Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональная характеристика поджелудочной железы у 45 дневных клинически здоровых поросят и влияние на нее селеданта и липотона

ПОПОВА Екатерина Александровна

Морфофункциональная характеристика поджелудочной железы у 45 дневных клинически здоровых поросят и влияние на нее селеданта и

липотона

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж - 2009

003473176

Работа выполнена в отделе патологической морфологии Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ СУЛЕЙМАНОВ Сулейман Мухитдннович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

КАРТАШОВ Сергей Николаевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Российский университет

Дружбы Народов»

Защита диссертации состоится 21 мая 2009 года в 13 часов на заседании диссертационного совета ДМ 220.010.05 при ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки» (394087, г. Воронеж, ул. Мичурина 1, тел/факс (4732) 53-86-51).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки»

Автореферат разослан «20» апреля 2009 г.

кандидат ветеринарных наук, доцент САПОЖКОВА Ольга Александровна

Ученый секретарь диссертационного совета

ХРОМОВА Л.Г.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Поджелудочная железа играет важнейшую роль в регуляции углеводного обмена, а как следствие нарушения углеводного обмена возникает нарушение жирового. Организм компенсирует недостаточное использование углеводов тканями увеличением потребления жиров. Как известно, при расщеплении жиров образуются кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная и в-оксимасляная кислоты) в избыточном количестве, что ведет к развитию ацидоза (Я. Д. Киршенблат, 1971).

Кроме того, применение лекарственных средств, специфического ействия не может устранять основную причину патологического состояния, вляющегося следствием нарушения метаболизма, обеспечивающего обмен веществ и энергии между клеткой и средой. Нарушение обмена веществ приводит к снижению иммунологической резистентности организма ивотных (А. М. Земсков, 1994; В. С. Бузлама, 2000).

Важнейшую роль в обеспечении здоровья человека и животных играют икроэлементы, которые служат эффективными биокатализаторами всех бменных процессов. При их недостатке в организме начинаются атологические изменения, приводящие к хаотически-нерегулируемой изнедеятельности всех органов и систем (В. Т. Самохин, 2003).0дним из аких микроэлементов является селен. Последнее время все чаще у людей и ивотных встречается дефицит этого микроэлемента. Селен, связан с ункцией более ста ферментов (А. Н. Алименко, 2004).

Л. В. Аникина с соавт. (1991) считают, что у селенодефицитных ивотных идет постепенное нарушение функциональных возможностей оджелудочной железы, вследствие чего, развивается гипоинсулинемия. роисходит угнетение активности пируватдегидрогеназного комплекса, икапливается его субстрат. В поврежденных мембранах подавляется иффузия кислорода, создаются условия для гипоксии. Это приводит к силению генерации молочной кислоты и к гиперлактацидемии - одному из

серьезнейших признаков сахарного диабета. Добавление препаратов селена диету благотворно действует на многие структуры и функции организм прежде всего, через нормализацию липидного и липопротеидного обмен Кроме того, селен, необходим для защиты мозга. Селедант поддержива способность клетки к идеальной саморегуляции и постоянному очищению недоокисленных продуктов обмена - свободных радикалов, которь постоянно " забивают" все живые клетки и разрушают их.

Использование тканевой терапии в ветеринарии также является последнее время актуальной темой. При комплексном применени специфических средств и тканевых препаратов значительно уменьшает риск рецидивов заболеваний (Н. М. Розумей, 2005). Тканевые препарат обладают богатым спектром действия, а именно, являются универсальны иммуномодуляторами, обладают антиоксидантными свойствам способствуют усилению клеточной и гуморальной активности систе организма, способствуют активации общей резистентности организма.

Плацентарный препарат липотон имеет в своем составе гексозы триглицериды, улучшающие углеводный и липидный обмен, фосфолипид являющимися структурным звеном клеточных мембран и мембран органел регулирующие проницаемость биомембран и активность мембран связывающих ферментов, обеспечивающие нормальное течен окислительно-востановительного фосфорилирования в клеточно метаболизме. Витамин А и Е обеспечивает предотвращения образован свободных радикалов, повреждающих ткани организма (Г. А. Востроилов 2004).

По данным В. И. Масычева с соавт. (1995) под влиянием тканевь препаратов происходит нормализация обмена веществ, усиливают анаболические и катаболические реакции организма, что ведет к повышени сопротивляемости. Кроме того, есть данные, что биогенные стимулято индуцируют биосинтез ферментов.

В проблеме микроэлементов, в частности, селена, а также в изучении действия тканевых препаратов, несмотря на многочисленные исследования, остаются белые пятна, начиная с практического применения и заканчивая изучением возможных отдаленных эффектов.

В сложном комплексе систем организма, обеспечивающих обменные процессы, значительную роль занимает поджелудочная железа.

До настоящего времени недостаточно изучены морфофункциональные изменения и ультраструктура в поджелудочной железе у поросят, как важнейшего регулятора углеводного обмена и общего гормонального статуса организма животного при применении селенсодержащих и тканевых препаратов.

В связи с этим возникла прямая необходимость изучения функциональной морфологии поджелудочной железы в процессе применения селеносодержащего препарата селеданта и биогенного стимулятора липотона в целях определения сущности механизма действия этих препаратов.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение структурной организации поджелудочной железы у молодняка свиней в норме и при применении селеданта и липотона.

В связи с этим на разрешение ставились следующие задачи:

1. Изучение морфофункциональной и ультраструктурной организации поджелудочной железы у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней;

2. Изучение морфофункциональной и ультраструктурной организации поджелудочной железы у 45 дневных поросят при применении селеданта;

3. Изучение морфофункциональной и ультраструктурной организации оджелудочной железы у 45 дневных поросят при применении липотона.

1.3. Научная новизна. Морфологическими, морфометрическими, истохимическими и электронно-микроскопическими методами сследований впервые изучена структурная организация поджелудочной елезы у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней и при применении м селеданта и липотона. Установлено, что в 45 дневном возрасте у

I

клинически здоровых поросят структурная организация поджелудочно железы сформирована из 70% экзо- и эндокринной частей и 30% - стромь Применение поросятам препаратов (селедант и липотон) увеличивало общи объем паренхимы ПЖ за счет улучшения структурной организаци ацинарных и эндокринных клеток. При этом в ультраструктуре ацинарны клеток значительно выявлялась гранулярная эндоплазматическая сеть, увеличивалось содержание секреторных гранул зимогена. Последн отсутствовали в эндокриноцитах.

1.4. Научно-практическая значимость и внедрение. Знан структурной организации поджелудочной железы у поросят в норме и п применении селеданта и липогона позволяет научно обосновать применение молодняку свиней.

Полученные данные использованы:

— в методическом пособии «Методы морфологических исследован (второе издание - 2007) (Одобрено секцией «Патология, фармакология терапия» ОВМ РАСХН 30.03. 2000);

- во «Временном наставлении по применению селеданта д сельскохозяйственных животных» (Утверждено ветеринарным отдел Воронежского областного управления сельского хозяйства 15.02.2005 года).

1.5. Апробация результатов исследования. Материалы диссертац представлены, обсуждены и одобрены на отчетных сессиях Всероссийско НИВИ патологии, фармакологии и терапии (2004 - 2007 гг.); международн конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора А. Авророва (Воронеж, 2006); на 16-ой Всероссийской научно-методическ конференции "Современные проблемы патологической анатомии, диагностики болезней животных" (Ставрополь, 2007); на международн научно - практической конференции преподавателей, молодых ученых аспирантов аграрных вузов РФ «Инновационные процессы в АПК» (Моек 2009).

1.6. Публикация. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, одна из которых опубликована в журнале "Ветеринарная патология" № 3 в 2005 году.

1.7. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Структурная организация поджелудочной железы у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней.

2. Влияние селеданта на морфофункциональное состояние поджелудочной железы у 45 дневных поросят.

3. Влияние липотона на морфофункциональное состояние поджелудочной железы у 45 дневных поросят.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 151 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, выводы, практические предложения и список использованной литературы. Он включает 212 источников, в том числе 65 зарубежных. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 70 рисунками.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена с 2004 по 2008 годы в лаборатории патологической морфологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии Российской академии сельскохозяйственных наук (ВНИВИПФиТ РАСХН) в соответствии с тематическим планом НИР.

При изучении данной темы использовались клинические, гистологические, гистохимические, иммуноморфологические, электронно-микроскопические, морфометрические, статистические и другие методы исследования.

Производственные опыты проведены в МХП «Николаевское» Аннинского района, ООО «Вишневское» Верхне-Хавского района Воронежской области и в свинокомплексе «Паритет» Урюпинского района

Волгоградской области. Поросят в возрасте 20-25 дней разделили на тр группы. Одна группа получала селедант в дозе 20 мкг/кг массы тела, втор группа получала липотон в дозе 1 мл/кг, а третья группа служила контроле Через 10-12 дней введение препаратов повторяли, В течение всего опыта животными велось клиническое наблюдение.

В 45 дневном возрасте от каждой группы поросят подвергали убою 3-головы. Материал отбирался в соответствии с поставленными целями задачами. Образцы поджелудочной железы фиксировались в 10-12%-но растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа. Матери подвергался обезвоживанию и заливался в парафин, с парафиновых блоко готовились серийные срезы толщиной 5-7 мкм на микротоме МП-2.

Для общей оценки морфологической структуры органа парафиновы срезы окрашивали гематоксилин-эозином и по Ван-Гизон. Для подсчет размера, диаметра, площади, объема клеточных структур использовал морфометрическую линейку и статистическую программу Meta Vision 1. Для подсчета количественного и процентного соотношения клето применяли окулярную измерительную сетку с известной площадью (0,011 мм2) при увеличении объектива 90 под иммерсией. Количеств морфометрических измерений, необходимых для объективного определени исходной величины было установлено по формуле: Х=400*(100-м)/М (Г. I Автандилов, 1980).

Окрашивали срезы на ДНК с реактивом Шиффа по методу Фельген для выявления ДНК и РНК проводили окраску по методу Браше метиловы зелёным - пиронином, окраску на В-клетки островков Лангерган проводили по методу Гомори (Э. Пирс, 1962), для выявления белк использовали метод с Амидочерным 10В (Кононский А. И., 1976), выявлен мукополисахоридов производили реакцией Шиф-йодной кислоты (ШИ реакция) (Э. Пирс, 1962). Учет реакций проводили методом цитофотометри Оптическая плотность гистохимических реакций на срезах измеряли цитофотометре «Люмам И-3».

Для электронной микроскопии материал фиксировали в 2,5 % - ном глютаровом альдегиде на 0,114 М коллидновом буфере на холоде с постфиксацией в 1 % - ном растворе тетраокси осмия на том же буфере. Осмомолярность 360 моем достигали введением во второй фиксатор 0,05 М железосинеродистого калия и раствора Рингера. Материал заключали в эпон-812. Готовились полутонкие срезы, которые окрашивались азур-2 в сочетании фуксином основным и просматривались в световом микроскопе «Leica». Ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме Ultracut (Leica), контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом и просматривали в электронном микроскопе ЕМ-208 (Philips).

Результаты исследований были подвергнуты статистической обработке на персональном компьютере IBM (программа Микрософт Эксель 2003).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Структурная организация поджелудочной железы у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней

У клинически здоровых поросят 45 дневного возраста паренхима поджелудочной железа была разделена на дольки, которые состояли из групп ацинусов. Дольки отделялись друг от друга соединительнотканной прослойкой, в которой располагались сосуды, нервы, нервные ганглии и выводные протоки.

Ширина соединительнотканной прослойки колебалась от 4 до 10 мкм. Междольковая соединительная ткань и стромальные элементы занимали 30% площади поджелудочной железы. На гистологических срезах, на фоне более темных по окраске ацинусов, просматривались достаточно светлые участки скоплений островковых клеток (Рис. 1А). Общее количество железистой паренхимы составило 70%. На долю экзокринной части железы,

представленной ацинусами, приходилось 63,8%, а островковая эндокринная часть железы составила 6,2%.

Большинство ацинусов не имели четких границ, каждый из них бы окутан узкими прослойками соединительной ткани с тонким коллагеновыми и эластическими волокнами (Рис. 1Б). Ацинусы был округлой или овальной формы с диаметром 52,14 ± 1,24 мкм и площады ацинарной клетки 55,85 ± 3,91 мкм2.

В ацинусе в среднем выявлялось от 7 до 12 ацинарных клеток довольн крупного размера, которые имели вид конуса с усеченной верхушкой располагались на базальной мембране. Вершины клеток составляли просве ацинуса. Высота ацинарных клеток составила 10,66 ± 0,41 мкм.

Клетки ацинуса имели эозинофильную зернистую цитоплазму и крупны базофильные ядра. Иногда встречались ацинарные клетки с двумя ядрам Ядра имели округлую форму, преимущественно с одним ядрышком кариоплазму с крупноглыбчатым хроматином. В большинстве своем, ядр были смещены к базальному краю клетки (Рис. 1В). Наблюдалось центральное расположение ядер в клетке.

У клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней средний диамет ядер клеток ацинусов составлял 4,67 ± 0,14 мкм, объем ядер - 53,41 ± 2,7 мкм3 и площадь — 15,80 ± 0,52 мкм2 (Табл. 1).

Таблица - 1. Морфометрические показатели экзокринной част поджелудочной железы клинически здоровых поросят 45 дневного возраста

Показатели Величина

Б ацинусов поджелудочной железы (мкм) 52,14 ±1,2

Высота ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм) 10,66 ±0,4

Б ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм2) 55,87 ±

О ядер ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм)

3,91 4,67 ±0,14

V ядер ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм3)

53,41 ± 2,77

8 ядер ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм2)

15,80 ±0,52

Я-Ц отношение ацинарных клеток поджелудочной железы

0,28

При этом эндокринные островки у поросят не имели собственной капсулы и были отделены от ацинарной паренхимы лишь незначительной прослойкой ретикулярной ткани. В островках незначительно выявлялась соединительная ткань. Эндокринная паренхима железы составила 6,2%. Островки имели овальную, продолговатую или удлиненную формы, с диаметром 89,12 ± 10,1 мкм и площадью 5351,87 ± 105,6 мкм2. Эндокриноциты в большинстве своем имели округлую форму, а строма островков была заполнена многочисленными кровеносными капиллярами.

Большую часть эндокринных островков занимали В-клетки, которые располагались по всей поверхности островка, с наибольшей локализацией в центре. В-клетки имели меньшие размеры по сравнению с ацинарными, округлую форму, с центрально расположенным ядром в цитоплазме клетки. Ядра их были крупными, круглыми, светлыми с мелкоглыбчатым хроматином, разбросанным по всей кариоплазме ядра.

Междольковые выводные протоки располагались в междольковой соединительной ткани и сопровождались кровеносными сосудами (Рис. 1Г). Крупные протоки чаще имели округлую форму и большой просвет, а мелкие - вытянутую форму и узкий просвет. Внутридольковые протоки были немногочисленными, разных размеров и формы. Чаще встречались протоки округлой или продолговатой формы.

Рис. 1. А. Диффузное распределение светлых островков Лангерганса в железистой паренхиме поджелудочной железы у 45 дневного поросенка. Окр. г.-э. Ув. ок. 7, об. 10.; Б. Нечеткое выделение границ ацинусов в поджелудочной железе у 45 дневного

I

клинически здорового поросенка. Ок. г.-э. Ув. ок. 7, об. 40.; В. Смещение ядер к базально краю клеток в ацинусах поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка. Окр. по Ван-Гизон. Ув. ок. 7, об. 100.; Г. Строма и кровеносные сосуды в поджелудочной железе у 45 дневного клинически здорового поросенка. Окр. по Ван-Гизон. Ув. ок. 7, об. 40. [

Оптическая плотность РНК ацинарных клеток составила 0,36±0,011 е. ! п., а в островковых клетках - 0,23 ± 0,024 е. о. п. РНК содержалас равномерно по всей цитоплазме ацинарной клетки, а в панкреатически! островках РНК встречалась преимущественно в перинуклеарной зоне (Ри 2А).

Содержание белков и белоксодержащих веществ в экзо- и эндокринное эпителиях составило соответственно 0,340 ± 0,012 и 0,26 ± 0,019 е. о. п., нуклеиновых кислот - соответственно 0,197 ± 0,023 и 0,165 ± 0,013 е. о. п Распределение белков и белоксодержащих веществ в поджелудочной желеЗ| у поросят было не равномерным. Наблюдалось увеличение показателей апикальной части экзокринных клеток (Рис. 2 Б, В).

Цитофотометрические содержание гликогена в поджелудочной железе 45 дневных клинически здоровых поросят составило в ацинусе 0,49 ±0,015 е о. п., в эндокринных островках - 0,37 ± 0,026 е. о. п. Гранулы гликоген

располагались избирательно в пределах ацинусов, с незначительным уменьшением в островковой паренхиме (Рис. 2 Г).

Рис. 2. А. Базофилия ядерного РНК клеток поджелудочной железы у клинически здорового 45 дневного поросенка. Окр. метиловым зеленым - пиронином по Браше. Ув. ок. 7, об. 100.; Б. Распределение нуклеиновых кислот в ядрах экзокринных клеток поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка. Окр. по Фельгену (без дополнительной окраски прочным зеленым). Ув. ок. 7, об. 40.; В. Оптическая плотность суммарных белков в апикальной части ацинусов поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка. Окр. амидочерным 10В. Ув. ок. 7, об. 40.; Г. Незначительное содержание гликогена в клетках ацинуса поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка. Окр. ШИК-реакция. Ув. ок. 7, об. 40.

При изучении полутонких срезов установили, что границы между ацинусами едва заметны, междольковая соединительная ткань была выражена слабо. Ацинусы имели овальную или вытянуто-овальную форму. Ядра клеток были шаровидными, крупные ядра содержали одно, два. редко три ядрышка (Рис. 3 А). В апикальной части ацинуса наблюдались немногочисленные скопления гранул зимоген. Внутридольковые протоки имели округлую, реже продолговатую формы и были выстланы однослойным кубическим эпителием с оксифильной цитоплазмой. Ядра экзокриноцитов имели округлую, овальную или угловатую форму. Междольковые крупные протоки были чаще вытянутыми, реже округлыми,

выстланы кубическим эпителием. Крупные ядра округлой формы занимал центральное положение в клетке, цитоплазма окрашивалась оксифильно. просвете протоков встречались гранулы секрета.

На субклеточном уровне в просвет ацинусов поджелудочной железь выступали микроворсинки, которые частично являлись выростам апикальной части плазматической мембраны. Эндоплазматическая сет выявлялась преимущественно в базальной части клеток и была представлен плотно упакованными, слегка расширенными мембранами и мелким вакуолями (Рис. 3 Б). Ядра эндокринных клеток располагались на базальнм мембране и были довольно крупными, и содержали гранул гетерохроматина (Рис. 3 В). Ядрышки ориентировались на кариолемме Митохондрии наблюдались во всех частях цитоплазмы и имел преимущественно форму вытянутого овала. Комплекс Гольдж локализовался преимущественно в надъядерных областях ацинуса представлял собой слегка расширенные вакуоли и цистерны. Было отмечен скопление единичных вакуолей и небольшое количество незрелых грану зимогена в зоне комплекса Гольджи. В редких случаях отмечались в просвет ацинусов центроацинозные клетки. Гранулы прозимогена и зимоген наблюдались в малом количестве и локализовались в апикальной част клеток (Рис. 3 Г).

Рис. 3. А. Полиморфность ядер экзокриноцитов в поджелудочной железе у 45 дневного клинически здорового поросенка (полутонкие срезы). Окр. Азур-2 в сочетании с фуксином основным. Ув. х 1000.; Б. Плотно упакованные мембраны эндоплазматической сети в ацинарной клетке у 45 дневного клинически здорового поросенка. Ув. х 3500.; В. Ориентация гетерохроматина на кариолемме в эндокриноците поджелудочной железе у 45 дневного клинически здорового поросенка. Ув. х 1800.;Г. Промежуточная стадия созревания гранул прозимогена в апикальной части ацинарных клеток поджелудочной железы у клинически здорового 45 дневного поросенка. Ув. х 7100.

3. 2. Структурная организация поджелудочной железы у 45 дневных клинически здоровых поросят при применении селеданта

У поросят 45 дневного возраста, при применении селеданта, толщина соединительнотканной перегородки долек ПЖ составила 4-9 мкм. Общее количество соединительной ткани — 26,6%, а железистой паренхимы — 73,3%. На долю ацинарнарной паренхимы приходилось 66,7%, а островковой -6,6%. Следовательно, объем железистой паренхимы увеличился на 4,71%, а соединительной ткани уменьшился на 11,3 %.

В поджелудочной железе у поросят при применении селеданта была хорошо выражена дольчатая структура органа (Рис. 4 А). При этом ацинусы имели более четкие границы, а апикальные части клеток образовывали просвет ацинуса (Рис. 4 Б). В центре некоторых ацинусов можно было видеть ядра центроацинозных клеток. Диаметр ацинуса составлял 53,11 ± 1,65 мкм, высота — 11,34 ± 0,64 мкм, а площадь - 58,46 ± 4,25 мкм2, что соответственно

на 1,8 %, 6,3 % и 4,6 % было больше показателей контрольной группы (Таб 2).

Таблица - 2. Морфометрические показатели экзокринной част поджелудочной железы у поросят 45 дневного возраста при применени селеданта

О ацинусов поджелудочной железы (мкм)

% от контроля

Высота ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм)

10,66 ± 0,41

% от контроля

Б ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм2)

55,87 ± 3,91

% от контроля

Б ядер ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм)

4,67 ±0,14

% от контроля

V ядер ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм3)

53,41 ± 2,77

% от контроля

8 ядер ацинарных клеток поджелудочной

15,80 ± 0,52

железы (мкм2) 0,68

% от контроля 12,3

Я-Ц отношение ацинарных клеток поджелудочной железы 0,28 0,30

Ядра ацинарных клеток были крупными, имели шаровидную форму и были смещены к базальной мембране клетки. Визуально отмечалось увеличение количества двуядерных клеток (Рис. 4 В). В ядре клеток насчитывались 2 - 3 и более ядрышек. Диаметр ядра составлял 5,21 ± 0,23 мкм, площадь ядра - 17,74 ± 0,68 мкм2, а объем - 84,92 ± 2,81 мкм3, что соответственно на 11,6 %, 12,3 % и 58,99 % было больше чем в контрольной группе.

Панкреатические островки у 45 дневных клинически здоровых поросят при применении селеданта были окружены тонкими коллагеновыми и эластическими волокнами, имели овально удлиненную форму, с диаметром 94,54 ± 9,8 мкм и площадью 5549,71 ± 105,6 мкм2. Эндокринная паренхима железы составила 6,6%.

Островковые клетки, визуально имели, более светлую окраску по сравнению с ацинусами, и достаточно четкие границы. Встречалась чаще округлая форма клеток с достаточно крупными шаровидными ядрами, которые занимали центральное положение в цитоплазме клетки (Рис. 4 Г). Пространство между островковыми клетками заполняли кровеносные капилляры.

Рис. 4. А. Выраженная дольчатость паренхимы поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении селеданта. Окр. Гемотоксилин по Вейгерту. Ув. ок. 7, об. 10.; Б. Экзокринная часть железы представленная скоплением ацинусов у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении селеданта. Окр. г.-э. Ув. ок. 7, об. 40.; В. Наличие 2 — 3 ядрышек в ядрах ацинарных клеток поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении селеданта. Окр. по Ван-Гизон. Ув. ок, 7, об. 100; Г. Овальные островки Лангергансп, расположенные в центральной части паренхимы поджелудочной железы у поросенка 45 дневного возраста при применении селеданта. Окр. г.-э. Ув. ок. 7, об. 40.

В поджелудочной железе у поросят при применении селеданта оптическая плотность РНК цитоплазмы ацинарных клеток составила 0,38 ± 0,02 е. о. п., а островковых - 0,24 ± 0,013 е. о. п., что соответственно на 22,6 % и на 4,34 % было больше, чем в контрольной группе.

Таким образом, установлено усиление синтезирующей активности ацинарных клеток. В цитоплазме клеток РНК выявлялась в виде диффузной, зернистой, парануклеарной и ядрышковой фракций (Рис. 5 А).

Содержание гликогена в поджелудочной железе у 45 дневных поросят при применении селеданта составило 0,52 ± 0,09 е. о. п. в экзокринных клетках и 0,39 ±0,010 е. о. п. в островковых, что соответственно на 6,1% и 5,4% было больше по сравнению с контрольной группой (Рис. 5 Б).

У 45 дневных клинически здоровых поросят наблюдалось увеличение содержания белков, которое составило 0,417±0,01Ю е. о. п., что на 22,3% было больше, чем у животных контрольной группы. Распределение белка в

экзокринной части поджелудочной железы было неравномерным. Наблюдалось незначительное увеличение веществ белковой природы в апикальной части экзокринных клеток. Тогда как, распределение белковых веществ в пределах исследованных островков Лангерганса было более менее равномерным. В содержании нуклеиновых кислот наблюдалась обратная закономерность. Так, в ядрах экзокринных клеток поджелудочной железы при применении селеданта наблюдалось незначительное уменьшение содержания нуклеиновых кислот по сравнению с животными контрольной группы, причем оно составляло 0,19 ±0,0150 е. о. п. (Рис. 5 В, Г). Распределение нуклеиновых кислот в ядрах экзокринного и эндокринного эпителия было также неравномерным. Содержание нуклеиновых кислот в эндокринных клетках было незначительно меньше, чем в экзокринных.

1.3 "

Ш1'

.....

* .

5

Рис. 5. А. Обилие цитоплазмотической РНК в ацинарных клетках поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении селеданта. Окр. метиловым зеленым - пиронином по Браше. Ув. ок. 7, об. 100.; Б. Увеличение оптической плотности гликогена в клетках ацинусов поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении селеданта. Окр. ШИК-реакпия. Ув. ок. 7, об. 40.; В Незначительное увеличение оптической плотности суммарных белков в ацинусах поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении селеданта. Окр. амидочерным 10В. Ув. ок. 7, об. 40.; Г. Незначительное уменьшение содержания нуклеиновых кислот в ядрах экзокринных клеток поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении селеданта. Окр. по Фельгену (без дополнительной окраски прочным зеленым). Ув. ок. 7, об. 100.

При применении селеданта на полутонких срезах поджелудочной железы было видно, что внутри долек ацинусы располагались плотно, между ними имелось незначительное количество рыхлой соединительной ткани. Основания клеток были покрыты тонкой базальной мембраной, охватывающей весь ацинус. На многих срезах неотчетливо выявлялись отдельные ацинусы. Ядра ацинарных клеток имели округлую форму и были сдвинуты к базальной части клетки, в них содержались крупные ядрышки. Цитоплазма между ядром и основанием клетки интенсивно воспринимала красители. В некоторых ацинусах просматривались центроацинозные клетки и начало вставочного протока. В ацинозных клетках ближе к апикальным ее частям и в просвете ацинусов, заметно было большое скопление гранул зимогена (Рис. 6 А).

В поджелудочной железе поросят при применении селеданта в ходе электронно-микроскопического исследования отмечали расширение и вакуолизацию цистерн эндоплазматической сети в цитоплазме ацинарных клеток (Рис. 6 Б). Электронно-плотные митохондрии эндокриноцитов локализовались в зоне комплекса Гольджи (Рис. 6 В). Отмечалось увеличение числа " светлых ядер", с просветлением кариоплазмы. Микроворсинки на апикальной поверхности клеток были высокими. В апикальной части, а также в просвете ацинарной клетки наблюдалось увеличение числа зрелых гранул зимогена, отдельные гранулы контактировали с цитоплазматической мембраной (Рис. 6 Г).

Рис. 6. А. Многочисленные гранулы зимогена в апикальной части анинуса поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении селеданта (полутонкие срезы). Окр. Азур-2 в сочетании с фуксином основным. Ув. х 1000.; Б. Развитая гранулярная эндоплазматическая сеть в эндокринной клетке поджелудочно. железы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении селеданта. Ув. 7100.; В. Электронноплотные митохондрии на фоне развитой ГЭС в эндокринонит поджелудочной железы 45 дневного клинически здорового поросенка при применен™ селеданта. Ув. х 5600.; Г, Ацинарные клетки образующие просвет ацинуса и скоплени зрелых гранул зимогена в апикальной части клеток в поджелудочной железе у 45 дневной клинически здорового поросенка при применении селеданта. Ув. х 2800.

3. 3. Структурная организация поджелудочной железы у 45 дневных клинически здоровых поросят при применении липотона

У поросят 45 дневного возраста при применении липотона паренхима поджелудочной железы имела дольчатое строение. Соединительнотканные перегородки имели ширину в пределах 4-10 мкм. Общее количество соединительной ткани составило 28,2 %. объем железистой паренхимы достигал 71,8%, из них ацинарная паренхима занимала 65,4 %, а островковая - 6,4 %.

Таким образом, в ПЖ при применении липотона объем железистой паренхимы увеличился на 2,6 %, а объем соединительной ткани уменьшился на 6,0 %.

Морфометрически было установлено, что у 45 дневных клинически здоровых поросят при применении липотона в поджелудочной железе диаметр ацинусов составлял 52,78 ± 1,26 мкм, высота ацинарной клетки достигала 10,78 ± 0,48 мкм, а их площадь - 57,24 ± 3,85 мкм, что соответственно на 1,2 %, 1,1 % и 2,5 % было больше показателей группы контроля (Табл. 3).

Ядра ацинарных клеток были крупными, имели шаровидную форму и были смещены к базальной мембране клетки. Визуально отмечалось увеличение количества двуядерных клеток. Диаметр ядра составил 4,93 ± 0,27 мкм, площадь ядра - 16,79 ± 0,42 мкм2, а объем - 62,97 ± 4,39 мкм3, что соответственно на 5,6 %, 6,3 % и 17,8 % было больше чем в контрольной группе.

Таблица - 3. Морфометрические показатели экзокринной части поджелудочной железы у поросят 45 дневного возраста при применении липотона

~~ —----_ Группы поросят Контроль Липотон

Показатели ^------

0 ацинусов поджелудочной железы (мкм) 52,14 ± 1,24 52,78 ± 1,26

% от контроля +1,2

Высота ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм) 10,66 ±0,41 10,78 ±0,48

% от контроля +1Д

8 ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм2) 55,87 ± 3,91 57,24 ±3,85

% от контроля +2,5

Б ядер ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм) 4,67 ±0,14 4,93 ± 0,27

% от контроля +5,6

V ядер ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм3) 53,41 ±2,77 62,97 ± 4,39

% от контроля +17,8

5 ядер ацинарных клеток поджелудочной железы (мкм2) 15,80 ± 0,52 16,79 ±0,42

% от контроля +6,3

Я-Ц отношение ацинарных клеток поджелудочной железы 0,28 0,29

Эндокринные островки имели овальную и удлиненно овальную формы, встречались также лентовидные с диаметром 92,62 ± 10,6 мкм и площадью 5372,29 ± 118,0 мкм2. Эндокринная паренхима ПЖ при применении липотона составила 6,4%. Клетки эндокринных островков имели округлую форму с крупными шаровидными ядрами, которые занимали центральное положением в цитоплазме клетки.

У 45 дневных поросят при применении липотона оптическая плотность РНК цитоплазмы ацинарных клеток ПЖ составила 0,37 ± 0,012 е. о. п., а островковых - 0,24 ± 0,010 е. о. п., что соответственно на 19,4 % и 4,4 % было больше, чем в контрольной группе.

Таким образом, отмечалось увеличение синтезирующей способности клеток поджелудочной железы при применении липотона.

Незначительно увеличилось содержание гликогена в поджелудочной железе у 45 дневных клинически здоровых поросят при применении липотона. При этом оно составило: в ацинусе — 0,52 ± 0,011 е. о. п., в

эндокринных островках -0,38 ± 0,02 е. о. п., что соответственно на 6,1 % и 2,7 % было больше показателей контрольной группы.

Рис. 7. А. Дольчатое строение поджелудочной железы с преобладанием ацинарной паренхимы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении липотона. Окр. по Ван-Гизон. Ув. ок. 7, об. 40.; Б. Ориентация ядер ацинарных клеток к базальной мембране в поджелудочной железе у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении липотона. Окр. г.-э. Ув. ок. 7, об. 40.; В. Увеличение содержания цитоплазматической РНК в клетках островков Лангерганса в поджелудочной железе у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении липотона. Окр. метиловым зеленым - пиронином по Браше. Ув. ок. 7, об. 40.; Г. Диффузное распределение гранул гликогена в ацинусах поджелудочной железы клинически здорового поросенка 45 дневного возраста при применении липотона. Окр. ШИК-реакция. Ув. ок. 7, об. 40.

В поджелудочной железе поросят при применении липотона содержание белка равнялось 0,39 ±0,015 е. о. п., что на 14,7% больше, чем у животных контрольной группы (Рис. 8А). Распределение белков и белоксодержащих веществ в поджелудочной железе у поросят было неравномерным. Отмечалось увеличение веществ белковой природы в апикальной части экзокринных клеток. В островках Лангерганса распределение белковых веществ также было равномерным и составило 0,185 ± 0,022 е. о. п.

Содержание нуклеиновых кислот в ядрах экзокринных клеток поджелудочной железы поросят при применении липотона незначительно уменьшалось и составило 0,185 ±0,022 е. о. п., что на 6,4 % было меньше

показателей контрольной группы. Содержание нуклеиновых кислот и в эндокринных клетках было незначительно меньше, чем в экзокринных (Рис. 8 Б).

На полутонких срезах поджелудочной железы у 45 дневных клинически здоровых поросят при применении липотна выявились овальной формы ацинусы. В них наблюдалось скопление зимогенных гранул в апикальной части клеток в виде темных зернистых участков (Рис. 8 В, Г). Цитоплазма клеток выделялась базофильностыо. Ядра имели округлую форму с хорошо выраженными ядрышками и осмиофильным хроматином. Нередко встречались клетки с двумя ядрами. Крупные ядрышки локализовались преимущественно в центре ядра. Встречались ядра с 2-3 ядрышками в кариоплазме, которые локализовались у ядерной оболочки.

ж

шв

..'А

Рис. 8. А. Увеличение содержания веществ белковой природы в апикальной части ацинуса у клинически здорового поросенка 45 дневного возраста при применении липотона. Окр. амидочерныы 10В. Ув. ок. 7, об. 40.; Б. Снижение оптической плотности нуклеиновых кислот в ядрах ацинарных клеток поджелудочной железы клинически здорового 45 дневного поросенка при применении липотона. Окр. по Фельгену (без дополнительной окраски прочным зеленым). Ув. ок. 7, об. 100.; В. Обилие гранул зимогена в ацинарных клетках поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении липотона (полутонкие срезы). Окр. Азур-2 в сочетании с фуксином основным. Ув. х 1000.; Г. Очаговая зернистость в перинуклеарной зоне в поджелудочной железе у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении липотона (полутонкие срезы). Окр. Азур-2 в сочетании с фуксином основным. Ув, х 1000.

Электронномикроскопически в поджелудочной железе у 45 дневного поросенка при применении липотона наблюдалось расширение цистерн эндоплазматической сети, локализация электронноплотных митохондрий преимущественно в зоне комплекса Гольджи (Рис. 9 А, Б, В). Отмечалось увеличение числа " светлых ядер" и просветление кариоплазмы. В апикальной части ацинарных клеток наблюдалось увеличение числа незрелых и зрелых гранул зимогена (Рис. 9 Г). Незрелые гранулы имели четкую пограничную мембрану, а зрелые были наполнены плотным осмифильным веществом, и их пограничная мембрана была практически неразличима. В просвете секреторных капилляров в отдельных случаях наблюдались цитоплазматические выросты, так называемые высокие микроворсинки.

Рис. 9. А. Скопление электронноплотных митохондрий в цитоплазме островковых клеток поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении пипотона. Ув. х 4400.; Б. Локализация электронно светлых митохондрий в зоне комплекса Гольджи в эндокринных клетках у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении липотона. Ув. х 4400.; В. Расширение цистерн комплекса Гольджи в зоне ГЭС в ацинарных клеток поджелудочной железы у 45 дневного клинически здорового поросенка при применении липотона. Ув. х 7100.; Г. Обилие гранул зимогена и прозимогена в ацинарных клетках поджелудочной железы у 45 дневнго клинически здорового поросенка при применении липотона. Ув. х 2200.

4. ВЫВОДЫ

1. Поджелудочная железа у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней состояла в 70 % случаях из паренхимы, а в 30 % - из стромы. Паренхима имела дольчатое строение и ее 91,14 % площади принадлежали экзокринным железам, а 8.86 % - эндокринным островкам Лангерганса.

2. У клинически здоровых поросят в экзокринной части паренхимы поджелудочной железы ацинусы с диаметром 52,14 ± 1,24 мкм состояли из 712 плотно прилегающих друг к другу конусовидных ацинарных клеток с высотой 10,66 ± 0,41 мкм. основанных на базальной мембране. Эндокринные островки в незначительном количестве диффузно были рассеяны по всей

паренхиме поджелудочной железы в диаметре 89,12±10,1 мкм и с площадью 5351,87 ± 105,6 мкм2, которые состояли преимущественно из В-клеток.

3. В ультраструктуре ацинарных клеток поджелудочной железы у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней характерно было наличие гранул зимогена и прозимогена, а в эндокриноцитах - преобладание гранулярной эндоплазматической сети с полиморфными электронноплотными митохондриями.

4. При применении селеданта у 45 дневных поросят в поджелудочной железе объем паренхимы увеличивался незначительно и составлял 73,3 % , а стромы - 26,6 % . Паренхима в 90,99 % случаях состояла из экзокринной части, а в 9,01 % — эндокринной части. Достоверно увеличивался объем ядер ацинарных клеток на 58,99 %, и в них улучшалась оптическая плотность РНК на 22,6 %, а содержание белка - на 22,3 %.

5. В ультраструктуре ацинарных клеток в поджелудочной железе у 45 дневных поросят при применении селеданта значительно выявлялась гранулярная эндоплазматическая сеть, и увеличивалось содержание прозимогена и зимогена. При этом в эндокриноцитах преобладало наличие более выраженных мембран гранулярной эндоплазматической сети и комплекса Гольджи при отсутствии секреторных гранул зимогена.

6. У 45 дневных поросят в поджелудочной железе при применении липотона наблюдалось увеличение объема паренхимы (91,08 %), преимущественно за счет экзокринной части. Объем ядра в ацинарной клетки увеличивался на 17,8 %, оптическая плотность РНК - на 19,4 % и белок -на 14,7 %. Отмечалось улучшение в ультраструктурной организации ацинарных и эндокринных клеток за счет увеличения количества секреторных гранул, электронноплотных митохондрий и гранулярной эндоплазматической сети.

7. Применение селеданта у 45 дневных поросят значительно улучшало морфологические, морфометрические, гистохимические и

ультраструктурные показатели поджелудочной железы (по сравнению с липотоном).

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Морфологически обосновано применение селеданта в дозе 20 мкг/кг массы тела, а липотона - в дозе 1 мл/кг массы тела поросятам в возрасте 20 -25 дней, дважды с интервалом 10-12 дней.

2. Материалы диссертации включены:

- во «Временное наставление по применению селеданта для сельскохозяйственных животных» (Утверждено ветеринарным отделом Воронежского областного управления сельского хозяйства 15.02.2005 года);

- в методическое пособие «Методы морфологических исследований (второе издание - 2007) (Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30.03. 2000).

6. Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Сулейманов С.М. Морфология органов лимфоидной и пищеварительной систем у молодняка животных при коррекции иммунного статуса / С.М. Сулейманов ... Е.А. Попова и др. // Ветеринарная патология, № 3 (14), 2005. С. - 75-80.

2. Гребенщиков A.B. Влияние селеданта на митотическую активность ядер экзокринных клеток поджелудочной железы поросят/А.В. Гребенщиков, С.М. Сулейманов... Е.А. Попова // Материалы международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Авророва A.A. 22-23 июня 2006 г., Воронеж, 2006. С. -114-115.

3. Попова Е.А. Гистохимия белка, белоксодержащих веществ и нуклеиновых кислот в эндо- и экзокринном эпителии поджелудочной железы

поросят при применении селеданта / Е.А. Попова, A.B. Гребенщиков // Материалы 16-й Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии животных «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных». 20-22 сентября 2007 г. Ставрополь, 2007. С. - 203-204.

4. Сулейманов С.М. Методы морфологических исследований / С.М. Сулейманов ... Е.А. Попова //Методическое пособие, 2-е издание. Воронеж, 2007, С. - 86.

5. Попова Е.А. Морфофункциональная и ультраструктурная организация ацинуса поджелудочной железы у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней / Е.А. Попова // Сборник статей первой Международной научно - практической конференции преподавателей, молодых ученых и аспирантов аграрных вузов РФ «Инновационные процессы в АПК», М., РУДН, 2009, С. - 201-203.

6. Попова Е.А. Ультраструктура экзокринной части поджелудочной железы у поросят при применении липотона / Е.А. Попова, С.М. Сулейманов // Сборник статей первой Международной научно -практической конференции преподавателей, молодых ученых и аспирантов аграрных вузов РФ «Инновационные процессы в АПК», М., РУДН, 2009, С. -203-205.

Подписано в печать 17.04.2009 г. Формат 60x84/16. Гарнитура «Times New Roman». Бумага офсетная. Усл. печ. л. 2,00. Тираж 60. Заказ 146.

Цифровая типография «Скоропечатня» 394000, Воронеж, пер. Солдатский 18, тел.:616-228.

Актуальность темы. Развитие промышленного животноводства поставило перед наукой ряд проблем, обеспечение получения здорового приплода с высокой резистентностью и реактивностью, разработкой более эффективных средств и способов общей неспецифической и специфической профилактики и терапии болезней животных (А.Г.Шахов с соавт., 1999; С. М. Сулейманов, 2000).

На фоне относительно стабильного эпизоотического благополучия по классическим инфекциям животноводства за последние 10 лет в целом по стране из года в год более 70% молодняка персболевают различными болезнями с общими клиническими синдромами нарушения функции систем органов пищеварения и дыхания (А.Г.Шахов с соавт. 2000). При этом маточное поголовье до 50% случаев также переболевает различными болезнями органов воспроизводительной системы (В. Д. Мисайлов с соавт., 2001).

В. Т. Самохин с соавт. (1997) считают, что биологический комплекс "мать-плод-новорожденпый " следует рассматривать как единую систему. Так как существует прямая зависимость между состоянием обмена веществ, уровнем естественной резистентности организма матерей, внутриутробным развитием плода, состоянием здоровья и сохранностью новорожденного молодняка. Авторы подчеркивают, что нарушения практически всех видов обмена веществ, в первую очередь сказывается на интенсивности биосинтеза белков, в том числе ферментов, гормонов, иммуноглобулинов и других, что приводит к развитию изменения характера течения обменных процессов в органах и тканях.

Поджелудочная железа играет важнейшую роль в регуляции углеводного обмена, а как следствие нарушения углеводного обмена возникает нарушение жирового. Организм компенсирует недостаточное использование углеводов тканями увеличением потребления жиров. Как известно, при расщеплении жиров образуются кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная и в-оксимасляная кислоты) в избыточном количестве, что ведет к развитию ацидоза (Я. Д. Киршенблат, 1971).

Кроме того применение лекарственных средств специфического действия не может устранять основную причину патологического состояния, являющегося следствием нарушения метаболизма, обеспечивающего обмен веществ и энергии между клеткой и средой. Нарушение обмена веществ приводит к снижению иммунологической резистентности организма животных (А. М. Земсков, 1994; В. С. Бузлама, 2000).

Важнейшую роль в обеспечении здоровья человека и животных играют микроэлементы, которые служат эффективными биокатализаторами всех обменных процессов. При их недостатке в организме начинаются патологические изменения, приводящие к хаотически-нерегулируемой жизнедеятельности всех органов и систем (В. Т. Самохин, 2003).

Одним из таких микроэлементов является селен. Последнее время все чаще у людей и животных встречается дефицит этого микроэлемента. Селен, связан с функцией более ста ферментов (А. Н. Алимеико, 2004).

Присутствие этих ферментов выражено в кислородообогощенных органах, таких как мозг, сердце, почки. Селенопротеин Р, который синтезируется в особенно больших количествах на поверхности эндотелия головного мозга и играет антиишемическую и антистрессовую роль в нейропротективных механизмах. (О. А. Громова с соавт., 2004).

JI. В. Аникина с соавт. (1991) считают, что у селенодефицитных животных идет постепенное нарушение функциональных возможностей поджелудочной железы, вследствие чего, развивается гипоиисулинемия. Происходит угнетение активности пируватдегидрогеназного комплекса, накапливается его субстрат. В поврежденных мембранах подавляется диффузия кислорода, создаются условия для гипоксии. Это приводит к усилению генерации молочной кислоты и к гиперлактацидемии - одному из серьезнейших признаков сахарного диабета. Добавление препаратов селена в диету благотворно действует на многие структуры и функции организма, прежде всего, через нормализацию липидного и липопротеидного обмена.

Кроме того, селен, необходим для защиты мозга. Селедант поддерживает способность клетки к идеальной саморегуляции и постоянному очищению от недоокисленных продуктов обмена — свободных радикалов, которые постоянно " забиваю т" все живые клетки и разрушают их.

Использование тканевой терапии в ветеринарии также является в последнее время актуальной темой. При комплексном применении специфических средств и тканевых препаратов значительно уменьшается риск рецидивов заболеваний (Н. М. Розумей, 2005). 1 Тканевые препараты обладают богатым спектром действия, а именно, являются универсальными иммуномодуляторами, обладают аптиоксидантными свойствами, способствуют усилению клеточной и гуморальной активности систем организма, способствуют активации общей резистентности организма.

Плацентарный препарат липотон имеет в своем составе гексозы и триглицериды, улучшающие углеводный и липидный обмен, фосфолипиды являющиеся структурным звеном клеточных мембран и мембран органелл, регулирующие проницаемость биомембран и активность мембрано-связывающих ферментов, обеспечивающие нормальное течение окислительно-востановителыюго фосфорилирования в клеточном метаболизме. Витамины А и Е предотвращают образование свободных 1 радикалов, повреждающих ткани организма (Г. А. Востроилова, 2004).

По данным В. И. Масычева с соавт. (1995) под влиянием тканевых препаратов происходит нормализация обмена веществ, усиливаются анаболические и катаболические реакции организма, что ведет к повышению сопротивляемости. Кроме того, есть данные, что биогенные стимуляторы индуцируют биосинтез ферментов.

В проблеме микроэлементов, в частности, селена, а также в изучении действия тканевых препаратов, несмотря па многочисленные исследования, остаются белые пятна, начиная с практического применения и заканчивая изучением возможных отдаленных эффектов. Практика ведения животноводства требует от ветеринарной науки всестороннего познания

I 1 закономерностей морфофункциональпых особенностей, как всего организма, так и отдельных систем организма животных.

В сложном комплексе систем организма, обеспечивающих обменные процессы, значительную роль занимает поджелудочная железа.

До настоящего времени недостаточно изучены морфофункциональные изменения и ультраструктура в поджелудочной железе у поросят, как важнейшего регулятора углеводного обмена и общего гормонального статуса организма животного при применении селенсодержащих и тканевых препаратов.

В связи с этим возникла прямая необходимость изучения функциональной морфологии поджелудочной железы в процессе применения селеносодержащего препарата селеданта и биогенного стимулятора липотона в целях определения сущности механизма действия этих препаратов.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение структурной организации поджелудочной железы у молодняка свиней в норме и при применении селеданта и липотона.

В связи с этим на разрешение ставились следующие задачи:

1. Изучение морфофункциональной и ультраструктурной организации поджелудочной железы у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней;

2. Изучение морфофункциональной и ультраструктурной организации поджелудочной железы у 45 дневных поросят при применении селеданта;

3. Изучение морфофункциональной и ультраструктурной организации поджелудочной железы у 45 дневных поросят при применении липотона

Научная новизна. Морфологическими, морфометрическими, гистохимическими и электронно-микроскопическими методами исследований впервые изучена структурная организация поджелудочной железы у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней и при применении им селеданта и липотона. Установлено, что в 45 дневном возрасте у клинически здоровых поросят структурная организация поджелудочной железы сформирована из 70% экзо- и эндокринной частей и 30% - стромы. Применение поросятам препаратов (селедант и липотон) увеличивало общий объем паренхимы ПЖ за счет улучшения структурной организации ацинарных и эндокринных клеток. При этом в ультраструктуре ацинарных клеток значительно выявлялась гранулярная эндоплазматичсская сеть, и увеличивалось содержание секреторных гранул зимогена. Последние отсутствовали в эндокриноцитах.

Научно-практическая значимость. Знание структурной организации поджелудочной железы у поросят в норме и при применении селеданта и липотона позволяет научно обосновать их применение молодняку свиней.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Структурная организация поджелудочной железы у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней.

2. Влияние селеданта на морфофункциональное состояние поджелудочной железы у 45 дневных поросят.

3. Влияние липотона на морфофункциональное состояние поджелудочной железы у 45 дневных поросят.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены, обсуждены и одобрены на отчетных сессиях Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии (2004-2007гг.); международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора А.А. Авророва (Воронеж, 2006); на 16-ой Всероссийской научно-методической конференции "Современные проблемы патологической анатомии и диагностики болезней животных" (Ставрополь, 2007); на международной научно - практической конференции преподавателей, молодых ученых и аспирантов аграрных вузов РФ «Инновационные процессы в АПК» (Москва, 2009).

Публикация. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, одна из которых опубликована в журнале "Ветеринарная патология" № 3 в 2005 году.

Внедрение результатов исследований. Полученные данные использованы:

- в методическом пособии «Методы морфологических исследований» (второе издание - 2007) (Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМРАСХН 30.03.2000);

- во «Временном наставлении по применению селеданта для сельскохозяйственных животных» (Утверждено ветеринарным отделом Воронежского областного управления сельского хозяйства 15.02.2005 года).

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 147 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, выводы, практические предложения и список использованной литературы, который включает 212 источников, в том числе 65 зарубежных. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 70 рисунками.

6. Выводы

1. Поджелудочная железа у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней состояла в 70 % случаях из паренхимы, а в 30 % - из стромы. Паренхима имела дольчатое строение и ее 91,14 % площади принадлежали экзокринным железам, а 8,86 % - эндокринным островкам Лангерганса.

2. У клинически здоровых поросят в экзокринной части паренхимы поджелудочной железы ацинусы с диаметром 52,14 ± 1,24 мкм состояли из 712 плотно прилегающих друг к другу конусовидных ацинарных клеток с высотой 10,66 ± 0,41 мкм, основанных на базальной мембране. Эндокринные островки в незначительном количестве диффузно были рассеяны по всей паренхиме поджелудочной железы в диаметре 89,12±10,1 мкм и с площадью 5351,87 ± 105,6 мкм2, которые состояли преимущественно из В-клеток.

3. В ультраструктуре ацинарных клеток поджелудочной железы у клинически здоровых поросят в возрасте 45 дней характерно было наличие гранул зимогена и прозимогена, а в эндокриноцитах - преобладание гранулярной эндоплазматической сети с полиморфными электронноплотными митохондриями.

4. При применении селеданта у 45 дневных поросят в поджелудочной железе объем паренхимы увеличивался незначительно и составлял 73,3 % , а стромы - 26,6 % . Паренхима в 90,99 % случаях состояла из экзокринной части, а в 9,01 % - эндокринной части. Достоверно увеличивался объем ядер ацинарных клеток на 58,99 %, и в них улучшалась оптическая плотность РНК на 22,6 %, а содержание белка - на 22,3 %.

5. В ультраструктуре ацинарных клеток в поджелудочной железе у 45 дневных поросят при применении селеданта значительно выявлялась гранулярная эндоплазматическая сеть, и увеличивалось содержание прозимогена и зимогена. При этом в эндокриноцитах преобладало наличие более выраженных мембран гранулярной эндоплазматической сети и комплекса Гольджи при отсутствии секреторных гранул зимогена.

6. У 45 дневных поросят в поджелудочной железе при применении липотона наблюдалось увеличение объема паренхимы (91,08 %), преимущественно за счет экзокринной части. Объем ядра в ацинарной клетки увеличивался на 17,8 %, оптическая плотность РНК- на 19,4 % и белок-на 14,7 %. Отмечалось улучшение в ультраструктурной организации ацинарных и эндокринных клеток за счет увеличения количества секреторных гранул, электронноплотных митохондрий и гранулярной эндоплазматической сети.

7. Применение селеданта у 45 дневных поросят значительно улучшало морфологические, морфометрические, гистохимические и ультраструктурные показатели поджелудочной железы (по сравнению с липотоном).

7. Практические предложения

1. Морфологически обосновано применение селеданта в дозе 20 мкг/кг массы тела, а липотона - в дозе 1 мл/кг массы тела поросятам в возрасте 20 — 25 дней, дважды с интервалом 10-12 дней.

2. Материалы диссертации включены: во «Временное наставление по применению селеданта для сельскохозяйственных животных» (Утверждено ветеринарным отделом Воронежского областного управления сельского хозяйства 15.02.2005 года);

- в методическое пособие «Методы морфологических исследований» (второе издание - 2007) (Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30.03. 2000).