Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея крупного рогатого скота

Глотова, Татьяна Ивановна

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея крупного рогатого скота

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Глотова, Татьяна Ивановна Новосибирск 2006 г.

Ученая степень: доктора биологических наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея крупного рогатого скота

На правах рукописи

ГЛОТОВА ТАТЬЯНА ИВАНОВНА

ИНФЕКЦИОННЫМ РИНОТРАХЕИТ И ВИРУСНАЯ ДИАРЕЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА (ДИАГНОСТИКА, МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ, ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРОТИВОВИРУСНЫХ ПРЕПАРАТОВ)

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология;

16.00.04 — ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Новосибирск 2006

Работа выполнена в ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН

Научный консультант:

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор академик РАСХН

Донченко Александр Семенович

доктор ветеринарных наук, профессор Юров Константин Павлович;

доктор биологических наук, профессор, Аликин Юрий Серафимович;

доктор биологических наук, профессор Колесников Владимир Алексеевич

Ведущая организация: Краснодарский научно-исследовательский

ветеринарный институт

Защита состоится «_/%> ^-¿у /¿а^Л 2006 г. в « » часов на заседании диссертационного совета Д.006.045.01 в Государственном научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Краснообск, СО РАСХН, ИЭВСиДВ.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО РАСХН

Автореферат разослан «^ » ^ ь-г^^ггуС^ 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

С.И. Логинов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Среди многообразия вирусных агентов, вызывающих патологию у крупного рогатого скота (КРС), вирусы инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС) занимают особое место в связи с многообразием клинических проявлений и тяжестью течения болезней, вызываемых ими (Н.Н. Крюков и соавт., 1984; К.П. Юров и соавт., 2003; D. Deregt et al., 1995; A.L.E. Lindberg, 2003).

Многие исследователи отводят первичную этиологическую роль в возникновении массовых респираторных болезней молодняка КРС этим вирусам, которая заключается в разрушении клеток эпителия (V. Fainstein et al., 1980), понижении активности бактериостатических механизмов в легких, воздействии на макрофаги, лейкоциты, Т4+-лимфоциты и изменении их функций (L.A. Babiuk et al., 1991; М.Т. Winkler, 1999).

Эти болезни регистрируются во всем мире, а также в РФ и причиняют значительный экономический ущерб мясному и молочному скотоводству (О.Г. Петрова и соавт., 1999; А.Г. Высокопоясный и соавт., 2000;

H.И. Закутский, 2000; В.А. Мищенко и соавт., 2001; Н.Ю. Басова, 2002; К.П. Юров и соавт., 2003; A.L.E. Lindberg, 2003).

В настоящее время необходима разработка и внедрение простых, высокочувствительных и специфичных методов, выявляющих возбудителя на любой стадии заболевания. Одним из них является полимераз-ная цепная реакция (ПЦР), которая становится важным диагностическим тестом в ветеринарной вирусологии (S. Belak et al., 1993).

В научной литературе есть сообщения о разработке и использовании ПЦР для выявления ДНК вируса ИРТ КРС в сперме быков (J. Rola et al., 1999), культуральной жидкости (В.Р. Sreenivasa et al., 1996), полевых изолятах (S.Moore et al., 2000). В качестве мишеней амплификации выбирались гены гликопротеинов (С. Ros et al., 1999), тимидинкиназы (S. Moore et al., 2000), использовалась стратегия гнездовой, или в комбинации с блот-гибридизацией ПЦР (R.S.Kataria, 1997).

С введением в практику ветеринарной вирусологии метода рестри-кционного анализа появилась возможность дифференциации вируса ИРТ КРС (BHV-1) на подтипы (1.1, 1.2 а/в и 1.3), различающиеся по вирулентности (A. Metzler, et. al., 1985). Впоследствии штаммы BHV-

I.3, реклассифицировали в отдельный тип BHV-5 (В. Roizman et al., 1995). Метод имеет ограниченное диагностическое значение, но успешно используется при эпизоотологических исследованиях, хотя обладает некоторыми недостатками, главным из которых является необходимость наработки большого количества вирусной ДНК.

Существование геномных вариантов вируса необходимо учитывать при разработке диагностических ПЦР-тест-систем (С. Ros, S. Belak, 1999). Для дифференциации между вариантами различных вирусов широко используются методы оценки полиморфизма ДНК, в частности, ПЦР-ПДРФ анализ (С. Херрингтон и соавт., 1999).

Принимая во внимание длительную персистенцию вируса ИРТ КРС на уровне популяции крупного рогатого скота, определение вирулентности изолятов в зависимости от их генотипа вызывает большой научно-практический интерес исследователей всего мира (М. Ackermann, 2001).

Актуальным в настоящее время является также изучение возможности использования противовирусных препаратов различных классов для профилактики и лечения больных животных (М.М. Зубаиров, 1998).

Учитывая то, что возбудитель ВД-БС КРС представлен цитопато-генным и нецитопатогенным биотипами, определяющими клинические проявления болезни в зависимости от способности индуцировать выработку интерферона типа 1 в организме восприимчивых животных, изучение связи между интерфероногенной активностью и его патогенно-стью имеет большой научный интерес (N. Grandvaux et al., 2002).

Цель и задачи исследований. Цель работы: разработка способов диагностики, изучение молекулярно-биологических свойств возбудителей и научное обоснование применения противовирусных препаратов при инфекционном ринотрахеите и вирусной диарее крупного рогатого скота.

Для достижения указанной цели были поставлены задачи:

1. Усовершенствовать методику постановки реакции нейтрализации в культуре клеток микрометодом для серологической диагностики ВД-БС КРС. Изучить распространение ИРТ и ВД-БС КРС в Сибири, установить роль вирусов в этиологии массовых респираторных болезней молодняка КРС и выявить ассоциации вирусов, возникающие при вспышка* массовых респираторных болезней;

2. Разработать ПЦР для выявления вируса ИРТ КРС и изучить ее сравнительную диагностическую эффективность, а также способ типи-рования и дифференциации штаммов и изолятов вируса при помощи ПЦР-ПДРФ-анализа;

3. Изучить некоторые молекулярно-биологические свойства штаммов и изолятов вирусов, выделенных от больных и инфицированных животных. В условиях контролируемых экспериментов определить их сравнительную патогенность для естественно восприимчивых животных в зависимости от генотипа и интерфероногенной активности, а также воспроизвести острую смешанную бронхопневмонию вирусной этиологии и изучить ее клинические проявления;

4. Изучить противовирусную активность препаратов различных классов, а также экзогенного интерферона в отношении вирусов ИРТ и ВД-БС КРС в опытах in vitro, а наиболее эффективных из них в экспериментах in vivo.

Научная новизна.

1. Усовершенствована методика постановки реакции нейтрализации в культуре клеток микрометодом для серологической диагностики ВД-БС КРС. Установлено широкое распространение ИРТ и ВД-БС КРС в Сибири и подтверждена ведущая роль вирусов в возникновении массовых респираторных болезней телят вирусной этиологии в крупных хо-

зяйствах племенного и молочного направления. Выявлена взаимосвязь между концентрацией поголовья, серопозитивностью и частотой выделения вирусов от больных животных. Изучены ассоциации вирусов, возникающие при массовых вспышках респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота.

2. Разработана ПЦР для выявления вируса ИРТ КРС и изучена ее сравнительная диагностическая эффективность, а также способ типиро-вания и дифференциации вируса при помощи ПЦР-ПДРФ-анализа. Проведено типирование Российских штаммов и изолятов вируса, разработан способ дифференциации аттенуированного вакцинного штамма ТК-А от полевых штаммов и изолятов вируса.

3. Изучены некоторые молекулярно-биологические свойства изолятов вирусов ИРТ и ВД-БС КРС, выделенных от больных и инфицированных животных. В условиях контролируемых экспериментов показана взаимосвязь генотипа вируса ИРТ КРС и интерфероногенной активности вируса ВД-БС КРС с их патогенностью для естественно восприимчивых животных, а также воспроизведена острая смешанная вирусная болезнь и показано усиление патогенных свойств вируса ИРТ КРС на фоне размножения вируса ВД-БС КРС.

4. Установлена противовирусная активность препаратов различных классов в отношении вирусов ИРТ и ВД-БС КРС в опытах in vitro. Показана профилактическая эффективность 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолона в контролируемых опытах на экспериментально зараженных телятах 4-6-месячного возраста.

Теоретическая и практическая значимость работы. Материалы диссертации использованы при составлении:

— Рекомендаций «Вирусные заболевания крупного рогатого скота в Сибири и на Урале (Особенности эпизоотологии, клинического проявления, диагностика, меры профилактики и борьбы)», утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. № 1, 12.01.2001) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. № 1, 15.01.2001);

— Методических рекомендаций «Оценка токсичности противовирусных препаратов в культуре клеток», утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. № 2, 05.03.2004) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. № 10, 05.03.2004);

— Методических рекомендаций «Выявление вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции с последующей дифференциацией вакцинного штамма и эпизоотических изолятов», утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. № 6, 09.11.2004) и подсекцией секции инфекционной

патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. № 11, 10.11.2004);

— Рекомендаций «Вирусные и ассоциативные вирусно-бактериаль-ные респираторные болезни крупного рогатого скота (Особенности эпизоотологии, патогенеза, клинического проявления, патологоанатомиче-ских изменений)», утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. № 6, 09.11.2004) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. № 23, 09.11.2004);

— Методических рекомендаций «Выявление вируснейтрализующих антител к вирусу вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота в реакции нейтрализации микрометодом в культуре клеток», утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. № 2, 29.04. 2005) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. № 4, 29.04.2005);

— МетодичеЬкого пособия «Противовирусное действие интерферо-нов», утвержденного Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. №2, 03.05^ч2005) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. № 4, 03.05. 2005);

— Методического пособия «Молекулярные методы диагностики: принципы и практическое применение при инфекционных болезнях животных», утвержденного Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. № 2, 03.05. 2005) и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. № 4, 03.05.2005).

Результаты исследований представляют теоретическую и практическую ценность, создают перспективы использования ПЦР не только в диагностике ИРТ КРС, но и в молекулярной эпизоотологии болезни и могут быть использованы для оптимизации противоэпизоотических мероприятий с целью дифференциации аттенуированного вакцинного штамма от полевых штаммов и изолятов вируса. Полученные данные также дают возможность расширить научные знания относительно роли вирусов в возникновении массовых респираторных болезней телят и могут быть использованы при дальнейшем изучении иммунологии и патогенеза инфекций, вызванных герпес- и пестивирусами. Результаты исследований открывают перспективы применения противовирусных препаратов для профилактики вирусных инфекций и могут быть использованы в практике при разработке оздоровительно-профилактических мероприятий.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на: заседаниях Ученого совета ГНУ Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН (Новосибирск, 1999-2005), Международной научно-практической конференции (Новосибирск, 1999); Научно-практической конференции (Новокузнецк, 2000); Научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Троицк, 2000); 111 и IV Всероссийской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (Москва, 2001, 2002); Научно-практической конференции «Болезни сельскохозяйственных животных вирусной и других этиологий и меры борьбы с ними» (Иркутск, 2001); 5-й Международной научно-практической конференции «Научное обеспечение АПК Сибири, Монголии, Казахстана, Беларуси и Башкорстана» (Новосибирск, 2002); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» (Воронеж, 2002); Международной научно-практической конференции (Покров, 2002); 6-й Международной научно-практической конференции «Аграрная наука Сибири, Монголии, Казахстана и Башкорстана — сельскому хозяйству» (Новосибирск, 2003); International Multidisciplinary Workshop Scientific Discussion Club «Progress in Biotechnology and neurobiology - integrative medicine» (Egypt, 2004); Научно-производственной конференции, посвященной 100-летию проф. Н.Т. Кондюрина (Омск, 2004); Международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы эпизоотологии на современном этапе» (Санкт-Петербург, 2004); Сибирском Международном ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005); Международной конференции «Развитие международного сотрудничества в области изучения инфекционных заболеваний (Новосибирск, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации» (Новосибирск, 2005), Международной научно-практической конференции «Проблемы ветеринарной науки и практики в современных условиях» (Алматы, 2005).

Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены Подсекцией инфекционной патологии при ИЭВСиДВ (прот. № 5, 20.10.2005) и Ученым Советом ГНУ ИЭВСиДВ (прот. № 9, 20.10.2005).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликованы 39 печатных работах в сборниках научных трудов, журналах «Ветеринария», «Вопросы вирусологии», «Антибиотики и химиотерапия» и других научных трудах и изданиях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 320 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, приложения. Работа иллюстрирована 35 рисунками и 20

таблицами. Список литературы включает 515 источников, в том числе 364 зарубежных.

Основные положения, выносимые на защиту:

— Модифицированный метод серологической диагностики ВД-БС КРС, распространение и особенности эпизоотической ситуации при ИРТ и ВД-БС КРС в Сибири;

— Теоретическое и экспериментальное обоснование разработки «Тест-системы для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции» и определение ее сравнительной диагностической ценности при различных формах болезни, а также способ типирования и дифференциации штаммов и изолятов вируса при помощи ПЦР — ПДРФ-анализа;

— Молекулярно-биологические свойства изолятов вирусов ИРТ и ВД-БС КРС, выделенных от больных и инфицированных вирусами животных и их сравнительная патогенность для естественно восприимчивых животных в зависимости от генотипа и интерфероногенной активности;

— Противовирусная активность препаратов различных классов в отношении вирусов ИРТ и ВД-БС КРС в опытах in vitro и in vivo.

Теоретический анализ, обобщение результатов, экспериментальные исследования выполнены автором самостоятельно.

Автор выражает глубокую благодарность за участие в выполнении некоторых фрагментов диссертации сотрудникам ГНЦ ВБ «Вектор»: С.Ф. Орешковой, А.Н. Сергееву, Е.И. Рябчиковой, заведующему лабораторией биотехнологии-диагностический центр ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН А.Г. Глотову, а также сотрудникам лаборатории A.B. Нефедченко и Н.В. Некрасовой.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Работа выполнена в 1998-2005 гг. в лаборатории биотехнологии-диагностический центр ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН, хозяйствах Новосибирской, Курганской, Тюменской, Омской, Кемеровской областей, Алтайского и Красноярского края, республики Бурятия и Хакасия.

Изучение эпизоотической ситуации по ИРТ и ВД-БС КРС в Сибири. При изучении распространения ИРТ и ВД-БС КРС использовали результаты собственных серологических и вирусологических исследований. Высчитывали средний процент проб сыворотки крови, содержащих вируснейтрализующие антитела к вирусам, от числа поступивших из хозяйств с различной концентрацией животных, где наблюдались вспышки респираторных болезней крупного рогатого скота.

Исследовали 5200 проб биоматериала от телят до 6-месячного возраста, 17233 пробы сыворотки крови коров-матерей, телок, телят до 12 месяцев из 114 хозяйств различной формы собственности, где не проводилась специфическая профилактика данных болезней.

Вирусологические исследования проводили согласно стандарту МЭБ (OIE Manual, Manual of Standarts//Chapter 2.3.5., 2000; Chapter 2.10.6., 2004). При массовых обследованиях пробы биоматериала на ВД-БС КРС дополнительно исследовали с использованием «Набора для диагностики вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа» (ТУ № 1007078-92).

Постановку реакции нейтрализации для диагностики ВД-БС КРС осуществляли микрометодом в собственной модификации, согласно разработанному наставлению (ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН, 2005).

Для ретроспективной диагностики болезней пробы сыворотки от животных отбирали однократно, а от больных телят двукратно с интервалом 20-23 дня для установления сероконверсии. Пробы хранили при -20°С и исследовали одновременно.

Гематологические исследования проводили согласно методикам, описанным И.П. Кондрахиным и соавт (1985).

Штаммы и изоляты. Вирус ИРТ КРС: использовали 7 Российских референтных штаммов: Оренбург, 4016 (ВГНКИ ветпрепаратов), ТК, ТК-

A, ТНЛ, ТНЛ-2, Щ (ВИЭВ), 4 Сибирских: А, Л, С11 и С012, выделенных нами и депонированных в НИИ «Коллекция культур микроорганизмов» ГНЦ ВБ «Вектор», а также 2 Венгерских: М29 и М40. Дополнительно тестировали 31 изолят вируса, выделенный от больных и инфицированных животных на территории России в различные годы. Изоляты С-2, Иван, Ярославль, КАМ, Б, ВВ, Я99, МС, КМ были получены из ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко, а Иь К2, Ж, П, И2, Кь Д, ПВ, М-Т, М, У, ПВ-М, СП, Сб, СК, СЗ, С4, Cl, С7, С15, COiO, СГ выделены в ИЭВС и ДВ.

Вирус ВД-БС КРС: штамм ВК-1 (ВИЭВ), штамм ТМ, выделенный нами и депонированный в НИИ «Коллекция культур микроорганизмов» ГНЦ ВБ «Вектор», изоляты И, ИС выделены нами от животных.

Моноспецифические гипериммунные сыворотки к выделенным изолятам получали путем гипериммунизации кроликов по схеме

B.C. Авилова и соавт. (1979).

Определение антигенного родства вирусов проводили в перекрестной реакции нейтрализации (3. Лярски, 1980).

Электронная микроскопия. Монослой культуры клеток КСТ (не менее 1 млн. клеток) заражали изолятами в дозе 1-10 ТЦД5о/кл- Зараженные клетки снимали раствором трипсина и Версена после проявления 50% и 100% ЦПД. Центрифугировали при 1500 об./мин. в течение 10 мин, осадок фиксировали 4%-м раствором параформа. Контролем служили клетки интактные и зараженные референтным штаммом ВК-1 вируса ВД КРС, зафиксированные в эти же сроки инкубации. Образцы постфиксировали 1%-м раствором осмиевой кислоты, обезвоживали по стандартной методике и заливали в смесь эпон-аралдит. Ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца, изучали в электронном микроскопе Н-600 (Хитачи, Япония).

Экспериментальное заражение. Для проверки патогенности выделенных штаммов вирусов использовали 54 серонегативных теленка черно-пестрой породы в возрасте 4-6 месяцев, подобранных по принципу аналогов. Суспензию каждого вируса вводили интраназально трем-восьми телятам в дозе 4х105,5'6 ТЦД50/0,1мл при помощи генератора аэрозоля БГ-2. Контрольным животным таким же способом вводили физиологический раствор.

За инфицированными и контрольными животными в течение 25 дней проводили клинические наблюдения с ежедневной термометрией, отбором проб крови для определения изменений гематологических показателей и тампонных проб носовых выделений с целью реизоляции исходного вируса, начиная со дня до заражения.

Культуры клеток. Использовали перевиваемые линии культур клеток МОВК, КСТ, ЯК-13, а также первично трипсинизированные культуры клеток тестикул бычка, почек эмбриона коровы (Л.П. Дьяконов и соавт., 2000).

Выделение ДНК вирусных штаммов и изолятов. ДНК выделяли методом фенольно-хлороформной экстракции по методике Т. Маниатис и соавт. (1984). В качестве матрицы для проведения ПЦР использовали 5 мкл полученной пробы ДНК.

Проверка чувствительности и специфичности ПЦР. Для определения чувствительности контрольный штамм вируса ИРТ КРС Оренбург титровали путем десятикратных разведений до конечного— 10"7 и амплифицировали в ПЦР.

Для проверки специфичности реакции проводили амплификацию ДНК близкородственных герпесвирусов КРС: ВНУ-2 (шт. М), ВНУ-4 (шт. Моуаг-33/63), ДНК культуры клеток, в которой реплицировали указанные вирусы, а также ДНК аденовируса КРС 1-го типа (шт. ВУ-10), риновируса КРС 1-го типа (штамм БЭЛ), полученные из ВНИИВВиМ, вируса болезни Ауески (штамм Арский, ВГНКИ).

Типирование изолятов вируса с помощью анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ). Анализировали ПЦР-продукты, полученные с праймерами В1 и В2, для всех исследуемых штаммов и изолятов вируса. Для гидролиза использовали эндонуклеазы рестрикции НраН, Рок1, Нра1, В£11, Тги91 (Мзе1), 8ас11 (86-3031).

Молекулярная гибридизация. Постановку осуществляли согласно «Наставлению по диагностике инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации», утв. ДВ МСХ и П РФ, 15.08.2001, № 13-7-2/1551.

Препараты. Использовали противовирусные препараты, распределенные по группам в соответствии с классификацией Ф.И. Ершова (1998).

Химиопрепараты: бромуридин, ацикловир, изатизон, госсипол (раствор в 0,07%-м водном растворе буры), рибавирин, полученные из института вирусологии им. Ивановского; рибавирин липосомирован-ный, разработанный в ГНЦ ВБ «Вектор»; анандин (стандартный ком-

мерческий препарат производства НИО «Медитэр», серии 1201-1202, 10%-й раствор глюкаминопропилкарбакридона); Арговит (Витар) производства ЗАО «Вектор-Бест», серии 11-12 в виде 20%-го раствора высокодисперсного серебра, стабилизированного поливинилпирролидо-ном; 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон.

Индукторы интерферона: «Сахабактисубтил», Bacillus subtilis ТНП-3, Bacillus subtilis- ТНП-5 (Якутия); «Коредон» (ООО «Стэлк»); 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон (ООО «Наука, Техника, Медицина»), Ридо-стин (ГНЦ «Вектор», серия 011100), Циклоферон производства НТФФ «Полисан» серии 10201-10202 в виде 12,5% раствора N-(1 дезокси-d-глюцитол-1 -ил)-М-метиламоний-10-метилкарбоксилат акридона.

Интерфероны:

а) природные — человеческий лейкоцитарный ИФН (ФГУП «НПО Микроген»);

в) рекомбинантные — препарат Роферон, рекомбинатный ИФН — а 2а (Ф. Хоффманн-Ля Рош Лтд»), Реаферон, рекомбинантный ИФН — а 2в («Вектор-Медика»), С 13-0404.

Иммуномодуляторы: полипренол в виде водно-эмульсионной формы и его производное Фоспренил производства ЗАО «Микро-плюс» при НИИ эпидемиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН серии 1056-1058 в виде 0,4%-го раствора полипренилфосфатов в комплексном водном растворителе; «Водная фракция углекислотного экстракта пихты сибирской» (ТУ 9151-001-58-908454-03, № 1), «Экстракт углекислотный пихты сибирской» (ТУ 9151-001-58-908454-03, №2), предоставленные ООО «Сибирский завод экстрактов и биотехнологий» г. Томск; эраконд — экстракт растительный конденсированный препарат производства ТОО НВП «АПТ-Экология», г. Екатеринбург, в виде 10% раствора экстракта люцерны с микроэлементами в комплексном водном растворителе; гу-митон, разработанный СНИИТ СО РАСХН (Томск).

Определение противовирусной активности препаратов. Монослой используемой культуры клеток заражали вирусами в дозе не менее 1 ТЦД50 на клетку, через 1,5 ч. после этого их отмывали питательной средой и вносили препараты в эффективных дозах или питательную среду (контроль). Через 72 ч. культивирования вируса в таких биосистемах культуральную жидкость титровали. Противовирусный эффект рассчитывали по соотношениям инфекционных активностей вирусов в опытных и контрольных образцах. В каждом опыте проводили дополнительный контроль на токсичность испытуемой дозы препаратов.

Определение интерферона: в образцах супернатантов и в сыворотке крови определяли титрованием в культурах клеток L-929, MDBK, КСТ (Д.Н. Носик и соавт., 1985).

Достоверность результатов подтверждали путем статистической обработки и определения различий средних значений с помощью критерия Стьюдента. Результаты считали достоверными при Р<0,05. Для обработ-

ки полученных данных использовали программу «Microsoft Excel», входящую в пакет программ «Microsoft Office 7.0».

Схемы проведения опытов и методики исследований приведены по мере изложения материалов собственных исследований в начале соответствующих подразделов диссертации.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Усовершенствование методики постановки реакции

нейтрализации для серологической диагностики ВД-БС КРС

Методики реакции варьируют в зависимости от типа штамма, начального разведения вируса, времени инкубации вируса с сывороткой (1—24 часа), используемых клеток, времени учета и метода подсчета титров антител (50% против 100%). Она рекомендована для международного использования, когда необходима высокая чувствительность и специфичность выявления вируснейтрализующих антител.

В нашей стране используется процедура постановки реакции в первично трипсинизированных культурах клеток макрометодом. В качестве ростовой среды используется 10% сыворотки крупного рогатого скота. Результаты учитываются на 5—7 дни по мере наступления цитопатиче-ского действия вируса в контрольных пробирках. Использование сыворотки КРС часто приводит к контаминации реакционной смеси антителами к вирусу, а также самим вирусом, что искажает результаты и требует поиска серонегативных к вирусу животных-доноров.

Модифицированный способ постановки реакции нейтрализации микрометодом исключает контаминацию ее компонентов благодаря замене первично трипсинизированной культуры клеток на перевиваемую (КСТ), сыворотки крови крупного рогатого скота на лошадиную (до 5%). Время исследования 100 проб сыворотки составляет 3 дня.

При исследовании 1000 проб сыворотки крови модифицированный метод выявил на 12% больше положительных проб, чем стандартный, что говорит о его более высокой чувствительности. Частота встречаемости величин титров 1:2-1:16 в модифицированном тесте на 5,8%, а 1:321:256 на 5,5% выше, чем в стандартном. Титры антител 1:512 и выше в стандартном тесте не выявлялись. В модифицированном тесте выявили три пробы сыворотки крови с такими титрами, что составило 0,75%.

Таким образом, модифицированный способ позволяет выявлять большее количество положительных проб сыворотки крови исследуемых животных в более короткие сроки в высоких титрах, а количество отрицательно реагирующих животных меньшее в сравнении со стандартным методом постановки реакции нейтрализации. Замена в модифицированном методе эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота лошадиной имеет преимущества, обусловленные более низкой стоимостью и отсутствием контаминации вирусом ВД-БС КРС. По срокам постановки диагноза он превосходит стандартный в 2 раза. Стоимость исследования

одной пробы при помощи модифицированного метода составляет 86 рублей, при помощи стандартного — 165 рублей, что в 1,9 раза снижает затраты на проведение диагностических исследований.

2.2.2. Распространение ИРТКРС и ВД-БС КРС в хозяйствах Сибири

Изучение особенностей распространения вирусных болезней весьма актуально и может быть использовано в практике при планировании и разработке комплекса оздоровительно-профилактических мероприятий.

Результаты серологических исследований показали, что максимальное количество проб сыворотки крови, содержащих антитела к вирусу ИРТ КРС в среднем по различным половозрастным группам КРС составило: в Республике Бурятия (76,4%), Кемеровской области (74,4), Красноярском крае (73,7), Тюменской области (67,9), Новосибирской области (61,3) и Алтайском крае (56,8%). Инфицированность животных в республике Хакасия и Курганской области составила, соответственно 52,9% и 52,4%.

Наибольшее распространение ВД-БС КРС получила в хозяйствах Кемеровской области (85,6%), Республики Бурятия (78,6) и Тюменской области (75,0%). В Красноярском крае выявили 73,7% положительно реагирующих животных, в Новосибирской области 66,4, а в Курганской — 64,8%.

При исследовании парных проб сыворотки крови от больных животных сероконверсию, сопровождавшуюся выделением вируса, выявили: к вирусу ИРТ КРС в 30—40% у коров и телят при острых вспышках ИРТ КРС, а к вирусу ВД-БС КРС в 20-30% случаев. В ряде хозяйств регистрировали совместное течение ИРТ и ВД-БС, а также других вирусных инфекций. Наличие специфических антител к вирусам ИРТ и ВД-БС в 78,8%, ИРТ, ВД-БС и ПГ-3 КРС в 63,8%, ИРТ, ВД-БС и возбудителям хламидиоза в 9,5% обследованных хозяйств. В 29,5% из них встречались случаи сочетанного течения ИРТ и ПГ-3. ИРТ, ВД-БС, рота-и коронавирусные инфекции выявляли в 23,4% случаев.

Анализ эпизоотической ситуации показал, что наибольшее распространение ИРТ и ВД-БС КРС получили в хозяйствах с интенсивным ведением животноводства.

Значения величин титров вируснейтрализующих антител к вирусам ИРТ и ВД-БС КРС существенным образом увеличиваются в зависимости от концентрации поголовья в хозяйстве. Разница между титрами антител у животных в хозяйствах с высокой и низкой концентрацией статистически достоверна (Р<0,05).

В такой ситуации часто наблюдали вариабельность результатов серологических исследований. Отмечался заметный разброс титров антител к обоим вирусам и, зачастую, отсутствие выявляемой реакции анти-телообразования. При таком типе течения этих инфекций может происходить частичное подавление иммунной реакции организма на один из возбудителей при сохранении или даже усилении значения этого возбудителя в патогенезе заболевания.

2.2.3. Спектр возбудителей инфекционных заболеваний, выделенных от больных телят, в неблагополучных по ИРТ КРС хозяйствах

Результаты вирусологических исследований показали, что количество проб, содержащих вирус ИРТ КРС, составляет 40%, а ВД-БС КРС — 11,7, вирус ПГ-3 КРС — 9,3, аденовирус — 2, коронавирус — 6%.

Наиболее часто выявляются следующие ассоциации вирусов: вирус ИРТ и ВД-БС КРС — 71,7%, вирус ИРТ и ПГ-3 КРС— 60, сочетание трех вирусов удалось обнаружить в 38,7%. Удельный вес аденовирусов и коронавирусов низок и составляет, соответственно, 2% и 6%.

Виды ассоциаций вирусов и частота распределения их во внутренних органах больных телят были следующие: ИРТ и ВД-БС чаще всего выявляли в легких (37,8%), трахеальной и бронхиальной слизи (16,5), слизистой носа (10,2) и трахее (9,82%). Вирусы ИРТ и ПГ-3 — в легких (27,39%), гортани (23,5), трахеальной и бронхиальной слизи (12,5%). Одновременно три вируса (ИРТ, ВД-БС и ПГ-3) — в легких (27,75%), гортани (19,7), трахеальной и бронхиальной слизи (14,7), легочных лимфатических узлах (12,5%).

Таким образом, в племенных и товарных хозяйствах ИРТ и ВД-БС КРС у телят протекают в сочетании с другими вирусными инфекциями. Однако наличие диагностического прироста титров вируснейтрализую-щих антител, чаще выявляемое у больных животных именно к этим вирусам, а также более частое выделение возбудителя от больных животных свидетельствует, на наш взгляд, об их ведущей роли в данных ассоциациях.

2.2.4. Выделение и характеризация изолятов вируса ИРТ КРС от больных и инфицированных вирусом животных

В 1998-2004 гг. из проб биоматериала выделили и типировали в реакции нейтрализации 26 изолятов вируса.

Референтный штамм ТК-А и все полевые изоляты вируса ИРТ КРС являлись близкородственными: степень их родства находилась в диапазоне 89,9-98,3%. Степень антигенного родства штамма ТК-А находилась в пределах 90,8-96,9% с изолятами ЛК, П, А, Д и 89,9-98,3% с изо-лятами С11, С012, П и Л.

Сыворотка к референтному штамму ТК-А нейтрализовала как гомологичный штамм, так и все изоляты вируса, использованные в работе. Индексы нейтрализации этой сыворотки ко всем изолятам находился в пределах от4,33±0,12 до 5,66±0,17 1§ТЦД5о/о,1мл- Наибольшую нейтрализующую активность проявили сыворотки, полученные к изолятам Л (5,0±0,17-5,66±0,19 ^ТЦД50/олмл), ПВ (5,0±0,2-5,66±0,17 1ёТЦД50/о,.мл) и СО 12 (5,00±0,17-5,66±0,171§ТЦД5о/о,1мл)» что свидетельствует о более выраженных антигенных свойствах этих изолятов.

2.2.5. Выделение и характеризация изолятов вируса ВД-БСКРС

от животных в Сибири

В 2001 году от больных и инфицированных вирусом животных выделили и типировали в реакции нейтрализации в культуре клеток три изолята вируса ВД-БС КРС, которые обозначили: ТМ (легкие больного теленка), И (вагинальные выделения коровы) и ИС (сперма быка-производителя). Все изоляты оказались чувствительными к хлороформу, эфиру, трипсину и прогреванию при 50 С, не обладали гемагглютини-рующими и гемадсорбирующими свойствами в отношении эритроцитов морской свинки и мыши.

В культуре клеток КСТ на 3-5 сутки инкубирования при 37°С на уровне 3-5 пассажей изоляты вызывали ЦПД и накапливались в титрах от 4,75 до 6,5 ^ ТЦД5о/мл- Все изоляты к 10-15-у пассажам проявляли ЦПД на 1-2-е сутки культивирования при дозе заражения 1ТЦД/кл. Изолят ТМ вызывал развитие ЦПД в более ранние сроки (на 1-е сутки инкубирования) и накапливался в более высоких титрах в сравнении с другими изолятами.

Электронно-микроскопическое изучение культур клеток, зараженных изолятами и референтным штаммом ВД-БС КРС ВК-1, выявило аналогичные изменения клеток и вирусные структуры. Инфицированные клетки округлые, с гомогенным ядром, структура хроматина которого утрачена (он выглядел «спекшимся»), В некоторых ядрах просматривались участки конденсации хроматина, характерные для апоптоза. Цитоплазма очень высокой электронной плотности содержала большое количество вакуолей разных размеров, жировые включения. Немногочисленные вирусные частицы сферической формы имели диаметр около 50 нм и локализовались в просвете коротких цистерн эндоплазматиче-ского ретикулума. В цитоплазме зараженных клеток обнаруживались также скопления вирусных нуклеоидов, имеющих диаметр около 30 нм, зачастую формирующих кристаллоидные структуры.

Гипериммунная сыворотка к штамму ВК-1 нейтрализовала гомологичный штамм и изоляты вируса. Высокие индексы нейтрализации были получены также при перекрестной реакции нейтрализации между выделенными изолятами. Референтный штамм и полевые изоляты вируса ВД-БС КРС являются близкородственными: степень их родства находится в диапазоне от 92,2 до 96,4%.

Таким образом, изоляты, выделенные от животных различных половозрастных групп, обладали характерными для представителей рода Рев^у^в антигенными свойствами, проявляли выраженное ЦПД в отношении чувствительных культур клеток, что позволило отнести их к первому биотипу вируса.

2.2.6. Разработка ПЦР для диагностики и шинирования штаммов

и изолятов вируса ИРТКРС

Подбор праймеров. Анализ последовательностей белков и генов депонированных штаммов вируса ИРТ КРС проводили с использованием международных баз данных при помощи компьютерных программ PC-gene, Alignment-serves и CLUSTAL.

Праймеры для выявления ДНК вируса ИРТ КРС синтезировали на ген гликопротеина В, выбор которого обусловлен жизненной важностью этого белка для вирусной репликации и высокой консервативностью его аминокислотных последовательностей. На основе сиквенса этого гена установлена возможность дифференциации подтипов BHV-1.1 и BHV-1.2 от BHV-5. В работе Н.В. Тикуновой и соавт. (2001) проведен сравнительный анализ последовательностей региона генов 1СР18,5 и gB двух штаммов вируса ИРТ КРС - Российского ТК-А и американского Cooper, полная нуклеотидная последовательность которого представлена в Genbank database: Bovine herpesvirus 1, complete genome. Entrez NC_001847 [gi: 9629818]. Исходя из этого, использовали праймеры к области гена ICP18.5. Праймер В1 соответствовал фрагменту 24002-24021н., В2 — фрагменту 24464-24445 н. (обратный) генома вируса.

Синтез праймеров, расчет условий и кинетики диагностической ПЦР осуществляли с помощью компьютерной программы «Oligo» версии 3.0 на автоматическом синтезаторе ASM 102 (фирма «Биосет»). ПЦР проводили на амплификаторе марки «Бис-108» производства ГНЦ ВБ «Вектор».

Проведение диагностической ПЦР. Полимеразную цепную реакцию проводили в 25 мкл реакционной смеси, содержащей 2,5 мкл буфера для Taq-ДНК полимеразы, 2,5 мкл 2mM dNTP mix — смеси дезокси-нуклеозидтрифосфатов, по 2,5 мкл каждого праймера (прямой и обратный) с концентрацией 2тМ, 2,5 ед. активности термостабильной Taq ДНК-полимеразы. В смесь добавляли 0,03у геномной ДНК (5 мкл).

Пробирки с ПЦР-смесью помещали в амплификатор со следующей программой температурно-временных циклов: Тде„ 95°С — 5 мин; (Тден 95°С— 1 мин, Тотж 54°С— 1 мин, Тэлон 72°С— 1,5 мин)— 35 циклов; Тэлон 72°С — 3 мин.

Электрофорез ПЦР-продукгов проводили в 2% агарозном геле при 50 мА в течение 30 мин, результаты учитывали, просматривая гель в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм на приборе «Трансиллюминатор-UVT-l».

Амплификацию В1-В2 фрагмента генома вируса ИРТ КРС проводили, используя в качестве матрицы ДНК, выделенную из референтных штаммов и полевых изолятов вируса. Праймеры В1 и В2 направляют синтез фрагмента размером 464 п.н. При проведении ПЦР с данными праймерами продукт ожидаемого размера получен для всех штаммов и изолятов вируса, использованных в работе (таблица 1) и отсутствовал в случае других вирусов — BHV-2, BHV-4, вируса болезни Ауески, аденовируса КРС 1-го типа и риновируса КРС 1-го типа. Чувствительность ПЦР составила 102 ТЦД50/МЛ.

Таблица 1 - Амплификация ДНК штаммов и изолятов вируса ИРТ КРС

№ п/п Наименование штаммов (изолятов) Клиническая форма заболевания, источник выделения Амплификация в ПЦР с праймерами на регион gB

Штаммы

1 Оренбург Респираторная, легкие +

2 4016 Респираторная, легкие +

3 ТК Респираторная, легкие +

4 ТНЛ Респираторная, легкие +

5 М-29 Респираторная, легкие +

6 М-40 Генитальная, влагалищные выделения +

7 ТНЛ-2 Респираторная, легкие +

8 щ Респираторная, легкие +

9 ТК-А Аттенуированный +

10 А Генитальная, влагалищные выделения +

11 Л Респираторная, легкие +

12 С11 Латентная, сперма +

13 С012 Латентная, сперма +

Изоляты

14-24 СП, СБ, СК, СЗ, Латентная, сперма +

МС,С4, С1.С7,

С15, СОЮ, СГ

25-30 И,,К2, С2, П, Генитальная, влагалищные выделения +

ВВ, ЛК

31-41 Б, Я99, И2, К,, Респираторная, легкие +

ПВ, КАМ, МТ,

Л, Я, Д,

Ярославль

42 М Конъюнктивальная +

43-44 У (абортплод), Мозг +

ПВМ

Результаты диагностической ПЦР для 7 штаммов вируса представлены на рис 1.

Рисунок 1 — Электрофореграмма продуктов диагностической ПЦР

на присутствие ДНК вируса герпеса 1-го типа 1 — маркер молекулярного веса (\lspl, гидролизат плазмиды риС19); 2-8 — штаммы 4016, Оренбург, ТК-А, ТК, М-29, ТНЛ, Л, соответственно

Таблица 2 — Оценка специфичности ПЦР для выявления ДНК вируса

ИРТ КРС

Вирус (штамм) Амплификация с праймерами на регион gB

Герпесвирус КРС 1-го типа (Оренбург) Герпесвирус КРС 2 типа (М) Герпесвирус КРС 4-го типа (Movar-33/63) Вирус болезни Ауески (Арский) Аденовирус КРС 1 типа (BV-10) Риновирус КРС 1-го типа (SD-1) ДНК культуры клеток MDBK +

Примечание: «+» — положительный результат; «-» — отрицательный результат.

Результаты опытов по определению специфичности реакции представлены в таблице 2.

2.2.7. Сравнительная эффективность полимеразной цепной реакции, молекулярной гибридизации и метода выделения вируса в культуре клеток при диагностике ИРТ КРС

Целью работы являлось сравнительное испытание молекулярной гибридизации (МГ) и полимеразной цепной реакции (ПЦР) с методом выделения вируса в культуре клеток (ВВ) при диагностике различных форм ИРТ КРС. При помощи 3 методов одновременно исследовали 496 проб биоматериала, полученных от больных и инфицированных вирусом ИРТ животных (таблица 3).

Из данных, представленных в таблице 3, видно, что эффективность ПЦР .при исследовании проб биоматериала от телят составила 27,6%, молекулярной гибридизации — 36,2%, а выделения вируса в культуре клеток — 29,8%; при исследовании проб от коров — 32,3%, 34,5 и 10,7%, от быков — ПЦР— 23,7%, молекулярной гибридизации и выделения вируса— по 12,7% соответственно. Наибольшую эффективность тест-система показала при исследовании проб спермы от быков-производителей.

Таблица 3 — Сравнительная эффективность трех методов выявления вируса ИРТ КРС в пробах биоматериала от животных разных половозрастных групп_

№ п/п Источник биоматериала ПЦР МГ вв

Исследовано проб/ выявлено положительных % выявления Исследовано проб/ выявлено положительных % выявления Исследовано проб/ выявлено положительных % выявления

1 2 3 4 Все Абортплоды Телята Коровы Быки го проб 24/6 116/32 65/21 2 91/69 496/128 25 27.6 32,3 23.7 25.8 13/3 58/21 29/10 189/24 289/58 23.1 36.2 34,5 12,7 20,1 8/3 57/17 75/8 189/24 329/52 37,5 29,8 10,7 12.7 15.8

Таким образом, эффективность ПЦР определяется ее высокой специфичностью, чувствительностью и способностью выявлять ДНК вируса в короткие сроки. Время анализа 100 проб биологического материала от животных, больных и инфицированных вирусом ИРТ КРС, составляет около 24 часов с момента их поступления в лабораторию, что по срокам постановки диагноза значительно превосходит вирусологические исследования.

2.2.8. Типирование штаммов и изолятов вируса ИРТ КРС при помощи ПЦР-ПДРФ-анализа

Основой мероприятий по борьбе с ИРТ КРС является специфическая профилактика в сочетании с комплексом ветеринарно-хозяйственных мероприятий. В нашей стране широкое применение нашли моно- и ассоциированные вакцины на основе аттенуированного штамма ТК-А (Н.Н. Крюков и соавт., 1972).

Учитывая большой объем вакцинации животных, для повышения эффективности противоэпизоотических мероприятий актуальным является разработка методов, позволяющих быстро и эффективно дифференцировать полевые и вакцинные штаммы вируса ИРТ КРС.

Ранее провели сравнение нуклеотидных последовательностей фрагментов геномов BHV-1 штамма ТК-А и штамма Cooper (Н.В. Тикунова и соавт., 2001). На участке амплифицированного фрагмента В1-В2 были проанализированы нуклеотидные замены, характерные для штамма ТК-А и отличающие его от референтного штамма Cooper. На основании этих данных были выбраны рестриктазы так, что при замене одного нуклеотида на другой сайт узнавания фермента либо появлялся, либо, наоборот, исчезал. Это дало возможность проводить ПДРФ-типирование штаммов и изолятов по набору рестрикционных фрагментов на дорожках геля при электрофорезе.

Типирование штаммов и изолятов вируса дало следующие результаты: при расщеплении рестриктазами Fok I и Нра II все они были одинаковыми — дали фрагменты одинаковой длины.

При анализе другими ферментами штаммы и изоляты вируса разделились на три группы. Штаммы Оренбург и 4016 расщеплялись всеми рестриктазами— Нра I, Tru 9.1, Bgl I и Sac II, в этом они схожи со штаммом Cooper. Штаммы М40 (Венгрия) и ТК не имели сайтов рестрикции Нра I и Tru 9.1.

При расщеплении ферментами обнаружилось отсутствие сайтов рестрикции Нра I, Tru 9.1, Bgl I и Sac II у штамма ТК-А.

Таким образом, все штаммы и изоляты вируса ИРТ КРС при помощи ПЦР-ПДРФ анализа были разделены на следующие группы:

1. «Соорег-подобные» (Оренбург, 4016)— гидролизуются эндонук-леазами Hpal, SacII;

2. «ТК-подобные» (ТК, М40) — рестриктируются только эндонук-деазой SacII;

3. «ТК-А-подобные» (ТК-А)— не подвергаются рестрикции ферментами Hpal, SacII.

Результаты типирования показали, что пять штаммов (М-29, 4016, Л, С11, Щапово) и 8 изолятов (Иван, Ярославль, KAM, Я99, ПВ, У, С15 и СГ) похожи на штамм Оренбург, т.е. гидролизуются рестрикгазами Нра I, Tru 9.1, Bgl I и Sac II и могут быть отнесены к первой группе («Cooper- подобные»).

Штаммы М-40, ТНЛ, ТНЛ-2, С012, а так же изоляты: ВВ, Б, СОЮ были отнесены ко второй группе: «ТК-подобные».

У изолятов С2, П, МТ, ЛК, СП, М, ПВМ, КМ, MC, С4 как и у ТК-А, отсутствуют эти сайты рестрикции, что дает основание отнести их к третьей группе «ТК-А-подобных» штаммов и они, видимо, имеют вакцинную природу.

Резюмируя полученные данные, можно сделать вывод, что при проведении ПДРФ-анализа с помощью эндонуклеазы рестрикции SacII у вакцинного штамма ТК-А отсутствовал сайт узнавания, но эпизоотические штаммы рестриктировались этим ферментом. При проведении электрофореза трек с вакцинным штаммом после рестрикции содержал одну полосу ДНК размером 464 н.п., а эпизоотические — 2 или 3 полосы, нижние из которых соответствовали размеру 343 и 121 н.п. (рис 2).

1 2 3 4 5 6 7 8

Рисунок 2 - ПДРФ-анализ изолятов ВНУ-1 при помощи эндонуклеазы БасН 1:— маркер молекулярного веса (МэрГ, гидролизат плазмиды риС19); 2 — штамм «ТК-А»; 3 — штамм «ТК»; 4 — изолят «Д»; 5 — изолят «П»; 6 — изолят «СП»; 7 — изолят «С 11»; 8 — штамм «Оренбург»

При гидролизе эндонуклеазой Нра1 штаммы ТК и ТК-А не имели сайтов рестрикции, а для штамма Оренбург были получены 2 полосы, которые соответствовали размеру 254 и 210 н.п. (рис. 3).

Что касается остальных: штамма А и изолятов (Кь Кг, Д, И], И2>СБ, СК, СЗ, С1, С7), то для них характерно наличие полос, свойственных штаммам первой и третьей групп одновременно. Можно предположить, что в данном случае среди животных отмечается совместная циркуляция вакцинного штамма и полевых изолятов. . ..... ,

1 2 3 4 5 6 7 S

Рисунок 3 - ПДРФ-анализ изолятов BHV-1 при помощи эндонуклеазы Hpal

1 — маркер молекулярного веса (Mspl, гидролизат плазмиды pUC19);

2 — штамм «ТК-А»; 3 — штамм «ТК»; 4 — изолят «Д»; 5 — изолят «П»;

6 — изолят «СП»; 7 — изолят «С11»; 8 — штамм «Оренбург»

Корреляции между источником выделения и принадлежностью изолятов к той или иной группе не отмечалось. Так, штаммы первой группы Cooper, Оренбург и 4016 являются респираторными, а изоляты У, С15 и СГ были выделены из мозга абортплода и спермы. Изолят ПВ и штамм JI были выделены от телят при вспышках респираторного заболевания.

Изоляты С2, П и JIK («ТК-А-подобные») выделены от коров при ге-нитальной форме болезни, СП, МС и С4 из спермы быка. Изоляты ПВМ и КМ были выделены из мозга абортированного плода и теленка. Изолят МТ — из трахеи больного теленка, в анамнезе которого была иммунизация живой вакциной, а изолят М — из конъюнктивы теленка.

Остальные изоляты, имеющие «смешанный» рестрикционный профиль, выделены из различных источников. Штамм А и изоляты Ki( Д, И2 — от телят с респираторной формой болезни, К2, У, Hi — из вагинальных выделений коров, СБ, СК, СЗ, CI, С7— из спермы быков-производителей.

2.2.9. Сравнительная патогенность штаммов

и изолятов вируса ИРТКРС для естественно восприимчивых животных в зависимости от генотипа

Сведения о географическом распространении генетических вариантов вируса ИРТ и их патогенности для естественно восприимчивых животных в России крайне ограничены.

По данным И.А. Морозова и соавт. (1991) на территории России встречаются все генетические варианты вируса, а аттенуированный вакцинный штамм ТК-А по рестрикционному профилю относится к подтипу 1.3 (BHV-5), что отличает его от большинства исследованных патогенных штаммов.

Целью настоящей работы являлось сравнительное изучение патогенности 12 штаммов и изолятов вируса, выделенных в бывшем СССР и России в различные годы (1969-2003) и относящихся по данным ПЦР-

ПДРФ-анализа к различным генетическим группам, для естественно восприимчивых животных.

Характеристика штаммов и изолятов вируса ИРТ КРС, использованных в экспериментах, приведена в таблице 4.

Результаты показали, что два сибирских изолята П и М не вызывали каких-либо клинических проявлений заболевания, за исключением кратковременного, в течение 4-х дней, незначительного подъема температуры тела до 40-40,3°С.

Инфицирование изолятом Д вызвало повышение температуры тела до 42°С на 4-й день после заражения, развитие острого катарального ринита, сопровождавшегося чиханием, и конъюнктивита. Телята выздоровели на 11-й день после инфицирования.

Экспериментальное заражение штаммами ТК, Щапово, ТЫЛ, Л, С11 приводило к повышению температуры тела через 2-3 дня после заражения в среднем до 41,5-42,3°С. Продолжительность лихорадочного периода составляла 5-10 дней, температурная кривая имела один пик, за исключением животных, инфицированных штаммом Л. Параллельно наблюдали снижение аппетита, угнетение, слезотечение, гиперсаливацию, гиперемию носового зеркала, а затем серозно-катаральный конъюнктивит, ринит, чихание, кашель, образование эрозий на слизистой оболочке носовой полости, исхудание, у части животных бронхопневмонию.

Выздоровление наступало через 11-14 дней после заражения. В случае бронхопневмонии остаточные явления сохранялись более продолжительное время.

Таблица 4 — Характеристика штаммов и изолятов вируса ИРТ, выделенных от животных на территории России в различные годы и использованных для экспериментального заражения телят _ -_

№ п/п Штамм (изолят) Клиническая форма болезни Место выделения, область Год выделения Генотип по ПЦР-ПДРФ-анализу Вирулентность

1 ТК Респираторная Тамбовская 1969 2 Высокая

2 ТК-А - Искусственно 1972 3 Авирулент-

атгенуирован ный

3 ТНЛ Респираторная Тамбовская 1970 2 Высокая

4 ТНЛ-2 Респираторная Тамбовская 1972 2 Средняя

5 Щапов Респираторная Московская 1984 1 Высокая

6 о Л Респираторная Новосибирская 2002 1 Высокая

7 СП Латентная* Тюменская 2003 1 Высокая

8 С012 Латентная1" Омская 2003 2 Средняя

9 П Генитальная Новосибирская 2002 3 Авирулент-

ный

10 д Респираторная Алтай 2001 1+3 Низкая

11 м Конъюнкти- Новосибирская 2002 3 Авирулент-

вальная ный

12 Саратов Генитальная Саратовская 1978 3 Средняя

(С2)

♦Выделены из спермы

У телят, инфицированных штаммом Л, клинические признаки усиливались на 7-10 дни, появлялось затрудненное с хрипами дыхание, сухой кашель, в носовых полостях — значительное скопление слизистого экссудата. При патологоанатомическом вскрытии трупа вынужденно убитого теленка обнаружили некротический ринит, увеличение и отечность регионарных лимфатических узлов (заглоточных, бронхиальных, легочных), гиперемию надгортанного хряща, гиперемию и отечность слизистой оболочки трахеи и значительное скопление в ней серозно-слизистого экссудата и фибрина, очаги некроза размером до 1-2 см2. В легких регистрировали признаки острой катаральной бронхопневмонии (гепатизация верхних долей). Оставшиеся телята, инфицированные этим штаммом, выздоровели на 18 день после заражения.

На вскрытии теленка, зараженного штаммом С11, отмечали некротические изменения на слизистой оболочке носа, в трахее - пенистый экссудат, при этом ее слизистая оболочка, а также надгортанный хрящ, оставались без изменений. Регионарные лимфатические узлы были увеличены в размере, на разрезе сочные. В легких выявили участки ателектазов, эмфиземы и гепатизацию верхушечных долей.

Штамм «Саратов», выделенный из назального экссудата при вспышке вульвовагинита в сочетании с респираторными симптомами у телочек в возрасте 3—4 месяца, как и вакцинный штамм ТК-А, относился к 3 группе. При инфицировании этим штаммом у телят развивалась респираторная болезнь средней тяжести, сопровождающаяся слезотечением, серозно-катаральным ринитом, угнетением общего состояния, снижением аппетита, повышением температуры тела до 40,5-41,2°С в течение 34 дней. Выздоровление наступало через 8—9 дней после заражения.

После введения штамма СО-12, выделенного из спермы быка-производителя, у всех телят регистрировали аналогичные клинические признаки, однако, он отнесен нами ко второй группе штаммов. Все инфицированные животные выздоровели на 10-12-й день после заражения.

У всех инфицированных животных выявили сероконверсию к вирусу ИРТ через 3 недели после заражения. Однако титры вируснейтрали-зующих антител были значительно выше при введении патогенных штаммов ТК, Щапово, Л, С11 (1:16-1:64) по сравнению со слабо вирулентным Д и авирулентными изолятами П, М, (1:8).

Длительность выделения исходных штаммов и изолятов с носовыми секретами инфицированных телят составляла в среднем 14 дней, независимо от интенсивности проявления клинических признаков. Наивысшие титры реизолированных штаммов и изолятов вируса у инфицированных телят выявляли на 5-7 дни (5,75-6,75 1§ТЦД5о/о.1мл)- Корреляции между титром реизолированного вируса и тяжестью проявления клинических признаков не установили. У всех животных титры вируса понижались к 14 дню после заражения (срок наблюдения) до 3-4,25 lgTim5o/o,i мл- Из проб легких вынужденно убитых телят, зараженных штаммами С11 и Л, выделили слабопатогенную культуру Salmonella dublin.

У контрольных животных отклонений клинических показателей от нормы не отмечали.

Результаты показали, что большинство тестированных отечественных штаммов и изолятов вируса ИРТ обладали патогенностью для экспериментально инфицированных животных. Несмотря на то, что они выделены от крупного рогатого скота с различными клиническими синдромами или из спермы латентно инфицированных быков-производителей, вызывали респираторную болезнь у подопытных телят при ин-траназальном введении.

Таким образом, в популяции крупного рогатого скота в России циркулируют штаммы с различной вирулентностью, которые по степени тяжести экспериментальной болезни разделили на четыре группы: высоко вирулентные: ТК, Щапово, THJl, JI, С11; со средней вирулентностью: THJI-2, Саратов, С012; с низкой вирулентностью (Д) и авирулент-ные (М, П), предположительно, вакцинные. Изолят Д, возможно, содержит одновременно вирионы вакцинного (ТК-А) и полевого штаммов.

2.2.10. Патогенность изолятов вируса ВД-БС КРС для естественно восприимчивых животных в зависимости от их интерферон индуцирующей активности

Целью исследований было изучение интерферон индуцирующей активности цитопатогенных изолятов вируса in vitro и у экспериментально инфицированных телят и выявление взаимосвязи этих показателей с патогенностью.

Результаты изучения интерферон индуцирующих свойств вируса ВД-БС КРС представлены в таблице 5.

Из данных таблицы 5 видно, что штамм ТМ индуцировал выработку интерферона в лейкоцитах КРС на более высоком уровне в течение всего срока наблюдения (21,3±4,35-85,3±17,4 ед/мл), чем изоляты И и ИС (5,33±1,1-16,7±4,35 ед/мл). Титры сывороточного интерферона у телят до и в 1-й день после заражения штаммом ТМ оставались на низком уровне, а со 2 дня повышались до максимального значения (213±34,8 ед/мл)

Таблица 5 — Интерферон индуцирующие свойства вируса ВД-БС КРС

Индуктор ИФН Титры интерферона (ед/мл)

В лейкоцитах КРС, час В сыворотке крови инфицированных телят, дни

24 48 72 1 2 5-6 10

Штамм ВК-1 Штамм ТМ Изолят И Изолят ИС 26,7±4,35 85,3±17,4 21,3±4,35 18,7±5,76 21,3±4,35 26,7±4,35 10,7±2,18 16,7±4,35 10,7±2,18 21,3±4,35 5,33±1,1 13,3±2,17 1,33±0,8 1,33±0,8 1,33±0,8 Не зар 4±1,08 3,33±1,09 2±0,09 ажали 213±34,8 53,3±8,1 42,7±8,7 10,7±2,2 2,7±2,17 2,7±2,17

на 5-6 день после заражения и к 10 дню понизились до 10,7±2,17 ед/мл. Титры ИФН в сыворотке крови телят, экспериментально инфицированных изолятами И и ИС, в 1-й день после заражения были на низком уровне. Со 2 по 5-6 дни титр их повысился до 42,7±8,7-53,3±8,7, а на 10 составил 2,7±2,17 ед/мл.

Все инфицированные животные заболели на 2-3 сутки после экспериментального заражения, однако такие животные клинически различались. Во всех случаях динамика колебаний титров ИФН совпадала с динамикой проявления клинических признаков.

У телят, зараженных штаммом ТМ, они были более яркими и проявлялись в виде угнетения общего состояния, повышения температуры тела до 42°С, серозных выделений из носа, катарального конъюнктивита, слезотечения, выделения вязкой слюны из ротовой полости, чихания и кашля. На 7 день после введения суспензии вируса у телят отмечали усиление выделений из носа. Одновременно с повышением температуры тела у животных регистрировали лейкопению со снижением количества лейкоцитов до 2880-3800 кл/мм3, увеличение количества лимфоцитов, снижение нейтрофилов и эозинофилов. У одного теленка регистрировали признаки кратковременной диареи (на 5-6 дни после инфицирования), каловые массы темно-коричневого цвета со зловонным запахом. Телята выздоровели на 12 день после заражения, но значительно потеряли в массе.

Выделение исходного штамма в культуре клеток было положительным у всех животных на 3 день после заражения. Наивысшие титры вируса у телят, инфицированных этим штаммом, выявляли на 6 день (3,75±0,2 1еТЦД5о/о,1мл). Понижение титров выделяемого с носовыми секретами вируса происходило к 9-10 дню и до 15 дня после заражения.

Изоляты И, ИС вызывали у инфицированных телят незначительное угнетение общего состояния, кратковременное повышение температуры тела, чихание и слабый серозный ринит. У них регистрировали лейкопению (3800-4000 кл/мм3), остальные гематологические показатели были сходными с таковыми у телят, инфицированных изолятом ТМ. Исходные изоляты выделяли в течение всего срока опыта (максимальные титры 2,5±0,24 ^ТЦЦ5о/о,1мл на 5-6 сутки). На 14 день опыта вирус от инфицированных телят не выделяли. Срок выздоровления их составил 10 дней, что совпадало со снижением титров сывороточного ИНФ.

У контрольных (неинфицированных) животных сывороточный интерферон выявляли в титрах 1,33±0,54—4± 1,89 ед/мл, клинические показатели были в пределах нормы. Вирусологические исследования там-понных проб были отрицательными.

Таким образом, изоляты вируса ВД-БС КРС проявили интерферон индуцирующую активность in vitro и у экспериментально инфицированных телят, коррелирующую с динамикой и интенсивностью проявления клинических признаков, а также титрами вируса в носовых выделениях. Вирулентность их для серонегативных телят была различной.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что интерферон индуцирующая активность цитопатогенных штаммов вируса ВД-БС может служить косвенным маркером их вирулентности.

Кроме того, эти данные показывают, что в настоящее время на территории Сибири циркулируют вирулентные изоляты вируса ВД-БС КРС, способные вызвать патологию респираторного тракта у молодняка КРС, что говорит о необходимости целенаправленной специфической профилактики болезни.

2.2.11. Смешанная экспериментальная инфекция телят, вызванная вирусами ВД-БС и ИРТ КРС

Учитывая широкое распространение смешанной инфекции, вызванной вирусами ИРТ и ВД-БС КРС, целью исследований было воспроизведение в условиях контролируемого эксперимента респираторной болезни у телят путем введения вирусов, патогенность которых была определена в предварительных опытах.

Схема опыта. Телят, по принципу аналогов, разделили на 2 группы по 3 головы в каждой. Телятам опытной группы первоначально ввели вирус ВД-БС КРС (шт. ТМ, № У-340). Через 5 дней им таким же способом ввели вирус ИРТ КРС (шт. С-11, №У-337). Трем оставшимся животным вводили стерильный физиологический раствор.

Интраназальное введение штамма ТМ на 2—3 сутки вызвало у телят угнетение общего состояния, повышение температуры тела (рис. 4) до 42°С, серозные выделения из носа, катаральный конъюнктивит, слезотечение, выделение вязкой слюны из ротовой полости, чихание и кашель.

На 7 день после введения вируса ВД-БС КРС (на 2 день после введения вируса ИРТ КРС) носовые выделения стали обильнее, а, начиная с 9 по 21 день после заражения, приобрели более густую консистенцию, дыхание животных стало затрудненным с хрипами. Одновременно с повышением температуры тела у животных регистрировали лейкопению до 2900-3750 кл/ммЗ, увеличение лимфоцитов, снижение нейтрофилов и эозинофилов (рис. 5).

Вирус ВД-БС КРС (рис. 6) выделяли из тампонных проб с 3 по 8 дни после заражения. Вирус ИРТ КРС выделяли в течение 19 дней с момента его введения, т. е. начиная с 5 дня по 24 день с момента введения вируса ВД-БС. Наивысшие титры вируса ВД-БС у телят достигали на 6 день (3,75 ^ТЦД5о/о,1 мл) после введения, а начиная с 9 дня, вирус из проб носовых выделений не реизолировали. Титры вируса ИРТ КРС достигали максимальных значений на 5 и 6 дни (6,25-6,75 ^ТЦД50/0,1 мл) после инокуляции опытным животным и понижались к 14 дню после заражения (срок наблюдения) до 3,25 ^ТЦЦ5о/о,1 мл-

При патологоанатомическом вскрытии трупа вынужденно убитого теленка установили некротический ринит и трахеит, увеличение регионарных лимфоузлов, скопление пенистого экссудата в трахее, участки эмфиземы и ателектазов в верхних долях легких. Срок выздоровления оставшихся телят затянулся до 21 дня, у них отмечали значительное снижение массы тела.

т—i—i—i—i—1—i—i—I—i—i—1—1—I—1—i—|—I—I—I—1—1—I—1—1

•контр, гр.

Рисунок 4 — Температурная кривая у телят опытной (инфицированы вирусами ВД-БС и ИРТ КРС) и контрольной группы

8000

я р

я о и: 1s 0J

ч о

X §

-т-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-i-1-1-1-1-;-1-г

1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25

Дни опыта

Рисунок 5 - Количество лейкоцитов у телят опытной (инфицированы вирусами ВД-БС и ИРТ КРС) и контрольной группы

Дни опыта

Рисунок 6 - Длительность выделения вирусов с носовыми секретами у телят опытной группы, инфицированных вирусами ВД-БС и ИРТ КРС

Оба вируса реизолировали из проб верхних и нижних отделов респираторного тракта, однако, длительность выделения вируса ИРТ на фоне, вызванном размножением вируса ВД-БС, была более продолжительной и составила 25 дней со дня его введения экспериментальным животным. Вирусологические исследования тампонных проб от контрольных животных, которым вводили только физиологический раствор, были отрицательными.

Следует отметить, что клинические признаки и патологоанатомиче-ские изменения во внутренних органах убитых с диагностической целью телят были практически идентичными признакам, которые встречаются при спонтанных вспышках массовых респираторных заболеваний молодняка КРС.

2.2.12. Противовирусная активность препаратов различных классов в опытах in vitro в отношении вирусов ИРТ и ВД-БС КРС

Ни один из испытанных препаратов не обладал вирулицидным эффектом в отношении исследованных вирусов при инкубации в течение 30 и 60 мин. В отношении вируса ИРТ КРС наибольшую активность проявили препараты с уже известным антигерпетическим действием: бромуридин, ацикловир, рибавирин и изатизон. Концентрации вируса после культивирования в присутствии этих препаратов были достоверно ниже, чем в контроле (в>100000 раз). Несколько меньшим противовирусным действием обладали рибавирин липосомированный, госсипол, анандин, полипренол, фос-пренил, подавлявшие репродукцию вируса на 3-4 lg ТЦД50/МЛ. В присутствии эраконда, арговита, экстракта углекислотного сосны сибирской и гуми-тона накопление вируса было на 2 lg ТЦД5о/о,1мл ниже, чем в контроле. Низкую противовирусную активность показали препараты экзогенного интерферона, снижая инфекционную активность вируса ИРТ в культуре клеток менее чем на 2 lg ТЦД5о/о,1мл- Инкубация вируса ИРТ с водной фракцией углекислотного экстракта пихты сибирской, 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолоном, ридостином, циклофероном, комплексом А и культурами Bacillus subtilis ТНП-3 и ТНП-5 не привела к статистически достоверному подавлению его репродукции (Р>0,05).

В отношении вируса ВД-БС КРС получили следующие результаты: статистически достоверное снижение титра вируса происходило при его инкубации с экзогенным интерфероном, рибавирином (в двух вариантах), 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолоном, экстрактом углекислот-ным пихты сибирской, ридостином и комплексом А (Р<0,05).

Фоспренил снижал титр вируса на 2,67 ^ТЦД50/0,1мл (Р<0,05). Однако инкубация вируса с полипренолом не привела к статистически достоверному подавлению его репродукции (Р>0,05). Остальные препараты оказались не эффективными в отношении вируса ВД-БС КРС.

Исходя из того, что спектр эффективных препаратов в отношении вируса ВД-БС КРС оказался достаточно узким, в дальнейшем изучили противовирусную активность рибавирина (как наиболее эффективного)

отдельно и в сочетании с интерфероном-a (реафероном), а также их си-нергическое взаимодействие в зависимости от использованных доз.

В результате проведенных исследований выявили синергизм между рибавирином и реафероном в отношении вируса ВД-БС КРС. Совместное применение препаратов уже при малых дозах (реаферон— ЗхЮ1— Зх103ед/мл, рибавирин — 5-250 мкг/мл) приводило к увеличению их противовирусной активности (рибавирина в 1,1-1,7; реаферона в 1,1-1,4 раза по сравнению с моно вариантами). Так, одновременное использование рибавирина и реаферона в концентрациях 250 мкг/мл ЗхЮ3 ед/мл, соответственно, приводило к максимальному снижению инфекционной активности вируса ВД-БС КРС на 3,67^ТЦД5о/о,1 мл- Однако, с повышением доз препаратов (реаферон до 3х 104 ед/мл, рибавирин — 500 мкг/мл) регистрировали явление антагонизма.

Полученные нами результаты могут послужить основой для выбора наиболее эффективных противовирусных препаратов при изучении их действия на животных с целью терапии моно и смешанных вирусных заболеваний КРС и включения их в перспективе в общую схему проти-воэпизоотических мероприятий.

2.2.13. Лечебно-профилактическая эффективность препарата

1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон в опытах на животных с использованием экспериментального заражения вирусами ИРТ

и ВД-БС КРС

В исследованиях «in vitro» установили, что препарат 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон в дозе 50 мкг/мл оказался нетоксичным для культуры клеток. Внесение его в культуру клеток за 24 часа до заражения вирусом ВД-БС КРС приводило к статистически достоверному снижению его титра (до 2 и более lg ТЦД50/о,1мл)- В отношении вируса ИРТ КРС препарат показал слабую активность.

Для определения профилактической эффективности препарата in vivo в опыте использовали шесть клинически здоровых серонегативных к вирусам ИРТ и ВД-БС телят 4-6-месячного возраста, которым задавали его в экспериментально подобранной дозе с кормом двукратно в течение 5 дней до заражения. Опытные телята были разделены на 2 группы по принципу аналогов по 3 животных в каждой. Животных опытных групп по истечении срока скармливания препарата, раздельно подвергли заражению, вирусами ИРТ (шт. С11) и ВД-БС КРС (шт. ТМ). Контрольным группам животных вводили культуральную жидкость.

Показателями профилактического действия препарата являлось снижение остроты проявления клинических признаков, инфекционной активности и длительности выделения вирусов с носовыми секретами телят после экспериментального заражения.

В результате у телят опытной группы, получавших препарат и экспериментально инфицированных вирусом ВД-БС, отмечали кратковре-

менное повышение температуры тела, незначительное угнетение общего состояния, слабый серозный ринит и чихание.

После интраназального введения штамма ТМ вируса ВД-БС КРС у контрольных животных на 2-3 сутки отмечали угнетение общего состояния, повышение температуры тела до 42°С, серозные выделения из носа, катаральный конъюнктивит, слезотечение, выделения вязкой слюны из ротовой полости, чихание и кашель. Температурные кривые инфицированных телят приведены на рис. 7.

Исходный вирус реизолировали от всех животных на 2 день после заражения (рис. 8). Наивысшие титры вируса у телят контрольной группы выявляли на 6 день (3,25±0,121§ТЦД5о/о,1 мл), а снижение его активности в носовых секретах телят происходило к 10 дню (0,6±0,071§ТЦД50/о,1 мл)-

■1-фенил-2,3-метил-4-

л и

иодпиразолон и шт.ТМ

"шт. ТМ

11 13 15

Дни опыта

Рисунок 7 - Температурная кривая у телят, получавших 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон после контрольного заражения вирусом ВД-БС КРС (штамм ТМ)

з —

г ?>

1 -фенил-2,3-диметил-4 Иодпиразолон и шт. ТМ шт.ТМ

8 9 10 11 12 13 14 15

Дни опыта

Рисунок 8 — Длительность выделения вируса с носовыми секретами телят, получавших 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон после контрольного заражения вирусом ВД-БС КРС (штамм ТМ)

Титры вируса ВД-БС КРС у телят опытной группы на 5-6 день после инфицирования составляли 1,5±0,24 - 1,75±0,12 ^ТЦД5о/о,1мл- К 8 дню они понижались до 0,75±0,121gTLUJ5o/o,i мл (Р <0,05).

Таким образом, у животных опытной и инфицированной вирусом ВД-БС КРС групп наблюдали снижение остроты проявления клинических признаков заболевания, инфекционной активности вируса на 6 день на l,51gTLm50/o,i мл и сокращение длительности его выделения с носовыми секретами на 2 дня по сравнению с контрольной группой.

У телят, инфицированных вирусом ИРТ, отмечали кратковременное повышение температуры тела, максимальные значения которой составили 40,5°С 6-7 день, незначительное угнетение общего состояния, чихание и слабый серозный ринит.

У животных контрольной группы после интраназального введения штамма СИ вируса ИРТ КРС на 2-3 сутки наблюдали угнетение общего состояния, повышение температуры тела до 42,5°С, серозные выделения из носа, катаральный конъюнктивит, слезотечение, чихание и кашель. Максимальный подъем температуры тела был на 9 день после заражения (42°С). Температурные кривые приведены на рис. 9.

43 42 41

I 40

I 39 38 37

1 3 5 7 9 11 13 15

Дни опыта

Рисунок 9 - Температурная кривая у телят, получавших 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон после контрольного заражения вирусом ИРТ КРС (штамм С11)

Исходный вирус выделяли от всех животных на 2 день после заражения. Наивысшие титры вируса у телят контрольной группы выявляли на 5 день (6,67±0,131gTL^50/o,i мл)- Снижение титра вируса в носовых секретах телят происходило к 15 дню до 2,5±0,071gTLm,50/o,i мл-

Титр вируса у телят опытной группы на 3 день составил 0,25±0,11 ^ТЦД5о/о.1мл, максимальные титры вируса ИРТ КРС достигали 2,75±0,12 ^ТЦД5о/о,1мл на 7 день после инфицирования. К 10 дню после заражения у животных отмечалось снижение титров выделяемого вируса до 1,25±0,121ёТЦД50/о,, МЛ(Р <0,05).

■шт. С11 вируса ИРТ КРС

" 1 -фенил-2,3-диметил-4 йодпиразолон и шт. СП

У животных этой группы интенсивность проявления клинических признаков и инфекционная активность вируса снижались на 10 день (3,51§ТЦЦ50/0,1 мл), а длительности выделения вируса с носовыми секретами была короче на 1 день в сравнении с аналогичными показателями у животных контрольной группы.

Таким образом, в опытах на экспериментально зараженных телятах препарат 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон обладал профилактическим действием в отношении обоих вирусов, снижая остроту проявления клинических признаков, титры вирусов и длительность их выделения с носовыми секретами, что обусловлено, очевидно, его высокой интерферон индуцирующей активностью (рис. 11).

Лечебную эффективность 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолона проверяли на 12 телятах 4-6-месячного возраста, разделенных на две опытные и две контрольные группы. Животных 1 опытной и контрольной групп экспериментально инфицировали штаммом С-11 вируса ИРТ, а 2 опытной и контрольной групп — штаммом ТМ вируса ВД-БС КРС.

Н а. S

>ч

о.

о н

X «

5 X

<L>

<и

ч 3

1-фенил-2,3-диметил-4 йодпиразолон и шт.С11 вируса ИРТ КРС шт. С11 вируса ИРТ КРС

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Дни опыта

Рисунок 10 — Длительность выделения вируса с носовыми секретами телят, получавших 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон после контрольного заражения вирусом ИРТ КРС (штамм С11)

■контроль шт.ТМ

"контроль шт. С11

"контроль 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон

■ 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон, шт.ТМ

■ 1 -фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон , шт.С 11

Дни опыта

Рисунок 11 — Средние титры сывороточного интерферона у телят опытных

и контрольных групп 32

Для определения лечебной эффективности препарат выпаивали с молоком в экспериментально подобранной дозе, двукратно, в течение 5 дней телятам опытных групп через 3 дня после заражения, в разгар развития клинических признаков заболеваний.

В результате проведенных исследований у животных опытных и контрольных групп клиническая картина, длительность выделения и титры вирусов в носовых секретах не различались, что позволило сделать заключение об отсутствии лечебной эффективности препарата 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон в использованной дозе и схеме применения у телят, экспериментально инфицированных вирусами ИРТ и ВД-БС КРС.

3. ВЫВОДЫ

1. Модифицированный способ постановки реакции нейтрализации микрометодом для серологической диагностики ВД-БС КРС исключил контаминацию ее компонентов благодаря замене первично трипсинизи-рованной культуры клеток перевиваемой, а сыворотки крови крупного рогатого скота — лошадиной. Время исследования 100 проб сыворотки крови составило 3 дня, что в 2 раза короче ив 1,9 раза дешевле, чем при постановке реакции стандартным методом. Частота выявления величин титров 1:2—1:16 в модифицированном тесте на 5,8%, а 1:32-1:256— на 5,5% выше, чем в стандартном.

2. Инфицированность животных в племенных и товарных хозяйствах Сибири вирусом ИРТ КРС составляла 61,3—76,4%, а вирусом ВД-БС — 64,8-85,6%. Совместное течение этих болезней отмечали в 79% обследованных хозяйств. Титры вируснейтрализующих антител к вирусам ИРТ и ВД-БС КРС повышались у животных с возрастом и в зависимости от величины и концентрации поголовья в хозяйстве. Разница между титрами антител у животных в хозяйствах с высокой и низкой концентрацией статистически достоверна (Р<0,05).

3. Выделение вируса ИРТ КРС в культуре клеток и обнаружение его методом молекулярной гибридизации и ПЦР составляло не более 30—40% у телят при острых вспышках респираторных болезней с установлением сероконверсии в аналогичных пределах. Выделение вируса ВД-БС КРС в культуре клеток— 8% с установлением сероконверсии в 20-30%, а его выявление при помощи иммуноферментного анализа — 11,7%.

4. В органах и тканях больных телят выявляли ассоциации вирусов: вирус ИРТ и ВД-БС КРС (71,7%), вирус ИРТ и ПГ-3 КРС (60%), трех вирусов— 38,7%. Сочетание вирусов ИРТ и ВД-БС регистрировали в легких (37,8%), трахеальной и бронхиальной слизи (16,5), слизистой носа (10,2) и трахее (9,82%).

5. Диагностическая ПЦР с праймерами к области гена 1СР18.5 гли-копротеина В вируса ИРТ КРС обладала высокой чувствительностью (10-100 ТЦД5о/о,1 мл вируса) и специфичностью, достоверно выявляла ДНК всех исследованных штаммов и изолятов вируса.

6. Отсутствие или наличие сайта рестрикции для ферментов Hpal и SacII при использовании праймеров к области гена ICP18.5 гликопро-теина В, обнаруженное при ПЦР-ПДРФ-анализе исследованных штаммов и изолятов вируса ИРТ КРС, установило наличие четырех генетических групп: 1. «Соорег-подобные» (респираторные); 2. «ТК-подобные» (генитальные); 3. «ТК-А-подобные»— (вакцинный); 4. Смешанные, имеющие рестрикционный профиль первой и третьей генетических групп. Не установлена корреляция между источником выделения и принадлежностью изолятов к той или иной группе.

7. ДНК вакцинного штамма «ТК-А», в отличие от эпизоотических, не содержала сайт узнавания фермента SacII. Электрофорез продуктов рестрикции ДНК вакцинного штамма показал одну полосу размером 464 п.н., а эпизоотических штаммов и изолятов 2 или 3 полосы, нижние из которых соответствовали 343 и 121 п.н.

8. Большинство тестированных отечественных штаммов и изолятов вируса ИРТ КРС были патогенными для экспериментально инфицированных животных, вызывая у них респираторную болезнь при интрана-зальном введении, но проявляли различную вирулентность. По степени тяжести экспериментальной болезни они классифицированы на: высоко вирулентные, со средней вирулентностью, с низкой вирулентностью и авирулентные, имеющие вакцинную природу.

9. Штаммы и изоляты вируса ВД-БС, выделенные в Сибири, имели характерные для рода Pestivirus семейства Flaviviridae культурально-морфологические и антигенные свойства, относились к первому биотипу (цитопатогенные) и обладали патогенностью для серонегативных к вирусу телят 4-6-месячного возраста. Вирулентность их была различной и коррелировала с интерферон индуцирующей активностью in vitro и у экспериментально инфицированных телят, а также с динамикой и интенсивностью проявления клинических признаков и титрами вируса в пробах носовых выделений.

10. Экспериментальное заражение серонегативных телят последовательно вирусом ВД-БС и ИРТ КРС приводило к развитию у них признаков острой респираторной болезни. Выделение вируса ВД-БС КРС из проб слизистой оболочки носовой полости, трахеи, бронхиальных лимфатических узлов, бронхов и легких доказало его способность реплицироваться в этих органах и вызывать их поражения совместно с вирусом ИРТ КРС. Более длительное присутствие вируса ИРТ КРС в органах респираторного тракта, включая легкие, в высоких концентрациях, свидетельствовало об усилении его патогенных свойств на фоне размножения вируса ВД-БС КРС.

11. Подтверждена противовирусная активность препаратов с известной антигерпетической активностью (бромуридин, ацикловир, рибавирин и изатизон) в отношении вируса ИРТ КРС, приводивших к достоверному снижению его концентрации по сравнению с контролем (в >100000 раз). Рибавирин липосомированный, госсипол, анандин, полипренол, фоспре-

нил подавляли репродукцию вируса на 3-4 lg ТЦЩо/мл, а эраконд, арговит, экстракт углекислотный сосны сибирской и гумитон на 2 lgTIJZ^o/o 1мл (Р<0,05).

12. В отношении вируса ВД-БС КРС наибольшую эффективность проявили экзогенный интерферон, рибавирин (в двух вариантах), 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон, экстракт углекислотный пихты сибирской и фос-пренил, ридостин и комплекс А, приводившие к статистически достоверному снижению титров вируса (Р<0,05).

13. Рибавирин и реаферон обладали синергизмом в отношении вируса ВД-БС КРС. Совместное применение препаратов при малых дозах (реаферон— Зх101-Зх103ед/мл, рибавирин— 5-250 мкг/мл) повышало их противовирусную активность (рибавирина в 1,1-1,7; реаферона в 1,1-1,4 раза по сравнению с моно вариантами). Одновременное использование этих препаратов в концентрациях 250 мкг/мл и ЗхЮ3 ед/мл, соответственно, приводило к снижению инфекционной активности вируса на 3,67^ТЦД5о/о,1мл- С повышением доз препаратов (реаферон до 3><104ед/мл, рибавирин — 500 мкг/мл) регистрировали явление антагонизма.

14. Установлена положительная корреляция противовирусного действия 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолона в опытах in vitro и in vivo в отношении вируса ВД-БС КРС. В отношении вируса ИРТ КРС такой корреляции не выявлено. Препарат в использованной дозе и схеме применения обладал профилактическим действием в отношении двух вирусов в опытах на экспериментально зараженных телятах. Скармливание препарата в течение 5 дней до заражения приводило к снижению тяжести клинических признаков, статистически достоверному (Р<0,05) снижению титров вирусов в носовых выделениях и сокращению длительности их экскреции.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Научные разработки и положения диссертационной работы нашли отражение в нормативных документах, внедренных в ветеринарную практику:

— Наставление и технические условия ТУ № 9388-009-00008064-99 на Тест-систему для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации, утвержденные ДВ МСХ и П РФ 15.08.2001, № 13-7-2/1551;

— Временная инструкция и Технические условия на набор для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции, прошедший Государственные комиссионные испытания в испытательном Центре ФГУ «ВГНКИ» в период с 07.06.-07.07.2004;

— Временная инструкция по применению реакции нейтрализации в микроварианте для выявления антител к вирусу вирусной диареи-болезни слизистых, утвержденная директором ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН 19.05. 2005.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние замораживания на биологические свойства клеток/ М-лы науч-но-практ. конф. Молодых ученых 21-22 сентября 1999 г., Обеспечение ветеринарного благополучия животных с учетом технологии производства. Барнаул, 1999. —С. 123-124.

2. Особенности эпизоотического процесса герпесвирусных инфекций домашних животных в современных условиях/ Соавт.: А.Г. Глотов // М-лы научно-практ. межд. конф. «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных». Научное обеспечение ветеринарных проблем: Сб. науч. тр. Троицк, 2000. — С. 97-98.

3. Особенности эпизоотологии ИРТ и ВД-БС КРС в регионе Сибири и Урала/ Соавт.: А.Г. Глотов, О.Г. Петрова, А.В.Нефедченко и др.// Болезни сельскохозяйственных животных вирусной и других этиологий и меры борьбы с ними: Материалы науч.-практ. Конф. (6-7 сентября 2001 г., Иркутск), РАСХН, Сиб. Отд-ние., Иркутск, 2001. — С.21-22.

4. Влияние иммуномодуляторов на течение инфекционного ринотрахеита у латентно инфицированных быков-производителей/ Соавт.: А.Г. Глотов, A.B. Нефедченко, М.Н. Кручинкин// Там же. — С. 27-28.

5. Распространение вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота/ Соавт.: А.Г. Глотов, О.Г. Петрова, A.B. Нефедченко и др.// Ветеринария.-2002. —№3. —С. 17-21.

6. Применение изатизона для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота/ Соавт.: А.Г. Глотов, Т.В. Шапченкова, Ю.Г. Юшков// Научное обеспечение АПК Сибири, Монголии, Казахстана, Беларуси и Башко-рстана: Материала 5-й Междунар. Науч.-практ. конф. (Абакан, 10-12 июля 2002 г.), РАСХН. Сиб. Отд-ние., Новосибирск, 2002. — С. 389-390.

7. Выявление ДНК вируса ИРТ КРС в пробах биоматериала от больных телят при помощи ПЦР/ Соавт.: А.Г. Глотов А.Г., C.B. Котенева, A.B. Нефедченко и др.// Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Международная научно-практич. конфер. Воронежский гос. Университет, Воронеж, 2002. —С. 194-195.

8. Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота: меры профилактики и борьбы в современных условиях/ Соавт.: А.Г. Глотов Биолого-экологические проблемы заразных болезней диких животных и их роль в патологии сельскохозяйственных животных и людей. Материалы Международной научно-практической конференции. ВНИИВВиМ, Покров, 2002. — С. 105-107.

9. Разработка и сравнительная эффективность тест-систем на основе молекулярной гибридизации и полимеразной цепной реакции для выявления вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота/Соавт.: А.Г. Глотов, С.В Котенева., A.B. Нефедченко и др.// Генодиагностика инфекционных заболеваний. Сборник тезисов 4-й Всероссийской научно-практической конференции. Москва, 2002. — С. 327-330.

10. Влияние вакцинации и иммуномодуляторов на течение инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота у быков-производителей /Соавт.: А.Г. Глотов, А.В.Нефедченко, М.Н. Кручинкин // Ветеринария.— 2003.— №. 2.— С. 17-20.

11. Выявление ДНК вируса ИРТ КРС с помощью полимеразной цепной реакции/ Соавт.: А.Г. Глотов, С.В Котенева, М.А. Суслопаров и др.// Ветеринария.-

2003. — №. 5. — С. 21-24.

12. Противовирусная активность препарата арговит (витар) в отношении вируса ИРТ крупного рогатого скота/ Соавт.: А.Г. Глотов, Т.В. Белкина// Аграрная наука Сибири, Монголии, Казахстана и Башкорстана— сельскому хозяйству: Труды 6-й Междунар. Науч.-практ. Конф. (Павлодар, 9-10 июля 2003 г.), РАСХН. Сиб. Отд-ние. — Новосибирск, 2003. —С. 111-113.

13. Использование полимеразной цепной реакции для экспресс-диагностики ИРТ крупного рогатого скота/ Соавт.: А.Г. Глотов, C.B. Котенева// Там же. — С. 113-115.

14. Спектр микроорганизмов, выделенных от коров с гинекологической патологией в стационарно неблагополучных по ИРТ КРС хозяйствах/ Соавт.: А.Г. Глотов, Нефедченко A.B., Котенева C.B. и др.// Материалы 2-й Междунар. Научно-практ. Конф. Ставропольского ГАУ, Ставрополь, 2003. — С. 296-298.

15. Решение о выдаче патента на изобретение, МПК 7 С 12 15/38, С Q 1/68. Способ выявления вируса ИРТ КРС в полимеразной цепной реакции с последующей дифференциацией вакцинного штамма ТК-А от эпизоотических штаммов и изолятов при помощи ПДРФ-анализа/ Соавт.: А.Г. Глотов, Н.В. Некрасова, A.B. Нефедченко; заявитель ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН. —№ 2003136419/13(039413); заявл. 24.12.03.

16. The study of antiviral properties of different preparations in cell culture at pestiviral infections/ A.G Glotov, A.A. Sergeev., A.N. Sergeev // International Multidisciplinary Workshop Scientific Discussion Club "Progress in Biotechnology and neurobiology— integrative medicine", Hurgada, Egypt, Africa, February 14-24,

2004. —C. 53-55.

17. Противовирусная активность различных препаратов in vitro в отношении вирусов инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота/ Соавт.: А.Г. Глотов, A.A. Сергеев, Т.В. Белкина и др. // Вопросы Вирусологии.— 2004.—№5. — С. 43-46.

18. Противовирусная активность препаратов в отношении вируса ИРТ/ Соавт.: А.Г. Глотов, A.A. Сергеев, Т.В. Белкина и др. // Ветеринария. — 2004. — № 12. —С. 16-18.

19. Дифференциация изолятов вируса ИРТ КРС с помощью ПЦР-ПДРФ анализа/ Соавт.: Е.В. Жираковская, С.Ф. Орешкова, А.Г. Глотов и др.// Ветеринария.—2004.—№ 11. —С. 17-21.

20. Противовирусная и интерферониндуцирующая активность Арговита в культуре клеток/ Актуальные вопросы микробиологии и инфекционной патологии животных. Материалы научно-производственной конф., посвященной 100-летию проф. Н.Т. Кондюрина (21-22 сентября 2004): Сб. науч. тр., ИВМ ОМГАУ, Омск , 2004. — С. 374-380.

21. Сравнительное изучение противовирусной активности полипренола и фоспренила/ Соавт. Ю.В. Безрук// Там же. — С. 381-384

22. Распространение вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС) крупного рогатого скота в регионе Сибири/ Соавт. А.Г.Глотов// Актуальные проблемы эпизоотологии на современном этапе: международная научно-производственная конференция (16-19 ноября 2004 г.), Санкт-Петербург, 2004. — С. 25-26.

23. Изучение антивирусных свойств препаратов различного происхождения в отношении герпес— и пестивирусов крупного рогатого скота/ Соавт.: А.Г. Глотов, A.A. Сергеев, А.Н. Сергеев и др.// Антибиотики и химиотерапия, 2004. — № 6. — С. 6-9.

24. Изучение вирулентности изолятов вируса вирусной диареи крупного рогатого скота на естественно восприимчивых животных/ Соавт.: А.Г. Глотов, A.B. Нефедченко, В.А. Гоппе// Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы Сиб. Междунар. Вет. Конгр. Новосиб. Гос. Аграр. Ун-т.- Новосибирск, 2005. —С. 121-122.

25. Распространение вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота в Сибири и ее роль в этиологии респираторных болезней телят/ Соавт.: А.Г.Глотов, В.А. Гоппе// Там же - С. 120-121.

26. Изучение интерферон индуцирующей активности Bacillus subtilis in vitro и in vivo/ Соавт.: Н.П. Тарабукина, А.Г.Глотов, М.П. Неустроев// Там же.- С. 240241.

27. Патогистологические изменения у телят, экспериментально инфицированных вирусом ИРТ КРС, выделенным из спермы быков-производителей / Соавт.: А.Г. Глотов, Д.Д. Гомбоев, В.И. Аксенов и др.// Там же. — С. 122-123.

28. Сравнительное изучение патогенности изолятов вируса ИРТ КРС на естественно восприимчивых животных /Соавт.: А.Г.Глотов, А.Ф. Шу-ляк//Российский ветеринарный журнал. — 2005. — № 1. —С. 6-8

29. Экспериментальная респираторная болезнь телят, вызванная вирусами вирусной диареи, инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и бактериями Salmonella dublin/ Соавт.: А.Г. Глотов, A.B. Нефедченко, Н.В. Некрасова и др. // Сибирский вестник с.-х. науки. — 2005. — № 2. — С. 44-49.

30. Новый способ выявления вируснейтрализующих антител к вирусу вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота/ Соавт.: Е.Б. Никитин, А.Г. Глотов//Вестник Павлодарского университета. — 2005. — № 2. — С. 208-211.

31. Способ оценки токсичности противовирусных препаратов/Соавт.: Е.Б. Никитин, Т.В. Белкина// Там же — С. 211-214.

32. Применение индукторов интерферона при инфекционном ринотрахеите крупного рогатого скота/Соавт.: A.B. Нефедченко//Материалы межд. научно-практ. конф. «Современное состояние и актуальные проблемы развития ветеринарной науки и практики», (15-16 сентября 2005 г.), Алматы. — 2005. — С. 134-136.

33. Типирование штаммов и изолятов вируса ИРТ КРС с помощью ПЦР-ПДРФ анализа/Соавт.: А.Г. Глотов, Н.В. Некрасова/Там же. — С. 131-134.

34. Пат. 2255976 Российская Федерация, МПК7 С 12 N 15/00, А 61 К 39/00. Способ выявления вируснейтрализующих антител при вирусной диарее-болезни слизистых крупного рогатого скота/Соавт. А.Г. Глотов; заявитель и патентообладатель ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН. — № 2003124954/15; заявл. 11.08.03; опубл. 10.07.05, Бюл. № 19.

35. Пат. 2259398 Российская Федерация, МПК7 С 12 N 15/38, С 12 Q 1/68. Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления ДНК вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота с помощью специфических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции (ПЦР)/Соавт.:

А.Г. Глотов, А.Ф. Шуляк; заявитель и патентообладатель ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН. — № 2003136419; заявл. 18.12.03; опубл. 27.08.05, Бюл. № 24.

36. Пат. 2265059 Российская Федерация, МПК7 С 12 Q 1/68, А 61 D 19/02. Способ оценки спермы быков-производителей на контаминацию вирусом инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота/Соавт.: А.Г. Глотов, A.B. Нефед-ченко, C.B. Котенева; заявитель и патентообладатель ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН. — № 2003125159/15 (026590); заявл. 11. 08.03; опубл. 27.11.05, Бюл. № 33.

37. Свойства изолятов вируса вирусной диареи крупного рогатого скота/Соавт.: А.Г. Глотов, В.А. Гоппе//Ветеринария. — 2005. — № 5. — С. 24-27.

38. Активность препаратов в отношении вируса ВД КРС/ Соавт.: А.Г. Глотов, Т.В. Белкина, А. Н. Сергеев и др.// Ветеринария. — 2005. — № 8. — С.26-28.

39. Генотип и вирулентность изолятов вируса ИРТ КРС/Соавт.: А.Г. Глотов, A.B. Нефедченко// Ветеринария. — 2005. — № 11. — С. 20-23.

Подписано в печать 22.12.2005 г. Формат 60x84 Vie-Печ. л. 2,0. Тираж 150 экз. Заказ № 474.

ИПЦ «Юпитер» 630501, Новосибирская область, пос. Краснообск

Оглавление диссертации Глотова, Татьяна Ивановна :: 2006 :: Новосибирск

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Характеристика инфекционного ринотрахеита 17 крупного рогатого скота.

2. Латентная форма инфекционного ринотрахеита 21 крупного рогатого скота, ее влияние на диагностику, специфическую профилактику заболевания и эпизоотологическое значение.

3. Структура и функционирование генома вируса 24 инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

4. Методы молекулярной биологии и их использование в 26 диагностике и молекулярной эпизоотологии инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

4Л. Рестрикционное картирование.

4.2. Исследования по молекулярной эпизоотологии 28 инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.

4.3. Конструирование молекулярных зондов для выявления 30 нуклеотидных последовательностей вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и их применение для диагностики болезни.

4.4. Разработка и применение полимеразной цепной 33 реакции для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого.

4.5. Методы оценки полиморфизма ДНК.

5. Иммунный ответ на инфекцию вирусом инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

6. Экспериментальные инфекции, вызванные вирусом 45 инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

7. Характеристика вирусной диареи-болезни слизистых 50 крупного рогатого скота.

8. Особенности клинического проявления вирусной 52 диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота.

9. Особенности патогенеза вирусной диареи-болезни 54 слизистых крупного рогатого скота.

10. Серологическая диагностика вирусной диареи-болезни 55 слизистых крупного рогатого скота.

11. Экспериментальные инфекции, вызванные вирусом 57 вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота.

12. Иммунология вирусной диареи-болезни слизистых 60 крупного рогатого скота.

12.1. Иммуносупрессивное действие нецитопатогенных и 60 цитопатогенных биотипов вируса вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота.

12.2. Подавление врожденного иммунитета с последующим 61 установлением персистентной инфекции.

13. Роль вирусов инфекционного ринотрахеита и вирусной 65 диареи-болезни слизистых в развитии респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота.

13.1. Влияние вирусов на клетки эпителия респираторных 66 путей.

13.2. Влияние вирусов на иммунные механизмы.

14. Применение противовирусных препаратов при 68 инфекционном ринотрахеите и вирусной диарееболезни слизистых крупного рогатого скота.

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Глотова, Татьяна Ивановна, автореферат

Актуальность проблемы. Среди многообразия вирусных агентов, вызывающих патологию у крупного рогатого скота (КРС), вирусы инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС) занимают особое место в связи с многообразием клинических проявлений и тяжестью течения болезней, вызываемых ими (Н.Н. Крюков и соавт. 1984; К.П. Юров и соавт, 2003; W.D.G. Yates, 1984; D. Deregt et al, 1995; A.L.E. Lindberg, 2003).

Многие исследователи отводят первичную этиологическую роль в возникновении массовых респираторных болезней молодняка КРС этим вирусам, т.к. инфицированные ими животные становятся восприимчивыми к развитию секундарной микрофлоры и осложнению инфекционного процесса (Н.Н. Крюков и соавт, 1984; Е.В. Андреев, 1984; W.D.G. Yates, 1984; L.A. Babiuk et al, 1991; RW. Fulton et al, 2004). Роль вирусов заключается в разрушении клеток эпителия респираторных путей (V.Fainstein et al, 1980), понижении активности бактериостатических механизмов в легких, воздействии на макрофаги и полиморфно-ядерные нейтрофилы, лейкоциты и Т4+-лимфоциты и изменении их функций (G. J. Jakab, 1983; Н. B.Ohmann et al, 1985; L.A. Babiuk et al, 1988; M. T. Winkler, 1999).

ИРТ и ВД-БС КРС регистрируются во многих регионах РФ и странах СНГ и причиняют значительный экономический ущерб мясному и молочному скотоводству (П.А. Красочко, 1991; О.Г. Петрова и соавт, 1999; А.Г. Высокопоясный и соавт, 2000; Н.И. Закутский, 2000; В.А. Мищенко и соавт, 2001; Н.Ю. Басова, 2002; К.П. Юров и соавт, 2003).

Латентная и персистентная формы у этих болезней осложняют проведение профилактических мероприятий, т.к. приводят к неконтролируемому распространению возбудителя во внешней среде, где немаловажную роль играют животные-вирусоносители (Е.А. Андреев, 1984; А.Г. Глотов, 1999; G. Van Shchaik, 1998). Учитывая длительную персистенцию возбудителя на уровне популяции крупного рогатого скота, определение вирулентности изолятов вирусов вызывает большой научно-практический интерес исследователей всего мира (М. Ackermann, 2001).

В настоящее время необходима разработка и внедрение простых, высокочувствительных и специфичных методов, выявляющих возбудителя на любой стадии заболевания, основанных на определении в биоматериале нуклеиновых кислот (молекулярная гибридизация и полимеразная цепная реакция).

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) становится одним из важных диагностических тестов в ветеринарной вирусологии (S.Belak. et al.,1993). Метод имеет явные преимущества в скорости и чувствительности по сравнению с традиционными вирусологическими методиками, а при высокой специфичности его значение для ветеринарной практики возрастает.

В научной литературе есть сообщения о разработке и использовании ПЦР для выявления ДНК вируса ИРТ КРС в сперме быков (M.Wiedmann, 1993; R.S.Kataria,1997; J. Rola et al, 1999), культуральной жидкости (В .Р. Sreenivasa et al., 1996), полевых изолятах (S.Moore et al., 2000).

В качестве мишеней амплификации выбирались гены гликопротеинов (М. Fuchs et al., 1999; С. Ros et al, 1999), тимидинкиназы (S. Moore et al., 2000), использовалась или стратегия гнездовой ПЦР, или ПЦР в комбинации с блот-гибридизацией (F.S. Kibenge et al., 1993; R.S.Kataria, 1997).

С введением в практику ветеринарной вирусологии метода рестрикционного анализа появилась возможность дифференцировать вирус ИРТ КРС (BHV-1) на подтипы (1.1, 1.2 а/в и 1.3), различающиеся по вирулентности (М. Engels et. al., 1981; А. Metzler, et. al., 1985). Впоследствии штаммы BHV-1.3, были реклассифицированы в отдельный тип BHV-5 (В. Roizman et al., 1995). Метод имеет ограниченное диагностическое значение, но успешно используется при эпизоотологических исследованиях. К сожалению, он обладает некоторыми недостатками, главным из которых является необходимость наработки большого количества вирусной ДНК.

Существование геномных вариантов вируса необходимо учитывать при разработке диагностических ПЦР-тест-систем (C.Ros, S.Belak, 1999). Для дифференциации между вариантами различных вирусов широко используются методы оценки полиморфизма ДНК, в частности, ПЦР-ПДРФ анализ (С. Херрингтон и соавт, 1999).

Актуальным в настоящее время представляется изучение возможности использования противовирусных препаратов различных классов для профилактики и лечения больных животных (М.М. Зубаиров, 1998).

Противовирусные препараты с успехом используются при лечении герпесвирусных инфекций человека (И.Ф. Баринский и соавт., 1986, Е. De Clerq, 2001). Данных о применении их для профилактики и терапии ИРТ и, особенно, ВД-БС у крупного рогатого скота недостаточно.

Возбудитель ВД-БС КРС представлен 2 биотипами, цитопатогенным и нецитопатогенным (A.L.E. Lindberg, 2003). Клинические проявления болезни у КРС зависят от биотипа вируса и определяются наличием интерферона (ИФН) 1 типа и его активности. Формирование персистентной формы болезни у плода происходит в период его внутриутробного развития до 150 дней нецитопатогенным вариантом вируса за счет ингибирования синтеза этого белка (М. Schweizer et al., 1999; N. Grandvaux et al., 2002). Цитопатогенные штаммы вируса, напротив, индуцируют выработку интерферона в организме животных в высоких титрах, что, по мнению C.R. Rinaldo et al. (1976) и S.J.Skidmore (1987), является косвенным свидетельством их патогенности.

Для достижения указанной цели были поставлены задачи:

1 .Усовершенствовать методику постановки реакции нейтрализации в культуре клеток микрометодом для ретроспективной серологической диагностики ВД-БС КРС. Изучить распространение ИРТ и ВД-БС КРС в Сибири, установить роль вирусов в этиологии массовых респираторных болезней молодняка КРС и выявить ассоциации вирусов, возникающие при вспышках массовых респираторных болезней;

2. Разработать ПЦР для выявления вируса ИРТ КРС и изучить ее сравнительную диагностическую эффективность, а также способ типирования и дифференциации штаммов и изолятов вируса при помощи ПЦР-ПДРФ-анализа;

Научная новизна.

1. Усовершенствована методика постановки реакции нейтрализации в культуре клеток микрометодом для ретроспективной серологической диагностики ВД-БС КРС. Установлено широкое распространение ИРТ и ВД-БС КРС в Сибири и подтверждена ведущая роль вирусов в возникновении массовых респираторных болезней телят вирусной этиологии в крупных хозяйствах племенного и молочного направления. Установлена взаимосвязь между концентрацией поголовья, серопозитивностью и частотой выделения вирусов от больных животных. Изучены ассоциации вирусов, возникающие при массовых вспышках респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота.

2. Разработана ПЦР для выявления вируса ИРТ КРС и изучена ее сравнительная диагностическая эффективность, а также способ типирования и дифференциации вируса при помощи ПЦР-ПДРФ-анализа. Проведено типирование штаммов и изолятов вируса, разработан способ дифференциации аттенуированного вакцинного штамма ТК-А от полевых штаммов и изолятов вируса.

4. Установлена противовирусная активность препаратов различных классов в отношении вирусов ИРТ и ВД-БС КРС в опытах in vitro. Показана профилактическая эффективность 1-фенил-2,3-диметил-4йодпиразолона в контролируемых опытах на экспериментально зараженных телятах 4-6-месячного возраста.

Теоретическая и практическая значимость работы. Материалы диссертации использованы при составлении:

- Рекомендаций «Вирусные заболевания крупного рогатого скота в Сибири и на Урале (Особенности эпизоотологии, клинического проявления, диагностика, меры профилактики и борьбы)», утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. № 1, 12.01.2001) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. №1, 15.01.2001);

- Методических рекомендаций «Оценка токсичности противовирусных препаратов в культуре клеток», утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. № 2, 05.03.2004) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. №10, 05.03.2004);

- Методических рекомендаций «Выявление вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции с последующей дифференциацией вакцинного штамма и эпизоотических изолятов», утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. № 6, 09.11.2004) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. №11, 10.11.2004);

- Рекомендаций «Вирусные и ассоциативные вирусно-бактериальные респираторные болезни крупного рогатого скота (Особенности эпизоотологии, патогенеза, клинического проявления, патологоанатомических изменений)», утвержденных Ученым советом ГНУ

ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. № 6, 09.11.2004) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. №23, 09.11.2004);

- Методических рекомендаций «Выявление вируснейтрализующих антител к вирусу вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота в реакции нейтрализации микрометодом в культуре клеток», утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. №2, 29.04. 2005) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. №4, 29.04.2005);

Методического пособия «Противовирусное действие интерферонов», утвержденного Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. №2, 03.05. 2005) и подсекцией секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. №4, 03.05.2005);

- Методического пособия «Молекулярные методы диагностики: принципы и практическое применение при инфекционных болезнях животных», утвержденного Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (прот. №2, 03.05. 2005) и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» (прот. №4, 03.05.2005).

Новосибирск, 2003); International Multidisciplinary Workshop Scientific Discussion Club «Progress in Biotechnology and neurobiology - integrative medicine» (Egypt, 2004); Научно-производственной конференции, посвященной 100-летию проф. Н.Т. Кондюрина (Омск, 2004); Международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы эпизоотологии на современном этапе» (Санкт-Петербург, 2004); Сибирском Международном ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005); Международной конференции «Развитие международного сотрудничества в области изучения инфекционных заболеваний (Новосибирск, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации» (Новосибирск, 2005), Международной научно-практической конференции «Проблемы ветеринарной науки и практики в современных условиях» (Алматы, 2005).

Заключение диссертационного исследования на тему "Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея крупного рогатого скота"

выводы

1. Модифицированный способ постановки реакции нейтрализации микрометодом для серологической диагностики ВД-БС КРС исключил контаминацию ее компонентов благодаря замене первично трипсинизированной культуры клеток перевиваемой, а сыворотки крови крупного рогатого скота - лошадиной. Время исследования 100 проб сыворотки крови составило 3 дня, что в 2 раза короче и в 1,9 раза дешевле, чем при постановке реакции стандартным методом. Частота выявления величин титров 1:2-1:16 в модифицированном тесте на 5,8%, а 1:32-1:256 -на 5,5%) выше, чем в стандартном.

2. Инфицированность животных в племенных и товарных хозяйствах Сибири вирусом ИРТ КРС составляла 61,3-76,4%), а вирусом ВД-БС - 64,8-85,6%о. Совместное течение этих болезней отмечали в 79% обследованных хозяйств. Титры вируснейтрализующих антител к вирусам ИРТ и ВД-БС КРС повышались у животных с возрастом и в зависимости от величины и концентрации поголовья в хозяйстве. Разница между титрами антител у животных в хозяйствах с высокой и низкой концентрацией статистически достоверна (Р<0,05).

3. Выделение вируса ИРТ КРС в культуре клеток и обнаружение его методом молекулярной гибридизации и ПЦР составляло не более 30-40% у телят при острых вспышках респираторных болезней с установлением сероконверсии в аналогичных пределах. Выделение вируса ВД-БС КРС в культуре клеток - 8% с установлением сероконверсии в 20-30%, а его выявление при помощи иммуноферментного анализа - 11,7%.

4. В органах и тканях больных телят выявляли ассоциации вирусов: вирус ИРТ и ВД-БС КРС (71,7%), вирус ИРТ и ПГ-3 КРС (60%), трех вирусов - 38,7%). Сочетание вирусов ИРТ и ВД-БС регистрировали в легких (37,8%>), трахеальной и бронхиальной слизи (16,5), слизистой носа (10,2) и трахее (9,82%).

5. Диагностическая ПЦР с праймерами к области гена 1СР18.5 гликопротеина В вируса ИРТ КРС обладала высокой чувствительностью (10-100 ТЦД50/0,1 мл вируса) и специфичностью, достоверно выявляла ДНК всех исследованных штаммов и изолятов вируса.

6. Отсутствие или наличие сайта рестрикции для ферментов Нра1 и 8ас11 при использовании праймеров к области гена 1СР18.5 гликопротеина В, обнаруженное при ПЦР-ПДРФ-анализе исследованных штаммов и изолятов вируса ИРТ КРС, установило наличие четырех генетических групп: 1.«Соорег-подобные» (респираторные); 2.«ТК-подобные» (генитальные); 3.«ТК-А-подобные» - (вакцинный); 4. Смешанные, имеющие рестрикционный профиль первой и третьей генетических групп. Не установлена корреляция между источником выделения и принадлежностью изолятов к той или иной группе.

7. ДНК вакцинного штамма «ТК-А», в отличие от эпизоотических, не содержала сайт узнавания фермента 8ас11. Электрофорез продуктов рестрикции ДНК вакцинного штамма показал одну полосу размером 464 п.н., а эпизоотических штаммов и изолятов 2 или 3 полосы, нижние из которых соответствовали 343 и121п.н.

8. Большинство тестированных отечественных штаммов и изолятов вируса ИРТ КРС были патогенными для экспериментально инфицированных животных, вызывая у них респираторную болезнь при интраназальном введении, но проявляли различную вирулентность. По степени тяжести экспериментальной болезни они классифицированы на: высоко вирулентные, со средней вирулентностью, с низкой вирулентностью и авирулентные, имеющие вакцинную природу.

9. Штаммы и изоляты вируса ВД-БС, выделенные в Сибири, имели характерные для рода Реэ^уп-ш семейства Б1аутпс1ае культурально-морфологические и антигенные свойства, относились к первому биотипу (цитопатогенные) и обладали патогенностью для серонегативных к вирусу телят 4-6-месячного возраста. Вирулентность их была различной и коррелировала с интерферон индуцирующей активностью in vitro и у экспериментально инфицированных телят, а также с динамикой и интенсивностью проявления клинических признаков и титрами вируса в пробах носовых выделений.

12. В отношении вируса ВД-БС КРС наибольшую эффективность проявили экзогенный интерферон, рибавирин (в двух вариантах), 1-фенил-2,3-диметил-4-йодпиразолон, экстракт углекислотный пихты сибирской и фоспренил, ридостин и комплекс А, приводившие к статистически достоверному снижению титров вируса (Р<0,05).

13. Рибавирин и реаферон обладали синергизмом в отношении вируса ВД-БС КРС. Совместное применение препаратов при малых дозах (реаферон - ЗхЮ'-ЗхЮ^д/мл, рибавирин - 5-250 мкг/мл) повышало их противовирусную активность (рибавирина в 1,1-1,7; реаферона в 1,1-1,4 раза по сравнению с моно вариантами). Одновременное использование этих препаратов в концентрациях 250 мкг/мл и 3x103 ед/мл, соответственно, приводило к снижению инфекционной активности вируса на 3,671§ТЦД5о/о,1мл- С повышением доз препаратов (реаферон до Зх104ед/мл, рибавирин - 500 мкг/мл) регистрировали явление антагонизма.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

-Наставление и технические условия ТУ № 9388-009-00008064-99 на Тест-систему для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации, утвержденные ДВ МСХ и ПРФ 15.08.2001, №13-7-2/1551;

-Временная инструкция и Технические условия на набор для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции, прошедший Государственные комиссионные испытания в испытательном Центре ФГУ «ВГНКИ» в период с 07.06.- 07.07.2004;

-Временная инструкция по применению реакции нейтрализации в микроварианте для выявления антител к вирусу вирусной диареи-болезни слизистых, утвержденная директором ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН 19.05. 2005.

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2006 года, Глотова, Татьяна Ивановна

1. Авилов B.C. Условия получения диагностических сывороток к вирусам инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и диареи крупного рогатого скота / B.C. Авилов, E.J1. Салажов, А.И. Лебедев, Н.И. Ма-тюгина// Бюллетень ВИЭВ.-1979.-Вып.37.-С.6-9.

2. Аликин Ю.С. Стимуляторы неспецифической резистентности на основе РНК для ветеринарной медицины: Автореф. дисс. . д-ра биол. наук/Ю.С.Аликин Новосибирск, 1998.

3. Алтухов Ю.П. Генетический мономорфизм видов и его возможное биологическое значение / Ю.П. Алтухов, Ю.Г. Рычков // Журн. общ. биологии. -1972. -Т. 33. -С. 281-300.

4. Алтухов Ю.П. Полиморфизм ДНК в популяционной генетике / Ю.П. Алтухов, Е.А. Салменкова // Генетика. -2002. -Т. 38. -№ 9. -С. 1173-1195.

5. Андреев Е.В. Вирусные инфекции слизистых оболочек крупного рогатого скота/ Е.В.Андреев // Сб. Ветеринария- 1974. №38. -С. 37-38.

6. Андреев E.B. Герпетическая инфекция быков-производителей /Е.В. Андреев, Н.П.Чечеткина, О.В. Дудник// Ветеринария. 1977. - №9. -С. 56-57.

7. Андреев Е.В. Ассоциированное воздействие на организм вируса и условно-патогенных бактерий // Е.В. Андреев/ Ветеринария. 1984. - № 6. - С. 25-27.

8. Ю.Ашмарин И.П. Быстрые методы статистической обработки и планирования экспериментов/ И.П. Ашмарин, H.H. Васильев, В.А. Амбро-сов// JL: Изд-во Ленингр. ун-та.- 1974.- 76 с.

9. П.Баринский И.Ф. Химиотерапия герпетической инфекции /И.Ф. Баринский, Н.Д. Львов, Е.О. Самойлович// Вопросы вирусологии. -1986.-№1,- С.6-18.

10. Баринский И.Ф. Герпес. Этиология, диагностика, лечение / И.Ф. Баринский, Г.К. Шубладзе, A.A. Каспаров, В.Н. Гребенюк. М.: Медицина. - 1986.- 269 с.

11. Басова Н.Ю. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота инфекционной этиологии в условиях Северного Кавказа: Автореф. дисс. докт.вет наук / Н.Ю.Басова Краснодар.-2002.-42 с.

12. Бектемиров А.Т. Гибридизация нуклеиновых кислот как средство быстрой вирусологической диагностики. Отчёт о рабочей консультации ВОЗ, Москва, 23 25 января. - 1985 /А.Т.Бектимиров// Вопросы вирусологии - 1988. -№1. - С. 110-117.

13. Бессарабов Б.Ф. Влияние изатизона на естественную резистентность организма животных /Б.Ф. Бессарабов, А.Н. Миролюбова, J1.B. Лозюк и др.//Ветеринария.-1994.- № 5. С.50-51.

14. Бучнев К.Н. Вирусное заболевание крупного рогатого скота с поражением слизистых оболочек /К.Н. Бучнев// Вестник с-х науки Казахстана,-1967.-№7.-С. 11-15.

15. Велямов М.Т. Противовирусная активность а-интерферонов животных в гетерологичных культурах клеток/М.Т. Велямов, Л.П. Дьяконов// Ветеринарная патология,- 2003.-№1,- С.75-76.

16. Вильнер Л.М. Биологическая активность и структурные особенности полирибонуклеотидных интерфероногенов / Л.М. Вильнер, A.A. Тимковский, Н.С. Тихомирова // Итоги науки и техники. Вирусология.- 1977. №6,-С. 114-159.

17. Вирусология. Методы. /Под ред. Б. Мейхи,- М: «Мир», 1988.

18. Воронин Е.С. Влияние иммуномодуляторов на иммунологический статус телят при экспериментальном ринотрахеите /Е.С. Воронин, Д.А. Девришов, В.Н. Денисенко // Ветеринария. 1991. - № 8. -С. 25-27.

19. Высокопоясный А.И. К этиологии респираторных болезней телят в краснодарском крае /А.И.Высокопоясный, Н.Ю. Басова, А.Г. Шипицын// актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с болезнями животных: Сб. науч. трудов.-1999.- С.54-56.

20. Высокопоясный А.И. Респираторные болезни телят на Кубани /А.И.Высокопоясный, Н.Ю.Басова, А.Г.Шахов, А.Г.Щипицын// Ветеринария 2000.-№2.-С.8-11.

21. Волкова Л.В. Современные лекарственные формы интерферона и их клинические свойства /Л.В. Волков, В.П. Кузнецов// Антибиотики и химиотерапия,- №47, 11.- С.30-37.

22. Гаджиев Б.М. Методы ускоренного выявления вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в культуре клеток почки теленка// Доклады ВАСХНИЛ. 1990. - №7. -С. 59-61.

23. Гаджиев Б.М. Сравнительная оценка методов выявления вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в культуре клеток почки телёнка /Б.М. Гаджиев, Н.К.Стогул, А.Э. Аваков// Доклады ВАСХНИЛ. 1990. - №12. - С. 41-44.

24. Гаджиев Б.М. Ускоренная индикация вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в культуре клеток: Автореф. дисс. .канд.вет.наук / Б.М. Гаджиев Москва.- 1991-24 с.

25. Глик Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. / Б. Глик, Дж. Пастернак. -М.: Мир, 2002. -589 с.

26. Глотов А.Г. Выделение вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в перевиваемой линии культуры клеток МДВК /Профилакт. Болезн. Мол: Сб.науч.Тр.// ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ.-1990.- С.32-34.

27. Глотов А.Г. Диагностика инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации /А.Г.Глотов, С.Ф. Орешкова // Ветеринария. 1996.-№6.-С. 21-24.

28. Глотов А.Г. Диагностика инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации и особенности эпизоотического процесса заболевания в современных условиях //Автореф. дисс. докт.вет наук/ А.Г.Глотов Новосибирск.-1999.-39 с.

29. Головещенко A.A. Применение фоспренила при откорме цыплят-бройлеров /A.A. Головещенко, A.B. Деева, К.А. Головещенко// Ветеринария.- 2002,- №12.- С.14-16.

30. Грибко С.М. Иммуностимуляторы в профилактике и терапии респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота: Автореф. дисс. канд. вет. наук/ С.М. Грибко Воронеж, 1998,- 22 с.

31. Григорьева К.Г. Физиологическая активность полиизопреноидов (обзор патентных данных) /К.Г. Григорьева, A.M. Моисеенко// Химико-фармацевтический журнал.-1989.-Т.23.-№2.-С. 144-155.

32. Григорян С.С. Интерферон индуцирующая активность заключенных в липосомы полинуклеотидов и пути ее повышения /С.С. Григорян, Ф.И. Ершов, A.M. Поверенный A.M. и др.// Вопросы вирусологии,-1987.-№3,- С.352-357.

33. Деева A.B. Применение фоспренила. Структура, биологические свойства, доклинические испытания /A.B. Деева, Р.В. Белоусова, Л.Л.Данилова и др.//Ветеринария. 2004. - №10,- С. 12-13.

34. Деева A.B. Применение фоспренила. Механизмы повышения продуктивности, профилактического и терапевтического действия /Р.В. Белоусова, Л.Л. Данилова и др. // Ветеринария.-2004.- №11.-С.9-11.

35. Деева A.B. Применение фоспренила при вирусных инфекциях телят /A.B. Деева, Т.Н. Ракова, Т.П. Лобова и др.// Ветеринария. 2004,-№6.- С.15-17.

36. Деева A.B. Повышение выхода, сохранности и прироста молодняка при использовании фоспренила и гамавита// Ветеринария.- 2005.-№2.-С.13-15.

37. Дьяконов Л.П. Культивирование клеток и тканей животных/ Л.П. Дьяконов, В.Ф. Глухов, A.A. Поздняков и др.// Учебно-методическое пособие. Ставрополь.-1986.- 96 с.

38. Дьяконов JI.П. Живая клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии)/ М.: Компания Спутник+, 2000.- 400 с.

39. Дужак А.Б. Природные индукторы интерферона: двуспиральная РНК киллерных плазмид Saccharomyces cerevisiae / А.Б. Дужак, А.Н. Костомаха, H.H. Лобова // Антибиотики и медицинская биотехнология.- 1985.- № 1.- С. 19-21.

40. Евстропов А.Н. Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях / А.Н. Евстропов, Е.С. Воробьев, С.К. Благерман и др.// Челябинск.-1984.-С.40.

41. Евстропов А.Н. Антивирусные вещества/ А.Н. Евстропов, В.Е. Яворская, A.C. Саратиков, Т.П. Прищеп//Минск,- 1984.- С. 43-44.

42. Евстропов А.Н. Комбинация ремантадина и 4-йодантипирина для лечения и профилактики экспериментальной гриппозной инфекции /А.Н. Евстропов.

43. B.Е. Яворовская, Г.А. Галегов // Вопросы вирусологии. 1989. - №6.1. C.734-738.

44. Евстропов А.Н. Изучение антивирусной активности нестероидных противовоспалительных средств в культуре клеток//А.Н. Евстропов. В.Е. Яворовская, Г.А. Галегов и др. // Вопросы вирусологии. 1989. - №5. - С.609-612.

45. Ершов Ф.И. Интерферон и его индукторы /Ф.И. Ершов, A.C. Новохатский М, Медицина, 1980.- 176 с.

46. Ершов Ф.И. Природные полифенолы и их производные -противовирусные препараты и индукторы интерферона /Ф.И.Ершов, Г.В. Масагутова, А.Н. Фомина// Ташкент.-1981.-С.99-101.

47. Ершов Ф.И. Микро метод для изучения индукторов интерферона in vitro / Ф.И. Ершов, A.M. Сайиткулов // Вопросы вирусологии. -1984.- №6.-С. 756 757.

48. Ершов Ф.И. Комбинированное использование противовирусных препаратов / Ф.И. Ершов, H.H. Чижов // Вопросы вирусологии.-1984,-№6.-С. 644 656.

49. Ершов Ф.И. Интерфероногенная активность низкомолекулярных соединений растительного происхождения /Ф.И.Ершов, A.M. Сайиткулов, Э.Б. Тазулаханов // Вопросы вирусологии.-1988.-№6.-С.750-752.

50. Ершов Ф.И. Индукторы интерферона (Состояние проблемы) /Ф.И.Ершов, H.H. Носик// Изучение индуктора интерферона -двуспиральной РНК в различных биологических системах.- Рига,-1989.-С.7-16.

51. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии/Ф.И.Ершов. М.: Медицина,-1996.-260 с.

52. Ершов Ф.И. Лекарства против вирусов /Ф.И. Ершов М.: Materia medica. - 1996.-С.5-13.

53. Ершов Ф.И. Интерфероны (к 40-летию открытия) /Ф.И.Ершов// Вопр. вирусологии. 1998. - №5. - С. 247-252.

54. Ершов Ф.И. Антивирусные препараты /Ф.И.Ершов. М.: Медицина.-1998.-192 с.

55. Жидков С.А. Изучение этиологии респираторных заболеваний телят // Тезисы докладов IV Всесоюзной ветеринарной вирусологической конференции. 1976. - №2. - С. 34-40.

56. Зубаиров М.М Противовирусные и антибактериальные свойства абактанов /М.М. Зубаиров, В.М. Котляров, А.Д. Середа и др.// Ветеринария,- 2001.- №4,- С.22-25.

57. Иванова Г.А. Выделение этиологического фактора в культуре ткани ПЭК от крупного рогатого скота с подозрением на инфекционный ринотрахеит и постановка реакции диффузионной преципитации в агаровом геле /Г.А. Иванова, Ю.В. Фомин, Н.В. Сафронская// В. сб.:

58. Вирусные болезни сельскохозяйственных животных. -М, 1970. Ч. 2. -С. 117-118.

59. Иванова И.П. Инфицированность стад крупного рогатого скота в хозяйствах Минской области / И.П. Иванов, П.А. Красочко // Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных: Материалы междунар. конф.- Минск, 2000.- С. 105-106.

60. Калиберов С.А. Экспериментальное изучение возможности экстренной профилактики боливийской геморрагической лихорадки /С.А. Калиберов, Г.М. Игнатьев, Л.А. Перебоева, Е.А. Кашенцева // Вопр. вирусологии.- 1995.- № 5.- С. 211-215.

61. Карпов A.B. Изучение интефероногенных свойств комплексов дрожжевая РНК тилорон в культуре клеток / A.B. Красочко, Н.М. Жолобак// Антибиотики и химиотерапия.-1995.- №5.- С. 20-23.

62. Кашкинбаев К.А. Патоморфология и вопросы патогенеза инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота: Автореф. дисс. . канд. вет. наук/К.А. Кашкинбаев М, 1978.- 23 с.

63. Коннов Н.М. Инфекционный ринотрахеит-баланопостит у откормочных бычков/ Н.М. Коннов Научные труды КВИ. - 1980. -133.-С. 9-12.

64. Коннов Н.М. Кератоконъюнктивит телят, вызванный вирусом ринотрахеита телят /Н.М. Коннов, К.Н. Шарафутдинова, Х.З. Гаффаров и др.// Тезисы докладов Всесоюз. науч. конференция:

65. Разработка, апробация и государственный контроль ветеринарных препаратов». -М, 1982. -С. 82-85.

66. Кондрахин И.П. Клиническая лабораторная диагностика в -ветеринарии: справочное издание/ И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов и др.// М.: Агропромиздат, 1985.- 287 с.

67. Красочко П.А. Активизация поствакцинального иммунитета у телят с помощью препарата альвеозан / П.А. Красочко, В.А. Машеро // Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных: Материалы междунар. конф.- Минск, 2000. С. 120-122.

68. Крюков H.H. Герпесвирусы и их роль в инфекционной патологии //Бюлл. ВИЭВ/ H.H. Крюков 1971. - Вып. 11. - С. 7-10.

69. Крюков H.H. Инфекционный ринотрахеит (пустулёзный вульвовагинит) крупного рогатого скота // Бюлл. ВИЭВ / H.H. Крюков 1972. - Вып.37. - С. 146-149.

70. Крюков H.H. Некоторые итоги изучения вирусных болезней сельскохозяйственных животных// Труды ВИЭВ /H.H. Крюков -1972.-Вып. 40.-С. 27-52.

71. Крюков H.H. Получение модифицированного вируса ИРТ и испытание его иммуногенных свойств/ H.H. Крюков, Н.М. Белкина,

72. A.Л. Семенихин//Бюл. ВИЭВ, 1972,- Вып. 14,- С.5-8.8 8.Крюков H.H. Инфекционный ринотрахеит пустулёзный вульвовагинит крупного рогатого скота // Итоги науки и техники /H.H. Крюков Животноводство и ветеринария,- М., 1980. - С. 32-113.

73. Крюков H.H. Микробный пейзаж и иммунологическая реактивность у телят, выращиваемых в условиях промышленной технологии /H.H. Крюков, А.Т. Семенюта, Э.А. Шегидевич // Труды ВИЭВ. 1984. -60.-С. 15-23.

74. Кузнецов В.П. Человеческие интерфероны: биологические свойства, опыт профилактического и лечебного применения /В.П. Кузнецов// Острые респираторные заболевания у детей.- М., 1986.- 112 с.

75. Кузнецов В.П. Интерфероны как средство иммуномодуляции / В.П. Кузнецов//Иммунология.- 1987.- №4.- С. 30-34.

76. Лярски 3. Диагностика вирусных болезней животных /3. Лярски,-Пер. с пол. Т.Г.Орловой, Я.-С. Ляндесберга; Под ред. и с предисл.

77. B.Н.Сюрина -М.: Колос, 1980.- 400 с.

78. Майборода Ф.Д. Выделение штамма вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота /Ф.Д. Майборода, H.H.

79. Крюков// Вторая Всесоюзная конференция молодых ученых по ветеринарии /Тез. докл. М.Д971.- С.43-45.

80. Майборода Ф.Д. Выделение вируса и клинико-морфологические особенности ИРТ у телят раннего возраста /Ф.Д. Майборода, К.А. Кашкинбаев // Ветеринария. 1977. -№ 3. - С. 54-55.

81. Макаревич В.Г. Чувствительность культур клеток к вирусу диареи крупного рогатого скота /В.Г. Макаревич, В.П. Назаров// Актуальные вопросы вет. вирусологии, изд. MBA.-1967.4.2.-С. 45-49.

82. Маниатис Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук. -М.: Мир, -1984.-112 с.

83. Масычева В.И. Стимулирующее влияние биологически активных веществ эмбриональной ткани птиц семейства куриных на иммунную систему животных (опыты на мышах) / В.И. Масычева,

84. B.В. Хомов, A.A. Сизов // Эпизоотоология, диагностика и меры борьбы с болезнями животных: Сб. науч. тр.- Новосибирск, 1997.1. C. 223-225.

85. Мищенко В.А. Особенности респираторных инфекций телят /В.А. мищенко, A.A. Гусев, О.И. Сухаев и др. / Ветеринария.-2000.-9.-С.-5-6.

86. Молекулярная клиническая диагностика// Методы. Ред. С Херрингтона и Дж. Макги. Изд. Мир, 1999, С.399-401.

87. Морозов И.А. Клонирование ДНК вируса инфекционного ринотрахеита, штамм М29 / И.А. Морозов// Ветеринарная иммунология и биотехнология: Сб. научн. Тр. ВИЭВ.-1988 Ь. -С. 23-25.

88. Морозов И.А. Дифференциация штаммов вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота с помощью рестрикционного анализа/И.А.Морозов, А.Ф. Шуляк, С.К. Артюшин и др.// Мол. генет., микробиол. и вирус. 1991. - №4. - С. 64-67.

89. Морозов И.А. Рестрикционный анализ и молекулярное клонирование ДНК вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота: Автореф. дисс. канд.ветер.наук / И.А.Морозов М. - 1991.-24с.

90. Мощик K.B. Лечение генитального герпеса левамизолом в комбинации с мегасилом / К.В. Мощик, В.Н. Гребенюк, Ф.И. Ершов // Вопр. вирусологии. 1982. - № 5,- С.606-609.

91. Музычин С.И. Эпизоотическая ситуация и профилактика вирусных респираторных заболеваний телят в БССР /С.И. Музычин, H.A. Ковалев, В.А. Марченко// Соврем. Пробл. Профилактики зоонозных болезней и пути их решения,- Минск.- 1987.-С.63-64.

92. Науменков В.И. Вопросы этиологии и динамики эпизоотического процесса при вирусных пневмоэнтеритах телят /В.И. Науменко// Ветеринария. 1994. - №2. - С. 23-24.

93. Новохатский A.C. Определение биосинтетического химиотерапевтического индекса противовирусных препаратов в культуре клеток/А. С. Новохатский, Ф.И. Ершов// Вопросы вирусологии, 1976, №4,- С. 17-24.

94. Ноздрин Г.А. Фармакологическая коррекция иммунодефицитов у телят в постнатальный период жизни: Автореф. дисс. . д-ра биол. наук /Г.А. Ноздрин С.-Пб. 1996.

95. Носик H.H. Влияние ремантадина и рибавирина на продукцию и противовирусное действие человеческих интерферонов 1 и 2 типа/Н.Н. Носик, Р.Д. Аспетов, A.C. Новохатский// Антибиотики.-1982.-Т.45.-№6.-С.21-24.

96. Носик H.H. Свойства двуспиральной РНК как индуктора интерферона /H.H. Носик, Ф.И. Ершов// Вопросы вирусологии.-1984.-№5,- С.599-603.

97. Носик H.H. Интерферониндуцирующая и противовирусная активность дсРНК дрожжевого происхождения /H.H. Носик, Ф.И. Ершов, О.В. Николаева и др. II Вопр. вирусологии,- 1984.- № 6.-С. 718 -720.

98. Орешкова С.Ф. Выявление вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота гибридизацией с нерадиоактивными ДНК-зондами /С.Ф.Орешкова, А.Г. Глотов, В.И. Семенихин и др.// Вопросы вирусологии.- 1995.- №6.- С.279-282.

99. Петрова О.Г. Острые респираторные вирусные инфекции крупного рогатого скота в Свердловской области /О.Г. Петрова, А.Т. Татарчук, Н.Л. Сапожникова и др./ Ветеринария.-2002.-№2.-С.-11-15.

100. Пономаренко Ф.М. Инфекционный катар верхних дыхательных путей крупного рогатого скота /Ф.М. Пономаренко// Советская ветеринария 1940 - №12. - С. 1-4.

101. Пономаренко Ф.М. Инфекционный катар верхних дыхательных путей /Ф.М. Пономаренко// Тр. Киевского ветер, инта.- 1950;-10.-С.19-25.

102. Пшеничнов В.А. Элементы системного подхода при изучении и применении противовирусных препаратов /В. А. Пшеничнов//Вопросы вирусологии.- 1989.-№2.-т.34.-С.129-145.

103. Рожков Ю.И. Генетический полиморфизм животных, его адаптационное значение и использование в селекции / Ю.И. Рожков, С.К. Охапкин// С.-х. биология. -1986. -№1. -С. 14-24.

104. Романцов М.Г. Индукторы интерферона / М.Г. Романцов, Ф.И. Ершов, С.Ю. Голубцев и др. // Иммунология. 1998. - №6. - С. 43-44.

105. Русанова Л.П. Лабораторная диагностика респираторных болезней телят ДНК-зондами /Л.П. Русанова, В.И. Баранов, A.C. Лысухо и др.// Ветеринария. 1992. -№ 3. - С. 24-25.

106. Садыков A.C. Низкомолекулярные индукторы интерферона. Связь структуры и функции /A.C. Садыков, Х.А. Асланов, С.А. Ауелбеков// Ташкент.-1981 .-С.3-25.

107. Санагатуллин Ф.А. Фармакоклиническая характеристика эраконда/Ф.А. Санагатуллин//Ветеринария.- 1995.-№3.-С.38-40.

108. Саратиков A.C. Противовоспалительные средства группы пиразола /A.C. Саратиков, Т.П. Прищеп, В.Е. Яворовская // Томск, 1975,-С.74.

109. Саратиков A.C., Яворовская В.Е. Иодантипирин-новый противовирусный препарат/A.C. Саратиков, В.Е. Яворовская //Химико-фармацефтический журнал, 1997.-№6.-С.55-56.

110. Сергеев А.Н. Эффективность экстренно-профилактического и лечебного действия иммуномодуляторов при экспериментальных филовирусных инфекциях /А.Н.Сергеев, М.Ю. Луб, О.В. Пьянков и др.// Антибиотики и химиотерапия.-1995.-Т.40.-№5.- С.24-27.

111. Сергеев А.Н. Изучение профилактической эффективности аэрозоля полипренола пихты сибирской при экспериментальной гриппозной инфекции /А.Н.Сергеев, A.C. Сафатов, О.В. Пьянков и др.//Вопросы вирусологии.- 2001.- № 6.-С.-24-28.

112. Семенов Б.Ф. Изучение патогенности штаммов вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота для кроликов

113. Б.Ф. Семенов, Д.Р. Каулен, И.Г. Баландин // Вопросы ветеринарной биологии: Сб. науч. трудов.- М.: МВА, 1988. С. 89-91.

114. Сухарев О.И. Особенности проявления инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота /О.И. Сухарев, В.В. Гуненков, В.Н.Сюрин//Вест. с.-х. науки. -М., 1981. 6. - С.110-114.

115. Сухарев О.И. Диссеминация и персистирование вирусов ИРТ, ПГ-3, ВД-БС в организме телят при экспериментальном заражении /О.И. Сухарев, Н.Р. Гладченко // Биол. препараты против инфекц. бол. жив-х.- М., 1981.- С. 87-92.

116. Сюрин В.Н. Диагностика вирусных болезней животных: Справочник /В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В.Фомина- М.: Агропромиздат, 1991.-528 с.

117. Сюрин В.Н. Проблемы патогенности вирусов и молекулярные основы рациональной терапии вирусных инфекций /В.Н. Сюрин// Актуальные проблемы ветеринарной медицины в России: Сб. науч. трудов СО РАСХН,- Новосибирск, 1998. С. 400-407.

118. Тикунова Н.В. структура перекрывающего региона генов ICP 18.5 и гликопротеина В вируса герпеса крупного рогатого скота первого типа (штамм ТК-А)/ Н.В. Тикунова, С.Ф. Орешкова, В.П. Мишин и др.// Вопр. Вирусол. 2001. - №3 - С.42-46.

119. Усов С.М. Иммунологические аспекты терапии и профилактики инфекционного ринотрахеита и вирусной диареикрупного рогатого скота: Автореф. дисс. . канд. вет. наук /С.М. Усов.-Минск, 1998.-21 с.

120. Чекнев С.Б. Активность естественных киллеров и показатели интерферонового статуса у больных рецидивирующим герпесом гениталий при лечении ридостином /С.Б. Чекнев, А.И. Миковская, E.H. Мешкова, A.A. Халдин // Вопр. вирусологии.- 1994.- №3.-С. 125-128.

121. Чижов Н.П. Механизм формирования резистентности вирусов к химиопрепаратам / Н.П. Чижов// Вопросы вирусологии.- 1985.-№3,- С.260-279.

122. Шегидевич Э.А. Природа, этиологическая структура, патогенез, диагностика массовых желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят и меры борьбы с ними /Э.А. Шегидевич, М.М. Гоголев, С.А. Жидков и др.// Труды ВИЭВ.-73.-2003.-С. 15-22.

123. Шульпин М.И. Индикация вируса диареи крупного рогатого скота, генотипирование и филогенетический анализ изолятов, выявленных на территории Российской Федерации /М.И. Шульпин, П.К.Аянот, В.А. Мищенко // Вопросы вирусологии. 2003. - №5. -С. 41-46.

124. Федоров H.A. Полимеразная цепная реакция (ПЦР). -Методическое пособие для начинающих /H.A. Федоров, Ю.С. Суханов, А.Х. Асади Мобархан, М.И. Артемьев. -М, 1996. -33с.

125. Федоров Ю.Н. Иммунокоррекция: применение и механизмдействия иммуномодулирующих препаратов// Ветеринария.-2005.-№ 2.- С.3-6.

126. Фельдмане Г.Я. Индукторы интерферона/ Г.Я. Фельдмане, А.Э. Дук, А.Х. Буйксис и др.//Рига.- 1981.-С.36-42.

127. Фомин Ю.В. Воспроизведение инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в эксперименте /Ю.В. Фомин, И.А. Петрова, Г.А. Иванова, Н.В. Фоменко // Труды MBA. M., 1974. - Вып. 70.-С. 108-109.

128. Юров К.П. Профилактика инфекционных болезней телят / К.П. Юров, А.Ф. Шуляк// Болезни сельскохозяйственных животных вирусной и других этиологий и меры борьбы с ними / Материалы науч.-прак. конф. Иркутск, 2001. - С.9-10.

129. Юров К.П. Распространение инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в различных регионах России /К.П. Юров, А.Ф. Шуляк, О.Г. Петрова, О.В. Майджи// Труды ВИЭВ.-73.-2003.-С. 15-22.

130. Яковлев А.Ф. Развитие методов оценки генотипа сельскохозяйственных животных /А.Ф. Яковлев// Цитогенетика и молекулярная генетика сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. Л.: ВНИИРГЖ, 1987. - С. 5-17.

131. Achour H.A. Serological and virological studies on the infectious bovine rhinotracheitis in Algeria/H.A.Achour, A. Moussa// Zentralbl Vet-erinarmed. 1996.- Vol.43 (№4). - P. 251-256.

132. Adler H. Cytokine regulation by virus infection: Bovine viral diarrhea virus, a flavivirus, downregulates production of tumor necrosis factor alpha in macrophages in vitro/H. Adler, T.W. Jungi, H. Pfister et al.//J Virol.- 1996.-V.70.-P.2650-2653.

133. Adler B. Macrophages infected with cytopathic bovine viral diarrhea virus release a factor(s) capable of priming uninfected macrophages for activation-induced apoptosis/ B. Adler, H. Adler, H. Pfister et al.// J Virol.- 1997.-V.71.-P.3255-3258.

134. Alegre M. Development of a multiplex polymerase chain reaction for the differentiation of bovine herpesvirus 1 and - 5. /M. Alegre, M. Nanni, N. Fondevila // J. Vet. Med. - 2001. - Vol. 48, №8. - P. 613-621.

135. Allan E. M. Scanning electron microscopy of the tracheal epithelium of calves inoculated with bovine herpesvirus 1 /E.M. Allan, P.M. Msolla // Res. Vet. Sci. 1980. - V.29. - P. 325-327.

136. Araki S. Enhancement of resistance to E. coli infection in mice by dihydroheptaprenol, a synthetic polyprenol derivate/S. Araki, K. Kagaya, K. Kitoh et al. //Infect. Immun.-1987.-V.55,№9.-P.2126-2170.

137. Atluru D. In vitro inhibition of 5-lipoxygenase metabolite, leukot-riene B4, in bovine mono-nuclear cells by bovine viral diarrhea virus/D. Atluru, S. Gudapaty, W. Xue et al. // Vet Immunol Immunopathol.-1992.-V.31.-P.49-59.

138. Andino R.N. Detection of bovine herpesvirus-1 nucleic acid sequences, using a dot-blot hybridization procedure/ R.N. Andino, H.N. Torres, P.S. Polacino et al.// Am. J. Vet. Res. 1987,- June.-Vol.48(№6).- P. 984-987.

139. Archetti I. Virus of New castle disease examined by electronic microscope /1. Archetti // J.Exp. Med.- 1950.-92.-P.441.

140. Ashbaugh S.E. Specific detection of shedding and latency of bovine herpesvirus 1 and 5 using a nested polymerase chain reac-tion/S.E.Ashbaugh, K.E.Thompson, E.B. Belknap et al.//J. Vet. Diagn. Invest.-1997.-Vol.9 №(4).-P. 387-394.

141. Ayers V.K. Use of in situ hybridization with a biotinylated probe for the detection of bovine herpesvirus-1 in aborted fetal tissue/V.K. Ayers, J.K. Collins, C.D. Blair, B.J. Beaty // J. Vet. Diagn. Invest. -1989.- Vol.1 (№3).-P. 231-236.

142. Babiuk L.A. Immune control of herpesvirus latency/L.A. Babiuk, B.T. Rouse // Can. J. Microbiol. 1979. - Vol. 25. - P. 267-274.

143. Babiuk L. A. Viral bacterial synergistic interaction in respiratory disease / L.A. Babiuk, M.J Lawman, H.B. Ohmann// Adv. Virus. Res.-1988.-V.35. -P.219.

144. Babiuk L.A. Application of Interferons in the Control / L.A. Babiuk, L.M. Sordillo, M. Campos et al.// Journal of Dairy Science/ -1991. Vol. 74.- N.12.-P.4385-4398.

145. Babiuk L.A. Immunology of bovine herpesvirus 1 infection / L.A. Babiuk, S. Van Drunen Littel-van den Hurlc, S.K. Tikoo // Vet. Microbiol. 1996.-Vol. 53, № 1-2.-P. 31-42.

146. Baginski S. G. Mechanism of action of a pestivirus antiviral compound// Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2000. - Vol. 97. - P. 7981-7986.

147. Barany G. Molecular cloning of DNA from a bovine herpesvirus 1 strain isolated in Hungary/G. Barany, B. Harrach, M.Benko, A. Bartha// Acta Vet. Hung.- 1989.- Vol.37 (№4).- P. 353-360.

148. Baron S. The interferons. Mechanisms of action and clinical applications/S. Baron, S.K.Tyring, W. R. Fleischmann et al.// J. Am. Med. Assoc.- 1991.-Vol. 266.- P. 1375-1383.

149. Barron B.L. Biologia molecular de la pathogenesis por herpesvi-rus/B.L. Barron, N. Vales //Rev. Latinoamer. Microbiol. -1991. Vol. 33 (№1). - P. 77-85.

150. Bartha A. Respiratory disease of cattle/A. Bartha// Bull. Off. Internat. Epizoot.-1977.-Vol. 88.-P. 105-113.

151. Bartha A. KomplexeBekampfungsmabnahmen gegen virusbedingte Erkrankungen der Atmungs und Verdauungsorgane der Rinder in der VR Ungarn/ A. Bartha // Mh. Vet-med. 1977. - Vol.32. - P. 28-32.

152. Beachy E. H. Bacterial adherence: adhesion-receptor interactions mediate the attachment of bacteria to mucosal surfaces /E.H. Beachy // J. Infect. Dis.- 1981. №3. - P. 143-325.

153. Belak S. Bovine Herpesvirus 1: Rapid diagnosis of infection by direct filter hybridization/ S.Belak, T.Linne, G.Magyar et al. // Mol. Cell. Probes. 1988.- 2 (№2).-P.- 147-156.

154. Belknap E.B. Experimental infection of neonatal calves with neurovirulent bovine herpesvirus type 1.3./E.B. Belknap, J.K. Collins, V.K. Ayers // Vet. Pathol. 1994. - May. - Vol.31 (№3). - P. 358-365.

155. Bielefeldt Ohmann H. Viral bacterial pneumonia in calves: Effect of bovine herpesvirus-1 on immunological functions/H. Bielefeldt Ohmann, L.A. Babiuk // J. Infect. Dis.-1985.- V.151.-P. 937-947.

156. Bielefeldt Ohmann H. Cytokine synergy with viral cytopathic effects and bacterial products during the pathogenesis of respiratory tract infection/ H. Bielefeldt Ohmann, L.A. Babiuk, R. Harland II Clin. Immunol. Immunopathol.-1991.- V.60.- P.151-153.

157. Biron C.A. Interferons a and (3 as immune regulators-A new look/C.A. Biron//Immunity.- 2001.-V.14.-P.661-664.

158. Bitsch V. Infectious bovine rhinotracheitis virus infection in bulls, with special reference to preputial infection /V.Bitsch// Appl. Microbiol. -1973.-Vol. 26,- P. 337-343.

159. Bitsch V. Persistence of infection with infectious bovine rhinotracheitis virus in Danish cattle herds / V.Bitsch // Nord. Veter. Med. 1978. - Vol.30 (№4/5).- P. 178-185.

160. Blecha F. Immunomodulation: Ameans of disease prevention in stressed livestock / F. Blecha II J. Anim. Sc. 1988. - № 8,- P.2084-2090.

161. Bochner B.S. Interleukin-1 production by human lung tissue. I. Identification and characterization/B.S. Bochner, S.D. Landy, M. Plant et al. // J. Immunol.-1987.-V.139.-P.2297-2302.

162. Bolin S.R. Control of bovine viral diarrhea infection by use of vaccination /S.R.Bolin// Vet Clin. North. Am Food. Anim. Pract.- 1995. -№11.-P. 615-625.

163. Bolin S.R. The pathogenesis of mucosal disease / S.R. Bolin // Vet Clin NAmer-Food Anim Pract.- 1995.-V. 1.-P.489-500.

164. Brock K.V. Rapid fluorescence detection of in situ hybridization with biotinylated bovine herpesvirus- 1 DNA probes /K.V.Brock, L.N. Potgieter//J. Vet. Diagn. Invest. 1989. - Vol.1 (№1). - P. 34-38.

165. Broes A. Syndrome hémorragique chez des bovines infectés par le virus de la diarrhée virale bovine (BVD/MD) / A. Broes, G. Wellemans, J. Dheedene // Ann Med Vet.- 1992.-V.137.-P. 33-38.

166. Brown G. A. Experimental reactivation of bovine herpesvirus 1 by means of corticosteroids in an intranasal rabbit model /G.A.Brown, H.J. Field//Arch. Virol. 1990.- Vol.1 - P. 81-101.

167. Brownlie J. Experimental infection of cattle in early pregnancy with a cytopathic strain of bovine virus diarrhoea virus / J. Brownlie, M. C. Clarke, C.J. Howard // Researchin Veterinary Science. 1989. -№46. - P. 307-311.

168. Brunner D. A comparison of three Techniques for detecting Bovine Herpesvirus type 1 (BHV-1) in naturally and experimentally contaminated bovine semen /D. Brunner, M. Engels, M. Schwyzer, R. Wyler// Zuchthyg 1988.- 23.-P.1-9.

169. Bruschke C.J.M. Distribution of bovine virus diarrhoea virus in tissues and white blood cells of cattle during acute infection /C.J.M. Bruschke, K. Weerdmeester, J.T.Van Oirschot, P.A.Van Rijn //Vet Mi-crob.- 1998.-V.64.-P.23-32.

170. Bryson D. Respiratory disease of cattle in England /D. Bryson // Veter.Rec.- 1978. Vol.103 (№22).-P. 485-489.

171. Campos M. Cytokine applications in infectious diseases. In: eds. B. Goddeeris and I. Morrisons, Cell-Mediated Immunity in Ruminants. CRC Press / M. Campos, D.L. Godson, H.P.A. Hughes, L.A. Babiuk // Boca Raton.-1992.-P. 229-240.

172. Candido A. Polymerase chain reaction amplification of genomic fragments of bovine herpesvirus 1 / A. Candido, E. Bontempo, M. Resende // Met. Inst. Oswaldo Crus. - 2000. - Mar.-Apr. Vol. 95, №2.-P. 225-226.

173. Carman S. Severe acute bovine viral diarrhea in Ontario, 1993— 1995 / S. Carman, T. van Dreumel, J. Ridpath et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1998. - №10. - P. 27-35.

174. Castrucci G. Comparative studies of strains of infectious bovine rhinotracheitis virus isolated from latently infected calves/G. Castrucci, F. Frigeri, S. Ranucci et al. // Comp. Immunol. Microbiol. And Infect. Diseases.- 1984. -7 (№1). -P.-1-10.

175. Castrucci G. The use of immunomodulators in the control of infectious bovine rhinotracheitis / G. Castrucci, B.I. Osburn, F. Frigeri et al. // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 2000. - Vol.23, № 3. -P.163-173.

176. Childs T. X. Disease in cattle Saskatchewan // Can. J. Comp. Med. -1946. -№10.-P. 316-319.

177. Corapi W.V. Thrombocytopenia and hemorrhages in veal calves infected with bovine viral diarrhea virus / W.V. Corapi, R.D. Elliott, T.W. French et al. II J. Am. Vet. Med. Assoc. 1990. - Vol.196. - P. 590 -596.

178. Coria M.F. Specific immune tolerance in an apparently healthy bull persistently infected with bovine viral diarrhea virus / M.F. Coria, A.W McClurkin // J. Am. Vet. Med. Assoc.- 1978. -.Vol. 172. P. 449-451.

179. Cummins J.M. Effect of gidrocortisone on the interferon response of calves infectious bovine rhino tracheitis virus /J.M. Cummins, B. Rosemquist//Ann. J. Veter. Res.- 1979. Vol. 38, № 8. - P. 1663-1665.

180. Curtis R. A. Infectious bovine rhinotracheitis clinical, pathological, and virological aspects / R.A. Curtis, A.A. Van Dreumel, J. Ditchfield II Can. Vet. J. - 1966. - V.7. - P. 161-168.

181. Dahme E. IBR IPV Infektionen des ZNS// Tierarztl. Umsch. -1984. - Vol.39 (№5). - P. 375-376.

182. David G.P. Severe disease in adult dairy cattle in three UK dairy herds associated with BVD virus infection / G.P. David, T.R. Crawshaw, R.F. Gunning et al. // Vet. Ree.- 1994. Vol.134. - P. 468-472.

183. Davison V. C. Adherence of Staphylococcus aureus to influenza virus-infected MDBK cells / V.C. Davison, B. A. Sanford // Infect Immun.- 1981.-Vol. 32. -P. 11-18.

184. De Clercq E. Molecular Targets for Antiviral Agents//Pharmacology And Experimental Therapeutics. 2001.- Vol. 297.-P.1-10.

185. Del Barrio G. Evaluation of the antiviral activity of an aqueous extract from Phyllanthus orbicularis /G. Del Barrio, F.Parra //J. Ethnophar-macol.- 2000,- V. 72 (1-2).- P.317-322.

186. Delhon G. Identification of DNA sequences in the latency related promoter of bovine herpesvirus 1 which are bound by neuronal specific factors /G. Delhon, C. Jones// Virus Res. 1997. -V.51 (№1). -P. 93-103.

187. Deptula W. Nieswoistai swoista odpornosc komorkowa u buhajow zakazonich naturalnie wirusem IBR/IPV (Bovid herpes virus 1) // Med. Vet. - 1992. - Vol.48, №6. - P. 276-279.

188. Deregt D. A short Incubation Serum Neutralization Test for Bovine Viral Diarrhea Virus /D. Deregt, S. Smithson, G. Kozub // Can. J. Vet. Res.- 1992.-Vol. 56.-161-164.

189. Deregt D. Bovine viral diarrhea vims: biotypes and disease /D. Deregt, K.G. Loewen// Can. Vet. J. 1995. - Vol. 36 (6). - P. 71-78.

190. Deregt D. Antigenic and molecular characterisation of a herpesvirus isolated from a North American elk / D. Degert, L.T. Jordan, S. Van-Drunen Littel-Van Den Hurk, S.A. Marsi // J. Vet. Res. 2000. - Vol. 61, №12.-P. 1614-1618.

191. Dialo A. Veterinärmedizin und Molecularbiologie: Moglikheiten und Grenzen der Virusdetektion// Schweiz. Arch. Tierheikl. 1991. -Vol.133, № 1,- P. 48 -59.

192. Dorman M.A. Detection of Bovid herpesvirus 1 DNA immobilized on nitrocellulose by hybridization with biotinylated DNA probes / M.A. Dorman, C.D. Blair, J.K. Collins, B.I. Beaty //J. Of Clinical Microb.-1985.-Vol. 22 -P.990-995.

193. Dunn D. C. Detection of bovine herpesvirus specific nucleic acids by in situ hybridization with biotinylated DNA probes/D.C. Dunn, C.D. Blair, D.C.Ward, B.I. Beaty// Am. J. Vet. Res. - 1986. -Vol. 47 (№4). -P. 740 -746.

194. Edwards S. The diagnosis of bovine virus diarrhoea-mucosal disease in cattle//Rev. sei. tech. Off. int. Epiz.- 1990,- Vol. 9,- P. 115-130.

195. Engels M. Comparison of the genomes of Infectious Bovine Herpesvirus and Infectious Bovine Vulvovaginitis virus strains by restriction endonuclease analysis /M.Engels, F. Steck, R. Wyler//Archives of Virology 1981.- 67.- P.- 169-174.

196. Engels M. The genome of caprine herpesvirus 1: genome structure and relatedness to bovine herpesvirus 1/M.Engels, E. Loepfe, P.Wild et al.// J. Gen. Virol. 1987. - Vol.68(№7). - P. 2019-2023.

197. Engels M. Pathogenesis of ruminant herpesvirus infections /M.Engels, M. Ackermann // Veterinary Microbiology. 1996. - 53. -P.-3-15.

198. Escuret V. Study of the antiviral mechanism of action of ribavirin in the bovine viral diarrhea virus model /V.Escuret, P. Parvaz, 0. Hantz et al. //Gastroenterologie Clinique & Biologique English.- 2002.-V. 26.-P.584-590.

199. Eskra L. Bovine herpesvirus 1 infects activated CD4+ lymphocytes / L. Eskra, G.A. Splitter // J. Gen. Virol. - 1997. - Vol. 78, № 9. -P. 2159- 2166.

200. Espinasse J. Reflexions et commentaires sur le role des virus dans les maladies respiratoires des bovins, a travers un sondage serologique effectue dans le cheptel marocain / J. Espinasse // Rec. Med. Veter. 1978. -Vol.154 (№12).-P. 1009-1013.

201. Fainstein V. Bacterial adherence to pharyngeal cells during viral infection / V. Fainstein, D.M. Musher, T.R. Cate // J. Infect. Dis. 1980. -V.141. - P.172-176.

202. Farley J.E. Inverted repeat sequences in infectious bovine rhinotra-cheitis virus DNA /J.E. Farley, LB. Skare, J. Skare// Internat. Conference on Human Herpesviruses. Atlanta, USA. 1980. - P.340-342.

203. Field H.J. The ingibition of bovine herpevirus by methyl 2-pyridyl ketone thiosemicarbazone and its effects on bovine cells /H.J. Field, M.J. Reading// Antiviral Res.-1987. V.7.- P.245-256.

204. Forman A.J. The susceptibility of bovine macrophages to infectious bovine rhinotracheitis virus infection / A.J. Forman, L.A. Babiuk, V. Misra, F. Baldwin // Infect. Immun 1982. - V. 35. - P. 1041- 1047.

205. Forman A.J. The effect of infectious bovine rhinotracheitis virus infection on bovine alveolar macrophages function / A.J. Forman, L.A. Babiuk // Ibid. 1982. -V.35. - P. 1048 -1057.

206. Foulton T. Herpesviridae: Classification et structure en 1991 // Compar. Immunol, Microbiol and Infect Diseases. 1992. - Vol.15, №1. -P. 13-29.

207. Frey H.R. Die IBR/IPV Infektionen und ihre Problematic/ Rinderproduktion. - 1983. - Vol.6. - P. 24-25.

208. Fulton R.W. In vitro interferon production by bovine tissues: induction with infectious bovine rhinotracheitis virus/R.W. Fulton, B.D. Rosen-quist // Am J. Vet Res 1976.- №37(12).-P.1497-1502.

209. Gagov I. Antiviral action of derivatives of 1,3,4-oxadiazine on reproduction of infectious rhinotracheitis virus H. Gagov, A. Toshkov, I. Mikhailov et al.//Acta Microbiol Bulg.- 1984.-V.14.-P.129-132.

210. Georgiades J. A. A new approach to chronic viral disease therapy by cytokines//Arch. Immunol. Ther. Exp.-1993.-Vol. 41.- P. 173-178.

211. Gibson C.D. Immune response of the bovine fetus to several antigens /C.D. Gibson, R. Zemjanis // Am. J. Vet. Res. 1973. - V. 34. -P.1277-1280.

212. Gibbs E.P.J. Bovine Herpesviruses. Part 1. Bovine Herpesvirus 1/ E.P.J. Gibbs, M.M. Rweyemamu //Veterinary Bulletin,Weybridge.-1977,-47.-P.317- 343.

213. Gillespie J.H. Comparison of infectious pustular vulvovaginitis virus with infectious rhinotracheitis virus /J.H. Gillespie, K. McEntee, J.W. Kendrick, W.C. Wagner // Cornell. Vet. 1959. - Vol.49, №3. -P. 288-297.

214. Gillespie J. H. I. In Vitro Protective Effect of Bacteria-Derived Alpha Interferon II against Selected Bovine Viruses/ J.H.Gillespie, D.S. Robson, F.W. Scott, F.E. Shif// Journal of Clinical Microbiology.- 1985.-P. 912-94

215. Gimeno E.J. Immunohistokemikst pavisande av bovint herpesvirus typ 1 i snitt fran nervvavnad /E.J. Gimeno, G. Ibargoyen, K. Belak, H.R. Sanguinetti// Sven. Veterinartidn. 1990. - Vol. 42, №15. - P. 653-655.

216. Gillespie J.H. Comparison of infectious pustular vulvovaginitis virus with infectious rhinotracheitis virus / J.H. Gillespie, K. McEntee, J.W. Kendrick, W.C. Wagner// Cornell. Vet. 1959. - Vol.49, №3. -P. 288-297.

217. Cirelli R. Interferons: An Overview of Their Pharmacology/ R. Ci-relli, K. Heme, S. K. Tyring// Clin. Immunother.- 1996.- N5.- Suppl. 1.-P. 22-30.

218. Givens M.D. Detection of Inhibition of Bovine Viral Diarrhea Virus by Aromatic Cationic Molecules /M.D. Givens, C.C. Dykstra, K.V. Brock et al.// American Society for Microbiology Antimicrob Agents Chemother. -2003. V. 47 (7) - P.2223-2230.

219. Graham D.A. Pestiviral infections in sheep and pigs in Northern Ireland /D.A. Graham, V. Calvert, A. German, S.J. McCul-lough// Veterinary Record. 2001. - Vol.148. - P. 69 -72.

220. Gray E.W. The ultrastructure of cell cultures infected with border disease and bovine virus diarrhoea viruses/ E.W. Gray, P.F. Nettleton // J. Gen. Virol. 1987. - 68.- Vol.9.- P. 2339-2346.

221. Gresser I. Biologic effects of interferons// J. Invest Dermatol.-1990.-№ 95.-P. 66-71.

222. Griebel P.J. Peripheral blood T lymphocyte population dynamics and function following a primary bovine herpesvirus-1 infection /P.J. Griebel, L. Qualtiere, W.C. Davis et al. //Virol. Immunol.- 1988.-V.L-P.286-287.

223. Griebel PJ. Bovine peripheral blood leukocyte population dynamics following treatment with recombinant bovine interferon-alphajl /P.J. Griebel, H. Bielefeldt Ohmann, M. Campos et al. / J. Interferon Res.-1989.-V. 9.-P. 245-257.

224. Griebel P. S. The interaction between herpesvirus type-1 and activated bovine T lymphocytes /P.S. Griebel, H. Bielefeldt Ohmann, M.J.P. Lawman, L. A. Babiuk// J. Gen. Virol.- 1990.-Vol. 71. P. 371-369.

225. Gupta P.K. Restriction enzyme analysis of bovine herpesvirus 1 DNA from an Indian isolate /P.K. Gupta, A. Rai// Biochem. Mol. Biol. Int. - 1993. - Vol. 29 (№5). - P. 889 - 898.

226. Gupta P.K. Cloning of Hindi 11 digested bovine herpesvirus 1 DNA fragments from an Indian respiratory isolate /P.K. Gupta, P. Chaud-huri, B. Sharma et al.// Biochem. Mol. Biol. Int. - 1995 a. - Vol.35(№l). -P. 167-175.

227. Gupta P.K. Cloning of 2.4 kb bovine herpesvirus 1 DNA fragment containing glycoprotein 111 gene into pUC18 plasmid vector/P.K. Gupta, P.Chaudhuri, B. Sharma et al. // Indian J. Exp. Biol. - 1995 b. -Jun. Vol.33 (№6).-P. 459-461.

228. Gupta P.K. Cloning and expression of bovine herpesvirus 1 glycoprotein C /P.K. Gupta, M. Saini, L.K. Gupta et al.// Biochem. Mol. Biol. Int. - 1999. - Vol.47 (№2). - P. 275-282.

229. Hage J.J. Population dynamics of bovine herpesvirus 1 infection in a dairy herd. /J.J.Hage, Y.H. Schukken, H.W. Barkema et al.// Vet. Microbiol. 1996.- Vol. 53(№l-2). - P. 1690 -180.

230. Hamelin C. Differentiation of vaccine and field strains of bovine herpesvirus type 1 by restriction endonuclease analysis /C. Hamelin, C. Jacques, R. Assaf// Nippon Juigalcu Zasshi. 1990. - Vol.52 (№3). -P. 461-467.

231. Hammerschmidt W. Short repeats cause heterogeniti at genomic terminus of bovine herpesvirus 1 /W. Hammerschmidt, H. Ludwig, H.J. Buhk// J. Virol.- 1986. Vol.58. - P. 43-49.

232. Hammerschmidt W. Specifity of cleavage in replicative-form DNA of bovine herpesvirus 1/ W. Hammerschmidt, H. Ludwig, H.J. Buhk// Journal of Virology. 1988.-P. 1355-1363.

233. Hammerschmidt W. Recombination of genomic terminus of bovine herpesvirus type 1 with cellular DNA / W. Hammerschmidt, H. Ludwig, H.J. Buhk // J. Gen. Virol. 1990. - Vol.71 (№9). - P.2043-2051.

234. Heidenreich S. Macrophage activation by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor. Priming for enhanced release of tumor necrosis factor-alpha and prostglandin E2// J. Immunol. 1989. -V.143.-P.1198-1205.

235. Homan E. Futher studies of naturelly occurring latent bovine herpesvirus infection / E. Homan, B. Easterday // Am. J. Vet. Res. 1981. -Vol.42, №10.-P. 1811-1813.

236. Honda E. A comparison of polypeptides and restriction endonuclease sites of BHV-1 isolates and identification of IPV virus in Japan /E.A.

237. Honda, Y. Katsu, K. Okasaki, T. Kumagai// Nippon Juigaku Zasshi.-1989.-Vol.34 (№1). P. 45-51.

238. Horiuchi M. Restriction endonuclease analysis of bovine herpesvirus type 1 isolates from calves encephalitis: comparison with vaccine virus /M. Horiuchi, N.Yamasaki, H. Furuoka et al. // J. Vet. Med. Sci.-1995.-Vol. 57 (№3).-P.577-580.

239. Horzinek M. C. Pestiviruses—taxonomic perspectives// Arch. Virol.- 1991,- Vol. 3,- P. 1-5.

240. Howard C.J. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies to bovine viral diarrhoea virus (BVDV) in cattle sera /C.J. Howard, M.C. Clarke, J. Brownlie// Vet. Microbiol.- 1985.-Vol. 10.-P.359-369.

241. Jakab G. J. Viral and bacterial interactions in respiratory tract infections: a review of the mechanisms of virus induced suppression of pulmonary antibacterial defenses /G.J. Jakab// Texas. Press. 1983. - P. 13.

242. Jensen J. Effect of infection by bovine viral diarrhea virus (BVDV) in vitro on interleukin-1 activity of bovine monocytes /J. Jensen, R.D. Schultz// Vet Immunol Immunopathol.- 1991.-V.29.-P.251-265.

243. Jericho K. W. Pneumonia in calves produced with aerosols of bovine herpesvirus-1 and Pasteurella haemolytica / K.W. Jericho, E.V. Langford // Can. J. Comp. Med. 1978. - №42. - P. 269-277.

244. Jericho K.W. Pneumonia in calves produced with aerosols of Pasteurella multocida alone and in combination with bovine herpesvirus 1 / K.W. Jericho, G.R. Garter // Ibid. 1985. - Vol. 49, №2. - P. 138-144.

245. Jericho K.W. Bovineherpesvirus 1 and Pasteurella haemolitica: aerobiology in experimentally infected calves /K.W. Jericho, A. Lejeune, G.B.Tiffin//Am. J. Of Vet. Res. - 1986. - Vol.47 (№2). - P. 205-210.

246. Jericho K.W. Experimental infectious respiratory disease in groups of calves: lobar distribution, variance, and sample-size requirements for vaccine evaluation / K.W. Jericho, G.C. Kozub // Can. J. Vet. Res. -2004.-Vol.68, №2.-P. 118-127.

247. Jubb K.V.P. Pathology of Domestic Animals. 1st ed, vol 2. New York: Academic Pr.- 1963. -P. 12-21.

248. Johnson D.W. Immunologic abnormalities in calves with chronic bovine viral diarrhea /D.W. Johnson, C.C. Muscoplat// Am J Vet Res.-1973. -34,- P. 1139-1141.

249. Iida J. Prophylactic activity of dihydroheptaprenol, a synthetic polyprenol derivative, against Sendai virus infection in mice /J. Iida, C. Ishihara, N. Mizukoshi et al.// Vaccine. 1990. - Vol. 8, N 4. -P. 376-380.

250. Kaaden O.R. Persistierende virusinfectionen mechanismen und konsequenzen// Biol. Tiermed. - 1992. - Vol.9, №4. - P. 135-136.

251. Kataria R.S. Detection of bovine herpesvirus 1 (BHV-1) genomic sequences in bovine semen inoculated with BHV-1 by polymerase chain reaction /R.S. Kataria, A.K. Tiwari, P.K. Gupta et al. // Acta Virol. -1997,- Vol.41 (№6).-P. 311-315.

252. Kelling C.L. Comparative virulence of isolates of bovine viral virus type II in experimentally inoculated six- to nine-month-old calves/C.L. Kelling, D.J. Steffen, C.L. Topliff et al.// Am. J. veter. Res.- 2002,-Vol.63,№10.-P. 1379-1384.

253. Kendrick J.W. Infectious pustular vulvovaginitis of cattle /J.W. Kendrick// Cornell. Vet. 1958. - Vol.48, №3. - P. 458 -495.

254. Kenichi U. Tanpakushitsu kakusan koso /U. Kenichi // Protein. Nucl. Acid and Enzime. 1992. - Vol.37, № 4. - P. 2374-2378.

255. Kennedy T.R. Restriction endonuclease patterns of bovine herpesvirus type 1 isolated from bovine mammary glands /T.R. Kennedy, J.F. Evermann, W.P. Cheevers// Am. J. Vet. Res. 1986. - Vol.47 (№12). -P. 2525-2529.

256. Ketelsen A.T. Depression of bovine monocyte chemotactic responses by bovine viral diarrhea virus /A.T. Ketelsen, D.W. Johnson, C.C. Muscoplat// Infect Immun.- 1979.- V.25.-P.565-568.

257. Kibenge F.S. Amplification of strains of bovine herpesvirus 1 by use of polymerase chain reaction with primers in the thymidine kinase region /F.S. Kibenge, L.M. Harris, P.K. McKenna et al.// Am. J. Vet. Res. 1994.-Vol.55 (№9).-P. 1206-1212.

258. Kiorpes A. L. Pathophisiologic studies of infectious bovine rhi-notracheitis in the Holstein-Friesian calf /A.L. Kiorpes, C.E. Bisgard, M. Manohar, A. Hernandez// Am. J. Vet. Res. 1978. - V.39. - P. 779-783.

259. Kohler H. Zur Virologie und Pathomorphologie des Mannlichen Genitale Nach Naturlicher und Experimenteller Infektion Mit Dem IBR/IPV Virus /H. Kohler, C. Kubin// Dtch. Tieraztl. Wochenschr. -1972.-Bd. 79.-S. 209-214.

260. Kokles R. Handbuch der Virusifektionen bei Tieren /R. Kokles// -1967. Vol.2(№2). - P.901-960.

261. Kutish G. Characterization of the latency-related transcriptionally active region of the bovine herpesvirus 1 genome /G. Kutish, T. Main-prize, D.Rock//J. Virol. 1990.-Dec. Vol. 64 (№12). -P. 5730-5037.

262. Lamontagne L. In vivo initiation of unstimulated in vitro inter-leukin-1 release by alveolar macrophages iL. Lamontagne, J. Gauldie, A. Stadnyk et al.//Am. Rev. Resp. Dis.-1985.-V. 131.-P. 326-330.

263. Larsson M. Interactions of viruses with dendritic cells, in: Lotze M.T, Thomson A.W. Dendritic cells /M. Larsson, J-F. Fonteneau, A. Lee, N. Bhardwaj// Academic Press Inc., London, San Diego.-2001,-P.505-522.

264. Lee K.M. Propagation of virus diarrhea virus of cattle in tissue culture / K.M. Lee, J.H. Gillespie // Am. J. Vet. Res. 1957. - V. 18. - P. 952.

265. Le Jan C. Les immunostimulants orientant la reponse locae virus 1' J.B.R. vers la production d interferon /C. Le Jan, J. Asso// Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis.- 1980,- № 4.- P. 485-489.

266. Leken T. Ruminant pestivirus infections in animals other than cattle and sheep / T. Leken // Veterinary Clinics of North America. Food Animal Practice. -1995. №11. - P. 597-614.

267. Li Y.Characterization of RNA synthesis and translation of bovine viral diarrhea virus (BVDV) / Y. Li, J. McNally// Virus Genes.- 2001.-V. 23.-P.149-155.

268. Lindberg A.L.E. Bovine viral diarrhea virus infections and its control. A review// Veterinary Quarterly. 2003.- Vol. 5, №1. - P. 1-16.

269. Ludwig H. Infectious bovine rhinotracheitis infectious pustular vulvovaginitis: BHV-1 infection /H. Ludwig, J.P. Gregersen// Rev. Sci. et Techn. Off. Int. Epizoot. - 1986. - Vol.5, №4. - P. 869-878.

270. Ludwig H. Bovine herpesviruses. In the Herpesviruses (Edited by B. Roizman) /H. Ludwig // Plenum Press, New York. 1983. -P.135-214.

271. Loretu K. Virus isolations from cases of infectious bovine pusto-vulvovaginitis and posthitis (IBR-IPV) in cattle in Tanzania /K. Loretu, P. Marinov, I. Genov, H. Bohnen// Bull. Epizoot. Dis. Afr. 1974. - Dec. Vol.22 (№4). - P.303-310.

272. Lotthammer K.H. Epidemiologic studies of the detection of viral infection agents in calf losses in the Weser-Ems region /K.H. Lotthammer, J. Ehlers// Dtsch Tierarztl Wochenschr.- 1990.- Vol.97(10).-P.418-420.

273. Lupton H. W. Clearance and shedding of infectious bovine rhi-notracheitis virus from the nasal mucosa of immune and nonimmune-calves / H.W. Lupton, D.E. Reed// A. J. Vet. Res. 1980. - V.41. - P. 117-119.

274. McClurkin A.W. Production of cattle immunotolerant to bovine viral diarrhea virus /A.W. McClurkin, E.T. Littledike, R.C. Cutlip et al.// Can. J. Comp. Med.- 1984. Vol. 48. - P. 156-161

275. Madin S.H. Isolation of IBR virus /S.H. Madin, C.J. York, D.G. Mc Kercher// Science. 1956. - Vol. 126, №6. - P. 721-722.

276. Magyar G. DNA restriction enzime analysis of a bovine herpesvirus 1 strain isolated from encephalitis in Hungary /G. Magyar, M. Benko, B. Harrach et al.// Acta Vet. Hung. 1989. - Vol.37, № 4. - P. 319-352.

277. Magyar G. Restriction endonuclease analysis of Hungarian bovine herpesvirus isolates from different clinical forms of IBR, IPV and encephalitis /G. Magyar, J. Tanyi, A. Hornyak, A. Bartha// Acta Vet. Hung. 1993.-41 (№1-2). - P.159-170.

278. Mahy B.W.J. Strategies of virus persistence / B.W.J. Mahy// Brit. Vet. Bull. 1985.- Vol.41 (№1).- P. 50-55.

279. Mann G.E. The regulation of interferon-tau production and uterine hormone receptors during early pregnancy /G.E. Mann, G.E. Lamming, R.S. Robinson, D.C. Wathes// J Reprod Fertil Suppl.- 1999.-V. 54.-P.317-328.

280. Markham R.J. Release of immunosuppressive substances from tissue culture cells infected with bovine viral diarrhea virus / R.J. Markham, M.L. Ramnaraine// Am J Vet Res.- 1985.-V.46.-P.879-883.

281. Markson L. M. The reaction of calves to experimental infection with the Oxford strain of infectious bovine rhinotracheitis virus /L.M. Markson, J.H. Darbyshire// Br. Vet. J. 1966. - V.122. - P. 522-529.

282. Masri S.A. Rapid detection of bovine herpesvirus 1 in the semen of infected bulls by a nested polymerase chain reaction assay /S.A. Masri, W. Olson, P.T. Nguyen et al. // Can. J. Vet. Res. -1996. Apr. Vol.60 (№2).-P. 100-107.

283. Mayfield J.E. Cloning and cleavage site mapping of DNA from bovine herpesvirus 1 (Cooper strain) /J.E. Mayfield, P.J. Good, H.J. Vanoort et al.// J. Virol, 1983. Vol.- 10. P. 259-264.

284. Mayr A. Viruskrankheiten der Kalber /A. Mayr// Reports and summaries Rapports et resumes. 11 International congress on diseases of cattle .- (Tel - Aviv, 20-23.10. 1980).- 1980. - P.233-260.

285. Mcintyre R. W. Exsperimental studies of upper respiratory infection of calves / R.W. Mcintyre // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1954. - №125. -P. 473-474.

286. McLain D.S. Cell-specific kinetics and efficiency of herpes simplex virus type 1 entry are determined by two distinct phases of attachment /D.S. McLain, A.O. Fuller//J. Virol.- 1994. -V.198.- P. 690-702.

287. McKercher D.J. Isolation of the infectious bovine rhinotracheitis virus / D.J. McKercher, O.C. Stroub, J.K. Saito, H.M. Wada// Can. J. Comp. Med. 1959. - Vol.23. - P. 2320-2328.

288. Mensik J. Activation of latent infectious bovine rhinotracheitis after experimental infection with parainfluenza virus in young calves /J. Mensik, Z. Pospisil, A. Suchankova et al.// Zentrable. Veterinarmed. 1976. -Bd. 23.-S. 854-864.

289. Mendez E. Infectious bovine viral diarrhea virus (Strain NADL) RNA from stable cDNA clones: a cellular insert determines NS3 production and viral cytopathogenicity / E. Mendez, N. Ruggli, M.S. Collett, C.M. Rice//J Virol.- 1998.-V.72.-P.4737-4745.

290. Metzler A.E. Bovine herpesvirus 1: Molecular and antigenic characteristics of variant viruses isolates from calves with neurological disease /A.E. Metzler, A.A. Shudel, M. Engels// Arcy. Of Virol. 1986. - Vol. 87.-P. 205-217.

291. Metzler A.E. Praevalenz des Bovinen Herpesvirus 4 in der schweizerischen Rinderpopulation und moeglische Kreuzreaktion mit dem Bovinen Herpesvirus 1 / A.E. Metzler, R. Wyler// Schweiz. Arch. Tierheilk. 1986. - 128. - P. 459-467.

292. Meyers G. Molecular characterization of pestiviruses /G. Meyers, HJ. Thiel // Adv Virus Res.- 1996,- Vol. 47.-P.53-118.

293. Milks L.C. The effect of neutrophil migration on epithelial perme-ability/L.C. Milks, G.P. Conyers, E.B. Cramer//! Cell Biol.-1986.-V.103.-P. 2729-2738.

294. Miller'N.J. Infectious necrotic rhinotracheitis of cattle/N.J. Miller// J. Am. Vet. Med. Assoc. 1955. - Vol.126. -P. 463-467.

295. Miller J.M. Experimentally induced infectious bovine rhinotracheitis virus infection during early pregnancy: Effect on the bovine corpus lu-teum and conceptus /J.M. Miller, M.J. Van Der Maaten// Am. J. Vet. Res. 1986. -47, №2. -P. 223-228.

296. Misra V. Ingibition of Bovine Herpesvirus 1 Glycoproteins by the Thymidine Analog (E)-5-(2-Bromovinyl)-2-Deoxyuridine /V. Mistra, R.C. Nelson, A. Babiuk// Antimicrobial Agents and Chemotherapy.-1983.-Vol.23.-P.857-865.

297. Misra V. Analysis of bovine herpes virus type 1 isolates by restriction endonuclease fingerpritting /V. Mistra, L.A. Babiuk, C. Darcel, Q. Le// Arch. Of Virol. 1983. - Vol. 76. - P. 341-354.

298. Moennig V. Infekcionsmedizinisch Herausforderungen/ V. Moen-nig, M. Kramer// Tierarztl. Umsch.-2000.- Jg.55,№8.-P.428-436.

299. Moore S. The detection of bovine herpesvirus 1 in routine diagnostic submissions using PCR. / S. Moore, M. Gunn, D. Walls // Bio-chem. Soc. Trans. - 1995. - Vol. 23, №2. - P.335.

300. Moore S. A rapid and sensitive PCR-based diagnostic assay to detect bovine herpesvirus 1 in routine diagnostic submission / S. Moore,

301. M. Gunn, D. Walls // Vet. Microbiol. 2000. - 31, Vol. 75, №2. -P. 145-153.

302. Moser C. Cytopatho-genic and noncytopathogenic RNA replicons of classical swine fever virus /C. Moser, P. Stettler, J-D Tratschin, M.A. Hofmann// J Virol.- 1999.-V.73.-P.7787-7794.

303. Mosmann T.K. Two types of murine helper T cell clone. I. definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins /T.K. Mosmann, H. Cherwinski, M.W. Bond et al.// J.Immunol.-1986.-V. 136.-P. 2348-2357.

304. Mossman K.L. Activation and inhibition of virus and interferon: the herpesvirus story /K.L. Mosmann // Viral Immunol. 2002. - V.15(l).-P.3-15.

305. Mraz O. The pasteurella carries in farm and laboratory animals / O. Mraz, F. Sisak, P. Jelen// Comp. Immunol. Microbiol. Infect. 1980. -32.-P. 437-445.

306. Msolla P.H. Reactivation and shedding of bovine herpesvirus 1 following Dictiocaulus viviparus infection /P.H. Msolla, E.M. Allan, A.E. Selmon, A.Wiseman // J. Comp. Pathol. 1983. - Vol.93. - P. 271-274.

307. Muscoplat C.C. Surface immunoglobu-lin of circulation lymphocytes in chronic bovine diarrhea: Abnormalities in cell populations and cell function / C.C. Muscoplat, D.W. Johnson, E. Teuscher// Am J Vet Res.- 1973.-V. 34.-P.1101-1123.

308. Mweene A.S. Detection of viral genome in non neutral tissues of cattle experimentally infected with bovine herpesvirus - 1. /A.S. Mweene, K. Okazaki, H. Kida// Japan. J. Vet. Res. - 1996. - Vol. 44, №3. -P. 165-174.

309. Mweene A.S. Development of immuno PCR for diagnosis of bovine herpesvirus - 1 infection /A.S. Mweene, K. Okazaki, E. Ono, Y. Shi

310. Shimizu et al.// J. Clin. Microbiol. 1996. - Mar. Vol. 34, №3. -P. 748 -750.

311. Narita M. Neural changes in recourent infection of infectious bovine rhinotracheitis virus in calves treated with dexamethasone /M. Narita, S. Inui, Y. Mukarami// Am. J. Vet. Res. 1978. - Vol.39, №9. -P. 1399-1403.

312. Neumann R. Biotinylated DNA Probes: Sensitivity and applications / R. Neumann, P. Rudolf, H.J. Eggers// Naturwissensohaften.-1986.-73.-P. 553- 556.

313. Niedobitek G. Detection of viral DNA by in situ hybridization using bromodesoxyuridine-labeled DNA probes /G. Niedobitek, T. Finn T, H.Herbst et al.//Amer. J. Pathol. 1989. - Vol.131, №1. - P. 1-4.

314. Nyaga P. N. Pathogenesis of bovine herpesvirus-1 (BHV-1) infections: interactions of the virus with peripheral bovine bloodcellular components /P.N. Nyaga, D.G. McKercher// Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis.- 1980. -V.2.-P. 587-602.

315. Odeon A.C. Experimental infection of calves with bovine viral diarrhea virus genotype II (NY-93) /A.C. Odeon, C.L. Kelling, D.J. Marshall et al.// Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 1999. -№11. -P. 221-228.

316. OIE Manual, Manual of Standarts// Chapter 2.3.5. 2000.

317. Olafson P. An apparently new transmissible disease of cattle / P. Olafson, A.D. MacCallum, F.H. Fox // Cornell Veterinarian.- 1946.-Vol.36. P. 205-213.

318. Ohmann H. B. Viral bacterial pneumonia in calves: effect of bovine herpesvirus-1 on immumological function / H.B. Ohmann, M.J. Lawman, L.A. Babiuk // J. Infect. Dis. 1985. - Vol. 151. - P. 937.

319. Ohmann B. H. Influence of interferons al and y and of tumor necrosis factor on persistent infection with bovine viral diarrhoea virus in vitro/ B. H. Ohmann, L. A. Babiuk//J. Gen. Virol.-1988.-V. 69.- P.1399-1403.

320. Ohmann H.B. Electron microscopy of bovine virus diarrhoea virus// Rev. Sci. Tech. 1990. - Vol. 9.- №1. - P. 61-73.

321. Omar A.R. The aetiology and pathology of pneumonia in calves //Vet. Bull.-1966. Vol. 36. - P. 259 - 27.

322. Osorio F.A. Comparison of the herpesvirus of cattle by DNA restriction endonuclease analysis and serologic analysis / F.A. Osorio, D.E. Reed, M.J.Van der Maaten, C.A. Metz// Am. J. Vet. Res. 1985. -Vol.10.-P. 2104-2109.

323. Pacciarini M. Detection of bovine herpes virus 1 (BHV-1) semen infection by a dot-blot hybridization assay /M. Pacciarini, A. Agresit, F. Desinome et al.// Br. Vet. J. 1988. - Vol. 144 (№1). - P. 55-63.

324. Pastoret P.-P. Effect de la dexamethasone sur le titre et la taille des plagues du virus de la rhinotracheite infectiuse bovine /P.-P. Pastoret, P. Jetteur, A. Aguilar-Setien et al.// Ann. Med. Vet. 1979c. - Vol.123. -P. 397-402.

325. Pastoret P.-P. Problems lies a la latence lors de vaccination contre le virus de la rhinotracheite infectieuse bovine (Bovid Herpesvirus) /P.-P. Pastoret, E. Thiry, H. Vindevogel // Develop. Biol. Standart. 1982. -Vol.52.-P. 455-461.

326. Pastoret P.-P. Bovid herpesvirus 1 infection in cattle: pathogenesis, consequences of latency /P.-P. Pastoret, E. Thiry, B. Brochier, G. Der-boven// Ann. Rech. Vet. -1982. - Vol.13, №3. - P. 221- 236.

327. Pastoret P.-P. Diagnosis and prophilaxis of infectious bovine rhinotracheitis: The role of virus latency /P.-P. Pastoret, E. Thiry// Comp. Immunol. Micribiol. Infect. Dis. 1985. - Vol.8, №1. - P. 35-42.

328. Paton D.J. Infection of pigs and cattle with bovine viral diarrhoea virus on a farm in England /D.J. Paton, V. Simpson, S.H. Done//Veterinary Record. 1992.-Vol. 131. - P. 185-188.

329. Pauli U. Veterinärmedizin und molecularbiologie: Möglichkeiten und Grenzen der Virusdetektion /U. Pauli, R. Zanoni, C. Hertig, E. Peterhans// Schweiz. Arch. Tierheilk. 1991. - Vol.133, №1. - P. 35-42.

330. Pellerin C. Identification of a new group of bovine viral diarrhea virus strains associated with severe outbreaks and high mortalities /C. Pellerin, J. van den Hurk, J. Lecomte, P. Tussen //Virology. -1994.-Vol. 203.- P.260 268.

331. Perdrizet J.A. Bovine virus diarrhea clinical syndromes in dairy herds / J.A. Perdrizet, W.C. Rebhun, E.J. Dubovi, R.O. Donis // Cornell. Vet.- 1987.-77.-P. 46-74.

332. Peshev R. Comparative molecular epidemiological investigation on different bovine herpes viruses /R. Peshev, L. Christensen, L. Christova L// Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 1998. - Vol.21 (№4). -P. 247-255.

333. Phillip J. I. Bovine respiratory disease: is control possible / J.I. Phillip // Vet. Res. 1972. - 90. - P. 522 -555.

334. Potgieter L.N. Immunology of bovine viral diarrhea virus / L.N. Potgieter// Vet ClinN Am-Food Anim Pract.- 1995.-V.11.-P.501-520.

335. Probst U. Zur IBR-virus-Ausscheidung experimentell infizierter Kuhl Insbesonderl in der Milch /U. Probst, R. Wyler, U. Kihm et al.// Schzoliz. Arch. Tierheilik. 1985. - Vol.127, №11. - P. 723-733.

336. Raggo C. Expression of bovine interleulcin-1 beta in a bovine herpesvirus -1 vector: in vitro analysis /C. Raggo, D.R. Fitzpatrick, L.A. Babiuk, X. Liang// Virology. -1996. Vol.1 (№22). - P. 78-86.

337. Raggo C. Infectious bovine rhinotracheitis, parainfluenza-3, and respiratory coronavirus// Vet. Clin. North. Am. Food Anim. Pract.- 1997.-Vol. 13 (№3).-P. 455-469.

338. Ramsey F.K. Mucosal disease of cattle / F.K. Ramsey, W.H. Olivers //North. Am. Vet.- 1953,-Vol. 34. P. 629-634.

339. Rebhun W.C. Thrombocytopenia associated with acute bovine virus diarrhea infection in cattle / W.C. Rebhun, T.W. French, J.A. Perdrizet et al. // J. Vet. Intern. Med.- 1989. V.3. - P. 42-46.

340. Renukaradya G.J. Prevalence of infectious bovine rhinotracheitis in Southern India//Rev. Sci. Tech. 1996. - Vol.15 (№3). -P. 1021-1028.

341. Ridpath J.F. Segregation of bovine viral diarrhea virus into genotypes / J.F. Ridpath, S.R. Bolin, E.J. Dubovi // Virology.- 1994. -Vol.205. -P.66-74.

342. Ridpath J.F. Phylogenetic, antigenic and clinical characterization of type 2 BVDV from North America / J.F. Ridpath, J.D.

343. Neill, M. Frey, J.G. Landgraf // Vet. Microbiol. 2000. - Vol.77. -P. 145-155.

344. Rinaldo C.R. Fetal and Adult Bovine Interferon Production During Bovine Viral Diarrhea Virus Infection/ C.R. Rinaldo D.V, Isackson J.C. Overall L.A. et al. //Infection and Immunity. -Vol.14, №3. 1976. -P.660-666.

345. Rock D.L. Mapping bovine herpesvirus type 1 latency-related RNA in trigeminal ganglia of latently infected rabbits /D.L. Rock, S.L. Beam, J.E. Mayfield// J. Virol. 1987. - Vol.61 (№12).-P. 3827-3831.

346. Rogers R. J. Bovine herpesvirus 1 infection of the upper alimentary tract of cattle and its association with a severe mortality /R.J. Rogers, S.G. Knott, F.W. Eaves, R.C. Clague // Aust. Vet. J. - 1978. - №54. -P. 562 -565.

347. Roizman B. Restriction enzyme analysis of herpesvirus DNA: Stability of restriction endonuclease patterns/ B. Roizman, M. Tognon // Lancet. 1983.-1.-P. 167-217.

348. Roizman B. Herpesviruses and Their Replication /B. Roizman, W. Batterson // Virology.- 1985.- Vol.4.- P. 497-525.

349. Rocha M.A. A high sensitivity-nested PCR assay for BHV-1 detection in semen of naturally infected bulls / M.A. Rocha, E. F. Barbosa, S.E. Guimaraes et al.//Vet. Microbiol.-1998. Vol.28 (№1). - P. 1-11.

350. Rocha M.A. Detection of BHV-1 in naturally infected bovine fetus by a nested PCR assay. / M.A. Rocha, E.F. Barbosa, R.M. Guedes, A.P. Lage et al. // Vet. Res. Commun. 1999. - Vol. 23, №2. - P. 133 -141.

351. Rola J. Amplification of DNA from bovine herpesvirus type 1 /J. Rola// Bull. Veter. Inst, in Pulawy. 1997. - Vol. 41, №1. - P. 5-10.

352. Rola J. Detection of bovine herpesvirus-1 in bull semen by PCR /J. Rola, J.F. Zmudzinski // Bull. Veter. Inst. In Pulawy.- 1999.-Vol. 43, № 2,-P. 119-123.

353. Rossi C.R. Association between route inoculation with infectious bovine rhinotracheitis virus and site of recrudescence after dexamethasone treatment /C.R. Rossi, G.K. Kiesel, P.F. Rumph// Am. J. Vet. Res. -1982a.-43.-8.-P. 1440-1442.

354. Rossi C.R. Effect of infectious bovine rhinotracheitis virus immunization on viral shedding in challenge-exposed calves treated with dexamethasone /C.R. Rossi, G.K. Kiesel // Am. J. Vet. Res. -1982b.- Vol.43, №9,-P. 1576-1579.

355. Roth J. A. Effects of bovine viral diarrhea virus infection on bovine polymorphonuclear leukocyte function /J.A. Roth, M.L. Kaeberle, R.W. Griffith // Am J Vet Res.- 1981.-V.42.-P.244-250.

356. Roth J.A. Lymphocyte blastogenesis and neutrophil function in cattle persistently infected with bovine viral diarrhea virus /J.A. Roth, S.R. Bolin, D.E. Frank // Am J Vet Res.- 1986.-V.47.-P.1139-1141.

357. Roth J. A. Recombinant bovine interferon-y as an immunomodulator in dexametasone treated and nontreated cattle /J.A. Roth, D.E. Frank// J. Interferon Res.-1989. - Vol. 9, № 1. - P. 143 -151.

358. Rufenacht J. Prevalence of cattle infected with bovine viral diarrhoea virus in Swittzerland /J. Rufenacht, P. Schaller, L.Adige et al.// Veter. Rec.-2000.-Vol. 147, №15.-P.413-417.

359. Rziha H.J. Herpesvirus (Pseudorabies virus) latency in swine: occurrence and physical state of viral DNA in neural tissues / H.J. Rziha, T.C. Mettenleiter, V. Ohlinger, G. Wittmann // Virology.-1986,-Vol.l55(2).-P.600-613.

360. Safatov A.S. Effect of intramuscularly injected polyprenols on influenza virus infections in mice /A.S. Safatov, A.N. Sergeev, L.N. Shish-kina et al.// Antiviral Chemistry and Chemotherapy 2000.-№2-C.31-37.

361. Santurde G. Rapid and high sensitivity test for direct detection of bovine herpesvirus 1 genome in clinical samples /G. Santurde, N. Da Silva, R. Villres et al. // Vet. Microbiol. 1996. - Vol.49 (№1-2). -P. 81-92.

362. Sausker E.A. Seroprevalence of OHV-2, BVDV, BHV-1, and BRSV in ranch-raised bison (Bison bison) / E.A. Sausker, N.W. Dyer // J. of Vet. Diagn. Invest. 2002. - V.14. - P. 68-70.

363. Schmitt J. Characterization of the bovine herpesvirus 1 UL8 gene and gene products /J. Schmitt, G.M. Keil // J. Gen. Virol. 1998. - 79 (l).-P. 133-141.

364. Schroeder R.J. An acute respiratory infection of dairy cattle /R.J. Schroeder, D.M. Moys // Am. J. Vet. Med. Assoc. 1959. - Vol.125. -№3. - P. 471-472.

365. Schweizer M. Oxidative stress in cells infected with bovine viral diarrhoea virus: a crucial step in the induction of apoptosis /M. Schweizer, E. Peterhans //J Gen Virol.- 1999.-V.80.-P.1147-1155.

366. Schweizer M. Noncytopathic bovine viral diarrhea virus inhibits double-stranded RNA-induced apoptosis and inter-feron synthesis /M. Schweizer, E. Peterhans // J. Virol. 2001. - V.75. - P.4692-4698.

367. Schwyzer M. Molecular biology of ruminant viruses /M. Schwyzer, M. Ackermann// Vet. Microbiol. 1996. - Nov. Vol.53 (№1-2). -P. 17-29.

368. Schwyzer M. Gene contens in a 31-kb segment at the left genome end of bovine herpesvirus-1 / M. Schwyzer, D. Styger, B. Vogt et al. // Vet. Microbiol. 1996. - Nov. Vol.53 (№1-2). - P. 67-77.

369. Schwyzer M. Gene contents in a 37-kb segment centered in the UL part of the bovine herpesvirus 1 genome GenBank, submitted (13-AUG-1996);21. Bovine herpesvirus 1, complete genome. Entrez NC001847 gi: 9629818.

370. Skidmore S.J. Interferonassay as a viral diagnostic test//J. Virol.Methods.-1987,-16(1 -2).-p. 155-15 8.

371. Seal B.S. Restriction endonuclease analysis of bovine herpesvirus DNA and nucleic acid homology between isolates /B.S. Seal, S.C. Jeor, R.E. Taylor // J. Gen. Virol. 1985. - Vol.66 (№12). - P. 2787-2782.

372. Shappell S.B. Adherence-dependent neutrophil hydrogen peroxide secretion is mediated by MAC-1 (CDllb/CD18) /S.B. Shappell, C. Toman, D. C. Anderson et al.// J. Leukocyte Biol.-1989.-V. 46.-P.304-306.

373. Simard C. Gene mapping of infectious bovine rhinotracheitis viral DNA genome /C. Simard, F. Nadon, C. Seguin et al.// Arch. Virol. -1990. Vol.110 (№1-2). - P. 63-75.

374. Simard C. Genomic heterogenities in bovine herpesvirus type 1 viral isolates: a major variant selected from a field isolate /C. Simard, S. La Bossiere, C. Segiun, M. Trudel // Intervirology. 1991. - Vol. 32 (№3). -P. 117-126.

375. Skidmore S.J. Interferonassay as a viral diagnostic test// J.Virol.Methods.-l 987.-16(1-2).- P. 155-158.

376. Smith V. W. Transmission of a genital isolate of bovine herpesvirus 1 to calves by the respiratory route /V.W. Smith, W. Coakley, D. Maker // Aust. Vet. J. 1980. - V.56. - P. 302-304.

377. Smith G.A. The location and nucleotide sequence of the thymidine kinase gene of bovine herpesvirus type 1.2 /G.A. Smith, P.L. Young, J. S. Mattick// 1990. - Vol.71.- №10. - P. 2417-2424.

378. Smits C.B. Comparison of three polymerase chain reaction methods for routine detection of bovine herpesvirus 1 DNA in fresh bull semen. /C.B. Smits, C. Van Maanen, R.D. Glas et al.// J. Virol. Methods. - 2000. - Mar. Vol. 85, №1-2. - P. 65-73.

379. Soine C. Prevalence of antibodies to bovine viral diarrhea virus in Namibian wildlife / C. Soine, G. Uatanaua, K.R. Depner // Tropical Animal Health and Production. 1992. - Vol. 24. - P. 125-126.

380. Sopp P. Detection of bovine viral diarrhea virus p80 protein in subpopulations of bovine leukocytes / P. Sopp, L.B. Hooper, M.C. Clarke et al. //J. Gen. Virol. 1994.-Vol.75.-P. 1189-1194.

381. Splichal I. Ontogeny of interferon alpha secreting cells in the porcine fetal hematopoietic organs /1. Splichal, M. Bonneau, B. Charley// Immunol Lett.- 1994.-V.43.-P.203-208.

382. Sreenivasa B.R. Direct detection of bovine herpesvirus 1 DNA from cell culture fluids using polymerase chain reaction. / B.R. Sreenivasa, T.J. Rasool, C. Natarajan // Indian J. Exp. Biol. - 1996. - Nov. Vol.34, №11.-P. 1169-1171.

383. Sreenivasa B.R. Restriction endonuclease analysis of DNA from Indian isolates of bovine herpesvirus 1. / B.R. Screenivasa, C. Natarjan, T.J. Rasool // Acta Virol. - 1996. - Nov-Dec. Vol. 40, №5-6. -P. 315-318.

384. Stahl K. Bulk milk testing for antibody seroprevalences to BVDV and BHV-1 in a rural region of Peru /K. Stahl, H. Rivera, I. Vagsholm, J. Moreno-Lopez//Prev.Vet.Med.-2002.-30.-56(3).-P.-l 93-202.

385. Stockdale P. H. G. Experimental bovine pneumonic pasteurellosis / P.H.G. Stockdale, E.V. Langford, C.L. Darcel// Can. J. Comp. Med. -1979.-V.43.-P. 262-279.

386. Straub O.C. Infectious bovine rhinotracheitis virus. History and recent development / O.C. Straub// Dev. Biol. Stand. 1975. - Vol.28. -P. 530-533.

387. Straub O.C. Vorkommen der duren IBR-IPV-viren hervorgerufenen Krankheiten und Moglishe Differential Diagnostische Probleme in den Verschiedenen Kontinenten und Deren Laudern / O.C. Straub // Dt. Tier-arztl. Wschr. - 1978. - Vol.85, №3. - P. 84-90.

388. Straub O.C. Advantages in BHV-1 (IBR) research /O.C. Straub// Dtsch Tierarztl Wochenschr- 2001.-108(10).- P.- 419-422.

389. Stubbings D. P. Bovine abortion associated with infectious bovine rhinotracheitis virus infection / D. P. Stubbings, I. Cameron// Vet. Ree. -1981.-V.108.-P. 101-102.

390. Sreenisava B.P. Restriction endonuclease analysis of DNA from Indian isolates of bovine herpesvirus 1/ B.P. Sreenisava, C. Natarjan, T. J. Rasoon// Acta Virol. 1996. - Vol. 40 (№5-6). - P. 315-318.

391. Summerfield A. Antiviral activity of an extract from leaves of the tropical plant Acanthospermum hispidum /A. Summerfield, G.M. Keil, T.C. Mettenleiter et al.// Antiviral. Res.- 1997.-V.36(l).-P.-55-62.

392. Taniguchi T. The interferon-a/p system in antiviral responses: a multimodal machinery of gene regulation by the IRF family of transcription factors/ T.Taniguchi, A. Takaoka// Curr Opin Immunol.- 2002.-V. 14.-P.111-116.

393. Theil K.W. Effect of poly I: C on infectious bovine rhinotracheitis virus infection in calves / K.W. Theil, S.B. Mohanty, F.M. Hetrick // Proc. Soc. Exp. Biol.- 1971.-№ 137.-P. 1176-1179.

394. Thein P. Herpesvirusinfektion bei Mensch und Tier. Jhre Problematik und Bekämpfung / P. Thein // Berlin und München Tierarztl. Wochenschr. 1980. - Vol.93, №11. - P. 201-205.

395. Theil K.D. Antiviral activity of enzymatically oxidized caffeic acid against herpesvirus hominis type 1 and type 2/ K.D. Theil, B. Helbig, M. Sprossing et al.// Acta Virol. 1983.- Vol. 27(3).- P.200-208.

396. Tolari F. Isolation and reactivation of bovid herpesvirus 1 in goats / F. Tolari, H. White, P. Nixon// 1990. - Vol.13, №1. - P. 67-71.

397. Turin L. BHV-1: new molecular approaches to control a common and widespread infection / L. Turin, S. Russo, G. Poli // Molecular Medicine. -1999.-V. 5.-P.261-284.

398. Thiry E. In vivo and in vitro effect of acyclovir on Pseudorabies virus, infectious bovine rhinotracheitis virus and pigeon herpesvirus /E. Thiry, H. Vindevogel, P. Leroy et al.// Ann. Rech. Vet.-1983.-V. 14(3).-P.239-245.

399. Tikoo S.K. Bovine herpesvirus 1 (BHV-1): biology, pathogenesis, and control / S.K. Tikoo, M. Campos, L.A. Babiulc // Adv. Virus. Res. -1995.-45.-P. 191-223.

400. Theodoridis A. Studies herpesviruses. Part 1. Isolation on bovine and characterization of viruses isolated from the genital tract of cattle /A. Theodoridis // Onderstepoort Journal of Veterinary Research.-1985.-Vol.52, №4. P. 239 -254.

401. Thomson R. G. Pathology and pathogenesis of the common diseases of the respiratory tract of cattle / R. G. Thomson // Can. Vet. J.-1974.-V.15.-P. 249 -251.

402. Thomson R.G. Investigation of factors of probable significance in the pathogenesis of pneumonic pasteurellosis in cattle / R.G. Thomson, S. Chander, M. Savan, M.L. Fox // Can. J. Comp. Med. 1975. - Vol. 39. -P. 194-207.

403. Underdahl N.R. Cultivation in tissue culture of cytopathogenic agent from bovine mucosal disease / N.R. Underdahl, O.D. Grace, A.B. Hoerlein // Proc Soc Biol Med.- 1957. Vol. 94. - P. 795.

404. Van Engelenburg F.A. Excretion of bovine herpesvirus 1 in semen is detected much longer y PCR than by virus isolation / F.A.Van Engelenburg, F.W. Van Schie, F.A. Rijsewijk, J.T. Van Oirschot// J. Clin. Mi-crobiol.-1995.-Vol.33 (№2). -P.308-312.

405. Van Oirschot J.T. Bovine herpesvirus in semen of bulls and the risk of transmission: a brief review / J.T. Van Oirschot// Vet. Q. -1995a.-V.17 (№1). P.29-33.

406. Van Oirschot J.T. Virulence and genotype of a bovine herpesvirus 1 isolate from semen of a subclinically infected bulls / J.T. Van Oirschot, F.A. Rijsewijk, P.J. Straver et al. // Vet. Rec. 1995b. - Sep. 2, Vol.137 (№10).-P. 235-239.

407. Van Schaik G. Introduction of BHV -1 on dairy farms. Risk assessment by cattle farmers and veterinarias / G. Van Schaik // Tijdschr. Diergeneeskd. 1998. -Vol.15, №123 (6).-P.180-183.

408. Van Der Maaten M.J. Ovarion lessions in heifers exposed to infectious bovine rhinotrcheitis virus by non-genital routes on the day after breeding / M.J. Van Der Maaten, J.M. Miller // Vet. Microbiol.-1984/1985-Vol.l0.- P.-155-163.

409. Van Der Maaten M.J. Ovarion lessions induced in heifers by intravenous inoculation with modified-live IBR virus on the day after breeding / M.J. Van Der Maaten, J.M. Miller // AM. J. Vet. Res. 1985. - Vol.46, №9.-P. 1996-1999.

410. Van Nieuwstadt A.P. Epidemiology of BHV 1 virus infections in dairy herds /A.P. Van Nieuwstadt, J. Verhoeff // J. Hyg.-1983.-Vol.91(2).-P.309-318.

411. Van Nieuwstadt A.P. Epizootological features of infection with infectious bovine rhinotracheitis virus on dairy farms / A.P. Van

412. Nieuwstadt, J. Verhoeff // Tijdschr Diergeeskd.-1983.-Vol.l5(10).-P.383-391.

413. Van Reeth K. Macrophages and respiratory viruses / K.Van Reeth, B. Adair// Pathol Biol.- 1997.-V.45.-P.184-192.

414. Van Schaik G. Introduction of BHV -1 on dairy farms. Risk assessment by cattle farmers and veterinarias /G. Van Schaik // Tijdschr. Diergeneeskd. 1998. -Vol.15, №123 (6). - P. 180-183.

415. Varady E. Restriction endonuclease analysis of a porcine isolate of bovine herpesvirus type 1 / E. Varady, T. Tuboly, J.V. Derbyshire // Can J. Vet. Res. -1994. -V.58 (№1). P. 65-66.

416. Vassilev V.B. Bovine viral diarrhea virus induced apoptosis correlates with increased intracellular viral RNA accumulation / V.B. Vassilev, R.O. Donis // Virus Res.- 2000.-V.69.-P.95-107.

417. Vergeron P. Les virus herpetiques / P. Vergeron// Tempo. Med. -1983.-Vol. 143, №13-14.-P. 21-23.

418. Vilcek S. The effect of the mode of sampling on BHV-1 detection in infected cattle by dot-blot hybridization / S. Vilcek, I. Deliova, L. Stro-jny et al.// Vet. Micribiol. 1993a. - 36 (3-4). - P. 355-358.

419. Vilcek S. Detection of the bovine herpesvirus-1 using the dot-blot hybridization method / S. Vilcek, I. Deliova, O. Forgac et al. // Vet. Med. 1993b.-Vol.38 (№4).-P. 193-202.

420. Vilcek S. Detection of bovine herpesvirus 1 with various types of DNA probes / S. Vilcek, I. Deliova, O. Forgac et al. // Acta. Vet. Hung. -1993c.-43 (1-2).-P. 179-190.

421. Vilcek S. Development of PCR tests for the detection of bovine herpesvirus 1, bovine respiratory syncytial viruses and pestiviruses / S. Vilcek // J. Vet. Med. - 1994 a. - Vol. 39, №11. - P.687-700.

422. Vilcek S. Rapid detection of bovine herpesvirus 1 (BHV-1) using the polymerase chain reaction. / S. Vilcek, P.F. Nettleton, J.A. Herring, A.J. Herring//J. Vet. Microbiol. - 1994 b. - Vol. 42, №1. - P. 53-64.

423. Vilcek S. Typing of pestiviruses from eland in Zimbabwe / S. Vilcek, D.J. Paton, L.W. Rowe, E.C. Anderson // J. of Wild. Dis. 2000. -Vol.36. - P. 165-168.

424. Vittori S. Deaza- and deoxyadenosine derivatives: synthesis and inhibition of animal viruses as human infection models / S. Vittori, D. Sal-vatori, R. Volpini et al. // Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids.-2003.-V.22(5-8).-P.877-881.

425. Vonk Noordegraaf A. An epidemiological and economical simulation model to evaluate the spread and control of infectious bovine rhi-notracheitis in the Netherland / A.Vonk Noorgraaf// Prev. Vet. Med.-1998.-1.-36 (№3).-P. 219-238.

426. Wagter L.H. A polymerase chain reaction (PCR) assay for the detection of bovine herpesvirus 1 (BHV1) in selectively digested whole bovine semen /L.H. Wagter, R.D. Glas, N. Bleuming-Pluym et al.// Vet. Res. Commun.-1996.-Vol.20 (№4). P. 401-408.

427. Waren L.M. Effelcts of BHV-1 on PMN adhesion to bovine lung endothelial cells / L.M. Waren, L.A. Babiulc, M. Campos // Veter. Immunol. Immunopathol. 1996. - Vol. 55, № 1-3. - P. 73 - 82.

428. Welsh M.D. Effect of BVD virus infection on alveolar macrophage functions /M.D.Welsh, B.M.Adair, J.C. Foster// Vet Immunol Immunopa-thol.- 1995.-V.46.-P. 195-210.

429. Whetstone C.A. Two different strains of an alphaherpesvirus can establish latency in the same tissue of the host animal: evidence from bovine herpesvirus 1 / C.A. Whetstone, J.M. Miller// Arch. Virol 1989. -107.-P. 27-34.

430. White G. The prospects for antiviral chemothaerapy in veterinary medicine /G. White//Veter. Rec.- 1981.-V.108,-№ 6.-P. 125-126.

431. Winkler M. T. Bovine Herpesvirus 1 Can Infect CD4+ T Lymphocytes and Induce Programmed Cell Death during Acute Infection of Cattle /M.T.Winkler//J. of Virol. 1999. Vol.73, №10. - P. 8657-8668.

432. Winkler M.T. Persistence and reactivation of bovine herpesvirus 1 in the tonsils of latently infected calves / M.T. Winkler, A. Doster, C. Jones// Journal of Virology. 2000. - V. 74. - P.5337-5346.

433. Winkler M.T. Analysis of bovine trigeminal ganglia following infection with bovine herpesvirus 1 / M.T. Winkler, A. Doster, J.-H. Sur, C. Jones//Veterinaiy Microbiology. -2002. V. 86. -P.139-155.

434. Wiseman A. The financial burden of infection rhinotracheitis / A. Wiseman //Vet. Rec. -1979.-V.105.-№20.- P.457- 469.

435. Wiseman A. Infectious bovine rhinotracheitis / A. Wiseman // Veter. Ann. Bristol. 1980. - Vol.20. - P. 204-208.

436. Woods G.T. Acute infectious bovine rhinotracheitis and salmonellosis in a dairy herd / G.T. Woods, L.E. Hanson, S.H. Swenson, H.E. Rhoades // J. Amer. Vet. Med. -1968. -V.152. P.1530-1535.

437. Woods, D.E. Role of fibronectin in prevention of adherence of Pseudomonas aeruginosa to buccal cells / D.E. Woods, D.S. Strauss, W.G. Johanson, J.A.Bass//J. Infect. Dis. 1981.-Vol. 143. - P. 784.

438. Yates W.D.G. A review of IBR, shipping fiver pneumonia and viral-bacterial in respiratory disease of cattle / W.D.G Yates // Can. J. Comp. Med. 1982. -46, №3. - P. 225-263.

439. Yates W.D.G. Interaction between viruses and bacteria in bovine respiratory disease / W.D.G Yates // Canad. Veter. J. -1984. № 25. -P. 37-41.

440. Zhou J. Improved detection of bovine herpesvirus -1 in artificially infected bovine semen by protein amplification. / J. Zhou, J. Lyaku, R.A. Fredrickson, F.S. Kibenge // J. Virol. Methods. 1999. - Vol. 79, №2. -P. 181-189.

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея крупного рогатого скота

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея крупного рогатого скота

Оглавление диссертации Глотова, Татьяна Ивановна :: 2006 :: Новосибирск

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Глотова, Татьяна Ивановна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея крупного рогатого скота"

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2006 года, Глотова, Татьяна Ивановна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций