Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Патоморфология и патогенез лихорадки КУ у животных при заражении разными штаммами коксиелл Бернета и при совместном течении с лучевой болезнью

РГБ ОД

прапах рукописи Г/ д^ ж

СИТДИКОВ РАШИД ИСЛЛМУТДИНОВИЧ

ПАТОМОРФОЛОГИЯ И ПАТОГЕНЕЗ Л1-1ХОРАДК11 КУ У ЖИВОТНЫХ ПРИ ЗАРАЖЕНИИ РАЗНЫМИ ШТАММАМИ КОКСИЕЛЛ БЕРНЕТА И ПРИ СОВМЕСТНОМ ТЕЧЕНИИ С ЛУЧЕВОЙ БОЛЕЗНЬЮ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учено"! степени доктора ветеринарных наук

Казань 2000 г.

Рабата выполнена на кафедре патологической анатомии имени К.Г. Боля Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана и в лаборатории иммунологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (г. Казань).

Научные консультанты: академик АНТ, доктор ветеринарных

наук, профессор Идрисов Г.З.

доктор ветеринарных наук, профессор Юсупов Р.Х.

Доктор ветеринарных наук, профессор Ежкова М.С.

Официальные оппоненты:

Доктор ветеринарных наук, профессор Дроздова Л.И.

Доктор медицинских наук, профессор Цыплаков Д.Э.

Ведущее учреждение:

Чувашская государственная сельскохозяйственная академия

Защита состоится » ¿^^./.я 2000г.. в часов на заседании

диссертационного совета Д-120.22.01. при Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана.

Автореферат разослан « ^ » ^¿¿ууу? 2000г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

Доцент Р.Р.Муллахметова

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Лихорадка Ку как антропозоонозное заболевание представляет серьезную народнохозяйственную проблему. Ее значение становится очевидным, если учесть наличке множества природных очагов инфекции, образование вторичных антопургических очагов, стойкость возбудителя к факторам внешней среды, разнообразие путей передачи, а также высокую чувствительность к коксиеллам нсиммунных людей и животных (В.В. Паутов, А.И. Игумнов, 1968; H.H. Федорова, 1968; K.M. Лобан, 1974, 1980, I9S7; М.М. Махистов, 1975; А.Б. Дайтер, 1978; К.Н. Токарсвпч, 1979, 1994; А.И. Коршун и соавт., 1988; Р.Г. Госманов и соавт., 1985; А.Б. Дай-тер н соавт., 1988; Р.Х. Юсупов и соавт., 1987, 19SS, 1994; P.P. Юсупов, 1995; В.А. Червапсв и соавт., 1999; М.В. Максимович и соавт., 1995; Fritz Е., 1994).

Ö 50-60-с годы на лабораторных животных (И.А. Шифрин, 1953; A.M. Игонин, 1961, 1962) и на небольшом поголовье сельскохозяй-твенных животных (Б.Г. Иванов, О.В. Якушев, 1960) изучали некоторые вопросы патогенеза и патоморфологии этой болезни. В последние годы учеными КГАВМ и ВНИВИ проводятся целенаправленные исследования по, изучению эпизоотологии, клиники, патогенеза и диагностики лихорадки Ку(А.Я Коршун и соавт., 1983, 1984; Р.Г. Госманов и соавт, 1984, 1985, 19S6; Р.Х. Юсупов, 1987, 1988, 1994, Р.Я. Гильмутдинов и соавт., 198S; В.А. Шошокин, 1976, 1987, 1988; Р.И. Ситдиков 1989, 1990; P.P. Юсупов, 1995; H.A. Хисма-туллина, 1994, 1996).

Очевидно, радикальные меры борьбы с лихорадкой Ку могут быть разработаны лишь с учетом результатов всестороннего изучения биологических особенностей коксиелл различных штаммов, а также механизмов взаимоотношения коксиелл с клетками организма как в процессе заболевания, так и при формировании лротизориккетсиозного иммунитета.

Имеющиеся в литературе данные по ультраструкгуре коксиелл немногочисленны, носят поверхностно-описательный характер и полученные данные в отношении морфологии этих микроорганизмов неполны и противоречивы.

В работах, посвященных изученито внутриклеточного паразитизма коксиелл з культуре тканей, куриных эмбрионах, выполненных на элек-троино-микроскопическом уровне (Н.В. Паутов, А.И. Игумнов, 1968; О.С. Гу-дима, В.Н. Милютин, 1968; О.С. Гудима, 1976, Н. Копдова, П. Бсртон, 1968 н др.) большое внимание уделено струетурным изменениям риккетсий, тогда как реакция клеток макроорганизма освещена недостаточно. Вместе с тем анализ структуры клеток и изменений их внутриклеточных органелл имеет большое значение, так как может способствовать раскрытию механизмов естественной и приобретенной резисгенции и принципов регуляции иммунитета у животных.

Интенсивное развитие атомной энергетики, главного источника будущего, требует дальнейших усилий науки и техники по обеспечению ее надежности и безопасности. Внимание к вопросам устойчивого ведения животноводства в зоне атомных предприятий значительно повысилось после аварии на Чернобыльской АЭС (P.M. Алексин, 19S8, 1992; Б.Н. Анненков, 1991; Л.И. Ефанова и соавт., 1999; Е.И. Трошин, 1999; В.А. Бударков и соавт., 1988, 1992, А.Д. Белов, 1989; В.А. Киршин и соавт., 2000).

В случае чрезвычайных ситуации, связанных с радиационными выбросами и влиянии их на природные очаги лихорадки Ку, возможно соче-таннос радиациоипо-биологичсскос поражение сельскохозяйственных животных.

При радиационном поражении сельскохозяйственных животных полулегальными и летальными дозами наблюдаются глубокие функциональные и морфологические нарушения клеточных структур, органов и систем организма. В результате таких изменении в значительной степени ослабляется иммунобиологическая реактивность животных, отягощается течение инфекционных болезней и, наоборот, инфекция утяжеляет течение лучевой болезни (Р.В. Петров, 1958; H.H. Кпемпарская с соавт., 1968; Г1.Д. Горизонтов, 1964; B.J1. Троицкий и соавт., 1965; П.И. Притулим, В.Л. Горбатов, 1968; В.М. Караваев, В.Л. Коляков и др., 1970; П.А. Карташов и др., 1978; В.Л. Киршнн, MJ1. Гусарова, 1999; A. Hollander, 1958; Р.Х. Юсупов, 1999; Г.М. 'Гонурия, JI.IO. Топурия, 1999; Киршин В.Л., 2000; Идрисов Г.З. и соавт., 2000).

Учитывая вышеизложенное, прсдстапляс-гся важным изучение пато-морфологичееккх изменений в клетках, органах, системах и организме животных при воздействии возбудителя лихорадки Ку и гамма - лучен. Это особенно важно в связи с тем, что вопросы патогенеза и морфологических изменений при раднационпо-биологическом поражении животных слабо изучены. Решение этих аспектов сочстанного воздействия радиации и биологических агентоз дало бы возможность выяснить механизмы развития лучевой патолопш на фоне болезни лихорадки Ку, а также имело большое практическое значение для дифференциальной диагностики и научного обоснования мероприятий по защите объектов сельскохозяйственного производства животных, продуктов животноводства, кормов от загрязнения радиоактивными веществами и инфицирования коксиеллами Бернета.

Цель и задачи исследований. Провести сравнительное исследование морфологической структур коксиелл различных штаммов, а также взаимодействие их с. клетками мононуклеарной фагоцитарной системы с учетом функционального состояния последних. Изучить патоморфоло-гическне, ци-тосерологическне и иммуноморфологнчсские изменения в органах и тканях Морских свинок и овец, зараженных разными штаммами коксиелл Бернета, й также при сочетаном радиационно-биологическом поражении в условиях эксперимента.

В связи с этим, в задачи исследований входило:

1) изучить морфологию коксиелл Бернета разных штаммов и взаимодействие их с клетками мононуклеарной фагоцитарной системы морских свинок и овец в динамике инфекционного процесса ин виво;

2) проанализировать динамику клеточного и гуморального иммунитета, характер пато-и иммуиоморфологических изменений в органах и тканях морских свинок и овец, зараженных разными штаммами коксиелл Бернета;

3) провести исследования клинической, гематологической картины, макро- н микроструктуры органов и тканей овец при лучевой болезни различной степени тяжести, осложненной лихорадкой Ку.

4) изучить особенности иммуноморфологии у овец при заражении их коксиеллами на фоне инвазии;

5) выяснить возможность применения ннактнвиропанного антигена из коксиелл Бернета в качестве вакцины.

6) пронести исследования иммунологических показателей у лабораторных животных при пакцинапии на фойе транспортного стресса.

Научная_новизна, Впервые проведено электронно-

микроскопическое исследование коксиелл Бернета референтного штамма «Грита» и эпизоотического штамма «Бзрабинский», находящихся в I фазе. Показано сходство ультраструктуры клеточных стенок и цитоплазмы коксиелл, независимо от штаммовой принадлежности. В результате проведенных электронно-микроскопических исследований были получены новые данные взаимодействия коксчелл разных штаммов с иммуннокомпстснтны-ми клетками лимфоузлов и селезенки в динамике инфекционного процесса у морских свинок и овец, при пом проведен детальный анализ ультраструктурной цнтопатологни. Впервые п условиях эксперимента изучены динамика клеточного и гуморального иммунитета, характер пато- и иммуио-морфологических изменений в органах и тканях морских свинок и овец, зараженных коксиеллами Бернета референтного, эпизоотического и эпидемиологического штаммов, находящихся в I фазе. Определены специфические и неспенифические патоморфологичеекие изменения в органах и тканях животных, вызванные введением вирулстных штаммов возбудителя лихорадки Ку. Выявлены патогномоничные признаки, свойственные для дан-нон болезни, характеризующиеся образованием в лимфоузлах эпителноид-ноклеточных гранулем с гигантскими клетками Пирогова - Лангханса. Элсктронномикроскопичсскими, иммуно- флуоресцентными и иммунофер-ментными исследованиями установлена персистенция возбудителя лихорадки Ку в фагоцитах лимфоидных и паренхиматозных органов подопытных животных в течение 120 дней (срок наблюдения).

Впервые у облученных гамма-лучами животных установлены интерфазная и репродуктивная гибель клеток в лимфоидных органах; образование в синусах лимфоузлов розеткообразукяцих макрофагов с аутологичными эритроцитами без фагоцитоза последних; метаплазия соединительнотканных клеток трабскул лимфоузлов в клетки типа макрофагов, способных к фагоцитозу, фибробластов - к холлагенообразовзншо и властных клеток, имеющих потенцию к бластомогенному росту. У овец, зараженных коксиеллами Бернета и. одновременном облучении их в доза 1,86 ^ Гр, вызывающем острую лучевую болезнь легкой степени тяжести, кгаши-хо-морфологические проявления лихорадки Ку не отличались от таковых при моноинфекции. Облучение животных в дозах 4,65 и 6,51 Гр и заражение коксиеллами Бернета приводило к отягощению как инфекционного процесса, так и лучевой болезни и сопровождалось 100%-ной гибелью. При заражении коксиеллами овец, спонтанно больных фасциолезом, установлены выраженные иммуноморфологические изменения у животных, обусловленные суммацией иммунодепрессивных свойств антигенов.

Практическая ценность. По результатам исследований составлены;

1. «Рекомендации по ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов убоя животных при радиационных поражениях, осложненной лихорадкой Ку, и ускоренной дифференциации некоторых бактериальных инфекций»,

утвержденные военно-ветеринарным отделом МО СССР в 1989 г. и внедренные в медицинскую и ветеринарную практику.

2. Методические указания по лабораторной диагностике лихорадки Ку животных (утв. ДВМСХ и ПРФ 13.05.9бг. 13-6-2600);

3. Ветеринарные правила ВП 13.31221-96. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека н животных коксисллсз (лихорадка Ку), санитарные правила СП 3.1.095-96;;

4. Методическое пособие «Клеточный электрофорез при изучении инфекционной патологии сельскохозяйственных животных». Казань-1992г.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на научных конференциях Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана (1987 - 2000 г.г), па X, XI, XII Всесоюзных конференциях по патологической анатомии (Саратов, 1987; Харьков, 1990; Воронеж, 1993; Казань, 1996), на Всесоюзной конференции «Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных (Львов, 1988) на IV Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишинев, 1989), на Всесоюзной конференции «Актуальные вопросы эпидемиологии, диагностики и профилактики риккетсиозов» (Москва, 1989), на II съезде по радиационным исследованиям «Радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность» (Пущино, 1997), на 2-ой международной научно-производственной конференции «Здоровое животное - безопасная пища -здоровый человек» (Москва, 1997), на И Республиканской научной конференции "Актуальные экологические проблемы Республики Татарстан" (Казань, ¡997), на международном координационном совещании "Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных" (Воронеж, 1997), на международной научной конференции, посвященной 125-летшо академии (Казань, 1998), на международной научной конференции, посвященной 70-лстию зоологического факультета (Казань, 2000).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 41 работа в журналах "Морфология", "Казанский медицинский журнал", "Вопросы рнккетеио-логии", материалы съездоз, межвузовских, республиканских, межрегиональных, Всероссийских, международных конференций, межвузовских научных трудов, получена приоритетная справка на рационализаторское предложение, изданы три нормативно - технических документа и одно методическое пособие.

Основные положения, выносимые на защиту:

-особенности ультраструктуры коксиелл Бернета штаммов "Грита" и "Барабинский";

-результаты изучения ультраструктурной перестройки иммунохомпе-тектшлх клеток в динамике развития инфекционного процесса:

- патоморфологичсская характеристика общих, специфических и аллергических изменений в органах и тканях при экспериментальной лихорадке Ку;

- клинико-морфологнческая характеристика лихорадки Ку при совместном течении с лучевой болезнью и инвазией;

- особенности пострадиационных изменений клинико-биологического состояния, макро- и микроструктуры органов и тканей овец при остром гамма облучении.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 603 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений,'списка литературы, включающего 781 источник, из которых 248 иностранных, и приложения. Работа иллюстрирована 44 таблицами и 171 рисунком.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Исследования проведены на кафедре патологической анатомии имени К. Г. Боля Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана и лаборатории иммунологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института в 1986- 1999 годах в соответствии с Государственным планом научных исследований по заданию О. сх. 61, проблеме 01.08.02Д, номера госрегистрации 01860093078, 0186003030355.

В опытах использовхти клинически здоровых животных, поступивших из хозяйств, благополучных по инфекционным заболеваниям. Исследования проводили на 145 овцах и 156 морских свинках, подобранных по принципу аналогов. Всего было проведено 6 серий опытов. Отдельные серии опытов проводили совместно с с.н.с. H.A. Хисматуллиной, И.А. Кур-бановой, P.A. Салахутдиновым и сотрудником лаборатории вирусологии РЦПБ СПИД В.А. Шошокиным. В работе использовали три штамма возбудителя лихорадки Ку, находящихся в I фазе: референтного - «Грита», эпизоотического - «Барабинскнй» и эпидемиологического - «Мордовия». Первый был получен из научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалея АМН РФ, путем длительного пассажа через организм белых мышей. Этот штамм коксиелл перевели в первую фазу по методике Р.Г. Госманова и Р.Х. Юсупова (1984).

Штамм «Барабинскнй» выделен от больной лихорадкой Ку коровы в эпизоотическом очаге профессором Госмановым Р.Г. и др. (1985), а штамм «Мордовия» от больного коксиеллезом человек;- главным специалистом управления здравоохранения администрации г. Чебоксары Мустаевой O.A. и сотрудниками лаборатории иммунологии в 1992 году. Эти штаммы коксиелл находились в I фазе.

Морфологическую структуру штаммов «Грита» и «Барабинскнй» изучали электронно-микроскопическими методами:

- методом негативного констрастирования фосфорновольфрамовой кислотой (pH - 7,0) в концентрациях 0,15%, 1%, 2% и 5% при экспозиции 1 минута, 45 секунд, 30 секунд, 15 и 5 секунд и насыщении растворами уранил-ацетата - а) водным, при экспозиции 3 минуты, 1 минута и 30 секунд; б) на 70% -ном этаноле при экспозиции 3 минуты, 1 минута и 30 секунд;

- методом ультратонких срезов. При этом исследуемый материал осаждали в центрифугированием до получения твердой «лепешки», сухсй ма-

териал заливали в агар, из которого вырезали нужные кусочки для дальнейшей обработки. Материал фиксировали в 3%-ном растворе гаотаральде-гида в течение 2 часоз при + 4 С, дофиксировали четырехокисыо осьмня, обезвоживали и заливали в смесь зпоксидных смол. Ультратонкие срезы, полученные на ультратоме LKB- Ш, монтировали на медные сеточки, контрастировали нитратом свинца и просматривали в электронном микроскопе JEM-10ÛB при инструментальном увеличении от 15000 до 50000 крат.

Клиинко-анатомические, патоморфологические и иммунологические, а также цитосерологические, ультраструкгурные, бактериологические исследования выполнены на материале б серий опытов, включавших 25 групп животных.

Схема проведенных опытов отражена в таблице 2.1. Морских свинок и овец первой и второй подопытных групп заражали штаммом «Грита», «Барбннскит; и «Мордовия», третьей, четвертой штаммами «Гри-та». Рнккегсисодержащую суспензию готовили по методике Р.Г. Госманова и Р.Х. Юсупова (1984). Антиген из коксиелл Берпета животным первой группы вводили внугрибрюшшшо в дозе 10 мл, овец 2 группы 4 подгруппы заражали внутривенно.

Подопытным животным третьей серии заражение проводили после равномерного внешнего гамма-облучения и в разгар лучевой болезни. Животных облучали с двух поверхностей гамма-лучами в дозах 200Р ( 1,86 Гр), 500Р (4,65 Гр) к 700 Р (6,51 Гр).

Овцы, спонтанно больные фасциолезом, были завезены из неблагополучного по данному заболеванию хозяйства Рыбно-Слободского района РТ.

В пятой серии опытов изучали иммуногенные свойства и безвредность инактивированного антигена коксиелл Берпета из штамма «Грита» на 100 морских евт/ках, разделенных на 4 группы. Приготовление антигена осуществляли по методшее, разработанной Р.Г. Госмановым и Р.Х. Юсуповым (19S4).

■ В шестой серии опытов изучали иммунологические показатели у морских свинок после 700 км транспортировки и выясняли ее влияние на специфическую иммунобиологическую реактивность организма при иммунизации антигеном из коксиелл Бернета. Морских свинок привезли из питомника Московской области. Приготовление инактивированного антигена коксиелл Бернета из штамма «Грита» осуществляли по методике, разработанной Р.Г. Госмановым и Р.Х. Юсуповым (1984). Антиген в дозе 1 nu: был введен подопытным морским свинкам в область шеи.

У подопытных животных исследовали клинико-гематологические показатели: общее состояние, количество лейкоцитов, эритроцитов, гемоглобина и температуру тела общепринятыми методами. Фагоцитарную реакцию - по способу в описании С.И. Плащенко и В.Г. Сидорова (1979), бактерицидную активность сыворотки - по C.B. Бухарину и А.Б. Чемному (1982), лизоцима - В.Г. Дорофейчуку (1968).

2.1. Схема проведенных исследований

Серия опыта Группа (всего животных) Подгруппа (кол-во животных в подгруппе) Заражение (штамм) Виды воздействий Доза гамма облучения Р(Гр) Степень тяжести лучевой болезни Вакцинация (доза) Интервал Убой (через дней)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Морские свинки

1 3(81) 1(27) «Грита» - - - - - 3, 5, 10, 15 30, 60, 90 и 120 дней

2(27) «Барабин-ский» - - - - -

3(27) «Мордовия» внутрибрю-шинно

Овцы

2 4(64) 1 (30) «Грита» - - - - - 3, 5, 10,20 30, 60 и 113

2(15) «Барабин-ский»

3(15) «Мордовия» 10, 20, 30, 40и ИЗ

Г" 4 (2 и 2) «Грита» и «Барабин-скин» внутривенно 40-й день

10(66) 1(6) «Грита» Облуч. + зараж. возбудителем лихорадки Ку в то г же день 200(1,86) легкая 15, 20

г 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

2(6) - «- Облуч. + зараж. возбудителем лихорадки Ку на 20-й день облучения ,• 200(1,86) легкая 40-й день 20-й день заражения

3(6) - Гамма-облучение 200(1,86) легкая - - 15, 20, 30

4(8) «Грита» Облуч. + зараж, возбудителем лихорадки Ку в тот же день 500 (4,65) тяжелая 13,15, 17, 27 (гибель)

5(8) - «- Облуч. + зараж. возбудителем лихорадки Ку на 15-й день после облучения 500 (4,65) тяжелая 21 день облуч. б-й день заражения (гибель)

6(8) - Гамма -облучение 500 (4,65) тяжелая - - 15, 16 и 20

7(6) «Грита» Облуч. + зараж. возбудителем лихорадки Ку в тот же день 700(6,51) Крайне тяжелая 8,10-й день (гибель)

8(6) Гамма-облучение 700(6.51) Крайне тяжелая 8, 10-й день (гибель)

9(6) «Грита» Заражение возбудителем лихорадки Ку 5, 10, 15, 20,30

10(6) - Интактные животные - - - 5, 10, 15, 20,30

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

4 1(15) «Грита» Фасциолез + зараж. возбудителем лихорадки Ку 5, 10, 20 и 30-й день

Морские свинки

5 4(100) 1(40) Иммунизация антигеном из коксислл Бернста Антиген из КБ1 мл 3, 5, 10, 15, 30,60, 90 и 120

20 (20) - - - - 2 мл ч/з 30 дн. 15

30 (20) - - - - 2 мл - «- 30, 60, 90 и 120

4(20) - - - - 2 мл -«-

6 3 (72) 1(24) Иммунизация антигеном из КБ ч/з 1 сутки после 700км автомобильной транспортировке 1 мл 3,7, 14,21, 30,60, 90 и 120 дн.

1 ! 2(24) - «-ч/з 14 суток после 700км автомобильной транспорти-- ровки 1 мл -«-

1 3(24) - иммунизация - - 1 мл - - «

Кровь для исследований брали из яремной вены.

Количество Т- и В- лимфоцитов в периферической крови определяли методом Е-РОК и ЗСэ-РОК (И.П. Кондрахин и соавт, 1985). Изучали также динамику электрофоретнческой подвижности (ЭФП) лимфоцитов и эритроцитов, выделенных из крови морских свинок. Лимфоциты выделяли в градиенте плотности поливиниловый спирт -верографин. При наличии в осадке эритроцитов, последние визировали в 0,85% -ном растворе хлористого аммония. ЭФГ1 клеток определяли на приборе «Пармоквапт-2» (ГДР) в автоматическом режиме при силе измерительного тока ЮМА и температуре 20°С. В качестве буферной системы использовали среду 199. Полученный цифровой материал обрабатывали статистически и результаты сравнивали с количественным соотношением популяций Т- и В- лимфоцитов. Гистограммы ЭФП клеток усредняли и анализировали профили распределения ЭФП.

Аутоаптителообразующие клетки определяли методом Йерпе в модификации H.H. Клемпарской (1972).

Наличие специфических антител к возбудителю лихорадки Ку в сыворотке крови различных видов животных (овец, морских свинок, белых мышей, находившихся в эксперименте) определяли в РДСК по методике Р.Г. Госманова, Р.Х. Юсупова (1984). Антителообраэующие клетки и рнккет-сиозный антиген в ллмфоидных органах и тканях выявляли прямым и непрямым иммунофлуоресцентным методом Кунса, а также иммунофермент-ным анализом (ИФА) совместно с Хисматуллпной H.A., Юсуповым P.P.

At "ителообразующие клетки и риккстсиознын антиген в лимфоид-ных органах И тканях выявляли иммунофлуоресцентным методом по Кунсу в модификации Септ-Мери (1962). Для подтверждения специфичности им-мунофлуорссцентных реакций ставили соответствующие контроли.

Для гистологических, гистохимических и иммунофлуоресцентных исследований брали кусочки регионарных и отдаленных лимфоузлов, селезенки, почек, сердца, легких, желудка, кишечника, головного и спинного мозга, тимуса, надпочечников и тканей с места введения антигенного материала.

Патматсриал фиксировали в холодном 10%-ном растворе нейтрального формалина по Бскксру, спирт-формоле 9:1, 96%-ном холодном этаноле. После фиксации уплотнение материала проводили путем заливки в парафин и замораживанием. Гистосрезы окрашивали гематоксилином и эозином, по Романовскому-Гимзе, по ван Гизону. Содержание РНК определяли по Браше, гликоген по Мак-Манусу, кислую фосфатазу - азосочстанисм по Берстону, щелочной фосфатазы - по Гомори (М.И. Меркулов, 1969). Мазки-отпечатки на обнаружение риккетсий красили по П.Ф. Здродовскому (1972). Для оценки специфичности гистохимических реакций ставили соответствующие контроли.

Для электронномикроскопичсских исследований использовали кусочки селезенки, бронхиального и брыжеечного лимфоузлов от зараженных морских свинок и овец. Обработку- тканей проводили по общепринятым злсктронномикроскопичееким методикам. Срезы получали на ультрагоме LKB-1U и просматривали в электронном микроскопе JF.M- 100В при инструментальном увеличении 25000-50000 крат. Материал фотографировали

на фотопластинки для ядерных исследований и фотопленки. Маркировали их и печатали электронограммы.

Для определения аминокислотного состава белка мышц, образцы брали из длиннейшей мышцы спины. Аминокислотный анализ белков проводили на автоматическом анализаторе аминокислот ААА-881 Чехословацкого производства.

Бактериологические исследования проводили согласно действующим «Правилам ветеринарного осмотра убойных животных и Еетсринарно-санитарной эксперты мяса и мясных продуктов» (1988) и ГОСТу 21837575. Мясо. Методы бактериологического анализа.

Цифровые данные, полученные в опытах, подвергали статистической обработке на программируемых микрокалькуляторах типа «Электроника МК-56» и «Электроника В3-34» (Р.Х. Тукшаитов, Н.Х. Нигматуллин, 1984). При сравнении показателей для каждого вариационного ряда вычисляли среднюю арифметическую (М), среднюю квадратичную ошибку средней арифметической (м), коэффициент достоверности (Р), который определяли по таблице Стыодента-Фишсра.

Микрофотографии производили на микратную пленку 300 и флюорографическую пленку РФ-3.

2.2. Электронномнкроскопическая характеристика коксиелл Бсрнета штаммов «Грита» и «Барабинский»

Одновременное использование методов негативного контрастирования и ультрзтонких срезов при исследовании субмикроскопнческой организации коксиелл Бсрнета референтного штамма «Грита» и эпизоотического - «Барабинский» позволили получить сведения о форме, характерных особенностях строения поверхностных и внутренних структур клеток изучаемых штаммов.

Проведенные исследования показали, что изучаемые нами штаммы обладали типичными для коксиелл Бернега морфологическими свойст-вадш 1 фазы.

Размеры их составляли (800-1000) ± (530-760) им. У обоих штаммов форма телец не единообразна, встречаются палочковидные и веретенообразные, булововндные и иногда с причудливыми контурами. Негативное контрастирование выявило сильную складчатость поверхности коксиелл обоих штаммов. На ультратонких срезах коксиеллы имели овальную форму и меньшие размеры: 780-900 им. Клеточная стенка коксиелл состояла из трех слоев: двух осмиофильных и разделяющих их осмиофобного. Общая толщина клеточной стенки составляла 8,5-9 им. Причем она могла быть гладкой или иметь неглубокие складки. К клеточной стенке изнутри прилегала трехслойная плазмолемма толщиной 7 - 7,5 им. Риккетсиоилазма имела умеренную электронную плотность и зернистость. В элекзролно-прозрачной вакуоле вдоль длинной оси, иногда несколько эксцентрично, расположен всретеновидный электронноплотный иуклеоид из спирально свернутых хроматиновых тяжей. Форма нуклеоида не всегда строго всре-теновидна, иногда имела булавовидные утолщения на одном или обоих

концах, а у штамма «Барабинсклй», кроме того в виде беспорядочно расположенных электронноплотных вкраплений по всей риккетсиоплазмс.

Таким образом, исследования при одновременном использовании методов негативного контрастирования и ультратошсих срезов при изучении тонкой организации возбудителя лихорадки Ку двух штаммов, находящихся в 1 фазе: референтного «Грита» и эпизоотического «Барабинский», показали, что изучаемые нами штаммы обладали типичными для кокснелл Берне-та морфологическими свойствами. Результаты по изучению ультратонкого строения срезов и целых клеток риккетсин штаммов «Грита» и «Барабинский» позволили констатировать, что основные структурные элементы их организации достаточно хорошо выражены и в определенной степени сходны.

2.3. Изучение ультраструктурной патологии органов

иммунной системы морских свинок и овец при заражении коксисллами Бсрнетга штаммов «Грита» и «Барабинский»

При изучении ультраструктура меток органов иммунной системы морских свинок на 10, 20, 30 и 40 день после заражения возбудителем лихорадки Ку установили факт внутриклеточного нахождения коксислл в макрофагах и свободно расположенных в участках лимфоузлов и селезенки с интснсир"ым распадом клеточных элементов. Риккетсин в органах морских свинок, заражетнлх штаммом «Грита», имели овальную форму н следующие размеры: длина от 780 до 900 нм, диаметр в широкой части от 200 до 300 нм, а коксиеллы штамма «Барабинский» имели длину от 500 до 720 iw, диаметр от 150 до 200 нм.

Коксиеллы Бернета, которые находились в вакуолях макрофагов, не были подвержены изменениям и имели правильное строение с признаками процесса репродукции. Коксиеллы, выявляемые в фагосомах, имели измененную структуру, что, вероятно, связано с действием ферментов фаголи-зосом. При этом нами установлена интересная закономерность: если макрофаг содсржил одну крупную или несколько средних вакуолей с множеством риккстсий - риккетсин почти не подвергались изменениям; если вакуолей с риккетсиями мало или в вакуолях мало риккетснй - микробные клетки изменялись вплоть до полной деструкции.

В макрофагах, содержащих риккетсии, отмечали изменение ядра -смещение ядрышка к периферии, формирование внутриядерных телец -включений, марпшация хроматина. В цитоплазме макрофагов митохондрии приобретали признаки активации, появлялись мелкие пылевидные рибосомы. В тех макрофагах, которые не содержали коксиеллы, ультраструктура носила признаки функциональной активации: отмечена значительная складчатость кариолеммы, каналы эндошшматической сети были разширены, ыатрикс митохондрий уплотнен. Степень изменений ультаструктуры макрофагов, лимфоцитов и плазмошгтов зависела от близости расположения данных клеток к зоне, где была выявлена репродукция риккетсий. По мере приближения клеток к таким участкам, в них усиливались дистрофические изменения, нарастала электронная прозрачность цитоплазмы клеток, мито-хсчирии набухали, матрикс их просветлялся. Количество крист в митохон-

дрнях уменьшалось, а сами кристы укорачивались. Отмечено расширение каналов эндоплазматическон сети н цистерн комплекса Гольджн одновременно с просветлением их содержимого.

Результаты изучения динамики ультраструктурных изменений им-мунокомпстентных клеток при заражении их коксиеллами Бсрнета штаммов «Грита» и «Парабинекии» показали, что на 5-е сутки после заражения вовлекались основные механизмы иммунного ответа организма на антиген в виде активации макрофагов, пролиферации плазматических клеток и гуморального звена иммунного ответа с одновременным увеличением количества гранулоцитов.

Ультраструктурная организация макрофагов, несмотря на наличие в них риккстсии, не имела, в основном, патологических изменений необратимого характера, а свидетельствовала лишь о повышенной функциональной активности. Ядро обычно многолопостное, хроматин ядра пребывал в диффузном состоянии. Цитоплазма содержала вакуолизирозаниые митохондрии, комплекс Гольджн с раздутыми цистернами и увеличенным количеством везикул. Каналы эндоплазматичсской сети не содержали секреторных продуктов или содержали их с очень низкой электронной плотностью. Обращало на себя внимание повышение функциональной активности иммуно-компегентиых клеток, развитие в иммунных органах гнперпластическо-пролнферативных процессов. Большинство плазматических клеток были с гипертрофированной эндоплазматичсской сетью, с расширенными каналами, содержащими секреторные продукты умеренной электронной плотности. Пролиферативныс процессы в иммунных органах сопровождались увеличением количества лимфобластов, больших лимфощггов, плазмобластов, гранулоцитов.

На 20-е сутки, риккстсии, находящиеся в макрофагах, вследствие их переваривания подвергались изменениям, вплоть до образования остаточных телец, причем более сильной деструкции были подвержены кокси-еллы, находящиеся в вакуолях. Как правило, рядом с вакуолями, содержащими риккстсии, часто локализовалось большое число фаголизосом, в которых риккстсии подвергались деструктивным действиям ферментов.

Наряду с тем, что в большинстве случаев коксиеллы были фагоцитированы макрофагами и подвергались лерсвариваншою, полной элиминации возбудителя из иммунных органов не происходило. Часть коксиелл переживала в цитоплазме фибробластов и находилась вне вакуолей. Сами фибробласты несли признаки функциональной активности: лопастные ядра с диффузным хроматином, повышенное число риоосом. Изменение структур макрофагов гипобнотического типа носило обратимый характер.

На 30-е сутки после заражения, коксиеллы Бернега обнаруживали в нммунокомпетентных органах как в макрофагах, так и свободно в межклеточных пространствах и тканевом детрите в некротических участках. Диапазон состояния ультраструктуры риккстсии был широк: от неизмененных форм до почти полностью переваренных микробных телец. Ультраструкту-рз макрофагов лимфоузлов характеризовалась изменениями как со стороны ядра, так и со стороны цитоплазмы. Но все они имели обратимый характер. Наряду с этим отмечалось сильное изменение структур макрофагов селезенки. В них происходил лизис участков цитоплазмы, разрывы мембран многих органоидов, пылевидные рибосомы. Каналы эндоплаэматиче-ской сети были расширены, но не содержали секрета. Комплекс Гольджи

представлен мелкими пузырьками. Контуры ядер сглажены, хроматин конденсирован на периферии. Ультраструктура лимфоцитов на этот срок была в пределах нормы, отмечалось увеличение количества плазматических клеток, часть из которых подвергалась деструктивным изменениям.

На 60-е сутки после заражения овец коксиеллы Бернета обнаруживали как в цитоплазме макрофагов, так и п межклеточных пространствах. Ультраструктура многих микробных телец была подвержена сильным изменениям. В одних случаях - они искривленные, с повышенной электронной плотностью, деструктивной клеточной стенкой, без дифференциации нук-леоида. В других - частицы возбудителя представляли собой одну или две электронноплотные глыбки, окруженные лизнрованной «стертой мембраной». Однако имелись риккетсии, ультраструктура которых была близка к норме. Субмшсроскопическая организация макрофагов, содержащих более или менее значительное количество риккетсии, подвергалась изменениям по типу белковой дистрофии. Ультраструктура макрофагов, не содержащих риккетсии, в целом была близка к норме. Кроме перечисленного, дистрофическим изменениям подвергались ретикулярные клетки стромы в виде вакуолизации митохондрий, расширения каналов эндоплазматичсской сети, увеличения везикул комплекса Гольджи. В ядре вышеуказанных клеток отмечалось снижение электронной плотности хроматина. В некоторых ретикулярных клеиах в ядрах присутствовали внутриядерные тельца-включения, хроматин их конденсировался на периферии. У отдельных клеток наблюдался пикноз ядер. В иммуиокомпетентных органах отмечалось увеличение числа лимфобластов и плазматических клеток. Ультраструктура их была в пределах '.мрмы, за исключением фибробластов. Деструкция их была такой глубокой, что «идентифицировать их смогли лишь по микрофибриллам.

Через ИЗ суток у овец, зараженных коксиеллами Бернета, риккетсии выявлялись в некротических участках лимфоузлов и цитоплазме макрофагов селезенки. В обоих случаях риккетсии были сильно изменены и во многих случаях представляли собой электронноплотные глыбки. Однако единичные экземпляры частиц возбудителя имели более или менее сохранившуюся структуру. Ультраструктура большинства макрофагов и других иммуиокомпетентных клеток имела, в основном, признаки функциональной активности. Следует отметить, что во все сроки исследований ультраструктура лимфоцитов в целом была в пределах физиологической нормы.

Изучение ультраструктурной организации штаммов коксислл свидетельству вовала, что микробные клетки активно размножались, на что указывало наличие макрофагов с вакуолями, заполненными сформированными риккетсиями. После инфицирования овец коксиеллами Бернета, независимо от разновидностей штаммов последних, наблюдали поглощение макрофагами микробных клеток, которые были в активной функциональной фазе. Фагоцитоз коксислл осуществлялся по типу эндоцитоза, для которого характерны инвагинация мембраны и образование вакуоли. Следует отметить, что этот процесс, а также изменение структуры фагоцитов в дииамике не 1ависели от штшовон принадлежности коксиелл Бернета.

2.4. Клеточные и гуморальные факторы защиты организма морских свинок и овец при экспериментально вызванной лихорадке Ку

Полученные нами данные при изучении динамики Т- и В- лимфоцитов в периферической крови показали, что заражение болезнетворной дозой коксиелл Бернега вызвало у морских свинок и овец снижение содержания Т-лимфоцитов п первые 30 дней после введения антигена (Р< 0,05, Р< 0,001). В последующем, к 60-му дню происходила нормализация их количества с возрастанием числа этих клеток на 90-й день (Р < 0,05). Вероятно, уменьшение количества Т-лимфоцитов связано с миграцией наиболее активных лимфоцитов из крови в очаги поражения в тканях, в результате в крови остается больше молодых, функционально еще неполноценных лимфоцитов (И.П. Петрова с соав., 1982).

Количество В-лимфоцитов возрастало к 10-му дню эксперимента и оставалось на достаточно высоком уровне до конца опыта. Исследование сывороток крови в РДСК с антигеном 2 фазы показало нарастание титра комплемснтсвязывающих антител с 10-го дня, пик которых наблюдался у морских свинок на 15-й день в разведении 1:320. В дальнейшем происходило снижение их, по к концу опыта (120-й день) титр антител фазы 2 был на довольно высоком уровне. У овец антитела фазы 2 так же рыявля-ли с 10-го дня, максимальный титр был на 30-й и 40-й дни и составил 1; 80. В последующие сроки происходило снижение титра антител, на 60-й день он составил 1:40. На 113-й день антитела фазы 2 у овец выявлены не были. При постановке РДСК с антигеном фазы I, антитела фазы I у морских свинок были выявлены на 60-й день в разведении 1:40, на 90-й день и 120-й день титр их составил 1:80. У овец антитела фазы 1 были выявлены в разведении 1:10 на 30-й день, повышение титра до 1:40 отмечалось на 60-й день, а на 113-й день их титр определялся в разведении 1:10.

Антигенный стимул коксиелл сопровождался ответной реакцией в лнмфоидных органах, качественными и количественными изменениями ан-тителообразующнх клеток. При заражении усиливалось образование плазматических клеток, пик которых в лимфоузлах н селезенке наблюдался на 10-е и 15-е сутки (Р < 0,001). К 30-му дню в этих органах отмечено снижение количества плазматических клеток, но на 120-й день показатели их, по сравнению с данными ннтактных животных, оставались статистически достоверно повышенными. Заражение также вызвало изменения в степени дифференциации их состава. По мере развития инфекционного процесса в составе антитслообразующих клеток, лимфоузлов и селезенки возрастало процентное содержание зрелых плазмоцитов, пик которых наблюдался на 15-й день (Р< 0,001). Надо отмстить, что процесс пролиферации антитело-образующих клеток с удлинением сроков инфекционного процесса не затухал, а проявлялся на протяжении всего периода исследования.

Введение коксиелл Берпста значительно повышало уровень содержания ауюантителообразующих клеток в крови, максимальное значение кою-рых отмечалось на 30-й день после заражения (Р< 0,001). Затем происходило постепенное снижение уровня их содержания, но эти показатели били достоверно высокими и на последний день исследования.

Таким образом, результаты наших исследований дают основание заключить, что кокспеллы Бсрпета штаммов «Грита» и «Барабинский» по своим антигенным и иммуиогенпым свойствам однотипны. Кокспеллы Бер-нста фазы 1 в организме зараженных животных вызывают понижение относительного числа Т-лимфоцнтов и увеличение бляшкообрачующнх клеток, свидетельствующих о большом повреждающем действии риккстсин и развитии процессов аутонммунизации в организме морских свинок и овец. Начиная с 5-10-го дня, в иммунобиологической перестройке преобладает возрастание количества В-лнмфоцитов и антнтслообразующих клеггок с высокой степенью их дифференциации, следствием чего является появление и увеличение титра специфических антител в сыворотке крови.

2.5.Клинпко - морфологические и патогнстологичсскне изменения в органах и тканях морских свинок и овец при экспериментально вызванной лихорадке Ку

Клинические признаки лихорадки Ку у животных после внутри-брюшинного заражения коксиеллами Бернста штаммов «Грита» (классический), «Барабинский» (эпизоотический), «Мордовия» (эпидемиологический) характеризовались лихорадкой шггермиггирующего типа с повышением температуры на 3-7,9-10,27-29, 55-57 сутки, угнетением общего состояния, снижением пищевой возбудимости и малоподвижностью, развитием серозно-катараль» ..'О ринита и конъюнктивита, цианозом видимых слизистых оболочек.

При послеубойном патологоанатомичсском исследовании органов и тканей морских свинок и' овец обнаруживали отек и очаговые геморрагии брюшины на месте введения антигена, умеренное увеличение лимфоузлов и набухание селезенки.

При гистологическом исследовании ткани брюшины на месте введения антигена обнаруживали геморрагии под брюшиной, отслоение се от прилегающей ткани, отек и геморрагии межмышечной соединительной ткани и значительное скопление лимфоидно-гистиоцитарных клеток и макрофагов.

При патоморфологичском исследовании органов и тканей подопытных животных изменения в подопытных группах были в основном однотипны. Установлено, что на 3-5-е сутки после инфицирования структура лимфатических узлов изменялась за счет лимфоидно-гиперпластической реакции, сопровождающейся расширением паракортикалной зоны и утолщением мякотных шнуров. В паракортикальных зонах лимфоузлов происходило увеличение лимфо- и шшмобластов. В синусах лимфатических узлов определялась выраженная макрофагальная реакция, с повышением активности кислой фосфатазы клеточных элементов. На 10, 15,20-е сутки, кроме мак-рофагальной реакции еннусов, наблюдалась плазматизации мякотных шнуров, где определялась высокая ферментативная активность щелочной фосфатазы. В корковом веществе регионарных и контррегионарных лимфоузлов обнаруживались компактные скопления эпитслиоилных клеток, выступающих в виде гранулем, где отмечали повышенную ферментативную активность кислой фосфатазы. На 20, 30, 40, 45-е сутки (за исключением групп

морских свинок) образование эпителиодно-клеточных гранулем происходило также в отдаленных лимфоузлах. В регионарных и контррегионарных лимфоузлах они имели значительные размеры с зернистобелковым содержимым в цитоплазме, дающим ШИК-положитсльную реакцию. Изредка в этих гранулемах или отдельно встречались единичные гигантские клетки Пнрогова-Лангханса. Кроме того, отмечали обеднение лимфоцитами паракортикалыюГ! зоны лимфоузлов, а в местах опустошения лимфоидиой ткани наблюдали разрастание фиброзной ткани. Стенка аргериол, венул и капилляров была утолщена, с признаками мукоидиого и фнбршюидного набухания. В основном веществе соединительной ткани этих сосудов увеличивалось содержание гликозамингликанов. В отдельных лимфоузлах встречали явлеш!я лнм-([юстаза и незначительные очаги геморрапш. На 113-й день исследования сформированные зпителпоидно-клеточные гранулемы имели незначительные размеры, эгштелиоидные клетки их были с признаками вакуольной дистрофии. Явлений инкапсуляцнй и фибротизации гранулем не отмечали. В корковом веществе регионарных лимфоузлов встречались обширные геморрагии. В селезенке лимфоидные филликулы часто были расширены, отмечалось обеднение лимфоцитами периартериальных гильз, а в перифоллику-лярнон зоне появлялось множество ретикулярных и макрофагальных элементов с повышенной активностью кислой фосфатазы. Ретикулярная осноза селезенки становилась огрубевшей, а в красной пульпе ее встречались единичные геморрагии.

В печени у всех подопытных животных наблюдали зерт!стую дистрофию паренхиматозных клеток с последующим переходом в жировую. Кроме того, происходило набухание и увеличение числа звездчатых рети-кулозндотелиоцитов с их частичной десквамацией. В интерстицни органа, чаще всего в периваскулярной ткани, обнаруживались скопления мононук-леаров. В органе с 10-го дня отмечено заметное увеличение ферментативной активности кислой фосфатазы, уменьшение РНК и гликогена.

В почках наблюдали зернистую дистрофию эпителия извитых канальцев. Эндотелий капилляров сосудистых клубочков умеренно пролифериро-вал. У отдельных животных на 40-й день отмечали пролиферативно-мембранозный гломерулонефрит. В интерстициальной ткани органа изредка обнаруживались очаговые пролифераты из лимфоидно-гистиоцитарных клеток.

В легких подопытных овец выявляли очаговые утолщения межальвеолярных перегородок за счет их полнокровия в начальные сроки и пролиферации лимфоидно-гнстиоцитарных клеток в более поздние сроки инфицирования.

Кардиомноциты были с явлениями зернистой дистрофии. Прозошцие мышечные волохиа сердца полностью лишились гликогена и были набухшими. У отдельных животных в межуточной ткани органа встречались очаговые скопления мононухлеарных клеток.

В головном мозгг у инфицированных животных находили полнокровие сосудов и отек вещества мозга, явления перицеллюлярного и периза-схулярного отека в стволовой части. У отдельных животных на 30-й день развивалась картина негнойного лимфоцитарного энцефалита и повышение проницаемости капилляров сосудистого сплетения боковых желудочков головного мозга.

В надпочечниках подопытных животных происходило расширение коркового слоя за счет гиперплазии клеток пучковой зоны и их полнокровия. У отдельных животных на 40-й день опыта в пучковой зоне встречались геморрагии, а также очаговые скопления мононуклеаров и сильное расширение синусов мозгового вещества.

В тимусе отмечали очаги опустошения Т-лимфошггов. Вокруг телец Гассаля наблюдали умеренный отек лимфоидпой ткани.

Таким образом у больных животных в органах и тканях развивались специфические, неспецифические и иммунопатологические процессы:

- специфические изменения характеризовались образованием в лимфоузлах с 10-го дня эпитслиоидноклсточных гранулем с гигантскими клеткаМи Пирогова-Лангханса, которые у овец сохранялись до конца опыта;

- неспецифичсские проявлялись лимфоидно гиперпластической, мак-рофагальной, плазмокясгочной реакциями в лимфоидных органах, повышением содержания в них гидролитических ферментов, увеличением синтеза РНК; в печени и миокарде - истощением резервного гликогена; в надпочечниках - расширением пучковой и сетчатой зон; в головном мозге -наличием псриваскулярных лимфоидноклеточных инфильтратов;

Иммунопатологические характеризовались огрубением и фибротиза-цией ретикулярной стромы лимфоидных органов, плазморрагией, эритро-диапедезом, мукоидным и фибриноидным набуханием стенок сосудов мик-роцирхуляторного русла, образованием лимфоидно-гистиоцнтарных инфильтратов в легких, миокарде, печени, почках, а также дистрофическими изменениями паренхиматозных элементов этих органов, что в совокупности свидетельствовало о морфологическом проявлении аллергической реакции типа ГЗТ.

2.6. Выявление методами флуоресцирующих антител и иммуноферментного анализа коксиелл Бсрнета в органах и тканях морских свинок и овец при экспериментально вызванной лихорадке Ку

При иммунофлуоресце!гпюм исследовании риккстсиозный антиген с 3-го дня после заражения морских свинок и овец выявлялся во всех исследованных лимфоузлах, селезенке, печени; с 5-го дня в почках, легких, надпочечниках, а на 60-й и 50-й день - в головном мозге. Антиген коксиелл, в основном, обнаруживался в магрофагах перечисленных органов, который не элименировался из над до 120-го дня у морских свинок и 113-го у овец (сроки наблюдений).

Метод иммувдфлуоресценцин позволяет диагностировать лихорадку Ку у спонтанно больных животных.

Параллельно с иммунофлуоресцснтными исследованиями по выявлению антигена в органах и тканях больных лихорадкой Ку животных проводили сэндвич-вариант ИФА. Установлено, что прямой сэндвич-вариант ИФА позволяет обнаружить антиген возбудителя лихорадки Ку в органах морских свинок и овец, экспериментально зараженных штаммами «Грита» и «Барабинский». При этом специфический антиген выявлен во всех исследо-

ванных органах, независимо от вида животного и штамма возбудителя, использованного при заражении.

В контрольных опытах во всех случаях в ИФА получены отрицательные результаты.

Таким образом, проведенные исследования по выявлению антигена коксиелл Бернета в органах и тканях зараженных животных ИФА и МФА позволили обнаружить возбудителя лихорадки Ку в патологическом материале независимо от штаммовой принадлежности его. Результаты этих исследований вошли в «Методические указания по лабораторной диагностике лихорадки Ку у животных».

2.7. Клинико-анатомическое проявление острой лучевой болезни у овец и ее влияние на организм в сочетании с возбудителем лихорадки Ку

В процессе опытов, клиническими наблюдениями, гематологическими, биохимическими, патоморфологическими и гистохимическими исследованиями установлено, что после гамма-облучепня у овец в дозе ¡,86 Гр развивалась острая лучевая болезнь легкой степени. У овец, облученных в дозе 4,65 Гр, развивалась острая лучевая болезнь тяжелой, а при облучении а дозе 6,51 Гр - крайне тяжелой степени.

В динамике развития острой лучевой болезни достаточно четко выделялись четыре периода: первый период - первичных реакций; второй - латентный или период кажущего благополучия; третий - период разгара; четвертый - период восстановления или гибели животного.

Проведенными патоморфологическими, гистохимическими исследованиями органов и тканей овец, облученных гамма лучами в дозе 1,86,4,65 и 6,51 Гр, установлено, что в результате биологического действия больших доз радиации, в первую очередь, патоморфологические изменения развивались в органах кроветворения, а именно: в лимфатических узлах, селезенке, тимусе, а также в лимфоидных образованиях внутренних органов. В них отмечалась как интерфазная, так и репродуктивная гибель клеток. Последняя, которую называют также митотической, касается, главным образом, делящихся популяций, наиболее демонстративно выявлялась в герминативных центрах лимфатических узлов н селезенки и характеризовалась полным исчезновением в них фигур митоза и в зависимости от дозы облучения даже самих центров размножения. Интерфазная гибель, которая предшествует вступлению клетки в митоз и не связана с циклом деления, наиболее часто поражает малые лимфоциты, лимфобласты, приводит к опустошению лимфоидНой ткани паракортикальной и межфолликулярной зон лимфатических узлов и периартериальной зон селезенки. В популяции погибших клеток морфологически и гиетохнмически обнаруживали изменения, характерные для апоптоза.

Через 15 суток после облучения в синусах лимфатических узлов, преимущественно а подкапсулярных, появлялись макрофаги с розеткообра-зованием аутологичными эритроцитами без фагоцитоза последних. Интенсивность образования розеток макрофагами оказалось дозозависимой, число их в исследованных лимфоузлах увеличивалось по мере повышения дозы и

сроков облучения. Иначе говоря, количественные изменения розеток макрофагов имели прямую зависимость от степени деструктивных изменений со внутренних органах.

Спустя 10 дней, независимо егг дозы облучения, развивался отек, разрыхление и разволокнение соединительной ткани трабекул лимфатических узлов. На почве деструкции и распада коллагеновых волокон, элементов гладкой мускулатуры трабекул происходило обособление соединительнотканных клеток.

Как видно из наших исследований, в результате биологического действия больших доз радиации в лимфоузлах овец происходила перестройка соединительной ткани с образованием макрофагов, способных к фагоцитозу, фибробластои - к коллагенообразовашпо и властных клеток, имеющих потенцию к бластомогенному росту. Подтверждением сказанного является факт обнаружения очагов опухолевого роста в легких овцы, облученной в дозе 6,51 Гр.

Указанные изменения мы квалифицируем как проплазию соединительной ткани в результате биологического действия радиации. Результаты наших исследований, с большей долей уверенности, дают основание полагать, что в механизмах проявления гормезиса под действием больших доз радиации лежат процессы метаплазии тканей.

Независимо от дозы облучения в сосудах мнкроциркуляторного русла органов развивались изменения микродинамики в виде явлений прогрессирующего венозного полнокровия, гемо- и лимфостаза, отмечались дистрофические и деструктивные изменения стенки сосудов в виде пикноза эидотслиальных клеток, явления геморрагического синдрома, повышения проницаемости и ломкости стенки сосудов. Как правило, отмечали перива-скулярный отек и лимфостаз. Причем капилляры, посткапилляры и венулы подвергались сравнительно более сильным изменениям, чем артернолы и прекапилляры.

У овец, зараженных коксиеллами Бсрнега и одновременном облучении их в дозе 1,86 Гр, вызывающей острую лучевую болезнь легкой степени тяжести, клинико-морфологичсское проявление лихорадки Ку не отличалось от таковой при моноинфекции.

Облучение животных в дозах 4,65 и 6,51 Гр и заражении коксиеллами Бернега приводило к отягощению как инфекционного процесса, так н лучевой болезни и сопровождалось 100%-нон гибелью подопытных овец.

Изменения в количественном содержании эритроцитов и гемоглобина у животных, подвергнутых внешнему гамма облучению и зараженных возбудителем лихорадки Ку в различные периоды острой лучевой болезни свидетельствовали о нарастающей анемии. Наиболее глубокие изменения наблюдались в показателях белой крови, количество лейкоцитов после облучения резко снижалось и на достоверно пониженном уровне удерживалось до конца опыта.

Приводя обобщенные данные по патогистологичсским исследованиям у животных, подвергнутых заражению возбудителем лихорадки Ку сразу же после облучения, отмечено следующее: у павших и вынужденно убитых овец наблюдали разлитые и пятнистые кровоизлияния на коже и в подкожной клетчатке, а в грудной и брюшной полостях в 100% случаев содержалась темно-красного цвета жидкость. У подопытных животных статистически уменьшалась живая масса, относительная масса мышечной тка-

ни, селезенки (крайне тяжелая форма облучения), увеличивалась относительная масса легких, сердца, печени, почек, надпочечников, по сравнению с интактнымн животными. У овец, облученных в дозе 4,65 Гр, наблюдалась эпиляция на спине, шее, боках, голове и конечностях.

При этом обращали па себя внимание изменения, свойственные выраженной дистопии сосудов мышечно- эластического типа, сосудисто- тканевой проницаемости и обширных кровоизлияний, агрегации эритроцитов в капиллярах с развитием синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови, серозно- геморрагической бронхопневмонии, паренхиматозной дистрофии миокарда почек, печени, холецистит, цистит, увеличение относительной массы паренхиматозных органов за счет их кровенаполнения. При гистологическом исследовании наряду с защитно-компенсаторными реакциями п лимфоидиых органах в виде незначительной плазматизации мякотпых шнуроо, макрофагальной реакции, с образованием специфических эпителиодно-осточных гранулем, характерных для лихорадки Ку, повышением уровня содержания специфических комплементсвязы-ваюшнх антител в крови (за исключением овец, облученных в дозе 6,51 Гр и зараженных возбудителем лихорадки Ку), происходило потенцирование патологического действия на организм и отягощение лучевой болезни. Они характеризовались усилением сосудисто-тканевой проницаемости, выраженной дистопией сосудов микроциркуляториого русла во внутренних органах, некротическими изменениями в лимфоузлах, редукцией лимфоидной ткани иммунокомпетентных органов, дистрофическими изменениями клеток печени, почек, миокарда на почве циркуляторно- гипоксических процессов. В головном мозге, кроме отека вещества мозга, периваскулярного и перицел-люлярного отека, развился негнойный лимфоцитраный энцефалит, как результат нарушения гематоэнцефалического барьера.

При изучении химического состава мышечной ткани выявлены значительные сдвиги в содержании белка. Так, при радиационном поражении, при сочетанном воздействии радиации и возбудителя лихорадки Ку, наблюдалось достоверное снижение белка на 0,84 - 2,77%. Отмечалось снижение суммарного содержания незаменимых аминокислот в ЮОг белка мышечной ткани овец, облученных в дозах 1,86-6,51 Гр на 1,08-5,76%.

У овец, облученных в дозе 1,86 Гр и зараженных возбудителем лихорадки Ку, наблюдалось достоверное снижение следующих незаменимых аминокислот: изолейцина, лейцина, метионина и увеличения фенила-ланина. Отмечалось достоверное увеличение некоторых заменимых аминокислот: аргинина, гистидина, пролина и сижение содержания глутаминовой кислоты.

При радиационном поражении овец в дозе 4,65 Гр и заражении возбудителем лихорадки Ку наблюдалось достоверное увеличение суммарного содержания незаменимых аминокислот в ЮОг белков мышечной ткани на 11,01- 13,19%. Отмечалось увеличение валина, изолейцина, лейцина, лизина. Выявлено снижение или отсутствие следующих заменимых аминокислот: гистидина, глутаминовой кислоты, пролина и увеличение серипа, алашша, аргинина, глпцина и аспаргиновой кислоты.

При облучении овец в дозе 6,51 Гр, облучении и заражении возбудителем лихорадки Ку, и вынуждено убитых на 8-10 сутки после радиационного воздействия, наблюдалось достоверное снижение метионнна, гистидина и увеличение аргчнина.

Лимитирующими аминокислотами, определяющими биологическую ценность, оказались мстиошш II цистин. Кроме того, при крайне тяжелой степени лучевой болезни биологическую полноценность также лимитировали фенилалалин и тирозин. При этом аминокислотный спектр лимитирующих аминокислот в белках мышечной ткани овец, пораженных ионизирующей радиацией и зараженных возбудителем лихорадки Ку, был несколько люкс по сравнению с белками мышечной ткани контрольных животных, что указывает на нарушение азотистого обмена в организме овец при радиационных поражениях.

Ионизирующее облучение вызывало развитие эндогенной инфекции, формируя дисбактериоз. По нашим исследованиям, величина бактериальной обсемененности мышц овец, пораженных ионизирующей радиацией и зараженных возбудителем лихорадки Ку, колебалась в пределах 3,99 ± 1,93 -5,64 ± 0,64 микробов в одном поле зрения мазков - отпечатков и 3410 ± 452 - 7767 ± 1237 бактерий в 1 г ткани. В контроле эти показатели были равны соответственно 2,00 ± 0,52 микроба в поле зрения, 2380 ±681 бактерий в 1 г ткани.

Микробная обсеменешюсгь внутренних органов (сердца, селезенки, печени, легких и почек) была в пределах 2,10 ± 1,26 - 10,73 ±5,05 и 7290 ± 2942 - 57967 ± 39272; лимфатических узлов (брыжеечных, надколенных, предлопаточных, печеночных) 6,94 ± 2,37 - 12,6 ± 2,42 и 29867 ± 4983 -81733 ±56459 микробов в 1 г ткани.

Максимальные величины бактериальной обсемененности внутренних органов и лимфоузлов контрольных животных составили соответственно 1,43 ±0,29 - 3,83± 1,52 и 2440± 1442 - 16787 ±4330 бактерий.

Как видно нз приведенных цифровых данных, верхние границы бактериальной обсемененности. мышц и внутренних органов подопытных животных превышали аналогичные показатели контрольных. Это чаще всего наблюдалось при убое овец в период разгара лучевой болезни.

Выделенная из органов и тканей подопытных и контрольных животных микрофлора состояла в основном из стрептококков и группы кишечной палочки. Возбудители сальмонсллеза, ботулизма и стафилококки не выявлялись.

У овец, облученных соответственно в дозах 1,86, 4,65 и 6,51 Гр и зараженных возбудителем лихорадки Ку в разгар лучевой болезни на фоне угнетения иммунобиологического статуса организма, вызванного облучением, происходила генерализация инфекции и утяжеление течения острой лучевой болезни. У больных овец наблюдали увеличение относительной массы легких^ сердца, печени, почек, уменьшение относительной массы селе-зенхм, мышечной т/.апн, отчетливо выраженный геморрагический синдром, меньшую степень Бнутрисосудистого свертывания крови, сочетание делим-фатизации селезенки, лимфатических узлов с дистрофическо-' некротическими изменениями паренхиматозны* клеток печени, почек, миокарда, серозно-гшоррал(ческую бронхопневмонию, гипофункцию щитовидной железы и 100%-ной леталыюстьШодопытных животных при дозах 4,65 и 6,51 Гр.

2.8.Морфологические особенности смешанного течения инвазии и инфекции

Значительное распространение гельмннтозов сельскохозяйственных животных имеет место в жнпотноподческнх хозяйствах Республики Татарстан. Установлено, что паразитарные болезни снижают привесы, вызывают истощение и гибель животных. По данным А.Х. Волкова и Р.Т. Сафиуллн-на (I99X) из обследованных ими хозяйств, гельмшгтозы обнаружены в 89,4%, при этом, жвачные в 1993-1997 г.г. были заражены фзсциоламн на 26,9%, дикроцелнямн - 35,4%, стропгилятами желудочно-кишечного тракта -46,7%, мониезиями - 16,4%. Па распространение гельмиитозов и степень инвазированностн животных большое влияние оказывают характер пастбищ, условия содержания животных, количество осадков и среднемесячные температуры.

Фасциолсз и лихорадка Ку имеют довольно широкое распространение и причиняют большой экономический ущерб животноводству. Вопрос о патоморфологических изменениях при фасциолезах достаточно широко отражен в литературе (A.M. Петров, 1912; И.С. Согояп, 1955; К Sugiura, 1960; P.A. Ханбскян, 1960; H.A. Ниссноаум, 1966; 1LI.A. Азимов, 1974; У.Г. Кадыров, 1997).

Патоморфологическне изменения при лихорадке Ку изучали Л.П. Васильева, И.Н. Кокорин, (1955); A.M. Игонин, (1961); Т.Н. Хавкинз, (1970); Б.Г. Иванов, О.В. Якушева, (I960); R.F Willeget et. al, (1979); В. Maegraith, (1984).

Патоморфологическне изменения при смешанных забопеваниях животных характеризуются вариабельностью. При этом пэтоморфоло-гические изменения, свойственные каждой нозологической форме, протекали более тяжело (М.В. Протасевич, 1968; P.A. Бузмакова, 1973; A.A. Ибрагимов, 1976, 1980; M.S. Balgin et. al., 19SI; А.И. Кривутенко, 1990 и другие.

Таким образом, проблема паразитоценозоп сложна и не полностью' решена, также до настоящего времени не изучены закономерности пато- и иммуноморфологических изменений в организме овец при ассоциированом течении фасциолеза и лихорадки Ку.

Изучение клинических, пато- и иммуноморфологических изменений у овец при смешанном течении фасциолеза и лихорадки Ку, дает возможность разработать рекомендации по их дифференциальной диагностике.

Смешанное течение фасциолеза и лихорадки Ку овец сопровождалось более тяжелым течением, что при монопатолопш. Усиление клинических признаков вело к развитию как патологических, так и защитных процессов в организме исследованных овец. Патологические процессы развивались, главным образом, в области локализации гельминтов, а также в регионарных лимфоузлах. При этом наблюдался билиарный цирроз, выраженный гепатоз, свойственные фасциоллезу, и происходило образование эпителоидно-клеточных гранулем, характерных для лихорадки Ку.

Суммирование повреждающих (первичных) и сенсибилизирующих (вторичных) факторов исследуемой ассоциированной патологии ведет к развитию более тяжелых патоморфологических изменений, во внутренних органах и органах иммунной системы овец. Они проявлялись в виде резких гемодинамическнх, дистрофических и воспалительных процессов, осо-

бснно в печени, желудочно-кишечном трасте, в поджелудочной железе, сердечной мышце, почках, легких, головном мозге, надпочечниках. ,В лимфоузлах происходило образование эпитслиоидпо-клеточных гранулем. В стенке кровеносных сосудов имело место мукоиднос и фибрнноидпое набухание, а также выраженная лимфоидно-макрофагальиая пролиферация в псриваскулярных пространствах, что соответствует проявлению гииер-чувствнтельности замедленного типа. Гистохимичсски в клетках исследованных органов отмечалось значительное снижение содержания РНК, гликогена.

Иммуиоморфологичские изменения при заражении возбудителем лихорадки Ку больных фасциоллсзом овец одновременно указывали на иммуностимулирующее действие кокснелл Бсрнста. В особенности на первых сроках в лимфоидных органах происходили лимфоидно-гиперпластические пролиферативные процессы. Заметная иммунная перестройка отмечалась в лимфоузлах, селезенке, тимусе, а также во внутренних органах. Пролиферация иммуннокомпстентных клеток развивалась параллельно с высокими показателями продукции антител. Однако хроническое течение фасциолеза сопровождалось иммуиодспресивным влияние?,! гельминтов на органы иммунной системы подопытных овец. В этом случае значительно сильнее развивались зпителиоидно-клеточные гранулемы, а уровень специфических комплсментсвязывающих антител был ниже, по сравнению с таковым у овец I, больных только лихорадкой Ку. Одновременно при ассоциированной патологии в периферической крови происходило увеличение бляшкообразующих клеток, свидетельствующих о развитии сугоиммунизации вследствие повреждающего действия как гельминтов, так и действия коксиелл Бериета на организм подопытных овец.

2,9.Иммуиологическая и иммуноморфологичсская оценка эффективности антигена коксислл Бериета

В плане разработки нового специфического препарата против лихорадки Ку испытывали растворимый антиген из коксиелл Бериета на морских свинках в разных дозах и кратности введения.

Установлено, что количество Т-лимфоцитоз в первой группе иммунизированных животных достоверно снижалось с 10-го дня, с восстановлением числа этих меток до исходного уровня к 30-му дню. Напротив, относительно® количество этих клеток было достоверно1 высоким на 60 и 90 да» составило соответственно 34,75 ± 0,7; 31,83 ± 1,09%, а в последующем происходило их снижение к. 150-му дню до уровня фоновых показателей.

У иммунизированных морских свинок отмечалось статистически достоверное увеличение. количества В-лимфоцитов с 10-го по 30-й день. В последующем, у животных происходило снижение В-лимфоцитов, но число их еще оставалось достоверно высоким на 60 и 90 дни. Во 2,3 и 4 группах подопытных животных прослеживалась аналогичная закономерность количественных и качественных изменений иммунокомпетентных клеток.

Исследования коррелятивной связи между интегральной ЭФП лимфоцитов и количеством Т- и В-лимфоцнтов показало для случая однократного введения 1 мл антигена положительную достоверную корреляцию величины ЭФП с количеством Т-лимфоцитов и отсутствие таковой по количеству В-лимфоцитов. При однократном введении 2 мл антигена положительная достоверная корреляция отмечалась между ЭФП и количеством В-лимфоцитов. При двукратном введении антигена высокая достоверная положительная корреляция отмечалась для Т- и В- популяций лимфоцитов при дозе 1 мл и отсутствие - при дозе 2 мл.

При серологическом исследовании сывороток крови морских свинок в РДСК с антигеном фазы II отмечалось увеличение титра антител с 10-го дня от 1:20 до 1:80 к 3-му месяцу исследования и уменьшение - к 5-му месяцу до 1:20. Средний титр антител к фазе I был выявлен на 1,2 н 3-й месяцы исследования и составил 1:10, 1:40 н 1:20 соответственно.

Уровень аутоантителообразугощих клеток возрос к 15-му дню исследований до 18,36% (Р < 0,05) и оставался в этих пределах до 5-го месяца исследований.

Сопоставляя данные инфекционного процесса с результатами исследований органов и тканей вакцинированных морских свинок, на которых проверялись иммуногеиные свойства и безвредность инактивированного антигена из коксиелл Бернета, установили, что происходящие в организме иммунизированных животных изменения, в основном, соответствовали стереотипным, возникающим при антигенном воздействии. Однако наряду с классическими морфологическими изменениями, наблюдаемыми при заражении возбудителем лихорадки Ку и проявляющимися лимфоидно-гиперплатической, макрофагальной и плазмоклеточной реакциями как в лимфоидных, так и в паренхиматозных органах этих животных, отмечались также аллергические изменения. Более рельефно эти изменения проявлялись в регионарных лимфоузлах и селезенке, В регионарных лимфоузлах, кроме сильного опустошения ретикулярной основы органа лимфоидными элементами, наблюдалась ее очаговая фибротизация. В селезенке происходило огрубение ретикулярной основы красной пульпы, обеднение перифол-ликулярной зоны клеточными элементами и се фибротизация. Кроме этого, наблюдались отек и разрыхление периваскулярной ткани трабекул, очаговые скопления лифоидно-гистиоцитарных клеток в паренхиматозных органах.

При изучении влияния доз и кратности введения иммуногегаюго препарата на организм лабораторных животных качественно резкой разницы в проявлениях нммуноморфологической перестройки организма в зависимости от доз не было. Отличия заключались лишь в степени выраженности этих процессов. Кроме этого, выявили выраженные аллергические изменения при вакцинации животных антигеном в дозе 2 мл и у животных, ревакцинированных через 1 месяц после первичной иммунизации дозами 1 и 2 мл. Эти изменения, по-видимому, связаны с наличием аллергического компонента коксиелл Бернета и свидетельствуют о значительном антигенном раздражении лимфоидной системы. Ввиду того, что ревакцинация совпадает с периодом, когда антиген полностью не элиминирован из организма и следовательно, аллергические процессы, развивающиеся при первичной антигенной стимуляции, не претерпевали обратного развития, повторное попадание антигена в этот период вызывало сильно выражен-

иую реакцию ГЗТ. ß органах иммунной системы животных при однократной иммунизации в дозе 1 мл морфологические проявления аллергической реакции имели место даже через 5 месяцев после введения испытуемого препарата. Следовательно, ревакцинацию антигеном из коксиелл Бернета нужно проводить не раньше, чем через 5 месяцев после первичной иммунизации.

Изучая иммуиогенные свойства антигена из коксиелл Бернета, особое внимание было уделено выяснению электрофорстнчсской подвижности лимфоцитов и эритроцитов. Известно, что патогсшгае воздействие возбудителя на живой организм отражается на состоянии клеток крови, их поверхностных мембранах. При изучешш жизнедеятельности клетки исследователи большое внимание уделяли состоянию поверхностного заряда мембраны, так как последний отвечает' за такие процессы как адгезия и контактное взаимодействие (М.А. Маркосян, 1972; С.С. Харамоненко, A.A.Рики-тянскнй, 1974; Г.И. Козинсц с соавт., 1977). Из данных литературы видно, что исследования по ЭФП были проведены с клетками крови человека и млекопитающих при различных заболеваниях - ревматизме, гепатите, лейкозах, гсльмшггозах и др. (A.A. Крылов, 1971; Д.Ю. Каримова, Г.Б. Эвранова, 1986).

Следует, отметить, что выявленная нами закономерность по ЭФП клеток не противоречит данным литературы и в сопоставлении их с результатами гистологических, гистохимических, иммунологических исследований в определенной мерс отражает их корреляцию и свидетельствует как об иммуногенном воздействии антигена из возбудителя лихорадки Ку на организм, так и защитно-приспособительных реакциях иммунизированных

ЖИВОТНЫХ.

Различные виды транспортировок животных, равно как чрезмерные физические нагрузки и другие неблагоприятные факторы внешней среды, являются для организма чрезвычайными раздражителями, которые вызывают в нем состояние общего адаптационного синдрома.

Кроме того, угнетение иммунной системы или иммунодефицита имеют особое практическое значение в тех случаях, когда на фоне их проводится вакцинация животных. В этих условиях у них не разовьется иммунная реагаш на введение иммунизирующего препарата или происходит формирование недостаточного иммушгтета, не обеспечивающего надежную защиту животных.

При изучении влияния транспортного стресса на иммунобиологические показатели морских свинок установлено воздействие его на специфическую иммунобиологическую реактивность организма после иммунизации антигеном из коксиелл Бернета.

Результаты паша исследований показали, что транспортировка морских свинок на автотранспорте приводит к понижению неспецифических иммунологических реакций организма. Восстановление защитно-адаптационных механизмов животных происходило на 15-20-ый день привоза. Транспортировка также оказывала значительное влияние и на формирование специфической' иммунологической реактивности животных, о чем свидетельствовали показатели клеточного и гуморального иммунитета. В связи с этим в целях восстановления иммунобиологических показателей организма и получения более качественных результатов исследования, ре-

комендуен выдерживать животных после доставки не' менее двух-трех недель до начала эксперимента.

ВЫВОДЫ

1. Электронномикроскопнческими исследованиями разных штаммов коксн-елл («Барабинскнй» - эпизоотический, «Грнта» - референтный), находящихся в 1 фазе, установлена идентичность их морфологии и ультрз-структуры, типичная для Coxieila Burnetii.

2. Впервые теоретически обосновано и экспериментально осуществлено изучение патоморфологии п патогенеза лихорадки Ку у сельскохозяйственных и лабораторных животных при заражении их разными штаммами коксиелл, находящихся в I фазе, а также при совместном течении инфекционного процесса с радиацпопно-биологическнм поражением животных.

3. Клинические признаки экспериментальной Ку-лихорадки у животных после внутрибрюшиниого заражения коксиеллами Бернета I фазы (штаммы «Грнта» - классический, «Барабинскнй» - эпизоотический, «Мордовия» - эпидемиологический) характеризовались лихорадкой интермнгнрутоще-го типа с повышением температуры на 3-7, 9-10, 27-29, 55-57 сутки с угнетением общего состояния, снижением пищевой возбудимости, малоподвижностью, развитием серозно-катарального ринита и конъюнктивита, цианозом видимых слизистых оболочек.

4. Иммуноморфологические изменения у больных Ку-лихорадкой животных проявлялись снижением содержания Т-лнмфошггов в течение первых 30 суток после заражения, нормализацией их уровня к 60-му, увеличением числа этих клеток на 90-е сутки. При этом количество В-лимфоцитов возрастало к 10-м суткам и оставалось на достаточно высоком уровне до 120 суток (срок наблюдения). Количество антителооб-разутощих клеток в лимфоузлах и селезенке зараженных животных достигало максимального уровня на 15-е сутки.

5. У больных животных в органах и тканях развивались специфические, неспецифические и иммунопатологические процессы:

э специфические изменения характеризовались образованием в лимфоузлах опителиоидноклегочных гранулем с гигантскими клетками Пирого-ва-Лакгханса;

® ¡^специфические - проявлялись гипсрпластической, макрофагальной, плазмохлеточной реакциями в лимфоидных органах, повышением содержания в них гидролитических ферментов, увеличением синтеза РНК, з печени и миокарде - истощением резервного гликогена, в надпочечниках - расширением пучковой и сетчатой зон, в головном мозге - наличием периваскулярных лимфоидноклеточных инфильтратов;

® иммунологические - характеризовались огрубением и фибротизациен ретикулярной стромы лимфоидных органов плазморрагнен, зритродиапеде-зом, мукоидным и фибрипоидным набуханием стенок сосудов микро-циркуляторного русла, образованием лимфондно-гистиоц1ггариых инфильтратов в легких, миокарде, печени, почках, а также дистрофическими изменениями паренхиматозных элементов этих органов, что в

совокупности свидетельствовало о морфологическом проявлении аллергической реакции типа ГЗТ.

6. Фагоцитоз возбудителя лихорадки Ку макрофагами лимфоузлов, а также макрофагами и фнбробластами селезенки у зараженных животных имел незавершенный характер с формированием различных размеров вакуолей в цитоплазме фагоцитов. При этом крупные и средние вакуоли содержали хорошо сохранившиеся, а мелкие - измененные фагоцитированные коксиеллы.

7. Ультраструктура макрофагов, лимфоцитов, плазмоцитов и ретикулярных клеток органов иммуногенеза у больных Ку-лнхорадкой животных характеризовалась изменениями, свидетельствующими об усилении их функциональной активности.

8. Сравнительный анализ выявления риккстсиозного антигена в органах и тканях зараженных животных иммунофлюорссцснтным методом и ИФА показал возможность его индикации в фагоцитах лимфоузлов, селезенки, печени, почек, легких, надпочечников, головного мозга с 3-х по 120-е сутки (срок наблюдения) с более высокой точностью индикации методом ИФА.

9. При воздействии гамма-облучения в дозах 1,86; 4,65; 6,51 Гр на овец у подопытных животных развивались клинико-морфологичсские признаки проявления острой лучевой болезни, соответствующие легкой, тяжелой и крайне тяжелой степени. При этом в органах иммуногенеза отмечали резкое повышение проницаемости капилляров, геморрагии, опустошение лимфоидной ткани, более ярко выраженное в зонах локализации Т-' лимфоцитов; появление в синусах лимфоузлов розеткообразующих макрофагов с аутологичными эритроцитами, что свидетельствовало об ау-тоагрессин лучевого поражения; в соединительной ткани лимфоузлов происходило образование макрофагов, способных к фагоцитозу, фиброб-ластов - к коллагенообразованию и бластных клеток, имеющих потенцию к бластомогенному росту.

10. У овец зараженных коксиеллами Бернета и одновременном облучении их в дозе 1,86 Гр, вызывающей острую лучевую болезнь легкой степени, клинико-морфологическис проявления болезни были подобны таковым

. при моноинфекцин. Облучение животных в дозе 4,65 и 6,51 Гр и заражение коксиеллами Бернета приводило к отягощению как инфекционного процесса, так и лучевой болезни

11. Апробация инактивированного антигена из коксиелл Бернета в качестве вакцины на лабораторных животных позволила выявить иммуногенные и реакгогенные свойства этого препарата, а также выраженность имму-номорфологических и защитно - приспособительных реакций иммунизированных животных. Транспортный стресс, предшедствующий вакцинации, оказывал иммунодепрессивное влияние на организм морских свинок.

12. Экспериментальное заражение коксиеллами овец, спонтанно больных фасциолезом, проявлялось развитием тяжелых патонммуноморфологиче-ских изменений в органах и тканях, обусловленных суммацией имму-нодепрессивных свойств фасциол и возбудителя Ку-лихорадки.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты практических исследований, сформулированные в диссертации, научные положения пошли в следующие документы:

в методические указания по лабораторной диагностике лихорадки Ку животных (Утв. ДВ МСХ и ПРФ 13.05.96 № 13-6-2/600);

• профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных (12, коксиеллез, лихорадка К>| санитарные правила СП 3.1.09596; ветеринарные правила ВП 13.3.1221-96;

• клеточный электрофорез при изучении инфекционной патологии сельскохозяйственных животных. Методическое пособие. Казань, 1992г.

2. Нами оформлены «Рекомендации по ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов убоя животных при радиационных поражениях, осложненной лихорадкой Ку, и ускоренной дифференциации некоторых бактериальных инфекций» (Утв. МО СССР в 1989г.), получена приоритетная справка^1» 145-88 от 12.04.88г.) на рационализаторское предложение «Имму-нофлуорссцснтное выявление риккетсий Бериета в. органах н тканях овец, больных лихорадкой Ку».

3. Результаты исследований, выводы и рекомендации следует использовать при разработке и совершенствовании технологии содержания сельскохозяйственных животных в регионах радиоактивного заражения, неблагополучных по Ку- лихорадке. Полученные данные рекомендуем включить в учебный и в учебно-исследовательский процессы ВУЗов, НИИ радиобиологического профиля и при написании учебников монографий и другой научно-методической литературы соответствующей тематики.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ситдиков Р.И. Динамика клеточных и гуморальных факторов защиты организма овец при экспериментальной лихорадке Ку.// Достижения ветеринарной и зоотехнической наук - в производство. Тезисы докладов Республиканской научно-производственной конференции. - Казань, 1988. — С. 29.

2. Ситдиков Р.И., Гильмутдинов Р.Я., Юсупов Р.Х., Госманов Р.Г., Курбано-ва И.А. Иммунологическая характеристика растворимого антигена риккетсий Бернета.// Достижения ветеринарной и зоотехнической науки - в производство. Тезисы докладов Республиканской научно-производственной конференции. - Казань, 1988. -С.28.

3. Гильмутдинов Р.Я., Юсупов Р.Х., Госманов Р.Г., Ситдиков Р.И. Состояние лимфоцитов при иммунизации животных антигеном из возбудителя лихорадки Ку по данным клеточного электрофореза.// Материалы Всесоюзной конференции. Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных. - Львов, 1988.-С. 434.

4. Ситдиков Р.И. Удостоверение на рационализаторское предложение № 145-88 «Иммунофлуоресцентное выявление риккетсий Бернета в органах

» тканях овец, больных лнхорадхой Ку». - Казанский ветеринарный институт. - Казань, 1988.

5. Ситдиков Р.И. Иммуноморфологнчсскнс изменения органов н тканей морских свинок, иммунизированных антигеном коксиелл Бсрнста. //Теоретические и практические вопросы ветеринарии и зоотехнии. Тезисы докладов Республиканской научно-производственной конференции -Казань, 1989.-С. 47-48.

6. Шарофидннов U.M., Ситдиков Р.И. Ранняя диагностика у убойных животных лихорадки Ку. // Тсзиси докладов республиканской научно- производственной конференции. Теоретические и практические вопросы ветеринарии н зоотехнии.-Казань, 1989.-С. 131-132.

7. Ситдиков Р.И., Шарофидннов И.М. Расселение коксиелл Бсрнста в органах и тканях и их пережнваемость в организме экспериментально зараженных овец.// Тсзиси докладов Республиканской научно-производственной конференции. Теоретические и практические вопросы ветеринарии и зоотехнии.. - Казань, 1989.-С. 132-133.

8. Ситдиков Р.И., Юсупов Р.Х., Курбанова И.Л. Состояние клеточного и гуморального иммунитета у морских свинок, инфицированных коксиелла-мн Бсрнегз.// Тезисы докладов IV Всесоюзного съезда патофизиологов. Нарушение механизмов регуляции и их коррекция. - Кишинев, 1989. -Т.Ш.-С, 1380.

9. Власснко В.В., Фролов В.П., Юсупов Р.Х., Идрисоп Г.З., Шарофидннов И.М., Ситдиков Р.П., Левковскнй И.В. Рекомендации по ветсринарно-санитарнон экспертизе .продуктов убоя животных при радиационных поражениях, осложненных лихорадкой Ку, н ускоренной дифференциации некоторых бактериальных инфекций.-Львов, 1989.-16с.

10. Ситдиков Р.П.. Шигапов Н.З., Шошокин. В.Л., Юсупов Р.Х. Патоморфоло-гия и некоторые вопросы патогенеза экспериментально вызванной лихорадки Ку у овец. Вопросы риккетснолопш.// Материалы IV Всесоюзной конференции. Актуальные вопросы эпидемиологии, диагностики и лечения, профилактики риккетиснозов.-Москва, 1989.-С. 29-31.

П.Сндиков Р.И., Юсупов Р.Х. Состояние клеточного н гуморального иммунитета у овец, инфицированных коксислламн Бсрнста. Вопросы ■ рнккетсиологни.// Материалы IV Всесоюзной конференции. Актуальные вопросы эпидемиологии, диагностики и лечения, профилактики риккетснозов. - Москва, 1989. - С. 27-29.

12. Ситдиков Р.И., Шошокин В.А., Шигапов Н.Э. Патоморфология экспериментальной лихорадки Ку у морских свинок.// Актуальные вопросы эпизоотологии и меры борьбы с туберкулезом животных. Межвуз. сб. научных трудов. - Казань, 1989. -С 86-92.

13. Салахутдинов P.A., Гильмугдинов Р.Я., Ситдиков Р.И. Специфические и неспецифические механизмы защиты у морских свинок при иммунизации на фоне транспортного стресса.//Акгуальные вопросы диагностики инфекционных болезней лабораторных животных, разработка и производство современных диагностических тсст-систсм. - Москва, 1989. -С. 18-19.

14. Ситдиков Pit, Шигапов Н.З. Гистологические и иммунофлуоресцентные исследования органов овец, спонтанно больных лихорадкой Ку У/Животноводству - комплексную программу развития. Тезисы докла-

J3

дов Республиканской научно-производственной конференции. - Казань, 1990. -С. 52.

15. Салахутдииов Р.Л., Курбанова И.Л., Снтднков Р.И. Изменение иммунологических показателей морских спинок после транснортиров-ки.//Рачрзботка эффективных методов диагностики особо опасных инфекционных болезнен животных. Межвузовский сборник научных трудов. - Казань, 1990. -С. 86-89

16. Снтднков Р.И., Штанов 11.3. Патоморфология экспериментальной лихорадки Ку у опсц.//Диагностнка, патоморфология, патогенез и профилактика болезней в промышленном животноводстве. Межвузовским сборник. -Саратов. 1990. -С. 89-91.

17. Гильмутлннов Р.Я., Снтднков Р.И. К биофизической интерпретации механизма диаисдста при лихорадке Ку.//Казанск!Ш медицинский журнал, 1993, № 5. -С. 370-371.

18. Гильмутдинов Р.Я., Снтднков Р.И. Системный морфофункционмьный подход при анализе инфекционных и фармакологических почдейст-вийУ/Матерналы Всероссийской научно-методической конференции «Диагностика, патогенез, патоморфология и профилактика болезней с.-х. животных», - Воронеж, 1993. -С. 36.

¡9. Гильмутлннов Р.Я., Юсупов Р.Х., Снтднков Р.И. Динамика морфофунк-циональных изменений в организме животных, иммунизированных против лихорадки Ку.// Межвузовский сб. науч. трудов «Вопросы инфекционной патологии с.-х. животных». - Казань, 1994.-С.-15-47.

20. Ситдиков Р.И., Юсупов Р.Х. Цнтопатологня органов иммунной системы животных, зараженных коксиеллами Бернета.//Материалы Республиканской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. - Казань, 1996.-С. 32.

21. Снтднков Р.И. Клшшко-морфологичсскне проявления лихорадки Ку при экспериментальном заражении больных фасциолезом овец.// . Тезисы докладов III Республиканской научной конференции. Актуальные экологические проблемы Республики Татарстан. Казань, 1997гол--С. 170-171.

22. Ситдиков Р.И., Юсупов Р.Х., Шошокин В.А., Гоманов Р.Г., Юсупов P.P. Некоторые данные об ультраструктурном строении коксиелл БернетаУ/ Материалы Республиканской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. Казань, 1997.-С.41

23. Ситдиков Р.И., Юсупов Р.Х., Госманов Р.Г., Шошокин В .А., Юсупов P.P. Иммуноморфологические изменения в органах и тканях животных при экспериментально вызванной лихорадке Ку. Л Материалы Республиканской научно-производственной конференции по • актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. Казань, 1997.-С. 42

24. Ситдиков Р.И., Юсупов Р.Х. Шошокин В.А., Госманоп Р.Г1., Юсупов P.P. Ультраструктурные изменения клеток системы мопонуклеарных фагоцитов, инфицированных коксиеллами БернетаУ/ Материалы Республиканской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. Казань, 1997.-С. 41

25. Ситдиков Р.И., Юсупов Р.Х. Шошокин В.А., Госманов Р.Г., Юсупов P.P. Ультраструктурное состояние коксиелл Бернета, находящихся в органах зараженных животных.// Материалы Республиканской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. Казань, 1997. - С. 44

26. Cirrдиков Р.И., Юсупов Р.Х. Иммуноморфологические изменения в органах и тканях морских свинок, иммунизированных антигеном кокснелл Бернста.// Актуальные проблемы встеринарно-саннтарного контроля сельскохозяйственной продукции. Тезисы докладов 2-ой международной научно-практической конференции: "«Здоровое животное - безопасная пища -здоровый человек», Москва, 1997. - С. 51.

27. Снтднков Р.И., Юсупов Р.Х. Клннико-анатомичсские реакции овец, подвергнутых радиации и заражению возбудителем лихорадки Ку.//Раднобиология, радиоэкология, радиационная безопасность. Тезисы докладов Iii съезда по радиационным исследованиям. - Пущино, 1997.-С. 217-218.

28. Снтднков Р.И. Клиннко-морфологическое проявление лихорадки Ку при экспериментальном заражении больных фасциолсзом овсц.//Актуальные экологические проблемы Республики Татарстан. Тезисы докладов 3 Республиканской конференции,-Казань, 1997.-С. 170-171.

29. Ситдиков Р.И., Юсупов Р.Х. Патоморфологическис изменения в органах и тканях овец, подвергнутых радиации и заражению возбудителем лихорадки Ку.//Материалы международного координационного совещания «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных»-Воронеж, 1997.-С. 133-134.

30. Ситдиков Р.И., Юсупов Р.Х., Шошокин В.А., Госманов Р.Г., Юсупов P.P. Морфологическая структура возбудителя лихорадки Ку.//Проблемы инфекционной и незаразной патологии сельскохозяйственных животных Материалы Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии сельскохозяйственных животных. - Казань, 1998. -С. 122-125.

31. Ситдиков Р.И., Юсупов Р.Х., Шошокин В.А., Госманов Р.Г., Юсупов P.P. Элсктронномикроскопическое изучение состояния возбудителя лихорадки Ку, находящегося в органах зараженных животных.//Проблсмы инфекционной и незаразной патологии сельскохозяйственных животных Материалы Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии сельскохозяйственных животных. - Казань, 1998. - С. 118122.

32. Ситдиков Р.И., Юсупов Р.Х., Шошокин В.А., Госманов Р.Г., Юсупов P.P. Ультраструктурная патология органов иммунной системы животных при заражении их возбудителем лихорадки Ку.//Проблемы инфекционной и незаразной патологии сельскохозяйственных животных. Материалы Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии сельскохозяйственных животных. - Казань, 1998.-С. 115-118.

33. Ситдиков Р.И., Юсупов Р.Х., Шошокин В.А., Госманов Р.Г., Юсупов P.P. Патоморфологические изменеши в органах и тканях животных при экспериментально вызванной лихорадке Ку. //Проблемы инфекционной и незаразной патологии сельскохозяйственных животных Материалы Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии сельскохозяйственных животных. - Казань, 1998.-С. 110-115.

34. Ситдиков Р.И. Патоморфологические проявления острой лучевой болезни у овец в сочетании с экспериментальным заражением возбудителем лихорадки КуУ/Материалы международной научной конференции, посвященной 125-летию академии. Казань, 1998.-С. 80.

35. Снтдиков P.M. Патоморфологическая диагностика лихорадки Ку животных.// Международная научно-практическая конференция «Диагностика, профилактика н меры борьбы с особо опасными й экзотическими болезнями животных». ВНИИ вет. вирусологии и микробиологии. - Покров,

1998. С. 47.

36. Снтдиков Р.И. Патоморфологические изменения при фасциолезе, осложненном лихорадкой Ку.//Тезисы докладов 3. Республиканской научной конференции молодых ученых. - Казань, 1998.-С. 111.

37. Снтдиков Р.И. Клннико-морфологическиг реакции у овец, подвергнутых радиации и заражению возбудителем лихорадки Ку Л Журнал «Морфология». Том ИЗ №3, 1998.-С. 110.

38. Снтдиков Р.И. Патоморфологические изменения в органах и тканях овец, зараженных возбудителем Ку- лихорадки в разгар лучевой болезни.// Международная научно-производственная конференция, посвященная 100-летию со дня рождения члена-корреспондента ВАСХНИЛ В.Т. Котова. «Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных» - Воронеж, 1999. - С. 134-13 5.

39. Ситдиков Р.И., Мустаева O.A., Юсупов Р.Х. Мавлеев В.В. Юшнико-морфологнческие изменения сердечно-сосудистой системы при коксиел-лезе.// Материалы Республиканской научно-производственной конференции. Актуальные проблемы животноводства и ветеринарии. - Казань,

1999. - С. 46-47.

40. Хисматуллина H.A., Ситдиков Р.И., Курбанова И.А., Юсупов Р.Х. Имму-нохимическая и патоморфологическая диагностика лихорадки Ку животных. // Инфекционные болезни. Материалы Международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооиНженерного факультета. - Казань, 2000. - С. 156-157.

41. Идрисов Г.З., Ситдиков Р.И. Патоморфология и патогенез лучевой болезни овсц.//Незаразные болезни. Материалы Международной конференции, посвященной 70-летию образования зооиюкенерного факультета. -Казань, 2000.-С. 221-223.

Заказ ¡г 127. Подписано б печать 22.05.2У00. Формат 60 х 8^/16 Тиран IUU экз. 2 г..л. Офсет.участок КГАЬ.'.!. Ка&ань-^2С074

Лихорадка Ку как антропозоонозное заболевание представляет серьезную народнохозяйственную проблему. Её значение становится очевидным, если учесть наличие множества природных очагов инфекций образование вторичных антропургических очагов, стойкость возбудителя к факторам внешней среды, разнообразие путей передачи, а также высокую чувствительность к коксиеллам неиммунных людей и животных (В.В.Паутов, А.И.Игумнов, 1968; Н.И.Федорова, 1968; К.М.Лобан, 1974, 1980, 1987; М.М.Махметов, 1975; А.Б.Дайтер, 1978; К.Н.Токаревич, 1979, 1994; А.И.Коршун и соавт.,1988; Р.Г.Госманов и соавт., 1985; А.Б.Дайтер и соавт., 1988; Р.Х.Юсупов и соавт., 1987, 1988, 1994; Р.Р.Юсупов, 1995; В.А.Черванёв и соавт., 1999; М.В.Максимович и соавт., 1995; Fritz Е., 1994.

Возбудитель лихорадки Ку, обладающий уникальным циклом развития и отличающийся от других микроорганизмов способностью весьма тонко приспосабливаться к внутриклеточным условиям паразитиро-вания, обуславливает своеобразие клинических проявлений данной инфекции у животных, создает большие трудности в распознавании заболевания, а отсутствие надежных средств специфической профилактики ведет к потенциальной угрозе здоровью человека и распространению этой инфекции среди сельскохозяйственных животных.

Очевидно, радикальные меры борьбы с лихорадкой Ку могут быть разработаны лишь с учетом результатов всестороннего изучения биологических особенностей коксиелл различных штаммов, а также механизмов взаимоотношения коксиелл с клетками организма как в процессе заболевания, так и при формировании противориккетсиозного иммунитета. Несмотря на 8 многолетнее изучение коксиелл ветеринарными и медицинскими специалистами различных профилей и достигнутые при этом успехи, многие аспекты этой проблемы остаются ещё недостаточно выясненными.

Имеющиеся в литературе данные по ультраструктуре коксиелл немногочисленны, носят поверхностно-описательный характер и полученные данные в отношении морфологии этих микроорганизмов неполны и противоречивы.

Решающее значение в формировании защитной реакции организма и развитии иммунитета против Ку-риккетсиоза, как установлено многочисленными исследованиями, играют клеточные факторы (Е.А.Кабанова и соавт., 1978; И.Н.Кокорин и соавт., 1980; А.Д.Аблизин и соавт., 1976; J.Kobayashi et.al; 1979; R.A.Kishimoto et.al, 1978; R.S.Humphres et.al, 1981 и др.) Однако, вопросы завершенности фагоцитарного процесса, формирования фаголизосом и др. при этой болезни выяснены недостаточно.

В работах, посвященных изучению внутриклеточного паразитизма коксиелл в культуре тканей, куриных эмбрионах, выполненных на электронно-микроскопическом уровне (В.Н.Паутов, А.И.Игумнов, 1968; О.С.Гудима, В.Н.Милютин, 1968; О.С.Гудима, 1976; Н.Кордова, П.Бёртон, 1968 и др.) большое внимание уделено структурным изменениям риккетсий, тогда как реакция клеток макроорганизма освещено недостаточно. Вместе с тем, анализ структуры клеток и изменений их внутриклеточных органелл имеет большое значение, так как может способствовать раскрытию механизмов естественной и приобретенной резистенции и принципов регуляции иммунитета у животных. Кроме того, исследование функциональной активности и реакции мононуклеарных клеток в отношении возбудителей Ку-риккетсиоза даёт возможность характеризовать иммунный потенциал организма.

В связи с вышеизложенным, представляется важным сравнительное исследование морфологической структур коксиелл различных штаммов, а также взаимодействие их с клетками мононуклеарной фагоцитарной системы с 9 учётом функционального состояния последних. Задачей морфологических исследований любого инфекционного процесса является выяснение взаимоотношений возбудителя и организма хозяина, в какие связи вступает он с различными структурами. Это необходимо для того, чтобы воссоздать динамику специфических изменений, их морфогенез, так как ."толкование патогенеза заболеваний без точного знания его морфогенеза является по меньшей мере беспредметным"(Н.Н.Аничков, 1958).

Риккетсиозы вообще, а лихорадка Ку в частности, относятся к числу немногих инфекционных заболеваний при которых целенаправленно не изучались состояние клеточного и гуморального иммунитетов, определяющих патогенез болезни. При многих инфекциях (бруцеллез, сальмонеллез, листе-риоз и др.) наблюдаются выраженные в той или иной степени изменения уровня содержания и нарушения функциональной активности основных популяций лимфоцитов в периферической крови, в значительной мере определяющих форму, степень тяжести и исход заболевания. В равной степени это относится также к Ку-лихорадке животных.

В связи с вышеизложенным, также представляется важным изучение патоморфологических, цитосерологических и иммуноморфо-логических изменений в органах и тканях морских свинок и овец, зараженных разными штаммами коксиелл Бернета в условиях эксперимента. Это способствовало бы выявлению патогномоничных признаков у больных животных, которые бы учитывались при постановке диагноза на лихорадку Ку.

Мировая общественность с начала 50-х годов проявляет серьёзную озабоченность по поводу воздействия ионизирующих излучений на человека, животных и окружающую среду. Во всех странах широкое применение получила ядерная энергетика, активно используются различные виды ионизирующих излучений в народном хозяйстве и научно-исследовательских работах. Кро

10 ме того, следует особо подчеркнуть наличие огромных запасов ядерного оружия в развитых странах, а также странах с агрессивной мировой политикой.

С другой стороны, интенсивное развитие атомной энергетики, главного источника будущего, требует дальнейших усилий науки и техники по обеспечению её надёжности и безопасности. Внимание к вопросам устойчивого ведения животноводства в зоне атомных предприятий значительно повысилось после аварии на Чернобыльской АЭС (P.M.Алексин, 1988-1992; Б.Н. Анненков, 1991; В.А.Киршин с соавт., 1988-1992; В.А.Бурдаков с соавт., 1988-1992;

A.Д.Белов, 1989; Б.С.Арстер, 1988-1992; Л.И.Ефанова и соавт., 1999; Е.И.Трошин, 1999).

В случае чрезвычайных ситуаций, связанных с радиационными выбросами и влиянии их на природные очаги лихорадки Ку, возможно сочетанное ра-диационно-биологическое поражение сельскохозяйственных животных.

В условиях современных крупных животноводческих комплексов, концентрация большого количества животных на ограниченных территориях увеличивается опасность их заражения и быстрого распространения инфекционных заболеваний, среди которых наиболее опасным для человека является лихорадка Ку. Не исключена возможность применения её возбудителей в качестве бактериологического оружия.

При радиационном поражении сельскохозяйственных животных полулетальными и летальными дозами наблюдаются глубокие функциональные и морфологические нарушения клеточных структур, органов и систем организма. В результате таких изменений в значительной степени ослабляется иммунобиологическая реактивность животных, отягощается течение инфекционных болезней и, наоборот, инфекция утяжеляет течение лучевой болезни (Р.В.Петров, 1958; Н.Н.Клемпарская с соавт., 1968; П.Д.Горизонтов, 1964;

B.Л.Троицкий и др., 1965; П.И.Притулин, В.А.Горбатов, 1968; В.М.Караваев, В.Л.Коляков и др., 1970; П.А.Карташов и др., 1978; В.А.Киршин, М.Л.Гусарова, 1999; A.Hollander, 1958).

II

Также установлено, что при действии ионизирующей радиации чувствительность животных к возбудителям инфекционных болезней повышается, инфекционный процесс протекает тяжело. Это своеобразие является следствием сложного взаимодействия между лучевой болезнью и инфекционным процессом, когда происходит не только отягощение одного патологического процесса другим, но и взаимоисключение отдельных проявлений болезни (П.И.Притулин и др., 1968; П.А.Карташов, 1975; А.И.Коршун и др., 19761980; Г.М.Тонурия, Л.Ю.Тонурия, 1999).

Учитывая вышеизложенное, представляется важным изучение патомор-фологических изменений в клетках, органах, системах и организме животных при воздействии возбудителя лихорадки Ку и гамма лучей. Это особенно важно в связи с тем, что вопросы патогонеза и морфологических изменений при радиационно-биологическом поражении животных слабо изучены. Решение этих аспектов сочетанного воздействия радиации и биологических агентов дало бы возможность выяснить механизмы развития лучевой патологии на фоне болезни лихорадки Ку, а также имело большое практическое значение для дифференциальной диагностики и научного обоснования мероприятий по защите объектов сельскохозяйственного производства животных, продуктов животноводства, кормов от заражения радиоактивными веществами и инфицирования коксиеллами Бернета.

Настоящая работа выполнена в 1989-1999гг согласно плана задания 01.10.92 Д, проблемы 0.сх.61 "Разработка и внедрение комплексной системы мероприятий по диагностике и профилактике лихорадки Ку животных", номера госрегистрации 01860093078, 01860030355, определенного лаборатории иммунологии ВНИВИ ГУВ Госагропромом СССР.

Цель и задачи исследований. Провести сравнительное исследование морфологической структур коксиелл различных штаммов, а также взаимодействие их с клетками мононуклеарной фагоцитарной системы с учетом функционального состояния последних. Изучить патоморфологические, цитосероло

12 гические и иммуноморфологические изменения в органах и тканях морских свинок и овец, зараженных разными штаммами коксиелл Бернета, а также при сочетанном радиационно-биологическом поражении в условиях эксперимента. В связи с этим, в задачи исследования входило:

1) изучить морфологию коксиелл Бернета разных штаммов и взаимодействие их с клетками мононуклеарной фагоцитарной системы морских свинок и овец в динамике инфекционного процесса ин виво;

2) проанализировать динамику состояния клеточного и гуморального иммунитета, характер патологии иммуноморфологических изменений в органах и тканях морских свинок и овец, зараженных коксиеллами Бернета разных штаммов;

3) Провести исследования клинической, гематологической картины, макро-и микроструктуры органов и тканей овец при лучевой болезни различной степени тяжести, осложненной лихорадкой Ку;

4) изучить особенности иммуноморфологии у овец при заражении их коксиеллами на фоне инвазии;

5) выяснить возможность применения инактивированного антигена из коксиелл Бернета в качестве вакцины;

6) провести исследования иммунологических показателей у лабораторных животных при вакцинации на фоне транспортного стресса.

Научная новизна. Впервые проведено электронно-микроскопическое исследование коксиелл Бернета референтного штамма "Грита" и эпизоотического штамма "Барабинский", находящихся в I фазе. Показано сходство ультраструктуры клеточных стенок и цитоплазмы коксиелл независимо от штаммовой принадлежности. В результате проведенных электронно-микроскопических исследований были получены новые данные взаимодействия коксиелл разных штаммов с иммунокомпетентными клетками лимфоузлов и селезенки в динамике инфекционного процесса у морских свинок и овец, при этом проведен детальный анализ ультраструктурной

13 цитопатологии. Впервые в условиях эксперимента изучены динамика клеточного и гуморального иммунитета, характер пато- и иммуноморфологи-ческих изменений в органах и тканях морских свинок и овец, зараженных коксиеллами Бернета референтного, эпизоотического и эпидемиологического штаммов, находящихся в I фазе. Определены специфические и неспецифические патоморфологические изменения в органах и тканях животных, вызванные введением вирулентных штаммов возбудителя лихорадки Ку. Выявлены патогномоничные признаки, свойственные для данной болезни, характеризующиеся образованием в лимфоузлах эпителиоидноклеточных гранулем с гигантскими клетками Пирогова-Лангханса. Электронномикроскопическими, иммунофлуоресцентными и иммуноферментными исследованиями установлена персистенция возбудителя лихорадки Ку в фагоцитах лимфоидных и паренхиматозных органов подопытных животных в течение 120 дней (срок наблюдения).

Впервые у облученных гамма-лучами животных установлены интерфазная и репродуктивная гибель клеток в лимфоидных органах; образование в синусах лимфоузлов розеткообразующих макрофагов с аутологичными эритроцитами без фагоцитоза последних; метаплазия соединительнотканных клеток тра-бекул лимфоузлов в клетки типа макрофагов, способных к фагоцитозу, фиб-робластов- к коллагенообразованию и бластных клеток, имеющих потенцию к бластомогенному росту. У овец, зараженных коксиеллами Бернета и, одновременном облучении их в дозе 1,86 Гр, вызывающем острую лучевую болезнь легкой степени тяжести, клинико-морфологические проявления лихорадки Ку не отличались от таковых при моноинфекции. Облучение животных в дозах 4,65 и 6,51 Гр и заражение коксиеллами Бернета приводило к отягощению как инфекционного процесса, так и лучевой болезни и сопровождалось 100% -ной гибелью. При заражении коксиеллами овец, спонтанно больных фасциолезом, установлены выраженные иммуноморфологические изменения у животных, обусловленные суммацией иммунодепрессивных свойств антигенов.

14

Результаты исследований по теме диссертации вошли в "Рекомендации по ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов убоя животных при радиационных поражениях, осложненной лихорадкой Ку, и ускоренной дифференциации некоторых бактериальных инфекций", утвержденные военно-ветеринарным отделом МО СССР в 1989 г. и внедрены в медицинскую и ветеринарную практику.

Материалы работы включены в заявку на рационализаторское предложение "Иммунофлуоресцентное выявление риккетсии Бернета в органах и тканях овец, больных лихорадкой Ку", на которую получена приоритетная справка (145-88 от 1988г.).

Результаты исследований вошли в следующие научно-технические документы:

- Методические указания по лабораторной диагностике лихорадки Ку животных (утв.ДВ МСХ и ПРФ 13.05.96г. 13-6-600);

- Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных 12. коксиеллез (лихорадка Ку), санитарные правила СП 3.1.095-96; Ветеринарные правила ВП 13.31221-96);

- Клеточный электрофорез при изучении инфекционной патологии сельскохозяйственных животных. Методическое пособие. Казань-1992г.

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликована 41 работа.

На защиту выносятся следующие основные положения:

- особенности ультраструктуры коксиелл Бернета штаммов "Грита" и "Бара-бинский";

- результаты изучения ультраструктурной перестройки иммуннокомпетентных клеток в динамике развития инфекционного процесса;

- патоморфологическая характеристика общих, специфических и аллергических изменений в органах и тканях при экспериментально вызванной лихорадке Ку;

15

- клинико-морфологическая характеристика лихорадки Ку при совместном течении с лучевой болезнью;

- особенности пострадиационных изменений клинико-биологического состояния, макро- и микроструктуры органов и тканей овец при остром гамма облучении.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на научных конференциях Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана (1987-2000гг), на X,XI,XII Всесоюзных конференциях по патологической анатомии (Саратов, 1987; Харьков, 1990; Воронеж, 1993; Казань, 1996), на Всесоюзной конференции "Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных (Львов, 1988), на Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы эпидемиологии, диагностики и профилактики риккетсиозов" (Москва, 1989), на II съезде по радиационным исследованиям "Радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность" (Пущино, 1997), на 2-ой международной научно-производственной конференции "Здоровое животное- безопасная пища - здоровый человек" (Москва, 1997), на II республиканской научной конференции "Актуальные экологические проблемы Республики Татарстан" (Казань, 1997), на международном координационном совещании ""Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных" (Воронеж, 1997), на международной научной конференции, посвященной 125-летию ака-демии(Казань, 1998).

Внедрение. Материалы диссертации, нашедшие отражение в опубликованных статьях, рекомендациях, монографии, используются в учебной (чтение лекций, проведение практических занятий со студентами и ветеринарными врачами факультета повышения квалификации, практике) и научно-исследовательской работе по дисциплинам "Безопасность жизнедеятельности", "Ветеринарная радиобиология", "Патологическая анатомия", "Ветери

16 нарно- санитарная экспертиза с основами технологии и стандартизации продуктов животноводства" в Казанской Государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана, а также в научно-исследовательской работе лаборатории иммунологии ВНИВИ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования изложения результатов, их обсуждения, выводов, справки о внедрении и списка литературы. Диссертация содержит 552 страницы машинописного текста, 167 рисунков, 44 таблицы. Список литературы включает 772 работы, в том числе 247 иностранных.

471 4. ВЫВОДЫ

1. Электронномикроскопическими исследованиями разных штаммов коксиелл («Барабинский» - эпизоотический, «Грита» - референтный), находящихся в I фазе установлено идентичность их морфологии и ультраструктуры, типичная для Coxiella Burnetii.

2. Впервые теоретически обосновано и экспериментально осуществлено изучение патоморфологии и патогенеза лихорадки Ку у сельскохозяйственных и лабораторных животных при заражении их разными штаммами коксиелл, находящихся в I фазе, а также при совместном течении инфекционного процесса с радиационно-биологическим поражением животных.

3. Клинические признаки экспериментальной Ку- лихорадки у животных после внутрибрюшинного заражения коксиеллами Бернета I фазы (штаммы «Грита» - классический, «Барабинский» - эпизоотический, «Мордовия» - эпидемиологический) характеризовались лихорадкой интермитирующего типа с повышением температуры на 3-7, 9-10, 27-29, 55-57 сутки с угнетением общего состояния, снижением пищевой возбудимости и малоподвижностью, развитием серозно-катарального ринита и конъюнктивита, цианозом видимых слизистых оболочек.

4. Иммуноморфологические изменения у больных Ку- лихорадкой животных проявлялись снижением содержания Т- лимфоцитов в течение первых 30 суток после заражения, нормализацией их уровня к 60-му, увеличению числа этих клеток на 90-е сутки. При этом количество В-лимфоцитов возрастало к 10-м суткам и оставалась на достаточно высоком уровне до 120-х суток (срок наблюдения). Количество антителообразующих клеток в лимфоузлах и селезенке зараженных животных достигало максимального уровня на 15-е сутки.

472

5. У больных животных в органах и тканях развивались специфические, неспецифические и иммунопатологические процессы:

• специфические изменения характеризовались образованием в лимфоузлах эпителиоидноклеточных гранулем с гигантскими клетками Пирогова-Лангханса;

• неспецифические проявлялись гиперпластической, макрофагальной, плазмоклеточной реакциями в лимфоидных органах, повышением содержания в них гидролитических ферментов, увеличением синтеза РНК, в печени и миокарде - истощением резервного гликогена, в надпочечниках - расширением пучковой и сетчатой зон, в головном мозге - наличием периваскулярных лимфоидноклеточных инфильтратов;

• иммунопатологические характеризовались огрубением и фибротизацией ретикулярной стромы лимфоидных органов плазморрагией, эритродиапедезом, мукоидным и фибриноидным набуханием стенок сосудов микроциркуляторного русла, образованием лимфоидно-гистиоцитарных инфильтратов в легких, миокарде, печени, почках, а также дистрофическими изменениями паренхиматозных элементов этих органов, что в совокупности свидетельствовало о морфологическом проявлении аллергической реакции типа ГЗТ.

6. Фагоцитоз возбудителя лихорадки Ку макрофагами лимфоузлов, а также макрофагами и фибробластами селезенки у зараженных животных имел незавершенный характер с формированием различных размеров вакуолей в цитоплазме фагоцитов. При этом крупные и средние вакуоли содержали хорошо сохранившиеся, а мелкие - измененные фагоцитированные коксиеллы.

7. Ультраструктура макрофагов, лимфоцитов, плазмоцитов и ретикулярных клеток органов иммуногенеза у больных Ку- лихорадкой животных характеризовалась изменениями, свидетельствующими об усилении их функциональной активности.

8. Сравнительный анализ выявления риккетсиозного антигена в органах и тканях зараженных животных иммунофлюоресцентным методом и ИФА показал возможность его индикации в фагоцитах лимфоузлов, селезенки, печени, почек, легких, надпочечников, головного мозга с 3-х по 120-е сутки (срок наблюдения) с более высокой точностью индикации методом ИФА.

9. При воздействии гамма-облучения в дозах 1,86; 4,65; 6,51 Гр на овец у подопытных животных развивались клинико-морфологические признаки проявления острой лучевой болезни, соответствующее легкой, тяжелой и крайне тяжелой степени. При этом в органах иммуногенеза отмечали резкое повышение проницаемости капилляров, геморрагии, опустошение лимфоидной ткани, более ярко выраженное в зонах локализации Т-лимфоцитов; появление в синусах лимфоузлов розеткообразующих макрофагов с аутологичными эритроцитами, что свидетельствовало об аутоагрессии лучевого поражения; в соединительной ткани лимфоузлов происходило образование макрофагов, способных к фагоцитозу, фибробластов - к коллагенообразованию и бластных клеток, имеющих потенцию к бластомогенному росту.

10.У овец, зараженных коксиеллами Бернета и одновременном облучении их в дозе 1,86 Гр, вызывающую острую лучевую болезнь легкой степени, клинико-морфологические проявления болезни были подобны таковым при моноинфекции. Облучение животных в дозе 4,65 и 6,51 Гр и заражение коксиеллами Бернета приводило к отягощению как инфекционного процесса, так и лучевой болезни.

И.Апробация инактивированного антигена из коксиелл Бернета в качестве вакцины на лабораторных животных позволила выявить иммуногенные и реактогенные свойства этого препарата, а также выраженность иммуноморфологических и защитно - приспособительных реакций иммунизированных животных. Транспортный стресс, предшествующий

474 вакцинации, оказывал иммунодепрессивное влияние на организм морских свинок.

12.Экспериментальное заражение коксиеллами овец, спонтанно больных фасциолезом, проявлялось развитием тяжелых пато- и иммуномор-фологических изменений в органах и тканях, обусловленных суммацией иммунодепрессивных свойств фасциол и возбудителя Ку-лихорадки.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты практических исследований, сформулированные в диссертации научные положения вошли в следующие научно-технические документы:

• методические указания по лабораторной диагностике лихорадки Ку животных (Утв. ДВ МСХ и ПРФ 13.05.96 № 13-6-2/600);

• профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных (12, коксиеллез лихорадка Ку), санитарные правила СП 3.1.09596; ветеринарные правила ВП 13.3.1221-96;

• клеточный электрофорез при изучении инфекционной патологии сельскохозяйственных животных. Методическое пособие. Казань, 1992г.

2. Нами оформлены «Рекомендации по ветеринарно - санитарной экспертизе продуктов убоя животных при радиационных поражениях, осложненной лихорадкой Ку, и ускоренной дифференциации некоторых бактериальных инфекций» ( Утв. МО СССР в 1989 г.), получена приоритетная справка (№ 145-88 от 12. 04. 88г.) на рационализаторское предложение «Иммунофлуоресцентное выявление риккетсий Бернета в органах и тканях овец, больных лихорадкой Ку».

3. Результаты исследований, выводы и рекомендации следует использовать при разработке и совершенствовании технологии содержания сельскохозяйственных животных в регионах радиоактивного заражения,

475 неблагополучных по Ку- лихорадке. Полученные данные рекомендуем включить в учебный и научно- исследовательский процессы ВУЗов, НИИ радиобиологического профиля и при написании учебников, монографий и другой научно- методической литературы соответствующей тематики.