Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.05) на тему:Лечение случайных ран с применением мази на коллагеновой основе

ÜQ344G42Ü

На правах рукописи

ЧЕРНЕНОК Василий Васильевич

ЛЕЧЕНИЕ СЛУЧАЙНЫХ РАН С ПРИМЕНЕНИЕМ МАЗИ НА КОЛЛАГЕНОВОЙ ОСНОВЕ

16.00.05 - ветеринарная хирургия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

2 2 СЕН 2008

Санкт-Петербург -2008

003446420

Работа выполнена на кафедре терапии, хирургии, ветакушерства и фармакологии ФГОУ ВПО «Брянская государственная сельскохозяйственная академия»

Научный руководитель. заслуженный работник высшей школы РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор Ткачев Анатолий Алексеевич

Официальные оппоненты

доктор ветеринарных наук, доцент Тарасенко Павел Александрович

кандидат ветеринарных наук, доцент Вощевоз Александр Трофимович

Ведущая организация

ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита состоится «^>> 2008 г в $ часов на заседании дис-

сертационного совета Д 220.059 01 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу. 196084, г Санкт - Петербург, ул Черниговская, 5 тел /факс 388-3631

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

р /?<?

Автореферат разослан «J> » 2008 г и размещен на сайте

http //spbgavm ru

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор ветеринарных наук Крячко О В

ХАш^

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Среди незаразных болезней, наблюдаемых в животноводстве, хирургические составляют более 40 %, а раны и травмы различной этиологии регистрируют у 80 % пациентов с хирургической патологией (КИ Шакалов, 1972, ГС Кузнецов, 1980, АФ Бурденюк, В М Власенко, 1985)

Часто открытые повреждения осложняются раневой инфекцией (К И Шакалов, 1972, Г С Кузнецов, 1980)

На современном этапе при лечении ран и раневой инфекции используют разные методы, способы и антимикробные средства (Ю А Давыдов, А Б Ларичев, 1999, В А Черванев, 2002, М Perrin, 1990, D Whitby, 1995) Тем не менее, изыскание новых препаратов для стимуляции процессов регенерации остается актуальным

В доступной нам литературе (В В Кованов, И А Сыренков, 1978) имеются данные об уникальных свойствах коллагена во-первых, коллаген стимулирует спонтанную агрегацию тромбоцитов и является эффективным гемостатиком, во-вторых, коллаген легко образует комплексы со многими лекарственными средствами и биологически активными веществами, пролонгируя их действие по месту применения, в-третьих, экзогенный коллаген, являющийся основой препаратов, в организме полностью рассасывается, причем сроки его биодеградации можно регулировать, а продукты лизиса активно включаются в процессы раневой репарации, стимулируя регенерацию собственных тканей организма, в-четвертых, коллаген не обладает токсическими и канцерогенными свойствами

Имеются данные об использовании коллагена для стимуляции репаративных процессов в кожно-мышечных ранах у собак в послеоперационный период (В В Белогуров, 2005) Однако применение препарата на коллагеновой основе при лечении инфицированных ран изучены недостаточно В этой связи целью работы явилось разработать и провести физиолого-хирургическую оценку лекарственного средства,

приготовленного на основе биополимера коллагена при лечении экспериментальных ран у животных

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи

1 Получить коллагеновую массу из отходов кожевенного сырья.

2 Подобрать компоненты мази и их оптимальную концентрацию

3. Определить способ ее применения в зависимости от фазы раневого процесса

4 Изучить влияние приготовленной лекарственной формы на течение раневого процесса у экспериментальных животных

5 Проанализировать влияние мази на коллагеновой основе на некоторые морфологические и биохимические показатели крови у кроликов

6 Дать сравнительную оценку эффективности воздействия исследуемой мази и линимента бальзамического по Вишневскому на течение раневого процесса у животных в эксперименте.

7 Дать практические рекомендации по применению лекарственной формы на основе биополимера коллагена при лечении ран у животных.

Научная новизна. Впервые разработана лекарственная форма данного состава на основе биополимера коллагена. Изучен характер ее физиолого-хирургического влияния на течение раневого процесса у животных и скорость заживления ран Экспериментально обосновано применение коллагеновой массы в качестве основы лекарственной формы при лечении ран у кроликов

Теоретическая и практическая значимость работы. Мазь на коллагеновой основе благоприятно влияет на течение раневого процесса, способствует сокращению сроков очищения ран от некротических тканей и появлению качественных грануляций Она уменьшает размер соединительнотканного рубца относительно традиционных методов лечения Это позволяет значительно сократить длительность лечения ран различной этиологии и в перспективе дать практические предложения по ее применению

На защиту выносятся следующие основные положения:

1 Подбор компонентов и приготовление мази на коллагеновой основе

2 Клиническая характеристика раневого процесса у крупного рогатого скота и кошек под действием мази

3 Клинико-морфологическое проявление раневого процесса у кроликов

4 Влияние мази на некоторые морфологические и биохимические показатели крови у кроликов

5 Сравнительная терапевтическая характеристика различных способов лечения гнойных ран

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены на научной конференции Брянской ГСХА (2005г), на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины в условиях современного животноводства», РНИУП «Институт экспериментальной ветеринарии им С Н Вышелесского HAH Беларуси» (Минск, 2005г )

Публикации По теме диссертации опубликовано 4 работы Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методику исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы и предложения, список использованной литературы включает 191 источников (138 отечественных и 53 зарубежных) и приложения Диссертация иллюстрирована 27 рисунками и 16 таблицами

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные исследования проводили в 2003 - 2007 годах в УОХ «Кокино», виварии кафедры терапии, хирургии, вет акушерства и фармакологии, Брянской ГСХА

Опыт провели на десяти коровах 9-10 летнего возраста, средней живой массой 400 кг, десяти кошках, разного пола, 4-5 летнего возраста

и 12 кроликах породы Бабочка, 12 - 14 месячного возраста, обоих полов, массой тела 3,5 - 4 кг, средней упитанности

Подопытным животным наносили плоскостные кожно-мышечные раны по общепринятой методике Выстригали и выбривали шерстный покров, место операции обрабатывали 70%-ным раствором спирта и 5%-ным спиртовым раствором йода (К А Петраков, П Т Саленко, С М Панинский, 2001) Операцию выполняли под местной инфильтрационной анестезией (Э И Веремей, В М Власенко, А.Н Елисеев и др, 2001) При помощи скальпеля и пинцета вырезали кожные лоскуты указанного размера с дополнительным разрезом мышечной ткани Гемостаз осуществляли тугой тампонадой

Коров разделили на три группы по 3, 3 и 4 гол в каждой Каждой корове наносили по две раны площадью 200 мм2 в области спины, отступая на 10 см от позвоночника Одну рану у коров не лечили -служила контролем, вторую рану в первой группе обрабатывали линиментом бальзамическим по Вишневскому, во второй - коллагеновой массой, в третьей - мазью на коллагеновой основе

Кошкам раны наносили в области холки площадью 100 мм2 Животных разделили на 2 группы по пять кошек в каждой Кошкам первой (контрольной) группы раны обрабатывали линиментом бальзамическим по Вишневскому Раны у кошек второй (опытной) группы лечили мазью на коллагеновой основе

Осмотр и обработку ран проводили ежедневно до полного заживления

Клинические признаки течения раневого процесса оценивали по следующим показателям купирование гиперемии кожи, купирование отека, появление грануляций, заполнение грануляциями всей раны, начало краевой эпителизации, полная эпителизация ран

Кролики были разделены по принципу парных аналогов на две группы по шесть голов в каждой Животным наносили плоскостные кожно-мышечные раны в области холки площадью 400 мм2

После остановки кровотечения, раны инфицировали смесью почвы и навоза (Вардапян А В , 2004)

Лечение стали проводить на вторые сутки после операции

У животных опытной группы раны обрабатывали мазью на коллагеновой основе

У кроликов контрольной группы лечение проводили линиментом бальзамическим по Вишневскому

Лекарственные средства (линимент бальзамический по Вишневскому и мазь на коллагеновой основе) наносили на марлевый тампон и прикладывали к ране Перевязки укрепляли с помощью лейкопластыря

Осмотр ран и смену перевязок проводили ежедневно до полного заживления

Показатели, характеризующие заживление ран

1 Оценка заживления по клинической картине При клиническом осмотре раны оценивали состояние краев, характер экссудата, выраженность эпителиального ободка, появление грануляционной ткани в ранах, ее характер

2 Планиметрические методы исследования проводили по методике ЛП Поповой (1942)

Измерения проводили на 4, 8 и 12 день от начала лечения

Определяли площадь раны и устанавливали процент уменьшения ее за сутки по отношению к площади, вычисленной при предыдущем исследовании, а также процент уменьшения площади раны за весь период лечения

3 Цитологический анализ мазков отпечатков проводили на 3, 5, 7, 10 сутки от начала лечения (М П Покровская, М С Макаров, 1942, М Ф Камаев, 1970, МС Макаров, 1975) Мазки-отпечатки готовили путем осторожного 2-х кратного прикладывания стерильного предметного стекла к одному и тому же исследуемому участку раны Приготовленные отпечатки высушивали на воздухе, затем фиксировали в 96% этиловом спирте (10 минут) и окрашивали по Романовскому - Гимзе Препараты исследовали на микроскопе «Биолам», увеличение микроскопа в каждом случае в 400 раз

4 Гистологические исследования проводили на 5 и 10 день от начала лечения Материал для гистологического исследования брали из ран на границе воспаленной и здоровой ткани, фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина После проводки в спиртах возрастающей крепости материал заливали в парафин Резали на ротационном микротоме МПС - 2 Срезы толщиной 6-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, альциановым синим и использовали для обзорной микроскопии (Г А Меркулов, 1961)

5 Бактериологическое исследование проводили первый раз при появлении признаков гнойного воспаления, а затем на 3, 5, 7, 10 день от начала лечения

Для определения общего количества бактерий из разведения 1 100 делали посев по 1 мл на 3 чашки Петри методом одновременных заливок

Из исходного материала делали высев на ПА - питательный агар, ПБ

- питательный бульон, ЖСА - желточносолевой агар, 5 % КА - кровяной агар, содержащий 5 % дефибринированной крови барана, Китт-Тароцци -для выделения анаэробных микроорганизмов - сеяли в две пробирки одну нагревали до 80° - 20 минут, другая оставалась интактной Для определения типов микробов из выросших колоний проводили микроскопию препаратов

- мазков с последующей окраской по Граму (Д Хоулд, Г А Заварзин, 1980)

Чувствительность выделенных культур к антибиотикам определяли методом дисков по общепринятой методике

Показатели, характеризующие общее состояние организма

1 Масса тела экспериментальных животных Взвешивание проводили каждые 7 дней после операции, до полного выздоровления

2 Измерение температуры, пульса, частоты дыхательных движений Проводили два раза в сутки утром с 8 до 9 часов, вечером с 17 до 19 часов, ежедневно в течение всего периода наблюдения

3 Морфологические и биохимические исследования крови подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов, уровень содержания гемоглобина и гематокритную величину определяли с помощью гематологического анализатора "SYSTEM 150+" Лейкограмму выводили

по общепринятой методике в мазках крови, окрашенных по методу Май-Грюнвальда (В Н Никитин, 1949, И П Кондрахин, А В Архипов, 2004)

В сыворотке крови определяли общий белок рефрактометрически, белковые фракции - нефелометрическим методом (С А Карпюк, 1962)

Исследования крови проводили перед началом лечения, а затем спустя 3, 7 и 11 суток от начала лечения

Весь цифровой материал был статистически обработан по методу вариационной статистики (НА Плохинский, 1969) на персональном компьютере по программе БТОВЯ (ВП Иванов, И А Крапивин, 1994, 1995)

Технология получения мази на коллагеновой основе Для получения коллагеновой массы использовали отходы кожевенного сырья (гольевая обрезь) кожевенного завода ООО «Лайка-клинцы» г Клинцы В качестве прототипа был выбран способ получения коллагенового материала из сырья животного происхождения (Ю В Фурман, О Б Сеин, Д О Сеин и др , 2000)

В состав лекарственной формы вошли деготь березовый, ксероформ, новокаин и коллагеновая масса

Для приготовления мази на коллагеновой основе, полученный коллаген нагревали до температуры 25-30°С, добавляли ксероформ и новокаин, тщательно перемешивали стеклянной палочкой до однородной массы, затем вносили деготь березовый и снова перемешивали В результате получали однородную массу густой консистенции, темно желтого цвета

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Клиническая характеристика течения раневого процесса у крупного рогатого скота и кошек

При осмотре ран у коров на вторые сутки после операции было установлено, что на поверхности ран, обработанных мазью на коллагеновой основе, образовалась своеобразная пленка, которая слегка

стягивала края раны. На 3 - 4 сутки сформировался струп серого цвета, который отделился на 15 - 16 день с образованием рубца бледно-розового цвета шириной 1-2 мм.

Раны, обработанные линиментом бальзамическим по Вишневскому, на вторые сутки были заполнена сгустком крови, влажные На 4-е сутки сформировался струп, который отделился на 17-й день эксперимента Образовавшийся рубец был бледно-розового цвета, шириной 3 - 5 мм

Раны, обработанные коллагеновой массой в первые 4-5 суток были чистые, без сгустков крови На 5 - 6 сутки формировался струп бледно-желтого цвета Полное заживление ран наступало на 17 - 18-е сутки Образовавшийся рубец имел бледно-красный цвет, его ширина составляла 2-3 мм

Раны, не подвергавшиеся лечению, в первые сутки содержали кровяной сгусток. На 3-й сутки образовался струп, который отделился на 19 - 20-е сутки с образованием рубца бледно-красного цвета, шириной 3 -5 мм

Оптимальным способом лечения явилось применение мази на коллагеновой основе Ее применение позволило сократить сроки заживления ран на 21,05 %, а также уменьшить размеры рубца, что является немаловажным показателем для характеристики испытуемого препарата

Характеризуя состояние ран у кошек, было отмечено, что спустя сутки после начала лечения, раны имели вид округлого отекшего повреждения, наблюдали болезненность раневых участков при пальпации. У животных контрольной группы раны до уровня их краев, были заполнены сгустками крови. У кошек опытной группы раны были чистые, с небольшим количеством прозрачного экссудата

Купирование отека и гиперемии кожи наблюдали на 3-4 сутки лечения ран мазью на коллагеновой основе. Аналогичные изменения в контрольной группе животных отмечали на 4-5 сутки лечения (Рис. 1)

СУТКИ

20

15

10 -

—------

0 ъ*-1---1-1-1-

Нанесение ран Появление Купирование Начало краевой Заполнение грануляций отека и эпителизации грануляциям!

грануляциями всей раны

Полная эпителизация ран

гиперемии кожи

—•— Контроль » Опыт

Рис 1 Динамика раневого процесса у кошек при лечении ран мазью на кодлагеновой основе

Появление грануляций в виде единичных узелков красного цвета в ранах опытной группы наблюдали с 3-х суток, а заполнение грануляциями всей раны отмечали на 10-12 сутки

Начиная с 5-7 дня лечения, у всех животных опытных групп отмечали постепенное уменьшение площади раневой поверхности, сглаживание поверхности ран с уровнем кожи

При лечении ран линиментом бальзамическим по Вишневскому наблюдалось отделение сероватого экссудата, количество которого существенно уменьшалось к 8-10 суткам

Появление грануляций в виде мелких точек красноватого цвета фиксировали с 3-4 дня лечения, а заполнение грануляциями всей раны наблюдали на 12-15 сутки.

Начало краевой эпителизации ран наблюдали с 7-9 дня лечения, а полная эпителизация ран отмечена к 19-20 суткам Полное заживление ран в опытной группе происходило на 15-16 сутки

Анализируя скорость заживления ран у кошек, видим, что применение мази на коллагеновой основе позволяет ускорить заживление ран в 1,26 раза по сравнению с линиментом бальзамическим по Вишневскому

3.2. Клинико-морфологическая картина течения раневого процесса у кроликов

При осмотре ран до начала лечения (на вторые сутки после нанесенной травмы), в контрольной и опытной группах отмечались все признаки воспалительного процесса: гиперемия кожи и воспалительный отек вокруг раны, при пальпации кожа вокруг раны умеренно горячая, полость раны заполнена экссудатом бледно-желтого цвета.

На 3-й сутки лечения наблюдали значительное уменьшение гиперемии кожи и воспалительного отека вокруг раны у животных опытной группы, аналогичные изменения в контрольной группе наблюдались на 4-е сутки.

Появление грануляционной ткани в ранах опытной группы наблюдали на 3-4 сутки после начала лечения, а контрольной - на 4-5-е сутки. При лечении мазью на коллагеновой основе грануляции появлялись раньше, имели красный, крупнозернистый вид. При обработке линиментом бальзамическим по Вишневскому грануляции были бледными, мелкозернистыми, иногда кровоточили.

Рис. 2. Рана у кролика опытной рис. 3. Рана у кролика контрольной

группы на 13-е сутки лечения. группы на 13-е сутки лечения.

С пятых суток от начала лечения у животных опытной группы уменьшилось количество нейтрофильных лейкоцитов и увеличилось число макрофагов. Аналогичные изменения в ранах контрольной группы отмечались лишь на седьмые сутки лечения. Гистологическая картина на

5-е сутки лечения ран мазью на коллагеновой основе характеризовалась развитием качественной грануляционной ткани, увеличением количества зрелых фибробластов, скоплением гистиоцитов В ранах животных контрольной группы были в большей степени выражены инфильтрация лейкоцитами, плазматическими клетками, пролиферация эндотелиального компонента и фибробластов, отек стромы

На 13 - 14-е сутки лечения, раны у кроликов опытной группы почти полностью покрыты эпителием, а полное заживление наблюдали на 14-15 сутки (Рис 2)

На 13 - 14 сутки, раны у животных получавших лечение линиментом бальзамическим по А В Вишневскому покрыты плотным, сухим струпом, который отделялся на 19 - 20 сутки с образованием рубца бледно-красного цвета (Рис 3)

3.3. Результаты планиметрических исследований у кроликов.

В течение первых суток после начала лечения, средние величины площади ран в контрольной и опытной группах, незначительно отличаются от исходных

Начало активной эпителизации краев раны мы наблюдали на 8-е сутки после начала лечения К этому периоду площадь ран у кроликов опытной группы сокращалась в среднем на 58,6±0,9 % и составляла 166,3±3,8 мм2 (Р < 0,001), причем площадь раны за сутки уменьшалась в среднем на 13,7±0,2 % У животных контрольной группы в этот период средняя площадь раны равнялась 248,7±6,9 мм2 (сокращалась на 37,3±0,69 %) и в среднем за сутки она уменьшалась на 8,4±0,17 % На 12-е сутки лечения, средняя площадь ран у опытных животных составляла 51,0±2,0 мм2 (сократилась на 87,3±0,8 %), полное заживление наблюдали на 14-15 день

У животных контрольной группы полное заживление ран наблюдали на 20-е сутки (Табл 1)

Таблица 1 - Планиметрическая характеристика заживления кожно-мышечных ран кроликов

Группа Планиметрические показатели Срок исследования от начала лечения рай, сут Полное заживление, сут

1 4 8 12

Контрольная Площадь ран, мм2 396,3±5,9 375,3±5,8 248,7±6,9 116,0± 2,6 20,0

Уменьшение раны, % 5,3±0,12 37,3±0,69 70,7±0,63

Заживление раны за сутки, % — 1,1±0,02 8,4±0,17 13,3±0,28

Опытная Площадь ран, мм2 401,3±4,7 369,0±4,7 166,3±3,8** 51,0±2,0** 14,7

Уменьшение раны, % — 8,1±0,68* 58,6±0,9** 87,3±0,8**

Заживление раны за сутки, % — 1,6±0,14* 13,7±0,2** 17,3±0,3**

* Р < 0,05, ** Р < 0,001, разница статистически достоверна

Данные представленные в таблице 8, показывают, что при лечении мазью на коллагеновой основе уменьшение площади ран происходит достоверно быстрее, чем при лечении линиментом бальзамическим по А В Вишневскому

3.4. Оценка результатов бактериологического исследования раневого экссудата

При исследовании смывов с раневых поверхностей кроликов были обнаружены Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, почвенные бациллы, протей и другие микробы

Результаты определения чувствительности выделенных культур к антибиотикам показали, что данные микроорганизмы чувствительны к антибиотикам группы цефалоспоринов (цефазолин, цефтриаксон), фторхинолонам (ципрофлоксоцин, офлоксоцин), однако наблюдали устойчивость к сульфаниламидным препаратам (сульфазин)

Уровень бактериальной обсемененности ран перед началом лечения в обеих группах составлял 1000 - 1500 микробных тел (М Т) в 1 мл смыва При лечении ран линиментом бальзамическим по Вишневскому количество микробов в первые 3 дня не изменилось, к 5-му дню лечения снизилось до 700 - 900 М Т в 1 мл смыва

При лечении ран мазью на коллагеновой основе на 3-й сутки лечения количество микробных тел в 1 мл смыва было в пределах 700 -1000, к 5-м суткам снижалось до 400 - 500 М Т и сохранялось на этом уровне при последующих исследованиях

3.5. Клинические показатели и морфобиохимические исследования крови

Для оценки общего состояния организма подсчитывали пульс, количество дыхательных движений, измеряли температуру тела

На протяжении всего времени исследований мы фиксировали учащение дыхания у кроликов На наш взгляд это можно объяснить развитием травматического стресса в период проведения научного эксперимента

Увеличение частоты пульса кроликов (не выходящее за пределы физиологических границ) фиксировали до третьих суток от нанесения травмы Затем этот показатель начинает постепенно снижаться

Изменения температуры тела кроликов аналогичны колебаниям пульса В целом по группе отмечаем повышение (в пределах нормы) температуры тела в первые два дня после операции, после чего показатели постепенно снижались

Таблица 2 - Сравнительная характеристика морфологических показателей крови у кроликов с кожно-мышечными ранами

Сроки исследования, сут Группа Эритроциты, 1012/л Лейкоциты, 109/л Гемоглобин, г/л Гематокрит, л/л

До опыта Контроль б,46±0,43 8,62±0,34 118,5±3,35 0,41±0,02

Опыт 6,32±0,27 8,47±0,52 116,3±2,98 0,37±0,01

Перед началом лечения Контроль 5,00±0,36 10,37±0,25 104,3*2,47 0,33±0,01

Опыт 5,42±0,31 10,42±0,42 106,2±2,88 0,33±0,01

3 Контроль 5,10±0,33 10,13±0,31 107,3±3,18 0,34±0,01

Опыт 5,58±0,26 9,40±0,18 111,0±3,52 0,34±0,00

7 Контроль 5,47±0,36 9,85±0,26 109,2±2,89 0,36±0,01

Опыт 6,28±0,20 8,47±0,36* 116,5±2,73 0,37±0,01

11 Контроль 6,03±0,25 8,93±0,27 119,8±3,27 0,38±0,01

Опыт 6,40±0,15 8,55±0,27 116,8±2,30 0,39Ь0,01

*) — Р < 0,05 — разница статистически достоверна

Со стороны морфологических показателей крови раневой процесс сопровождался снижением уровня эритроцитов и гемоглобина, не

выходящим за пределы физиологической нормы, в течение первых суток после травмы Это можно объяснить развитием послеоперационного стресса и раневой болезни (Табл 2)

Параллельно со снижением числа эритроцитов наблюдается уменьшение гематокритной величины Перед началом лечения этот показатель составлял у обеих групп 0,33±0,01 л/л, что находится ниже физиологической нормы Нормализацию этого показателя отмечали к 7-м суткам лечения

Таблица 3 - Изменение лейкоцитарной формулы _ крови у кроликов, %_

Сроки исследования Группа Баз Эозин Нейтрофилы Лимф Мои

П С

До начала эксперимента Контроль 0,7±0,3 3,0±0,4 3,5±0,7 33,5±2,7 59,3±2,7 0,5±0,3

Опыт 1,040,3 2,7±0,6 5,5±0,7 34,0±1,4 55,8±1,7 1,0±0,4

Перед началом лечения Контроль 0,8±0,3 0,3±0,2 12,2±0,9 27,2±1,4 54,5±1,4 5,0±0,6

Опыт 0,8±0,3 0,7±0,3 13,7±1,0 29,3±0,8 51,0±1,2 4,5±0,4

3 Контроль 1,2±0,4 0,5±0,2 11,3±0,5 28,7±1,5 55,7±1,8 2,6±0,3

Опыт 1,0±0,3 1,2±0,5 11,8±0,8 30,3±1Д 53,3±0,9 2,3±0,2

7 Контроль 1,0±0,2 2,3±0,4 10,0±0,5 28,3±1,0 57,5±0,8 0,8±0,3

Опыт 0,3±0,2 2,0±0,4 8,01-0,7 33,5±1,5* 54,6±0,9 1,5±0,3

11 Контроль 1,0±0,3 2,5±0,6 7,3±0,2 33,3±0,9 55,2±1,2 0,7±0,3

Опыт 1,2±0,3 2,8±0,2 6,3±1,0 37,0±0,9* 51,8±0,8 0,8±0,3

*) — Р < 0,05 — разница статистически достоверна

Увеличение количества лейкоцитов (умеренный лейкоцитоз) наблюдали в течение 5 сут после нанесения травмы— 10,37±0,16 тыс/мкл в контрольной группе и 10,42±0,27 тыс/мкл в опытной, что можно объяснить общей реакцией организма на местный воспалительный процесс Снижение количества лейкоцитов отмечали с 3-х суток после начала лечения, причем у кроликов опытной группы этот процесс происходил достоверно быстрее

При анализе лейкоцитарной формулы видим, что у всех животных на 2-е сутки развития раневой инфекции имеет место нейтрофилия со сдвигом ядра влево, одновременно наблюдается моноцитоз, что указывает на хорошую реакцию органов гемопоэза на патологический раздражитель (Табл 3)

При биохимическом анализе крови обнаружили снижение общего белка в сыворотке крови (Рис 4). Минимальное значение, в опытной группе 69,5±2,79 г/л, в контрольной 67,7±2,68 г/л, было зафиксировано на 3-й сутки лечения (5-е сутки после травмы) Гипопротеинемия сопровождалась понижением уровня альбуминов с одновременным увеличением глобулинов, что расценивается как характерное проявление защитных механизмов организма при травме Уровень общего белка, а также соотношение белковых фракций приблизилось к исходным показателям у всех кроликов к 11-м суткам лечения

И Опытная группа — Контрольная группа

Рис 4 Динамика изменения содержания белка в сыворотке крови у кроликов

4. ВЫВОДЫ

1 Использование коллагеновой массы в качестве основы лекарственных средств обосновывается ее качествами отсутствие токсических и канцерогенных свойств, гидрофильность, способность легко образовывать комплексы со многими лекарственными веществами и полностью рассасываться в организме

2 Применение мази на коллагеновой основе сокращает сроки лечения ран у коров на 4 дня В контрольной группе заживление ран происходило на 19-20 сутки, при лечении мазью на коллагеновой основе - на 15-16 сутки

3 При лечении ран у кошек мазь на коллагеновой основе ускоряет образование грануляционной ткани в 1,23 раза, эпителизацию ран в 1,26 раза по сравнению с линиментом бальзамическим по Вишневскому

4 Мазь на коллагеновой основе благоприятно влияет на скорость регенерации травмированной ткани и эпителизацию раневого дефекта, сокращая сроки заживления ран у кроликов в среднем на 26,5 % относительно контроля

5 Мазь на коллагеновой основе ослабляет распространение воспалительных процессов, усиливает пролиферацию фибробластов, а также способствует синтезу собственного коллагена, что оказывает существенное влияние на качество и размеры соединительнотканного рубца

6 Применение мази на коллагеновой основе способствует снижению бактериальной обсемененности ран у кроликов Количество микробных тел к пятым суткам лечения коллагенсодержащим препаратом составляло 400 — 500 микробов в 1 мл смыва с раневой поверхности, в то время как в контрольной группе этот показатель находился на уровне 700 — 900

7 Морфологический и биохимический состав крови кроликов с гнойными ранами в течение всего периода наблюдений соответствовал стадиям и фазам течения раневого процесса

Все показатели крови приближались к исходным на седьмые сутки лечения, что свидетельствует о положительном влиянии испытуемого препарата на дыхательную и защитную функцию крови при раневом процессе

8 Содержание белка в плазме крови у кроликов в опытной группе было выше, чем в контрольной на 3-й сутки лечения на 2,6 %, на 7-е - на 3,6 %, на 11-е сутки на 2,7 % Альбумино-глобулиновое отношение у животных на 7-е сутки лечения существенно не отличалась в контрольной группе 1,43 в опытной -1,45

9 Применение мази на коллагеновой основе оказывает выраженное противовоспалительное действие, проявляющееся сокращением сроков общей реакции организма на травму

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 Мазь на коллагеновой основе рекомендуем при лечении гнойных ран Ее применение позволяет сократить сроки заживления ран в среднем до 26,5%, а также уменьшить размер соединительнотканного рубца

2 Основные положения диссертации рекомендуем использовать при написании учебных пособий, диссертаций, статей, чтении лекций по хирургии, фармакологии, физиологии, клинической диагностике, проведении семинарских занятий среди студентов факультетов ветеринарной медицины ВУЗов и колледжей

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Черненок В В Перспективы использования коллагена в лечебной практике Научные и практические аспекты совершенствования технологии производства продукции животноводства, профилактики и лечения сельскохозяйственных животных Материалы XXI научной конференции студентов и аспирантов - Брянск, 2005 - С. 14-16

2 Черненок В В Применение мази с коллагеновой основой при лечении ран / В В Черненок, Л Н Гамко, Ю В Фурман // Мат межд на-учно-практич конф «Актуальные проблемы ветеринарной медицины в условиях современного животноводства», РНИУП «Институт экспериментальной ветеринарии им С Н Вышелесского НАН Беларуси» -Науч тр Вып -38 - Минск,2005 -С 543 -546

3 Гамко Л Н Мазь на коллагеновой основе при лечении ран у кроликов / Л Н Гамко, В В Черненок // - Ветеринария - 2007 - №3 - С 45-47.

4 Черненок В В Динамика изменения некоторых гематологических показателей при лечении гнойных ран у кроликов мазью на коллагеновой основе /В В. Черненок, Ю Н Черненок, Л Н Гамко// Сборник науч тр межд научно-практич конф «Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения ее качества» -Брянск-2007 С 499-502

Подписано к печати 22 08 2008 г Формат 60x84 716 Бумага офсетная Уел п л 1 Тираж 100 экз Изд №1187 Издательство Брянской государственной сельскохозяйственной академии 243365 Брянская обл , Выгоничский район, с Кокино, Брянская ГСХА

Актуальность темы. Одной из первостепенных задач ветеринарной науки является поиск и внедрение в производство доступных, дешевых и эффективных лекарственных средств.

Среди незаразных болезней, наблюдаемых в животноводстве, хирургические составляют более 40%, а раны и травмы различной этиологии регистрируются до 80% всех пациентов с хирургической патологией (К.И. Шакалов, 1972; Г.С. Кузнецов, 1980; А.Ф. Бурденюк, В.М. Власенко, 1985).

В большинстве случаев причинами травматизма животных являются нарушения правил их кормления, содержания и эксплуатации.

В целом хирургические болезни наносят немалый экономический ущерб. По статистическим данным, в среднем у 2-4% убойных свиней имеются травмы. Мясо от таких животных в 20% случаев оказывается непригодным в пищу (С.М. Кулешов, 1987). По данным Г.С. Кузнецова (1980) гибель поросят от травм может достигать 8,3% от общих потерь вследствие их болезней.

Очень часто травмы носят характер открытых повреждений, которые в большинстве случаев осложняются раневой инфекцией (К.И. Шакалов, 1972; Г.С. Кузнецов, 1980).

Применение новейших методов исследования репарации раневого процесса расширило возможности изучения процесса заживления ран, однако проблема эта не утратила своего значения и остается одним из актуальных вопросов современной хирургии.

Важнейшим положением учения о ранах и единым звеном, связующим его основные разделы, является доказанный факт общности биологических законов заживления ран любого генеза и локализации, которые схематически молено представить в виде фаз течения раневого процесса: 1 - воспаление (сосудистые изменения, очищение), 2 -регенерация, 3 - реорганизация рубца и эпителизация (М.И. Кузин, Б.М.

Костюченок, 1990). В заживлении ран, независимо от происхождения и методов воздействия на нее, участвуют одни и те же клеточные элементы, обеспечивающие принципиально сходную общую динамику раневого процесса (Д.С. Саркисов, 1984). Этот факт определяет общность объективных критериев оценки течения раневого процесса и принципиальных основ патогенетического лечения ран.

Препараты, предназначенные для лечения повреждений кожи должны защищать рану от заноса патогенной микрофлоры, обладать противовоспалительным эффектом, а в период грануляции и эпителизации ран стимулировать эти процессы и ускорять заполнение тканевых дефектов вновь образованной тканью, сокращая тем самым сроки заживления ран.

На современном этапе для лечения ран и раневой инфекции предлагается ряд методов и способов, разработано множество антимикробных препаратов (П.И. Булай, 1995; Ю.А. Давыдов, А.Б. Ларичев, 1999; Б.А. Парамонов, Я.О. Порембский, В.Г. Яблонский, 2000; М. Perrin, 1990; D. Whitby, 1995). Тем не менее, изыскание новых препаратов для стимуляции процессов регенерации остается актуальным.

В доступной нам литературе (В.В. Кованов, И.А. Сыренков, 1978) имеются данные об уникальных свойствах коллагена: во-первых, коллаген стимулирует спонтанную агрегацию тромбоцитов и является эффективным гемостатиком; во-вторых, коллаген легко образует комплексы со многими лекарственными средствами и биологически активными веществами, пролонгируя их действие по месту применения; в-третьих, экзогенный коллаген, являющийся основой препаратов, в организме полностью рассасывается, причем сроки его биодеградации можно регулировать, а продукты лизиса активно включаются в процессы раневой репарации, стимулируя регенерацию собственных тканей организма; в-четвертых, коллаген не обладает токсическими и канцерогенными свойствами.

В литературных источниках есть сведения об использовании коллагена в качестве основы лекарственных препаратов.

Коллаген в виде водной суспензии с добавлением фурацилина применяли для лечения эндометрита у свиноматок (А.В. Мосолов, 2003). Д.В. Шагаев, В.А. Лукъяновский, И.С. Колесниченко (2005) использовали коллаген в качестве мазевой основы при лечении дерматитов собак. Имеются данные об использовании коллагена для стимуляции репаративных процессов в кожно-мышечных ранах у собак в послеоперационный период (В.В. Белогуров, 2005). Во всех случаях были получены положительные результаты. Однако применение препарата на коллагеновой основе при лечении инфицированных ран изучены недостаточно.

В этой связи целью работы явилось разработать и провести физиолого-хирургическую оценку лекарственного средства, приготовленного на основе биополимера коллагена при лечении экспериментальных ран у животных.

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. Получить коллагеновую массу из отходов кожевенного сырья.

2. Подобрать компоненты мази и их оптимальную концентрацию.

3. Определить способ ее применения в зависимости от фазы раневого процесса.

4. Изучить влияние приготовленной лекарственной формы на течение раневого процесса у экспериментальных животных.

5. Проанализировать влияние мази на коллагеновой основе на некоторые морфологические и биохимические показатели крови у кроликов.

6. Дать сравнительную оценку эффективности воздействия исследуемой мази и линимента бальзамического по Вишневскому на течение раневого процесса у животных в эксперименте.

7. Разработать практические рекомендации по применению лекарственной формы на основе биополимера коллагена при лечении ран у животных.

Научная новизна. Впервые разработана лекарственная форма данного состава на основе биополимера коллагена, изучен характер ее физиолого-хирургического влияния на течение раневого процесса и скорость заживления ран. Экспериментально обосновано применение коллагеновой массы в качестве основы лекарственной формы при лечении ран у кроликов. Теоретическая и практическая значимость работы. Мазь на коллагеновой основе благоприятно влияет на течение раневого процесса, способствует сокращению сроков очищения ран от некротических тканей и появлению качественных грануляций. Она уменьшает размер соединительнотканного рубца относительно традиционных методов лечения. Это позволяет значительно сократить длительность лечения ран различной этиологии и в перспективе дать практические предложения по ее применению.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Подбор компонентов и приготовление мази на коллагеновой основе.

2. Клиническая характеристика раневого процесса у крупного рогатого скота и кошек под действием мази.

3. Клинико-морфологическое проявление раневого процесса у кроликов.

4. Влияние мази на некоторые морфологические и биохимические показатели крови у кроликов.

5. Сравнительная терапевтическая характеристика различных способов лечения гнойных ран.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены на научной конференции Брянской ГСХА (2005г.), на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины в условиях современного животноводства», РНИУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского НАН Беларуси» (Минск, 2005г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методику исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы и практические предложения, список использованной литературы включает 191 источник (138 отечественных и 53 зарубежных) и приложения. Диссертация иллюстрирована 27 рисунками и 16 таблицами.

5. ВЫВОДЫ

1. Использование коллагеновой массы в качестве основы лекарственных средств обосновывается ее качествами: отсутствие токсических и канцерогенных свойств, гидрофильность, способность легко образовывать комплексы со многими лекарственными веществами и полностью рассасываться в организме.

2. Применение мази на коллагеновой основе сокращает сроки лечения ран у коров на 4 дня. В контрольной группе заживление ран происходило на 19-20 сутки, при лечении мазью на коллагеновой основе - на 15-16 сутки.

3. При лечении ран у кошек мазь на коллагеновой основе ускоряет образование грануляционной ткани в 1,23 раза; эпителизацию ран в 1,26 раза по сравнению с линиментом бальзамическим по Вишневскому.

4. Мазь на коллагеновой основе благоприятно влияет на скорость регенерации травмированной ткани и эпителизацию раневого дефекта, сокращая сроки заживления ран у кроликов в среднем на 26,5 % относительно контроля.

5. Мазь на коллагеновой основе ослабляет распространение воспалительных процессов, усиливает пролиферацию фибробластов, а также способствует синтезу собственного коллагена, что оказывает существенное влияние на качество и размеры соединительнотканного рубца.

6. Применение мази на коллагеновой основе способствует снижению бактериальной обсемененности ран у кроликов. Количество микробных тел к пятым суткам лечения коллагенсодержащим препаратом составляло 400 — 500 микробов в 1 мл смыва с раневой поверхности, в то время как в контрольной группе этот показатель находился на уровне 700 — 900.

7. Морфологический и биохимический состав крови кроликов с гнойными ранами в течение всего периода наблюдений соответствовал стадиям и фазам течения раневого процесса.

Все показатели крови приближались к исходным на седьмые сутки лечения, что свидетельствует о положительном влиянии испытуемого препарата на дыхательную и защитную функцию крови при раневом процессе.

8. Содержание белка в плазме крови у кроликов в опытной группе было выше, чем в контрольной на 3-й сутки лечения на 2,6 %, на 7-е - на 3,6 %, на 11-е сутки на 2,7 %. Альбумино-глобулиновое отношение у животных на 7-е сутки лечения существенно не отличалась: в контрольной группе 1,43 в опытной - 1,45.

9. Применение мази на коллагеновой основе оказывает выраженное противовоспалительное действие, проявляющееся сокращением сроков общей реакции организма на травму.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Мазь на коллагеновой основе рекомендуем при лечении гнойных ран. Ее применение позволяет сократить сроки заживления ран в среднем до 26,5%, а также уменьшить размер соединительнотканного рубца.

2. Основные положения диссертации рекомендуем использовать при написании учебных пособий, диссертаций, статей, чтении лекций по хирургии, фармакологии, физиологии, клинической диагностике, проведении семинарских занятий среди студентов факультетов ветеринарной медицины ВУЗов и колледжей.

89