Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Изыскание нового акарицида и разработка режима его применения для борьбы с иксодовыми клещами

ГЛАВАГРОБИОПРОМ СССР ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ

На правах рукописи Для служебного пользования

Экз. №

Иванов Николай Иванович

УДК 619:616.995.421:636

ИЗЫСКАНИЕ НОВОГО АКАРИЦИДА И РАЗРАБОТКА РЕЖИМА ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ БОРЬБЫ С ИКСОДОВЫМИ КЛЕЩАМИ

16.00*04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

г.Покров - 1991

Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследовательском инс туте ветеринарное энтомологии и арахнологии и в Московсхом инсти те прикладной биотехнологии

Научный консультант - доктор биологических наук, профессор йуленко Василий Николаевич

Официальные ошоненты :

Доктор биологических наук Волков Виктор Николаевич ( ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии ) Доктор ветеринарных наук, профессор Арестов Иван Георгиевич ( ВитебскиА ветеринарный институт ) Доктор ветеринарных наук, профессор Счетов Пётр Кузьмич ( Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт г.Казань )

Ведущее учреждение - Ленинградский ветеринарный институт

Защита диссертация состоится ¿^с-^с^ 1991 г. в

__ часов на заседании специализированного совета Д.120.61.О при Всесоюзном научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии.

Адрес института: 601120, г. Покров Владимирской области, ВШШВВиМ

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВКИИВВиМ Автореферат разослан 1991 г.

Учёный секретарь специализированного совета, лауреат Государственной премии СССР,

кандидат биологических наук В .Рябов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. При решении насущных проблем народного благосостояния первоочередной задачей является существенное улучшение продовольственного снабжения страны. Этому спо -сойотвует снижение заболеваний сельскохозяйственных животных и сохранзниз их продуктивности и, в частности, с помощью новых средств борьбы с кксодовши клещами, что профилахтирует пиро -плагмидозы крупного рогатого скота.

Экономический ущерб от паразнтирования иксодовых клещей на крупном рогатом скоте в целом по стране ежегодно составляет 47.120.000 рублей ( Ярных B.C., Бойко Ю.И., 1971 ). Также зна -чительны потерн от заболевания крупного рогатого скота пиропла-змвдозамн, переносчиками возбудителей которых являются иксодо -еыз жлеци. Эти заболевания являются не только причиной падежа или вынужденного убоя животных, но и существенно снижают их продуктивность.. В результате заболевания молодняка крупного рогатого скота прямые убытки достигают 167,7 рубля на каждом жи -зогном.( Тугушин М.Н., Ярёменко Т.Г., 1972 ). В случае противо-кле^евой обработки акарицидгми экономическая эффективность со -ставляет более 3 рублей на каждом животном ( Кан П..Т., Пономарёв С.П.,1966; Ибрагимов P.A.,1985 ).>Однако многие акарициды кумулирувтся в организме, выделяются с молоком и медленно обезвреживаются во внешней среде, а членистоногие приобретают устойчивость к ним при длительном применении, что служит серьёзным препятствием к кх использованию. К тому же в недалёком прошлом ассортимент препаратов, используемых для обработки животных.з страна, был весьма ограничен: в течение десятилетий практически применяется только хлорофос. В этой связи в нашей стране к за рубежом проводится изыскание новых избирательно дейегвушрх и недорогих пестицидов.

Цаль работы. Изыскание нового акарнцида, обладающего вы -сокой избирательной акарицидностью, слабыми кумулятивными свойствами, к разработка режима его применения при пироплазми-дозах крупного рогатого скота.

Научная нопдана; Впервые установлена взаимосвязь структуры и специфической биологической активности соединений ряда цикло -

гексиловых эфиров диалкилтиофосфорных кислот и некоторых других ФОС и изучены биологические и токсикологические параметры циклофо-са, разработан режим его применения для уничтожения иксодовых клещей на крупном рогатом скоте с целью профилактики пироплазмидозов.

Практическая значимость. Работа имеет важное практическое значение, поскольку отечественный акарицид-циклофос вследствие технологичности производства, доступности исходного сырья позволяет расширить объём проводимых противоклещевых мепоприятий. Циклофос можно использовать для замены хлорофоса в зонах, где имеется хло-рофосоустойчивая популяция иксодо?ых клещей. По результатам исследований получены следующие официальные документы:

1. Наставление по применению циклофоса для борьбы с иксодовыми клещами на крупном рогатом скоте. Утверждено ГУВ Госагропроыа СССР 25.12.85 г., » И5-6а.

2. Методические указания по определению остаточных количеств циклофоса в органах и тканях животных гаэожидкост/ной хроматографией. Утверждены МЗ СССР 27.12.84 г., » 3149.

3. Рекомендации по борьбе с гнусом, мухами и иксодовьми клещами на фермах и комплексах крупного рогатого скота в Хабаровском крае. Утверждены ветеринарным отделом Хабаровского краевого управления сельского хозяйства. Хабаровск, 1980, 49 с.

Опытные партии циклофоса выпущены Волгоградским производст -венным объединением "Химпром" им. С.М.Кирова.

Сделано теоретическое обоснование нового направления поиска избирательно действующих акарицидов, что позволит в ближайшем будущем приступить к практической его реализации.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на :

1) П Конференции по вопросам химизации сельского хозяйства Татарской АССР. Казань, 1968 г.

2) Научной конференции, посвященной 95-летию Казанского ветеринарного института. Казань, 1968 г.

3) Заседании научно-методического совета при Казанском ветеринарном институте. Казань, 1971 г.

4) Всесоюзном совещании по вопросам борьбы с гнусом, клеща-

ми и оводами сельскохозяйственных животных. Новомосковск, 1971 г.

5) Конференции молодых ученых, посвященной 100-детию со дня рождения В.И.Ленина. Казань, 1971 г.

6) Ш Научной конференции по вопросам химизации сельского хозяйства Татарской АССР. Казань, 1971 г.

7) Конференции молодых учёных, посвященной ХХ1У съезду КПСС. Казань, 1971 г.

8) Пленуме Госкомиссии по итогам испытаний пестицидов ветеринарными научно-исследовательскими учреждениями в 1969-1970 гг. Москва, 1971 г.

9) Заседании Татарского отделения Всесоюзного общества фармакологов. Казань, 1972 г.

10) Конференции молодых учёных и студентов, посвященной 50-леткю СССР. Казань, 1973 г.

11) Всесоюзной научной конференции, посвященной 100-летию Казанского ветеринарного института. Казань, 1973 г.

12) Всесоюзной конференции по вопросам изыскания, изучения и применения з медицинской практике новых инсектицидов. Москва, 1973 г.

13) 1У Наутмой конференции по вопросам химизации сельского хозяйства Татарской АССР. Казань, 1973 г.

14) Актовой научной конференции по итогам научно-иеследова-тэльских работ при Казанском ветеринарном институте. Казань, 1973 г.

15) Конференции молодых учёных и студентов Казанского ветеринарного института. Казань, 1974 г.

16) Заседании ветеринарного фармсовета при ГУВ МСХ СССР* Москва, 1974 г.

17) УП Съезде Возсовзкого энтомологического общества. Ленинград, 1975 г.

18) Республиканской научно-производственной конференции по борьбе с инфекционными, инвазионными и незаразными болезнями овзц. Аша-Ать,, 1975 г.

19) П Итоговой научной конферзнции зоологов Воляско-Камского края. Казань, 1975 г.

£0) Щ Всесоюзном совещании по теоретической и прикладной

акарологии. Ташкент, 1976 г.

21) Зональной научно-практической конференции, Тюмень, 1978

г.

22) Областной научно-практической конференции.Тюмень,1979.г.

23) Научно-производственной конференции по проблема« ветеринарии в зоне БАМ. Чита, 1979 г.

24) Зональной научно-практической конференции,Тюмень,1980 г.

25) Заседании секции МСХШИ "Паразитология и профилактика инвазионных болезней сельскохозяйственных животных". Москва, 1982 г.

26) Всесоюзном совещании "Современные направления медицинской дезинсекции и дератизации". Москва, 1981г.

27) У Всесоюзной акарологическом совещании. Фрунзе, 1985 г.

28) У1 Совещании энтомологов Сибири. Новосибирск,,1985 г.

29) Ежегодных заседаниях учёных советов Казанского ветеринарного института ( 1969-1974 гг. ) и Всесоюзного научно-исследовательского института ветеринарной энтомологии и арахнологии ( 19751986 гг. ) по рассмотрению итогов выполнения научных исследований. Казань, Тшень.

30) Ежегодных заседаниях координационного совета по решению государственного задания 10. научно-технической проблемы 0.51.09. •( 1976-1984 гг. ). Москва.

Публикации. По материалам диссертации имеется 25 публикаций. Структура -работа. Диссертация изложена на 391 странице машинописного текста и включает в себя введение, обзор литературы, описание объектов, материалов и методов исследования, изложения экспериментальных данных и их обсуждения, выводов, предложений для практики и приложения. Список литературы содержит 441 наименование, из них 132 на иностранных языках. Работа иллюстрирована 41 рисунком и 23 таблицами.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Поиск новых акарицидов для борьбы с иксодовыми кленами.

2. Разработка режима применения цнклофоса для уничтожения иксодовых клещей на крупном рогатом скове с целью профилактики пироплазми-дозов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Обзор литературы Даны общие сведения об иксодовых клещах и мерах борьбы о ними. Обобщены данные о продолжительности защитного периода акарицидов на ксжно-волосяном покрове крупного рогатого скота, о путях поиска новых акарицидов.

Объекты, материалы и методы исследований Экспериментальная часть работы проведена в отделе арахно-энто.мологии и протозоологии Казанского ветеринарного института, з отделе акарологии ВНИИ вет.энтомологии и арахнологии, во ВНИИ ЦиСе, в учебно-опытном хозяйстве Казанского ветеринарного инсти-гута и в колхозах и совхозах Чувашской, Татарской, Удмуртской kCCP, Тюменской области, Узбекской, Казахской, Украинской ССР л Хабаровского края, а производственные испытания выполнены в /збекской GCP, Ставропольском крае и Чечено-Ингушской АССР.

Всего в опытах с циклофосом было использовано 1.777 голов ïpynHoro рогатого енота. При изучении особенностей сохранения цеарицидов на волосяном покрове разных видов животных исполь-зогано 25 лошадей.

Лабораторные эксперименты проведены на 286 кроликах,1.579 >злых мшах, 7 курицах, 18.319 самцах'и самках иксодовых клешей, в ток числе на 7.0Ô5 особях H.enatolicuia, 1.380 особях. H.plumbeun, 6.775 особях H.detritum, 2.370 особях X.rioi-пиз, 240 особях НаеиарйуваНа conoinns, 70 особях U.sil-varua и 419 особях ü.marginatus , а также lia 20.014 личинках Н.detrítica, 5.000 личинках-В.calcaratus, на 2.419. сам-:ах комнатных мух, 400 самках комаров, 1.260 личинках комароа, .50 слепнях ,277 клещах А. регзАсиз ,857 пчёлах и на ЮЗ ля-•ушяах.

В лабораторных условиях при изучении акарицидности препа-laToa использовали, в основном, метод топихалького .нанесения пкргогых растворов- на ииаго иксодовых клещей. В течение всего шгга клещей содержали d термостате при 25°G и относительной лаяности воздуха 85-90%. Наблюдения за состоянием клещей вели течение 7-14 суток.

В полевых условиях при изучении острой и остаточной аха-рицидной активности кожно-волосяной покров крупного рогатого скота опрыскивали растворами и эмульсиями препаратов. Проводили учёт состояния иксодовых клещей природной популяции, питающихся на обработанных животных. Кроме того, на животных под -саживали имаго клещей, выращенных в лабораторных условиях. В качестве тест-объектов использовали также комнатных мух цутём принудительного контактирования с обработанными участками волосяного покрова, а также отлавливали естественно напившихся крови самок комаров.

Подвергали исследованиям как отдельные, так и комплекс факторов, предположительно влияющих на- продолжительность сохранения препарата на кожно-волосяном покрове животных: солнечное облучение, рН волосяного покрова и др. При изучении влияния солнечного облучения на сохраняемость хлорофоса на стеклянных поверхностях, раствор препарата в ацетоне разливали в чашки Петри и растворитель выпаривали. Одна опытная группа чашек хранилась в темноте при комнатной температуре, другая подвергалась прямому солнечному облучению. Остатки хлорофоса определяли полярографически в спитэтовых смывах со стеклянных поверхностей. После часового экстрагирования проб выстриженных волос децинор-мальным раствором КС1 при комнатной температуре значение рН определяли на рН-метрах типа ЛПС-02 и ЖМ-60М.

Острую токсичность препаратов при введении в желудок и при наружном нанесении, кумулятивные свойства, местное действие изучали на лабораторных животных по общепринятым методикам.

Определение оптимального режима обработок против иксодо -еых клещей с использованием исследуемого и контрольного препаратов проведено на крупном рогатом скоте. В день исследований животных отделяли от общего етада, устанавливали их клиническое состояние, брали кровь и мочу для анализа. В последующем животных обрабатывали растворами и эмульсиями препаратов и че -рез определённые интервалы времени проводили клинико-лабора -торные исследования. Белок в моче определяли сулемовой пробой, углеводы - пробой Гайнеса, холинэстеразу в цельной крови - по Хэстрину, билирубин в сыворотке крови - по Иендрашеку.

Анализ экстрактов проб органов и тканей животных на со -

держание циклофоса проведены к.в.н. Б.А.Королёвым на газо -жидкостном хроматографе с термоионным детектором.

Производственные испытания циклофоса выполнены согласно Методике, утверждённой ГУВ МСХ GGCP 05.04.79 г.

Отдельные стороны механизма действия циклофоса изучены с применением различных методик. G этой целью использовали методику изолированной петли тонкого кишечника кролика по Магнусу, изолированного сердца лягушки по Штраубу в модификации Березина. Изучение влияния циклофоса на митотическую активность и ДНК клеток млекопитающих выполнено на монослойной культуре мышиных фибробластов ( L ). На окрашенном орсеином препарате подсчитывали мнтотический индекс культуры и соотношение от -дельных фаз митоза. ДНК г фибробластах выявляли по методу Фёльгена и Россенгека. Цитофотометрическое определение количества ДНК з ядрах проводили на установке МУ35-5 в видимом свете при длине волны 546 ммк зондовым способом.

Для этих же целей исследовали потери массы тела клещей путём взвеЕНвакия на аналитических весах, газообмен при воздействии акарицидов ( в аппарате Баркрофта в нашей модификации ), комбинированное действие акарицидов по А.И.1Итенберг и Х.И.Лут-соя ( 1965 ), гкстохиьитсески по Падикула и Герман - активность АТШ&гы, по Нахласу и Зэлшзману - активность СДГ в срезах мышц конечностей клещей после обработки анарицидвми, антихолинэсте-разную активность акарицидов в гомогенате клещей по Хэстрину, перекрёстную резистентность к цйклофосу у хлорофосоустойчивых мух.

Исследования действия циклофоса на пчёл выполнены путём индивидуального и группового кормления сахарным сиропом с добавлением к нему циклофоса.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Скрининг акарицидов

Как видно из табл. I, всего было испытано 200 соеди -нений и препаратов, в том числе III эфиров органических кислот фосфора. Бреди 7 аналогов хлорофоса установлено,что утяжеление молекулы соединения взаимодействием с гликолями и заменой ме-

токсирадикала на этокси- приводит к понижению акарицидноети. 16 полуацеталей хлораля, исходного продукта при синтезе хлорофоса, акарицидной активностью не обладали.

Таблица I

Группы препаратов, исследованных на акарицидные свойства

Наименование групп соединений : Количество соединений

$$иры органических кислот фосфора III

Гидразоны 20

Гидразиды 4

Гидразины 5

Алифатические нитросоёдинения 5

Формазоны 5

Карбаматы 3

Полуацетали 16

Другие химические соединения и препараты 31

всего:200

Из ряда ДЦВФ на акарицидность исследовано 20 аналогов. 14 соединений оказались неэффективными. Диэтил - ( 1-метил-2-хлор-винил ) фосфат и диизобутил - ( 1-иетил-2,2-дихлорвинил ) фосфат обладали слабой акарицидностью. В отличие от ДДВФ у этих 16 соединений в энольном остатке -Н был заменен на группу -СН3 или 0С1а# Другие 4 соединения : дибутилдихяорвинилтиефосфат, дибутил-дихлорвинилфосфат, диизоамилдихлорвинилфосфат и диэтилдихлорвинил-фосфат оказались высокотоксшашми для лабораторных пивотных.

Следующей группой были производные кислот фосфора с пептидной связью в эфирном радикале. Эти соединения широко исследованы как акарицидные средства для уничтожения растительноядных клещей. При этом избирательная токсичность зависела от природы аминокислотного остатка.образующего пептидную связь. В наших опытах дитио-производные аминокислот акарицидностью не обладали. Акарицидные свойства монотиопвоизводных глицина и ск- аланина по сравнешт с другими соединениями более выражены^ На основании отсутствия ака-

рицидной активности у дитиопроизводного oL - аланина и выраженной акапицидности его кислородного аналога можно предположить, что первое соединение в организме клещей переходит в соответствующий кислородный аналог и медленноподвергается сравнительно быстрой детоксикации.

Наиболее активными оказались производные тиокислот фосфора. В отделе химиотерапии Казанского ветеринарного института кандидатом химических наук В.И.Балабановым был синтезирован ряд цик-логексиловых зфиров дналкилтиофосфорной кислоты,которые исследовались нами на биологическуп активность. На способ получения цик-логексиловых зфиров дналкилтиофосфорных кислот, обладающих акари-цидным-действием, получено авторское свидетельство № 325850. Это изобретение касается получения эфи^ов тиофосфолной кислоты, а именно, неописанных в литературе циклогексиловых эфиров дналкилтиофосфорных кислот общей формулы:

- о - Е0)1 - о - <~\

R>0 4- R" Е* ^К"

где : в и в' - алкилы, циклогексил; R" - циклогексил.

Предлагаемый способ основан на хорошо известной реакции эте-эификацих хлорангндиидов кислот фосфора спиртами и заключается в ром, что хлорангидридц дналкилтиофосфорных кислот подвергают ззашодейсгвкз с циклогексанолами в присутствии акцептора хлори-iTorö водорода. Процесс проводится в среде инертного растворите-гя. ЦэлеЕые продукты получаются с высоким выходом и выделяются 13 реакционной среды известными приёмами.

Как показали исследования, в ряду испытанных нами соединений ¡илькыа акарицвднкы действием обладают смешанные эфиры, в которых : hr» являются низшими алифатическими радикалами. Как и в дру. -■их рядах этого класса, соединения с двумя этильными радикалами ¡олее токсичны для млекопитающих, чем с метильннми. Тиольный изо-:ор циклофоса имеет более высокую акарицндность и более токсичен ,ля млекопитающих, чём тионный изомер. Замена тионной серы на ислород приводит к потере акарицидной активности. Замена одного

алкильного радикала на циклогексиловый существенно снижает ака -рицидность, но пои этом почти безразлично, какой второй радикал : метокси- или метиловый. Острая токсичность для белых ыьшей при

этом опять-таки значительно не изменяется. Аммонийные соли диме-

кислоты оказались слабыми акарицидами.

Наиболее подходящим в качестве перспективного акарицида из исследованных соединений и препаратов оказался циклофос ( смесь тионного и тиольного изомеров ). Этот препарат и был в дальнейшем подробно исследован в лабораторных, полевых и производственных ус> ловиях.

В связи с необходимостью наработки препарата для ггооизвод-ственных испытаний максимально упростили синтез и приблизили его изготовление к заводским условиям ( а.с. 403681 ). Синтез диме -тилциклогексилтиофосфата прост и заключается во взаимодействии хлорангидоида дкметилтиофосфорной кислоты с циклогексанолом без растворителя и основания той температуре 60°С с отдувом выделя -юцегося хлористого водорода током инертного гала. Исходя из экономических соображений, было предложено изучить возможность ис -пользования технического продукта без предварительной очистки. В этом случае в техническом продукте циклофоса кроме целевых соединений содержатся и побочные, которые могут оказать неблаго -приятное влияние на сельскохозяйственных животных, а также на специфическую активность против иксодовых клещей. В связи с этим необходимо было выделить эти соединения в чистом виде и дать их токсикологическую характеристику. Для решения этих за -дач был радработан ызтод индикации триметилтиофосфата, хлоран -гидрида диметилтиофосфорной кислоты, тионного и тиольного изо -ыеров циклофоса тонкослойной хроматографией с использованием в качестве проявителя 0,5^-ного гексанового раствора 2,6-дибром -

Тионный изомер циклофоса

Тнольный изомер циклофоса

тилциклогексилтиофосфата, амиды и диамиды циклогексилтиофосфорной

гг -хяор-р-хинонимина ( Даурова Е.Г. и др.,1972 ). Пятна хлор-ангидрида диметилтиофосфорной кислоты, тионного изомера цик -лофоса и триметилтиофосфата имели интенсивно-красный, а ти -ольного изомера - ярко-жёлтый цвет. Оптимальной для разгонки является система "н-гексан: ацетон" в соотношении 4:1. Чувствительность метода для тионного изомера составила 0,28, для тиольного - 2,8 мкг, Установлено,что нецелевые компоненты циклофоса ( триметилтиофосфат, диметилхдорфосфат и циклогек -санол ) не играют заметной роли в акарицидном эффекте, но обуславливают нежелательные токсические эффекты на теплокровных нивотных, снижают гигиенические качества препарата. Признано допустимы:-! их содержание в техническом продукте до 20%.

Токсикологическая и акарицидная характеристика циклофоса

ДЦ^О тионного изомера циклофоса ( тиона ) для белых мышей при введении в желудок составляет 945 мг/кг, тиольного изомера ( тиола ) - 301 мг/кг. При остром смертельном отравлении цик-лофосом у белых мышей, в основном, отмечаются гемодинамические расстройства во внутренних паренхиматозных органах. Отсутствие симптомов токсического действия циклофоса у белых мышей при трёхкратном введении в желудек 1/3 ДДюо ггоепарата с 12-часо-вьми интервалами показало, что детоксикация его в организме белых мышей завершается достаточно быстро. Коэффициент кумуляции для белых мьшай при введении в желудок более 10. Циклофос является сряднетоксичньм веществом. У всех исследованных се -рий препарата, очищенных и технических, ЛДзд более 200 мг/кг. Циклофос слабо всасывается через неповреждённую кожу: кожно -оральный коэффициент = 7, При нанесении чистого вещества на выстриженную кожу белых мылей и 1-3%-ных эмульсий на кожу кроликов и 50-ной эмульсии на кожу крупного рогатого скота признаков раздражения и воспаления не обнаружено. Ппи многократных опрыскиваниях крупного рогатого скота рабочей эмульсией циклофоса клинических симптомов и изменений в крови не установлено. При этом зарегистрирована функциональная кумуляция ( угнетение активности холинэстеразы цельной крови ) без видимых клинических признаков. Чарез 4 суток после двадцати -восьмикратной обработки телят циклофосом тионный изомер цик-

лофоса обнаружен только в коже и волосах в количестве 0,025 и 0,01 иг/кг соответственно, тиольного изомера цикЯофоса вовсе не было. Обработка телёнка 5$~ной эмульсией препарата вызывает отравление с признаками холинэргического возбуждения. Бы -делительная функция печени остаётся без изменений.

ЛДзд тиона при топикальном нанесении спиртовых растворов на самок н.апа1;о;1±оит составляет 2,00 + 0,17 мкг/особь. Как видно из табл.2, наименьший коэффициент, избирательности шсари-цидного действия наблюдается для хлорофоса на самках клещей Н. миит. Тиол превышает по коэффициенту избирательности хлорофос и циодрин у всех видов клещей.

Таблица- 2

Сравнительная токсикологическая и акарицидная характеристика тиола

Наимено-: ЛДсл : ЛДса :Коэф-: ЛДсл :Коэф-: ЛДзд :Коэф-

акарици-.лых ыы^:но дая :но дм но для

дов :шей при:самок Н. самок н. Гсамох и.

Гвведе- гсиггЦит :?ель-: е11та /т :тель-

_:в мг/кг:_:_:_:_:_:_

Тиол 301 10,4+0,1 26,9 5,8+0,2 52,1 5,1+0,2 58,7

Хлорофос 660х 257,7+0,2 2,6 70,6+0,2 9,3 23,4^0,2 28,2

Больфо 4АХХ 2,3+0,2 19,1 4,4^),1 18,8

Циодрин 30^ 7,2+0,2 4,1

х

XX

XXX

по Г.Шрадеру, 196§; по И^А.Антоновой, 1975; по ¿ТА.Иванову,1974;

Чувствительность разных холинэстераз а циклофосу и сё- связь с акарицидностыо В качестве источников холинэстеразы использовали нормальную сыворотку лошади, взвесь отмытых эритроцитов крупного рогатого скота, гшогенат из серого вещества мозга, кролика и гомогенат

яксодовых клещей. Тиои не обладает антихолмнэстеразной актив-иосгьв. Тнол подавляет активность холинэстеразы эритроцитов крупного рогатого скота меньше ( 1^0= 1,4»10"^ после часовой экспозиции при 38°С ), чем активность холииэетеразы нормаль -той «коротки крови лошади ( ). Холинэстераза

:ерого вещества мозга кролика оказалась наиболее чувствительной к тиолу. Её активность тиолом подавляется в 1,6 раза'больше, чем сыворотки крови лссади, и в 2,1 раза больше, чем активность холинэстеразы эритроцитов крупного рогатого скота. Следовательно, циклоне по антихолинэстеразной активности соответствует классическому действию тиоэфиров кислот фосфора.

Параллельно с изучением антихолинэстеразной активности ци-слофоса и других контрольных аяарицидов в отношении гомогената «содовых клещей определяли острую токсичность при купании клешей этой же генерации в растворах и эмульсиях ( табл.3 ). Ана -

Таблица 3 Сравнительная акарицидная и антихо-линэстеразная активность препаратов

¡аименэванив препаратов : СКзд 1§0

:для самок .клещей :для холинэстеразы :Н. ¿е-ьггьив. через : гомогената самок :неделю после купа-:клещей Н. ае^^иа. :ния в течение I :при 380С в течение _:минуты_ :60 минут_

!С$-ный концентрат ^мульски винилфосфата ¡а основе маточника

0/£-кый концентрат мульсип циодрина течсственного про-:зводства

¡ИВЛОфЭС ( Т8ХНИЧ8-кий продукт )

лорофос с еодерха-ием 97% д.в.

(2,85+0,25).КГ5 (7,65+0,45)

(8,74+0,57). Ю"5 (6,50нЮ,53).Ю-4

(7,05+0,35).Ю""5 (5,60+0,25)-Ю"6

(3,05+0,50).Ю-4 (2,70+0,35)-Ю-6

из полученных результатов показывает, что наибольшей акари -

цидностью обладает 20%-ный к.э. винилфосфата, затем следуют 50%-ный к.э.циодрина и циклофос, наименьшая активность у хлорофоса. Однако у него наибольшая антихолинэстеразная актив -ность, затем следуют циодрин, винилфосфат и циклофос. Установлено резкое отличие между хлорофосом и циклофосом: если акари-цидность хлорофоса меньше циклофоса в 13 раз, то антихолинэстеразная активность у хлорофоса в отношении гомогената клещей больше циклофоса в 100 раз. Прямая корреляция между антихо -линэстеразной активностью и акарицидностью винилфосфата, цио-дрина,циклофоса и хлорофоса отсутствует.

Фармакологическое исследование циклофоса

Наш исследования ограничились изучением легко регистрируемых функций мышечного сокращения, а именно, изолированной петли кишечника кролика и изолированного сердца лягушки. При этом исходили из известного положения, что метаболическая си -стема, гладкой мышцы тонкого кишечника относится к положительно пентозному типу ( Лабори А., 1970 ). В этом случае преобладает пентозный путь, а цикл Кребса малоактивен. Синтез АТФ осуществляется исключительно на гликолитическом пути. Если при блокировании пентозного пути продолжаег функционировать глико-литический путь, способствуя выделению ионов натрия из мышечного волокна, то отмечается гипертония, которая может закончиться контрактурой. Проникновение ионов натрия в мышечное волокно, которое может произойти в результате блокады окислительных процессов или анаэробного гликолиза, приводит к атонии вследствие истощения при полной деполяризации.

В экспериментах на изолированной петле кишечника кролика в концентрациях 5 •10""® и меньше тиольный изомер циклофоса обычно не оказывает никакого влияния на мускулатуру. Дальнейшее увеличение концентрации гиола в растворе приводит к ослаблению тонуса кишечной стенки и уменьшению амплитуды сокращений, ко -торые проявляются уже при разведении 5.10 . При концентрации тиола 1*10"^ угнетающий эффект выражен сильнее. В этом случае прослеживается двухфазность действия препарата: после контакта с препаратом быстро наступает снижение амплитуды сокращения и понижается тонус кишечной стенки. Затем угнетающее влияние

сменяется постепенным повышением тонуса и уменьшением амплитуды кишечных сокращений. При дальнейшем повышении концентрации ти-ола наступает прекращение сокращений кишечной петли с полным её расслаблением.

Для сравнения исследовали действие хлорофоса,который в разведении 1,6-10""^ постепенно повышает тонус изолированной петли кишечника и приводит к спазматическому её сокращению.Это указывает на антихолинэстеразный характер действия препарата.

На изолированном сердце лягушки тиол применяли в разных разведениях. Препарат в разведении 5.10*"^-и меньше оказался недеятельным, а с яонцгктрацли 2.10"^ и больше вызывал замедление ритма и уменьшение амплитуды сокращений. На большинстве килограмм при разведении тиола 5.10 отмечается двухфазность действия препарата. В первой фазе обычно регистрируется отрицательное инотропное действие вплоть до полного прекращения сердечных сокращений. Затем следует вторая фаза, которая начинается с увеличения амплитуды сердечных сокращений и.замедления ритма. Вслед за развивающимся после этого отрицательным хронотропным действием увеличивается тонус миокарда. При концентрации 2*10"^ и 3-10-4 реакция сердца на тиол была более слабой и замедленной и во многих опытах первая фаза почти не прослеживается. В некоторых случаях при концентрации тиола 5«и всегда при ещё более высоких концентрациях описанные выше изменения развивались быстрее и двухфазность действия тиола невозможно было зарегистрировать. Действие было обратимым: при отмывании раствором Рин-гера во всех опытах работа сердца лягушки восстанавливалась.При этом систолический объем был заметно выше исходного.

Таким образом, в действии тиола мы обнаружили необычный эффект: это вещестзо снижает тонус килечного волокна и существенно замедляет ритм сердечных сокращений. Анализ записей сокращений кишечника позволяет предположить возможность преимущественного ингибирования тиолом анаэробного гликолиза.

Для фармакологического исследованя использовали ферментативные яды, хорошо известные по их ингибирующему действию на определённые энзиматические процессы. Сравнивая в параллельных опытах эффекты воздействия этих ядов и тиола,была сделана по -пытка определить неизвестную точку приложения действия цикло -

фоса на катаболизм углеводов.

Сульфат меди - ингибитор двух первых дегидрогеназ пенто-зофосфатного пути ( Лабори А., 1970 ) в разведении 3,3.10"^ восстанавливал сокращения кишечника,приведённого в состояние атонии под влиянием адреналина. Однако при атонии, вызванной тиолом,аналогичное действие сульфата меди отсутствовало. Хлористый кальций в разведении 6* 10""^ частично снимает действие тиола и амплитуда сокращений изолированного отрезка кишечника повышается. В этом отношении его действие совпадает с опытами А.Лабори ( 1970 ), где таким образом снимался эффект угнетения Шазы.

На изолированном^ сердце лягушкй эффект первой фазы тиола также можно связать с уменьшением активности АТФааы. С этой целью в первой фазе испытали действие мочевины,освобоадающгй сульфгидрильные группы белков и тем самым восстанавливающей функции органов, нарушенных- из-за связывания сульфгидрильншс групп ферментов ядами ( Петрова Е.В. и др.,1968 ). В разведении 1.Ю мочевина восстанавливала исходную амплитуду сокращений сердца. Тем не менее, за этим наблюдали отрицательное инотропное действие. На фоне отрицательного инотропного и хронотропного действия эффект раствора ыочовккы в том же разведении отсутствовал.

Следовательно, тиольный изомер цкклофоса угнетает анаэробный гликолиз и АНЕазу и вместе с тем он не ограничивает активности пентозного пути, который может быть усилен из-за ослабления функции гйяколитичсекого пути.

Биохимический анализ действия тиольного изомера циклофоса

Поскольку в предыдущих опытах в действии тиола было отпечено угнетение АТФазы, вежно было , оценить значение этого фактора в акарнцидном эффекте тиола и хлорофоса. Одновременно исследовали влияние этих препаратов на активность СДГ, у -которой, как. и у АТФазы, в составе активного центра имеется сульфгвд -рильная группа. При гистохимическом исследовании поперечных срезов мышц кокечивствй отравленных акарицидаыи клещей значительных изменений в сравнении е контролем' не зарегистрировало.

В последующем исследовали катаболизм жиров у иксодовых клещей под действием тиола, байгона и хлопофоса, для чего оппеделяли количественное содетогание кетоновых тел. Ппи этом показано отсутствие в течение 24 часов накопления продуктов неполного окисления жипкых кислот. По-видимому, в пепвыа сутки после обпаботки этими акапицидами не происходит угнетения активности фетментных систем цикла Квебса.

Возможность проявления акаоицидного эффекта тиола и конт-польных акарицидов байгона и хлорофоса подавлением активности одного и того яе фепмента организма иксодовых оещей оценили по известным папаметпам суммации, ослабления или усиления действия их комбинированного применения ( Кустов В.В. и дтк ,1975 ). Из табл.4 видно, что смесь тиола с байгоном имела менее чем адди -

Таблица 4

Эффект комбинипованного действия акарицидов ппи топнкальном нанесении на самок иксодовых клещей

Состав смеси акарицидов

: Соотно-: : пение : : состав-: : лятацнх : : смеси :

Су1.!ма долей составляющих акави-цидного эффекта

: Хапактет) : совместного : действия

Вид клещей

Тйол+байгон 2:1 1,11 ¿аддитивный Н.

Тиол+байг.он 2:1 .1,21 ^аддитивный н. апа4о11оиа

Хлопофос+тиол 10:1 0,64 »аддитивный н. йайгЗ^иа

Хловофоо+тиол 10:1 0,48 ^аддитивный н, апа^Исип

тинный, а смесь хлорофоса с тиолом - более чем аддитивный характер.

Видимо, более чем аддитивный херактеп акаойцидного дейст -вия смеси хлопофоса с тиолом связан с (5иотт>ансформацией хлово -фоса, поскольку тиол не может трансфовчиповаться в более ток-сичноэ соединение, а метаболизм его в организме иксодовых клещей, по нашим данным, протекает медленно. Усиление действия хлорофоса

может быть обусловлено увеличением скорости ферментативного превращения в ДЦВФ и уменьшением скорости его детонсикации. Метаболизм хлорофоса системой неспецифических эстераз, видимо,не усиливается, так как эта система при действии тиола не изменяется. На это указывает менее чем аддитивное действие смеси тиола и байгона на клещей, а в настоящее время известно, что кар-баматы в них метаболизируются, в основном, оксидазами смешан -ной функции. Надо полагать, что в угнетении активности гвдролаз или в конкурентном взаимодействии тиолом активных центров де -токсицируикцих ДДВФ ферментов заключается основной механизм потенцирования акарицидиого действия хлорофоса тиолом.

Определённые сведения получены при изучении чувствительности К циклофосу КОМК 1НЫХ мух, устойчивых к хлорофосу. При этом устойчивость к хлорофосу была обусловлена биохимической детокси-кацией. Если бы механизм детоксикации хлорофоса и циклофоса совпадали, го мы отметили бы перекрёстную резистентность мух, в противном случае её бы не было. Как видно из таблицы 5, показа-

Таблица 5

Резистентность комнатных мух к хлорофосу и циклофосу

Штаммы мух : ЛДсц для самок мух : Показатель резистентности : в мкг/г ;_

: хлорофос: циклофос : хлорофос : циклофос

Брест-72 2112 133,8 96 0,68

Душанбе-73 18282 427,0 831 1,85

Кайраккум-73 2574 198,5 117 0,86

Киев-73 2794 160,0 127 0,78

Ленинабад-73 2266 115,4- 103 0,50

Интактный 22 230,8 I I

тель резистентности ( ПР ) к хлорофосу у устойчивых штаммов колеблется от 96 до 831. Большинство устойчивых культур более чувствительны к циклофосу» чем интактный шт&хш. П^и этом ПР к циклофосу составили 0,5-0,86 при ПР интактного шташа - I. Лииь куль-

тура Душанбе-73 проявляет слабую толерантность к циклофосу -ПР=1,85. Таким образом, у этих штаммов отсутствует перекрёстная резистентность к циклофосу и биохимические механизмы де-токсикации хлорофоса и циклофоса разные. В дальнейшем, Д.К.Поляков и О.И.Смирнова ( 1978 ) подтвердили отсутствие пере -крёстной резистентности к циклофосу у иксодовых клещей, ус -тойчивых к хлорофосу.

Для выяснения цитотоксического действия тиола использовали культуру клеток мышиных фибробластов. Анализ распределения клеток по фазам митоза показывает эффект,характерный для большинства ингибиторов клеточного деления. По-видимому, под влиянием тиола клетки теряют способность к разъединению хроматид на стадии анафазы. Они задерживаются на стадии метафазы, и часть клеток погибает. Таким образом, выявлены признаки блокирования клеточного деления под влиянием тиола. Содержание ДНК в клетках под действием тиола отличается от его содержания при действии канцерогенов,тормозящих одновременно несколько фаз митотнческого цикла ( Андрианов Л.А. мдр.,1971), не вызывая блокирования каких-либо определённых его участков.Проведённые опыты дополняют данные предьщущих исследований,где при воздействии тиола наблюдается увеличение числа клеток в метафазе и снижение в конечных стадиях митоза: анафазе и телгфазе. Естественно, это отражается на содержании ДНК в клетках.

Характерным признаком действия ФОС является нарушение водного баланса,на что указывает потеря массы отравленными клещами. Основная масса тела иксодовых клещей в наших опытах уменьшалась при воздействии хлоро^фоса и тиола в первые два дня после обработки, причём наибольшая потеря массы отмечена в течение вторых суток. В дальнейшем, потеря массы стабилизирова -лась, однако она была больше контрольной. При обработке байго-ном отмечено более быстрое действие. Наибольшая потеря отмечена в течение первых суток за счет испарения влаги и выделения светло- ¡шричневой жидкости, количество которой составило 29,9-35,1% от общей потери массы за сутки. В последующие дни эксперимента выделения жидкости не отмечено. При действии токсических доз препаратов у клещей наблюдается некоор-

дотированные движения, периодическое размыкание и смыкание падьп, прокалывание хоботком фильтровальное бумаги. К концу первых суток после обработки акарицад&ми отравленные клещи прикрепляются к фильтровальной бумаге, пальпы размыкаются. Между пальпаыи на гипостоме во всех случаях обнаружена белая высохшая масса - застывший секрет слюнных желез. В другом эксперименте исследовали влияние открытия дахалец на потери массы иксодовыми клещами. Для их открывания использовали углекислый газ, который у отдельных видов иксодоеых клещей увеличивает потери массы до 10 раз ( hetnavy т., 1976 ) « видно из рис. I, наиболее выражены потери массы под действием тиола, углекислого газа и их смеси при низкой относительной влажности воздуха. Углекислый газ вызывает усиление потери влаги. В то se время под действием углекислого газа эффект тиола не усиливается. Это указывает на то, что при воздействии тиола дыхальца остаются открытыми.

Механизм регулирования потери влаги, по нашему мнению, существенно различается у сытых самок и голодающих особей. Потеря самками дыхальцевого контроля,весьма существенного для голодающих особей, приводит к увеличению потерь воды. Однако такая потеря воды, по-видимому, для сытых самой благоприятна из-за необходимости концентрирования жидкой пици, В этом случае скорость потери влаги сытыми самками после обработки акарицидами не отличается от необработанных акарицидами сытых семок или даже меньше контрольных ( Шир.инов Н.М.,Балтаджиев О.М., 1978 ). В наших полевых исследованиях и наблюдениях других авторов отмечена боль -шая устойчивость сытых клещей к анарицидаи. При применении рекомендуемых доз акарицидов они не погибают и откладывают яйца, из которых вылупляются личинки. Под действием ксследованках акарицидов, вероятно, включаются механизмы потери воды, характерна® для вполне напившейся крови самки: возбуждается ротовой аларат и пищеварительный тракт, теряется дыхадьцзЕай контроль. Эти факторы приводят к сальному и неконтролируемому обезвокив&кшо организма и к его гибели. Этот феномен имеет немаловажное значзкие в акарицндном эффекте тиола в сравнительно сухой атмосфере.

В весенний период регулярные обработки крупного рогатого скота 0,5£-ной эмульсией циклофоса и 15&-ним раствором хлорофоса с семидневными интервалами профилаетируют переносимое клещами заболевание - пироплазмоз. В июне-июле, в период наивыс -шей активности клещей рода нуа1ошша в связи-с непродолжи -гсльнш остаточным действием применяющихся акарицидов обработки с семидневными интервалами не предохраняют полностью от заболевания тейдериозоы. В этот период года обработки животных с целью профилактики тейлериоза необходимо проводить с пятидневными интервалами.

Комиссионные испытания специфической акарицидной активности 4С^-ного к.э. циклофоса для борьбы с клещами В. са1сага1;из и Я. р1ишЬешв , паразитирующих на крупном рогатом скоте, проведены в Ставропольском крае и Чечено-Ингушской АССР на 544 швотшх. На теле животных через 24-48 часов после обработки Э,5$-ной эмульсией циклофоса погибли самцы,- голодные и слабона-гаташшеся крови самки клещей. Сытые самки, снятые с животных после обработки, откладывали яйца. Однако из яиц личинки не вылупились.- За период исследований среди животных, обрабатываемых днклофосом и хлорофосом с семидневными интервалами, заболевания шроплагмидоз&чи не зарегистрировано. В контрольной группе без обработки заболело 15 животных смешанной инвазией пироплазмоза \ франсаиеллеза.

Гаи им образом, комиссионные производственные испытания по-сазали, что 40^-ный к.э. циклофоса является удобной формой для фактического применения, а опрыскивание 0,5%-ной эмульсией по ;.в. весьма эффективно'для уничтожения иксодовых клещей, парафирующих на крупном рогатом скоте.

В дальнейшем, эффективность циклофоса для уничтожения иксо-^вых клещей с целью профилактики пироплазмидозов подтверждена » раз!шх зонах страны В.Г.Боднарчуком и В.Г.Прохоровой ( 1982 ), '.З.Кащенко ( 1978 ),В.Н.Кусовым и др. ( 1982 ), Н.А.Дуйшеевым 1984 ) и др.

выводы

1. В хода исследований зависимости биологической активности от структуры 200 химических соединений установлено,что циклогексиловые эфиры диалкилтиофосфорных кислот, алкокси -группами которых служат низшие алифатические радикалы, являются потенциальными акарицидами. Удлинение алифатической уг- ! леродной цепи соединений вызывает уменьшение, тион-тиояьная изомеризация - повышение, замена тионной серы на кислород -потерю акарицидности. Связывание молекул хлорофоса гликолями, увеличение углеродной цепи алкоксигруппы и замена водорода в энольном остатке на метиловый и трихлорметиловый радикалы в ряду ДЦВФ снижают акарицидные свойства соединений.

2. Обнаружение впервые акарицидных свойств и исследова -ние биологически и токсикологически параметров циклофоса ( смеси диметилциклогексилтионфосфата и диметилциклогексилтиолфос-фата ) позволили предложить новый перспективный акарицид для уничтожения иксодовых клещей.

3. Коэффициент избирательного действия диметилциклогексил-тйолфосфата в сравнении с хлорофосом в отношении самок клещей Н. detritum выше в II, H.eBstolicuBi - в 6 и К.вИтегш:.

в 2 раза.

4. При хроматографическом разделении смеси изошров циклофоса и некоторых его серусодержащих примесей на пластинках "Си-луфол" с использованием в качестве подвижного растворителя системы ин-гексан: ацетон" в соотношении 4:1 В^ тиольного изомера цикхлофоса составляет 0,15, тионного - 0,47. Чувствительность- метода - 0,28 ыкг для тионного и 2,8 мкг для тиольного изомера.

5. Тионшй изомер циклофоса антихолинэстеразной активностью не обладает» IgQ тиольного изомера в отношении холинэс-теразы сыворотки крови лошади составляет 1,1» 10"*^ М, холинэс-теразы эритроцитов крупного рогатого скота - I,4«10"^ М, хо-линзстеразы серого вещества мозга кролика - 6,9.10-6 од.

6. Циклофос всасывается через кутикулу иксодовых клещей, в организме которых гион-тиольгая изомеризация отсутствует, тиольний изомер метаболиэкруется медленно.

7. Корреляция мсзду ак&рицидность» винилфосфата ,циодрпна,

хлорофоса и циклофоса и их антихолинэстеразной активностью в отношении- холинэстеразы гомогената иксодовых клещей отсутствует. Аларицидная активность хлорофоса меньше циклофоса в 13 раз, антихолинэстеразная активность больше в 100 раз.

8. Тиольный изомер циклофоса угнетает анаэробный глико -лиз.частично АГФазу, не ограничивает активности пентозного пути. функционирование цикла Кребса не подавляется.

9; в акторы детоксинации хлорофоса и тиоль'ного изомера в организме иксодовых клещей различны: комбинированное применение этих веществ приводит к более чем аддитивному эффекту,у членистоногих, устойчивых, к хлорофосу, отсутствует перекрёстная резистентность к циклофосу.

10. Тиольный изомер циклофоса нарушает водный баланс отравленных клещей. При зтом проявляется не местное действие с вовлечением в процесс какого-либо отдельного фермента с нару-пеннем его функции, а центральное действие; Динамика потери воды отравленными клещами не зависит от дозы препарата.

11. Взрослне голодные клещи в начальный период после линьки э качестве энергетических источников используют преимущественно углеводы, затем белки и жиры, бо временем уменьшается потребление кислорода. При отравлении иксодовых клещей тиоль-ным изомером циклофоса увеличивается газообмен за счет преимущественного использования углеводов.

12. Анализ литературных данных и собственных исследований позволил установить, что:

- в начальный период отравления иксодовых клещей известными аяарицидоми и тиольньм изомером циклофоса проявляется нервное возбуждение,из-за чего их можно отнести к нерным ядам;

- нервное возбуждение и отравление членистоногих акарицидами не связано с угнетением холинэстеразы, поскольку высокая антихолинэстеразная активность не является признаком высокой пастициднссти соединений;

- в механизме акарициднэго■действия хлорофоса и тиольного изомера циклофоса проявляются признаки блокады ганглионарных синапсов: в начальный период отправления отмечается размыка-

ниеи смыкание пальп, слюноотделение, прокалывание хоботком фильтровальной бумаги, опорожнение кишечника, усиление потребления кислорода и потеря дыхальцевого контроля, направленный поиск высокоизбирательных акарицидов возможен среди соединений, имеющих в основе механизма действия ган-глионарный блок членистоногих.

13. Циклофос относится к ереднетоксичесним веществам: ЛДзд его тионного изомера для белых мышей при введении в желудок составляет 940, тиольного изомера - 310 ыг/кг. ЛДзд 40%-ного к.э. циклофоса в аналогичных условиях для белых ыьшей -630 мг/кг по д.в. Всасывание циклофоса через неповреждённую кожу по сравнению со всасыванием из желудочно-кишечного тракта происходит медленно:кожно-оральный козэфициент равен 7.Цлклофос обладает слабыми кумулятивными свойствами:выделение его из организма и детоксикация,в основном,завершаются в течение 12 часов.

14. Двадцативосьмикратная обработка крупного рогатого скота 0,5^-ной рабочей эмульсией циклофоса по д.в. с 5-7-дневшми интервалами^ вызываает побочных клинических изменений.

15. Посж! обработки животных циклофосом в. дозе,превышающей в 1,5-2 раза рекомендуемую,отмечается функциональная кумуляция: угнетение активности холинэстеразы крови. При этом степень функциональной кумуляции прямо пропорциональна дозе препарата. При увеличении концентрации рабочей эмульсии до 10 раз отмечается отравление с признаками холинэргического возбуждения.

16. После обработки крупного рогатого скота рабочей эмульсией циклофоса остатки препарата в кишцах и внутренних органах через 4 суток не обнаруживаются. При обработке коров тионный изомер циклофоса выделяется с молоком в течение суток, остатки тиольного изомера в молоке отсутствуют.

17. Для уничтожения иксодовых клещей на теле крупного рогатого скота необходимо использовать 0 ;5^-нуьо рабочую эмульсию циклофоса. Остаточная акарицидность циклофоса на кожно-волося-ном покрове крупного рогатого скота сохраняется до 48 часов.

18. Остаточная акарицидность 1^-ного раствора эталонного препарата хлорофоса также не превышает 48 часов.Одной из причин

кггрого исчезновения хлорофоса с козшо-волоеяного покрова круп-ого рогатом скота является слабощелочная среда волосяного покоса я быстряй гидролиз. Величина pH волосяного покрова крупного огатого скота меняется з зависимости о* сезона года: её значена бояьав з зимний и ыеньае в летний период.

19. 40%-кый н.э. циклофоса пригоден для защита крупного ро-атого скота о? нксодовых клещей в течение всего сезона их парафирования. В сезон тейлериоза обработки крупного рогатого ско-а. хлорофосом а 40£-ныа я.э. циклофоса необходимо проводить с тандпэпщзш, з остальное время - с семидневными интервалами.

20. Пропзвэдствеиные испытания подтвердили высокую специфи-гехую акарицздкую азтлвность технического препарата и 40%-ного ,э. цкхлофоса а позксшгсеть его использования для уничтожения 1разкгирувщих шгсодовых плещей путё»' обработки крупного рогато) скота с 5-7-диавшян ннтервалают с цехьа профаяазтпда пиро-газяадозоа.

ПРЩОЖЕНШ ДНЯ ПРАКТИКИ

1. Поставлена® по применению цодиофоса для борьбы с нхсодо-иа клет;аш1 на хрупком рогатом скоте ( в соавторстве ). Утвзр-S3ho ГУВ Госагропроаа СССП 25.12.85 г.» Р П5-6а. Принято для s&sksscui з гэгерлнарноЯ практике ( Приказ i? 101 по ГУВ Госагро-гша СССР от 25.12.86 г. ).

2. 1Ь?однчзсхнэ указания по опредзлею® остато^ашх количеств аяофоса в органах я тканях аивотних газожидкостной хроматогра-:зй ( з соазторстпо'). Утверждены 113 СССР 27.12.84 г., & 3149.

3. Изобретении "Способ получения циклогвкснлоеых зфиров ди-жигаефосфорках каслог" ( в соавторстве A.c. 325950 СССР. ::::я?о для прженення в зотврииаряоЗ практике з еоответстзшс с мавявинси & П5-6а от 10.12.81 г. ( Права» 7 по ГУВ МСХ

GP 02 06.02.85 г. ).

4. Рекомендация по борьбе с гнусом, цухаш и иаеодошган сцпет на §зр!зз я ашвлеяеах крупного рогатого скота в Хабаровой ира© ( в еоайторсгвэ ). Утззрадас! Езтер2шар:ша отделом Ха-рэзсдггр краззэго управления сэльеяого зозяСсгва. Хабаровск, ВО, 49 с.

5. Рационализаторское предложение "Сосуд к микроаппарату Баркрофта для измерения газообмена иксодовых клещей". Удостоверение ВНИИ вет.энтомологии и арахнологии, № 237.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. A.c. 325850 СССР, М.,Кл. СО 07 f 9/16. Способ получения циклогексиловых эфиров диалкилтиофосфорных кислот / В.И.Бараба-нов, Н.И.Иванов, И.М.Шермергорн, П.А.Лаврзнтьев ( СССР ).-

£ 1435774/23-4; Заявлено 11.05.70,- 4 с.

2. A.c. 403681 СССР, М. ,Кл. С 07 f 9/16. Способ получения диметилциклогексилтиофосфата / В.И.Барабанов, И.М.Шермергорн, П.А.Лаврентьев, Н.И.Иванов ( СССР ).- 1? I70076I/23-4; Заявлено 27.09.71} Опубл. 26.10.73. БОх.» 43.- 2 с.

3. Иванов Н.И., Анисын С.Д. К вопросу остаточного инсектицидного действия хлорофоса на волосяном покрове крупного рогатого скота // Учён.зап.Казан.вет.ин-та.-1969.-Т.105.-С.310-313.

4. Анисуч С.Д., Иванов Н.И. К вопросу остаточного инсектицидного действия хлорофоса С сообщение П ) // ¡»5атериады кокф. мол.учёных, цосвящДОО-летш со дня рождения В.И.Ленина.- Казань ,1970,- С. 107-108.

5. Аниснн С.Д., Иванов Н.И. К проблеме остаточного действа": инсектицидов на иожно-волосяном покрове крупного рогатого скота JJ Тр.ВНИИВС.-1971.-Т.40.- С.238-240.

6. Иванов Н.И. Изучение кумулятивных свойств нового акарк-цидного препарата циклофоса в организма теплокровных животных // Материалы кокф. иол.учёных и студентов, посвящ.50-ле?кв СССР.

- Казань,1973.-С.358-369.

7. Иванов Н.И. Влияние циклофоса на изолированный отрззок кишечника кролика и сердце лягушки // Учён.зап.Казан.ват.ин-ад.

- 1974.-Т.118.-С.203-208.

8. Инсектицидам активность циклдфоса для мух, устойчивых i хлорофосу / И.В.Гвоздева, Н.И.Иванов, В.Н.Кирюханцева, B.H.Kycoi // Материалы У съезда ВЭО,- Л., 1974.- 4.1.- C.2II-2I2.

9. Иванов Н.И., Кусов В.Н., Зинник В.П. Влияние циклофоса на содержание ДЖ ыьшашх фкбробластов // Учён, зап .Казан, вет. и та,- 1975.- T.II9.- С.221-223.

10. Стринадкин П.С., Иванов Н.И., Баталова Г.К. К вопросу [знсканм новых акарицидов для борьбы с пеороптозом 1фоликов // юлезни овец и меры борьбы с ними в Казахстане: Сб.-Алма-Ата, ¡975,- С.298-299.

11. Иванов Н.И. Хроматография изомеров циклсфоса на тонком глов // Науч.-техн.бпл.ВНИИВЭД/ВАСХНШ.-1977.-Вья.12.-С.35-37.

12. Иванов Н.И,, Кащенко Г.З. Итоги производственного испытания акарнцидной активности циклофоса в условиях Узбекской ССР '/ Науч. -техн. бал. ВНИИВЭА/ВАОШЩ. -1977.-Внп.II. -С. 32-36.

13. Иванов Н.И., Тихомиров С.Ы. К вопросу механизма акари-;идного действия хлорофоса // Науч.-техн.бвл.ВНИИВЭА/ВАСХНИД.-[978.-Вып.13.-С.51-53.

14. Иванов Н.И., Кащенко Г.З. Антихолинэстеразная и акари-9{дная активность хлорофоса, цнодрина, винилфосфата и циклофоса s отношении клещей H. detritum // Болезни с.-х.животных: Тр. ^зНИВИ.-1978.-Т.26.-С.52-56.

15. Иванов Н.И. Некоторые токсикологические свойства композитов технического циклофоса // Науч.-техн.бюл.ВНИИВЭА/ВАСХНИД,

- 1979.-Вып.17.-С,51-56.

16. Иванов Н.И. Больфо // Итоги гос.испытаний пестицидов зет.и.-и. учреждениями в 1978 г.: Материалы к 19 Пленуму Госко-лисеии. Тбилиси, 6-8 июня 1979 г.- M.,I979.- С.8.

17. Иванов Н.И. Полевые испытания акарицидов против иксодо-зых клещей в Хабаровском крае // Науч.-техн.бюл.ВНШВЭА/ВАСХНШ,-

- 1980.-Вып.20,- С.24-28.

18. Иванов Н.И. Влияние акарицидов на водный баланс иксодо-зых клещей // Науч.-техн.бюл.ВНИИВЗА/ВАСХНШ1.-1981.-Вип.22,- С. 18-51.

19. Кусов В.Н., Иванов Н.И., Макушенко В.М. Акарицидность %ля иксодид и токсические свойства циклофоса // Тез.докл.на Ш Зсесоюз.соЕещ. по теорет. и приклад, акарологии. Ташкент, 4-6 экт.1976 г.- Ташкент,1976.- C.I54,

20.^ Кусов В.Н., Иванов Н.И., Макушенко В.М. О системном действии циклофоса на аргасовых клещей и постельных клопов /7 /чён.зал.Казан.вет.ин-та.-1978.-Т.129.-С.91-94.

21. Королёв Б.А., Иванов Н.И. Некоторые вопросы гигиеничё-ского аспекта применения циклофоса против иксодовых клещей // Соврем, направления мед. дезинсекции и дератизации: Тез.докл. М., 17-18 окт. 1981.- М.,1981.- С.71-72.

22. Применение циклофоса для профилактики пироплазмидозов крупного рогатого скота / Н.И.Иванов, У.Я.Узаков, В.Н.Кусов, А.К.Коншина // Химия в сел. хоз-ве.- 1981.- № II,- С.42-43.

23. Токсикологическая оценка новой препаративной формы циклофоса на крупном рогатом скоте // Н.И.Иванов, В.Н.Кусов, У.Я.Узаков, Б.В.Валиев, А.К.Коншина, В.М.Макушенко, Л.П.Пащенко // Сиб.вестн. с.-х. науки.- 1983,- № I.- G.71-75.

24. Иванов Н.И. Изменение водного баланса клещей H.anato-lioum под действием акарицидов // Пятое Всесоюз. акаролог. со-вещ.: Тез.докл. Фрунзе, май 1985 г.- Фрунзе:Илим, 1985,- С.138-139.

25. Иванов Н.И., Кербабаев З.Б. Действие акарицидов на газообмен иксодовых клещей // Экология и география членистоногих Сибири: Сб. / Отв.ред. д-р биол.наук проф. А.И.Черепанов.- Новосибирск: Наука, 1987,- С.233-234.

Тираж 100 - 2,0 п.л. - 2,03 уч.-изд.л.

Заказ 130

Формат 60x34/16

^Механизированное г/логлтелыюе производство ВНИКШПа