Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Особенности онтогенеза нервного аппарата тонкого кишечника свиней при действии ростовых факторов

Г I и им

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи УДК 636.4.61'

МАЛАШКО Виктор Викторович

ОСОБЕННОСТИ ОНТОГЕНЕЗА НЕРВНОГО АППАРАТА ТОНКОГО КИШЕЧНИКА СВИНЕЙ ПРИ ДЕЙСТВИИ РОСТОВЫХ ФАКТОРОВ

Специальность: 16.00.02 — патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соисигнме учено» степени доктора ветеринарных наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 1093

Работа выполнена на иафедре физиологии, биотехнологии и ветеринарии Белорусской сельскохозяйственной академии и в лаборатории функциональной морфологии и физиологии нейрона Института физиологии им. И. П. Павлова Российской Академии наук (г. Санкт-Петербург),

Научный консультант — доктор внелогических наук Сотников О. С

Официальные оппоненты: академик АЕНРФ, член-корреспондент РАН, доктор биологических наук, профессор Ноздрачев А. Д.; доктор ветеринарных наук, профессор Ткачев А. А.; доктор биологических наук, профессор Соколова М. А.

Ведущее учреждение — Казанский ветеринарный институт им. Н. Э. Баумана.

Защита диссертации состоится «' /» /О 1993 г.

в 13.00 часов на заседании Специализированного совета Д 120.20.01 при Санкт-Петербургском ветеринарном институте.

Адрес института' ,/¡0^984, Санкт-Петербург, Московский проспект, д. 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского ветеринарного института.

Автореферат разослан « № 1993 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, доцент

И. В. Никишина

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

I.I.„Актуальность темы.. В обеспечении естественного порога резистентности,сникения стрессовых нагрузок при отъеме поросят, профилактики желудочно-кишечных болезней и стимуляции роста животных особая роль отводится биологически активным веществам. В нивотноводстве используется более 220 кормовых добавок. Важное место среди них занимают антибиотики неыедицинс-кого назначения (авопарция.бацитращщ.кормогризин.спираыицин и др.),вита:,шнн,аминокислоты,вторичные продукты микробиологического производства,которые применяются в качестве ростовых факторов при выращивания и откорме животных (Н.И.Леонов,1969; Н.В. Редько,1974; П.Н.Котуранов и др.,1981; Н.Г.Макарцев и др.,1984; В.Е.Наследников,Д984; Й.Г.Пивняк и др.,1984; Т.Н.Ракова,1985; А.Хенниг'и др.,1986; К.М.Солнцев,I987;wahlstrom,I98I;weies, 1983; Katz,I985; Dierick.1986; Fuller, 1990).^

' Решение практических задач производства базируется на знании механизма биологического действия ростостимуляторов. Остается неясным,каким образом действуют ростовые факторы за пре -делами желудочно-кишечного тракта,а такяе непосредственно в клетке. Предположения исходят из того,что ишнродозы стимуляторов вмешиваются в обмен веществ в клетке,активизируют функцию некоторых энзимов,принимают участие в процессах анаболизма,по- . вышают синтез балков и жиров (Н.Г.Мельник и др.,I976;ostertag, 1983; Pflug, 1985; Heitzman,I986).

Развитие биотехнологии позволило в последние года получать ряд незаменимых аминокислот. Наряду с этим возникла проблема -утилизации вторичных продуктов производства аминокислот. С 1985 года появилась новая группа биологически активных веществ -кормоамины. Кормоашны стали использоваться в качестве протеиновой добавки при выращивании и откорме свиней (В.П. Саенко,1989; М.В.Шадак а др.,1992).

До настоящего времени не проводились комплексные исследо-вания.посвященные изучении влияния ростостимуляторов на нервную систему тонкого кишечника свиней в подсосный период, на до-ращивании и откорме,при энтеральной патологии. Среди систем, обеспечивающих, рост и развитие животных,важная роль принадлежит органам пищеварения и их иннервационному аппарату. Нейро-гистологами были показаны основные закономерности строения ин-

3

трал:уральных сплетений пищеварительного тракта в эмбриогенезе и постнатальном онтогенезе (Д.П.Тельцов,1970; А.П.Амвросьев, 1972; Н.Г.Колосов И сотр.,1962; 1968; 1972; Н.А.Ееребцов,1982;

A.Д.Ноздрачев и сотр.,1986; IS67; И.А.Булыгин и сотр.,1973; 1974; 1981; Gerahon, 1983; Scheuraan u.a., 1984; Gabella, 1986; Stach u.a. ,1987; Gabriel,1989; Csoknya, 1990).

Отсутствуют сведения о морфогенезе нейронов при использовании антибиотиков немедацинского назначения,кормоаминов,витаминов,корыового препарата микробиологического каротина. Не изучалась реактивная перестройка нейронов в период отъеыа поросят, при заболевании гастроэнтеритом к на фоне комбинированного применения ыикробно-витаыишшх препаратов.

Для исследования клеточных факторов и механизмов регенерации, пластичности нервной система используют метод культивирования и трансплантации (Е.И.Чумасов,1981; 0.и.Сотников,1985;

B.П.Калюнов;19ЬЗ). Подобный перспективный метод не использовался для изучения влияния ростовых факторов на нейроны в культуре тканп.

В связи с этим актуальны;,1 является исследование особенностей структурных изменений и адаптивных преобразований нейронов интрачуральных ганглиев тонкого кишечника свиней с целью разработки теоретически предпосылок и практических мероприятий по рациональному и целенаправленному использованию отдельных видов и ноыглекса ростостимулирутацих средств в' свиноводстве.

1.2._Цель работы.. Изучить особенности онтогенеза нервного аппарата тонкого кишечника свиней при действии ростовых факторов.

Дяя решения указанной проблема-были поставлены следующие задачи:

1. Изучить динамику морфогенеза интрамурального нервного аппарата тонкого кишечника у интактных свиней в постнатальном онтогенезе; •

2. Исследовать влияние кормогрязина и кормоаминов на нервный аппарат тонкого кишечника в период доращивания и от-хорма свиней. Проанализировать возможность прямого воздействия гризина на нейроны в модельных экспериментах in vitro ;

3. Выявить особенности формирования нервных структур тонкого" кишечника поросят-сосунов при применении кормоамина-Л; . 4

4. Определить адаптационные преобразования нервных эле- . ментов в пред- л послеотъемккй периоды к на фоне комбинированного введения концентрата кормогриззна.кормоакина-Л.кормогри-зина-40 и кормового препарата микробиологического каротина;

5. Сравнить реакции нейронов при заболевании поросят гастроэнтеритом и при лечении комплексным мшсробно-витамшшым препаратом; " •

6. Оценить зоотехнические и ветеринарные показатели продуктивности свиней и экономическую эффективность при использовании ростостимуляторов.

1.3. „Наузкая^овязна^ I. Получены новые данные о закономерностях л кинетике морфогенеза отдельных нейронов,ганглиев и сплетений тонкой кишки у интактных свиней в постнатальном онтогенезе;

2. Впервые продемонстрировано полярное расположение на разных полюсах ганглиев функционально различных нейронов. Такое состояние получило название "поляризация клеток". Это позволило показать,что нейриты клеток I типа Догеля преимущественно распространяются в оральном направлении. Выявлены региональные отличия между нейронами шшечно-кишечного и подслизис-того сплетений по активности гидролитических и окислительно -восстановительных ферментов;

3. Проанализирован процесс сянаптогенеза в штрамураль-ных ганглиях. Впервые прослежена модификация мембранных кон -тактов и реактивная подвижность нервных структур в процессе дифференцировки нейронов;

4. Установлено,что наибольшей пластичностью обладают си-налтический аппарат,дендриты.цитоскелет и мембраны нейронов. Зти структуры могут служить основой для оценки действия экзо-к эндогенных веществ. Сформулировано положение о том,что ин-трамуральные ганглии являйте.-. удобным и доступным объектом для скрининга биологически активных веществ;

5. Получены приоритетные данные при исследовании влияния ростовых веществ на нервный аппарат тонкого кишечника свиней

в разные периоды постнатального онтогенеза. Впервые дана рациональная оценка компенсаторно-приспособительной реакции нёй-ронов ,в ходе применения эрготропных средств. Важными- факторами нейрогенеза является морфогенетическая пластичность,способ-

5 ■

ствующая развивающимся и зрелым нейронам к адаптивным преобразованиям на введение стимулирующих препаратов;

6. Впервые показано,что нейроны I и II типов Догеля имеют индивидуальную специфическую реакцию при действии эрготро-пиков. Расширен диапазон морфологических критериев изменений нейронов при введении в организм свиней препаратов; •

7. Выявлено два периода в ганглиозацни нервных структур тонкой кишки при действии розтсстшуляторов. Исследована реакция нейронов на введение кормоаминоэ. Преимущественное действие препаратов направлено на коррекцию белкового обмена,что позволяет нейронам в экстремальных ситуациях кивотдых (отъем, смена рациона,вемероприятия) функционировать в стабильном ренине. Применение кормоашна-Л поросятам-сосукаы ускоряет сроки становления дефинитивного состояния энтесальных ганглиев;

8. Разработана схема превентивной обработки поросят для мкниыизацял последствий послеотьеиного стресса на основе переменного применения препаратов. Впервые сформулировано положение о том,что при более раннем отъеме поросят реабилитационный период протекает длительнее;

9. Показаны морфологические признаки пластической реорганизации нервного аппарата при заболевании поросят гастроэнтеритом. Впервые вскрыт двухфазный характер деятельности холин-и адренергической систем,что коррелирует с течением патологического процесса. Апробирован комплексный препарат для профилактики и лечения заболеваний тонкого кишечника поросят.

1.4._Тео£етическая_значимость. Экспериментальные исследования об особенностях онтогенеза нервного аппарата тонкого кишечника свиней,позволяют показать некоторые ноше закономерности дифференцировки нейронов,которые имеют ваккое значение для понимания процессов морфогенеза,служат теоретической основой ддя рационального использования стимулирующих средств в свиноводстве.

Положения,раскрывавдие соотношение и роль клеточных,тканевых и алиментарных факторов в развитии интрамуралыюй нервной системы,существенны не только для объяснений процесса нейроонтогенеза.но и для понимания этиологии структурных нарушений в нервной системе. В работе раскрыта общность ряда "морфогенетичсских процессов развития нервных структур,что имеет определенное значении для теоретического обоснования и раз-6

работки новых приемов к решению проблемы управления ростом и развитием организма, базирующихся на использовании стимулирующих средств.

' 1.5.практическая ценность,. Работа посвящена решению ванной проблемы современного свиноводства - разработке способов и приемов повышения продуктивности етвотных,снижению последствий послеотъемного стресса.профилактшш и лечения энтераль-ных заболеваний поросят. Введение в рацион свиней ростостиму-ляторов обеспечивает увеличение твой массы на 8-12,9/5 по отношению к контролю,переваримость сухого вещества повышается на 12,9/5,органического вещества - на 7,%,сырого протеина -на 6,5%,сырой клетчатки - на 55р. Переменное использование • препаратов в пред- и послеотъеыный периоды позволяет повысить сохранность поросят,снизить заболеваемость. Пршлененение комплексного препарата на основе концентрата кормогризина,аскорбиновой кислоты и рутина способствует снижению заболеваемости поросят гастроэнтеритом на 13,4-18,7$.

1.6._ДолояениАвыносимые_на задиту¿Новые данные о морфогенезе нейронов интрамуральных ганглиев тонкого кишечника свиней в постнатальном онтогенезе.

2. Ре зультатц корфогпстохкдлческого,ультраструктурного анализов и сведения об адаптивной перестройке нервного аппарата тонкого кишечника под воздействием ростовых факторов

в подсосный период поросят,при доращиваяии и откорме свиней.

3. Представления об изменениях в энтеральной нервной системе в послеотьемный период и коррекция структурных изменений нейронов при комбинированном использовании препаратов.

4. Оценка морфологических изменений нейронов на фоне действия комплексного микробно-витаминного препарата при заболевании поросят гастроэнтеритом.

1.7._Апробация_лисседта1щонного материала. Материалы диссертации были представлены и обсуждены на: IX Всесоюзном съезде анатомов,гистологов и эмбриологов (Минск,1981); У1 съезде Белорусского физиологического общества (Гродно,1983); Всесоюзной научной конференции "Экологические аспекты функциональной морфологии в животноводстве (Витебск,1984); I съезде анатомов, гистологов и этлбриологов Белоруссии (Минск, 1984); Всесоюзной научно-технической конференции молодых ученых и специалистов

7

сельского хозяйства, "Актуальные вопросы профилактики и лечения болезней•сельскохозяйственных животных" (М.,1985); Всесоюзной научной конференции "Проблемы диагностики,терапии и профилактики незаразных болезней сельскохозяйственных животных в промышленном животноводстве" (Воронеж,1986); Всесоюзной научной конференции "Проблемы морфологии животных в условиях промышленного животноводства" (Ульяновск,1987); ХУ съезде Всесоюзного физиологического общества (Кишинев, 1987); УН съезде Белорусского физиологического общества (Витебск,1987); Научной конференции "Ферментные препараты в ветеринарии и животноводстве" (Вильнюс,1989); Международной конференции "Биологические основы высокой продуктивности животных" (Боровск,1990); Республиканской научно-производственной конференции "Профилактика и мары борьбы с болезнями молодняка сельскохозяйственных животных" (Витебск,1990); Научно-производственной конференции,посвященной 150-летаю образования Белорусской сельскохозяйственной академии (Горки, 1990); УШ съезде Белорусского физиологического общества (Минск,199I); II съезде анатомов,гистологов и эмбриологов (Минск,1991); Научно-практической конференции Западного отделения ВАСХНИЛ "Биотехнология и воспроизводство в животноводстве" (Горки,1991); III Республиканской научно-технической конференции "Применение электронной микроскопии в науке и технике" (Минск,1991); Всесоюзной научной конференции "Использование физических и биологических факторов в ветеринарии и животноводстве" (Витебск,1991);.Международной научной конференции "Новые знания о кормовых добавках в кормлении свиней и птицы" (Каунас, 1993); Ежегодно на научно-производственных конференциях Белорусской сельскохозяйственной академии о 1983 года.

Материалы диссертации докладывались на Координационном совещании Совета Главка вузов Госагропрома СССР (Брянск,1989); Заседании Московского Общества испытателей природа (М.,1990); Совмостном заседании Санкт-Петербургского Общестра естествоиспытателей, Общества анатомов,гистологов,эмбриологов и Физиологического общества (Санкт-Петербург,1992); Результаты диссертационной работы были представлены на XXII Всемирном ветеринарном конгрессе (Австралия,1983).

1.8. Jljöjnqtagiig. По материалам диссертации опубликовано 29 работ.. 8

1.9._Вн9йре1ше_рвэультатов_работы. I. Инструкция по применению антибиотиков при выращивании и откорме сельскохозяйственных животных (Всесоюзная инструкция, утверждена зам.министра сельского хозяйства СССР. Н.,1985).

2. Вторичные продукты безотходной биотехнологии производства аминокислот в рационах свиней и морфологическая оценка их действия (Рекомендации,утверждены зам.председателя Могилевского облагропрома. Могилев,1990).

3. Технические условия (ТУ): Кормоамин-0 (ТУ 2740-90); Кормоамин-Из+Тр (ТУ 2741-90); Кормоамин-Тр (ТУ 2744-90).

4. Способ профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта и стимуляция роста поросят в послеотъемный период (Рацпредложение Й5 от 8.XII.1989 г.). Внедрено в племсовхозе им. Чкалова Горецного района Могилевской области.

5. Способ получения кормовой добавки из отходов производства аминокислот (A.c. №1405774).

6. Комбинированная морфометрическая сетка для подсчета ор-ганелл различной плотности и размеров в клетке на электронограм-мах (Рацпредложение №1/185 от 10.01.1990 г.). Внедрено на кафедре физиологии,биотехнологии и ветеринарии Белорусской сельскохозяйственной академии.

7. Научные разработки по использовании ростостимуляторов в свиноводстве были представлены на I и II Международных сельскохозяйственных ярмарках в Белоруссии "Терра-92" и "Терра-93".

Материалы диссертации используются в учебном процессе Белорусской сельскохозяйственной академии,Белоцерковском,Брянском, Гродненском,Таджикском сельскохозяйственных институтах,Витебском, Омском,Санкт-Петербургском ветеринарных институтах,Государственном Аграрном Университете Республики Молдова,что подтверждено Главным управлением аграрного образования Министерства сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь (справка от 5 шля 1993 года).

Тема диссертации утверждена Межвузовским координационные Советом по морфологии животных при Главном управлении высших учебных заведений Государственной комиссии Совета Министров СССР по продовольствию а закупкам (протокол Л2 от 6.У1.1989 г.), является самостоятельным разделом Республиканской научно-технической программы за Ш2.03.04.

I.ICK Объем £иссерт£цш1. Объем текста диссертации - 325 страниц машинописного текста и состоит из введения,обзора литературы, описания объекта и методов исследований,результатов исследований и их обсуждения, заключения,выводов и рекомендаций для производства. В состав диссертации входят 42 таблицы,17 схем,24 графика,а таксе 405 микрофотографий,объединенных в 156 рисунков (Приложение к диссертации - альбом иллюстраций). Библиографический указатель включает 376 работ отечественных и 400 работ зарубежных исследователей.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Научно-производственные опыты проводились в условиях товарных свиноводческих ферм и на промышленных комплексах на свиньях крупной белой породы. Формирование групп осуществлялось по принципу групп-аналогов с учетом известного происхождения,возраста, упитанност i,пола,физиологического состояния,живой массы и условий содержания в предварительный период. В зависимости от цели и задач опытов возраст животных составлял от новорожден-ности до 8 месяцев. В качестве ростовых,антистрессовых и лечебно-профилактических средств изучались кормогризин-40,концентрат кормогризина,активностью 50 тыс кормоашны,препарат микробиологического каротина СКПМК).аскорбиновая кислота,рутин и их различные сочетания.

Для морфологического.анализа всего использовано в контроле 304,в опыте - 265 животных. В возрасте до 2 месяцев было исследовано 265 поросят,с 2 до 4 месяцев - 1?4,с 4 до 6 месяцев -74 и с 6 до 8 месяцев - 56 животных. Объектом изучения' служил тонкий кишечник и его нервный аппарат. С учетом и особенностью развития тонкого кишечника в постнатальном онтогенезе (A.B. Квасницкий,1946; К.Б.Свечин.1956; Е.З.Ткачев,1981; Л.В.Давлето-Ba,I985;Dunaford, 1989) исследовались образцы на участках соответствующих 1-1,3$ (12-перстная кишка),6-7,5$ (проксимальный отдел тощей кишки),30-38£ (средний отдел тощей кишки),60-70$ (дистальный отд^л тощей кишки) и 95-100$ (подвздошная кишка) длине тонкого кишечника.

Оценивали продуктивные показатели свиней согласно ОСТа 10 3-86 "Система стандартов в свиноводства" (M..I9B8). Химический ^биологический анализы продуктов убоя,а также кормоаминов проводились в лабораториях зооанализа опытной станции Белорус- • 10

ской сельхозакадемии,БелНИИЖ,в лаборатории биохимии растений Всесоюзного селекционно-генетического института (ВСТИ),во Всесоюзном научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии. Для стандартизации отдельных гистологических процедур и технических процессов использовали собственные модификации гистологических методак,конструкции и приспособления (B.B.lvidr лашко. Гистологические и ыорфометрические методы исследования (учебное пособие). Изд-во БСХА.Горки,1993).

Использованы следующие методики: нейрогистологические метода импрегнации серебром по Билыповскому-Грос.в модификации Б.И.Лаврентьева,Рассказовой,Кампосу.Гольдки,Гольджи-Кокса. Для импрегнации серебром использовали пленочные препарата тонкого кишечника,изготовленные по собственной методике (Рацпредложение №2/97 от Б.02.82 г.). Клеточная архитектоника изучалсь методами Ниссля.в модификации И.В.Викторова (I969) я В.В.Малашно (Рацпредложение £6/88 от 20.05.81 г.). Состояние белкового обмена в нейронах контролировалось методами Браше.галлоционин-хромовыми квасцами по Эйнарсону. Для получеши обзорной информации применяли окраску гематоксилин-эозином.

Энзимологические метода применяли в качестве тестов общего и специфического обмена в тканях. Сукцинатдегидрогеназу (СДГ, КФ 1.3.99.I) определяли по методу Нахласа.лактатдегирогеназу (ЛДГ.КФ I.I.I.27) - по методу Гесса,Скарпели и Пирсу (Э.Шрс, 1962),малатдегидрогеназу (МДГ.КФ I.I.I.37) - по методу Нахласа, Уокера,Зелигмана,ацетилхолинэстеразу (АХЭ.КФ 3.1.1.7) - по методу Карновского-Рутс в модификации Эль-Бадави и Шенка,щелочную фосфатазу (ЩФ,КФ 3.1.I.I) - по методу Гомори-Такамачу,кислую фосфатазу (КФ.КФ 3.1.3.2) - по методу Гомори. Образцы тканей для гистохимических исследований фиксировали в жидком азоте в сосуде Дыоара по собственной методике (Рацпредложения №27 от 11.12.80 г. и Ä7/89 от 20.05.81 г.).

Для электронной микроскопии ткани фиксировали 5#-гшм раствором глютарового альдегида,приготовленном на О,IM фосфатном буфере (pH 7,2-7,4). В последующем материал обрабатывался 2$-ным раствором четырехокиси осмия.контрастировался уранил ацетатом и заключался в аралдит. Дополнительно срезы окрашивали цитратом свинца и просматривали' под микроскопами IEM-I00B и IEM-ЮОСХ (Япония). Количественную оценку активности ферментов и концентрацию РНК проводили с помощью сканирующего микроскопа

II

фотометра MPv -2 (фирмы Leltz ,ФРГ). Для проведения морфомет-рического и стереологического анализов руководствовались правилами, изложенными в руководствах по морфометрии (Л.М.Непомнящих и др.,I9B6; Г.Г.Автандилов,1990). Для рационализации подсчета органелл нейронов применит прибор для анализа колоний бактерий ЛСБ ТУ 64-I-2I0I-72.

В культуре нервной ткани изучено действие гризина. Исследовались ганглии пограничного симпатического ствола,шейные и поясничные чувствительные узлы 10-,12- и 15-суточных эмбрионов кур. Всего в экспериментах использовано 4Ü ганглиев в контроле и 32 ганглия,стимулированных раствором гризина..

Исследования документированы микрофотографиями,полученные с электронограмм, с помощью МФН-12, микроскопа МШ-II и разово-контрастного микроскопа (фирмы JI0MÓ). Цифровые данные обработаны на ЭВМ,EC-I020 и ДВК-3.

3. РЕЗУЛЬТАТУ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Развитие структурных компонентов интраыуральных ганглиев

У новорожденных поросят мышечно-кишечное сплетение тонкого кишечника представлено узкопетлистой сетью. Нервные тяжи имеют градиенты толщины от 5-10 мкм до 13-22 мкм,размер ганглиев находится в пределах 120-135 мкм.удлиненной формы - 140-168 мкм. Подслизиотои сплетение состоит из внутреннего подслизистого сплетения (сплетение Мейсснера) .находящееся под lamina muscuia-rie mucosae и наружного подслизистого сплетения (сплетение Ша-Садаша),расположенное ближе к циркулярному мышечному слою. В сплетении Мейсснера содержится больше узлов,чем в сплетении Ша-бадаша. Но морфологическим параметрам довольно трудно провести четкую типизацию нейронов на I и II типы Догеля. В связи со слабой степенью развития отростков зона их ветвления ограничена, аксональные и дендритные сплетения рыхлые. По, уровню даф-ференцировки нейронов мышечно-кишечное и подслизистое сплете-йия отличаются между собой. Подслизистое сплетение содержит больше нейробластов.

Выявлена взаимосвязь между формой ганглиев и количеством нейробластов. Эта овязь наблюдается в ганглиях кольцевидной •форму. Размер подобных узлов составляет 287,80 х 200,40 мкм. Расстояние между ганглиями доходит до 307,05 мкм. Коэффициент' 12

корреляции между размером кольцевидных ганглиев и количеством нейробластов в подслизистом сплетении равняется г =0,5 ^ 0,02, в мышечно-кишечном сплетении г =0,3 - 0,04.

У месячных поросят в интрамуралымх сплетениях выявляются 4 группы клеток: малодифференцироваяные,мелкие,средние и крупные нейроны. Узлы приобретают продолговато-овальную форму. От ганглиев отходит 2-3 нервных тяжа, в результате реорганизации геометрии'узлов.нейроны формируют гнездные группировки. Исходя из этого мы выделяем такое понятие,как "поляризация" клеток. Под поляризацией понимается - способность нейронов I и II типов Догеля образовывать агрегаты клеток с четко выраженной полярностью. Общий признак поляризационных отношений состоит в том,что мультиполярные нейроны I типа сосредотачиваются на одном полюсе,а уни-,би- и псевдоуниполярные клетки - на противоположном участке ганглия. По топография,концентрации и взаимному отношению нейронов друг к другу выделено 8 вариантов поляризационных отношений. Сплетения тонкой кишки свиней в этом плане являются удобной моделью для описания особенностей топографического положения нейронов (БЪасЪ.КШ).

У поросят 2-месячного возраста по мере развития тонкой кишки и употреблении грубого корма иятрамуральные сплетения принимают дефинитивный вид,где хорошо различаются все типы нейронов.

Краткая характеристика_ней^онов. Нейроны I типа Догеля весьма полиморфные образования,где встречаются грушевидные,округлые, овальные с целым рядом переходных форм. Клетки преимущественно размещаются по периферии и в оральных участках ганглиев. Часть нейритов также ориентирована в оральном направлении. Темпы развития нейронов на протяжении 2-месячного возраста неодинаковы. С момента новорожденное™ до 30-дневного возраста диаметр перикариона увеличивается на 25,7%,в последующие 30 дней - на 31,4!? (Р<0,01). Размер ядер возрастает на 7-8$.

Популяция нейронов II типа Догеля,состоящая из уни-,би-, псевдоуниполярных и мультиполярных клеток характеризуется следующими признаками: I) нейроны формируют компактные скопления; 2) нейриты образуют круговые (наряду с вертикальными) пути во вторичных тяжах мышечно-кишечного сплетения. Диаметр клеточного тела за 30-даевный период увеличивается на 23,3$ (Р <0,05),в последующий месяц - на 76,5$ (Р<0,01),ядер соответственно -на 24,А% и 32,9$ (Р <0,05).

На протяжении 2-4-месячного возраста происходит дальнейшее формирование основных типов нейронов и элементов цитоархи-тектоники. К конструктивным перестройкам относятся: увеличение протяженности дендритных и аксонных ветвей,степени ветвления отростков,перемещение узлов ветвления с проксимальных на более дистальные участки,появление на дендритах и нейрите конусов роста. Наблюдается закономерность,чем больше размер нейронов, тем крупнее узлы и соответственно снижается плотность расположения клеток. Узлы с высокой плотностью нейронов имеют меньшие размеры и ближе расположены друг к другу. Выделено два типа ганглиев - с малонасыщенными и насыщенными нервными элементами. Всего классифицировано 6 групп ганглиев по количеству нейронов. В подслизистом сплетении наибольший процент приходится на узлы с содержанием от 1-5 (64,4$) и до 6-12 (26,6$) нейронов,в мы-шечно-кшшчном сплетении 18,8$ ганглиев содержат 13-17 и 41,9$-6-12 нейронов. Благодаря интенсивному спраутингу нейритов система локальных связей становится более пластичной.

В динамике развития нервных отростков по степени гипер-лластичности выделяется два периода: I период с I- до 60-дневного возраста и II период с 4- до 6-месячного возраста. В эти периода наиболее выражены темпы удлинения дендритов,увеличения основных нервных стволов и ветвей. На всем протяжении исследований в интрамуралышх сплетениях сохраняется "резервный пул" нейробластоз.

3.2. Дуняшка ультраструктура развивающихся нейронов

У новорожденных поросят высокой функциональной активностью обладает аппарат Гольдки,состоящий из уплощенных цистерн, мелких«пузырьков и вакуолей. У ыалодифференцированных нейронов эндоплазматическая сеть развита слабо. Большая часть нервных волокон не покрыта глией. "Оголенность" нейритов создает условия для электрического взаимодействия,формирования макмембран-ных контактов. Ганглии характеризуются несформированностью значительного числа синапсов. Размер межклеточной щели составляет 83-110 км.что свидетельствует о невысокой степени зрелости нервных элементов.

По истечении 30 дней после рождения поросят отмечается .повышенное взаимодействие нервных структур с окружающими тканями. Значительные инвагинации мембран инициированы зкзоцитоз-14

ними везикулами. Появляются нервные терминала с содержанием крупных пузырьков,имеющих 100-120 нм в диаметре. Концентрация светлых синаптических везикул на I мкм^ аксонного окончания возрастает на 46,558.гранулярных пузырьков - на 58,(Р<0,01).

В 2-месячном возрасте повышенное скопление светлых оинап-тическйх пузырьков отмечается на границе с интерстициалыпа. пространством. Увеличивается площадь специализации мембран, возрастает электронная плотность и толщина пре- и постсинапти-ческой мембран. Концентрация гранулярных синаптических везикул возрастает на ИЗ,(Р <0,05).светлых пузырьков остается на прежном уровне.

Динамика синтезирующего белок аппарата сомы нейронов характеризуется следующими показателями: концентрация рибосом на мембранах эндоплазматической сети нейронов у 1-дневных поросят составляет 13,84 ± 2,30,свободных рибосом - 20,36 - 1,37 на I мкм^ площади цитоплазмы,у 30-дневных поросят соответственно концентрация рибосом возрастает на 72,8$ (Р<0,01) и на 28,5^ (Р<0,05) ,у 60-даевных животных - на 63,4£ и 47$ (Р<0,01).

3.3. Развитие нервных сплетений при использовании стимуляторов роста

Изучено влияние кормогризина и кормоаминов на структуру нервного аппарата тонкой кишки свиней о 2- до 8-месячного возраста. Использование кормогризина в течение двух месяцев активизирует генераторные процессы в интрамуральных ганглиях. На перикарионах появляется большое количество типиковидных пара-подиальных микроотростков. Это хорошо заметно у клеток II типа Догеля. Количество нейронов,имеющих признаки клеток I типа Догеля увеличивается на 45%, возрастает на '7% число нейронов неопределенной (атипичной) формы. У клеток I типа количество первичных,вторичных и третичных отростков превышает контроль в среднем на 66,6$ (табл.1), О'ъем нейронов I типа увеличивается на 35,II типа Догеля - на 46,4/? (Р<0,01) по сравнению с контролем.

Установлена отрицательная корреляционная связь между объемом нейронов I типа и количеством дендритов (г =-0,3 - 0,05), для клеток II типа Догеля - положительная связь ( г=0,4 ± 0,03). Плотность нейронов превышает контроль на 6,8$. Более плотные узлы рассматриваются,как свидетельство их большей зрелости.

15

Таблица I

Морфометрическая характеристика нейронов мышечно-кишеч-ного сплетения при 2-месячном применении кормогризина

Показатели

Количество первичных дендритов Количество вторичных дендритов Количество третичных дендритов Общая длина декдритов.мкм Площадь,занимаемая дендритами,

ХХР<0,05;ХР<0,01

Опыт

4,72 ± 2,05 6,67 ± 2,36х 1,65 ± 1,12 ' 3,23 ± х.ео^ 0,48 * 0,32 1,31 ± 0,45 123,33 £ 76,86 324,23 ± 120,07х

2834,07±1456,55 6479,87±1239,87х

; Контроль

После 4-меслчного применения кормогризина наблюдается уменьшение ростового потенциала нейронов. У нейронов I типа Догеля отмечается лсчезновение дендритических ламелл. В результате ретракции отростков тела нейронов становятся бугристыми, извилистыми. Структура сплетений более разнообразна и менее геометрична. На фоне гипертрофированных нейронов появляются мелкие клетки с нежными нитевидными отросткаш.

В возрасте 8 месяцев (использование препарата в течение 6 месяцев) увеличивается число варикозностей.в местах ветвлений отростков формируются натеки нейроплазмы. В результате гипертрофии тел,отростков и повышенной рамификации изменяется фактор формы нейронов. В контроле он составляет 0,75-0,83,в опыте - 0,70-0,73. Это указывает на то,что тела нейронов становятся неправильными по форме и соотношение мембранных поверхностей увеличивается по отношению к цитоплазме.

В эксперименте после 4-месячного' введения препарата содержание мелких клеток возрастает до 37, Ъ%,против 275? в возрасте 4 месяцев. Картина сплетений напоминает таковую у поросят 1-2-месячного возраста. Под воздействием кормогризина наступает "вторая волна" дофференцировки нейробластов. Структура вещества Ниссля динамично меняется в зависимости от длительности применения препарата. Хроматолитические явления в опыте наиболее выражены в возрасте 6-8 месяцев.

Действие кормоашнов направлено на повышение синтеза белка. В нейронах ыышечно-кишечного сплетения концентрация РНК выше на 33,3-48!?,в подслизистом сплетении - на 28,1-72,9$ (Р <0,0-0 16

по отношению к контролю. Максимальное содержание РНК в нейронах мьгшечно-кишечного сплетения установлено в возрасте 6 месяцев, в подслизистом сплетении - в 3-4-месячном возрасте. Отмечается устойчивая гипертрофия нейронов. Объем нейронов I типа Догеля на протяжении 3-8 месяцев превышал контроль на 5,6-38,7$. II типа - на 46,6-71,6$ (Р<0,05). Средняя площадь поперечного сечения отростков нейронов I типа возрастает на 27,7-50,5$,II типа Догеля - на 21,5-44,5? (Р <0,01). Соответствующим образом формируется архитектоника ганглиев в условиях воздействия кор-моаминов (табл.2). .

Таблица 2

Морфометрические показатели ганглиев мышечно-кишечного сплетения при 2-месячном использовании кормоаминов

Показатели

Контроль

Опыт

Плотность нейронов по бры-

■2 187,71 ± 34,39 216,21 ± 36,27х

жеечному краю на х ым Размеры ганглиев,мкм

Толщина продольных нервных пучков,мкм

от 124 х 68 до 427 х 209

от 145 х 95 до 626 х 248

Толщина поперечных нервных пучков,мкм

54,34 - 10,15 75,92 ± 12,21**

107,21 ± 17,04 118,10 ± 14,90

ХР<0,05; ХХР<0,01_

Плотность нейронов на I мм2 превышает контроль на 15,2$,

размеры ганглиев увеличиваются на 63,4-74%,толщина нервных

пучков - на 39,7$. Наблюдается увеличение клеток глии. В сред-

нем на I нейрон в контроле приходится 3-4,в опыте - 6-8 глио-

цитов. Перисоматические процессы направлены на активизацию до-

полнительного роста отростков.

3.4. Динамика ультраструктуры нейронов при стимуляции

роста животных

В перше два месяца применения кормогризина увеличивается степень адгезии нейронных и глпальных мембран с формированием глио-нейрональных межклеточных контактов. Глиоцчты образуют повышенное число отростков,конкурирующих за контакт с аксолеммой. Активизация метаболических процессов проявляется через эндо- и экзоцитоз. На границе с интерстициём на 15-27,9% возрастает ко-

17

личество терминалей,функционирующих по открытому (свободному) типу,т.е. не изолированы глией от базальной мембраны. Нервные окончания содержат большею концентрацию светлых синаптических везикул возле базальной мембраны. В отличие от окончаний закрытого типа, данные структуры больпз подвержены влиянию химизма среды или биологически активных веществ,поступающих в интерсти-циалькое пространство из разных источников. Возможен и другой вариант,когда биологически активные вещества (ацетилхолин,пептиды, АТФ и др.) из открытых окончаний диффундируют в интерстиций, тем самым оказывают стимулирующее влияние на другие клетки организма по принципу дистантных медиаторов.

После 4-месячного применения кормогризина цитоплазма нейронов становится просветленной. Изменяется структура примембран-кых белков. На внешней стороне мембраны формируются субмембранные уплотнения,достигающие толщины 150-200 км. По состоянию внутренней структуры выделяются отростки со светлым и темным профилями. В светлых отростках встречаются миелиноподобныэ тела и митохондрии с темным матринсом. В контроле различаются три вида аксонов по содержанию синаптических пузырьков. I вид заполнен светлыми (агранудярными) везикулами 30-50 нм в диаметре,2 вид содержит смешанную популяцию везикул: светлые мелкие (85%) и мелкие гранулярные (45-80 нм в. диаметре) - 15% и 3 вид встречается реже и представлен набором трех категорий пузырьков: светлыми - 50$,ме.жими гранулярными - 30$ и крупными (100-180 нм в диаметре) плотными везикулами - 20$.

В эксперименте добавляются еще три варианта сочетаний синаптических везикул: 4 вид аксонных бутонов заполнен мелкими светлыми,мелкими гранулярными и крупными плотными (200-300 нм в диаметре) везикулами,5 вид терминалей содержит только мелкие гранулярные и крупные плотные пузырьки и 6 вид нервных окончаний заполнен лишь плотными крупными везикулами. В условиях стимуляции наступает более ускоренное созревшие медиаторных систем, что сопровождается повышением концентрации синаптическх пузырьков. Динамично изменяется аппарат Гольдаи. В зависимости от преобладания везикул или цистерн нами выделено два типа: везикулярный и цистеральный. Везикулярный тип характерен для нейронов молодых животных,а также при применении ростовых веществ в'ц&рше два месяца.

В 8-месячном возрасте установлено,что аксо-соматические си-

напсы на нейронах с явлениями хроматолиза содержат нэзначи- 5 тельное количество синалтических пузырьков,которые часто агглютинируют и образуют около цресиналтической мембраны осмио-фильные участки. По отношению к 6-месячному возрасту происходит уменьшение размеров межклеточного пространства в 1,5-2,7 раза. Существенное сужение отмечается в местах интенсивного эндо- и экзоцитоза. В динамике изменения концентрации светлых синалтических везикул как в контроле,так и в опыте отмечался параллельный процесс. В контроле содержание везикул колебалось с 35,I2i3,78 в 3-месячном возрасте до 86,12^3,56 на I мкм2 площади нервного окончания в возраст^ 8 месяцев. В опыте эти показатели превышали контроль на 18,7-44,255 (Р>0,01). Количество гранулярных синалтических пузырьков в контроле составляло 26,66i2,07 - 37,91^2,74,в опыте - 36,80±1,81 - 51,63±2,66 на I мкм2 площади нейрита. Везикулярная плотность в процессе онтогенеза варьирует в широких пределах..В настоящее время отсутствует однозначная теоретическая интерпретация функционального состояния аксоннон термлнали по параметру плотности везикул. Литературные данные (Л.Н.Дъячкова,1971; Т.А.Брвгина, I975;Weibel, 1990) и собственные наблюдения позволяют рассматривать высокую концентрацию везикул,как свидетельство значительной потенциальной эффективности синаптического действия.

Изучение действия гризина in vitro показало,что эксплантаты, выращенные под влиянием препарата выглядят иначе,чем в контроле. Ареал выселения глии меньше в 2-3 раза,тогда как зона роста нейритов больше. Со стороны нейритов наблюдается бурный рост' и ветвление. Несмбтря на обилие ветвей,что повышает взаимодействие различных нейритов,эксплантаты,обработанные гризином не обнаруживают тенденции к формированию сплетений. Можно думать,что гризин действует на наружную клеточную мембрану и влияет на процессы морфогенеза. -

Использование кормоашнов с 2- до 4-месячного возраста приводит к увеличению числа митохондрий в нейронах. Высокая активность присуще алтарату Гольджи. Он имеет тесно сгруппированные цистерны по 4-7 штук с узкими просветами. Возле них концентрируется до 30-57 секреторных йезикул. Возрастает разнообразив авезгяулярных контактов. Формируются серийные дасио-сомы. Подобную связь ш обозначили как "каскадный тип " контактов. Появление десмосомных контактов обычно связа-

19

но о активацией клетки (Д.Теппермен и др. ,1989; Р1пСоуа, 1985).

После 2-мссячного применения кормоаминов,главным образом, увеличивается содержание светлых синаптических везикул. Их количество на одну аксоннуто терминаль доходит до 150-205 пузырьков. Б условиях активации метаболической функции нейроноз отмечается сильное развитие цитоскелетных структур (шкротрубо-чек и нейрофиламентов). В результате применения кормоаминов наблюдается активное формирование везикул как в цитоплазме ней-. ронов.так и в отростках.

На протяжении 4-6-месячного использования препаратов мок-но наблюдать две группы нейронов по насыщенности цитоплазмы органеллаыи. Первая группа содержит обилие полирибосоп,крупные митохондрии,ядро имеет светлую кариоплазму. Ядерная оболочка сопровождается небольшими инвагинациями. Вторая группа нейронов характеризуется меньшим содержанием полирибосом,отмечается периферический хроматолиз. Ядро тлеет глубокие инвагинации. Свободные нервные окончания .граничащие с интерсткцкалышм пространством образуют значительные уплотнения в области контакта. В нейрошло возрастает число нервных отростков,заполненных плотными мелкими (40-60 нм в диаметре) и средней величины !.би— 90 нм в диаметре) везикулами. Максимальное количество их зарегистрировано з возрасте 8 месяцев.

Содержание светлых синаптических пузырьков в возрасте 4 месяцев выше контроля на 82,9$,гранулярных везикул - на 48$ (Р<0,01). Концентрация микротрубочек на I мим*" площади нервного отростка в 4-месячн.ом возрасте превышает контроль на 48,2$ (Р <0,05),в 6 и 8 месяцев - на 23$ и 25$.(Р <0,05). Концентрация свободных рибосом на I мкм2 цитоплазмы нейрона на протяжении 6-месячного использования кормоаминов возрастает на 12,720,9$ (Р<0,05),фиксированных рибосом к мембранам эндоплазыа-тической сети - на 33,2-44,7$ (Р<0,01) по отношению к контролю.

3.4. Морфология нервного аппарата тонкого кишечника поросят-сосунов при использовании кормоамина-Л

Кор1.5оамш1-Л вводился в качестве подкормки поросятам с 12-дневного возраста. В опыте формирование нервных сплетений протекает активнее. Насыщение нервных узлов нейронами болео обильное. В 30-дневном возрасте объем ¡кйронов I типа Догеля превы-20

шает контроль на 31,8$,в 60-дневном возрасте - на 23,6?,II тиО па Догеля соответственно - на 42,5$ и 13,555 (Р<0,05). Активный рост и рамификация отростков приводит к образованию плотного нейрошиш. Количество ответвлений нервных отростков в опыте выше на 50-63,6% (Р<0,05). Площадь поперечного сечения денд-ритов нейронов 1 типа Догеля в первые 30 дней применения пре- • парата выше контроля в 2 раза,эквивалентная площадь отростков, приходящаяся на один иейрон-в 3 раза. Показатели для клеток II типа Догеля равнялись соответственно' - 60,2? и 68,6? (Р<0,05).

Активность СДГ до ЗО-дневного возраста в нейронах не отличалась от контроля,а в 60 дней выше контроля на 40,3?,активность КФ на протяжении двух месяцев увеличивается на 19,2-21,9? (Р <0,05). Разница в активности Щф между опытом и контролем составила 57,5? (Р<0,01). Выявленные морфологические и гистохимические особенности свидетельствуют о высокой пластичности нейронов на воздействие кормоамина.

При ультраструктурном исследовании установлено,что гранулярная эндоплазматическая сеть представлена длинными параллельными мембранами,последние плотно покрыты рибосомами. Концентрация рибосом на мембранах сети выие контроля на 35,9? (Р<0,011 В первые месяцы постнатального онтогенеза происходит активное формирование цитоскелетных структур нейрона и отростков. Увеличение концентрации микротрубочек заметно между 30 и 60 днями. В контроле в этот период на I мкм2 площади сечения нервного отростка приходится 45,06*6,14 - 53,34*9,58,в опыте - 58,36*13,5967,10*13,78 микротрубочек. Иод влиянием кормоамина увеличивается число десыосомоподобкых контактов. В основном это контакты "каскадного" типа,которые связывают между собой до 4-6 нервных отростков. Подобный факт,возможно,служит для перемещения медиатора трансглиально.

Постнатальное развитие в первые месяцы жизни животных сопровождается определенной физиологической гибелью нейронов,как естественный процесс (В.Н.Калюнов,1986). В опыте нейронные структуры также подвержены дегенерации,однако их было на 25,831,3? (Р<0,05) меньше по сравнению с контролем. На заключительном этапе применения кормоамина активизируется деятельность симпатической нервной системы. Появляются нервные терминали с высокой концентрацией гранулярных синаптических везикул,что превышает контроль на 18,4? СР <0,05).

3.5. Изменение нервного аппарата тонкого кишечщпса поросят в период отъемного стресса и при комбинированном применении кормогризина, КПМК, кормоамина-Л и концентрата кормогризина Сопоставляя картину морфологических изменений нейронов при отъеме поросят в 45 и 60 дней установлено,что при более раннем отъеме увеличивается количество реактивно-деструктивных нейронов. Изменения клеток неодинаковы как по длине кишечника, так и между шшечно-кишечным и подслизистым сплетениями. В под-слизистом сплетении число неизмененных нейронов при отъеме в 45 дней составляет 60-79,4$,в мышечно-кишечном сплетении - 70,3-80,6$,при 60-дневном отъеме поросят соответственно - 70,5-80,4$ а 78,8-90$. Отмечается активная ретракция отростков. Часть клеток из мультиполярных превращается в би- и униполярные,и равно-отростчатае нейроны. При отъеме поросят в 45 дней реабилитационный период для интрамуральных ганглиев длится 15-20 дней, при отъеме в 60 дней - 10-15 пней.

Испытана комбинация препаратов,состоящая из кормогризина, кормоамина,концентрата кормогризина,активностью 50 тыс ЕД и КПЖ для снижения последствий послеотъемного стресса. Препараты вводились в рацион животных за 10 дней до отъема й в течение 30 дней после отъема. Из 5 испытанных комбинаций наиболее эффективными оказались сочетания: кормогризин-40 + кормоамин-1 и концентрат кормогризина + КПМК + кормогризин-40.

При определении высоты ворсинок выявлено,что на 5 день после отъема поросят их высота в контроле уменьшается на 20,9$, в опытах - на 9,3-11,4$ (Р<0,05),на 10 день соответственно -10,9$ и 6,3-9$ (Р<0,05). Значительно уменьшается толщина глико-каликсного слоя,что повышает доступ микробов к мембране энтеро-цитов. ,В цитоплазме нейронов наступает гипертрофия митохондрий, матрикс их просветляется,часть крист разрушается. Цистерны гранулярной эндоплазыатической сети укорачиваются,одновременно наступает пролиферация гладкой эндоплазматической сети. На 1015 день увеличивается количество лизосом,образуются сложные мембранные тела,цистерны аппарата Гольдки расширены. В отростках возрастает содержание секреторных везикул. Регистрируется два типа дегенерации нервных отростков - темный и светлый. Чаще дегенерация по темному типу свойственна аксонкш терминалям 22

с содержанием светлых и гранулярных синаптических пузырьков. -Концентрация микротрубочек на I мкм2 площади сечения нервных отростков снижается на 12,8-22$ (Р <0,05). В опытных группах этот показатель не превышает 2,7-4,6$. На 5 день-посла отъема поросят концентрация светлых синаптических везикул в контроле увеличивается на 14,(Р<0,05) по отношении к опыту. Однако на 10 сутки их содержание уменьшается на 23,3-27,0$ (Р<0,05). Активность АХЭ в нейронах мышечно-кишечиого оплетения на 5 день в контроле превышает опытные данные на 26,3%,в подолизистом сплетении - на 26,6/1 (Р<0,05). На 10 день наступает снижение энзиматической активности соответственно на 31$ и 38,5$. В экспериментальных условиях отмечается медленный процесс нарастания активности АХЭ.

На 30 день после отъема поросят в опытах увеличивается содержание крупных плотных везикул - депо нейропептидов. Подобных нервных терминалей было по сравнению о контролем больше на 21,8-35,7$ (Р<0,05). Соединения пептидной природа,относимые к так называемым "рсгуляторным пептидам" обладают вазоактивны-ш свойствами,тем сашм активизируют кровоонабжение и метаболические процессы (Н.К.Климов и др. ,1991; Guth et al., I9W).

Использование препаратов оказывает стабилизирующий эффект на активность дегидрогеназ. В нейронах шиечно-кишечного и под-слизистого сплетений на 5-10 день после отъема поросят спад активности СДГ не превышал 5-6,6$,ЛДГ - 6,7-7,2% и ВДГ - 7,1-9,9$,в контроле соответственно - СДГ - 23,1-13$,ЛДГ - 14-30$ и ВДГ - II,8-27,7$ (Р<0,05).

Таким образом,выявленные'морфофункциональные закономерности, подкрепленные математическим анализом,углубляют представления о механизме действия ростостимуляторов.а также свидетельствуют о возможности регуляции структурно-метаболических процессов в период отъема поросят.

3.6. Морфология нервного аппарата, тонкого кишечника при заболевании поросят гастроэнтеритом и лечении комплексным микробно-витаминшм препаратом

Для изучения интрамурального нервного аппарата в условиях патологии исследовались поросят на 1-2,3-4 и 5 дни болезни. Перестройки нейронов начинаются с набухания тел н отростков. Ней-ропиль сплетений становится рыхлым. Наблюдается активизация

23

деятельности ядра- и ядрышка,резко выражена эктопия ядра. На-раотают явления хроматолиза. По истечении 3 дней болезни в области перикарионов нейронов образуются тонкие,длинные побеги филоподий. В результате компенсаторной реакции увеличивается число ыультиполярных нейронов. Отмечается отслоение капсул от нейронов,появляются клетки-тени. Нейроны подслизистого сплетения более подвержены деструктивным изменениями,чем мышечно-кишечного сплетения (табл.3).

Таблица 3

Распределение нейронов по характеру морфологических изменений при заболевании поросят гастроэнтеритом,?

Морфологические

Ыышечно-кишечное сплетение

Подслизистое сплетение

нейронов Дни б о л е з к и

|1-2 1 3-4 : 5 : 1—2 1 3-4 : 5

Нормальные 86,6 74.2 80,5 77,2 54,2 48,9

Вакуолизированные 2.1 3,3 2,8 3,8 7,8 4,5

Дегенерированные 1.3 4,6 5,9 4,5 10,7 19,3

Атрофированные 0,6 1.3 2,8 3,2 7,7 12,0

Погибшие 0.1 0,8 0,8 0,3 3,8 4.3

При электронномикроскопическом исследовании на 2 день болезни в цитоплазме нейронов выявлены гипертрофированные митохондрии .цистерны аппарата Гольджи находятся в суженном состоянии. Эндоплазматическая сеть сохраняет функциональную мобильность. В последующие дай цистерны сети расширяются и напоминают вакуоли. Их ширина увеличивается на ВС,9?,при одновременном снижении плотности рибосом. Увеличение количества нейронов с рыхлой зернистой эндоплазматической сетью и просветление за счет -уменьшения полисом и расширения цистерн сети свидетельствует о сильной функциональной активации,приводящей к истощению их белоксинтезирующего аппарата.

На 4-5 день в связи с нарушением водного баланса цитоплазма отростков -приобретает просветленный вид. Наступает деформация Мембран и синаптических везикул. Признаком реактивной перестройки является повышенная адгезия хлопьевидного материала на мембранах аксонов и глиоцитов. Активизируются процессы эндо- и экзоцитоза. Интерстициальное пространство умень-

шается в размере в 2,3-3,8 раза по сравнению о началом забо- ° лования. В первые дни болезни активность холинергических синапсов возрастает. Аналогичная тенденция наблюдается со. сторо-ных адренергической системы. Синапсы на -4-5 день болезни поросят характеризуются усилением контраста нервных профилей,увеличением примембранных светлых пространств,разрушением мембран.

На 1-2 день болезни поросят количество нейронов с высокой степенью активности АХЭ достигает 17,4$,на 4-5 день - 8-8,2$. Происходит резкое истощение запасов нейромедаатора.что коррелирует с тяжестью патологического процесса. По отношению к началу болезни на 5 день активность СДГ скитается на 54,7$, ЛДГ - на 32,6$ и № - на 24,7$, Активность Щ в эндотелии • кровеносных сосудов уменьшается на 38,8$,в капсулах нейронов-на 52$, Активность КФ на 5 день развития патологического процесса падает на 88,1$. Активность гидролаз обычно связывают с замедлением расщепления белков,жиров.и углеводов. У поросят с признаками диареи щелочная фосфатаза на 50$ менее активна, чем у клинически здоровых поросят (Н.Г.Середа,1979;кга1^Е^, 1986). За счет ретракции глиалышх отростков наблюдается повышенное образование межклеточных контактов. На 3 день болезни наступает массовый отрыв микроворсинок от мембраны знтероцитов.

С лечебной и профилактической целью был испытан комплексный препарат (табл.4).

Таблица 4 Схема применения препарата

Мероприятие

Кратность и

длительность

применения

■¡Концентрат :Аскорби~ ;кормогрази-:новая : на, актавно-:кислота, ;стью 50 тыс:мг/гол. :ЕД,мг/кг :живой массы:

мг/гол.

Профилактика Лечение

I раз в течение

цень в > дней

2 раза в день в течение 4-5 Дней

20 40

50 50

50 50

При лечении поросят нейроны сохраняют тонкие,нежные и обильно ветвящиеся отростки. Хроматодитичесхие процессы захватывают не более 7,5-8,6$ нейронов. В подслизистом сплетений количество нормальных нейронов выше контроля на 14,4-58,7$,

25

в мышечно-кшечном сплетении - на 7,3-18,2$ (P<0,Q5). Цистерны зерниотой эндоплазматической соти более плотные,концентрация рибосом на мембранах уменьшается на 6,в контроле - на 63,55». Синоптический аппарат не подвержен резким функциональным изменениям. На протяжении 5 суток наблюдений количество нейронов,имеющих высокую активность ЛХЭ равнялось 12,8-35,9$. На 2 донь лечения поросят комплексным препаратом микроворсинки утолщаются,плотно прилегают друг к другу. Сверху покрыты олоем гликокалпкса.

Таким образом,препарат обладает антидаарейным и протекторным действием,способствует стабилизации белкового синтеза в нейронах. Сохраняется выоокий уровень деятельности холинерги-чеокой и адренергнческой систем. Сохранение гликокаликсного слоя обеспечивает эффективную сепарацию мелких и крупных молекул, тем самым снижает поток антигенов и токсических продуктов в организм поросят.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

До сих пор точный механизм действия ростостимуляторов на организм животных полностью не раскрыт. На основании собственных результатов и литературных данных (В.М.Субботин,1976; Т. Юшкевич,1985; DeЪтап, 1984; Hedde, 1986; SolomonI988;Ketyi, 1990) ростовой эффект проявляется через следующие фазы:

I 2 а з а - стабилизация_кшечной микрокоды. Обладая широким спектром действия антибиотики немедицинского назначения (кормогризин) задерживают рост грамположитсльных и грамотрица-' тельных бактерий,Д-стрептококков,грибов. В результате формируется стабильная кишечная экосистема » создается аутогенная защита организма, состоящая из полезных микробов. Облигатная микрофлора противостоит заселению кишечника патогенными микробами. При гибели микробов из их клеточных стенок освобождаются скелетоны,состоящие из миколевой кисловуиукопептида (Vanamyrn, 1984). Скелетоны,обладая иммуностимулирующим действием,усиливают специфический иммунитет и восстанавливают клеточный иммунитет,актквизируют'макрофагальнне клетки и неспеццшичеакую антиинфекционную резистентность (Azuma,1987).

11_ф_а_з_а_- децепторная. Действие корыогрлзина направлено на "очищение" поверхности мембран ворсинок,что создаст возможность и повышает доступность' препарата к рецепторам энтерецп-26, .. v..-.. ■ ь "■

тов. По химическому составу действующее вещество гризин поли-о пептидной природы,относится'к группе стрептотрвдиновых антибиотиков. В связи с тем,что аминогликозидные антибиотики обладают мембранотропным действием,очевидно,наиболее вероятной областью присоединения являются фосфолипиды фосфорной кислоты. Гризин соединяется с рецепторами,образует лиганд-роцепторный комплекс в области пресинаптической мембраны. Установлено,что область действия полипептидов является преслнаптическая мембрана холи-нергического синапса (Р1вкегеа,1983). На уровне синапса гризин оказывает потенцирующий эффект на синтез и выделение ацетилхо-лина. Повышение деятельности холиноргической системы активизирует моторную функцию кишечника,усиливает секрецию,стимулирует гликолиз, и энтероцитах увеличивается транспорт На+,С1~,Н+' .изменяются адгезивше свойства мембран (КайапоГ? ,1974;Сгипве1;, . 1975). Холинергическая систе1.1а оказывает активизирующее действие на адренс-ргичоскую систему, так как в пусковых и адалтацион-гшх механизмах ведущая роль принадлежит холинореактивным системам.

III (Ь а з а - поступление Ощтернал1зац11я)_гоизина_внутрь клетки. Гризин вступает в соединение с рецепторами на поверхности цитолемш и поступает внутрь клетки. Этот процесс связан с активным эндоцитозом,формированием развитого цитоскелета и многочисленных гладких и клатриновых везикул,межклеточных контактов, увеличением адгезии субмембрашшх белков.

Сопоставляя фазность действия ростостиыуляторов и продуктивные показатели свиней наш установлено,что в I и II фазы наблюдаются максимальные изменения "живой массы,энергии роста,снижение расхода корма,заболеваемости и падежа животных.

ВЫВОДЫ

I. На разных этапах постнатальиого онтогенеза реализуется комплекс морфогенетических процессов,который включает дифферен-цировку нервных элементов, формирование архитектоники ганглиев и их взаимоотношение с окружающими структурами. Установлены региональные различия по степени дифференцировки нейронов между мышечно-кишечннм и подслизистым сплетениями. Содержание нейро-бластов в подслизистом сплетении колебалось от 80,7? у новорожденных поросят до 11,7? у животных 8-ыесячного возраста, в ш-

27

шечно-хишачном сплетении соответственно от 71,8$ до ,8,7$.

2. Обнаружены два периода активного морфогенеза нейронов:

I период даштоя о I- до 60-дневного возраста и II период - с 4 до 6 месяцев. В 8ти периоды отмечаются максимальные темпы удлинения нервных отростков,увеличение основных нервных стволов и ветвей,узлы ветвления перемещаются более дистально. Установлены неодинаковые темпа развития нейронов. С I до 30 дней диаметр нейронов I типа Догеля увеличивается на 25,7$,II типа Догеля -на 23,3$,ядер соответственно - на 7$ и 24,4$,с 30- до 60-дневного возраста этот показатель для нейронов I типа составил 31,4$,II типа - 76,5$,ядер 7,8$ и 32,9$ соответственно. На протяжении 2-8-месячного возраста диаметр перикарионов нейронов I типа возрастает в среднем на 12-17,1$,II типа - на 3,6-10,3$, ядер - на 12,9$ и 24,^$ соответственно.

3. Морфологическим эквивалентом реактивной подвижности нервных структур в процессе диффоронцировки нейронов является: выпячивание (экструзия),сокращение (ретракция).ветвление (рамификация) .прикрепление к субстрату (адгезия) нервных отростков и редукция нервных сплетений. Высокими пластическими свойствами обладают дендрита,синапсы,мембраны и щтосколетные структуры нейрона. В ходе синаптогенеза модификация мембранных контактов осуществляется в трех направлениях: апезикулярный мембранный контакт трансформируется в сторону химического синапса; изоляция контактирующих мембран глией и слияние мембран в области контакта и их лизис.

4. Реакция нейронов интрамуральных ганглиев зависит от длительности применения кормогризина,возраста животных. Морфологический субстрат адаптационной возможности включает два периода: I период,который длится с 2- до 4-месячного возраста сопровождается активизацией морфогенетических процессов. В результате происходит ускорение дифференцировки нейронов. Повышается активность холин- и адренергической систем. Со стороны нервных отростков наблюдается усиление экструзионной активности,повышается степень адгезии нейро-тглиальных мембран с формированием авезикулярных контактов,стимулируются процессы эндо- и экзоци-тоза. II период с 4 до 6 месяцев сопровождается замедлением темпов морфогенеза нейронов. Реактивно-деструктивным процессам больше подвержены нейроны I типа Догеля. Наступает "вторая волна* двфференцировки запасного пула нейробластов. Содержанке

28

мелких нейронов увеличивается на 37,5$,против 27$ в 4-месячнои возрасте. Учитывая высокую пластичность дендритов установлено, что их параметры тевно коррелируют с размерами нейронов. Коэффициент корреляции между площадью,занимаемой дендритами и размером нейронов составляет г =0,3^0,04,общей длиной дендритов и размером клеток г =0,4±Ü,G2. ,

5. Действие кормоаминоа направлено на повышение, синтеза балка. В нейронах мышечно-кишечного сплетения концентрация РНК выше на 33,4-48$,в подслизистом сплетении - на 28,1-72,9$ по сравнению с контролем. Степень рамификации отроотков возрастает на 30,2-41$, Количество глиоцитов в расчете на один нейрон увеличивается на 20-22,5$. На ультраструктурном уровне обнаружено увеличение количества митохондрий,повышенно число авезикуляр-ных контактов,светлых и гранулярных,синаптических везикул.

6. Использование кормоамина-Л для поросят-сосунов способствует ускорению синапто- и глиогенеза,активизируется деятельность адренергической нервной системы. Концентрация гранулярных синаптических везикул на I ккм^ площади аксонной терминали увеличивается на 18,4$,светлых пузырьков - на 15,7$ по сравнению о контролем. Активность СДГ в нейронах повышается на 40,3$,КФ и ЩФ - на 23,7$ и 57,5$.

7. Установлена зависимость между сроками отъема поросят и ■ длительностью адаптационного периода интрамуральных ганглиев. При отъеме поросят в 45 дней восстановительный срок составляет 15-20 дней,при отъеме в 60 дней - ID-i5 дней. В послеотъемннй период в подслизистом сплетении наблюдается больше реактивно-деструктивных нейронов,чем в мышечно-кишечном сплетении. Наиболее выраженные ультраструктурные изменения нейронов наступают на. 5 день после отъема поросят.

Комбинированное применение препаратов на основе кормогри-зина-40,концентрата кормогризина,активностью 50 тыс ЕЩ,кормоамина-Л и КПМК за 10 дней до отъема и в течение 30 дней после отъема поросят позволяет минимизировать последствия послеотъем-ного стресса и сократить длительность адаптационного периода, стабилизировать деятельность тонкого кишечника..

8. В интрамуральном нервном аппарата при заболевании поро» сят гастроэнтеритом обнаружен градиент поражений нейронов в зависимости от топографии. В подслизистом сплетении гибель нейронов в процессе 5-дневной патологии достигает 0,3-4,3$,в ыы-

29

О

шечно-кишечном сплетении - 0,1-0,8$. В порше дни болезни поросят отмечается гипертрофия отростков,на 3-5 день патологии цитоплазма отростков просветляется,появляются вакуоли,наступает дезинтеграция микротрубочек. На 4-5 день усиливаются процессы эндо- и экзоцитоза. Интерстециальное пространство уменьшается в размерах в 2,3-3,8 раза. Со стороны микроворсинок эн-тероцитов происходит массовый отрыв и разрушение,исчезает слой гликокаликса.

Комплексный препарат,состоящий из концентрата кормогризина, аскорбиновой киолоты и рутина способствует активизации синтеза белка в нейронах,оказываот протекторный эффект на структуру нервных отростков и синоптический аппарат.' Препараты предохраняют холин- и адроноргичыскую нервную систему от быстрого модиа-торного истощения при паболевании поросят гастроэнтеритом.

9. В модельных экспериментах в культуре нервной ткани обнаружен нойршзгимулирующнй эффект гризина. Окспирпыентальные исследования,проведенные in vivo и in vitro по изучению действия ростостимуляторов показывают,что интрацуральные ганглии тонкого кишечника евнней могут служить удобной моделью для анализа дий— ствия ростовых факторов различной биологической природ-!.

10. При использовании кормогризина и кормоашнов в период доращивания п откорма свшшй .тлвая масса превышала контроль на 4,I-II,9/¿ и 6,4-11,4$ соответственно. В шее свиней увеличилось содержание сухого вещества на 7,3^,протеина - на 3,3-13,1$. Падеж и заболеваемость поросят снизились на 3-5$ и 9-15$. Эффективность прш.юнения кормоаыинов составила 1U6 руб Ь5 коп в расчете на I голову (цены по' состоянию на 199л г.). Переменное применение препаратов в пред- и послоотьемнын периоды поросят повышало живую массу на 6,5-9,3$. Экономическая эффективность

в расчете на I голову равнялась 3 руб 50 коп. При использовании комплексного препарата в качестве лечебно-профилактического средства при желудочно-кишечных заболеваниях поросят экономический эффект составил 5 руб 40 коп в расчете на I голову.

IffAKTO4BCKp_nPEpg5ffiHp

I. Результаты исследований предлагаем использовать:

- при написании соответствующих разделов учебных и справочных руководств по морфологии,теории адаптации,кормлению животных;

- в учебном процессе дая чтения лекций и проведения лаборатор-30

G

но-практическпх занятий по цитологии,гистологии,анатомии,физиологии, биохимии и кормлению на биологических и зооветеринарных факультетах высших учебных заведений;

- в лабораториях НИИ,занимающихся изучением влияния биологически активных веществ на функциональные системы и организм в целом;

- в практике свиноводства с целью целенаправленного влияния на рост,развитие,повышение продуктивности животных и профилактики желудочно-кишечных болезней.

2. Данные о динамике морфологических,гистохимических и ультраструктурных изменениях в тонкой кишке и её иннервацион-ном аппарате позволяют специалистам-практикам,экспериментаторам целенаправленно влиять на развитие функций кишечника в пред- и поел еотъемный периоды и при лечеюи заболеваний тонкого кишечника поросят.

СЩСОК_ОСНОВНЫХ ПЕЧАТНЫХ_РАЕОТ

1. Малашко В.В..Бобрик В.М. Эффективность применения препаратов микробиологического синтеза для повышения продуктивности и профилактики заболеваемости животных //Тезисы докладов Всесоюзной научно-практической конф. "Актуальные вопросы профилактики и лечения болезней животных". -5,1.,1985.-0.172-173.

2. Котуранов П.Н.,Малашко В.В.,Лосева А.И. Препараты антибиотиков,морфофункционалыше перестройки организма и продуктивность свиней //Биологически активные вещества в рационах сельскохозяйственных животных /Сб.научн.тр. -Горки,1965. -С.7-10. .

3. Малашко В.В. Особенности роста л развития животных при введении в рацион препаратов микробного синтеза //Научные основы развития животноводства в БССР /Сб.научн.тр. -Шнек: Ура-джай,1986. -Вып.16. -С.85-86.

4. Малашко В.В. Гистохимические и морфологические аспекты реагирования иннервационного аппарата тонкой кишки свиней при введении стимуляторов роста микробиологического синтеза //Экологические аспекты функциональной морфологии в животноводство /Сб.научн.тр. -1.1.: Наука, 1986. -С.114-116.

5. Малашко В.В. Адаптационные изменения ферментов жолудоч-по-кишечного тракта свиной при обогащении рациона стимуляторами роста /Дезиси докладов Всесоюзной научной конф. "Проблемы диагностики,терапии и профилактики болезней швотеих в про-

мышлонном животноводстве". -Бороне:;;,I9iß. -Ч. I. -С,81.

6. :.!алалко В.З. Гистохимическая оценка стимулирующего влияния кормовых антибиотиков на организм свиней //Биологически активные вещества в комбикормах и белково-витаминные подкормки в рационах сельскохозяйственных животных /Сб.научн. тр. -Горки,1987. -С.27-30.

7. Малашко В.В. Структурно-функциональные аспекты реакции интраыуральных нейронов тонкой кишки на дефицит белка в рационе //Тезисы докладов УН съезда Белорусского физиологического общества. -Витебск,1987. -С,148-149.

8. Дэмирчеглян Б.Л..Арутынян A.B..Малашко В.В.,Бобрик В.М. Эффективность использования кормогркзина-10,полученного на основе сорбционных стоков в рационах сельскохозяйственных животных //Биологически активные вещества в комбикормах и бел-ково-витаминные подкормки в рационах сельскохозяйственных животных /Сб.научи.тр. -Горки,1987. -С.72-76.

9. Котуранов Л.Н.,Редько Н.В.,Малашко В.В. Особенности физиологических процессов в пищеварительном тракте сельскохозяйственных животных при использовании в рационах биологически активных веществ //Тезисы докладов ХУ съезда всесоюзного физиологического общества. -Кишинев: Наука,1967. -Т.2. -С.57-.

10. Шалак ivi.B. .Друтюнян Л.В.,Балобин Б.В. .¡.'алшжо jj.B. Некоторые аспекты применения аминокислот и их влияние на продуктивность скота и птицы /Датериалы 1У Всесоюзной кон^ероь-ции "Аминокислоты для сельского хозяйства, пищевой прошалоа-ности,медицины и научных исследований. -1.1.: Наука,1988. -С. I60-I6I.

11. («алашко В.В. Продукты безотходной биотехнологии в рационах свиней и некоторые морфологические показатели при их использовании' //Тезисы конй. "Ферментные препараты в ветеринарии'и животноводстве". -Каунас,1989. -С.53-54.

12. Малашко В.В. Новый вид форм для заливки гистологических препаратов в парафин. Деп. в В1ШТШ. JJ4308-B89. -8с.

13. Малашко В.В. Дополнительные данные к модификации метода окраски нервной ткани по Нисслю. Деп. в ВИНИТИ. JS3093-B89. -8с.

14. Малашко В.В. Нейроглиальные отношения в иннервашонном аппарате тонкой кишки и некоторые зоотехнические данные при использовании нетрадиционных источников кормов в рационах сви-32

ней //Функциональная 1! возрастная морфология свиней в экологоо экспериментальном освещении /Межвузовский сб.научн.тр. -Белгород, 1989. -С.13-21.

15. Малашка В.В. Другасныя прадукты вытворчасц1 шл1нак1с-лот у рацыёнах св1ней I марфалаг1чная ацэнка 1х дзеяння //Вес-ц1 АН БССР. Сер. с.-г. навук. -1990. -.'М. -С.78-81.

16. Малашко В.В. Комбинированное применение хормогризина и кормоамика для профилактики заболеваний! пищеварительной системы поросят //Уатериалы Республиканской научно-производственной конф. "Профилактика и меры борьбы о болезнями молодняка сельскохозяйственных животных". -Витебск,Х990.-С.152-153.

17. ¡лалаико В.хЗ. Ультраструктурная организация интрамураль-ных нейронов тонкой кишки новорожденных поросят //Функциональная и возрастная морфология свиней в эколого-зксперименталь-ном освещении /межвузовский сб.научн.тр. -Белгород,1990.

-С.25-28.

Та. ¡.:алашко В.В. .Сотников О.С. Эрготропное действие кормо-гризика и кориоашша-Л на организм поросят в поолоотъемшй! период //..',аториалы Международной кон». "Биологические основы высокой продуктивности сельскохозяйственных ашвот¡их", -Боровск, 1500. —0.95-С6.

19. ГЛэлашко В.В. Далак М.В. Способ профилактики заболеваний гелудочно-кжпечного тракта и стимуляция роста поросят в послеотьемный период //Рационализаторские предложения и изобретения,рекомендуемые для внедрения в сельскохозяйственное производство. -М.,1990. -Вып.5, -С.36-37.

20. Малашко В.В.- Биотехнологические приемы регуляции процесса адаптагенеза пищеварительного тракта свиней //Материалы научно-практической конф. "Биотехнология и воспроизводство в животноводстве". -Горки,1991. -С.49.

21. Ыалашко В.В. Ультраструктура штрамуральннх нейронов тонкой юшки поросят в постнатальном онтогенезе //Материалы 3 Республиканской научно-технической конф. "Применение электронной микроскопии в науке и технике". .-Манок, 1991. -С.98.

22. Малашко В.В. Ультраструктурное изучение онтогенеза нейронов интраыуральных ганглиев тонкой кишки поросят //Материалы У1И съезда Белорусского физиологического общества. Шнек; Наука и техника,1991. -С.80.

23. Малашко В.В. Гистогенез нервного аппарата тонкой кишки

33

свиней в постнатальном онтогенезе и его коррекция при использовании ростостимуляторов //¡Лрфофункцпональные основы формп-рования в онтогенезе адаптивных возможностей организма человека и животных. —ГЛ.: Наука, 1991. -С.30-34.

24. Малашко В.В..Сотников О.С. Нервный аппарат тонкой кишки поросят при воздействии стимулятора роста корыогризина //Архив анатомии,гистологии и эмбриологии. -1991.-Т. 100. -й4.

С.30-39.

25. Малашко В.В. Структурно-функциональные критерии преобразований в синапсах миентерального сплетения 12-перстной кишки свиней при воздействии регуляторов роста //Материалы II съез -да анатомов,гистологов и эмбриологов Белоруссии. -Минск,I99i. -T.I. -С.112.

26. Малашко В.В.,Гобрик В.М. Нетрадиционные источники кормов в рационах свиней и некоторые морфологические показатели при их применении //Вопросы полноценности кормления сельскохозяйственных животных и качество кормов /Сб.каучн.тр. -Горки, 1991. -С.16-21.

27. Малашко В.В. Применение комплекса препаратов при выращивании поросят //Информационный листок,шифр I.I.2.7. Белорусский филиал ВНИИТЭИагропрома. -Минск, 1992. -Ш)9. -4с.

28. Малашко В.В. Метаболизм тонкой кишки поросят в после-отъемный период и его коррекция при применении биологически активных веществ //Материалы конф. "Проблемы диагностики,профилактики и лечения сельскохозяйственных животных в Нечерноземной зоне. -Нижний Новгород, 1992. -С.79-Ы.

29. Сотников О.С.,МаЛашко В.В.,Гусова Б.А. .Инсежарова Г.М. Динамика мекнейрональных отношений в раннем онтогенезе и при посттравматической регенерации //Тезисы докладов научной конф. "Морфология раневого процесса", -Санкт-Петербург,1992. -C.3G-39.

30'. A.C. ¿1405774. Способ получения кормовой добавки из отходов производства аминокислот. Офиц.бол.открытии и изобретений, I9B8. -.'524.

31. Рацпредложение JS2/97. Методика приготовления тотальных препаратов желудочно-кишечного тракта для импрегнации азотнокислым серебром //Гистологические и морфометрические методы исследования. -Горки,1993. -C.8-II.