Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Исследование иммунологического статуса свиней в промышленных комплексах в связи с вакцинопрофилактикой сальмонеллеза

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

ВСЕСОЮЗНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-КОНТРОЛЬНЫЙ ИНСТИТУТ ВЕТПРЕПАРАТОВ

ГАЙДАМАКА АЛЕКСАНДР ВИКТОРОШЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА СВИНЕЙ В ПРОМЫШЛЕННЫХ КОМПЛЕКСАХ В СВЯЗИ С ВАКЩНОПРОФИЛАКШОЙ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

На правах рукописи

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА - 1990

Работа выполнена в Харьковском зооветеринарном институте им. Н.М.Борисенко

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор АПАТЕНКО В.М.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор ПРИТУЖН П.И.

доктор ветеринарных наук, профессор СИДОРОВ М.А.

Ведущая организация: Витебский ветеринарный институт

Защита состоится "/3 » ^¿¿¿¿^уиЯх 1990 г в часов на заседании Специализированного совета й Д 120.85.01 во Всесоюзном государственном научно-контрольном институте вет препаратов /123022.Москва,Звенигородское шсссе,5,ВГНКИ/.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всесоюзного государственного научно-контрольного института ввтпре-паратов

Автореферат разослан " ^ " СИ^пД^Л 1990 г

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук АНТОНОВА К.А.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕШСША РАБОШ

1.1, Актуальность теш. Опыт ведения современного промышленного животноводства указывает на необходимость глубокого изучения особенностей функционирования биосистемы '"животнне-биосфера". Высокая концентрация поголовья ка ограниченной территория приводит к значительному усложнению и повышению взаимовлияния различных звеньев'биосистемы.В нашей стране в крупных свиноводческих комплексах острой проблемой остается высокая микробиальная обсе-мененность и загазованность воздуха;используемые технологические приемы кормления поросят являются неадекватными физиологическим потребностям формирующегося организма.Эти и другие особенности обитания свиней в кошлексах обусловливают нарушения обмена веществ .усугубляют становление и функционирование защитно-адаптационных систем,что вызывает изменение характера реактивности организма на различные воздействия.

Успешное решение ветеринарных проблем без учета специфики интенсивного свиноводства становится невозможным.До настоящего времени, например, еще окончательно не решена проблема сальмонеллеза. Это связано с недостаточным уровнем знаний об особенностях морфологического и функционального становления системы иммунитета у свиней.выращиваемых в условиях интенсивной технологии,а также особенностях жизнедеятельности микроорганизмов в сложной системе биоценоза,специфичного для каждого хозяйства.Сальмонеллез по-прзжнему наносит немалый экономический ущерб,кроме того,это заболевание .являясь антролозоонозом,имеет большое как эпизоотологи-ческое.так и эпидемиологическое значение /П.И.Притулин,1975;

B.И.Покровский и др.,I979;Ю,Е.Полоцкий и др.,1979;Ю.А.Малахов, Е.Ю.Щустер,В.С.Соловьева,1981;В.П.Урбан,И. Л.НаЙманов,1984;

C.Г.Пак и и др.,1982Р. и др.,1983/.

В промышленных комплексах участились случаи заболевания и гибели поросят от сальмонеллеза,несмотря на проводимую широкую вакцинопрофилактику.В этой связи возникла практическая необходимость исследований,направленных на выявление причин низкой эффективности мер специфической профилактики и поиск более совершенных средств и методов вакцинации,Поэтому изучение особенностей функционирования системы иммунитета у свиней,в том числа в связи с вакцинопрофилактикой сальмонеллеза,имеет практический и научный интерес, и является весьма актуальным.

1.2.Цель и задачи исследований. Целью работы являлось изучение особенностей становления системы иммунитета у поросят промышленных комплексов;выявление основных причин недостаточной эффективности специфической профилактики сальмонеллеза,а также усовершенствование схемы вакцинопрофилактики этого заболевания среди поросят крупного промышленного комплекса,стационарно неблагополучного по сальмонеллезу.

Исходя из поставленной цели,решались следующие задачи.

1.Изучение показателей количества и функциональной активности Т- и В-лимфоцитов в крови поросят промышленных комплексов.

2.Выделение иммунохимически чистех препаратов 1§0,1§М и 1§А из сыворотки крови свиней и получение к ним моноспэцифических антисывороток с целью их использования при изучении уровней иммуноглобулинов различных классов в крови поросят.выращиваемых по интенсивной технологи!.

3.Изучение сравнительной эффективности парэнтералыюй иммунизации поросят промышленного комплекса,неблагополучного по сальмонеллезу .различными вакцинными препаратами против сальмонеллеза свиней.

4.Изучение сравнительной эффективности пероральной и парэнте-ральной вакцинации поросят против сальмонеллеза,выращиваемых в условиях совхоза-комбината,неблагополучного: по этому заболеванию.

5.Исследование особенностей динамики некоторых иммунобиологических показателей у поросят в процессе поствакцинального иммуногенеза в ответ на введение вакцип различных типов против сальмонеллеза^ также б процессе экспериментальной сальмонеллезной инфекции на фоне упреждающей вакцинации.

I.В.Научная новизну. Предложен способ выделения ЩИ из сыворотки крови свиней,защищенный авторским свидетельством на изобретение й 1573579. .

Определены особенности динамики показателей количества розет-кообразукщих Т- и В-лимфоцитов,уровней Г^СД^МД^А в крови поросят промышленных комплексов Харьковской и Донецкой областей.Показана нецелесообразность вакцинации поросят против сальмонеллеза в послеотьемный период /26-45-дневный возраст/.

На поросятах.вырадиваешх в совхозе-комбинате,неблагополучном по саяьыонеллезу,проведено сравнительное изучение эффективности различных способов иммунизации против сальмонеллеза с использо-

ванием нескольких видов вакцин;определены особенности динаклкк показателей активности Т- и В-с;ютемы имму.лтета,уровнеЧ ХдО. 1дМ,1дА,а также специфических антител в крови поросят б процессе поствакцинального иммуногенеза м'последующей экспериментальной сальмонеллезной инфекции.Показано,что при аероряльном применении вакцины против сальмонеллеза свиней из супрессорного ре-вертанта дампомМа, оЬо&галыид Н9 наличие колостральных специфических антител в крови поросят не оказывает отрицательного влн-ния на поствакцинальный иммуногенез.

1.4.Практическая значимость работы. Экспериментально обоснована целесообразность проведения пероральной иммунизации 10-20 — дневных поросят вакциной против сальмонеллеза свиней кз оупрес-сорного ревертанта Ьабпсни&а еАс&ыиий1 №9 о целью специфической профилактики сальмонеллеза в промышленных свиноводчески! комплексах,неблагополучных по этому заболеванию.

Планирование и осуществление ветеринарных мероприятий в промышленных комплексах предлагается проводить с учетом особенностей становления системы иммунитета и наличия выраженных иммуно-дефицитных состояний у поросят.Полученные результаты свидетельствуют о нецелесообразности применения вакцинных препаратов в послеотъемный период /Я6-45-дневшй возраст/ при вырациванми свиней по интенсивной технологии.

1.5.Реализация результатов исследований. Получено авторское свидетельство Й 1573579 на изобретение "Способ выделения иммуноглобулина Ми /приоритет от 21 марта 1908 г/.Составлены "Методические рекомендации по определению количества и функциональной активности Т- и В-лшфэцитов в периферической крови свиней" и "Методические рекомендации по выделению иммуноглобулинов 0 в М из сыворотки крови свиней и получению к ним моноспецифических антисывороток".На основании полученных данных усовершенствована схема ветеринарно-санитарных мероприятий в промышленном свиноводческом комплексе мощностью 108 тыс.свиней,стационарно неблагополучном по сальмонеллезу.

Результаты исследований по теме диссертации используются для совершенствования учебного процесса на ветеринарном факультете, а такие факультета повышения квалификации Харьковского зооветеринарного института.В качестве широкой пропаганды полученных данных Харьковским МТЦНТИ изданы два информационных листка.

1.6.Апробация пябот^. Основные результаты проведенных исслэ-

ловяняй доложены на:

- Всесоюзной нзучной конференции "Проблемы диагностики,терапия н профилактики незаразных болезней сельскохозяйственных животных Е проглншлонном животноводстве"/г.Воронеж,октябрь,1986/;

- Всесоюзной конференции "Эпизоотология,эпидемиология,средства диагностики,терапии и специфической профилактики инфэкционных эаболвьаняй,общих для человека и жввоткых"/г Львов,октябрь,1988/;

- I областной конференции "Вторичные юлмунодефнциты инфекционной х кеикфекциок.чой этиологии "/г. Харьков, апрель,! 039/;

- Всесоюзной конТерйнции "Актуальные проблемы э к о г. е ркие н таль и о й и клнничсскоЯ типологии "/г .Москва, октябрь, IÍ89/;

- 1 Всесоюзном нмлуиологическом съезде /г.Сочи,ноябрь,I9SS/;

~ отраслевом совещании Министерства медицинской промышленности "Состояниэ,проблемы и перспективы развития диагностики бактериальных инфекции/Главное управление 'Тиопрепарат".Всесоюзный НИИ прикладной микробиологии.г.Оболенск,ноябрь, 1989/;

- заседании Харьковского областного научного общества к.мунологоз и алде ргологсв/г.Харьков,декабрь,19Ь2/;

- годовых отчетных научных кок^вреыслх сотрудников У.ЗМ IS87, 1968,19í!9,IOSO гг.

1.7.Публикация результатов исследований. По результатам исследований опубликовано 1.5 научных работ,в том числе "Методкческке рекомендации по определению количества и функциональной активности Т- к В-лимфоцитов в периферической крови свинеД".авторское свидетельство ко изобретение Й1573579 "Способ выделения иммуноглобулина М"; составлены, "Методические рекомендации по выделению иммуноглобулинов С1 и М из сыворотки крови свиней и получению к ним v.o-носиецяфичоских антисывороток".

1.8.Структура и объец диссертации. Диссертация изложена на 141 странице машинописного текста и ьклэтает:введение,обзор литературы, материалы собственных исследований,их обсуждение,вывода и практические предложения.Диссертация иллюстрирована 17 таблицами ,21 рисунком.Список использованной литературы включает 1.81 источник,в том числа 108 иностранных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЁДОНАНИЯ .

2.Г.Материалы и методы исследований.

Исследования проводились ка свиньях крупной белой порода,выращиваемых по интенсивней технологии в промышленных комплексах мощностью 108 тыс.свиней в год.эксперименты по изучению эффектиз-

ности вэкцинопрофклактики сальмонелл.13а 1гроводялксь на поросятах соБГозо-комоината,стационарно неблагополучного гю этоку заболева-

h11d.

Экспериментальные хизсткые подвергались клиническому наблюдении, а также лаборатории« исследованиям,включающим общий клинический анализ крови,определение количества розеткообраяующих Т- и В-лшл-фоцятов,функциональной активности Г- к Б-лигЛоц-лтов,урсйнвЯ IqG, IgM.IgA и специфических протизосальмонеллозных антител е kuobv. С целью определения напряженности поствашстналытого протизоса'я.-монеллезного иммунитета, гтоигмо лаборатории исследований,проводилось прямое заражение ваюткирэванннх поросят вирулентным штаммом сальмонелл /Scdnauiüi tdofoiaiiui*, ка. Vujiiwdoif/.Зараже;п:е проводилось спустя 3 недели после завершения вакцинации.Основными критериями для определения уровня устойчивости к сальмонеллезу являлись результаты прямого заражения вакцинированных яивоткнх указанной культурой. Трупы павших поросят подвергались таателънсму бактериологическому и патологоанатоиическому исследованию.

Клинический анализ крови проводили по общепринятым методикам. Количество розоткообразукщхх 'Г- и В-лимфоцитов определяли методом спонтанного розеткообразования.В качестве ивдикаторшх частиц для Т-лимфоцитов использовали 0,5^-ю взвесь тщательно отитах зритродатов барана,для В-лимфсцитов- эритроциты оыка,сенсибилизированные антиэригроцитарной сывороткой и комплементом.Ро-зеткообразумщю.ш 'Г- и В-лш.'-фоцитами /Е-РОК и И С-РОК/ счлтали глотки,присоединившие три и более индикаторных частицы.Взвесь мо-нонуклеар.чых клеток получали методом градиентного центрифугирования на градиенте плотности фиколл-верографина с удельным весом 1,077.

Функциональную активность 7- и В-лшфоцитов определяли в ре-акц;ш блаеттраноформацик /РБТ/ на фитогемагглютишш' /ФГА/ и ми-то ген лахоноса.З работе использовали ФГА фирмы Jfco /для PET 'Г-лимфоцитов/ и китогвн лакокоса производства фирмы Sigma /для PET В-лимфоцитов/'. Перед постановкой реакции проводили под-титровку каздой новой серии штогенов для определения ниболее эффективной стимулиружщей концентрации в культуральной среде .Учет результатов PET Л осуществляли по поглощению клетками радиокзо-топнол метки /Н3-тймидина/ путем измерения проб на сщштилляци-01шом счетчике "Бэта-I" в жидком сцинтилляторе.Кяасттраноформа-циониув активность лимфоцитов оценивали по коэффициенту'' стимуляции клеток /Кс/,который вычисляли по формуле: ,

■ ■ л. JLl!_ . «да.

с в .

А- количество импульсов в пробах с митогеком, F- количество импульсов в контролышх пробах /без мйтогена/.

Определение количества IgG,IgM,IgA в сыворотке крови осуществляли методом радиальной иммунодиффузии /по Манчини/ в равномерном слоэ I,5Ji-ro агарового геля,содержащего моноспецифическую антисыворотку к иммуноглобулинам свиньи соответствующего класса.

Моноспецкфические антиеыаоротки к IgG,lgM,IgA свиньи готовили самостоятельно.Процесс получения указанных препаратов включал следующие основные этапы:

- выделение иммунохкмичоски чистых препаратов IgQ,I§MtIgA свиньи;

- иммунизация очищенными антигенами /IgCJ.Iglil.IgA/ животных-продуцентов антисыворотск;

- истощение антиеыворогок с целью удаления антител к легким цепям иммуноглобулинов;

- контроль качества полученных препаратов.

Иммунохимически чистые препараты IgG/IjM.IgA получали из сыво-_ ротки крови свиньи с использованием методов ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-сефадексе А-50,ДЭАЗ-целлюлозе¡гель-хроматографии на сефарозе 4В,сефароэе бВ.сефадексо в-150,сефадексе G-200 /производства фждшРНагтас/'а/;препаративного электрофореза в блоке агароэы и других.Контроль чистота полученных пропаратов осуществляли методами электрофореза в полиакриламидном геле и имлуно-электрофореза с применением стандартных моноспецифических антисывороток к IgO,I<jM,IjA свиньи производства фирмы Dessau /Т№/.

В качестве животных-продуцентов антисывороток использовали взрослых кроликов,которых иммунизировали очищенными антигенами по специальной сгеме с применением полного адыозанта ФреИнда.

Для удаления из антисывороток антител к легким цепям иммуноглобулинов применили иымуносорбентннй метод.Готовили иммуносор-бенты на основе сефарозы 43,активированной бромцианом.

Контроль качества полученных антисывороток осуществляли методом кммуноэлектхюфореза против цельной сыворотки крови свиньи,а также иммунохимически чистых препаратов IgG,Igf.5,IgA свиньи.

Уровень специфических протавосальмонеллъзннх антител определяли в реакции агглютинации /с убитнм бактериачышм анмгено1</,я такае в реакции нэпрялюй /пассивной/ гемагглюпшацпи о С-»ритро-цитарными сальмонелле зными диагностикумама.

С целью установления точной причини гибели экспериментальных животных все трупы подвергали тщательному бактериологическому исследованию с обязательным типироюнием культур,выделешшх из различных органов,Тилироваше культур сальмонелл осуществляли в реакции агглютинации с сальмснеллезными агглютинирующими поливалентны?® О-сыворотками и ионорецепторными Н-сивороткамк первой и второй фаз с учетом биохимических свойств бактерий.

Результаты исследований подвергали статистической обработке на ЭШ с целью количественной и качественной характеристики варриа-ционных рядов,а также определения достоверности различий между сравниваемыми рядами по 1 -критерию Стьюдента.

2.2.Результаты изучения показателей иммунологического статуса свиней в промышленных комплексах.

Целесообразность исследования активности Т- и В-сисгем иммунитета диктовалась необходимостью виявлешш возможных иммуноло я-ческих расстройств у поросят,выращиваемых по интенсивной технологии.Работа проводилась в крупных промышленных комплексах,где отьем поросят осуществляется в 26-27 дневном возрасте.

Исследовашш проведены на семи группах клинически здоровых животных 25-90 дневного возраста,а также на 45-дневных поросятах с клиническими признаками гастроэнтерита.Проведено также сравнительное изучение количества и функциональной активности Т-лимфо-цитов в крови поросят промышленного комплекса и порослт.выразд-ваешх по традиционной технологии./ всех животных определяли лейкоформулу а количество лейкоцитов , в крови .Последнее у молодкх поросят подвержено большим физиологическим колебаниям,поэтому определение абсолютного количества розеткообразуюших 7- и В-лям-фоцнтов /Е-РОК и ЕАС-РОК/ как показателя активности Т- и В-сиотем иммунитета представлялось нецелесообразен.Этот показатель вычисляли у поросят старше 40-дневного возраста.В таблице I приведены результаты исследований количества Е-РОК и ЕАС-РОК в крови 25-90-дневных поросят.

Наибольшая заболеваемость и гибель поросят в комплексах наблюдается первые 2 недели после отъема-в возрасте 30-45 дней.Анализ данных по уровню Е-РОК в крови свидетельствует о выраженной нестабильности Т-системы иммунитета в этот период.Количество ЕАС-РОК в крови поросят подвержено значительно меньшим колебяю;ям:через ч-5 дней после отъема оно несколько снижается /о 9,610,94 до 7,4+0,87$/,а затем медяэнно повышаете?.К 40-дневному возрасту

этот показатель досг/.ГР.ет послеотъемьогс уровня,а в возрасте 45 дней увеличивается до 20,5+1,352 /1,93+0,08 х ХОг/л/.

Таблица I

Количество Е-РОК и ЕАС-РОК в крови поросят,выращиваемых в проглныленном комплексе мощностей 108 тнс.свиней в год

Возраст :Кол-во: Количество Е-РОК : Количество ЕАС-Р0К животных, :яи£-х :__________________________

дней ; : относитель-¡абсолютное,¡относитель-:абсолютное, : ное' % :х109/л :йое- % : х 1С9/л

25 40 12,7*1,6 9,в£0,94

50 10 18,0+2,4 7,4+0,87

36 10 30,2+2,7 7,5+0,9Г

40 20 23,912,6 10,3+1,03.

45 15 17,7±1,8 1,61+0,11 20,5±1,Э5 I, ,93+0,08

55 10 32,2+2,? 4,12+0,15 29,7±1,42 3, ,95+0,32

90 15 35,3+2,3 4,44±0,33 31,2+2,67 4, ,23^0,46

Количество Е-РОК в крови кликичоскк здоровых поросят с 45- до 90-дкэвного возраста равномерно повышаюсь и в трехмесячном возрасте составило 35,5+2,3$ /4,44+0,33 х Ю9/л/,в целом соот.остсгнуя низким значенилм.Показатвли ЕАС-РОК имели сходную тенденцию,но количество этих клеток в крови ЭО-дневннх кизотши соответствовало довольно высокому значения и составило 31,2+2,67? /4,232.0,46 х X Ю9Д/.

Поскольку в "критический" период /30-45-дневный возраст/ у поросят в комплексах отмечаются заболевания преимущественно с клк-ническиш признаками гастроэнтерита.представлялось целесообразным исследовать особенности футидаонироватш Т- я В-систим иммуните-та.у таю« яавотных.В опыт отобрали 14 голов 45-днгЕних больных поросят с клиническими признаками гастроэнтерита и 10 голой клинически здоровых животных того же возраста.У больных животных установлено достоверное снижение количества Е-РОК и ЕАС-РОК в крови,особенно выраженное в отношении Е-РОК,уровень которых у больных и здоровых поросят составил соответственно 10,7+0,6!? /О,83*0,21 х 109/'л/ и 18,6+а,3$ /I,80+0,Зо'х 109/л/.При этом,показатель достоверности отличий по относительному количеству -составил: Р<0,00Т.;по абсолютному- Р<0,02.

Ранний отъем поросят от свиноматок является еилышм стрессор-ют .¡актором.В совокупности с комплексом других неблагоприятных воздействий это приводит к нарушениям созровшая и Яункциониронь-шы важнейших систем организма,п той числе иммунной .В этой связи практически!! п научный интерес представляло сравнитолтлюо изучение активности Т-системы иммунитета у поросят промшзланного комплекса к поросят,зырациваемнх по традиционной технологии.Для чро-зедэкия исследований стобрали 10 голов 45-диаз:п1Х поросят крупной белой иороды,выращиваемых в промышленном комплексе,где отъем осуществлялся в 26-дневном возрасте,а также 10 голов 45-днеБних поросят той же городи,выращиваемых в условиях обычного хозяйства и находаиихся под маткоЗ.У всех тавотных определяли количестве лейкоцитов, лойкоформулу,количество и функщюиалыгую активность Т-лимродатсз крози.В таблице 2 представлены основные результат лабораторных исследований.Относительное и абсолютное количество й-ГОК в крови поросят промышленного комплекса было достоверно ниже /Р< 0,01 и Р<0,05/,чем у поросят,выращиваемых в обычном хо-

Таблица 2

Показатели активности Т-системн иммунитета у 4Ь-дкевга1х поросят промкомплекса к поросят обычного хозяйства.

Показатели активности Т-системы иммунитета

Поросята

промкомялекса :обычного х-ва

:Показатель

^ДОС'ГСБ-ТИ отличий

Количество Е-РОК:

относительное абсолютное, х 109/л

функциональная активность в РЕТЛ на ФГА:

Б пробах без ФГА, имп.Дшк па 100 тыс.

Т-ЛИМфОЩ1ТОВ

в пробах,стимулированных ФГА,

ими./мин на 100 тис. Т-ЛИМФОЦИТОВ

Коэф{Я1СЗбНГ етшудя-ции в РКГЛ на ФГА

17,0*2,24 1,61+0,17

28,6+3,12 2,41+0,36

Р< 0,01 Р< 0,05

148,44+31,83 92,80+12,91 Р>0,05

3133,22+949,61 6483,1^+937,67 Р <0,05 21,1+2,9 ß9,S+9,7 Р< 0,001

зя.Чствв и составило соответственно:17,0£2,24# /1,61+0,17 х Ю^/л/ и 2В,613,12?! /2,41+0,36 х 109/л/.Кодф<Тк<циэнт стимуляции ь РБТЛ на 4>ГА составил у этих животных соответственно¡21,1+2,9 и 69,9+9,7 /?< 0,001/.Таким образом,функциональная активность Г-клеток крови у поросят промкомплокса оказалась более,чем в 3 раза ниже,чем у животных обычного хозяйства,находяимхся под маткой.

Полученные данные указывают на то,что активность Т-системы иммунитета у поросят 45-дневного воираста,выращиваемых по интенсивной технологии,значительно нике.чем у поросят,взращиваемых по традини-онной технологии.Этот факт свидетельствует о неспособности порвох к полноценной иммунной реакции на воздействия различных антигенов, в том числе содержащихся в вакцинных препаратах.Тем более что большинство антг.тюв являются Т-зависнмыми и обуславливают обязательнее участие Т-клеток в развитии иммунного ответа.

Помимо изучения показателей клеточного иммунитет ,были проведены исследования по изучению показателей гуморального звона,среда которых важнейшими являются уровни иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови.Для определения абсолютного количества в сыворотке крови применили метод радиальной иммуно-диффузии по Манчики.В риботе использовали моноспецифические англ-сыворотки к 1§0,1§М,1}А свиньи,которые готовили самостоятельно. Полученные препараты подвергали тщательному контролю с использованием стандартного набора антяенвороток и эталонной сыворотки крове свиньи производства фирмы Ьеазаи /ГДР/.

Проведено изучение уровней Г^О.ХдМ,в крови поросят различных возрастных груш /о 15- до 111-дневного возраста/, выращиваемых по интенсивной технологии в комплексах .Полученные результата представлены в таблице 3.Приведенные данные свидетельствуют о том, что уровни иммуноглобулинов всех классов имеют сначала четкую тенденцию к снижению,а затем к постепенному увеличению.Минимальное количество 1§А /0,4 (¿0,025 г/л/ зафиксировано у 36-37-дневных поросят;в последующем 5 тот пок азатель равномерно повышался,приближаясь к значениям у взрослых животных.

Количество 1^0 у 15-16-дневкых поросят составило 13,213+0,631г/л. В сыворотке крови 43-44-дневных животных оно было минимальным: 6,893±,0,407 г/л.Различие между показателями у 29-30-и 36-37 -дневных поросят оказалось статистически недостоверным,по,1Тому можно считать,что общая тенденция к снижению до 43-44-дневного возраста в целом со;:раняется.Начиная, лишь, с 50-51-днеЕного воэрас-

та,количество заметно повышается и ч возрасте 8С-81 лень достигает уровня взрослых животных.

Таблица 3

Показатели количества Т^ОД^МД^А в сыворотке крови поросят промышленных комплексов, г/л.

Возраст

дней 12А : гь : . : а 1£М : я

15-16 н.и. 13,213+0,631 47 3,963+0,263 47

2.2-23 1,717+0,181. 17 11,093+0,824 17 3,610+0,315 • 33

29-30 0,599+0,099 . 9 7,881+0,983 21 2,337+0,276 21

36-37 0,453+0,025 89 9,158+0,500 101 1,795+0,093 99

43-^4 0,579+0,057 24 6,893+0,407 35 2,147+0,213 33

50-51 0,744+0,079 18 8,494+0,716 18 2,639+0,2Ь9 16

60-81 0,775+0,052 26 22,451+1,564 26 2,760+0,313 25

ИО-Ш 1,098+0,060 44 18,408£0,Э35 45 2,905+0,160 43

При исследовании сыворотки крови поросят промышлонногб комплекса, стационарно ньблагополучного по сальмонеллезу,обнаружили,что количество и Т^М в крови 22-43-дневных животных значительно ниже,чем у поросят того же возраста,но выращиваемых в условиях благополучного по этои^у заболеванию совхоза-комбината. Так .количество у 22-дневных поросят'соответственно составило:5,953 + ±0,447 и 11,093+0,824 г/л /Р<0,001/;у 2У-дневних- 3,791+1,226 и II, 232+1,080 г/л /Р< 0,001/;у 36-дневных- 4,771+0,719 и 9,241 + 0,436 г/л /Р<0,001/;у 43-дневнкх- 4,090+0,258 и 7,864+0,396 г/л /Р<0,001/.

Наименьший уровень /1,795+0,093 г/л/ выявили в крови 36-37 дневных поросят.К 51-дневному возрасту уровень достлгкет 2,639+0,289 г/л и статистичесгш достоверно но отличается от показателей у более старших животных.Показатели количества у поросят неблагополучного и благополучного по сальмонеллезу хозяйств соответственно сосгавили:у 22-дневных- 2,954+0,036 и 4,584+1,86г/л /Р<0,01/;у 29-дневних- 1,17210,079 и 3,210+1,028 г/л /Р<0,00Г/; У 36-доевшх- 1,509+0,161 и 1,824+0,101 г/л /Р>0,05/;у 43-дневных- 1,456+0,174 г/л и 2,407+0,272 г/л /Р<0,02/.

В целом следует ответить,что у поросят промышленных комплексов активный синтез иммуноглобулинов'классов А и М начинает компенси-

ровать распад пассивно полученных от матери,начиная примерно с .%-37-дневного возраста ¡класса в - с 43-44-дневного возраста.

Полученные результаты свидетельствуют о наличии у поросят в крупных комплексах иммунодефицитных состояшШ, связанных с попиленной активностью как клеточных,так и гуморальных звеньев иммунитета.гто свидетельствует о практической необходимости учета выявленных особенностей становления и функциопировашш систем! иммунитета у поросят при планировании ветеринарных мероприятий. 2..3.результат; изучения 'тТ^ективности вакцинопролгилактикл ральмоналлеза с вино К ^ промышленном комплексе.стацко-рар^о неблагополучном по сальмонеллезу Б совхозе-комбинате,гдз проводилась работа,на протяжении ряда лет специфическая профилактика сальмонеллеза была неэффективной: отмечалась повышенная заболеваемость и гибель поросят от сальмонеллеза, несмотря на проводимую вакцинацию.Для того,чтобы выявить особенности динамики некоторых иммунобиологических параметров у поросят,вакцинированных против салъмоне.шеза.и их связь с неспособностью животных к наработке иммунитета,была проведена серия специальных экспериментов.

3 первой серии опытов применили л арэ моральную иммунизацию поросят о использованием формолвакцины, вакцины из штшяла ТС-1'77, а также вакцины из сунрессорного ревортанта иАсйгш-иил Л 9

с последующей проверкой фактической устойчивости поросят к саль-монеллезу в опыте прямого заражения вирулентным штаммом сальмонелл. Вакцинация поросят промышленного комплекса,стационарно неблагополучного по салъмонэллезу,проводилась на фоне сниженной иммунологической реактивности /резко пониженные показатели Т- и В-системы иммунитета/.По нашему мнению,это явилось одно!5 из главных причин неспособности поросят к полноценному иммунному отьету на вакцины,который контролировали клинически /по результатам эк-оперкментапьной сальмонеллезной инфекщга/>а также по результатам исследований уровней специфических антител,ГсОД^МД^А,количества Е-РОК.ЕАС-РОК,функциональной активности Т- и^В-лимроцитоЕ крови ж рада других гематологических показателей.Спустя неделю после завершения вакцинации у поросят всех групп уровни розеткообразу-ющкх Г- и В-лимфоцитов в крови соответствовали достаточно знсо-ким'показателям,Однако функциональная активность Т- и В-лцмйоци-тов.при этом,находилась на'очень низком уровне.То есть вакцинация не способствовала повышению функциональной активности Т- и В-систем иммунитета.Несмотря, на то,что'количество Е-РОК у вакци-

нировант:х животных,спустя 14 дней поело завершения вакцинации било заметно тше.чзм у контрольных /келригатых/ поросят,их (¡унк-циональнач активность била ниже по сравнению с показателя?™ в контроле,Отсутствие заметных сдвигов в системе иммунитета в поствакцинальный период наглядно также просматривалось на примере ЕАС-РСК в крови.Количество этих клеток у вакцинированных животных,а также «функциональная активность В-лимфоцитов /в ГБТЛ на митоген лаконооа/ в поствакципальны!! период не ккели достоверных отличлй от показателей в группе контроля.Более того,у псросяг, призитых формолпакцкно:!, коэффициент стимуляции з РБТЛ на патоген лаконоса в 44-днявном возрасте бил достоверно /?< 0,02/ ниже,чем у швот'ту. контрольной группа. •

Примечательно,что у поросят,парантералъно привитых живыми вакцинами, через недолю после первой вакцинации заметно снижались тлтри специфических протавосать.чонрллезных /0-6,7/ антител,а поело ревакцинации эту тенденцию отмечали также и у поросят.привитых формолвакциной .Спустя 22 дня поило завершения вакцинации у подопытных животных была вызвана .-экспериментальная сальмонел-лепная инфекция.Всего заражению подвергся 131 порососок:по 35, 32,33 и 31 животному соответственно из групп,привитых формол-вакцииой,вакциной из штамма ТС-177,вакциной из еупрессоркого рэ-вертанта Ьа1тлщ11а. ^л&юыиАъ №9 и контрольной группы.Поело заражения все поросята подвергались ежедневному клиническому наблюдению с обязателыщм измерением температуры тела утром и вечерей. Трупы павших животных тщательно исследовали бактериолога-чески и патологоанагоккчеекк с целью установления подлинной причины гибели .Следует подчеркнуть, что летальность ке имела значимых отличий по группам поросят и находилась на высоком уровне: от 71,4 до 78,43.Причем пероболевание у привитых тавотных тлело более тяжелый характер,о чом свидетельствовали клинические наблюдения и результаты патологоаяатомичэского вскрытия.

Приведенное данные свидетельствуют о том,что парентеральная вакцинация поросят.промышленного комплекса,стационарно неблагополучного по салъмокеллеэу, оказалась о практической и ишунобй-ологической точки зрения н'елелессобразной.Более того,ке вызывая активного гюствакцгшального иммуногенеза,она явилась причиной дополнитэлы'ого антигенного прессинга на органазм поросят.Последнее,по нашему мношш, предопределило более тяжелое течете экспериментальной инфекции.Особенно заметное ухудшение клинической '.

картинн нереболевания и картины патологоанатомического вскрытия отмечали у поросят,иммунизированных вакциной из штамма ТС-177.По этой причине в дальнейших исследованиях по выбору эффективной схемы вакцинопрофилактиш этот препаргт ш не использовали.

С учетом особенностей становления системы. иммунитета у поросят црошшленных комплексов,а твкжо результатов проведенных экспериментов, нам представлялось целесообразным применить такую схему вакцинации,которая бы,прежде всего,способствовала активному включению в иммуногенез лимфоидных структур кишечника и приводила к развитию иммунитета уже к 5-месячному возрасту.Шло предположено,что в условиях промышленного комплекса,неблагополучного по сальмонеллезу, наиболее эффективной будет пероральная вакш»нация животных 10-20 -дневного возраста.Однако,по мнению некоторых исследователей,вакцинацию поросят против сальмонеллеза,подученных от иммунных свиноматок, необходимо проводить в более поздние сроки,так как ранняя иммунизация сопряжона с наличием у животных пассивных молозивных антител, что приводит к нарушению иммуногенеза и снижению количества соответствующих антител в организме Д1.А.Антюков,1904;Т.М.Прудникова, А.К.Брем, 1987;Р. Ргееаил^аъ др.,1978/.Такой подход к решению проблемы вакцинопрофилактики сальмоноллеза,по-видимому,целесообразен в условиях хозяйств,имеющих традиционную технологию выращивания свиней,или,по крайней мере,в промышленных комплексах,благополучных по этому заболеванию.В условиях промышленного комплекса, -стационарно неблагополучного по сальмонеллезу,практически стоит задача создания достаточно высокого уровня иммунитета уже к 1,6-месячному возрасту,чего невозможно достичь,начинал вакцинацию после трзхнедельного возраста,Рецк яш поставленной задачи,к тому же„затрудняется особенностями интенсивной технологии /ранний отъем ж др./ и нередко имеющей место недостаточностью систеш иммунитета у поросят,а также общим недоразвитием животных.С целью практической проверки целесообразности ранней пероральной вакцинации поросят была проведена серия экспериментов,заключающихся в 'сравнительном изучении эффективности пероральной и парэнтеральной иммунизации 10-20-дневпых животные.Причем ь этих опытах использовались поросята,полученные от иммунных к сальмонеллезу свиноматок,с целью экспериментальной проверки влияния молозивного специфического им -мунитета на поствакцинальный иммуногенез. ■

В опытах использовали поросят,полученных от 8 евин маток.На 9-й день после опороса в сыворотке крови свиноматок обнаруживали спе-

цифические противосальмойеллезнне антитела /0-6,7/ в титрах от 1:40 до 1:160.У 9-дневных поросят титры колебались от 1:10 до 1:40.Для вакцинации животных использовали вакцину из супрессорно-го ревертанта ¿а/тоыИа сАо&ыаи1! Й9,которую вводили трехкратно перорально в 10-,15- и 20-дневном возрасте /группа I/ и парентерально в том же возрасте /группа 2/.Поросят группы 3 прививали трехкратно формолвакциной,согласно "Наставления по применении-..."; животные группы 4 вакцинации но подвергались и служили в качестве контроля.В 46-дневном возрасте животных всех групп заразили вирулентным штаммом сальмонелл.В конце опыта уровень летальности по 1-й,2-й,3-й и 4-й группам соответственно составил: 20,75,75 и 100/6. Полученные клтшчеекке данные свидетельствуют с достаточно высоком уровне иммунитета у 46-дневных поросят,перорально иммунизированных в 10-20-дневном возрасте вакциной из супрессорчого ревертанта &а1глопШ& скскимш.^ №9.06 этом свидетельствует тот факт, что при заражении ЛД^эд,уровень легальности в этой группе был минимальным среди остзльных опытных групп и составил Примечательно, что именно у поросят,привитых этой вакциной перорально,в 33-дневнсм возрасте наблюдали значительное повышение уровней специфических антител в сыворотке крови,свидетельствующее об активном поствакциналг.ном иммуногенезе .У этих же поросят в ответ на заражение гуморальная иммунная реакция била выражена в наибольшей степени.Результата сопоставления динамики титров антител и уровней иммуноглобулинов различных классов позволяют сделать вывод о том, что развитие комплекса иммунных реакций у поросят группы I, в ответ па экспериментальную инфекцию,происходило по принпипу вторичного иммушюго ответа.Это подтверждается тем,что в перше дни после заражения активнач гуморальная реакция была связана с синтезом антител,преимущественно относящихся к иммуноглобулинам класса О.В Оолпе поздние сроки пвреболованля наблвдали равномерное повышение количества 1^А,что позволяет предположить об индукции синтеза 1£А-антител,игращихважнейпуюроль в защитных механизмах на поверхности слизистых оболочек.После заражения не иа-блюдалось повышение уровней 1£М,что также свидетельствует об анриорной га.тмунологкческоЯ -компетентности организма поросят в отношении основного антигенного комплекса сальмонелл и,как следствие этого,развитии защитных реакций по принципу вторичного иммунного ответа,ибо Яри -первичном ичг.унном ответе прежде всего синтезируются -антитела,относящиеся к

Как известно,основная цоль вакцинаций и заключается в сообще-

нии зшвсшсш способности к белее активной /в функциональном и временном аспэктах/ индукции имцушшх реакций на определенные антигены. ' -,

Парэитеральцая вакцинация поросят fie вызвала развития актизного иммунитета к экспериментальной салькокеллозной инфекции.Следует отметить,что натсчие молозйбных специфичзских антител в организме ди-зотннх не оказало отрицательного влияния па постзашшпйлымй кглму-н'огонез.В отлячле от парентерально привитых поросят,у порорально имлугазированных зкквотннх не .наблвдали тенденцию к снютениа уровней спеотфических антител в крови посла введения вакцин.

Сопоставление уровней специфических антител к количества lgG, IgM.IgA з сыворотка крови свиноматок и их поросят указывает на то, что молозивнмй иммунитет связан опере дачей поросятам антител,относящихся, преимущественно к ишуноглойулинам класса G и А .Уровни специфические антител,а также Ig3,Iç>U,IgA в крови свиноматок но являются критериями для сценки их способности сообщать потомству полноценкнй молозившй иммунитет .Этот процесс зависит от уровня иммунных бе.яков е молочных секретах,а такте эффективного их всасывания в кишечнике поросят первых дней ккзни и ряда других факторов. В связи с этим критерием полноценности процесса передачи пассивного иммунитета могут являться показатели количества указанных белков в крови клинически здоровых поросят-сосунов.

• 3. ВЫВОДЫ

'1.У поросят,выращиваемых по интенсивной технологии,отмечается им-Мунодефициткое состоящее,наиболее выраженное в иослеотъемный период /30-45-дневнкй возраст/ и характеризующееся погакенным количеством E-POK,EAC-PûK,IgG,a также снижением. функционашгой активности Т- и В-лим$оцитов крови.

2.Установлена целесообразность пероральной иммунизации 10-20-дневных поросят вакциной из супрессорного ревертанта З(Unuorxtùi. olwàwe-■buii .'69 в промышленных комплексах в связи с"ее"более высокой км-муногеяностью и низкой реактогенностью по сравнению с другими типами вакцин.

3.Парэнтеральная иммунизация 16-30-дневнкх поросят промышленного комплекса против сальмонеллеза сопровождается снижением титра кс-лостральных специфических антител в крови жиеотнкх,полученных от иммунных свиноматок, и не вызывает активного поствакцинального иммуногенеза. '

4.При пероральной шауиизации Ip-20-днеБншс поросят вакциной из

. - 19 -

супрессорпого реЕертанта ba£t*wtui€ci cfio&latiu/ifrV наличие пассивных специфических антител б крови животных нз оказывает отрицательно? с влшш:л на поствакципалышй иммуногенез. б.Салы.'.онеллезнач инфекция у 46-53-дневных поросят промшпл'лшсгс комплекса сопровождается значительным скигегаем активности Т-системы иммунитета.

6.У поросят,иороралыю иммунизированных вакциной из супрессорного ревертанта Штом&а Л9 и зараженных вирулентны« штам-

мом сапьмо.челч в 46-дневном возрасте,установлена иммунологическая реакция-по принципу вторичного иммунного отзета: актив in; Й синтез специфических IgG-антител,более чем в 1,5 раза превышающий аналогичный показатель у животных,иммунизированных парэнтэрально. 7 .Специфический колостралышЯ противооалшонеллозныг иммунитет у поросят обусловлен передачей потомству от имгунных свиноматок специфических антител,относящихся к иммуноглобулинам класса 0 и А.

0.Уровни специфических протийосальмонеллезшх антител,IgG.I^M и IgA в куоек свиноматок не коррелируют о таковыми у полученных от тис поросят.

4. РЕКОЖНДАЩМ ДЛЯ ПРАКТИКИ ,'Х-чр conepiaohctbcdainin специфической профилактики сальмонелле за сышяй в промышленных комплексах,неблагополучных по этому зъболе-вачгао,рекомендуется применение пероральной иммунизации поросят до 20-дневного возраста,С этой целью успешно можэт быть использована вактиа против сальмоиелиеэа свиной из супрессорного рэверганта batrnc/utfa. с&ЛегихУш'ь ЯЭ.

Наличия иммунодефицит! кх состояний у поросят .выращиваемых по интенсивной технологии.обусловливает нецелесообразность применения вакцинных препаратов против сальмонеллеза в послеотъемннй период /30-45-дневннй возраст/.

5. СПИСОК РАГОГ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЯЖ ДИССЕРТАЦИИ

1.Дунаев Г.8. Дустовзр А. Я..Гайдамака А.Б.Активность Т- и В-систем иммунитета у поросят в комплексах/'I Ветеринария. 1984.№5.С.39.

2.Пустовар А.Я..Скобельцина Е.С.,Гайдамака А .В. Показатели Т-системы иммунитета у поросят при раннем отъеме//Ветеринария. 1985.Ив.

С.35-36.

•З.Пустовар А.Я..Гайдамака А.В.Возрастные особенности некоторых иммунологических показателей у поросят промышленных комплексов/' По-вншепие эффективности производства свинины:Сб.науч.тр/Харьк.р.-х. ин-т им.В.В.Докучаева.Т.315.ХарьковЛ985.С.43-48.

4.Пустовар Л.Я.,Гайдамака А.В.Значение некоторых иммунологических и биохимических показателей дал контроля резистентности поросят в крупных снецхозах//Проблемы диагностики,терапии и профилактики незаразных болезней сельскохозлйствен.шх животных в промышленном животноводстве:Те з.докл.на Все союз.науч.конф.Воронел,окт.1986.

5.Пустовар А.Я.,Гайдамака A.B..Апатенко В.М.Методические рекомендации по определению количества и функциональной активности Т- и В-лиыфоцитов в периферической крови свиней.Харьков.1988. 22 с.

6.Пустовар А.Я.,Гайдамака А.В.Некоторые вопросы, диагностики и специфической профилактики кишечных инфекций и псевдомоноза свиней в спецкозах// Эпизоотология,эпидемиология,средства диагностики,терапии и специфической профилактики инфекционных заболеваний,общих для человека и животных:Тез.докл.на Всесоюз.науч.конф.Львов.1988.

7.Гайдамака A.B..Пустовар А.Я.Об использовании свиньи в экспериментальной иммунологии.Влияние миелопвда на количество Т-лимфоци-тов и иммуноглобулинов 0,М и А в крови свиней// Интерлейки ни и другие медиаторы в клинической *ммунологии:Респ.сб,науч.тр./Под ред.Чередеева Л.Н.,Ковальчука Л.В.МоскваЛ£89.С.7'Л-83. в.Дустовар А.Я.,Гайдамака А.В.,Апатенко В.М..Пурисман В,И.Контроль имкуьологического состояния организма свиней и эффективность применения сывороточных препаратов в специализированных хозяйствах/У Иг форм, листок ÍÍ48-89 Харьк.ГЩНТИ. Харьков,1989.

Э.Пусювар А.Я..Гайдамака А.В.,Апатенко В.М..Пурисман В.И.Динамика основных классов иммуноглобулинов и розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов у поросят,выращиваемых в услов-ях промышленного стресса/' Вторичные иммунодефицита инфекционной и неинфекционной этиологии: Тез. докл. науч,конф. Харьков .1989.С.75.

Ю.Пустогар А,Я..Гайдамака А.В.,Кафтанов В.В..Пурисман В.И.Опыт применения миелопида для иммуносткмуляции у поросят промышленного комплекса/'Ивформ.листок №44-89.Харьк.МТШШ! .Харьков,1969.

11.Пустовар А.Я..Гайдамака A.B. Эффективность применена миелопида при терапии вторичных иммунодефицитов у поросят/teз.докл.на

I. Всесоюз.иммунологическом съезде.Москва,I989.Т.2.С.260.

12.Пустовар А.Я..Гайдамака А.В.Динамика некоторых показателей иммунологического статуса поросят в условиях промышленного свиноводства// Ветеринария: Ре сп.межвед,тематич.науч.сб.Киев,I989.C.43-45.

13.Пустовар А.Я.,Гайдамака А,В..Пурисман В.И.К вопросам иммунологического контроля у свиней и эффективность применения препаратов .

гаммаглобулина в промышленном комплексе/У Интенсификация произволе тва свинины:Межвуэ.тематич.сб.науч.тр.Харьков,1989.С.106-- 110.

14.Гайдамака А.В.Состояние иммунитета у вакцинированных поросят при экспериментальном сальмонеллезе/7 Ветеринария.1990.№7.

С.30-31.

15.А.с. 1573579.Способ шделения иммуноглобулина М /А.В.Гайдамака, А.Я.Пустовар.В.М.Апатенко.1990.

Ответственный за выпуск- кандидат биол.иаук И.Л.Антонова

Подп.в печ. 4.10.90 г. Формат 60x84 I/16. Бумаг а тип.ЖЗ. Объем 1,0 уч.-изд.л. Тираж 100. Заказ 445.

Участок оперативной печати Харьковского СХИ