Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Использование пептидных биорегуляторов для коррекции иммунодефецита у поросят при бронхопневмонии

»9 4 -1 ? Я Ч

* *

Л1ИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИП ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

КРЯЧКО

Оксана Васильевна

УДК 619:616.24-002.153:615.361:636.4

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЕПТИДНЫХ БИОРЕГУЛЯТОРОВ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ИЛШУНОДЕФИЦИТА У ПОРОСЯТ ПРИ БРОНХОПНЕВМОНИИ

Специальность: 16.00.02 — Патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

1992

Работа выполнена на кафедре патологической физиологии Санкт-Петербургского ветеринарного института и в научно-исследовательской лаборатории биорегуляторов Военно-медицинской ордена Ленина Краснознаменной академии им. С. М. Кирова. -

Научные руководителилауреат премии СМ СССР, доктор ветеринарных наук, профессор Лютинский С. И.; лауреат премии СМ СССР, доктор медицинских наук, профессор Хавинсон В. X.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных, наук, профессор Су-лейманов С. М.; кандидат ветеринарных наук, доцент Дугин Г. Л.

Ведущая организация — Нижегородский сельскохозяйственный институт.

Защита диссертации состоится 1993 г.

в 13 часов на заседании Специализированна^ совета Д 120.20.01 при Санкт-Петербургском ветеринарном институте (196084, Санкт-Петербург, Московский пр., 112).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского ветеринарного института.

Автореферат разослан « ^¿/¿¿Х- 1992 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, доцент

Никишина И. В.

-■'•лЛЙ I 'Л ■-...• ¡"»■с, Cq^.pUPÄJffEPkctf^PABOTU

' 'АетШ&'нЬЫ^*проблемы, Развитие свиноводства на иромншлеи-еюй; основе ставит перед ветеринарными работниками «овне задачи, по профилактике и лечении инфекционных. и незаразннх болезней ш вотанх. Существенннм фактором, влияющим на развитие яювотинх, «пишется заболеваемость их- респираторными болезнями.

По данннм ряда авторов заболеваемость поросят в крупш« цш пдекспх ивсп«?царческой бронхопнермоиией колеблется в предела* 10 - ?Л '%, а при откорме сборного поголовья и содержании его в неудовлетворительных помещениях можот достигать 60 % /Maxcii А.г. пщ>., 1283; .Sivrayrc P.E.. ШЗ; Мпресик H.H., 1989/. Ре-

шающим фпктором в возникновении- и развитии неспецифической бронхопневмонии является снижение резистентности организма свиней к неблагоприятным воздействиям внешней среды /Шахов А.Г.,и др., 1980; Данилевский В.М., 1983; Урбан В.П., Найманов И.Л., 1984; Карпуть И.М. и др., 1989; Абрамов С.С. и др., 1990/.

К проблеме йммунодефицитных состояний в настоящее время проявляется все больший интерес. Литература, в честности, содержит сведения о возникновения таких состояний у лвдей при респираторных заболеваниях /Быкова А.Р. и др., I960; Марщшовский В.Ю. и цр., 1033; Чучалин А.Г. и др., 1909/. В ветеринарии этот вопрос изучен недостаточно. Большая часть ра^от посвящена состоянию им-'луино;'! системы при донной патологии у телят /Красников Г.А. и др., 1.989; Конопелько II.Я. и др., 1990; Могиленко А.Ф., 199Ü; Воронин E.G. и др., 1991 и др./. Имеются лишь единичные работы, отра-кашдае состояние яеепецифической резистентности поросят при бронхопневмонии./Васильев М.Ф., 1975, 1977/. До настоящего времени почти не изучена роль клеточного звена иммунитета при легочной патологии у животных, поэтому представлялось необходимым проведение исследований с целью уточнения,значения этого фактора в патогенезе неспецифической бронхопневмонии поросят.

Снижение чувствительности микроорганизмов, вызывающих заболевания легких, к антибактериальным препаратам, учащение случаев лекарственной аллергии, значительные нарушения общего и местного иммунитета у больных пневмонией обусловливают необходимость разработки новых' методов лечения с применением иммунорегулиругощих средств /Провоторов В.М., Никитин A.B., 1987; Чучалин А.Г. и др.-, 1989/, Возможность разработки таких методов лечения открывается путем применения нового класса веществ - пептидных биорегуляторов».

В.Г.Морозов и В.ХДавинсон /1981, 1983/ сформулировали представлс нив о биорегулирувдих пептидах, осуществляющих перенос специфичес кой информации, необходимой для нормального функционирования, pas вития и взаимодействия клеток, В настоящее время пептидные биорегуляторы выделены из самых различных органов и тканей и некоторые из них успешно применяются при различных заболеваниях, сопровождающихся нарушением функции иммунной, нервной, половой и других систем /Яковлев Г.М. и др., 198?, 1990/. Однако, несмотря на шире кое использование пептидных биорегуляторов в медицинской практике и начало применения их в ветеринарии /Скрипник Э.П., 1989; Иванова Т.А., 1990; Карпенко Л.Ю., 1990; Сухинина Т.Л., 1992/, является не изученным влияние этого класса веществ на организм животных при бронхолегочной патологии, в частности, у поросят.

Цель и задачи исследований. Основной целью наших исследований явилось изучение состояния клеточных факторов защиты для обоснования возможности коррекции иммунодефицитных состояний у поросят при неспецифической бронхопневмонии пептидными биорегуляторами, такими,как тимоген /синтетический пептид тимуса/ и 1Ш1 /пептидный комплекс, выделенный из легких/.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить иммунологические показатели, наиболее полно отражающие состояние клеточных факторов защиты при бронхопнёвмо-

. нии: гемограмму, содержание Т- и В-лимфоцитов, функциональную активность Т-звена иммунитета, цитологические характеристики . м.естной защиты легких, функциональную активность альвеолярных макрофагов. -, ' . . '

2. Изучить изменение иммунологических показателей в динами-,»ке заболевания поросят бронхопневмонией цри традиционном лечении ' с применением антибиотиков и при дополнительном введении иммуно-

модуляторов. •

3. Определить влияние, пептидных биорегуляторов на производственные показатели - среднесуточный прирост живой массы и сохранность переболевших животных.

4. Произвести сравнительную оценку предложенных схем лече- ' ния на клеточную защиту поросят и на производственные показатели.

Научна^ новизна. Впервые проведено комплексное изучение состояния клеточных факторов защиты общего и местного иммунитета у поросят при иеспсцифической бронхопневмонии,

Показано, что внутримышечное введение пептидных биорегуля-оров способствует восстановлению иммунологической реактивности поросят при бронхопневмонии, сокращает сроки заболевания, уси-ивает энергию роста переболевших животных.

Практическая значимость работы. Результаты проведенных ис-ледований раскрывают особенности нарушений клеточных факторов ащитн у поросят при бронхопневмонии и обосновывают целесообраз-ость включения пептидных биорегуляторов в комплекс лечебных ме-оприятий при данной патолопта.

По результатам исследований разработано и внедрено 5 рацио-ализаторских предложений.

Внедрение. Результаты исследований внедрены в совхозе "Спут-ик" Всеволожского района Ленинградской области и используются в чебном процессе на : эфедре патологической физиологии Санкт-Пе-ербургского ветеринарного института.

Апробация работы.Основные положения диссертации доложены на аучннх конференциях профессорско-преподавательского состава, аучных сотрудников и аспирантов Санкт-Петербургского ветеринар-ого института /1991, 1992 гг./, на 46-й научной конференции мо-одьех ученых, аспирантов и студентов /1992 г./ и на заседании :афедры патологической физиологии.

Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в научннх работах.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 152 страг-ицах машинописного текста, включая 25 таблиц, 7 рисунков и 14 'отографяй. Она состоит из введения, обзора литературы, собст-енных исследований, обсуждения полученных результатов выводов, рактических предложений, а также приложения. Список литературы клгочает 236 источников, в том числе 85 на иностранном языке.

Основные положения диссертации, выносимые на задиту:

1, Бронхопневмония у поросят сочетается с дефицитом клеточ-:нх факторов защиты и нарушением их функциональной активности.

2. Сравнительная оценка влияния пептидных биорегуляторов на юне антибиотикотерашга на показатели клеточных факторов защиты >бщего и местного иммунитета у поросят при бронхопневмонии.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИСОВДОЕАНИЙ

Исследования проводились в 1989 - 1392 гг. на базе кафедры [атологической физиологии Санкт-Петербургского ветеринарного

института, научно-исследовательской лаборатории биорегуляторов Военно-медицинской академий им,С.М.Кирова, а также в совхозе "Спутник" Всеволожского района Ленинградской области.

Свинокомплекс "Спутник" является хозяйством с замкнутым производственным циклом. Породний состав поголовья - помесь крупной белой и ландрас. Параметры микроклимата в помещении, где проводились исследования, соответствовали зоогигиеническим нормам для поросят 1-го периода откорма. Для кормления животных использовался комбикорм - СК-6.

Всем этапам исследований предшествовал подбор поросят по принципу аналогов /порода, возраст, живая масса, общее развитие/. Били сформированы группы животных с клиническими признаками заболеваний легких и клинически здоровых. Диагноз "бронхопневмония" ставили на основании результатов клинического осмотра, термометрии, наличия кашля, истечений из носовызс ходов. В начале л конце исследований проводили взвешивание животных..

Особенности иммунобиологической реактивности поросят при бронхопневмонии изучали на 30 животных. в возрасте 115 -120 дней. У поросят исследовали кровь и проводили оценку состояния клеточного звеиа местной защиты ¿.згких до и после лечения антибиотиками по схеме, принятой в хозяйстве/ бициллин-3 в дозе ЮСОО Ёц/кг и тривит в дозе 0,1 мл/кг по 5 инъекций в течение 20 суток/. Для сопоставления полученных^результатов проводили аналогичные исследования на 30 клинически здоровых поросятах соответствующего возраста.

Изучали влияние на течение бронхопневмонии синтетлчоокого пептида тимуса - тимогена, который бил выделен методом высокоэффективной жидкостной хроматографии из природного препарата тимуса - тималина /Яковлев Г.М. и др., 1988/, а также пептидов легочной паренхимы /ШШ/, полученных из легких телят по методу В.Г.Морозова и В.ХДавинсона /1981/. Для этого 120 поросят а клиническими признакам! бронхопневмонии были разделены на 4 группы., где на фоне основного лечения антибиотиками в двух из аих препараты применяли раздельно, в одной сочетанно, а последняя служила контролем.' ' ■ Кровь от животных исследовали до и через 10, 20 и -30 суток поЬле начала лечения. Оценку состояния клеточного эвена местной защиты легких проводили до и спустя- 30 суток после начала лечения, одновременно отбирали цробы для гистологического лсследова-г

ния легких.

- Кровь для исследования брали у животных из орбитальйого венозного синуса по методике Дж.Повда /1983/. Гематологические исследования /определение количества эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, СОЭ, лейкограмма/ проводили общепринятыми методами /Коцдрахин И.П., 1985/. Для иммунологических исследований из ге~ паринизированной 'крови выделяли лимфоциты центрифугированием в градиенте плотности 1,077 v/m /фиколл-пак, "Рка-гто-сСл-Швеция/ по Д.&оуим /1968/ и использовали в концентрация

2 х 106 клеток/мл. Мя оценки Т-системн иммунитета у поросят определяли: количество Т-лимфоцитов /Б-РОК/ методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана /¡)ond<xt АД. ti ai , 1972/} количество "активных" Т-лимфоцитов /Еа-РОК/ /Кегпихп tM.dat., 1976/; количество теофшшнчувствительных /супрессорц/ и теофиллинрезис-тентных /хелперы/ Т-лимфоцитов /LlfoCditut S. tt ei. , 1978/; функциональную активность Т-лимфоцитов в реакции торможения миграции лейкоцитов /РТ?ЛЛ/ с конканавалином А /Кон к, "Strira.", ФРГ/ по Дя.Бендиксену и др./1980/ в модификации В.Х.Хавинсона и В.Г.Морозова /1980/, Состояние B-системы иммунитета определяли по количеству B-лимфоцитов /М-РОК/ методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши /StuLhopouêoi G, f tilott S.V. ,197V«

С целью оценш состояния местной клеточной защити легких проводили бронхоальвеолярнн!! лаваж тотчас после убоя животных. В лаватшой жидкости определяли общее количество клеток и их процентное соотношение в мазках, окрашенных по Паппенгейму-Крюкову. Фагоцитарную активность альвеолярных макрофагов определяли по поглощению частиц латекса /Фрейдлин И.С., 1986/. Способность клеток 'лавэчной чшдкости к продукции супероксвд-анион-радикала . /спонтанной и стимулированной/ определяли по R&.& Uestil /198У

3 применением в качестве стимуляторов .форбол-миристат-ацетата /фМА, растворимый стимулятор/ и опсонизированного эимозана/03, корпускулярный стимулятор/-.

Цифровой материал обработан статистически с использованием линрокалькулятора "Электроника МК-61" о введением программ З.А.Костшенко и др./1987/.,

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Иммунобиологический статус поросят при бронхопневмонии •

и пяиякие на него антибиотикотерапии'.

В результате проведенных исследований мы установили, что

бронхопневмония у поросят сопровождалась снижением /Р * 0,05/ сс держания эритроцитов и гемоглобина, ускорением /Р<0,05/ СОЭ. При изучении лейкограммы было отмечено увеличение /Р<0,05/ содержания паяочкоядерных форм нейтрофилов, эоэино- и лимфопения. Иммунологические исследования показали, что у поросят при бронхопневмонии имело место нарушение дифференцировочных процессов в органах иммунной системы. Это выражалось в уменьшении у больных животных относительного содержания Т-лимфоцитов на 38,7 % /Р<0,05/ и незначительным снижением содержания В-лимфоцитов, что в целом вело к достоверному увеличению в крови больных содержания нулевых клеток. Оно составило 64,7 ± 1,33 % против 51,7 + 1,31 56 у здоровых.

При бронхопневмонии мы также отмечали снижение /Р< 0,05/ абсолютного содержания Т-лимфоцитов на 18,2 % по сравнению со здоровыми животными, а постановка теста"активного" розеткообра-зования позволила выявить снижение /Р<0,05/ как абсолютного, так и относительного содержания Еа-РОК на 26,9 и 39,7 % соотвеч ственно у больных по сравнению со здоровыми.

При изучении соотношения иммунорегуляторннх субпопуляций Т-лимфо'цитов мы установили, что при бронхопневмонии имело месте почти двукратное снижение /Р< 0,05/ коэффициента дифференциров-ки Етр-РОК/Етч-РОК по сравнению со здоровыми животными.

При определении функциональной активности Т-клеток было выявлено, что у больных животных снижена продукция лимфокинов. Это выражалось в увеличении /Р<0,05/ процента миграции лейко-, цитов в РТМЛ с Кон А у больных почти в 2 раза по% сравнению со здоровыми.

Следовательно, количественный дефицит Т-лимфоцитов, угнетение активности лимфоцитов в тестах "активного" розеткообразо-вания и РТШ1 с Кон А позволяют нам говорить о наличии дефицита в клеточном звене иммунной системы и угнетением его функционал! ной активности при бронхопневмонии у поросят. Это совпадает, в ■ основном, с результатами выявленных нарушений иммунной системы ■при болезнях легких у людей. Так, В.Н.Куэник и др./1982/ в разгар острой пневмонии'у детей наблвдали снижение показателей ' ■ ■клеточного иммунитета. Клиническое ухудшение у больных сопровождалось ростом числа нулевых клеток и уменьшением суммарного количества Т- и В-лимфоцитов. Аналогичные нарушения клеточного иммунитета описали А.В.Быкова и др./1980/ при бронхите.

Для изучения состояния клеточного звена местной защиты легких проводили бронхоальвеолярннй лавах, в результате которого шло получено 11,9 + 0,59 х 108 клеток на 100 мл лаважной жидкости. Это в 3,8 раза больше /Р<0,05/, чем от здоровых. Причем, i здоровых животных среди клеток преобладали макрофаги, а у 5ольных было отмечено почти 8-кратное увеличение содержания ней-грофилов в лаважной жидкости по сравнению со здоровыми.

При определении фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов было установлено, что при бронхопневмонии у поросят имело ,1йсто рп снижение: фагоцитарное число на 21,7 %, а фагоцитарный адцекс ~ на 34,4 % у больных были ниже /Р<0,05/, чем у здоровья поросят.

Следствием нарушения окислительной способности клеток респираторного тракта б>'яо почти двукратное снижение /Р^ 0,05/ про-*укции ими у больных животных супероксидного аяиона, что соста-зило 13,0 + 1,73 нмоль/млн.кл./10 шл /спонтанная/ ,* 35,7 ± 0,33 моль/млн.кл./Ю мин /стимулированная ФМА/ и 25,3 + 2,1.8 толь/ лян.кл./Ю ига /стимулированная 03/.

В результате антибиотикотерагаи показатели гемограмм» в основном нормализовались и достигали уровня здоровых животных, однако, содержание гемоглобина оставалось низким на протяжении iicero периода исследований и даже через 30 суток на 16,8 % было -шже /Р<0,05/, чем у здоровых.

иммунологические исследования показали, что использование 5ициллинз-3 не способствовало восстановлению иммунологических показателей у переболевших животных. Содержание Т-лим^сцитов, га функциональная активность хотя и возрастам после лечения, ;го все еще 'оставались ниже уровня здоровых животных.

Днтибиотикотерапия также не оказывала влияния на показатели клеточного звена местной защиты легких, которые за период наблгь-цений не претерпевали существенных изменений.

2. -Влияние тимогена на иммунобиологический статус поросят при бронхопневмонии.

Тимоген вводили больным поросятам в дозе 3-5 ккг/кг однократно внутримышечно на фоне антибиотикотералии, применявшейся в контрольной группе. В результате применения препарата у животных на 3-5 дней раньше, чем в контроле, улучшалось общее состояние, восстанавливался аппетит и нормализовалась температура тела.

Э

Среднесуточные привесы порооят опытной группы были на 35 г выше, чем в контроле.

Гематологическими исследованиями было выявлено, что инъекция тимогена способствовала восстановлению концентрации гемоглобина до уровня здоровых животных: она превышала /Р-< 0,05/ на 13,1 % исходную величину и на 16,2 % аналогичный показатель в ■ контроле. Однако, тимоген не оказывал влияния на содержание эрит-' роцитов, лейкоцитов, СОЭ - динамика изменений этих показателей была сходной в опытной и контрольной группах.

Иммунологические исследования свидетельствовали о нормализа-. ции показателей иммунной системы под влиянием тимогена. Тек, уже через 10 суток после инъекции препарата отмечали активацию Т-ои-стемы иммунитета у животных опытной группы:содержание Т-лимфоцитов, их "активных" и хелперных форм на 14,6 %, 44,7 % и 26,5 % соответственно превысили /Р< 0,05/ аналогичные показатели в контрольной группе. При дальнейших исследованиях отличия сохранялись и были наибольшими спустя 20 суток после введения тимогена: количество Т-лимфоцитов, их. "активных" и хелперных форм превышали /Р<0,05/ аналогичные показатели в контроле на 25,5 %, 94,4 % и 48,9 % соответственно. Коэффициент дифференцировки субпопуляций Т-лимфоцитов под влиянием тимогена увеличивался спустя 10 суток после инъекции и на 20-е сутки достигал уровня здоровых животных, '

Функциональная активность Т-клеток, определяемая в РТШ о Кон А, цретерпевала положительные изменения, она восстанавлива- • лась спустя 30 суток до уровня здоровых животных.,

Содержание В-лимфоцитов через 10, суток возрастало в 2,3 раза по сравнению с исходным значением и превышало соответствующий показатель в контроле на 14,3 %. В дальнейшем отмечали тенденцию к снижению содержания В-клеток в опытной группе, в то время как в контрольной показатель продолжал расти и разница мевду ниш спустя 30 суток после начала лечения была двукратной. При этом необходимо отметить, что в опытной группе содержание В-клеток в, этот период достигало уровня здоровых животных.

Применение тимогена вызывало сниженйе/Р< 0,05/ содержания ' 'нулевых клеток в крови на 42,3 % уже через 10 суток после инъекций. В дальнейшем содержание нулевых клеток в крови опытных животных сохранялось на данном уровне и' во; все'сроки исследований было достоверно ниже, чем у контрольных. Это свидетельствовало

о восстановлении дифференцировочных процессов в иммунокомпетент-ных органах.

При изучении показателей местной клеточной защиты легких било установлено, что применение тимогена способствовало уменьшению миграции клеток в межальвеолярное пространство легких: общее их количество у опытных животных в 1,8 раза было ниже /Р < 0,05/, чем у контрольных. Причем, преобладание нейтрофилов сохранялось и в 1,6 раза превышало /Р^ 0,05/ показатель в контрольной группе в относительных цифрах, а в абсолютных значениях содержание нейтрофилов в обеих группах было почти равным.

Применение тимогена усиливало фагоцитарную активность альвеолярных макрофагов, что выражалось в увеличении /Р< 0,05/ как фагоцитарного числа на 28,5 %, так и фагоцитарного индекса -в 1,9 раза.

Введение тимогена не оказывало влияния на спонтанную продукцию супероксидного аниона клетками лаважной жидкости, однако, при использовании в качестве стимуляторов ФМА и 03 наблодали превышение /Р<0,05/ показателей опытной группы над контрольной в 2,4 и 3,7 разй соответственно.

'3. Влияние пептидов легочной паренхимы на.иш5Я0= биологический статус поросят при бронхопневмонии.

Пептиды легочной паренхимы /Ш1П/ вводили поросятам, больным бронхопневмонией в дозе 0,4 мг/кг трехкратно с интервалом 24 часа. В результате этого у животных опытной группы раньте наступало клиническое выздоровление, а .среднесуточные привесы на 34 г превнсили аналогичный показатель в контроле.

Гематологическими исследованиями было установлено, что ПЛИ це оказывал выраженного влияния на морфологический состав крови: динамика показателей клеток красной и белой крови.бала сходной в опытной и контрольной группах.

О голожительном влиянии ГОШ на ряд показателей имыунограмш свидетельствовали результату.иммунологических исследований. Так, спустя 20 суток после начала лечения содержание Г-лимфоцитов превысило /Р<г 0,05/ уровень н контрольной группе на 17,0 %,"ак-тивннх" Т~лимфоцитов - на-80,0 %,. а Т-лимфсцитов-хелпоров -, на 31,5 %. Содержание В-лимфоцитов вкрови опытных .тавотных в этрт период было ниже /Р<0,05/ на 64,5 %, чем у контрольных. Спустя 30 суток указанные отличия сохранялись. Однако, применение ШЩ, не способствовало восстановлению функциональной акгив-о '

ности Т-клеток: динамика выработки ими лимфокинов у порооят опытной и контрольной групп бшха одинаковой.

При изучении влияния ПЛП на состояние местной защиты легких было установлено,' что введение препарата способствовало увеличению миграции клеток в межальвеолярное пространство легких: общее их количество на 61,3 % превысило /Р<0,05/ показатель в контрольной группе. Среди ¿¿леток в лавачсной жидкости преобладали макрофаги /41,3 + 0,88 %/ и лимфоциты /33,0 + 1,16 %/.

В результате применения ПЛП активизировалась фагоцитарная функция альвеолярных макрофагов: фагоцитарное число возрастало /Р< 0,05/ на 27,5 %, а фагоцитарный индекс - на 71,4 % по срав-> ■ нению с исходным уровнем, в то время как-поглотительная способность альвеолярных макрофагов поросят контрольной группы не претерпевала существенных изменений.

При изучении окислительной способности клеток лаважной жидкости было установлено, что под действием ЕГО Происходила активация продукции супероксидного аниона: спонтанная возрастала /Р<0,05/ в 2,3 раза, ФМА-стимулированная - в 2,9 раза, 03-стимулированная - 3,3 раза.

4. Влияние сочетанного применения тимогена и пептидов' легочной паренхимы на иммунобиологический статус поросят при бронхопневмонии.

Тимоген и пептиды легочной паренхимы вводили поросятам по схемам, указант л д.ля предыдущих групп. Пептидные биорегудяторц . как и ранее были использованы в комплексной терапии, включающей, антибиотики и витамины. Наблюдения показали, что наряду с клиническим улучшением, наступавшим раньше, чем у контрольных животных, среднесуточные привесы у поросят опытной группы были . на 32 г больше, чем в контроле.

Гематологическими исследованиями было,установлено, что со-четанное применение пептидных биорегуляторов не оказывало выраженного влияния на морфологический состав крови, динамика изменения которого была сходной в опытной и контрольной группах. Однако, нормализацию содержания гемоглобина в крови опытных животных можно было наблюдать через 30 суток после начала лечения, чего не наблюдалось у поросят контрольной группы.

В результате иммунологических исследований было установле-ло, .что через 20 суток з крови опытных ответных под влиянием

иммунотерапия .происходила нормализация относительного и абсолютного содержания популяций лимфоцитов, так, абсолютное количество Т-лимфоцитов иревысило /Р-'О.Об/ таковое в'контроле на

22.2 %, "активных" Т-лимфоцитов - на 88,0 %, Т-лим^оцитоь-хел--перов - на .37,5 %. Коэффициент диф^еренцировки суопопуляций Т-лимфоцитов возрос /Р«: 0,05/ и бил в 1,6 раза Солыш /Г-^О.ОЬ/, чем в контрольной группе. Спустя 30 суток ¡¡осле начала применения пептидных биорегуляторов отличия между опытной и контрольной группами сохранялись.

Количество В-лимфоцитов спустя 10 суток после начала применения препаратов в 2,7 раза превысило /Р«-'0,0Б/ исходный уровень. В дальнейшем наблюдалась нормализация содержания В-клеток -через 30 суток оно достигло уровня здоровых животных и было ниже /Р<0,05/ контрольного показателя в 1,6 раза.

Исходно высокое содержание нулевых клеток снижалось /Р< ' -¿"0,05/ в крови животных опытной группы, отличаясь от показателей контроля спустя 20 суток после начала лечения на 1Ь,9 '%, через 30 суток - на 16,4 •%. .

Помимо влияния на количественный характеристики '¡-звена иммунитета, сочетанное применение ивтчщинх сисрегуляторон нормализовало функциональную активность Т-клеток, об »том свидетельствовало уменьшение процента миграции лейкоцитов й ГТМЛ с Кон А, который был ниже /Р<и,05/ в 1,5 раза, чем в контроле.

При изучении показателей местной клеточной за,¡сити легких бняо устшюняьно, что сочетанное применение пепмдних оиорегу- . ляторов оказало наиболее благоприятное воздействие на течение воспалительного процесса в легких. Ото шфаииюсь ь ирюцпии-альном отличий воспалительного экссудата от других груши ь нем преобладали макрофага /44,7 ± 1,33 %/ и лимфоциты /33,0 + ± 1)16 %/, а абсолютное количество нейтрофилов бцяо на 22,А % ниже /Рс0,05/, чем в контрольной группе. В то же прчзд общее количество клеток т> давсаио.1 жидкости оы.о н;ыч /!'•- 0,1/,/ ш.

19.3 %, чем аналогичный показатель ь контроле.

Сочетанное применение препаратов оказывало значительное

■ влияние на фагоцитарную активность альвеолярных л»крофах"сь поросят при бронхопневмонии, что ьыракадось в увеличении /Р<0,05/ , фагоцитарного^числа на 29,5 %, фагоцитарного индекса - в 1,6 раза по сравнению с исходным уровнем, а т&Уле позитивно повлияло на окислительную способность клеток лаважной жидкости;

спонтанная продукция супероксидного аниона возрастала /Р«= 0,05/ в 1,8 раза, ФМА-стимулированная - в 1,7 раза, 03-стимулирован-ная - в 2,9 раза, в то. время как аналогичные показатели у поросят контрольной группы оставались на исходно низком уровне,

ВЫВОДЫ

1. При неспецифической бронхопневмонии у поросят установлен дефицит Т-системы иммунитета, проявляющийся снижением в крови больных животных содержания Т-лимфоцитов на 38,7 %, их "активных" форм на 26,9 %, а также двукратным снижением коэффициента дифференцировки субпопуляций Т-лимфоЦитов за счет 70 %-ного снижения содержания клеток с хелперной активностью. Одновременно отмечено увеличение содержания нулевых клеток на 25,1 # по сравнений со здоровыми животными. '

2. При неспецифической бронхопневмонии у поросят отмечено увеличение притока клеток в межальвеолярное пространство легких: их общее количество составляет 11,9 ± 0,69 х 108/100 мл лаважной жидкости, что в 3,8 раза больше, чем у здоровых., причем среди клеток у больных преобладают нейтрофилы, в то время -как у здоровых основной клеточной единицей лаважной жидкости

являются ма1фофаги. .

3. Недостаточность Т-звена иммунитета у поросят при бронхопневмонии сочетается со сниженной фагоцитарной активностью альвеолярных макрофагов: фагоцитарное число.на 21,7 %, а фаго-г цитарный индекс ла 34,4 % ниже, чем у здоровых животных, а

_ также со снижением окислительной способности клеток лаважной жидкости: продукция супероксидного аниона ими ниже, чем у здоровых животных.- 'спонтанная на 84,6 %, стимулированная - на 27,1 %,

4. Применение бициллйна-3 в качестве основного средства ■ терапии бронхопневмонии не способствует восстановлению показателей как местного, так и системного иммунитета у переболевших; животных.

5. Применение ти:.югека в дозе 3-5 мкг/кг поросятам, больным неспецифической бронхопневмонией, оказывает преимущественно' стимулирующее влияние на систему клеточного иммунитета, что проявляется в увеличении содержания Т-лимфоцитов на 25,5 %, их

-•активных'форм на 94,4 %, клеток с хелперной активностью на • 48,9 % и коэффициента дифференцировки субпопуляций Т-клеток

Б 2 1>ыЗа ДО уровня ЭДОрОЫГХ лШйОЩЩХ спустя 20 суток ПОСЛс ййъ^кцаа препарата. Одновременно отмьчается восстановление функциональной активности Т-клеток: выработка ими лимфокинов ьоарииин в 2 раза спустя 30 суток после начала лечения и достигла уровня здоровых животных.

Пидежитсльное влияние тю*еиа на показатели местной кло-»члший Защиты легких проявилось в увеГЦЧвйШ фнротртари^;; ИК" тивыости атевеолирнн*. макрофах'он: фегецптирное число возросло на Со,Г» а фатоци'гарный индекс - в 1,9 раза по сравнению с исходно низким уровнем.

6, Применение пептидов легочной паренхимы в дозе 0,4 мг/кг в течение 3-х суток с интервалом 24 часа поросятам, больным неспецифической бронхопневмонией, оказывает преимущественно стимулирующее влияние на клеточное звено местной защити легких, увеличивая приток в межаяьвеояярное пространство легких мщ.^уи'ои на 25,8 % и их фататтаряуэ актныюсть /фагоцитарное пл^ш - нь "7, Я Хи ¿шгоспта^нмЯ иадькс - нн 71,4 %/ь а «&«*«<* окйслитищ.и^« V,!»--..;..••:•!(.,СТЬ АлЩчж ЛаЬЯЙИОй ..(НДПССТи в 2~"> риза но сравнена» о

11 г;Л• ¡1.::.; НИЗКИМ урОШЫД.

Н-л- .-мп ¿иное влияние ВлП лч клеточное звено онеч'&яниго >>••• •.•!>ьроймяотся спуоуя £и суток поело начала А»пен«щ а

.тр-.кт.^рл^уитоц восстшюшент-и кс.ипмеотьышых: поючЗ-.лТсл'мЛ Т-:«!-,; нн .••и.'.'нигеш, не !.;еплл при атом его функциональною ак-

7. Сочетанное применение тимогена и пешчщоь лчгочпой паренхимы ч урпзг.нн!.-' .-она:; к^ро-.мтьм, осльным не^игцп^ческоА бронч^'лп,■•Н'.н,!, I,. п^'окигельйое влияние на состоите • как так и местного иммунитета. Это выражается- в нормализации содержания Т- и Б-лим^.оцитов и восстановлянии функциональной активности Т-клаток спусм 33-30 оуток поело начала лечега.т, нрп-ьи ь такой же- степени, как и при гя'ед-аиа *в-глогч.'и;; отг^^ьно.

Си 1«1'«лнов Терпение нрч..н::рА'.,оь Сйиуоол-нуот ЬриклвЧишь » 'ла1" пи'рофьгов и лим$сцигьл, увеличению фагоцитар-

ной, альвеолярных макрофагов /фагоцитарного «шела -

на.29,5 %, фагоцитарного индекса - в 1,8 раза/ и окислительной способности 'клеток, лаважной жидкости'в 1,7- 2,5 раза. - •• 9. Использование пептидных биорегуляторов в комплексной-т&-. раши неслецифической бронхопневмонии сокращает сроки лечения и

О I'

стимулирует прирост массы леченных животных в среднем на 9,2 % по сравнению с контрольными. ■ ■

9. Полученный экономический эффект от применения тимогена 'для лечения неспецифической бронхопневмонии поросят составил . 9,21 руб. в расчете на 1 животное и 12,97 руб. в расчете на 1руб. затрат. .

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1, С целью повышения эффективности терайии бронхопневмонии у поросят рекомендуется применение пептидных биорегуляторов: тимогена в дозе 3-5 мкг/кг однократно и пёптидов ' легочной nàpeH-; химы /ШШ/ в дозе 0,4 от/кг трехкратно с. интервалом 24 часа в •комплексе с антибиотике-' и витаминотерапией в первые дни заболевания, /' ' . • ' ,

2, По материалам исследований разработай и предложен способ бронхоальвеолярного лавйжа легких.свиньи /рац.предложение

» 3987/5. от 9.09.91/. .

. ,3; Материалы диссертационной работы могут быть использованы é учебном;процессе при чтении лекций и проведении практичес-/хт. занятий ро патологической физиологии, иммунологии, •клинической диагностике, внутренним незаразным болезням, а также при написании учебников и учебных пособий.

.СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ;

1. фячко О,В, Применение тимогена для иммунокоррекции при

. бронхопневмонии свиней// Тез.докл. науч.-конф. Ленинградского вет. ин-та "Актуальные проблемы ветеринарии",- Л,г1991.- С. 46-47.

2, Крячко О. В, Метод иммунокоррекции тимогеном при неспеци-' фической бронхопневмонии// Сб.йзобр. и рац.предложений ВМедА

им.С.М.Кирова "Усовершенствование методов и аппаратуры, цриме-. няемых в учебном продессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике".- Л,, 1991.- С. 52.

. 3. Крячко О.В. Некоторые показатели иммунитета при бронхопневмонии свиней//. Сб.науч.тр.' Ленинградского вет.ин-та "Физиологические в биохимические основы повышения продуктивности с.-х. животных и''пушных зверей".-С.-Петербург, 1991,- С. 74-76.

4. Лютинский С.М., Крячко О.В.,- Хавинсон В.Х., Серый C.B. " Влияние ти:,',огена на иммунную систему поросят при неспецифической бронхопневмонии// Ветеринария, 1991,- № 9.- С.-30-32.

5. Лютинский С.И., Крячко О.В., Кожемякин А.Л. Способ бронхоальвеолярного лаважа изолированных легких свиньи// Со. изобр. и рад.предложений ВМедА им.С.М.Кирова "Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, ие-дико-биологических исследованиях и клинической практике".-С.-Петербург, 1932,- С. 33-34.

6. Крячко О.В. Активность ма)фо$агальной системы легких свиней при пневмонии// Тез.докл.науч.конф.С.-Петербургского вет, ин-та "Актуальные цроблемы ветеринарии".-С.-Петербург, 19У2,-С. 27-28.