Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Использование пептидных биорегуляторов для коррекции иммунодефицита у поросят при бронхопневмонии

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

КРЯЧКО Оксана Васильевна

УДК 619:616.24—002.153:615.361:636.4

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЕПТИДНЫХ БИОРЕГУЛЯТОРОВ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ИММУНОДЕФИЦИТА У ПОРОСЯТ ПРИ БРОНХОПНЕВМОНИИ

Специальность: 16.00.02 — Патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

1992

Работа выполнена на кафедре патологической физиологии Санкт-Петербургского ветеринарного института и в научно-исследовательской лаборатории биорегуляторов Военно-медицинской ордена Ленина Краснознаменной академии им, С. М. Кирова.

Научные руководители^ лауреат премии СМ СССР, доктор ветеринарных наук, профессор Лютииский С. И.; лауреат премии СМ СССР, доктор медицинских наук, профессор Хавинсон В. X.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Су-лейманов С. М.; кандидат ветеринарных наук, доцент Дугин Г. Л.

Ведущая организация — Нижегородский сельскохозяйственный институт.

Защита диссертации состоится « ^■» ' 1993 г.

в 13 часов на заседании Специализированного совета Д 120.20.01 при Санкт-Петербургском ветеринарном институте (196084, Санкт-Петербург, Московский пр., 112).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского ветеринарного института.

Автореферат разослан

1992 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, доцент

Никишина И. В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАБОТЫ

<

Актуальность проблемы. Развитие свиноводства на промишлен-эй основе ставит перед ветеринарными работниками новые задачи э профилактике и лечению инфекционных и незаразных болезней жи-этних. Существенным фактором, влияющим на развитие животных, зляется заболеваемость ю респираторными болезнями.

По даннш ряда авторов заболеваемость поросят в крупных ком-ieiccax неспецифической бронхопневмонией колеблется в пределах 3 - 24 %, а ггри откорме сборного поголовья я содержании его в зудовлегворительннх помещениях может достигать 60 % /Шахой А.Г. др., 1979, 1988; Душук Р.В., 1983; Андросик H.H., 1985/. Реющим фактором в возникновении'и развитии песпецифической брон-зпнеЕМоиии является снижение резистентности организма свиней к зблагоприятннм воздействиям внешней среди /Шахов А.Г.,и др., Ш; Данилевский В.М., 1983; Урбан В.Д., Найманов И.Л., 1984; фпуть И.М. и др., 1989; Абрамов С.С. и др., 1990/.

К проблеме голмунодсфицитных состояний в настоящее время продается все больший интерес. Литература, в частности, содержит «дения о возникновении таких состояний у лвдей при респиратор-dc заболеваниях /Быкова A.B. и др., 1980; Марциновский В.Ю. и »., 1933; Чучалин А.Г. и др., 1989/. В ветеринарии этот вопрос учен недостаточно. Большая часть работ посвящена состоянию им-tihoR системы при данной патологии у телят /Красников Г.А. я др., 69; Конопелько П.Я. и др., 1990; Могиленко А.Ф., 1990; Ворон E.G. и др., 1991 и др./. Имеются лишь единичные работы, отра-лщие состояние неспецифической резистентности поросят при брон-гшевмония./Васильев М.ф,, 1975, 1977/, До настоящего времени чти не изучена роль клеточного звена иммунитета при легочной тологни у животных, поэтому представлялось необходимым прове-ние исследований с целью уточнения_з'начекия этого фактора в тогенезе неспецифичеокой,бронхопневмонии поросят.

Снижение чувствительности микроорганизмов, вызывающих забо-вания легких, к антибактериальным препаратам, учащение случаев карственной аллергии, значительные нарушения общего и местного мунитета у больных пневмонией обусловливают необходимость раз-ботки нових методов лечения с применением иммунорегулирующих едств /Провоторов В.М., Никитин A.B., 1987; Чучалин А.Г. и др.» 89/. Возможность разработки таких методов лечения открывается тем применения нового класса веществ - пептидных биорегуляторов.

В.Г.Морозов и В.Х.Хавинсон /1981, 1383/ сформулировали представл нив о биорегулирувдих пептвдах, осуществляющих перенос специфиче кой информации, необходимой для нормального функционирования, ра вития и взаимодействия клеток. В настоящее время пептидные биоре гуляторы выделены из самых различных органов и тканей и некоторн из них успешно применяются при различных заболеваниях, сопровождающихся нарушением функции иммунной, нервной, половой и других систем /Яковлев Г.М. и др., 1987, 1990/. Однако, несмотря на шир кое использование пептидных биорегуляторов в медицинской практик и начало применения их в ветеринарии /Скрипник Э.П., 1989; Иване ва Т.А./ 1990; Карпенко Л.Ю., 1990; Сухинина Т.Л., 1992/, является не изученным влияние этого класса веществ на организм живох ных при бронхолегочной патологии, в частности, у поросят.

Цель и задачи исследований. Основной целью наших исследований явилось изучение состояния клеточных факторов защиты для обоснования возможности коррекции иммунодефицитных состояний у поросят при неспецифической бронхопневмонии пептидными биорегуляторами, такими,как тимоген■/синтетический пептид тимуса/ и 1Ш1 /пептидный комплекс, ввделенный из легких/.

Для достижения поставлечной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить иммунологические показатели, наиболее' полно отражающие состояние клеточных факторов защиты при бронхопневмонии: гемограмму, содержание Т- и В-лиыфоцитов, функциональную активность Т-звеяа иммунитета, цитологические характеристики . местной защиты легких, функциональную активность альвеолярных макрофагов. - ' .

2. Изучить изменение иммунологических показателей в динамична заболевания поросят бронхопневмонией при традиционном леченш ' с применением антибиотиков и при дополнительном введении ишуно-

модуляторов.

3. Определить влияние.пептидных биорегуляторов на производственные показатели - среднесуточный прирост живой массы и сохранность переболевших животных.

4. Произвести сравнительную оценку предложенных схем лечения на клеточную защиту поросят и на производственные показатели

Научная новизна. Впервые проведено комплексное изучение состояния клеточных факторов защиты общего и местного иммунитета у поросят при неспецифической бронхопневмонии.

Показано, что внутримышечное введение пептидных биорегуля->ров способствует восстановлению иммунологической реактивности поросят при бронхопневмонии, сокращает сроки заболевания, уси-[вает энергию роста переболевших животных.

Практическая значимость работу. Результаты проведенных ис-(едований раскрывают особенности нарушений клеточных факторов щиты у поросят 'при бронхопневмонии и обосновывают целесообраэ-ють включения пептидных биорегуляторов в комплекс лечебных ме-•приятий при данной патологии.

По результатам исследований разработано и внедрено 5 рацио-лизаторских предложений.

Внедрение. Результаты исследований внедрены в совхозе "Спут-:к" Всеволожского района Ленинградской области и используются в ебном процессе на : эфедре патологической физиологии Санкт-Пе-рбургского ветеринарного института.

Апробалия работы.Основные положения диссертации доложены на учннх конференциях профессорско-преподавательского состава, учных сотрудников и аспирантов Санкт-Петербургского ветеринар-го института /1991, 1992 гг./, на 46-й научной конференции мо-цьсх ученых, аспирантов, и студентов /1992 г./ и на заседании федри патологической физиологии.

Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в научных работах.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 152 страдах машинописного текста, включая 25 таблиц, 7 рисунков и 14 гографий. Она состоит из введения, обзора литературы, собст-шпс исследований, обсуждения полученных результатов выводов, актическиХ предложений, а также приложения. Список литературы тачает 236 источников, в том числе 85 на иностранном языке.

Основные положения диссертащш. выносимые на защиту:

1. Бронхопневмония у поросят сочетается'с дефицитом клсточ-с факторов защиты и нарушением их функциональной активности.

2. Сравнительная оценка влияния пептидных биорегуляторов на !е антибиотикотерапни на показателя клеточных факторов защиты 1его и местного иммунитета у поросят при бронхопневмонии.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССОДОВАШЙ

Исследования проводились в 1989 - 13.92 гг. на базе кафедры алогической физиологии Санкт-Петербургского ветеринарного'

института, научно-исследовательской лаборатории биорегуляторов Военно-медицинской академии им.С.М.Кирова, а также в совхозе "Спутник" Всеволожского района Ленинградской области.

Свинокомплекс "Спутник" является хозяйством с замкнутым прс изводственннм циклом. Породний состав поголовья - помесь крупно! белой и ландрас. Параметры микроклимата в помещении, где провод! дйсь исследования, соответствовали зоогигиеническим нормам для поросят 1-го периода откорма. Для коршения животных использова/ оя комбикорм - СК-6,

Всем этапам исследований предшествовал подбор поросят по принципу аналогов /порода, возраст, кивая масса, общее развитие/ Били сформированы группы животных с клиническими признакам! заболеваний лех'ких и клинически здоровых. Диагноз "бронходневмонш ставили на основании результатов клинического осмотра, термометрии, наличия кашля, истечений из носовых ходов. В начале и конц< исследований проводили взвешивание животных..

Особенности иммунобиологической реактивности поросят при бронхопневмонии изучали на 30 животных в возрасте 115 -120 дней, У поросят исследовали кровь и проводили оценку состояния клеточного звена местной защиты ;_эгких до и после лечения антибиотиками по схема, принятой в хозяйстве/ бициллин-З. п дозе lGüOO Кд/ю и тривит в дозе 0,1 мл/кг по 5 инъекций в течпше 20 суток/. Для сопоставления полученных.результатов проводили аналогичные исследования на 30 клинически здорових поросятах соответствующего возраста.

Изучали влияние на течение бренхопныж.онин с^нтьтичеокого пептида тимуса - тимогена, который бш ввделен методом шео'ко-а|фектишой жидкостной хроматографии из природного препарата тимуса - тималииа /Яковлев Г.М. и др., 1988/, а также пептидов легочной паренхимы /ШШ/, полученных из легких телят по методу В.¡Г.Морозова и В.ХДавинсопа /1981/. Для этого 120 поросят ф клиническими признаками бронхопневмонии бшга разделены па 4 грушш, где да фоне основного лечения антибиотиками в двух. т шх препарата применяли раздельно, в одно;'! сочетаннр, а последняя служила контролем.'

■ . 1<ровь от животных исследовали до и через 10, 20 и -30 суток после начаяа лечения. Оценку состояния клеточного звена местной защиты легких проводили до и спустя 30 суток после начала лечения, .одновременно отбиуали пробн для гистологического исследова

над легких.

Кровь для исследования брали у животных из орбитальйого венозного синуса по методике Дк.Понда /1983/. Гематологические исследования /определение количества эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, СОЭ, лейкограмма/ проводили общепринятыми методами /Ковдрахян И.П., 1985/. Для иммунологических исследований из гв-паринизированной 'крова выделяли лимфоциты центрифугированием в градиенте плотности 1,077 г/мл /фиколл-пак, *t'Ka.t->r>ixcùCL Швеция/ по A.ft<n/u»w /1968/ и использовали в концентрации 2 х 10® клеток/мл. Km оценки Т-системы иммунитета у поросят определяли: количество Î-лимфоцитов /Е-РОК/ методом спонтанного роэеткообразования с эритроцита-.® барана /¿fondai Al. et я? , 1372/} количество "активных" Т-лимфоцитов /Еа-РОV /Кегтап tAtial., 1976/; количество теофилинчувствительных /супрессорц/ и теофиллинрезис-тентных /хелперы/ Т-лимфоцитов /Litna.tiêul S. et tit. , 1978/; функциональную активность Т-лимфоцитов в реакции торможения миграции лейкоцитов /РТМЛ/ с конкзнавалином А /Кон А, "5'егул", ФРГ/ по Дж.Бендиксену и др./1980/ в модификации В.ХДавинсона и В.Г.Морозова /1980/. Состояние В-системы иммунитета определяли по ко-чячеству В-лимфоцитов /М-РОБ/ методом спонтанного розетаообразо-зания с эритроцита«! мнши /St&U\Opcutc<, G., ¿Itiott £. / Ду?4/.

С целью оценки состояния местной клеточной защиты легких про-' адшга бронхоальвеолярный лаваи тотчао после убоя животных. В • ¡ава-шой жидкости определяли общее количество клеток и их проектное соотношение в мазках, окрашенных по Паяпенгейму-Крюкову. >агоцитарную активность альвеолярных макрофагов определяли по .оглощекию частиц латекса /Фрейдлин. И.О., 1986/. Способность кле-ок 'лаважиой жидкости к продукции супероксид-аняон-радикала . спонтанной и стимулированной/ определяли по hestct /1987'

применением в качестве стимуляторов форбол-мзристат-ацетата MA, растворимый стимулятор/ и опсонизарованного зимозана/03, орпускулярннй стимулятор/-.

Цифровой материал обработан статистически с использованием *крокалысулятора "Электроника МК-61" с введением программ-•А.Костгоченко и др./1987/„

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Иммунобиологический статус поросят при бронхопневмонии •

и -влияние на него антибиотикотерапии.

В результате проведении исследований мы установили, что «

бронхопневмония у поросят сопровождалась снижением /Р^0,05/ С1 держания эритроцитов и гемоглобина, ускорением /Р«-0,05/ СОЭ. При изучении лейкограммы было отмечено увеличение /Р < 0,05/ содержания палочкояцерных форм нейтрофилов, аозино- и лимфопенкя, Иммунологические исследования показали, что у поросят при бронхопневмонии имело место нарушение дифференцировочных процессов в органах иммунной системы. Это выражалось в уменьшении у больных животных относительного содержания Т-лимфоцитов на 38,7 % /Р < 0,05/ и незначительным снижением содержания В-лкмфоцитов, что в целом вело к достоверному увеличению в крови больных содержания нулевых клеток. Оно составило 64,7 + 1,33 % против 51,7 + 1,31 % у здоровых.

При бронхопневмонии мы также отмечали снижение /Р< 0,05/ абсолютного содержания Т-лщфоцитов на 18,2 % по сравнению со здоровыми животными, а постановка теста"активного" розеткообра зования позволила вшшить снижение /Р<0,05/ как абсолютного, так и относительного содержания Еа-РОК на 26,9 и ЗУ,7 % соотве ственно у больных по сравнению со здоровы®. . ■

При изучении соотношения иммунорегудяторных субпопуляций Т-лимфбцитов мы установили, что при бронхопневмонии имело мес! почти двукратное снижение /Р< 0,05/ коэффициента дифференциро! ки Етр-РОК/Етч-РОК по сравнению со здоровыми животными.

При определении функциональной активности Т-клёток было выявлено, что у больных животных снижена продукция лимфохиноа, Это выражалось в увеличении /Р<0,05/ процента миграции лейко-1 цитов в РТМЛ с Кон А у больных почти в 2 раза по^сравнению со здоровыми. --'

Следовательно, количественный дефицит Т-лимфоцитов, угнетение активности лимфоцитов в тестах "активного" розеткообраз вания и РТМЛ с Кон А позволяют нагл говорить о наличии дефицит в клеточном звене иммунной системы и угнетением его функциона ной активности при бронхопневмонии у поросят. Это совпадает, основном, с результатами выявленных нарушений иммунной систем ■при болезнях легких у людей. Так, В.Н.Куаник'и др./1982/ в ра тар острой пневмонии'у детей наблвдаля снижение показателей ' ■клеточного иммунитета. Клиническое ухудшение у больных сопровождалось ростом числа нулевых клеток и уменьшением суммарно! количества Т~ и В-лимфоцитов,'Аналогичные нарушения■клеточно! иммунитета описали А.В.Быкова и др./1980/ при бронхите.

Для изучения состояния клеточного звена местной зшцитн лег-[X проводили бронхоальвеолярннй лавет, в результате которого шо получено 11,9 + 0,59 х 108 клеток на 100 мл лаважной дад-юти. Это в 3,8 раза больше /Р^ 0,05/, чем от■ здоровых. Причем, здоровых животных среди клеток преобладали макрофаги, а у яьних было отмечено почти 8-кратное увеличение содержания ней-юфнлов в лаважной жидкости по сравнению со здоровыми.

При определении фагоцитарной активности альвеолярных макро-job било установлено, что при бронхопневмонии у поросят имело сто ее снижение: фагоцитарное число на 21,7 %, а фагоцитарный пеке - 'на 34,4 % у большее были ниже /Р^ 0,05/, чем у здоро-х поросят.

Следствием нарушения окислительной способности клеток рес-раторного тракта б'чо почти двукратное снижение /Р^ 0,05/ проищи ими у больных животных супероксидного аниона, что соста-ло 13,0 + 1,73 нмоль/мли.кл./Ю vnti /спонтанная/ ; 35,7 ± 0,33 оль/ган.кл./10 мин /стимулированная ФМА/ и 25,3 ± 2,18 кмоль/ ' в.кл./Ю мин /стимулированная 03/,

В результате антибиотикотерапии показатели гемограммы в ос-вном нормализовались и достигали уровня здоровых животных, од-га, содержание гемоглобина оставалось низким на протяжении ?го периода исследований я дахе через 30 суток на 16,8 % било не /Р<0,05/, чем у здоровых.

Иммунологические исследования показали, что использование щллина-3 не способствовало восстановлению иммунологических сазателей у переболевших животных. Содержание Т-лимфсцитов, функциональная активность хотя и. возрастали после лечения, все еда Оставались ниже уровня здоровых яивотных.

Антибиотикотерапил такяе не оказывала влияния на показатели ¡точного эвена местной защиты легких, которые за период наблю-!ий ие претерпевали существенных изменений»

2. - Влияние тимогена на иммунобиологический статус поросят при,бронхопневмонии.

Тимоген вводили больным поросятам в дозе 3-5 мкг/кг одзо-,тно внутримышечно на фоне антибиотикотерапии, применявшейся оитрольной группе. В результате применения препарата у лсибот-на 3-5 дней раньше, чем в контроле, улучшалось общее состоя, восстанавливался аппетит и нормализовалась температура тела.

Среднесуточные привесы поросят опытной группы были на 35 г выше, чем в контроле.

Гематологическими исследованиями было выявлено, что инъек-■ ция тимогена способствовала восстановлению концентрации гемоглобина до уровня здоровых животных: она превышала /Р-< 0,05/ на 13,1 % исходную величину и на 16,2 % аналогичный показатель в контроле. Однако, тимоген не оказывал влияния на содержание эрг * роцитов, лейкоцитов, СОЭ - динамика изменений этих показателей была сходной в опытной и контрольной группах.

Иммунологические исследования свидетельствовали о нормализа-. ции показателей иммунной системы под влиянием тимогена. Так, узо через 10 суток после инъекции препарата отмечали активацию Т-си-стемы иммунитета у животных опытной группы: содержанке Т-лимфоци-тов, их "активных" и хелперных форм на 14,6 44,7 % и 25,5 % соответственно превысили /Р< 0,05/ аналогичные показатели в контрольной группе. При дальнейших исследованиях отличия сохранялись и были наибольшими спустя 20 суток после введения тимогена количество Т-лимфоцитов, их "активных" и хелперных форм превыша ли /Р<0,05/ аналогичные показатели в контроле на 25,5 %, 94,4 и 48,9 $ соответственно. Коэффициент диф$еренцировки субпопуляций Т-лимфоцитов под влиянием тимогена увеличивался спустя 10 суток после инъекции и на 20-е сутки достигал уровня здоровых животных.

Функциональная активность Т-клеток, определяемая в РТМ1 с Кон А, претерпевала положительные изменения, она восстанавливалась спустя 30 суток до уровня здоровых животных.,

Содержание В-лшфоцитов через 10, суток возрастало в 2,3 ра за по сравнению с исходным значением и превышало соответствуй» показатель в контроле на 14,3 %. В дальнейшем отмечали тенденци к снижению содержания Б-клеток в опытной группе, в то время как в контрольной показатель продолжал расти и разница между ними спустя 30 суток после начала лечения была двукратной. При этом необходимо отметить, что в опытной группе содержание В-клеток в-этот период достигаю уровня здоровых животных.

Применение тимогена вызывало снижение/Р< 0,05/ содержания ''нулевых клеток в крови на 42,3 % уже через 10 суток после инъе! ций. В дальнейшем содержание'нулевых клеток в крови опытных тавотных сохранялось на данном уровне и' во- все сроки исследований было достоверно ниже, чем у контрольных. Это свидетельствовало

о восстановлении дафференцировочнкх процессов в иммунокомпетент-ннх органах.

При изучении показателей местной клеточной защиты легких было установлено, что применение тимогена способствовало уменьшению миграции клеток в межальвеолярное пространство легких: общее их количество у опытных животных в 1,8 раза было ниже /Р<0,05/, чем у контрольных. Причем, преобладание нейтрофялов сохранялось и в 1,6 раза превнаало /Р< 0,05/ показатель в контрольной группе в относительных цифрах, а в абсолютных значени-' ях содержание нейтрофилов в обеих группах было почти равным.

Применение тимогена усиливало фагоцитарную активность альвеолярных макрофагов, что выражалось в увеличении /Р<0,05/ как . фагоцитарного числа на 28,5 %, так и фагоцитарного индекса -в 1,9 раза.

Введение тимогена не оказывало влияния на спонтанную продук-' цйю супероксидного аниона клетками лаватаой жидкости, однако, при использовании в качестве стимуляторов ФМА и 03 наблвдали превышение /Рс0,05/ показателей опытной группы над контрольной в 2,4 и 3,7 разй соответственно.

'3. Влияние пептидов легочной паренхимы на иммунобиологический статус поросят при бронхопневмонии.

Пептиды легочной паренхимы /ШШ/ вводили поросятам, больным бронхопневмонией в дозе 0,4 мг/кг трехкратно с интервалом 24 часа. Б результата этого у животных опытной группы раньше наступало клиническое выздоровление, а среднесуточные привесы на 34 г превысили аналогичный показатель в контроле.

Гематологическими исследованиями бнло установлено, что ШШ це оказывал выраженного влияния на морфологический состав крови: , динамика показателей клеток красной и белой крови была модной в опытной и контрольной группах.

О голомтельном влиянии ШШ на ряд показателей иммунограммн ■■свидетельствовали результаты иммунологических исследований. Так,

бпустя 20 .суток после начала лечения содержание Г-лим^оцитов ^ превысило./Р< 0,05/ уровень в контрольной группе на 17,0 "активы их" Т-лимфоцитов - на-80,0 %,. а Т-лшфоцитоа-хелпероа на 31,5 %. Содержание В-лимфоцитов в крови опытных животных в этрт период было ниже /Р-^0,05/ на 04,5 %, чем у контрольных. • Спустя 30 суток указанные отличия сохранялись. Однако, применение 11Щ не способствовало восстановлению функциональной актив-о - ,

ности'Т-клеток: динамика выработки ими лимфокинов у поросят опытной и контрольной групп была одинаковой.

При изучении влияния ПИП на состояние местной защиты легких было установлено, что введение препарата способствовало увеличению миграции клеток в межальвеолярное пространство легких: общее их количество на 61,3 % превысило /Р<0,05/ показатель в контрольной груше. Среди ¿яеток в лава-кной жадности преобладали макрофаги /41,3 + 0,88 %! и лимфоциты /33,0 + 1,16 %/.

В результате применения 1ШП активизировалась фагоцитарная функция альвеолярных макрофагов: фагоцитарное число возрастало '/Р-с 0,05/ на 27,5 %, а фагоцитарный индекс - на 71,4 % по сравнению с исходным уровнем, в то время как-поглотительная способ-кость альвеолярных макрофагов поросят контрольной группы не претерпевала существенных изменений.

При изучении окислительной способности клеток лаважной жидкости было установлено, что под действием ПЛП Происходила ахстявация продукции супероксвдного аниона: спонтанная возрастала /Г <0,05/ в 2,3 раза, ФМА-сммулированная - в 2,9 раза, ОЗ-стимулированпая - 3,3 раза,

4. Влияние сочетанного применения тимогена и пептидов' легочной паренхимы на иммунобиологический статус поросят пси бронхопневмонии.

Тимоген к пептиды легочной паренхимы вводил!! поросятам по схемам, указшнц л для предыдущих групп. Пептидные биорегуляторц как и ранее были использованы в комплексной терапии, включающей антибиотики и витамины. Наблюдения показали, что наряду с клиническим -улучшением, наступавшим раньше, чем у контрольных животных, среднесуточные привесы у поросят опытной группы были . на 32 г больше, чем в контроле.

Гематологическими исследованиями было установлено, что со-четанное применение пептидных биорегуляторов не оказывало выраженного влияния на морфологический состав крови, динамика изменения которого бша- сходной в опытной и контрольной группах. Однако, нормализацию содержания гемоглобина в крови опытных животных можно было наблюдать через 30 суток после начала лечения, чего не наблюдалось у поросят контрольной группы.

В результате иммунологических исследований было установле-чо, .что через 20 суток з крови опытных янвотных под влиянием

иммунотерапия происходила нормализация относительного и абсолютного содержания популяций лимфоцитов. Так, абсолютное количество Т-лимфоцитов превысило /Р-=0,05/ таковое в контроле на

22.2 %, "активных" Т-лимфоцитов - на 88,0 %, Т-лимфоцитов-хел-перов - на 37,5 %. Коэффициент дяф^еренцировки субпопуляций Т~лимфоцитов возрос /Р*=0,05/ ц бил в 1,6 раза больше /Р-^0,05/, чем в.контрольной группе. Спустя 30 суток после начала применения пептидша биорегуляторов отличия между опытной и контрольной группами сохранялись.

Количество В-лшфоцитов спустя 10 суток после начааа применения препаратов в 2,7 раза превысило /Р«0,05/ исходный уровень. Б дальнейшем наблюдалась нормализация содержания ¡З-клеток -через 30 суток оно достигло уровня здоровых животных и было ниже /Р<0,05/ контрольного показателя в 1,6 раза.

Исходно высокое содержание нулевых клеток снижалось /?< ' ^0,05/ в крови животных опытной группы, отличаясь от показателей контроля спустя 20 суток после начала лечения на 15,9 %, через 30 суток - на 16,4 %. .

Помимо влияния на количественные характеристики Т-звена иммунитета, сочетанное применени-е пептидных биорегуляторов нормализовало функциональную активность Т-клеток, об этом спиде- -тельствовало уменьшение процента миграции лейкоцитов в ГТМЛ с Кон А, который был ниме /Р<0,05/ в 1,5 раза, чем в контроле.

При изучении показателей местной клеточной защиты легких было установлено, что сочетанное применение аептидши оиорегу-ляторов оказазо наиболее благоприятное воздействие на течение воспалительного процесса в легких. Это выражалось в принципиальном отлитой воспалительного экссудата от другие групп: в нем преобладали макрофаги /44,7 ± 1,33 %/ и лимфоциты /33,0 ± ± 1)16 %/, а абсолютное количество нейтрофидов,было ,на 22,4 % ниже /Р< 0,05/, чем в контрольной группе, В то же нреад обцое количество меток в дшшиой жидкости Ото ниже /Р< 0,05/ на

19.3 %, чем аналогичный показатель в контроле.

. Сочетанное применение препаратов окьчцпало значительное влияние на фагоцитарную активность альвеолярных макрофагов поросят при бронхопневмонии, что ьцрадалось в уъелпчении /Р<0,05/ , фагоцитарного числа на 20,5 %,-фагоцитарного индекса - в 1,6 pasa по сравнению с исходным уровнем, а г>ауле нозлтпшо поамя-ло на окислительную способность меток лаважно.1 лодксста;

спонтанная продукция супер оксидного аниона возрастала /Р-= 0,05/ в 1,8 раза, ФМА-стшулированная - в 1,7 раза, 03-стимулирован-ная - в 2,9 раза, в то время как аналогичные показатели у поросят контрольной группы оставались на исходно низком уровне.

ВЫВОДЫ

1. При неспецифической бронхопневмонии у поросят установлен дефицит Т-системы иммунитета, проявляющийся снижением в крови больных животных содержания Т-лимфоцитов на 38,7 %, их "активных" форм на 26,9 %, а также двукратным снижением коэффициента дифференцировки субпопуляций Т-лимфоцитов за счет 70 %-ного снижения содержания клеток с хелперной активностью. Одновременно отмечено увеличение содержания нулевых клеток на 25,1$ по сравнений со здоровыми животными.

2. При неспецифической бронхопневмонии у поросят отмечено увеличение притока клеток в межальвеолярное пространство легких: их общее количество составляет 11,9 ± 0,59 х 10^/100 мл лаважной шщкости, что в 3,8 раза больше, чем у здоровых, причем среди клеток у больных .преобладают нейтрофилы, в то время -как у здоровых основной клеточной единицей лаважной жидкости

являются ма!фофаги. .

3. Недостаточность Т-эвена иммунитета у поросят при бронхопневмонии сочетается со сниженной фагоцитарной активностью альвеолярных макрофагов: фагоцитарное число.на 21,7 %, а фагоцитарный индекс ла 34,4 % ниже, чем у здоровых животных, а также со снижением окислительной способности клеток лаважной жидкости: продукция супероксвдного аниона ими ниже, чем у здоровых животных -'спонтанная на 84,6 %, стимулированная - на 27,1 %. .

4. Применение бициллйна-3 в качестве основного средства ■ терапии бронхопневмонии не способствует восстановлению показателей как местного, так и системного иммунитета у переболевших животных. •

5. Применение ти;логена в дозе 3-5 мкг/кг поросятам, больным неспецмфаческой бронхопневмонией, оказывает преимущественно' стимулирующее влиялие на систему клеточного иммунитета, что проявляется в увеличении содержания Т~лимфоцктов на 25,5 %, их 'активных' форм на 94,4 %, клеток с хеиперной активностью на • 48,9 % и коэффициента дифференцировки субпопуляций Г-кдеток

14 '

в 2 раза до уровня здоровых животных спустя 20 суток после инъекции препарата. Одновременно отмечается восстановление функциональной активности Т-клеток: выработка ими'лимфокинов возросла в 2 раза спустя 30 суток после начала лечения и достигла уровня здоровых животных.

Положительное влияние тимогена на показатели местной клеточной защити легких проявилось в увеличении фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов: фагоцитарное число возросло на 28,5 %, а фагоцитарный индекс - в 1,9 раза по сравнению с исходно низким уровнем.

6. Применение пептидов легочной паренхимы в дозе 0,4 мг/кг в течение 3-х суток с интервалом 24 часа поросята!,!, больным не-опецифической бронхопневмонией, оказывает преимущественно смму-лируи'цее влияние на клеточное звено местной защити легких, увеличивая приток в мааальвеолярное пространство легких макрофагов на 25,8 % и их фагоцитарную активность /фагоцитарное число - на 27,8 %, фагоцитарный индекс - на 71,4 %/, а таете окислительную способность клеток лавакной жидкости в 2-3 раза по сравнению о исходно низким уровней.

.Положительное влияние 11ЛП на клеточное звено системного иммунитета проявляется спустя 20 суток после начала лечения и характеризуется восстановлением количественных показателей Т-звена иммунитета, не меняя ¡три этом его функциональную активность.

■7.- Сочетанноа применение тямогена и пептидов легочной паренхимы в указанных дозах: поросятам, больным неспецифической бронхопневмонией, оказывает положительное влияние на-состояние как системного, тпк и местного иммунитета. Это вьражается- в нормализации содержания Т- и В-лимфоцитов и восстановлении функциональной активности Т-клеток спустя 20-30 оуток после напала лечения, причем в такой же степени:, кок к при введении тямогена отдельно.

Сочетанное введение препаратов способствует Привлечению п очаг воспаления ¡.¡икрофагов и лимфоцитов, увеличению фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов /фагоцитарного чьела -на 29,5 %, фагоцитарного индекса - в 1,9 раза/ и окислительно! способности клеток лаважнои жидкости'в 1,7- 2,9 раза.

•• 8, Использование пептидных биорегуляторов в комплексной те-, радии неспецифическзй бронхопневмонии сокращает срока лечение а

стимулирует прирост массы леченных животных в среднем на 9,2 % по сравнению с контрольными.

9. Полученный экономический эффект от применения тимогена " для лечения неопецифической бронхопневмонии поросят составил . 9,21 руб. в расчете на 1 животное и 12,97 руб. в расчете на 1руб. затрат. . ' ,

ПРАКТИЧЕСКИЕ 'ПРИЛОЖЕНИЯ

1. С целью повышения эффективности терапии бронхопневмонии у поросят рекомендуется применение пептидных биорегуляторов: тимогена в дозе 3-5 мкг/кг однократно и пептидов'легочной парен-; химы /ШШ/ в дозе 0,4 мг/кг трехкратно о. интервалом 24 часа в ■комплексе с антибиотике- и витаминотерапией в первые дни заболевания;. /-' , • ' ' _

2. По материалам исследований разработай и предложен способ бронхоальвеолярного лавёжа легких.свиньи /рац.цредложение

» 3987/5 от 9.09.91/.

, ,3.' Материалы диссертационной работы могут быть использованы i учебном ; процессе при чтении лекций и проведении практичес-/.ких занятий ро патологической физиологии, иммунологии,'клинической диагностике, внутренним незаразным болезням, а также при написании учебников и учебных пособий.

.СПИСОК РАБОТ» ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ;

1. Крячко о,в. Применение тимогена для иммунокоррекции при : бронхопневмонии свиней// Тез.докл. иауч/конф. Ленинградского вет. ин-та "Актуальные проблемы ветеринарии",- Л,,1991,- С. 46-47.

■ 2, Крячко О.В. Метод иммунокоррекции тимогеном при неспеци-• фической бронхопневмонии// СО. из обр. и рац. предложений ШедА

им.С.М.Кирова "Усовершенствование методов и аппаратуры, приме-, ' няемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и ' клинической практике".- Л,, 1991,- С. 52.

. 3. Крячко О.В. Некоторые показатели иммунитета при бронхопневмонии свиней//. Сб.науч.тр.' Ленинградского вет .ин-та "Физиологические и йиохимические основы повышения продуктивности с.-х. животных и пушных зверей".-С.-Петербург, 1991.- С. 74-76.

4. Лютинския СЛ., Крячко О.В.,' Хавинсон В.Х., Серый C.B. " Влияние тиг.югена на иммунную систему поросят при неспецифической бронх опиевмокии// Ветеринария, 1S91.- 1'е 9.- С. •30-32.

5. Лютинский С.И., Крячко О.В., Кожемякин АЛ. Способ бронхоальвеолярного лаважа изолированных легких свиньи// Сб. иэобр. и рац.предложений ШедА им.С.М.Кирова "Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике".-С.-Петербург, 1982,- С. 33-34.

6. Крячко О.В. Активность макрофагальной системы легких свиней при пневмонии// Тез.докл.науч.конф.С.-Петербургского вет. ин-та "Актуальные проблемы ветеринарии".-С.-Петербург, 1992.-С. 27-23.

1 7