Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Патоморфология лимфоидных органов и иммуноморфологическая диагностика при некоторых вирусных энтеритах новорожденных телят

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР

ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННА АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

С А В Е Н К О Николай Школаевич

УДК 619:в1б,98:578.834.1: 636.2^28.063:611.4

ПАТОНОРШОГИЯ ЛИМ40ИДНЫХ ОРГАНОВ И ИММУШЖОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПРИ НЕЮТОРЬК ВИРУСНЫХ ЭНТЕРИТАХ НОВОРОЖДЕННЫХ ГШТ.

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных.

Автореферат диссертации на соискение учёной степени кандидата ветеринаринх паук.

Воронеж - 1991.

Работа выполнена на кафедре патологической анатомии в патологической физиологии Харьковского аооветеринарного института им. Н.М.Борисенко.

НАУЧШЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: Доктор ветеринарных наук, профессор

B.М.АНАТЕНКО

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНШ: Доктор ветеринарных наук, профессор

C.М.СУЛЕйМАНОВ.

Кандидат ветеринарных наук, доцент Б.А.ГЛАДКОВ

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Витебский ордена "Знак Почёта"

ветеринарный институт им.Октябрьской революции.

Защита состоится " [¡_ "_Цл<оиЛ 10© 1г. в 9 ^^ часов

на заседании специализированного совета К. 120.54.03 при Воронежском государственном агроуниверситете по адресу : 394012, г.Воронеж, ул.Ломоносова, 114-а, ветеринарный факультет ВГАУ.

Отвывы просим направлять по адресу: 394012, г.Воронеж, ул.Ломоносова, 114-а, ветеринарный факультет ВГАУ»

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института по адресу: 394512, г.Воронеж, ул.Мичурина, 1.

Автореферат разослан / О и-^&Л}_ 1991г.

Ученый секретарь специализированного совета,

кандидат ветеринарных наук , Н.А.Чвплыгина

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одну из актуальных проблей ветеринарной пауки и практики составляют желудочно-кишечные заболевания новорожденных телят, поакольку они наносят большой экономический ущерб народному хозяйству.

Ив общего количества потерь телят на долю желудочно-кишечных заболеваний приходится не менее 30%. Их причиной являются неинфекционные и инфекционные факторы. Ш бактериальных инфекций наибольшее значение имеют знтеропатогенние штаммы ашерихий, салмонеллк, клостридии и хламидии. Из вирусных инфекций важнейшими являются рота- н коронавирусы. В ряде случвев отмечены смешанные инфекции /\MetZ-iZt_ 3.,

l-X ТПе^Х-И- 19G2/. ■ У многих телят обнаруживают пониженную реактивность, у некоторых вообще отсутствует реактивность при серологическом обследовании / /TlenXik. У., Pe^nU -d -et аСС , 1966/.

В то же время, ряд авторов отмечает иммунодепрессквное воздействие бактериальных «'вирусных агентов на икуиную систему организма животных /Макаров В.Г., Чевелев С.Ф., 1982; Квачев В.Г.,1985; Апатенко В.И., ТУрицына Е.Г., 1986/.

Таким образом, взаимосвязь состояния иммунной системы телят и пораженноети их теми или иными патогенными факторами представляет значительный интерес для вотеринарной науки и практики, поскольку состояние органов иммуногенеаа обуславливает развитие патологических процессов при инфекционных болезнях с одной стороны, а с другой стороны, влияние • на »ти органы вирусов и Сектерий являются одной из характеристик их патогенности.

Бее контроля состояния иммунной системы у животных, нет возможности научно*обоснованно влиять на состояние общей резистентности и успешно проводить лечебно-профилактические Мероприятия при ваболеваниях желудочно-кишечного тракта.

Применяемые методы количественного определения <и функциональной оценки требуют неборов специального сложного лабораторного оборудования и дефицитных материалов, что затрудняет их широкое внедрение в практику /Пивовар В.Г;,1984, Корчен Н.И.,1986, Красников Г.И.,198Е/.

В зарубежной литературе имеются сообщения об исследованиях на телягаг-гногобиогах, зараженных ротавирусами и Е. ес-4л инфекцией, однако морфологическая часть работы незначительна и не достаточно глубока -ТПесЬм^й, 1984, 1984а/.

Таким образом, имеющиеся в литературе данные недостаточны для полной характеристики изменений в лимфоидных органах новорожденных телят при корона- и ротавирусной инфекции в при ассоциированной корона- ротавирусной инфекции. Не имеют глубокого анализа патогенеаа желудочно-кишечных ваболева-ний, вызванных вирусными ассоциациями в связи с Морфофункцй-ональной характеристикой органов иммуногенеза.

В изученной литературе мы не встретили материала- по прижизненной функциональной оценке тимуса телят.

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований являлось определенйе и оцёнка морфологических изменений в органах иммуногенеза при корона- и ротавирусной инфекции новорожденных, телят»

В вадйчи исследований входило:

- изучение патоморфологических изменений и лимфоидных 4

ррганах при экспериментальном заражении безмоловивных телят рота- и коронавирусами раздельно и в ассоциации ;

- изучение уровня Г- и В-клеток иммунитета при ассоциированной корона- и рогавирусной инфекции;

-электронно-микроскопическое исследование тимуса в норые и при заражении ротавирусбы;

- изучение особенностей топографии вилочковой деле8Ы для определения места проведения биопсии тимуса новорожденных телят;

- отработка методики отбора биоптата тимуса новорожденных телят;

- отработка метода прижизненной ыорфофункциональной оценки Т-системы иммунитета.

Научная новиана работы. Новыми являются данные о пато-морфологических изменениях в лимфоидных органах новорожденных безмолозивных беэиикробных телят при экспериментальной ротавирусной, коронавирусной инфекции отдельно и в ассоциации. Впервые изучены ультраструктурные изменения в тимусе новорожденных безмикробных телят лишенных молозива при экспериментальной ротавирусной инфекции. Разработан способ цувкци-■онного доступа к тимусу новорожденных телят для прижизненной оценки состояния иммунной системы. Установлена корелятивнвя связь мееду динамикой состояния Т-систеиы иммунитета и титром коронавирусного антигена в фекальных массах новорожденных телят*

Научная'и практическая ценность работы.

1. Предложен способ пункциоиного доступа к тимусу новорожденных телят для прижизненной оценки состояния иммунной системы.

2. Установлены патомореологические изменения центральных и периферических лимфоидных органов у безмикробных телят лишенных молозива при экспериментальных ротавирусной, корона-вирусной инфекциях и при ассоциированных короне-рохавйрусноГ инфекции телят.

3. Представлены материалы по ультраструктурной организации тимуса новорожденных телят.

4. Установлены ультраструктурные изменения в тимусе экспериментально зараженных ротавирусной инфекцией безмик-робньгх хэлят лишенных молозива.

5. Установлена динамика Т- и Б-лимфоцитов при смешанной корона-ротавирусной инфекции у новорожденных телят.

Апробация работы. Основные результаты доложены, обсуждены и одобрены на научных конференциях Харьковского ЗВЙ /1987, 1988/, на 2-Й республиканской научной'конференции молодых учёных и специалистов /Харьков, 1986/, на .10-й и 11-й Всесоюзных конференциях по патологической анвтомии сельскохозяйственных животных /Саратов, ¡967; Харьков, 1990/, на областной научно-практической конференции по ветеринарно-санитарным основам увеличения производства и повышения качества продуктов животноводства /Одесса,

Реализация результатов исследования. Полученные данные вошлй в "Методические рекомендации прижизненной и посмертной диагностике иммунодефицитов телят", утвержденные Учёным Советом Харьковского эооветеринэрного института им. Н»М> Борисенко пр.№8 от 16.0S.86_. На основании результатов исследований разработан "Способ цуипцкоиного доступа к тимусу новорожденных телят" о.с. К1518941. Данные используются в учебном процессе кафедр микробиологии, вирусологии и паю- -

логической анатомии Харьковского зооветеринарного института и Сумского филиала ХСХИ.

■Публикация» По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ.

Обьем и структура работы. Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предложений, иллюстрирована 54 рисунками и 11 таблицами. Список испольаованной литературы содержит 210 названий отечественных и 62 иностранных авторов.

2.МАТЕРИАЛЫ и МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ •

Рабата проведена в 1985-1987 годах на кафедре патологической анатомии и кафедре микробиологии и вирусологии Харьковского зооветеринарного института им.Н.М.Борисенко.

В исследованиях испольвовали трупы павших новороаденных телят из хозяйств Харьковской области, доставленных на кафедру патологической анатомии ХЗВИ.

При выполнении настоящей рсйоть производилась морфологические исследования тимуса, селезенки, лимфатических узлов, илеоцекального клапана.

Отобранный материал для гистологических исследований фиксировали в \0% растворе нейтрального формалина, жидкости Карнуа, Буэна.

Обезвоживание' и уплотнение материала достигалось проведением его черев спирты возрастающей концентрации и заливкой в парафин по общепринятой, методике /Меркулов Г.А., 1969/.

На ротационном микротоме типа МПС-2 из парафиновых блоков готовились гистологические срезы толщиной 5-8 мкм.

Для получения обзорных препаратов депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином Ьрлиха и эозином, для выявления митотической активности кле.ток использовали железный гематоксилин по Гайденгайну /Роиейс Б.,1954; Роскии Г.И., Левинсон Л.Б.,1957/. Сетчатую основу исследуемых органов выявляли методами Маллори. Клеточный состав определяли в гистологических срезах окрашенных Ааур-П-аозином.

Из гистохимических реакций были применена окраска метиловым зеленым-пиронином по Бреше для определения плазматических клеток»

Для морфометрических исследований окрашенных гистопре-паратов тимуса, селезенки, лимфатических узлов, илеоцекаль-ного клапана применяли окуляр-микрометр МОВ-1-15. Измеряли величину долек тимуса, толщину капсулы и трабекул тимуса, селезенки и лимфатических узлов, шириву коркового и мозгового вещества,'диаметр телец Гассаля, фолликулов и клеточных элементов /по 50 измерений на 5 препаратах по каждой группе/»

Соотношение коркового и моавового слоев определяли с помощью милиметровой сетки Автандилова.

Подсчет и аналив количества клеток в основных структурных компонентах тимуса, лимфатических узлов, селезенки, иле-оцекальном клапане проводили на условной единице площади, равной 0,85 см2/ подсчет проводился .на 5 препаратах в 80 полях ярения по каждой группе/.

Микрофотографирование гистопрепаратов осуществляли с помощью микроскопа МБИ-б и фотокамеры Зенит-Е, фотонасадки МФН-1). .

Для влектронномикроскопических исследований использовали кусочки вилочковой желеаы от 6 новорожденных телят 3-5

е

дневного возраста, выращенных в безмикробных условиях без дачи молозива. Исследовали материал от 3 телят зараженных ротавирусом и 3 телят, которые оставались в контроле. Кусочки тимуса фиксировались на льду в растворе 0504 на веронал-ацетатном буфере при рН 7,4 в течение 1-го часа. В последующем исследуемый материал обезвоживали в спиртах с возрастающей концентрацией и заливали в вПои-аралдит. Срезы толщиной 25-40 нм получали на отечественном ультрамикротоме УМТП-2. Срезы монтировали на медной сетке и контрастировали насыщенным раствором уранил-ацетата 2о мин.и раствором ацетата свинца по Рейнольдсу /15 мин,/.

Просмотр и фотографирование проводили на отечественном •Лектроннон микроскопе БВМ-100л при ускоряющем напряжении 75-105 кв. Инструментальное.увеличение составило 10000 раз. Полученные негативы дополнительно увеличивались в 1,5-2 раза.

Для иаучения топографической анатомии тимуса мы применяли методы препаровки, визирографии /Ханжин А.Ф.,1956/ и координатной мерометрии/Косых А.П., 1965/, а также методику разработанную Горбатенко В.П./1987/.

Визирографирование проводили в трех положениях: справа, и слева и с вентральной поверхности. Труп теленка укрепляли на визирографическом столе в неподвижном положении. Для сов-дания виаирограмм использовали полиэтиленовую пленку, на которой визирографом наносились контуры головы и шеи животного, контуры мышц грудино-головного комплекса и первого ребра.

Массу тимуса и селезенки определяли в абсолютных показателях и в относительных показателях в виде индекса тимуса и селезенки. Взвешивание органов осуществляли на аналитических весах. Цвет, консистенции и форма, органов определялась

ррганолептически.

В сотрудничестве с отделом вирусологии Украинского НИИ экспериментальной ветеринарии был проведен эксперимент по ааражению 13 беамикробных телят лишенных молозива, корона-вирусной, ротавьрусной и смешанной корона-ротавирусной инфекцией.

Для опыта телят получали в совхозе "Дергачевский" Харьковской области в момент растела норов. Новорожденных телят принимали в стерильный мешок после обмывания дезинфек-цирующш' раствором на их голову одевали стерильную полиэтиленовую маску с марлевыми фильтрами в области носовых отверстий. В таком виде животных немедленно доставляли в стерильный бокс, в котором проводилась регулярно обработка 0,5$ раствором хлорамина и стерилизация ультрафиолетовым облучением. Кормление телят осуществляли по специальной схеме, с термической обработкой корма, исключающей проникновению микрофлоры в организм. В течение всего опыта проводили микробиологический и вирусологический контроль.

Выделение лимфоцитов из периферической крови и определения количества Т- и.В-лимфоцитов проводили по методике Корчвяа Н.И./19В6/.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Иммуноморфология беэмикробных телят, лишенньх молозива.

При вскрытии телят контрольной группы установлено, что органы грудной и брюшной полости имели типичную для данного виде и возраста форму, размеры и консистенцию. Серозные и слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта гладкие, блестящие, влажные.

При гистологическом исследовании тимуса четко просматривается корковое и мозговое вещество. Соотношение коркового вещества к мозговому веществу составило 2,610,15:1. Отношение паренхимы тимуса к мелдольковой соединительной ткани 18,69+0,5:1. В корковом веществе тимуса тимоциты плотно расположены. Количество тимоцитов в корковом веществе составляло 51 тыс. на 1 мм^. Среди тимоцитов коркового вещества

имеются клетки различной величины. Преимущественно ею малье лимфоциты. Ядра их имели плотно расположенный хроматин в виде крупных гранул. Средние и большие лимфоциты содержались в значительно меньшем количестве. Они имели меньше хроматина в ядрах и прокрашивались менее интенсивно. Редко встречались лимфобласты. Просматривались фигуры митоза. Плотность тимоцитов в мозговом веществе на 1 мм*2 составляла 21,5+0,8 тысяч. Тимоциты размещались среди ретикулоопителиальных клеток. Ретикулоэпигелиельные клетки имели крупное ядро и полигональной формы обширную цитоплазму. Тельца Гассаля мелкие, редко встречаются поля состоящие иэ нескольких ретикулозпи-телиальных клеток. Более крупные тельца Гассаля размером 0,022-0,036 встречаются единично. Отношение'концентрации тимоцитов на единицу плошади в корковом и мозговом вещест-

ве составило 2,42

Патоморфологическими исследованиям^ селезенки установлено слабое развитие белой пульпы. Она представлена скоплениями лимфоцитов вокруг центральных артерий. Количество фолликулов в 5 полях зрения микроскопа составляет 17+1. Фолликулы не имели герминативных центров, размеры их незначительны. Диаметр колеблется от 0,1 мм до 0,2 мы у разных телят. В белой пульпе селезенки содержались лимфоциты разной величины. Преимущественно ато средние лимфоциты. Венозные синусы спавшиеся. Из клеток крови в синусах встречаются эритроциты, лимфоциты, моноциты, нейтрофилы. Капсула и тра-бекулы селезенки хорошо развиты. Отношение паренхимы селезенки к площади трабекул и капсулы на гистосреэах составляло 3,0510,31 .

При исследовании мезентериальных лимфоузлов установлено, что капсула и трабекулы узлов тонкие. Корковое вещество слабо развито. Ликфоидние фолликулы встречались очень редко и были незначительного размера. В фолликулах отсутствовали просветленные герминативные центры. Соотношение площади коркового слоя и мозгового слоя составляло 0,Sil. В пяти полях зрения микроскопа /объектив в/ обнаруживаются 2+1 фолликула»

Размеры фолликулов небольшие и составляют 0,1810,02 &'м* Мякотные шнуры мозгового вещества компактные, незначительно

развитые. Синусы содержали клеточные элементы - лимфоциты,

макрофаги.

На гистологических препаратах илеоцекального клапана контрольных телят встречались до 5£1 фолликулов. Фолликулы не имели герминативных центров, были небольших размеров. Некоторые из фолликулов располагались под слизистой оболоч-

кой, однако встречались и подзпителиальные лимфоиднке фолликулы. Паренхима фолликулов заполнена преимущественно лимфоцитами. Лимфоциты имели равную величину. Имелось также небольшое число ретикулярных клеток, микрофагов. Лимфобласты встречались исключительно редко. Подзпителиальнье фолликулы контактируют с клетками эпителиального покрова органа, которые образуют впителиальный купол фолликула. Кроме фолликулов в толще слизистой оболочки просматривается диффузная лимфо-идная ткань.

3.2. Патоморфология лимфоидных органов

телят, лишенных молозива,при заражении ротавирусами.-

Сравнение морфометрических показателей тимуса телят веракеннкх ротавирусами с контрольной группой телят позволяло выявить снижение количества тимоцитов в 1 мм^ в корковом веществе на 16,51 а в мозговом веществе на 15,63/4. В то же время уменьшилось соотношение паренхимы тимуса к меащольковой соединительной ткани с 18,6910,5 до 8,28+0,4, хотя соотношение коркового и мозгового вещества снизилось незначительно --с 2,8+0,15 до 2,36+0,1. Отношение количества тимоцитов на 1 мм^ в корковом веществе к количеству тех же клеток в мозговом веществе уменьшилось незначительно. Размеры телец Гассаля увеличились незначительно.

При сопоставлении результатов исследования селезенки телят разных групп не обнаружили достоверных рааличий в количестве и размерах фолликулов. Однако заметно увеличение отношения паренхими селезенки к трабекулам.

В меаентериальных лимфоузлах вереженных телят немного

увеличилось соотношение коркового и мозгового вещества с

т

/0,8 до 1,0+0,2/. Количество фолликулов увеличилось до 15+1,е.

Количество фолликулов лимфоидной ткени илеоцекального клапана телят опытной группы увеличилось в 7,2 раза/с 5+1 д. 36+1/. В отличие от контрольных телят появилось значительное

количество фолликулов с герминативными центрами /83,33V. При зтом соотношений площади фолликулов к площади герминативных центров составило 2,68.

3.3. Патоморфология лимфоидных органов

телят, лишенных молозива,при заражении коронавирусами.

При сравнении полученных данных опытной и контрольной групп телят в тимусе отмечали достоверное снижение количества тимоцитов на 1 им® в корковом веществе на 41,82?о, а моэговом веществе на ¡¿9,4$. В то же время отношение количества тимоцитов коркового вещества к такому же показателю мозгового вещества снивилось с 2,42 до 1,9. А отношение площадей коркового и мозгового вещества уменьшилось с 2,8^0,15 до 1,83+ 0,1, то есть в 1,53 раза / или 34,6/5/. К тому же в два раза снизилось отношение паренхимы тимуса к междольковой соединительной ткани. Увеличение телец Гассаля нельзя считать достоверным.

В селезенке в среднестатистических псказателях количества ¡олликулов и их размеров существенных отличий не имеется. В то же время отношение паренхимы селезенки к тра-бекулам увеличилось с 3,0610,31 до 4,83+0,12 /в 1,6 раза/.

В мезентериальных лимфатических узлах соотношение площади коркового и мозгового вещества незначительно увеличилось с 0,8 до 1,3110,1.

При исследовании лимфоидной ткани илеоцекального клапана отмечали значительное увеличение количества фолликулов / с 5+1 до 44+£/, причем у Сезмикробных животных фолликулы с герминативным центром не встречались, а в случае инфицирования коронавирусным антигеном ??,3?ь фолликулов имели герминативные центры. Соотношение площади фолликулов к площади герминативных центров составило 2,13+0,04.

3.4. Патоморфология лимфоидных органов

телят, лишенных молозива,при заражении корона- и ротавирусами в ассоциации.

Сравнительная оценка результатов полученных при морфо-метрических исследованиях телят зараженных корона-ротавирус-Ной инфекцией дала возможность установить, что у зараженных телят соотношение коркового и мозгового вещества тимуса снизилось в 1,8 раза /на 44,2°/°/. Произошло также снижение отношения площади паренхимы тимуса к междольковой соединительной ткани с 18,6910,5 до 8,6710,2 на 53,6$. У зараженных телят снизилось количество тимоцитов на 1 мм^ в корковом вещества с 51,010,74 до 38,710,24 то есть в 1,3 рава / или на 24^ /, в то время как количество тимоцитов на 1 мм2 в мозговом веществе снизилось в 1,1 раза /на 13,4/6 /, причем отношение количества тимоцитов в корковом веществе к количеству в мозговом веществе на 1 мм® составило 2,14. Тельца Гасселя незначительно увеличились.

В селезенке уменьшилось количество фолликулов в пяти полях зрения с 1711 до 13+1,2, в то время как отношение пар;:»-химы селезенки к площади стромы увеличилось с 3,0510,31 5,33+0,12 / в 1,7 раза/, а размеры фолликулов увеличились незначительно, 1

15

В мезенгериальном лимфатической узле изменилось соотношение плоивди коркового и мозгового вещества. В опыте оно составило 1,11, в то время как в контроле было равно 0,8. Одновременно увеличилось количество фолликулов коркового вещества с 410,8 до 1311,48.

При заражении телят ассоциированной корона-ротавирусной инфекцие* в лимфоидной ткани илеоцекального клапана отмечено увеличение количества фолликулов с 511 до 6514,0. Из которых 5512 /57,7$ / содержали герминативные центры, в то время как у контрольных животных в том же органе лиыфоидные фолликулы не содержали герминативных центров вообще.

3.5. Блектронномикроскопические исследования тимуса телят зараженных ротавирусом.

На субмикроскопическом уровне тимоциты телят, вабитых или павших после заражения ротавирусом, характеризуются ядрами неправильной форыь, повышением электронной плотности. Ядра некоторых тимоцитов просветлялись вследствие кариолиза, иногда не имели хроматина, гранулы мелкого размера равномерно расположены по всему ядру. В более тя,целых случаях пери-нуклеерное пространство имеет очаговые расширения, В отдельных тимоцитах наблюдали разрушение ядерной мембраны с выходом мелких злектронноплотньх гранул в цитоплазму.

Цитоплазма тимоцитов богата рибосомами и полисомами вследствие чего метрике цитоплазмы становится более элект-ронноплотньн. Часть тимоцитов имеет разрушенную плазиалемму. Митохондрии в цитоплазме клеток часто имели разрушеннье кресхы,

В ретикулозпителиальных клетках увеличилось число ваку-16

слей, образующих гопгноочаговые скопления, увеличен объеи комплекса Гольдга, рибосом и полисом.

З.б. Динвмика Т- и В-системы иммунитета ■ при ассоциативной рота-коронавирусной инфекции беэмолоэивных телят.

Анализ результатов иммунологических исследований дает возможность проследить динамику иммунологических показателей крови телят контрольной и опытной групп. Снижение количества лейкоцитов в периферической крови с 7,0+1,59x10% до 5,7+ 4,бх109/л за время опыта произошло зв счет снижения абсолютного количества лимфоцитов в первые три'дня опыта до 2,4+0,37x10®/л с 3,3+1,14х109/л в первый день. Существенно уменьшилось относительное количество Т-лимфоцитов с' 39,89+7,48/4 в первый день - до 10,6215,88$ на третий день и 11,49+9,2$ на седьмой день. Снизился абсолютный уровень Т-лимфоцитов с 1,2610,18x1О9/л до 0,19±0,03х109/л к третьему дню, после чего незначительно повысился к седьмому дню - до 0,26+0,07х109/л. Кожно считать, что снижение общего пула лимфоцитов произошло за счет уменьшения количества Т-лимфоцитов на 77$ по сравнению с контролем.

Количеатво В-ликфоЦитов было незначительным в первый и третий дни опыта и составляло 4,2+2,7$ /0,110,05хЮ9/л и 4,0910,48$ /0,0910,03x109/л, что мсжно объяснять возрастньг? дефицитом В-системы иммунитета. Однако к седьмому дню количество В-ликфюцитов повысилось до 5,7412,09$ /0,1910,02/, что вызвано интенсивной антигенной стимуляцией. Поскольку титр ротавирусного антигена в фекальных пробах всех телят достигал каксимального значения уже в первых пололительных пробах в РДП 0,66-1,0 и в ША 8 и выше.

В результате сопоставления с результатами контрольной группы можно предположить, что ротавирусная инфекция произвела иимуносупрессивный эффект и вызвала резкое достоверное снижение уровня Т-лимфоцитов у всех телят к третьему дню заболевания с 39,89+7,48$ до 10,6215,88$ /от 1,2610,1ехЮ9/л до 0,19+0,03x109/л. На фоне иммунодепрессивного действия рота-вирусной инфекции резко поднялся' титд коронавирусного гема-глютинина и достигал значений 10,0-12,0

3.7. Отработка' биопсии тимуса для оценки иммунного статуса новоровденньх телят.

Основной задачей было изучение оптимальных способов отбора биопсийного материала ив тимуса для прижизненного исследования с целью оценки его морфо-функционального состояния. При изучении топографии тимуса у новорожденных телят установили, что тимус в развитом состоянии имеет непарную грудную часть и парную шейную часть. Грудная часть располагается в грудной полости впереди сердце, а шейная - на вентральной поверхности трахеи. Головной конец тимуса контактирует со щитовидной железой, шейной долей слюнной железы и передними шейными лимфатическими узлами. Другой конец входит в апертуру грудной полости и, переходит в грудную не.парную часть. Грудная честь тимуса лежит впереди сердца между апикальными долями левого и правого легкого. Каудальная часть тимуса примыкает к перикарду« Наиболее мощно развит участок шейкой части -примыкающей к грудной полости в связи с чем ппопеаа необходимо проводить именно в этом месте.

При сравнении методов биопсии выявили, что при отборе инструмент необходимо вводить нгз глубину 3-5 см параллельно

вентральной поверхности трахеи. При втои осуществляя контроль и фиксацию тимуса рукой черев кожу у поверхности трахеи.

Для сравнения изучали биопсию с помощью прибора для гарпунной биопсии троакара /игл^ диаметром 3-4мм, прибора для костномозговой пункции. При применении троакара /иглы/ 3-4 мм гистоструктура тимуса была сохранена. Корковый и мозговой слой имели четкие границы. Тельца Г'ассаля хорошо просматривались. Сохранилась соединительнотканная основа органа. Таким образом, для достижения большей сохранности ткани тимуса, из испытанных нами инструментов предпочтительнее применение троакара - иглы диаметром 3-4 мм.

Сравнительное изучение морфологии ткани тимуса и биоп-тата позволили заключить, что биоптат тимуса сохраняет основные морфологические структуры органа, служащие критерием оценки его ыорфофункционального состояния. Для вкспресс -диагностики, нужно применять фиксацию' в жидкости Карнуа и 10/? нейтральном формалине с последующей заливкой в парафин, хотя предпочтительнее с целью ускорения получения результатов применять фиксатор Карнуа.

При изучении морфологии тимуса новорожденных телят первых дней- жизни в области расположения щитовидной железы И передних шейных лимфатических узлов, а также в области входа тимуса в грудную полость и участка грудного тимуса в месте соприкосновения с сердцем, существенных достоверных различий по основным параметрам нами не установлено.

в к в о д к

1.Безыикробнье, лишеннее молоэиЕа телята отличаются от конвенциональных меньшей зрелостью органов лимфоцито-поэза, у них слабее развиты селезенка, лимфоузлы и лимфоид-ная ткань клеоцекального клапана.

8. Степень морфофункционыьной зрелоети тимуса у беа-микробньх, лишенных молозива телят одинакова с новорожденными телятами, выращиваемым« обкчньм способом.

3. При вызванных в эксперименте у йезиикробных телят, лишенных молозива рота-, корона- и смешанной рота-коронави-русных инфекциях в регионарных к участкам воспаления в кишечнике брыжечных лимфатических узлах развивается острый сероэ-ньй лимфонодулит в указанных лимфатических узлах при рота-вирусной и смешанной корона-ротавирусной инфекции количество фолликулов увеличивается, при коронавирусной т уменьшается.

4. Ликфовдная ткань илеоцеквльного клепана при вызванных в эксперименте рота-, корона- и рота-коронавирусных инфекциях увеличивается в объеме, в ней появляется большое количество лиыфбидных фолликулов, во многих из них возникают герминативные центры.

5. При вкспериментальнь'х рота-, корона- и смешанной рота-коронавирусн&х инфекциях селезенка беэмикробньх телят, лишенных шлоэива ■ реагировала незначительно,

6. .8 тимусе при вызванных в эксперименте рота-, корона-и смешанной рота-коронавирусной инфекциях раг-шивается акци-дегдальнеп трансформация.

7. Характерное для акцидентальной трансформации тимуса с-нилеи!!'*? в корко/юм слое количества гиьоцитов при воспроизводимых в вксперименте коно- и ассоциировенньх вироаах имеет

в своей основе некроз тимоцитов, алиминацию тимоцитов макрофагами и миграции тимоцитов в кровь и периферические органы.

8. Установленные глектронномикроскопическими исследованиями тимуса новорожденных телят, зараженных ротевирусои, явления фагментации ядерной оболочки, выхода кариоплазмы в цитоплазму, разрушение плазмалеммы и выход цитоплазмы тимоцитов в перицеллюлярное пространство, свидетельствует о значительных деструктивных процессах происходящих в органе,входящих в комплекс структурных изменений характерных для морфологического синдрома акцидентвльной трансформации.

9. При заражении безюкробных телят лишенных молоаивр корона- ротавир.усами в ассоциации развивается прогрессирующая лейкопения обусловленная, главным образом, снилением уровня Т-лимфоцитов в крови. Количество В-ликфоцитов бьло незначительным в течение всего опыта.

10. Развитие смешанной рота- коронавирусной инфекции носит ступенчатый характер, ротавирус при развитии зтой инфекции опережает действие коронаяируса, последний.проявляет свое действие только при достижении достаточно высокой своей концентрации в организме,

И. Тимус, как центральный орган иммуногенеза, подврр-жен морфологическим изменениям отражающим функциональное состояние иммунной системы.

12. Особенности топографии тимуса новорожденных телят позволяют проводить отбор биоптата пункционным способом для морфофункциональной оценки состояния системы иммунитета.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРИЛОЖЕНИЯ

Результаты проведенных исследований вошли в :

1. "Методические рекомендации по прижизненной и посмертной диагностике иммунодефицитов телят", одобренные и рекомендованные методической комиссией ветеринарного факультете и утвержденные Ученым Советом Харьковского зооветеринарного института им. Н.М.Борисенкб / протокол №8 от 16.08.8бг./«

2» "Способ пункционного доступа к тиьусу новорожденных телят", на который получено авторское свидетельство за if 1618941, приоритет от 8.06.1987 года.

га

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

'1. Савенко H.H., Апатенко В.М. Иымуноморфолопш тимуса новорожденных телят при диарейнои синдроме // Ветеринарно-санитарные основы увеличения производства и повышения качества продуктов животноводства: Тез.научн.практ.конф., 29-30 декабря 1986г.- Одесса, 1986.-С.55-56.

2. Вовк С.И., Коновалов В.Н., Савенко H.H. Клинические

и патологоанатомические изменения при коронавирусноя инфекции в эксперименте // Вклад молодых учёных Украины в интенсификацию сельскохозяйственного производства: Теэ.г-й респ.науч. произв.конф. молодых ученых.- Харьков, 1986.- С.91-92.

3. Савенко H.H., Коновалов В.Н., Вовк С.И. Морфология лимфоидных органов новорожденных телят при экспериментальных инфекциях / Вклад молодых учёных Украины в Интенсификацию сельскохозяйственного производства: Теэ.г-й респ.науч.-произв.

конф. молодых учёных,- Харьков, 1986.-С.132-133.

!

3. Савенко H.H. Нммуноморфология при вирусных инфекциях новорожденных теля! // Диагностика, патоморфология, патогенез и профилактика болезней в промышленном животноводстве / Межвузовский научный сборник. Часть 1,-Иед-во Саратовского университета.. - 1990.

5. Савенко H.H., Апатенко В.М. Способ пункционного доступа к тимусу новорожденных телят // Авторское свидетельство К 1518941. Зарегистрировано 01.08.1689г.

Огвггс.'воиыЯ за выпуск тА/. '

Под«. к печ. ¡б- 0с/\ У/ Формат 60Х84!Лб. Бумага тип. Печать офсетная. Усл. печ. л. О Уч.-изд. л. X, I- Тнраж -/СС »и. Зак. Як&ЛС Бесплатно.

Харьковское межвузовское арендное полиграфическое предприятие. 310093, Харьков, ул. Свердлова, 115.