Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.05) на тему:Оценка двигательных функций тазовых конечностей у крыс с контузионной травмой спинного мозга

I la правах pvкопнем

Жарков Александр Владимирович

Оценка двигательных функций тазовых конечностей у крыс с контузионной травмой спинного мозга

16 1)0 05 - iseiepmiapnaa \нр\ргия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарпыч наук

Москва-2008

003172334

Работа выполнена на базе кафедры ветеринарной хирургии ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К И Скрябина» и лаборатории иммунохимии Государственного научного центра социальной и судебной психиатрии имени В П Сербского

Научный руководитечъ заслуженный ветеринарный врач РФ, доктор

биологических наук, профессор, Тимофеев Сергей Владимирович.

Официачьные оппоненты доктор ветеринарных наук, профессор,

Копенкии Евгений Павлович.

заслуженный деятель науки РФ и РТ доктор ветеринарных наук, профессор, Шакуров Мухаметфатих Шакурович.

Ведунья организация ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная

сельскохозяйственная академия»

Защита диссертации состоится 30 июня 2008 в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 220 042 02 при ФГОУ ВПО «Московская I осударственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К И Скрябина» (109472, Москва, ул Академика Скрябина, 23, тел 377-9383)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К И Скрябина»

Автореферат разослан 30 мая 2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета

Торба А.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Ак1у.1лытс1ь 1емы 13 последние годы в ветеринарных клиниках у вечичивается количество пациентов с вергебральиой патологией и поражениями спинного мозга

Самой частой причиной нарушения функции спинного мозга является вертебро-сшшальная травма В большинстве случаев такие животные подвергаются хирургическому лечению и длительной реабилитации, что требует значительных усичий, как со стороны ветеринарного специалиста, так и со стороны хозяев животного, при этом не всегда удается добиться потного восстановления утраченных функции Особую значимость эта проблема приобретает в условиях служебного собаководства, тк собака получившая травму спинного мозга, как правичо, подлежит выбраковке

В настоящее время хирургическое лечение спиначыюи травмы, как правило, заключается в декомпрессии спинною мозта, стабилизации поврежденных сегментов позвоночника и восстановлении ликвородинамики, позитивно отражается на восстановлении функций спинного мозга, однако у значительного количества больных животных не наблюдается уменьшения невролог ического дефицита

В этой связи назрела острая необходимость в разработке новых методических подходов к лечению травм спинного мозга, позволяющих не только восстанавливать опорно-двигательную функцию позвоночника, но и оказывать положительное влияние на процессы регенерации спинного мозга, что, вне всякого сомнения, повысит эффективность проводимых реконструктивно-восстановительных мероприятий

В настоящее время в мире на животных моделях выполняется большое количество экспериментальных работ, посвященных поиску оптимальной стратегии восстановления структуры и функции спинного мозга [Кегег, Р J , 2004, Епгтапп О и ег а1 , 2006], однако до сих пор не было получено убедительных результатов, позволяющих успешно решать эгу проблему в клинической медицине При всем многообразии имеющейся информации, ее систематизация и осмысление на настоящий момент представляет собой довольно сложную задачу

Наибольшую проблему представляет собой интерпретация полученных данных Оценка клинических случаев травмы спинного мозга в ветеринарной практике осложняется разнообразием механизмов ее нанесения (уровень повреждения спинного мозга, тип первичного повреждения нервной ткани), возраста и вида пациентов, времени, прошедшего с момента травмы,

а также применяемой терапии [Fehlings and Та tor, 1999], однако экспериментальные данные характеризуются еще большим многообразием, начиная с применяемой модели повреждения спинного мозга и заканчивая методами оценки посттравматических изменений и эффективности тон пли иной стратегии лечения травм спинного мозга

В этих условиях необходимо продолжать экспериментальную работу по поиску оптимального метода восстановления структуры и функции спинного мозга, ассимилируя накопленную к этому времени информацию по данной проблеме

Вместе с тем, для проведения полноценных доклинических испытаний подходов к лечению травмы спинного мозга и получения от них максимального объема информации необходимо усовершенствование меюдик проведения эксперимента, создание единых протоколов исследования [Reiei, 2004], коюрые позволили бы потуча1ь обьективные данные об эффективности того или иного метода лечения на различных уровнях структурной организации

Цель и задачи исследования. Цель исследования - разработать методы количественной оценки функционального состояния спинного мола при его травме у крыс и научно обосновать их использование в процессе экспериментальной iepannn травмы спинного мозга клеточными препаратами

Для реализации цели было необходимо решить следующие задачи

1 Воспроизвести классическую модель кошузионной травмы спинного мозга и изучить особенносш восстановления двигательных функции при контузии спинного мозга различной тяжести в динамике постоперационного периода

2 Теоретически обосновать необходимость объективной оценки двигательных функций тазовых конечностей, разработать нагрузочные тесты, позволяющие оценивать нарушения моторных функции (плавание, удержание на вращающемся стержне, прохождение сажающейся дорожки) в условиях контузионной травмы спинного мозга

3 Определить среднестатистические показатели при прохождении гестов «ротород», «плавание» и «дорожка» у интактных крыс, и крыс после контузионной травмы спинного мозга различной степени тяжести

4 Апробировать предчоженные способы объекшвнон оценки |равмы спинного мозга у крыс в условиях экспериментальном трансплантации клеточных препаратов

Научная новизна. Экспериментально обоснованы и впервые разработаны нагрузочные тесгы, позволяющие объективно оценивать нарушения моторных функций животных с контузионной травмой спинного мозга (плавание, удержание на вращающемся стержне, прочожчеиие сужающейся дорожки)

Впервые определены среднестатистические показатели при прохождении тестов «ротород», «плавание» и «дорожка» у ингакгных крыс, и крыс после контузионной травмы спинного мозга разчичпой степени тяжести Показана эффективность субарахноидальной фансплатации разтпчных клеточных препаратов у крыс с контузиеи спинного мозга средней степени тяжести

Научно-практнческое значение работы. Получены по вые оригинальные сведения о механизме развития и клиническом манифес 1ации травматической болезни спинного мозга у крыс в условиях экспериментальной контузии спинного мозга

Предложенную методику оценки двигательных функций тазовых конечностей у крыс целесообразно использовать при нсслетовании эффективности медикаментозно-хирургического лечения травматической болезни спинного мозга дня объективизации полученных экспериментальных данных Основные положения работы можно использовать в учебном процессе при чтении лекций н проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах ветеринарной хирургии высших учебных заведении, а гакже в научно-практической деятельности ветеринарных учреждений травматолого-ортопедического профиля и исследовательских лабораторий

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Разработанные методы тестирования позволяют дать объективную оценку состояния двигательных функций тазовых конечностей у крыс с травмой спинного мозга

2 Субарахноидальное введение клеточных культур эмбриональной нервной ткани и глиально-обонятельных. клеток позволяет добиться положительного эффекта у 30% животных с контузионной травмой спинного мозга средней степени тяжести равного 2-3 баллам по шкале

ВВВ, однако не вызывает общего улучшения двигательных функции тазовых конечностей

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на расширенном заседании кафедры ветеринарной хирургии, учебно-методическом совете факультета ветеринарной медицины и Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу молодых ученых в 2008 году

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 статей, в том числе 1 в журнале «Ветеринарная медицина», рекомендованном ВАК РФ

Структура и объем рабо!ы. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста и состоит введения, обзора литературы результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и практических рекомендаций Содержит 24 рисунка, 6 таблиц Библиографический указатель включает 171 научную публикацию, из них 33 отечественных и 138 иностранных источников

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1\1«1 гериалы п методы.

Для решения поставленных задач было проведено три серии экспериментов

В первой серии была полностью воспроизведена экспериментальная модель контузионной травмы спинного мозга у крыс (Giuner 1992) После травмы проводили тестирование животных по общепринятой системе оценки произвольных движений тазовых конечностей у крыс после травмы спинного мозга - шкала ВВВ (Basso D, Beattie М, and Biesnalian J 1995) Тестирование проводили на le, Зе и 7е сутки после травмы и, далее, еженедельно Полученные данные были обработаны статистическими методами

Во второй серии экспериментов для оценки состояния животных после контузии спинного мозга были разработаны и применены функциональные (нагрузочные) тесты - удержание крыс на вращающемся барабане (ротород), прохождение суживающейся дорожки и преодолевание бассейна

В третей серии экспериментов после контузии спинного мола проводили трансплантацию клеточных препаратов (эмбриональная нервная ткань, глиально-обонятельиые обкладочные клетки - GOEC, мезенхимальные стволовые клетки - MSC или фибробласты крыс) в с>барахноидалыюе

пространство. В послеоперационном периоде оценивали состояние крыс по системе ВВВ и применяли функциональные тесты.

При решении поставленных в работе задач использовали клинический, неврологический, морфологический и статистический методы исследования. Всех экспериментальных животных в третьей серии опытов подвергали хирургической операции по поводу трансплантации клеточных препаратов.

В эксперименте использовали самцов крыс породы \Vistar, массой 250-ЗООгр. Моделирование конту зионной травмы спинного мозга осуществлялось при помощи аппарата (импактора), полностью воспроизводящего парамефы и исходные характеристики оригинального устройства [Сгипег ,1Л. 1942] (Рис. 1). Рабочей частью аппарата явлется металлический стержень, весом Юг и диаметром 2мм с круглым сечением и плоским торцом, заключённый в стеклянную трубку, выставляемый в нужное положение с помощью мпкромашшулятора.

Рис. 1. Действующая модель аппарата для нанесения кошушошюй гравмы спинною моч! а "имиактор".

Моделирование копту знойной травмы

V

Рис 2. (кмций вил спинного мочга до контушонпон травмы.

1'ис.З. Фиксация позвоночники крысы в «импакторе». I

(

Дня проведения эксперимента но отработке модели контузионной травмы спинного мозга было использовано 49 самцов крыс линии Wistai, массой 250-300г Животных в случайном порядке распределили на группы с различной тяжестью повреждения спинного мозга Перед пемружепнем в наркоз животным инъецировали 0,1% атропин в дозе 0,1мл Анестезию проводти с помощью в/б введения смеси кетамина и седуксена (1 1) в дозе 0,3мл на ЮОг Затем, по общепринятой методике выполняли ламинэктомию на уровне Th9 (Рис 2 ), после чего позвоночник крысы жеако фиксирован! метаплическими клипсами за остистые отростки Th8 и ТЫО позвонков (Рис

3) и проводили контузию спинного мозга различной cieneiiii тяжести (Рис

4) В зависимости от высоты падения груза животные быт распределены в следующие группы - «6,5мм» «12,5мм», «20мм», «25мм» и «50мм»

Операционную рану ушивали послойно В качестве шовного Maiepnajia использовали атравматическую нить "фторэст" (2м) На кожу накладывали внутрикожныи шов После операции всем животным назначали иньекцию антибактериального препарата энрофлон (0,1мл, и/к) и в течение 2х часов выдерживали при температуре 30-32СС В послеоперационном периоде у животных с нарушением мочеиспускания механически опорожняли мочевой пузырь дважды в день до восстановления его функции

Тестирование животных «в открытом ноле» по системе ВВВ проводили на le и 7е сутки после операции и далее, еженедельно Для тестирования использовали круглый «ринг» диаметром 90см с высотой стенок 7см Животные наблюдались в течение 15 недель

Для морфологического кошроля были использованы животные из тру пи «12,5мм» и «25мм» С этой целью часть животных выводит из эксперимента на 5-е и 30-е сутки Перед взятием образцов спинного мозга животных наркотизировали и проводили транскардиальную перфузию буферным раствором (PBS), а затем 4% pací вором параформальдегпда по общепринятой методике После этого выделяли участок спинного мозга длиной 10мм, содержащий область контузии, и выдерживали его в течение 5 суток в 10% формалине Затем материал проводили по стандартной методике, формировали парафиновые блоки и изготавливали гистологические срезы, которые окрашивали на миелин, и определят количество сохраненного белого вещества в эпицентре повреждения Разработка и применение функциональных гестов.

На модели контузионной травмы спинного мозга были апробированы следующие функциональные (нагрузочные) тесгы - «ротород», «тавание» и

«суживающаяся дорожка» Тест «суживающаяся дорожка» заключается в прохождении крысой по дорожке длиной 165 см и шириной вначале 9 см, в конце - 3 см Дорожка располагается на уровне 120-130 см над полом, что создает у крыс мотивацию для ее преодоления Крысы с повреждением спинного мозга при продвижении вперед начинали оступаться (наступать тазовыми конечностями мимо дорожки) В зависимости от степени 1яжесш травмы спинного мозга в целом, и степени нарушения проприорецепцин в частности, крысы могли безошибочно проходить по дорожке различное расстояние Интакгные крысы преодолевали дорожку полностью

Тест «плавание» Для тестирования использовали прозрачный бассейн длиной 130 см и шириной 20 см У одного из бортиков расползалась горизонтальная площадка Перед проведением исследования животных приучали пересекать бассейн и выбираться на площадку, что у ингакгных крыс занимало 3-4 сек Крысы с повреждением спинного мозга выполняли эIу задачу медленнее, до 10-12 сек

Тест «ротород» Одним из показателей восстановления двигательных функций является время удерживания крысы на вращающемся барабане Барабан диаметром 7 см располагался на уровне 120-130 см над полом, что создавало у крыс мотивацию к удержанию на барабане максимально возможное время Скорость вращения регулировалась от Зх до 21 го об/сек

Для проведения исследования по определению эффективности и адекватности данных тестов при оценке двигательных функций тазовых конечностей после контузионнои травмы спинного мозга было создано 3 1руппы животных с легкой, средней и тяжелой степенью повреждения («6,5мм», «12,5мм» и «25мм», соответственно) по 7-9 животных в каждой Использовали также самцов крыс линии \Vistar, массой 250-300г Перед нанесением контузионнои травмы всех животных в течение Зх днеи приучали к выполнению описанных тестов Эксперимент по нанесению контузионнои травмы спинного мозга проводили по описанной выше методике Па 7й день послеоперационного периода и далее еженедельно в течение 8 недель проводили оценка состояния животных, по системе ВВВ и описанным тестам

Применение клеючнои терапии при КТСМ и апробация нагрузочных 1ееюв.

Для оценки эффективности клеточной трансплантации нами было выбрано несколько клеточных препаратов - нейральные стволовые клетки из эмбриональной нервной ткани крыс (КПЭНТ), глиально-обонятельпые

клетки крыс (вОЕС), аутолотичные стромальные (мезенхимадьные) стволовые клетки из жировой ткани крыс (МБС) и, в камее[ве контроля -фибробласты крыс В эксперименте было использовано 34 самца крыс породы \Vistar, массой 250-300г Всех животных перед проведением эксперимента в течение 3\ дней приучали к выполнению описанных выше нагрузочных тестов, далее выполняли контузионпую гравму спинною мозга средней тяжести (12,5мм) Затем голову крысы жестко фиксировали в стереотаксическом аппарате под утлом 80-90° к туловищу и с помощью микроманипулятора вводили иглу в большую цистерну мозга Посте эвакуации 25-30мкл ликвора осуществляли медленное вве тение (Юмкл/мин) того или иного клеточного препарата в количестве 2 мл н клеток в 50мкл среды (ЭМЕМ) Послеоперационное веление н тестирование животных проводили в соответствии с мего тиками эксперимента

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Моделирование контузионной травмы спинного мозга

Анализ результатов тестирования по шкале ВВВ показал, что увеличение высоты падения груза соотносится со степенью появляющеюся неврологического дефицита Различия между всеми группами достоверны (Р<0,05), кроме групп «20мм» и «12 5мм», с 1и по 5ю неделю, что говорит о надежности исиотьзуемого оборудования и стандартности воспроизводимой травмы спинного мозга Кривая средних значений группы «20мм» расположилась между кривыми групп «12,5мм» и «25мм» что дополнительно свидетельствует о воспроизводимости контузионной трав »ты спинного мозга, несмотря на то, что в некоторых точках достоверных различий с группой «12,5мм» не отмечали (рис 5) Было отмечено, что к 4й-5й неделе положительная динамика в восстановлении произвольных движений практически прекращалась, кривые оценки выходили па «плато» и в дальнейшем не происходило значительных изменений в степени неврологического дефицита, что может свидетельствовать об отсутствии процессов спонтанного восстановления структуры и функции спинною мозга Кроме того, морфологический анализ гистологических срезов в центральной зоне повреждения показал соответствие степени нарушении в двигательной сфере количеству белого вещества, сохранившемуся после травмы (табл 1 )

!н V 1 мед 2 нед 3 нед 4 нед 5 нед 0 мед 7 нед а кед 9 нед 10 11 12 13 день день нед нед нед нед

время после операции

— группа ¡: 1 V'. -группа 12 5 м грунт 20 мм

-группа I* мм

Рис 5 Динамика восстановления произвольных движении > крыс с кот^шошюн 1равмои спинного мои а рашичнои степени тялестн Оценка в баллах но шкале ВВВ р 0 05

Тай пни 1 ГЬющадь белого вещества на поперечных срезах спинною моз!а в тинешрс новреж ышя м,м2, р £ 0,05

Тяжесть КТСМ Средние величины (Хср±т) показателей нагрузочных тестов то и после КТСМ

предоп 5 сут 30 с> г

12 5мм 2,34 (±0,075) 2,21 (±0,089) 1,67 (±0,114)

25мм 2,34 (±0,075) 2,0 (±0,212) 1,48 (±0,164)

Разработка н применение функциональных тестов.

При анализе результатов применения теста «суживающаяся дорожка» было выявлено, что между показателями групп сравнения сущеспзуют значительные различия (рис 6) Динамика восстановления показателей соответствовала динамике изменения баллов по шкале ВВВ, т е улучшения в прохождении этого теста имели место до 4-5Й недели В дальнейшем значительного изменения показателей не наблюдали Различия между группой «25мм» и остальными группами являлись достоверными (Р<0 05) Группы «6,5мм» и «12,5мм» имели небольшую область перекрытия доверительных интервалов, однако средние значения по гр)ипам различались значительно

---- 1

I Г 1 1

— группа b -группа Р группа 2е'

t

3 мед 4 мед 5 нед

время после операции

6 нед 7 нед

Рис 6 Геи «с>живающаяся порожка» Динамика показаге 1еп > крьн. с кинпшопшш травмои СПШШ01 о мол а раличиои ст^пеш! тяжким р < 0 05

Тест «плавание» выявил значительные и достоверные различия между группой «25мм» и остальными группами (рис 7) Средние значения в I руинах «6,5мм» и «12,5» также отличались, однако имели область пересечения доверительных ишервалов Небольшая положительная динамика присутствовала до 6-7 недель

■ * IpyPf d ^ Эк Jt

-•«—труппа 1 t

г^упз, MM

время после ТСМ

Put 7 leu «плавание» Динамика показателей > крыс с конг> зиоинои трав\шн шинпот моимрагшчнои степени тяжей и м'сек р<005

При анализе результатов теста «ротород» было отмечено, что между показателями в группах сравнения существуют значительные различия (рис 8) В челом можно отметить, что некоторое улучшение показателей с течением времени присутствует в течении практически в течение всех 8 недель в то время как показатели по системе ВВВ почти не изменяются после 4-5 й недели Данный тест не позволяет выявлять отдельные качественные признаки или какие-либо тонкие движения, однако позво 1яет дать иитегратьную оценку функциональной активности тазовых конечностей животного и общей работоспособности организма

При анализе данных тестирования по шкале ВВВ было отмечено, что часть животных из групп с лег кой, а иногда и средней степенью повреждения СМ восстанавливаются почти до уровня предоперационных значении (8090%) Уровень восстановления двигательных функций по данным объективных 1естов был значительно ниже и чаще всего не превышал 60% от предоперационных значений даже в группах с легкой степенью травмы спинного мозга

200

гтредоп 1 нед 2 нед 3 нед 4 нед 5 цел 6 нед 7 нед В нед

время после операции

Рис 8 IееI «Роюрод» Динамика показателен у крыс с контузиопнои гравмои С1ШШ101 о мои а различной степени тяжести р < 0 05

Применение клеточной терапии при КТСМ и апробация нагрузочных тестов

При анализе результатов тестирования по шкале ВВВ было отмечено, что в группах с трансплантацией стволовых клеток из эмбриональной нервной ткани (группа «КГ1ЭНТ») и глиально-обонятельных клеток

(группа «йОЕС») произвольные движения восстановились несколько лучше, чем в группах с трансплантацией других клеточных препаратов и контрольных группах (рис 9) Однако достоверных различий выявить не удалось Вместе с тем, если проанализировать распределение животных в контрольных и опытных группах, можно отметить, что в группах «КПЭНТ» и «вОЕС» 30-35% животных гга 8й неделе наблюдения получили от 15 до 17 баллов по ВВВ, что в контрольных грмтах происходит не чаще, чем в 2-3% случаев

-ГРИША К11 I

- [ И , ГГ1Л I

|рлии И-Л

~1Р ГЛ I .

1 гч 2 нед

4 нел 5 кед 6 кед 7 нед

время после операции

Рис 9 Восстановление моторных функции > крыс с конт\ шошюн фшчои ишшио мсига после субарамютиолыюи гранит таигацми к тегочныч препаратов в биич по шкале ВВВ р < 0 05

Во всех остальных тесгах разницы между группами с трансплантацией клеточных препаратов и контрольными групп тми выявлено не было (рис 10,11,12) Подобные различия в результатах оценки эффективности лечения контузионной травмы спинною мола различной степени тяжести с помощью системы ВВВ и нагрузочных тестов может объясняться тем, что данные тесты дают более интегральные показатели состояния организма животного, а также являются значительно более объективными методами, чем шкала ВВВ

Сравнительная оценка восстановления двигательных нарушении после экспериментальной контузионной травмы спинного мозга с номощыо шкалы «ВВВ» и нагрузочных тестов показала, что последние сущест венно уточняют характер патологических изменений в двигательной сфере С

одной стороны, нагрузочные тесты относительно раньше выявтяюг феномен прекращения самовосстановления нарушенных функций, с тру I ой - они позволяют оценить интегральные адаптационные возможное!и организма, уровни восстановления которых после контузионной травмы спинного мозга оказались существенно ниже, чем таковые д !я воссгановпения произвольных движении, оцениваемых по шкале ВВВ

i

-ГРУППА í'T;

-ГРУППА GОЕГ

rpinnA м:: . -rPvnnA KOHTr'Vlb

3 нрд 4 нед 5 мед

время после операции

Pili 10 I ее i «плавание» Динамика показателей у крыс с коту ¡ионном ipir umiiikiio мозга поете транипашашш различных клеточных препаратов мни О 05

МНИ р

-fF/nn» KViH -TFynru СОЕС ГР-.ППа М<5С ГРУППА KOHTPOj

npejori 1 нед 2 мед 3 нед

4 нед 5 нед 6 нед 7 нед ß неа

время после операции

Рис 11 Тес1 «с\живаюшаяся дорожка» Динамика показателей v крыс с конт\ тонной травмой спинного мозга после трансплантации различных клеточныч препаратв см р <0

200

180

1d0

140

« 1Л>

| 100 ч

I 80

U0 40 20 0

предоп 1 нед 2 нед 3 нед 4 мед 5 нед 6 нед 7 нед 8 кед

время после трансплантации \

_,________________ I

fut 12 Illt «ротород» Динамика показателен ) крыс с koiiivмюшюи ipimuiii шинного Moira после траншлашации различных к ictomhlix npenapaum сек р (I

Оценка только произвольных движений по шкале ВВВ не отражает в полной мере уровень функционального двигательного дефицита у крыс с контузионной травмой спинного мозга Выявленные нами особенносш динамики и степени восстановления в двшагельной сфере после коту ¡пи спинного мозга у крыс с помощью предложенных нагрузочных тестов дают возможность, помимо увеличения объективности исследований, оценивай, эффективность экспериментальной терапии травм спинного мозга с учеши верификации адаптационных возможностей ор!анизма в целом Пооеци'е обстоятельство особенно важно для обоснования передачи новых средств лечения ТСМ в клиническую практику

ВЫВОДЫ

1 Двигательные функции у крыс с контузионной травмой спинною мола не восстанавливаются до предоперационного уровня (не более, чем па 65% при легкой степени тяжести контузии - 6,5мм)

2 Частичное самопроизвольное восстановление двигательных фу нкщш после контузионнои травмы спинного моз[а у крыс происходит в течение 5 недель, в дальнейшем достоверной динамики их восстановления не наблюдается

3 Скорость плавания иитактных крыс и крыс после контузионной трачмы спинного мозга соотносится с тяжестью травмы и к момету завершения восстановления двигательных функций составляет

- интакгные крысы - 0,4±0,02 м/с

- легкая КТСМ - 0,26±0,007 м/с

- средняя КТСМ - 0,25±0,008 м/с

- тяжелая КТСМ - 0,16±0,004 м/с

4 Время удержания на ротороде интактных крыс и крыс после контузионной травмы спинного мозга соответствует оепеин повреждения спинного мозга и к моменту завершения восстановлен»'! двигательных функций составляет

- интактные крысы - 180±10 сек,

- легкая КТСМ - 37±6,6 сек,

- средняя КТСМ - 15±1,6 сек,

- тяжелая КТСМ - 2,5±1,1 сек,

5 Расстояние, безошибочно проходимое крысами с контузионной травмой спинного мозга по «дорожке» длиной 165см, шириной виачаче 9см, в конце - Зсм, соответствует тяжести травмы и к момснтх завершения восстановления двигательных функций составляет

- иптактные крысы - 165 см

-легкая КТСМ - 98± 15,7 см,

- средняя КТСМ - 72,5±7,4 см,

- тяжелая КТСМ - 28,75±4,5 см

6 Предложенные нагрузочные тесты («ротород», «плавание» «суживающаяся дорожка») позволяют дать объективна ю (котичествениую) оценку двигательной функции тазовых конечное 1сн у крыс после повреждения спинного мозга и могут быть использованы для подтверждения эффективности методов лечения травмы спиши» о мозта

7 Субарахпопдальное введение клеточных культур эмбриональном нервной ткани и глиалыю-обонятельных клеток позволяет доби I ься положтечьного эффекта у 30% животных с контузионной травмой спинного мозга средней степени тяжести равного 2-3 баллам по шкале ВВВ, однако не вызывает общего улучшения двигательных функции тазовых конечностей

СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

- Для лопучения достоверных результатов исследования пере 1 проведением контузии спинного мозга животных необходимо пртчли- к выполнению тестов не менее, чем в течение Зх дней

- Тест «суживающаяся дорожка» целесообразно проводин \ животных с легкой и средней степенью контузии спинного мозга, юи.ко после появления ша!ательных движений, что соответствует 9 ба ыам по шкале ВВВ

- Предложенную методику оценки двигатетьных функций I а ¡оных конечностей у крыс целесообразно использовать при исследовании эффективности экспериментального лечения травматической боте¡пи спинного мозга

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Жарков, А В Применение миелофафии при подозрении на повреж генпе спинного мозга у собак / Жарков АВ, Тимофеев С В, Козлов 11 \ Ветеринарный консультант - 2003 - №23-24 (71) - С 26-27

2 Жарков, А В Разработка способа определения направления вве тения трл/спедикулярных винтов при чрескостном внутреннем остеоинпезе гр) допоясничного отдела позвоночника у собак / Жарков А В , Акимов Л В , Козлов НА // Сборник статей молодых ученых / МГАВМиБ им К И Скрябина - 2006 - С 18-20

3 Жарков, А В Гопографо-анатомическое обоснование введ.нпч гранспедикулярных винтов в грудоноясничном отделе позвоночника } июак / Жарков А В , Акимов А В , Козлов НА// Сборник статей молодых \ ченых / МГАВМиБ им К И Скрябина - 2006 - С 20-22

4 Жарков, А В Наш опыт декомпрессионных вмешательств при повреждениях и заболеваниях позвоночника в грудопоясипчном отде 1е V собак // Сборник статей молодых ученых / МГАВМиБ им К И Скрябина -2006 -С 23-26

5 Жарков, А В Тимофеев С В Применение нагрузочных тестов ня объективной оценки двигательных нарушений после контузионной травмы

спинного мозга у крыс / Жарков Л В Тимофеев С В // Научно-практическин лурнап «Ветеринарная медицина» - 2007 - №4 - С 29-30 6 Жарков, А В Особенности течения травматической болезни спинпою мозга у животных Подходы к лечению / Жарков А В // Сборник сьпеи молодых у ченых / МГАВМиБ им К И Скрябина - 2008

Автор благодарит руководителя Отдела биологической психиатрии Л Г У I НЦ социальной и судебной психиатрии им ВП Сербского Росздравл академика РАМН, профессора Чехонина В П и кандидата медицинских наук, старшею научного сотрудника лаборатории иммунохимии Лебедева С Р- ;а научно-техническую и методическую помощь при выполнении экспериментов

Подп в печ 28 05 2008 Формат 60x90/16 Объем 1,0 п л

Бумага офисная Печать цифровая

Тираж 100 экз Заказ № 453

ГОУВПО «Государственный университет управления» Издательский дом ГОУВПО «ГУУ»

109542, Москва, Рязанский проспект, 99, Учебный корпус, ауд 106 Тел /факс (495) 371-95-10, e-mail dinc@guuru www guu ru