Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Moнo- и ассоциативные вирусные респираторные инфекции крупного рогатого скота (иммунологическая диагностика, профилактика и терапия)

Академия аграрных наук Республики Беларусь

Белорусский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского

УДК 619:616.98:578.83.31 -076-084. :636:612.017.И/Л2

Красочко Петр Лльбинович

Mono- и ассоциативные пнрусные респираторные инфекции крупного рогатого скота (иммунологическая диагностика, профилактика и терапия)

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммуныюгия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Минск — 1997 г.

Работа выполнена в Белорусском научно - исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. С. Н. Вышелесского и Молдавском научно-исследовательском институте животноводства и ветеринарии НПО "Заря"

Научный консультант - академик Академии Аграрных наук Республики Беларусь , • доктор ветеринарных наук, профессор, Ковалев H.A.

Официальные аппоненты: Член-корреспондент FACH, доктор биологических наук, профессор Воронин Е.С. Член-корреспондент ААН РБ, доктор ветеринарных наук, профессор Лемеш В.М Доктор медицинских наук, профессор Семенов В.М.

Оппонирующая организация - Институт экспериментальной и клинической вете

ринарной медицины Украинской академии . . аграрных наук

Защита состоится " & 1997 года в ¿ft. _ часов на заседании

Совета по защите диссертаций Д 05.16.01 в Белорусском научно - исследовательском институте зкспермиентальной ветеринарии им. С. Н. Вышелесского по адресу: 223020, г. Минск, n/о Кунцевщина, БелНИИЭВ им. С. Н. Вышелесского

, С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Белорусского научно -исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. С. Н. Вышелесского

•Автореферат разослан " 6 997

'года

Ученый секретарь Совета по защите диссертаций, доктор ветеринарных Р

йаук. профессор а Л. Линник

Актуальность темы

Современное ведение мясного и молочного скотоводства, связа-ное с концентрацией поголовья, комплектованием животноводческих ферм и комплексов одновозрвстными животными с однородным генетическим потенциалом, что способствует быстрому распространению инфекционных заболеваний, прежде всего вирусной этиологии (П.П.Фукс, 1989).

Среди таких болезней выделяются пневмоэитериты, которые наносят наибольший экономический ущерб.В их этиологической структуре играют роль вирус инфекционного ринотрахеита (ИРТ), па-рагриппа-3 (ПГ-3) , респираторно-синтициальный вирус (PC),вирус диареи (ВД), аденовирусы (АдВ). Это так назывемЫе "малые" инфекция, которые у здоровых животных с нормальными функциями иммунной системы протекают бессимптомно без выраженных клинических признаков. Вместе с тем, когда в патологический процесс вовлекается несколько вирусов, то есть при смешанной или ассоциативной инфекции, в особенности на фоне'нарушенного обмена веществ и угнетен-,, ной иммунной системы развиваются тяжелые формы пневмоэитеритов, часто с летальным исходом, а переболевшие животные отстают в росте и развитии (Н.Н.Крюков, 1972; Е.В.Андреев, 1978;; Н.А.Ковалев, 1989; В.П.Литвин,1991; В.Н.Сюрин, 1991; П.П.Фукс, 1995; Е.С.Воронин, 1996 и др.

Полиэтиологичность пневмоэитеритов существенно усложняет вакцино- и серопрофилактику, а развитие иммуиодефицитных состояний ставит под сомнение ее целесообразность. Поэтому разработка точных методов прижизненной диагностики, оценка состояния иммунной системы, а также эффективных иммуностимуляторов, действующих на разные звенья иммунной системы является актуальной задачей.

Связь работы с крупными научными прс"раммами. темами

Работа выполнялась в 1985 - 1990 годы а Молдавском НИИ животноводства и ветеринарии и Белорусском НИИ экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышедесского и являлась частью те;.: "Разработать систему ветеринарных мероприятий по профилакгш:?, лечению инфекционных, ннвазионнил к незаразных болезней животных, пчел и птиц, повышению саннтарного качестна продуктов животноводства" (номер Iосрегистрацин 4-01. 860038616) и "На основе бко-технологичесКих методов разработать м усовершенствовать средства диагностики ч профилактики наиболее распространенных инфекционных болезней, позволяющие обеспечить стойкое благополучно хо-

зяйств и сохранность животных до 95-98% (№ госрегистрации 142 от 6 декабря 1993 г.).

Цель и задачи исследований

Целью настоящих исследований явилась разработка и усовершенствование методов иммунологической диагностики, профилактики и терапии моно- и ассоциированных вирусных респираторных инфекций крупного рогатого скота.

Для выполнения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространение инфекционного ринотрахеита. вирусной диарен и респираторно-синтициальной инфекции крупного рогатого скота в хозяйствах Республики Беларусь и Республики Молдова.

2. Разработать новые эффективные способы выявления антигенов вирусов инфекционного ринотрахеита, диареи, респираторно-синтициальной инфекции и антител к ним в биологическом материале с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РИГА), торможения непрямой гемагглютинации (РТНГА), иммуиоферментного анализа (ИФЛ).

3. Разработать иммуностимулирующие препараты на основе непатогенных для теплокровных животных бактерий и продуктов пчеловодства, изучить их влияние на иммунную систему и лечебно-профилактическую эффективность при респираторных инфекциях.

4. Изучить состояние иммунной систеимы у телят с разным клиническим статусом И при иммунизации моно- и ассоциированными вакцинами на фоне стимуляции поствакцинального иммунитета.

5. Разработать и испытать в условиях производства комплексную систему по иммунологической диагностике, профилактике и терапии респираторных заболеваний телят.

Впервые к стране разработаны высокоэффективные эритроци-тарные диагностнкумы с антигенами вирусов инфекционного ринотрахеита, диарен и респираторно-синтициальной инфекции крупного рогатого скота для выявления антител в РИГА и антигенов в РТНГА (патент Республики Беларусь № 763, патент Российской Федерации № 1835659).

Впервые разработан способ оценки состояния В-системы лимфоцитов крупного рогатого скот» с помощью бактериального липополй-

сахарида в реакции бласттрансформации лимфоцитов (авторское свидетельство СССР №.¡554590).

Разработаны новые способы выявления антигенов и антител в иммуноферментнсм анализе при инфекционном ринотрахеите, вирус-hoíí диарее и респираторио-сиитнциалыюй инфекции крупного рогатого скота. Впервые теоретически обоснованы и практически использованы новые иммуностимулирующие препараты на основе бактериальных липонолисахаридов и продуктов пчеловодства при вирусных респираторных инфекциях крупного рогатого скота (заявки на иобре-тение в патентное ведомство Республики Беларусь № 9600174 от 12 апреля /996 г. и № 960314 от 24 июня 1996 г.).

Впервые изучено влияние препаратов серебра на репродукцию респираторных вирусов в системе in vitro и обосновано их одновременное применение с сывороточными препаратами для профилактики и терапии пнепмоэнтернтов телят вирусно-бактериальной этиологии (Заявка на изобретение в патентное ведомство Республики Беларусь № 960171 от 10 апреля 1996 г.). Впервые изучено влияние на иммунную систему телят моно- и ассоциированных вакцин против респираторныь заболеваний и предложены способы стимуляции иммунитета с помощью препаратов бактериального происхождения и препаратов цветочной пыльцы ti перги (Патент Российской Федерации № 2048120, Патент Республики Молдова № 257).

Практиче ска я_зн_;.чимость работы

Результаты экспериментальных исследований обогащают современные знания по вопросам диагностики, патогенеза, лечения и профилактики вирусных респираторных инфекций крупного рогатого скота, что позволяет с достаточно высокой точностью и эффективностью производить борьбу с данными заболеваниями. Разработанные современные методы диагностики вирусных респираторных инфекций позволяют ускорить постановку диагноза до 2-4 часов, что способствует ускорению проведения лечебно-профилактических мероприятий (Рекомендации утверждены НТС ГАП РМ в 1987, ГУВ МСХП РБ в 1991, ТУ !0 РМ 10-152-88, ТУ 10 РМ 150-153-88, ТУ 46 Украины 0494185-001-91, ТУ 10-07-006-93). Изучена, этиологическая структура возбудителей респираторных инфекций в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь и Республике Молдова, состояние иммунной системы и обмена веществ при данной патологии у телят. Разработанные средства, способы и схемы применения иммуностимулирующих, сывороточных и вакцинных препаратов для профилактики Я

терапии респираторных заболеваний телят позволяют значительно сократить заболеваемость и непроизводительное выбытие телят (Рекомендации утверждены НТС Агропромсоюза РМ в 1990 г., НТС МСХП РБ в 1995 г., ТУ (0-07-006-93, ТУ РБ 00028493.069-95, ТУ РБ 00028493.070.-95, ТУ РБ 00028493.124-95).

Применение указанных разработок в условиях производства позволяет в 5-10 раз сократить время постановки диагноза, в 3-5 раз сократить заболеваемость и непроизводительное выбытие молодняка крупного рогатого скота от вирусных респираторных инфекций.

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятии в 7 высших учебных заведениях Республики Беларусь, Украины и Российской Федерации.

Экономическая значимость полученных результатов

Внедрение в практику разработанных препаратов и способов их примения показало их высокую эффективность, позволяют сократить их заболеваемость и непроизводительное выбытие животных в 2-5 раз и достигнуть окупаемости ветеринарных мероприятий при использовании разработок от 2,47 до 40,39 рублей на 1 рубль затрат.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

— распространение вирусных респираторных инфекций в Республике Беларусь и Республике Молдова, что позволяет рационально осуществлять планирование нротнвоэпизоотнческих мероприятий на уровне областей и республик;

— результаты разработки и внедрения методов иммунологической диагностики инфекционного рин°трэ*.е|(гз, вирусной диареи Ч респнраторно-сннтициальнои инфекции крупного рогатого скота с помощью РИГА, РТНГА, ИФА, что позволяет проводить диагностике* ские исследования в сжатые срок^ И тем самым, с учетом этиологии заболевания, осуществлять соответствующие противоэпизоотические мероприятия:

— состояние обмена веществ и иммунитета у телят при вирусных респираторных инфекциях, что позволяет повысить эффективность комплекса лечебно-профилактических мероприятий на основе использования лекарственных средств, воздействующих на угнетенные звенья иммунной системы н обмена веществ;

— результаты разработки, апробации и внедрения иммуностимулирующих и противовирусных препаратов из продуктов пчеловод-

ства,"сапрофитных бактерий и препаратов серебра, позволяющие ускорить выздоровление больных, рост и разгитие выздоравливающих теляг: •

— закономерности иммунного ответа у телят после иммунизации их вакцинами при раздельном и комбинированном применении со стимуляцией 'поствакцинального иммунитета, позволяющие получать у животных напряженный иммунитет и снизжать заболеваемость телят респираторными инфекциями.

Личный вклад соискателя

Исследования по разработке методов иммунологической диагностики. профилактики и терапии вирусных респираторных инфекций, отработке параметров изготовления иммуностимулирующих и противовирусных, сывороточных препаратов проводились лично соискателем. При выполнении комплексных разработок -иммуно стимулирующих, сывороточных, вакцинных препаратов, молозивного арго-тиоглобулика личный вклад соискателя составлял 40 - 60"/».

Апробация результатов диссертации

Материалы диссертационной работы, касающиеся разработки способов иммунодиагностики и способов повышения резистентности организма животных удостоены Премии Комсомола Молдавии им. Б.Глаиана в области науки и техники (1988). Эритроцигярные диагно-стикумы с антигеном вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи н респираторно-син тнциального вируса экспонировались на ВДНХ Республики Молдова (1987, 1989, 1990).

Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены: на заседаниях Ученого Совета Молдавского НИИЖиВ (1985-1990 гг.) и Белорусского НИНЭЙ им. С.Н.Вышелесского (19911995 гг.): Всесоюзных научных конференциях и съездах (Кострома, 1988; Ростов-на-Дону, 1989; Москва, 1990; Нижний Новгород, !990; Новосибирск, 1991; Витебск, 1991); Республиканских научно-практических конференциях Республики Молдова ( Кишинев, 1986, 1989. 1990 г.г.); Международных и республиканских научно-практических конференциях Республик« Беларусь (Витебск, 1990, 1993, 1994, 1995.1996 г.г; Гомель 1992.); Республиканской ■ научной конференции "ЗшоЫктев уе(еппат)'о5 ргоЫетоз" (Кяншадорис, 1993 г.); Международных и республиканских научно-практических конференциях Украины (Харьков, 1993, 1994, 1995 г.г.); 'Международной научно-

практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарной ме-дицины"(Смоленск, 1996 г.).

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 481 страницах машинописного текста и состоит из: введения, общей характеристики работы, обзора литературы по теме и выбора напрвленпя исследовании, изложения общей методики и основных методов исследования», 8 глав собственных исследований, анализа и обобщения результатов исследовании, выводов и практических предложений. Список использованной литературы включает 531 наименование работ отечественных и зарубежных авторов. Материалы диссертации иллюстрированы 68 таблицами и 61 рисунками. В приложении на ¡31 страницах, приводятся документы и таблицы, подтверждающих результаты отдельных работ, их научную и практическую значимость,

ОБЩАЯ МЕТОДИКА И ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в лаборатории острых вирусных инфекций Белорусского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. С.Н.ВыШелесского (БелНИИЭВ), лаборатории вирусных заболеваний Молдавского научно-исследовательского института животноводства и • ветеринарии (МНИИЖиВ), животноводческих хозяйствах Республики Беларусь, Республики Молдова, республиканских, областных и районных ветеринарных лабораториях Республики Беларусь и Республики Молдова в период с 1985 по 1996 годы.

Штаммы вирусов » бактерци:

В работе использовались вакцинные штаммы вируса инфекционного ринотрахеита "ТК-А", "МВА-2/81", вируса диареи "Oregon С-24V", "ВК-1 № 28". респираторно-синтициального вируса "PCB" и "Randall",-полученные из ВГНКИ ветпрепаратов, Московской ветеринарной академии, Всероссийского института экспериментальной ветеринарии.

Для проведения иммунологических исследований и получения бактериальных липополисахаридов использованы штаммы бактерий: E.coli, St epidermidis №56, M.lysodeicticus. а также 22 штамма споро-образующих аэробных бактерий, полученные из ГИСК им. Тарасеви-4at Украинского Государственного научно-контрольного института ветпрепаратов м кормовых добавок, из Всесоюзной коллекции микро-ортанизммов института физиологии и биохнмиии микроорганизмов АН СССР.

Животные. Основного объектом исследований служили 2697 голов телят черно-пеотрой породы различного возраста, 160 кроликов пород белый великан, шиншилла массой 1-3 кг, 250 белых мышей, 70 белых крыс.

При проведении диагностических исследований исследовано 7146 сывороток крови коров, 471 теленка до I месячного возраста, 2370 телят, больных респираторными заболеваниями 1-6 месячного возраста, 2368 голов молодняка крупного рогатого скота старше 6 месячного возраста, сборное молоко от коров из 84 хозяйств, 106 носовых секретов, исследовано 600 парных сывороток крови. Выполнено более 37000 серологических, 32000 иммунохимических. биохимических и иммунологических исследовании. .

Реакцию непрямой гемагглютинацин (РНГА) ставили мнкроме-тодом в микротитраторе системы Такачи по В.Н.Сюрину с со-авг.(1986)

Реакцию торможения непрямой гемагглютинации (РТНГА) для обнаружения вирусных антигенов вирусов ИРТ. ВД в биологическом материале ставили но В.М.Никитину (1982).

Наборы для иммуноферментного анализа и его постановку для выявления противовирусных антител и вирусных антигенов в биологическом материале готовили по Х.Фримелю и Г.Хольцгайду (1987).

Для культивирования, титрования и накопления вирусов ИРТ, ВД и PC использовали первично-трипсинизированные клетки почки эмбриона коров (ПЭК) и перевивае мые клетки почки теленка ПТ-80 и ГТТ (линия "Таурус").

Иммунологическую перестройку организма телят изучали при введении моновакцин против ИРТ, ВД и PC-инфекции и их комбинаций с сочетании бактериальным липополисахаридом из Bac.alvei в дозе 5-7 мкг/мл ). Вакцины вводили телятам интратрахеально по одной иммунизирующей дозе двукратно с интервалом 21-28 дней.

У телят в крови изучали содержание Т- и В-лимфоцитов по Д.К.Новикову и В.И. Новиковой (1979); фагоцитарную активность нейтрофилов по Н.С.Кисляк и Р.В.Ленской (1978); антигенсвязы-вающие клетки по Ф.Ю.Гарибу и Н.Н.Гурарию (1988): реакцию бласт-трансформации лимфоцитов по К.С.Азаренку и В.М.Семенову (1987); концентрацию иммуноглобулинов М и G-классов по G.Mancini et al. (1964); противовирусные антитела в РИГА, ИФА; бактерицидную активность сыворотки крови по О.В. Смирновой и Т.А.Кузьминой (1966); концентрацию лизоцима по В.Г.Дорофейчуку (1978); титр бета-

лнзинов по В.Г.Дрофейчуку с соавт.()982); бактериальный титр интерферона по Н.С.Мурашовой с соавт.(1984).

Основные показатели состояния обменных процессов организма животных исследовали с помощью автоматического биохимического анализатора "Spektrum" фирмы "Abbot" (США), концентрацию микро- Ii макроэлементов - на атомно-абсорбционном спектрофотометре lL-951-Video-l 1. Коцентрацию общего белка сыворотки крови определяли рефрактометрически с помощью рефрактометра РПЛ-2.

Для получения мокоспеицифческнх антисывороток к иммуноглобулинам классов М и G крупного рогатого скота выделение их проводили из сыворотки крови с помощью ДЭАЭ-целлюлозы по В.П.Кьеткову и И.А,Петровской (1972) с последующей гипериммунн-зацпей кроликов под конъюнктиву глаза по Куш-Чинг-Яну (1957). Выделение бактериальных липополисахаридов из спорообразующнх бацилл и биологически-активных веществ из продуктов пчеловодства -с помощью щелочного и кислотного гидролиза по В.М.Никитину (1982).

Статистическая обработка цифрового материала проводилась по Р.Б.Стрелкову (1966) с учетом рекомендаций П.Ф.Рокицкого (1967.

Экономическую эффективность применения научных разработок рассчитывали согласно "Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий", утвержденной ГУВ МСХ СССР в 1982 г.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Анализ ветеринарной отчетности по респираторным и желудочно-кишечным заболеваниям крупного рогатого скота.

Данные ветеринарной отчетности ГУВ МСХП РБ на протяжение 5 лет с 1990 по 1994 г. показали, что заболеваемость крупного рогатого скота увеличивается из года в год и имеет стойкую тенденцию к увеличению. Так, заболеваемость животных возросла с 1990 года с 64,1% до 73,73% к 1994 году (в отношении к общему поголовью крупного рогатого скота). По отношению к родившимся телятам заболеваемость составила в 1990 году 205, 88%, а в 1993 году — 248,8%. Основную масса из числа заболевших животных приходилась на молодняк. Так, в 1990 году процент заболевшего молодняка по отношению к общему поголовью составил 45.9%, а в 1994 году — 55,3%. По отношению к числу родившихся телят заболеваемость молодняца щ 1990 голу составила 147,38%, а в (993 году — 190,46%. Лолучэдн)^ данные свидетельствует о fo^. что телята успераю! реррйрлеть 2-Э

раза в первые месяцы жизни, Кроме того, хотя из года в год умень-ается абсолютное число заболевших телят (2891,95 тысяч голов в 1990 и 518,02 тысяч голов в 1994 году), процентное отношение их как к общему оголовью, так и к числу родившихся продолжает увеличиваться (рис.1.).

Заболеваемость крупного рогатого скота была в основном обусловле-а поражением органов пищеварения и дыхательных путей.Их удельный вес зеличивался с 1990 по 1994 годы. При этом установлено, что начиная с ¡>90 года происходило увеличение удельного веса респираторных заболева-ип с 68.77% до 88,66% (по отношению к числу родившихся телят). Из числа ^болевших с поражением респираторных органов основная масса — это олодняк. Так, в 1990 году Молодняк, заболевший с признаками поражения еспираторных органов составил 61,62%, а в 1993 — 77,43%. Удельный вес елудочно-кишечных заболеваний был еще более высоким, чем респнратор-ых. Так, в.1990 году 93,43% крупного рогатого скота (по отношению к роившимся) болело с поражением желудочно-кишечного тракта, в 1992 году

- 118,76%. В 1994 году произошло снижение заболеваемости до 114,4%. В энной патологии крупного рогатого скота также основной удельный вес знимал молодняк. Так, в 1990 году 79,0% телят (по отношению к родив-гимся) переболело гастроэнтеритами, тогда как в 1992 году — 102,97%. ледует отметить, что в общей массе заболевших в 1990 году телята с рес-нраторными н желудочно-кишечными заболеваниями составили 162,2% от исла родившихся (молодняк — 140,65%), в 1991 — соответственно 180,05%

- 160,40%. в 1992 году: 201.84% — 178,32%, в 1993 году: 206,3% — 179,41%, 994 году: 196,11%— 170,55"»

-V-

Заболело крупного рогатого скота

В том числа молодняка

Период

□ 1990 П1991 01992 П1993

□ 1994

Рисунок 1. Заболеваемость крупного в Республике Беларусь зя 1990

рогатого скота -1994 гг.

Высокая степень заболеваемости крупного рогатого скота обуславливает и большое количество непроизводительного выбытия крупного рогатого скота за 1990-1994 годы. В 1990 году отход крупного рогатого скота составил 389,29 тыс. животных или 19,84% от числа родившихся, из них молодняка — 319,76 тыс. голов или 16,3%. В 1994 году отход животных составил 510,27 тыс. голов или 35,77% от числа родившихся, из них молодняка — 426,54 тыс. голов или 29,89% от числа родившихся. Непроизводительное выбытие молодняка составило 82-83,5% от общего числа выбывших животных.

Наиболее часто падеж телят был обусловлен поражением желудочно-кишечного тракта. Так, в 1990 году от поражения органов пищеварения пало 75,05 тыс. голов скота или 56,68% и из них молодняка — 49,78%. От респираторных заболеваний чало 32,17% животных и из них молодняка — 29,05%. В 1994 году этот показатель значительно возрос — по причине желудочно-кишечных заболеваний надо 88,75 тыс. голов крупного рогатого скота или 56,76% и из них молодняка — 52,21%. По причине респираторных заболеваний пало 54,61 тыс. голов или 34,9%, из них молодняка соответственно 49,5 тыс. голов или 31,66%:

Что касается вынужденного убоя, то в 1990 году по причине желудочно-кишечных заболеваний вынужденно убито 1 25,79 тыс. голов или 48,97%, из них молодняка — 43,19%. При респираторных заболеваниях вынужденно убито 92,79 тыс. голов или 36,12%, из них молодняка — 87,2! тыс. голов или 33,96%. В 1994 году при желудочно-кишечных заболеваниях вынужденно убито 51,65% и из них телят — 44,66%. При респираторных заболеваниях вынужденно убито 113,98 тыс. животных или 37,86%, из них молодняка — 34,35%.

Таким образом, проведенный анализ заболеваемости н отхода крупного рогатого скота свидетельствует о значительном ущербе, приносящем хозяйствам Республики Беларусь желудочно-кишечными и респираторными заболеваниями. Однако эти данные не позволяют дифференцировать заболеваемость и отход в зависимости от этиологической структуры

Разработка к совершенствование иммунологических ммсгодов диагностик-» вирусных респираторных инфекций телят.

Разработка способа нзготовцения эритроцитарных Д1^гдрсур)су-

раметров изготовления эритроцнтарны.-. диагкрртокумов за основу был взят метод сенсибилизации нативных эрцтроцитор с помощью кончогйрующего вещества - хлорида хрома, предложенный

R.Simmons (1957). В результате проведенных исследований установлено. что наиболе оптимальной оказалась методика, согласно которой стабилизация эритроцитов крупного рогатого скота в 5-10%-ной концентрации осуществлялась с помощью 0,2-0,5®о-наго раствора акролеина в течение 60-75 минут при температуре 37 С, танизация с помощью раствора танина 1:20000-1:50000 в течение 45-90 минут при 37 С. Изучение штаммов вирусов ИРТ, ВД и PC-инфекции показало, что для получения высокоактивного эрнтроцитарного диагностикума необходимы вирусы с инфекционной активностью не менее 4,0-5,5 iogi 50/мл. Пвышенню увствнтельности диагностнкума и его стабильности способствовало использование в процессе сенсибилизации конъюги-руюших веществ, вызывающих лучшее соединение антигена со стромой эритроцитов. Установлено, что 0,1-0.2%-ный раствор хлорида хрома с 1-2 объемами раствора трипанового синего в разведении 1:500 повышает чувствительность диагностических препаратов в 2-4 раза.В целом, при изготовлении эритроцитарных диагностикумов с антигенами вирусов ИРТ, ВД и PC-инфекции наиболее оптимальной оказалась ме-. тоднка, согласно которой компоненты соединяли в следующих пропорциях: 1-1,5 объема 50-60%-ной взвеси стабилизированных аролеи-ном, танизированных эр»троциторв крупного рогатого скота; 1 объ-емм антигенов вирусов ИРТ, ВД или PC-инфекции с титром не менее 4,5 lg ТЦД 50/мл: 1-2 объема трипанового синего в разведении 1:500; 1-2 объема изотонического раствора натрия хлорида; 4.5-6.5 объемов 0,1-0,2%-ного раствора хлорида хрома. Компоненты перемешивали и выдерживали при комнатной температуре 5-6 минут. Реакцию останавливали 10 объемами, 0,02М фосфатного буферного раствора. После трехкратного отмывания этим же раствором смесь ресуспендировали в консерванте (0,3%-ный фенолизированный изотонический раствор натрия хлорида с 1%-ом нормальной кроличьей или лощадиной сыворотки, инактвированной и абсорбированной эритроцитами) до 0,75-1°о-ной концентрации. Срок годности эритроцитарных диагностикумов - не менее 1 года при условии хранения при 2-4 градусах.

Специфичность полученных таким образом эритрорцитарных диагностикумов проверялась путем сравнения результатов постановки РИГА и других серологических реакций, применяемых для диагностики ИРТ, ВД и PC-инфекции. Результаты обсчитаны математически и на основании сопоставления титров антител был определен коэффициент корелляцин по Н.Ф.Рокнцкому (1967). Коэффициент корелляции при сопоставлении титров антител, полученных в РИГА и РН при ИРТ составил 0,79; при ВД - 0,75; при PC-инфекции - 0,65. При сопоставлении

РИГА и РСК - соответственно 0,64; 0,56 и 0,48. При сопоставлении РНГА и ИФА - 0,76; 0,79 и 0,83. Перекрестная РИГА с антисыворотками к другим возбудителям вирусной и бактериальной природы показала высокую специфичность синтезированных эритроцитарных днцг-ностикумов.

Отработка параметров выявления вирусных антигенов и бнол<Ь гическом материале с помощью реакции торможения HCjipj_M^)H_r&i магглютинацин (РТНГА). Для обнаружения антигенов вирусов ИРТ н ВД в биологическом материале с помощью РТНГА отработан конкурентный метод еа постановки. В основу постановки РТНГА положено изменение титра антител после взаимодействия исследуемого антигена с положительной сывороткой. Уменьшение титра антител в результате постановки РНГА с чистой положительной сывороткой и после ее взаимодействия с вирусным антигеном в 2 н более раз свидетельствует о наличии данного антигена в биологическом материале. При этом используется поливалентная положительная сыворотка, содержащая антитела к вирусам ИРТ н ВД в высоких титрах (не ниже 1:128). Антигены вирусов ИРТ и ВД с помощью РТНГА выявлялись в вытяжках из патматериала, носовых секретах, сыворотках крови от больных и переболевших респираторными ннфекцнями телят, а также в вируссо-держащей жидкости после культивирования вирусов на культуре клеток. При этом с помощью РТНГА в вытяжках из патматериала антигены вируса ИРТ выявлялись у 75,0% и ВД у 41,7% обследованных животных, в культуральной жидкости - соответсвенно у 65,7% и 35,7%, в сыворотках крови от больных телят у 58,0% и 52"«, сыворотках крови переболевших телят - у 46,5% и 33,3"», в носовых секретах от больных телят - у 10"о и 15% .У клинически здоровых и взрослых животных из неблагополучных но ИРТ и ВД хозяйств в биологическом материале вирусных антигенов обнаружено не было. Специфичность РТНГА подтверждали постановкой РИД с моноспецнфнческими сыворотками протиив ИРТ и ВД. Постановка РТНГА с биологическим материалом от больных н переболевших острыми респираторными инфекциями телят позволяет ускорить постановку диагноза и в то же время снизить трудозатраты,

Отработка парметров постановки ПФА для выявления антител к

изготовлении тест-систем для постановки иммуноферментного анализа с целью выявления антител к вирусам ИРТ, ВД и РС-инфекцин для иммобилизации вирусных антигенов использованы полистироловые панелн с плоским дном, ранние белки вирусов в концентрации 20-30 мкг/мл на иатрий-карбонатном

буфере с рН 9,6 в течение 18-20 часов. Исследуемые, положительные и отрицательные сыворотки разведнли от 1:50 до 1:150, контакт их с нммобилнзнрованными антигенами производился в течение 1-2 часов. Для выявления комплекса антиген-антнгело нспользуовйлнсь конъюга-ты пероксидазы хрена с моноклональными антителами против lg М рогатого скота в разведении 1:400-1:500 и моноснецнфнческнми цнти-сыворотками против lg G крупного рогатого скота в разведении 1:51:10 в течение 60 минут. Комплекс антиген-антитело-конъюгат выявляли субстратной смесью, состоящей из ортофенилендиамина и перекиси водорода, остановка реакции осуществлялась 10%-ным раствором серной кислоты. Учет производился спектрофотометрически или визуально.При этом положительной считалась реакция, в которой показатель оптической плотности исследуемой сыворотки превышал аналогичный показатель заранее отрицательной сыворотки в 2 и более раз. В результате использования данного метода постановки ИФА отмечены наиболее высокие показатели выявления антител в сыворотках крови больных, переболевших и вакцинированных против ИРТ, ВД и PC-инфекции животных.

Отработка параметров постановки ИФА для выявления антигенов вирусов ИРТ, ВД и PC-инфекции в биологическом материале За-основу при выявлении вирусных антигенов в биологическом материале был использован конкурентный способ постановки ИФА. Оценку метода осуществляли по снижению оптической плотности реакционной смеси, образуемой после нейтрализации противовирусных-.антнтел вирусным антигеном и выявлялся остаток антител,которые не были нейтрализованы вирусным антигеном. Постановку ИФА осуществляли в два этапа: на первом этапе производили соединение заранее положительной сыворотки в двойном титре (в разведении 1:75) с исследуемым или положительным вируссодержащим материалом в соотношении 1:1 в течение 60 минут; на втйром этапе производили постановку ИФА по методу, разработанному для выявления специфических антител. Параллельно в обязательном порядке в качестве положительного контроля использовалась положительная сыворотка в стандартном разведении (1:150).После спектрофотометрического учета ИФА производили сравнивание показателен оптической плотности заранее положительной сыворотки и этой же сыворотки после взаимодействия с исследуемым вирусным антигеном. Положительной считалась проба, в которой разница в показателях была не менее, чем 0,300 единиц оптической плотности. С помощью отработанного метода с высокой степенью достоверности производится идентификация выделяемых на куль-

туре клеток вирусов ИРТ н ВД, концентрация вирусов п вакцинах или диагностических антигенах. Кроме того, антигены вирусов ИРТ и ВД выявлялись в вытяжках из пораженных органов (соответственно 75,0 и 50"о положительных проб) и в сыворотках крови, из которых удалены иммуноглобулины ( у НЮ н 80%) от больных и переболевших респираторными заболеваниями телят, фекалиях от больных энтеритами телят {20 и 70"«).

Отработка параметров постановки ПФА для вылвае.НЦа-ЙЦДИЗЗа к вирусам (1РТ, ВД и РС в сборном молоке коров. Выявление противовирусных антител и молоке коров позволяет ускоршь постановку диагноза и установить циркуляцию возбудителен в стадах крупного рогатого скота. При отработке параметров выявления антител к вирусам ИРТ, ВД и РС-Инфекцни в сборном молоке было установлено, что удаление казеина следует осуществлять с помощью 2-4%-ного раствори молочной кислоты с последующим удалением его центрифугированием и 'централизацией двууглекислым натрием. Концентрацию молочных иммуноглобулинов лучше производить с помощью полиэтилен-гликоля ММ 6000 до 15%-ного насыщения. После предварительной подготовки проб постановка ИФА осуществляется по вышеописанному методу. В результате проведенных исследований сборных проб Молока из 84 хозяйств противовирусные антитела к вирусу ИРТ выявлены у 58,4% обследованных стад, к вирусу диареи - у 61,9%. к РС-внрусу - у 40.5"», что указывает на циркуляцию данных возбудителен среди крупного рогатого скота.

Этнологическая структурае вирусных респираторных инфекций в животноводческих хозяйствах. Наличие антител к вирусам-возбудителям респираторных инфекций в сыворотках крови крупного рогатого скота различных половозрастных групп и клинического состояния свидетельствует о степени ннфнцированости стад (у взрослых животных), а также о переболеванни молодняка вирусными инфекциями. В процессе работы для диагностики ИРТ использовано 2302 сыворотки крови.от коров из хозяйств Республики Беларусь и 4708 - из Республики Молдова; к вирусу диареи - соотвествеНно 1652 и 4559, РС-внрусу - 1617 и 160. Кроме того, от телят было происследовано 3072 сыворотки крови из хозяйств Республики Беларусь и 3893 проб сывороток из хозяйств Республики Молдова, В табл. 1 представлены результаты исследований сывороток крови от крупного рогатого скота различных половозрастных групп на наличие антител к вирусам ИРТ, ВД и РС-инфекцин в РИГА.

Таблица 1

Результаты исследования сывороток крови на наличие антител к вирусам - возбудителям респираторных инфекций в стадах Республики Беларусь и Республики Молдова_._

Наименование заболеваний

Иифенкционный рино-трахеит Вирусная диарея Респираторно-син-тициальная инфекция

№№ п/п Возрастные группы животных Страны СНГ исследовано проб положит результат (%) исследовано проб положит. результат <%) исследовано проб положит. результат (%)

1. Коровы Беларусь 2302 62.4 1652 83,1 1617 60,8

Молдова 4708 26,7 4559 42.1 160 53.2

2. Телята 1-6 мес. больных ОРЗ Беларусь 1062 37,9 1062 68,1 897 50,5

Молдова 1243 8,9 876 28,7 111 30,6

3, Телята 1-6. мес., переболевших ОРЗ Беларусь 1202 60,6 1202 81,1 1075 72,5

Молдова 641 44,3 641 60.5 176 60,8

4. Телята старше б месяцев Беларусь 308 65,9 308 87,7 308 80,8

Молдова 2010 38,1 1854 55,9 1854 73,4

5. Телята до 1 мес. Беларусь 312 29,5 312 57,7 312 44,2

Молдова 105 17,1 105 43,8 105 40,0

Из представленных данных видно, что в стадах крупного рогатого в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь и Республики Молдова в этиологической структуре вирусных респираторных инфекций основное место принадлежит вирусам ИРТ, ВД и в несколько меньшей степени - PC-инфекции. Так, у коров, антитела к вирусу ИРТ в Республике Беларусь выявлены у 6'2,4% обследованных животных, в Республике Молдова - у 26,7%; к ВД соответственно у 83,1% и 42,1 %; к PC-вирусу - у 60,8 и 53,2%. У больных острыми респираторными инфекциями телят антитела к ИРТ устанавливались соответственно у 37,9% и 8,9%; к ВД - у 68,1 % н 28,7%; к PC-вирусу - у 50,5% и 30,6%; у переболевших ОРЗ телят антитела к ИРТ были у 60,6 и 44,3%; к ВД -81,1 и 60,5%; к PC-вирусу - 72,5 и 60,8% обследованных животных. Несколько выше были показатели у молодняка старше 6 месяцев: антитела к ИРТ были у 65,9 и 38,1% животных; к ВД - 97,7 и 55,9%; к РС-вирусу - у 80,8 и 73,4%. Наличие антител к вирусам - возбудителям респираторных инфекций у молодняка крупного рогатого скота старше 3-4-х месячного возраста свидетельствует о переболевании животных данной инфекцией (Н.Н.Крюков, 1982). Исследование наличия антител к вирусам ИРТ, ВД и PC-инфекции у телят до 1-го месячного возраста показало, что у жнвотных этой возрастной группы отмечается низкий уровень колострального иммунитета. Это приводит к высокой заболеваемости телят пневмоэнтеритами. Так, колостральные антитела у телят в диагностических титрах к вирусу ИРТ из хозяйств Республики Беларусь устанавливались у 29,5% обследованных животных, в Молдове - у 17,1%; к ВД соответственно у 57,7 и 43,8%; к РС-вирусу - у 44,2 и 40,0%. Полученные результаты дают основание сделать заключение в том, что данные возбудители являются ведущими в возникновении респираторных инфекций телят в животноводческих хозяйствах Беларуси и Молдовы.

В современных условиях ведения животноводства, обусловленного концентрацией молодняка на ограниченных площадях важное место в возникновении вирусных респираторных инфекций играют ассоциации вирусов. При этом установлено более тяжелое течение инфекций, вызываемых двумя и более возбудителями одновременно. В табл.2 представлены результаты изучения моно- и ассоцативных вирусных респираторных инфекций у телят различного возраста к клинического состояния Республики Беларусь.

Из данных исследования как одиночных, так и парных сывороток больных телят виджно. что переболеванне их в основном обусловлено ассоциацией вирусов, состоящей из 2-х возбудителей одно-

Таблица 2

Выявление moho- а ассоциативных вирусных респираторных инфекций у коров к телят различного возраста и клинического __состояния а Республике Беларусь___

Выявлено:

№ Возрастные груп-пы животных Количество исследованных проб мононпфекдии ассоциативные инфекции

п/гг • ИРТ ВД РС ИРТ + ВД ИРТ -1- РС ВД + РС ИРТ+ВД +РС

к-во % к-во % к-во % . к-во % к-во 0, к-во «0 к-во 0 0

Коровы 1617 37 2.3 209 12.9 43 2.7 241 14.9 20 1.2 153 9.5 746 46.1

2. Телята 1-6 мес., больные ОРЗ 1062 за 3.6 321 30.2 63 5.9 . 138 13.0 28 2.6 163 15.4 211 19.9

з. Телята 1-6 мес-переболершие ОРЗ 1202. 52 4.3 120 10.0 60 5.0 143 11.9 46 3.8 161 13.4 482 40.1

4. Телята старше 6 месяцев, клиинчес-ки здоровые 308 5 1.6 36 11.7 6 1.9 8.4 16 5.2 10 3.2 43 13.9 173 56.2

5. Телята, бальные и переболевшие ОРЗ (исследование пар ныл сывороток) 500 (парные сыворотхи) 31 12.4 41 ¡6.4 21 34 ¡3.6 15 6.0 26 10.4 !7 ,6.8

временно- ИРТ+ВД (13,0% и 13,6%)) или ВД+РС (15,4% и 10,4%). У телят 1-6-ти месячного возраста и более старших переболевших ОРЗ выявляются ассоциации из трех возбудителей одновременно -ИРТ+ВД+РС (40,1% и 56,2%). Характерно то, что моноинфекции чаще выявляются у больных телят (39,7%). У коров и переболевших телят этот показатель значительно ннже (17,9% и 19,3%).

Состояние иммунной системы и обмена веществ у телят при вирусных респираторных инфекциях.

Переболевание телят ассоциативными вирусными респираторными инфекциями сопровождалось значительным угнетением клеточного к гуморального звеньев иммунной системы. Наиболее характерным являлось уменьшение количества Т-лимфоцитов (в 1,2 раза меньше, чем у клинически здоровых), В-лимфоцитов (в 1,28 раза), фагоцитра-ной активности нейтрофилов периферической крови (в 1,23 фагоцит-раное число и 1,56 - фагоцитарный индекс).

Изучение состояния гуморального иммунитета показывает, что в 2,7 раза снижается количество лизоцима, в 1,3 раза бактерицидная активностьт сыворотки крови, 1,6 раза титр интерферона, в 4,3 раза увеличивается количество циркулирующих иммунных комплексов. Кроме того, отмечен повышенный титр противирусных антител. 1С вирусу ИРТ у больных телят он был в 2,5 раза выше, чем у здоровых, к ПГ-3 в 2,53 раза, к РС-вирусу - в 1,2 раза.

Наряду с изменениями в иммунной системе переболевание телят вирусными респираторными инфекциями сопровождалось значительными изменениями в белковом, азотистом, углевордьом, липидном и пигментном обменах организма животных при респираторных инфекциях. Содержание низкомолекулярных азотистых веществ (мочевины, креатинина и мочевой кислоты) в сыворотке крови у больных и переболевших телят превышало уровень здоровых животных в 1,2-2,2 раза. Это взаимосвязано с повышенным содержанием циркулирующих нммунных комплексов ( в 4,3 и 5 раз выше чем у здоровых), которые воздействуют на фильтрующую способность почечных канальцев. Концентрация бнллирубина в крови у больных и переболевших телят была в 1,3-1,5 раза выше, чем у здоровых, а концентрация глюкозы в 1.23-1,27 раза и липндов в 1.1-1,47 раза ниже. Была повышена активность аспартатамккотрансферразы в 3,14 (у больных) и в 3,2 раза (у переболевших), алцнинамннотрансферразы соответсвено 2,7 и 5,09 раза; креатинннкиназы в 4.6 и 1.8 раза, понижена активность амилазы в 1.05 и 1,16 раза, щелочной фосфатазы в 1,73 и 1,6 раза, холинэстеразы в 1,28 и 1.05 раза. Значительные изменения отмечены и при изучении

минерального обмена - у больных ОРЗ телят отмечено повышение концентрации меди в 1,23, калия в 1,13 раза, снижение концентрации кальция в 1,07 раза, железа в 1,72 раза, цинка в 1,4 раза.

Полученные данные свидетельствуют о том, что при переболева-нии респираторными заболеваниями в патологический процесс вовлекаются не только органы дыхания, но и угнетаются основные звенья иммунитета, обмена веществ, а также поражаются жизненно-важные и системы организма теленка - сердечно-сосудистая, выделительная, отмечаются нарушения и работе печени, почек, сердечной мышцы.

Иммуностимулирующие препараты в терапии и профилактике вирусных респираторных инфекций телят. Иммунологическая перестрой! ка организма телят н лечебно-профилактическая эффективность Т-активина при респираторных заболеваниях. В ряду известных иммуностимулирующих препаратов, нашедших применение в профилактике и терапии респираторных заболеваний телят особое место принадлежит Т-актнвину, представляющему собой комплекс полипептидов из тимуса крупного рогатого скота. Проведенные исследования по изучению лечебно-профилактической эффективности и влияния на клеточный иммунитет больных ОРЗ телят показали его высокую активность. В частности отмечено стимулирующее влияние на лимфоциты периферической крови ( на общее их количество, на Т-и В-систему лимфоцитов). Установлено, что в результате заболевания у телят отмечается значительное угнетение Т- и В-звеньев лимфоцитов - до 10,0+0,95 и 10,2+0,84%. Но через 7 дней после обработки Т-активином отмечается значительное увеличение их количества - соответсвенно до 19,4+1,29% и 13.0+0,9%. К 28 дню наблюдения количество Т-лимфоцнтов возросло до 24,8+0,9% и В-лимфоцитов до1 5,4+1,72%. У контрольных животных значительных колебаний в содержании Т- и В-лимфоцитов не обнаружено. Обработка телят Т-активином восстанавливала угнетенные звенья клеточного иммунитета у телят, больных ОРЗ, что способствовало быстрейшему их выздоровлению.

Лечебно-профилактическая эффективность Т-актнвина была проверена на 2-х группах телят, заболеваемость в которых составляла 50%. После обработки Т-активином, число больных телят через 4 дня снизилось до 25%, а через 20 дней - до 4,5%, то[дз как среди телят контрольной группы к И) дню больныхбыло 63,6%. К 20 дню число за-болевшихбыло 36,4%, а к 40 дню - 9.1%. Полное выздоровление телят контрольной группы произошло к 45 дню наблюдения. Экономическая эффективность от применения Т-активина составляет 2,54 рублп на 1 рубль затрат.

Иммунологическая и лечебно-профилактическая эффективность протаргола при вирусных респираторных инфекциях. Из имеющихся антибактериальных химиотерапевтических препаратов известны препараты серебра - протаргол и колларгол, которые обладаютпротиво-вирусными и иммуностимулирующими свойствами. В результате проверки различных растворов протаргола на культуре клеток отмечено угнетение репродукции вирусов ИРТ и ВД при 0,25-0,5%-ной его концентрации. Проведенные исследования влияния 0.5%-ного раствора протаргола на иммунную систему позволили установить его иммуностимулирующий эффект. Так, через 14 дней после обработки у телят отмечена увеличение Т-лимфоцитов на 49%, В-лимфоцитов на 55%, фагоцитарного числа на 15%, фагоцитарного индекса на 58%, бактерицидной активности сыворотки крови на 198%, общего белка сыворотки крови на 34%. Это позволило применить его для лечения вирусных респираторных инфекций животных. Протаргол для лечения телят использовали в 0,5%-ной концентрации на неспецифическом иммуноглобулине. Применялось интратрахеалыюе и аэрозольное введение . Ин-тратрахеально раствор протаргола вводили 3-4-х кратно с интервалом в 3-5 дней, аэрозольно- в дозе 2 мл на 1 кубический метр помещения 1 раз в 3-5 дней с экспозицией не менее 60 минут. В результате проведенных исследований коэффициент заболеваемости интратрахеально обработанных телят снижается с 0,24 до 0,08, аэрозольно обработанных - с 0,42 до 0,24. Окупаемость вегмероприятий сответственно составляла 12,01 и 8,81 рублен на 1 рубль затрат.

Кроме вышеописанных методов была изучена эффективность пе-рорального.введения протаргола. Для этого был создан комплексный препарат "Молозивный арготиоглобулнн", в состав которго входит молозивный иммуноглобулин как источник иммуноглобулинов-антител к возбудителям вирусно-бактериальной природы, протаргол как антибактериальное, противовирусное и иммуностимулирующее вещество и тиосульфат натрия как антитоксическое и иммуностимулирующее вещество. Для отработки соотношения компонентов, их взаимного влияния друг на друга, определения терапевтической и профилактической доз была проведена серия лабораторных и производственных опытов. В результате установлено, что оптимальной лечеб-ио-профилактическон дозой препарата "Молозивный арготиоглобу-лин" является 100 мл при 2-3-х кратном использовании 1 раз в день. Производственные испытания его п различных животноводческих хозяйствах показали высокую эффективность. Так среди обработанных телят отход составлял от 0 до 3,4%. тогда как у необработанных - от

15 до 23,3%. Экономическая эффективность от применения. "Молозивного арготиоглобулина" составляла 8,16 рубля на 1 рубль затрат.

Стимуляция иммунной системы телят при вирусных респираторных инфекциях с помощью бактериальных.липщ1щдсдхавнд0вл Известно, что для стимуляции иммунной системы организма животных используются бактериальные лнпоплисахариды (ЛПС), являющиеся поликлональными активаторами В-системы лимфоцитов. Обладая высокой иммунологической активностью, данный вид иммуностимуляторов, особенно полученных из грамотрицательных бактерий нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта организма животных и человека,обладает высокой реактогениостью. Поэтому путем экспериментальных исследований из 22 различных штаммов микроорганизмов с использованием таких иммунологических тестов, как реакция бласттрансформацин лимфоцитов, нагрузочные тесты с лейкоцитами, взятыми от животных с иммунодефицнтами, был ртобран ЛПС из спо-рообразующей аэробной бактерии - Вас.а1уе1 ВКМ-724 - возбудителя европейского гнильца пчел. Данный микроорганизм не имеет контакта с теплокровными животными и поэтому его применили в диагностических целях для оценки функционального состояния В-системы лимфоцитов, а также для повышения резистентности организма сельскохозяйственных животных. В целях диагностики бактериальный ЛПС из Вас.а1уе1 ВКМ-724 использован для постановки реакции бласттраисформашш в концентрации 20-50 мкг/мл. При сравнении результатов РБТЛ, поставленной с ЛПС из Вас.а1уе) и Вас1.рго<^ю5ит и Е.соП, фитогемагглютинином, конканавалином-А установено, что он по своей активности не уступает общепринятым митогенам и его можно с успехом использовать в комплексных исследованиях при оценке функционального состояния Т- и В-лимфоцитов.

При использовании вышеуказанного ЛПС для телят наиболее оптимальной явилась доза 5-10 мкг/кг живой массы. После однократной обработки телят ЛПС в этих дозах к 5 дню отмечено увеличение Т-лимфоцитов-на 47%, В-лимфоцитов на 37%, фагоцитарного числа иа 15%, фагоцитарного индекса на 597% по сравнению с исходными данными. К 14 дню указанные показатели снизились и пришли к уровню исходных данных. После трехкратной обработки телят ЛПС из Вас.а1уе1 с интервалом в 7 дней отмечена значительная стимуляция клеточного н гуморального иммунитета, продолжающаяся до 18 дня наблюдения. Так, к 4 дню отмечено возрастание фагоцитарного числа на 22%, фагоцитарного индекса на 108%,, к 8-му дню - соответственно

на 25 и 52%, к 18-му - 5 и 27%., 1-лимфоцитов - соответственно на 37%, 45%, 33%; B-лимфоцитов на 62%, 87%, 55%, лизоцима на 94% (5-й день), 215% (8-й день). Другие показатели гуморального иммунитета у обработанных телят не отлачилсь от уровня контрольных животных. Обработка телят бактериальным ЛПС оказывает значительное влияние на белковый, углеводный, липидный. азотистый, пигментный, минеральный обмены, активность ферментов крови. Производственные испытания бактериального ЛПС на телятах с целью повышения резистентности организма показали высокую его эффективность. Заболеваемость телят ОРЗ снизилась в 2,3 раза, прирост живой массы увеличился на 80 г, окупаемость ветмероприятий составила 10,86 рублей на 1 рубль затрат.

Изучение состояния иммунитета и обмена веществ телят при скармливании цветочной пыльцы. Цветочная пыльца (обножка), пчелиная перга - уникальные природные продукты, являющиеся концентратом биологически активных веществ. Накопленные в мировой практике данные по их использованию для повышения иммунологической резистентности организма человека и животных явились основанием для проведения исследовании по применению молодняку крупного рогатого скота при респираторных заболеваниях. Цветочную пыльцу ежедневно скармливали телятам в количестве 0,8% (40г) от суточной потребности заменителя цельного молока в течение 1 месяца. При изучении иммунологической перестройки организма телят установлено, что через 10 дней повышалась фагоцитарная активность нентрофилоа: фагоцитарное число возросло на 23%, НСТ-тест - 17%, Т-лимфоцитов -на 16%, Т-активных лимфоцитов - на 41%, Т-хелперов - на 30%. Повышенные показатели состояния клеточного иммунитета оставались на этом уровне до 30 дня наблюдення. Скармливание цветочной пыльцы телятам оказывало стимулирующее влияние на углеводный, липидный, белковый, пигментный, азотистый, минеральный обмены веществ и активность ферментов крови. При проведении производственных испытаний в нодопытной группе телят получено дополнительной продукции на 141,46 рублей больше, чем в контрольной. Окупаемость ветеринарных мероприятий при скармливании цветочной пыльцы составляет 2,47 рубля на 1 рубль затрат.

Иммунологическая эффективность препарата, полученного на основе пчелиной перги. Себестоимость скармливания цветочной пыльцы молодняку крупного рогатого скота в для активйзаци иммунной системы,относительно высока. Поэтому нами проведена разработка инъекционной формы иммуностимулирующего препарата на •

основе цветочно» пыльцы или пчелиной перги, что дозволило снизить себестомость препарата и в то же время повысить его эффективность. При проведении иммунологической оценки in vitro видных и спиртовых вытяжек, кислотных и щелочных гидролизатов из смеси пыльцы и меда, перги с помощью нагрузочных тестов лейкоцитов и реакции бласттрансформацни лимфоцитов установлена высокая иммунологическая активность кислотных и щелочных гидролизатов из перги. На этой основе синтезирован препарат "Апнстимулин-А", представляющий собой гидролизат пчелиной перги. Проведенные токсикологические исследования показали его низкую токснчных и отсутствие алле-генных свойств, стнмулнрущее воздействие на обмен веществ организма лабораторных животных. В результате проведенных исследований на лабораторных и сельскохозяйственных животных установлена терапевтическая доза - 1 мг/кг живой масы при 3:4-х кратном введении с интервалом в 3-4 дня. При обработке больных пневмоэнтеритами телят отмечалось восстановление угнетенных звеньев иммунитета до уровня клинически здоровых животных. В табл 3 представлены результаты влияния на клеточный и гуморальный иммунитет препарата "Апнстимулин-А" у клинически здоровых (подопытная группа № 1) и больных пневмоэнтеритами (подопытная группа № 2) телят в терапевтических дозах (1 мг/кг массы). Из представленных данных видно, что введение препарата способствует активизации Т- и В-лимфоцитов, фа' гоцйтарной активности нейтрофилов, увеличивает активность интерферона и лизоцима. Проведенные производственные испытания препарата "Апистимулин-А" показали, что он способствует снижению заболеваемости телят респираторными инфекциями с 66,7-95% до 20-32,5%, отхода с 17,3-23,35 до 4,8-7°/о, Окупаемость ветмероприятий при его использовании составляет 40,39 рублей на 1 рубль затрат.

Иммунный ответ организма телят на введение вакц'.-н против moho- к ассоциированных вирусных респираторных инфекций. Иммунизация молодняка крупного рогатого скота моновакцинами против ИРТ, ВД и PC-инфекции не всегда дает желаемый профилактический эффект т.к. не учитывался этиологическая структура возбудителей циркулирующих в хозяйстве ивследствие нарушений иммунной системы вакцинируемых животных. Проведенные исследования по изучению влияния на иммуную систему организма телят моновакцин и их комбинаций одновременно со стимуляцией поствакцинального процесса позволяет по новому осуществлять подход к специфической профилактике ИРТ.ВД и PC-инфекций. Исследования проводились в 2 этапа. На первом этапе изучалась иммунологическая перестройка организма телят

Таблица 3

Показатели гуморального и клеточного иммунитета у телят, получавших "Апистимулин-А"

Группы животных

п/п Дни взятия материала Показатели № 1 (здоровые) №2 (6ол1.ныс) №3 (Koiiipo.il,)

1 До обработки Титр ин герфсрона, % 31.1+3.34 11.7+1.25 28.913.1

Бактерицидная активность сыворотки крови, % 68.714.9 61.014.3 74.815.35

Лизоцим, мкг/мл 6.45Ю.4 5.0+0.54 5.47+0,39

Лимфашггы, "Л 64.5+2.58 45.113.3 61.4+2.15

Т-лимфацитм, % 29±1.29 21.111.8 27.4+1.4

В-лимфациты, % 16.4+1.3 13.811.3 16.811.7

Фагоцитар.число 56.811.72 51.213.43 64.615.15

Фагоцитар.индекс 3.25+0.38 1.510.21 3.35+0.3

2 Через 8 дней Титр интерферона, % 34.2+3.76 35.612.61 3.78+0.8

Бактерицидная активность сыворотки крови, % 78,2±5.7 75.115.5 4.0Н0.5

Лизоцим, мкг/мл 7.5+0.83 6.45+0.65 5.9518.66

Лимфациты, % 7Z.2i3.98 57.112.5 62.811.7

Т-лимфащпы, % 35.211.7 29.8+3.3 26.1+2.4

В-лимфзциты, % 20.614.3 19.814.7 17.013.7

Фагоцитар.число 82.619.7 66.119.2 66.7+3.8

Фагоцитар.индекс 7.7+0.7 4.310.9 3.7810.8

3 Через 14 дней Титр интерферона, % 42.213.1 38.912.92 28.812.11

Бактерицидная активность сыворотки крови, % 83.6+6.13 79.3+5.82 75.8+5.56

Лизоцим, мкг/мл 9.5511.05 8.010.6 6.98+0.41

Лимфациты, % 75.214.7 61.815.6 65.112.6

Т-лимфациты, % 32.1±3.9 34.612.8 28.311.7

В-лнмфациты, % 29.1+1.7 23.111.9 18.111.72

Фагоцитар.число 84.415.1 68.015.3 62.413.7

Фагоцитар.ипдскс 8.3+1.7 5.3+0.3 4.0110.5

при введении им моновакцин со стимулятором поствакцинального иммунитета (бактериального ЛПС из Вас.а1уе1 ВКМ-724). При этом установлено. что у телят формируется напряженный иммунитет и в процесс вовлекаются основные звенья клеточного и гуморального иммунитета. Стимуляция поствакциналыюго иммунитета с помощью бактериального ЛПС способствует повышению титра противовирусных антител в 24 раза, биосинтезу интерферона на 10-20%, активизации клеточного иммунитета на 5-15%.Иммунная система телят на одновременное введение вакцин против респираторных инфекций в комбинациях ИРТ+ВД, ИРТ + РС, ВД+РС, ИРТ+ВД+РС в чистом виде и одновременно со стимулятором отвечала выработкой полноценного иммунного ответа на все вирусные антигены. При этом не отмечается конкуренции между вирусными антигенами, на что указывает одинаковый биосинтез антител как на моновакцину, так и на этот же антиген, примененный в комбинации. Использование моно- и комбинаций вакцин против ИРТ,ВД и РС-инфекции сопровождается повышением количества Т- и В-лимфоцнтов, аптигенсвязывающих клеток, увеличением биосинтеза интерферона, иммуноглобулинов М и О-классов. Уже на-чнная с 4 дня наблюдения титры противовирусных антител в РИГА повышались в 3,25 и более раз и к 45 дню наблюдения титр их достигал 8,0 1о£2 к каждому из вирусов. Иммунологические показатели организма телят после иммунизации моновакцинами и их комбинациями позволяют констатировать тот факт, что нммунная система организма молодняка крупного рогатого скота способна отвечать одновременно на введение 2-3 вирус-вакцин полноценным иммунным ответом, а использование бактериального липоплисахарида из Вас.а1уе1 ВКМ-724 вызывать стимуляцию биосинтеза антителообразоваиия и активности клеточного звена иммунитета.

Разработка и внедрение в условиях производства комплексной системы иммунологической диагностики, профилактики и терапии вирусных респираторных инфекций телят. Разработанная система включает в себя следующие мероприятия:

1. Установление диагноза заболевания с помощью разработанных иммунологических тестов (РИГА, ИФА и РТНГА);

2. Активная иммунизация воспроизводящего поголовья (стельных коров) и молодняка живыми вирус-вакцинами против ИРТ.ВД и РС-инфекции ( в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйства по данным инфекциям);

3. Отбор животных-доноров или гипериммунизация взрослого крупного рогатого скота для получения высокоактивных сывороточ-

ных препаратов (гипериммунные сыворотки, сыворотки реконвалес-центов, неспецифический иммуноглобулин, молозивный иммуноглобулин), используемых в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при респираторных инфекциях телят.

4. Иммуностимулирующая терапия и профилактика нммунодефи-цитных состояний телят с использованием бактериальных липоплиса-харидов, препаратов из продуктов пчеловодства, Т-актнвина.

5. Противовирусная и антибактериальная терапия и профилактика вирусных респираторных инфекций и осложненных условно-патогенной микрофлорой заболеваний органов дыхания с использованием препаратов серебра, химиотерапевтнческнх препаратов пролонгированного и Широкого спекта действия.

Использование комплекса мероприятий в хозяйствах позволяет снизить заболеваемость в 3-5 раза, непроизводительное выбытие телят в 2-3 раза. ОАшемость ветмероприятий от использования системы составляет от 4 до 11 рублей на I рубль затрат.

ВЫВОДЫ

I.Заболеваемость крупного рогатого скота с поражением органов дыхания н пищеварения, особенно у молодняка, в Республике Беларусь в основном проявляется в зимне-весенний период, а в последние годы - круглогодично с тенденцией к увеличению. Удельные вес болезней молодняка увеличился с 205,88% в 1990 г. до 248,8% в 1994 г, заболеваемость с поражением респираторных органов возросла с 68,77 до 88,66%, поражением желудочно-кишечного тракта с 93,43 до 118,76%, непроизвоительное выбытие телят с 16,3% до 29,89% от числа родившихся. Непроизводительное выбытие в основном было обусловлено респираторными и желудочно-кишечными заболеваниями.

2. Сенсибилизация стабилизированных акролеином, танизиро-ваииых эритроцитов крупного рогатого скота антигенами вирусов инфекционного ринотрахеита (штам МВА 2/81), диареи ( штамм ВК-1 № 28) и респираторно-сннтициального' вируса (штамм "PCB") с использованием конъюгирующих веществ - хлорида хрома с трипановым синим позволяет получить высокоактивные эритроцитарные диагности-кумы, выявлящие в РНГА - специфические противовирусные антитела в сыворотках крови, молозива и носовых секретах, в РТНГА - вирусные антигены в патологическом материале, сыворотках крови и носовых секретах от больных и переболевших телят, а также идентифицировать вирусы после культивирования на культуре клеток и вывявлять

в реакции розеткообразовання - антнгенсвязывющие клетоки перифе-' рическон крови у больных и иммунизированных животных.

3.Иммобилизация на полистироловых панелях ранних белков вирусов ИРТ, ВД и РС в концентрации 20^30 мкг/мл, использования пе-роксидазных конъюгатов с моноклональными антителами против 10 М и антисывороткамн против Гц в крупного рогатого скота, ортофе-нилендиамина с перекисью водорода для проявления реакции позволяют эффективно выявлять в непрямом варианте ИФА как противовирусные антитела в сыворотках крови, молозиве, молоке, носовых секретах так и вирусные антигены в биологическом материале.

4. В этиологической структуре вирусных респираторных заболеваний крупного рогатого скота в Республике Беларусь и Молдове основной удельный вес занимают ИРТ 62,4% и 26,7% у коров, 37,7% и 8,9% у больных ОРЗ телят, 60,6% и 44,3% у телят переболевших ОРЗ; ВД у 83,1% и 42,1% у коров, 68,1 и 28,7% у больных телят, 81,1 и 60,5% у переболевших телят; РС инфекция - 60,8% и 53,2% у коров,-65,9 и 38, Г о у больных телят, 72,5 и 60,8% у переболевших телят.

Респираторные заболевания крупного рогатого скота проявляются в виде моно- и ассоциативных инфекций. Моноинфекции (ИРТ, ВД и РС) установлены у 18,9% взрослых животных; у 39,7% больных респираторными заболеваниями телят; у 19,3% переболевших ОРЗ телят. Ассоциативная вирусная респираторная инфекция, вызываемая двумя возбудителями одновременно (ИРТ+ВД, ИРТ+РС и ВД+РС) у коров отмечена у 26,5%, у больных ОРЗ телят у 31,0%, у переболевших ОРЗ телят у 28,9%. Инфекция, вызываемая ассоциацией вирусов ИРТ+ВД + РС отмечается у коров у 46,1%, больных телят у 19,9%, переболевших телят - 40,1%

5. У больных и переболевших респираторными заболеваниями телят отмечается угнетение Т- и В-систем лимфоцитов, снижение активности фагоцитоза; уменьшение активности ферментных систем крови, нарушение работы почек, печени, нарастание количества циркулирующих иммунных комплексов, концентрации в крови мочевины, мочевой кислоту, креатинина, указывающее на системней процесс,

6. Иммуностимулирующие препараты - Т^активин, гндролиздт цветочной яцльцы, препарат и3 пчелиной перги "Апистнмулин-А" воздействующие ,1а Т-снстему лимфоцитов, а протаргол и бактериальна липоролисахарид из Вчс.аЬ'еЦ влияющие на В-систему способствуют активизации угнетенных звеньев иммунитета и обмена веществ При респираторных заболеваниях телят-

7. Иммунизация молодняка крупного рогатого скота моновакцинами ИРТ, ВД и РС и их комбинаций сопровождается выработкой специфических противовирусных антител М и ^ О классов, повышением количества Т- и В-лимфоцитов, увеличением титра интерферона, количества антигенсвязывающих клеток, что обеспечивает эффективную иммунную защиту.

Оновременное введение телятам комбинации вакцин против ИР Г, ВД и РС-инфекции не сопровождается конкуренцией вирусных антигенов. Добавление к вакцинам бактериального липополнсахарнла из Вас.а1уе| ВКМ 724 в дозе 5-10 мкг/кг повышет показатели клеточного и гуморального иммунитета на 5-15%.

8. Комплексная система имунологической диагностики, профилактики и терапии вирусно-бактериальных пиевмоэнтеритов молодняка крупного рогатого скота позволяет снизить заболеваемость телят в 2-5 раз, а непроизводительное выбытие в 1,5-3,5 раза.Экономическая эффективность от применения методов диагностики ИРТ» ВД и РС-инфекцни, иммуностимулирующих и лечебно-профилактических препаратов и схем лечения при вирусных респираторных заболеваниях телят составляет от 2,47 до 40,39 рублей на I рубль затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

(.Рекомендации по диагностике вирусных респираторных инфек-цнй -.-рунного рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) — рассмотрены н одобрены секцией ветеринарии НТС Го-сагропрома Молдавской ССР от 19.11.1987 г., протокол № 2;

2.Рекомендации по диагностике, профилактике и терапии инфекционных заболеваний телят — утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 24.07.1991 г.;

3.Методические рекомендации по диагностике и профилактике инфекционных заболеваний молодняка "трупного рогатого скота — рассмотрены и утверждены секцией ветеринарии НТС Агропромсоюза ССР Молдова 10 июля 1990 г., протокол № I;

4.Мегоднческие рекомендации по использованию иммунофер-ментного анализа при выявлении антител М-класса к вирусу диареи — болезни слизистых крупного рогатого скота — рассмотрены, одобрены и утверждены на заседании секции иммунологии и биотехнологии ВАСХНИЛ 27 ноября 1991 г.;

5.Рекомендации по использованию протаргола с глобулином для профилактики и терапии смешанных вирусных респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота — рассмотрены и утверждены

ветеринарной секцией НТС Агропромсоюза Республики Молдова от 10-июля 1990 г., протокол №1;

6.Методические рекомендации по оценке функциональной активности В-лимфоцитов сельскохозяйственных животных — рассмотрены и одобрены на заседании секции иммунологии и биотехнологии ВАСХНИЛ 27 ноября 1991 г.;

7.Методические рекомендации по комплексной профилактике и терапии пневмоэнтеритов телят - рассмотрены и утверждены отделом ветеринарии управления сельского хозяйства Смоленской области 6 апреля 1 994 г.

8.Методические рекомендации по иммунологической диагностике, профилактике и терапии пневмоэнтеритов телят вирусно-бактериальной этиологии — рассмотрены и одобрены НТС Минсельхозпрода Республики Беларусь 29 декабря 1996 г., протокол № 4.

9.Нормативно-техническая документация на "Набор жидких эри-троцнтарных антигенов и сывороток для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (инструкция по изготовлению и контролю, наставление по применению, ТУ И) РМ 150-152-89;;

10.Нормативно-техническая документация на "Набор жидких эритроцитарных антигенов и сывороток для диагностики вирусной диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота (инструкция по изготовлению и контролю, наставление по применению, ТУ 10 РМ 150153-89);

1 I.Нормативно-техническая документация на "Набор жидкого цветного эритроцитарного антигена и сывороток для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (инструкция по изготовлению и контролю, наставление по применению, ТУ 46 Украины 0494185-001-91);

12,Нормативно-техническая документация на "Молозивный ар-готноглобулин" (инструкция по изготовлению и контролю, наставление по применению, ТУ 10-07-006-93);

!З.Нормативно-техническая документация на "Наб1р р1дких ери-троцитарних антиген1в 1 снроваток для д1агностики в!русно1 д1аре1 велико! рогато! худоби" (инструкция по изготовлению и контролю, наставление по применению, ТУ 46 15.034-94);

14.Нормативно-техническая документация НЧ "Сыроротку крови крупного рогатого скота щ свиней для нмиуно»соррекцчк, терапии и профилактики пневмоэнтеритов сельскохозяйственны* животных (инструкция по изготовлсцню и коцтро-чго, наставление по применению, ГУ 00028493.069-95);

15.Нормативно-техническая документация на "Иммуноглобулин молозивный неспецифический" (инструкция по изготовлению и контролю, наставление по применению, ТУ РБ 00028493.070-95):

16.Нормативно-техническая документация на "Сухую живую культуральную вирусвакцину против респираторно-сингициальной инфекции крупного рогатого скота" (инструкция по изготовлению и контролю, инструкция по применению, ТУ РБ 00028493.124-95).

17. Авторское свидетельство СССР № 1554590 "Способ определения функциональной активности лимфоцитов крупного рогатого скота".

18. Патент Российской Федерации № 1835659 ц Патент Республики Беларусь Кз 763 " Способ приготовления эритроцитарного диагностику м а на основе вируса диареи крупного рогатого скота;

19. Патент Российской Федерации № 2048120 и Патент Республики Молдова № 257 "Способ приготовления корма для сельскохозяйственных животных".

Список опубликованных работ по теме диссертации

По теме диссертации опубликовано 85 научных работ, основные положения изложены в следующих:

1. Помирко Т.Н., Красочко П.А. Пневмоэнтериты телят: меры борьбы с ними на промышленных комплексах II Сельское хозяйство Молдавии. - 1987,- № 4.- С.38.

2. Красочко П.А.. Помирко Т.Н. Выявление антител к респираторным вирусам у крупного рогатого скота II Ветеринария,- 1988.- № 4,- С. 63-64.

3. Профилактика и терапия респираторных заболеваний телят / Помирко Т., Красочко П., Сгародуб В., Жовтан АII Сельское хозяйство Молдавии,- 1988.-№ 11.-С.35-36.

4. Красочко П.А., Помирко Т.И. Анализ степени инфицированное™ крупного рогатого скота и овец вирусами парагриппа-3 и диареи Н Современные аспекты профилактики инфекционных болезней молодняка /Межвузовский сборник научных трудов Кишиневского СХИ им. М.В.Фрунзе. Кишинев, 1989,- С. 52-55.

5. Красочко П.А. Определение антител к зирусу диареи в сыворотках крови крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа И Первый иммунологический съезд. Тез. докл. Т.1. М„ 1989. С-226.

6. Использование твердофазного ИФА для выявления 1ц М- антител к вирусу диареи у крупного рогатого скота / Красочко П.А.', Красочко И.А., Федоров Ю.Н. Феоктистова Т.А. И Иммунитет сельскохозяйственных животных / Труды ВИЭВ.т. 67.-М., 1989.-С27-31.

7. Помирко Т.П., Красочко П.А. Иммунологические аспекты возникновения респираторных заболеваний телят в промышленных комплексах и интегрированная прфилактика II Актуальные проблемы ветеринарной и зоотехнической науки в интенсификации животноводства. Матер, конф. МВА. М., 1990,- С.118-119.

8. Зелюткоу Ю.Г., Красачка П.А. Атрыманне эрытрацытарнага дыягносты-кума в!руснай дыярэ! буйнай рагатай жывелы II Весщ Акадэмп навук БССР, сер.сельскагаспадарчых навук. 1990.7Мз 1.-С.113-116.

9. Красочко П.А. С; »чуляция иммунной системы телят бактериальным ли-пополисахарндом для профилактики респираторных инфекций // Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка сельскохозяйственных животных. Тез. докл. научн.-произв. конф. Минск, 1990.- С.112-113.

10. Красочко П.А. ИспользованиеТ-Яктивина для коррекции приобретенного иммунодефицита при респираторных инфекциях телят II Современные проблемы иммунологии, биотехнологии и клеточной инженерии в ветеринарной медицине. Гез.докл Всес. научи.-техн.конф„ М.. 1990. - С.75-77.

11. Красочко П.А., Помирко Т.И.. Яровой П.И. применение Т-активнна и протаргола для лечения респираторных болезней телят II Ветеринария.- 1990,- № П.- С.22-23.

12. Красочко П., Пузына Г. Вакцины против бесплодия // Мололчное и мясное скотоводство.- 1991.- № 1,-С.37-38.

13. Красочко П.А. Чувствительность ИФА и РИГА при диагностике вирусной диареи крупного рогатого скота II Ветеринария. 1991.- № 5. С. 58-59.

14. Красочко П.А. Эпизоотологическое обследование коров на вирусы ИРТ и ВД по наличию антител в сборном молоке // Тез.докл. 111 Всес.конф. по эпизоотологии. Новосибирск, 1991,- с. 232-233.

15. Красочко П.А. Эффективное средство при респираторных заболеваниях //'Молочное и мясное скотоводство.- 1992.- № 2,- С.7-8.

16. Красочко П.А.. Федоров Ю.Н., Феоктистова ТА. Результаты разработки твердофазного ИФА-теста при вирусной диарее крупнорго рогатого скота // Биотехнологическне аспекты развития животноводства. Кишинек: Молдагронн-формреклама, 1991.-С.118-125.

17. Красочко П.А. Роль вирусов в этиологии респираторных инфекций телят II Биотехнологические аспекты развития животноводства. Кишинек: Мол-дагрониформреклама, 1991. -С. 125-130.

18. Красочко П.А. Иммунный ответ у телят при различных способах введения вакцинного РС-внруса // Технология получения и выращивания здорового молодняка сельскохозяйствекнных животных и рыбопосадочного материала. Тез. докл. респубд. научню-практ.конф. - Минск, 1993.- С.107-108.

19. Использование ИФА для изучения динамики противовирусных антиител Ig М и Ig G-классов / Красочко П.А., Ковалев H.A., Красочко И.А., Зелютков Ю.Г., Федоров Ю.Н. II Ученые записки Витебского ордена "Знак Почета" ветеринарного института им. Октябрьской революции. Т.ЗО,- Витебск, 1993,- С.62-64.

20. КрасоЧко П.А., Зелютков Ю.Г. Иммуноферментный анализ при обнаружении противовирусных антител в сборном молоке II Ветеринарная Наука-производству. Межведомственный сборник. вып.З!.- Минск, 1993. - С.19-21.

21. Красочко П.А., Премия Н.Г.Йммунологическая оценка цветочной пыльцы и перги // Апитерапия и пчеловодство. Матер.научн.конф. Вып.З. Вильнюс: Ална литера.-1993,- С.40-44.

22. Красочко П.А., Красочко H.A. Наличие антител к ьирусу диареи крупного рогатого скота у сельскохозяйственных и диких животгных И Информационный бюллетень института экспериментальной и клинической ветеринарной медицины,- Харьков, 1995,- С.36-37.

23: Кавалеу М.А., Красачка П.А. Рэсшраторна-сштыцыяльная шфекцыя буйной рагатай жывёлы // Ветэрынарная энцыклапедыя. Мшск: Беларуская энцы-клапедыя.-I995.-C.340.

24. Красочко П.А., Красочко И.А., Зелютков Ю.Г. Определение состояния поствакцинального иммунитета у телят с помощью ИФА И Иммунодиагностика и иммунотерапия. Труды 1-й Международной конф.- Витебск, 1995.- С.87-88.

25. Красочко П. А., Грибко С.М. Специфическая профилактика инфекционного ринотрахента и вирусной диареи крупного рогатого скота // Актуальные проблемы ветеринарной медицины. Матер.Мсжд.научн.-практ.конф. Смоленск, 1996.-С.39-41.

26. Ковалев H.A.. Красочко П.А. Иммунологические основы диагностики, профилактики и терапии вирусных респираторных прнфекцнй телят // Ветеринарные и зооинженерные проблемы животноводства. Матер. 1-й Международной на-учн.-практ.конф.- Витебск, 1996.- с. 110-1II.

У

РЭЗЮМЭ Красочка Пётр Альбшав1ч

Мона-1 асацыятыуныя вфуппля рэсщраторныя шфекцы! буйнай рагатай жывёлы (¡муналапчная дыягностыка, прафшактыка I тэрал1я)

Ключавыя словы: Ь|. -кцыйны рынатрахе1т, Ырусная дыярэя, рэсгйраторш-сштьшыяльная шфекцыя, паслявакцыпальны ¡муштэт, ¡мунарэз1стэнтнасць, ¡муна-стымулятары, эрытрацытарныя дыягностыкумы, ¡мунаферментны анал!з, рэакиыя непрамой гемаглютынацьй, анзыгензаязваючыя клети.

Аб'ект даследавання - цяляты, трусы, мышы, пацукк Мэтай даследавання з'яуляецца разработка 1 удасканальванне метадау ¡муналапчнай дыягностым, прафитктык1 1 тэрапп мона- 1 асаиыятыуных вирусных рэсп!раторных 1нфекцын буйнай рагатай жывёлы. Мэта дасягнута шляхам пастаноую спецыяльных до.сле-дау на 2697 цялятах, 160 трусах, 250 белых мышах, 70 белых пацуках, даследавана 12955 сываратак крыв! буйной рагатай жывёлы, 106 васавых сакрэтау, пастаулена звыш 37000 сералаичных рэакцый, 32000 б1ях1м1чных 1 ¡муналапчных анал)зау.

Павуковая навниа даследайанняу заключаецца у распрацоуцы новых эфек-тыуных эрытрацытарных дягностыкумау з антыгенам! в1русау ¡нфекцыйнага ры-натрахету, в^руснан дыярэ1, рэспраторна-сштыцыяльнага в!русу I тэст-с1стэм для ¡наферментнага анал1зу для выяулення внтытэл, айтыгенау 1 антыгензвязваючых клетак, прапанаваны спосабы ацэнк! стану ¡муштэту у цялят разл1чнага клннчнага статусу, распрацаваны новыя 1мунастымул1руючЬ1я прэпараты, спосабы 1 схемы ¡х прымянення пры рэсшраторных ¡нфекцЫях, вывучаны уплыу на ¡мунную астэму цялят В1русных вакцын пры раздзеяьным 1 камбшаваным прымяненш, адпрацава-ны спосабы стымуляцьп паслявакцынальнага ¡муштэту з дапамогай быктэрыяль-нага лшапол'|сахарыду з Вас.аКе! ВКМ 724. Навуковая нав!зна абаронена 5 патэн-там! 1 аутарск'1М1 пасведчанням! Рас ¡искан Федзрацьн, Беларуси 1 Маддовы.

На аснове рэзультатау даследаванняу распрацавана нарматыуна-тэхшчная дакументацыя на 8 б!ялапчных прэпараты, зацверджана 1 надрукавана 8 рэкамен-дацый па пытчннях дыягностьш. прафшактык1 1 тэрапп В1русных рэсшраторных захворванняу буйнай рагатай жыйёлы. Распрацаваная комплексная с1стэма па ба-рацьбе з рэстраторным! шфекцыям1 пазваляе у значнай меры зшзшь захворванне 1 адход маладняка, павыс!ць ¡х прадуктыунасць.

РЕЗЮМЕ Красочко Петр Альбинович

Моно- и ассоциативные вирусные респираторные инфекции крупного рогатого скота (иммунологическая диагностика, профилактика и терапия)

Ключевые слова: инфекционный ринотрахеиг, вирусная диарея, респира-торно-синтициальная инфекция, поствакцинальный нмммунигег, иммунорези-стентность, иммуностимуляторы, эритроцитарные диагностикумы, иммунофер-ментный анализ, реакция торможения непрямой гемагглютинашш, антигенсвязы-вающие клетки.

Объект исследований - телята, кролики, мыши. Цель исследований - разработка-и усовершенствование методов иммунологической диагностики, профилактики и терапии моно- и ассоциированных вирусных респираторных инфекций крупного рогатого скота. Цели достигалась путем постановки специальных опытов на 2697 телятах, 160 кроликах, 250 белых мышах, 70 белых крысах, исследования 12355 сывороток крови, 106 носовых секретов, постановки 37000, серологических реакций, 32000 биохимических и иммунологических анализов.

Научная новизна исследований заключается в разработке более эффективных эритроцитарных диагностикумов с антигенами вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и респираторно-синтициального вируса и тест-систем для ИФА для выявления противовирусных антител, антигенов и антигенсвязывающих клеток, предложены способы оценки и состояния иммунитета у телят различного клинического статуса, разработаны новые иммуностимулирующие препараты, способы и схемы их применения при респираторных инфекциях, изучено влияние на иммунную систему вирусных вакцин при их раздельном и комбинированном применении, от&отан способ стимуляции поствакцинального иммунитета с помощью бактериального Липополисахарнда из Bac.alvei ВКМ-724. Научная новизна подтверждена получением 5 патентов Российской Федерации, Беларуси, Молдовы И авторских свидетельств СССР.

На основании результатов исследований разработана и утверждена нормативно-технической документация на 8 биологических препаратов, утверждено и издано 8 рекомендаций по вопросам диагностики, профилактики и терапии респираторных инфекций телят. Разработанная комплексная система по борьбе с респираторными заболеваниями позволяет значительно сократить заболеваемость и отход молодняка, повысить продуктивность.

SUMMARY Krasochko Petr Albinovicli

Mono- and associated virus respiratory infections of cattle (immunological diagnostic, prophylaxis and therapy)

Key words: infectious rhinotracheitis, virus diarrhea, respiratory sencytial infection, postvaccinal immunity, immunoresistance, immunostimulators, the erythrocytes's diagnostics, Et ISA, the reaction of indirect hemagglutination, antigen-linking cells.

The object of investigation - calves, rabbits, mice, rats. The aim ofinvestigation -workingout and improvement of methods of immunological diagnostic, prophylaxis and therapy of mono- and associated virus respiratory infections of cattle. The aim has been realised in tests carried out with 2697 calves, 160 rabbits, 250 white mice, 70 white rats, investigation of 12955 samples of blood serum, of 106 nasale secrets, the production of 37000 of serological reactions, 32000 biochemical and immunological analises.

The scientific novelty of research consists in followig: the new, more effective erythrocytes's diagnostics with antigens of viruses of infectious .rhinotracheitis, virus diarrhea, respiratory sencytial infection, and test-system for ELtSA were worked out, the methods of estimations of immunity of calves of different clinical status were ■ suggested, the new immunostimulative preparations were worked out and also the methods and schemes of their using for treatment of respiratory infections, the influence of virus vaccines during their mono- and combined using on immune system were studied, the method of stimulation of post vaccination immunity by bacterial lypopolysaccaride from Cac.alvei BK.M - 724 was realized. The novelty of work is corroborated by 5 patent of Russian Federation, Duelorussia and Moldova.

The normative-tecnical documents on 8 biological preparations were worked out and maintained on the base of results of investigations, 8 recommendations on the questions of diagnostic, prophllaxis and therapy of respiratory infections of calves were maintaned and published. The complex system of prevention of respiratory desiases that was worked out allowes significantly reduce the morbidity and mortality of calves, and Increase their productivity.