) я 109,9? {20,- Рг0,01; прж асгсользозаназ зптероцдда на 101,7г (19,34?); 104,0г (19,93?) и 105,7г (20,10%) - ВеО.СГ соответственно по группам выше, чем в контроле.

В процессе эксперимента проводили ежедневный учет падежа подопытных цыплят и установливали причину их гибели. Согласно нашим данным, процент сохранности повышается с использованием галлиферма и знтероцида, причем увеличение сохранности отмечалось по всем группам до сравнению с контролем. Сохранность в 1-й группе -СО?, г,о 2-й - в 3-й - 94?, в 4-И - 93%, в 5-й - 95? а п б-й -

94?, тогда как в контрольной группе атот показатель равен 82%'.

Со данным наших исследований, уровень гемоглобина а количество эритроцитов в крови цыплят изменялся в зависимости от возраста з балл в пределах физиологической нормы. В конце опыта существенных различий среди показателей опытных групп не установлено.

Одним из свойств пробиотикои является стимуляция задатках механизмов хозяина. Этот факт подтверждают данные по активности лизоцима сыворотки крови, бактерицидной активности (БАС), по содержание ляэосомэллто-гяпготпп: белков (ЛКВ) зпо количеству общего белка в сыворотке крови в наших исследованиях. Содержание лязо-цама в сыворотке кровл цыплят на 60 день наблюдений в 1-й, 2-й, 3-й, 4-й, 5-й и 6-й опытных группах выше, чем в контрольной группе на 0,15 мкг/ьи (2,07?); 0,73 мкг/мл (10,08?); 0,71 мкг/мл (9,81?), гК0,01 при прзшененяа гадлгфера, а при использовании энтероцида, на - 0,37 чкг/кя (5,11?); 0,62 мкг/мл <8,66?) и 0,65 ккг/ии (8,9в>1 ?<0,01 соответственно. Ейктчртнвдпял активность сыворот™ крозз

а

бшга выше у цыплят опытных групп, чем у контрольной группы на 10,692; 9,74$ (Р<0,01); 4,92$; 7,28$ и 7,32$ (Р<0,05) по 2-й, 3-й, 4-й, 5-й и 6-й группам. В 1-й опытной группе различие незначительное, на 2,81$.

В наших исследованиях уровень ДКБ крови изменялся в 'зависимости от возраста цыплят и дозы применения пробиотиков. Ваяно отметить, что количество ЛКБ в крови цыплят довольно стабильный показатель. Все изменения, которые отмечены в эксперименте, незначительны, разница результатов часто недостоверна.

Нами отмечено, что максимальные различия в количестве общего белка сыворотки крови наблюдались у подопытных цыплят в возрасте 20 и 40 дней, т.е. на 10 и 30 день после добавления в корм галлиферма и энтероцида. Затем количество общего белка сыворотки крови стабилизировалось к 60 дню эксперимента. Наибольшее количество общего белка в конце опыта наблюдалось во 2-й и 5-й группах - 0,16г$ (3,95$) и 0,15г$ (3,70$), Ве0,05 при применении галлиферма в дозе 0,03г/голову и энтероцида - 0,15г (1,5$ к массе корма) соответственно.

2.2.4. Производственное испытание пробиотиков галлиферма и энтероцида.

Ш провели производственные испытания галлиферма и энтероцида после определения оптимальных доз и схем применения препаратов в условиях Красногорской птицефабрики. Установлено, что кивая масса цыплят, получавших галлиферм (в дозе 0,03г на голову) в течение 60 дней выше на 105,9г (17,9$), а у цыплят, получавших энТе-роцид - на 71,1г (12,0$); среднесуточный привес соответственно на 1,76г (17,8$) и 1,18г (11,9%); уменьшало затраты корма на. 1кг прироста живой массы на 0,6кг (16,2$) и 0,4кг (10,8$) в сравнении с контролем.

Сохранность цыплят была выше в группе, где применяли галлиферм и составила 92,7$. В группе, где использовали энтероцид, она равнялась 90,1$, а в контроле - 83,5$, т.е. меньше на 9,2$ и 6,6$ соответственно. Падеж от коли бактериоза в опытных группах не наблюдали, а в контрольной группе он составил 2,5$ (таблица 4).

Результаты производственного опыта.

Таблица 4.

Показатели • Контрольная

■ т-руппа. 1

Галлиферм

Зытероцид

Количество цыплят, гол 12000 Выбраковка, % 6,0

Падеж всего, % 10,5

в.т.ч. от колабактериоза 2,5

Сохранность, % 83,5

Живая масса, г. в 20дн. возраста 40дн. возраста бОдн. возраста

Среднесуточный привес, г. Затраты корма на 1кг прироста живой массы, кг. 3,7

Перевод в следующую возрастную группу, гол. 10020

155,2±5,3 387,5*18 ,'3

592,6*21,7

12000 12000 4,0 5,3

3.3 4,6

92,7

90,1

175,6*6,7 167,5*7,1 457,2*19,Iх 432,4*18,6 698,5*25,663,7*24,9х

9,88*0,02 11,64*0,05 11,06*0,03

3,1

3,3

III24

I08I2

Примечание : х - Вс0,05 ; хх - Р<.0,01.

Анализируя данные среди опытных групп, лучшие показатели в груше, где применяли галлиферм. Живая масса цыплят была выше на 34,8г (5,2/2), среднесуточный привес - на 0,58г (.5,2%), сохранность на 2,6%, затраты корма на 1кг прироста живой массы меньше на 0,2кг (6,1/5), чем у цыплят, в рацион к которым добавляли энтероцид.

Профилактическое свойство галлиферма и энтероцида при производственном испытании подтвердила высокую резистентность организма цыплят против колибактериоза з возрасте 50 дней (по микробному клиренсу), По нашим данным, цыплята пелучавяяе галлиферм и энтероцид оказались устойчивыми к введению 2, coli. J них через 24 часа , в крови обнаруживались единичные колонии бактерий - 8,3 и 11,3 т.е.

в 40,0 и 26,4 раз меньше, чем в контрольной группе, где они находились в значительном количестве - 298,6 (Р<0,001),

По ходу производственного испытания пробиотиков, ш провели морфологические исследования внутренних органов опытных и контрольных цыплят в возрасте 50 дней. При гистологическом исследовании кишечника опытных групп цыплят, получавших галлиферм и энтероцид, по сравнению с контролем обнаруживали увеличение объема крипт и появление повышенного количества лимфоидных клеток в тонком отделе кишечника. В печени заметна активация ретикулоэндотелия сосудов • микроциркуляторного русла и увеличение лимфоидных клеток. Гиперплазия лимфоретикулярных элементов селезенки.

Эти изменения подтверждают, что применение галлиферма и энтероцида .благотворно влияет на организм птиц и активизирует иммунную систему.

3. В Ы В О Д Ы.

1. Пробиотические препараты галлиферм и энтероцид обладают выраженными антагонистическими свойствами относительно Е. cdi in vitro. Зона задержки роста на мясопептонном агаре составила 14-44 мм. при применении галлиферма и 10-36мм при использовании энтероцида.

2. Галлиферм и энтероцид обладали лечебным действием в дозах соответственное 0,06г на голову и 0,30г (3,0$ к массе корма) при

скармливании цыплятам в течение 7 дней.

3. Введение в рацион галлиферма и энтероцида цыплятам способствовало увеличению количества общего белка сыворотки крови на 3,95-3,70$; лизоцима - на 10,1-9,0$; бактерицидной активности сыворотки крови на 19,35-13,50$; лизосомалько-катионных белков на 2,59-2,07$ по сравнению, с контролем.

4. Введение в рацион пробиотиков галлиферма и энтероцида оказало положительное действие на морфологию внутренних органов. При этом обнаруживали, увеличение объема крипт в тонком отделе кишечника, усиленную пролиферацию лимфоидных клеток кишечника, печени и селезенки.

5. Добавление к рациону галлиферма в дозе 0,03г на голову в

течение 10 дней о интервалом 20 дней и энтероцида в дозе 0Д5г (1,5$ к массе корма) в течение 10 дней с перерывом на 10 .дней способствовало уменьшению падежа птицы от колибзктериоза на '¿,Ъ% по сравнению с контролем. В опытах с применением галлиферма сохранность составила 92,7$; энтероцида - 90,1%, а в контроле - 03,5*.

6. Производственное испытание галлиферма и энтероцида на цыплятах повысило их живую массу, получавших галлиферм - на 105,9г (17,95»), энтероцид - на 71,1г (12,ОЙ); среднесуточный привес соответственно на 1,76г (17,8$) и 1,18г (11,92); уменьшало затраты косма на 1кг прироста живой массы на 0,6кг (16,2??) и 0,4кг (10,8^) в сравнении с контролем.

4. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ. '

Полученные данные' о применении молочно-кислых бактерий галлиферма и энтероцида при колибактериозе цыплят используются в учебном процессе и лабораторной практике на кафедре птицеводства и болезней птиц .Московской государственной академии ветеринарной медицина и биотехнологии (МГАВМиБ), а также рекомендованы в производство для предупреждения развития колибактериоза на Красногорской птицефабрике Красногорского района Московской области.

5. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЙ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

В целах предупреждения колибактериоза и дисбактериоза в птицеводстве рекомендуется применение галлиферма и энтероцида цыплятам- суточного возраста в дозах 0,03г на голову и 0,15г (1,5? к массе корма) соответственно. Схема применения галли5ерма, циклами

по 1С .дней с интервалом 2Г. дней, йггероцид - в течение 1С ¡шел с повторным курсом применения через 1С дней.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ.

I. Донкор Дюзе* Хлкссн. Использование пробиотпков галлиферма и эктероцида (СБА) .трг. пго^клзкткк« колиСяктеркоза цыплят яич~ ' пего направления: Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных

болезней животных. Сборник научных трудов. Мое. гос. акзд. вет. мед. и биотех. (МГАВМиБ). -М.,1994, с.67-69.

Размножено 100 экз. на ротапринте зак. 291. Типография "РОТЭЛС", ^¡ясницкая, 35

Актуалность темы: При расмотрении способов борьбы с многими инфекционными болезнями бактериальной этиологии чаще сосредоточивают основное внимание на патогенных микроорганизмах -возбудителях этих заболевании, реже обращают внимание на сопутствующую обычную микрофлору желудочно-кишечного тракта, но в ряде случаев именно обычная микрофлора приобретает большое значение в возникновении или развитии болезни, способствуя либо препятствуя ее проявлению. Иногда обычная микрофлора становится источником тех патогенных или условно-патогенных инфекционных агентов, которые обуславливают эндогенное инфицирование, проявление секундарных инфекций.

В то же время многие исследователи (H.A. Радчук, 1975, 1990; С.А. Артемьева, 1977; Г.А. Грошева, 1979; Б.Ф. Бессарабов, 1985; Н.В. Кожемяка, 1991; R. Gordon, 1961; L. Meszaros, L. Stipaivits, 1966 ) считают, что высокая степень концентрации поголовья на ограниченных площадях, максимальная механизация и автоматизация производственных процессов в условиях искусственного микроклимата способствуют возникновению болезней, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами.

Есть и еще ряд моментов в технологии, неизбежно вызывающих кишечные дисбактериозы даже при полном соблюдении ветеринарно-санитарных мероприятий. Кишечная микрофлора - чуткий индикатор, реагирующий на стресс, вызываемый вакцинаций, сменой корма и другими причинами. Чрезмерная гигиена на птицефабрике приводит к уничтожению всей микрофлоры, в том числе и полезной.

В последние годы участились случаи колибактериозов, сальмонеллезов, а также хронических дисбактериозов птицы, вызванных условно-патогенной мшфофлорой. Использование антибиотиков и химических препаратов для лечения и профилактики кишечных инфекций иногда не дает положительных результатов. Наряду с этим, антибиотикотерапия препятствует получению экологически чистой продукции (В.И. Ежов, 1970; В.Ф. Ковалев, 1986). Поэтому исследователи многих стран обратили внимание на роль и значение нормальной кишечной микофлоры в поддержании здорового микробиоценоза, а также на механизм действия антибиотиков и его последствия для кишечной микрофлоры (В.Н. Красноголовцев, 1964; О.В. Чахава и др., 1982; B.C. Гостев, 1982; В.А. Антипов 1981; К. Ducluzean, P. Raibant, 1985).

В ветеринарной практике разных стран появились препараты, действие которых направлено на конкурентное снижение числа энтеропато генных бактерий за счет увеличения количества представителей нормальной микрофлоры. Эти препараты получили название "пробиотики" ( W.B. Wren, 1987; S.M. Fox. 1988).

Под термином пробиотики подразумеваются препараты, в состав которых входят живые бактерии - представители нормальной кишечной микрофлоры и их метаболиты (Г.И. Гончарова и др., 1987).

Механизм действия пробиотиков противоположен механизму действия антибиотиков. Он основан на принудительном заселении нормальной кишечной микрофлорой и на четырех принципах в кормлении сельско-хозяйственных животных и птиц: кислотность, ферменты, бактерии и дрожжи.

Пробиотики с учетом этих четырех принципов кормления используют для профилактики и лечения дисбактериозов молодняка сельско-хояйственных животных и птицы, исправления микробного "пейзажа" кишечника при терапии антибиотиками и химическими препаратами, для стимуляции привесов и повышения естественной резистентносги организма (А. Панин, Н. Серых, 1992; Т. Sefton, 1990; V. Bottazzi, 1993; C.V. Reddy, 1994).

Вопросу борьбы с колибактериозом птиц посвящено много работ. Однако до настоящего времени нет надежных средств и методов борьбы с этим заболеванием. В связи с этим разработка способов повышения резистентности птицы и профилактики этой болезни является актуальной задачей.

Цель и задачи исследований.

Целью наших исследований явилось сравнительное изучение профилактического действия к колибактериозу двух пробиотиков -галлиферма и энтероцида, а также их влияние на резистентность организма цыплят.

В связи с этим перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Изучить в опытах in vitro антагонистическое действие пробиотиков к эпизоотическим и музейным штаммам Е. coli.

2. Определить оптимальные дозы и схемы применения галлиферма и энтероцида, а также их влияние на морфологию внутренних органов при профилактике колибактериоза цыплят.

3. Определить лечебное действие галлиферма и энтерцида при введении тест-микроба Е. coli.

4. Производственное испытание галлиферма и энтероцида в условиях Красногорской птицефабрики.

Научная новизна

Впервые изучено сравнительное действие двух пробиотиков -галлиферма и энтероцида нарост и развитие цыплят, а также на некоторые показатели естественной резистенноста. Определена чувствительность эпизоотического и музейных штаммов Б. coli к галлиферму и энтероциду. Определена оптимальная лечебно-профилактическая доза и схема применения галлиферма и энтероцида при колибактериозе цыплят. Проведено производственное испытание этих пробиотиков, в котором установлено, что микрооранизмы, входящие в состав препаратов галлиферма и энтероцида обладают антагонистическим действием по отношению Б. coli. Это подтверждается данными микробного клиренса, морфологическими изменениями внутренних органов.

Практическая и теоретическая значимость работы

Разработаны схема применения и лечебно-профилактическая доза галлиферма и энтероцида для предупреждения колибактериоза. Данные схемы и доза применения пробиотиков внедрены в условиях Красногорской птицефабрики Красногорского района Московской области.

Разработаны методические рекомендации по применению пробиотиков галлиферма и энтероцида в птицеводстве.

Апробащш материалов диссертации

Основные положения диссертации доложены на учебно-методической конференции по обмену опытов в подготовке специалистов по ветеринарной медецине для зарубежных стран (февраль 1994г.). специалистам ветеринарной и зоотехнической служб Красногорской птицефабрики Московской области (октябрь 1994г.), сотрудникам кафедры птицеводства и болезней птиц.

Публикация результатов

По теме диссертационной работы опубликованы три научные статьи и методические рекомендации. (2 craAi находятся в печати).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Исследование по определению антагонистического действия галли-ферма и энтероцида к эпизоотическим и музейным штаммам Е. coli

2. Лечебное действие препаратов галлиферма и энтероцида при колибактериозе цыплят.

3. Разработка оптимальных доз и схем применения галлиферма и энтероцида.

4. Влияние галлиферма и энтероцида на некоторые показатели естественной резистентности и на морфологию внутренних органов цыплят.

5. Произвдственное испытание пробиотиков галлиферма и энтероцида.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 184 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения, выводов, предложений для методической практики и производства. Диссертация иллюстрирована 27 таблицами и 44 рисунками. Список использованной литературы включает 254 работ, в том числе 144 зарубежных авторов.

-159 -5. ВЫВОДЫ

1. Пробиотические препараты галлиферм и энтероцид обладает выраженными антагоническими свойствами относительно Е. coli in vitro. Зона задержки роста на мйсопептонном агаре (»ставила 14-44мм. при применении галлиферма и 10-36мм при использовании энтероцида.

2. Галлиферм и энтероцид обладали лечебным действием в дозах соответственное О.Обг на голову и 3,0% (0,3г) к массе корма при скармливании цыплятам в течение 7 дней.

3. Введение в рацион галлиферма и энтероцида цыплятам способствовало увеличению количества общего белка сыворотки крови на 3,95-3,70%; лизоцима - на 10,1 - 9,0%; бактерицидной активности сыворотки крови на 19,35-13,50%; лизосомально-катионных белков на 2,59-2,07% по сравнению с контролем.

4. Введение в рацион пробиотиков галлиферма и энтероцида оказало положительное действие на морфологию внутренних органов. При этом обнаруживали увеличение объема крипт в тонком отделе кишечника, усиленную пролиферацию лимфоидных клеток кишечника, печени и селезенки.

5. Добавление к рациону галлиферма в дозе 0,03г на голову в течение 10 дней с интервалом 20 дней,энтероцида в дозе 1,5% (0,15г) к массе корма в течение 10 дней с перерывом на 10 дней способствовало уменьшению падежа птицы от колибактериоза на 2,5% по сравнению с контролем. В опытах с применением галлиферма сохранность составила 92,7%; энтероцида - 90,1%, а в контроле - 83,5%.

6. Производственное испытание галлиферма и энтероцида на цыплятах повысило их живую массу, получавших галлиферм - на 105,9г (17,9%), энтероцид - на 71, 1г (12,0%); среднесуточный привес соответственно на 1,76г (17,8%) и 1,18г (11,9%); уменьшало затраты корма на 1кг прироста живой массы на 0,6кг (16,2%) и 0,4кг (10,8%) в сравнении с контролем.

-1616. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

В целях предупреждения колибактериоза и дисбактериоза в птицеводстве рекомендуется применение галлиферма и энтероцидацыплятам суточного возраста в дозах 0,03г голову и 1,5% к массе корма соответственно. Схема применения галлиферма, циклами по 10 дней с интервалом 20 дней. Энтероцид - в течение 10 дней с повторным курсом применения через 10 дней.

7. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Полученные данные о применении молочно-кислых бактерий галлиферма и энтероцида при колибактериозе цыплят используются в учебном процессе и лабораторной практике на кафедре птицеводства и болезней птиц Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии (МГАВМиБ), а также рекомендованы в производство для предупреждения развития колибактериоза на Красногорской птицефабрике Красногорского района Московской области.