Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммуноферментный метод диагностики лейкоза птиц

ХТОНСКАЯ С ШЛК0Х03ЯКСГП1Ы МАЯ АХШДШ

На правах рукописи

АЕДУКАЛЫКОВА САУЛЕ ТАУМА1ЮВНА

УДК 619:576.807.7:616.988:636.5

ШОТОМЯМЭДТНий 1.1КТ0Д ЩШОСТйКИ ЛЕЙКОЗА ПТИЦ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТ0ГЕ5ЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

г. Тар-у, 1990 Г.

ЭСТОНСКАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ

На правах рукописи

АЩЩШШКОВА САУЛЕ ТАУМАНОВНА

/ДК 619:576.807.7:616.988:636.5

ИММУН0ФЕРМЕНТ11ЫИ 1.1ЕТ0Д ДИАП10СТИКИ ЛЕЙКОЗА ПТИЦ

16.0U.03 - вотеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание явной степени кандидата ветеринарных наук

г. Тарту, 1990 г.

Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследовательском ветеринарном институте птицеводства

ЯаушыЯ руководитель - доктор ветеринарных наук,

професоор В.О.ЗШНСЮв!

Официальное оппоненты:

доктор ветеринарных наук, К.Ш.ФРАНГУЛЯН

кандидат ветеринарных наук, доцент ».А.СЖОВАРТ

Ведущее научное учреждение: Все сошный ордена Ленина институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваланко

Защита состоггоя * 1990 г. в ^

чаоов на заседании сдациализиро ванного Совета К 120.33.03 Эстонской сельскохозяйственной академии ю адресу: 202400, ЭССР, г.Тарту» УЛ. РиЯа 12.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Эстонской сельскохозяйственной академик.

Автореферат разослан * " 1990 г.

Учекыв секретарь спапкаллзлрованного Совета, кандидат ветеринарных наук, додент ~ АЛАОТС Я.В.

Актуальность темы. Изучение лейкоз-саркомных болезней тиц является одной из актуальных проблем в блоке онкогенных ассоциирующихся с ними болезней, которые отягощают течение тих инфекций, усложняют эпизоотическую ситуацию и способству-т образованию новых высокопатогенных эпизоотических штаммов. В вязи с отим на первое место выдвигается задача дальнейшего со-ериюнствования методов и средств диагностики лейкоз-саркомных олозней птиц. Необходимы высокочувствительные и специфические етоды лабораторной диагностики, позволяющие выделять более олное, если не абсолютное, количество носителей онковирусов и нтител к ним. ;

Используемые сейчас методы диагностики лейкоз-саркомных олезней птиц - РСК, КоФАЛ-тест, реакция нейтрализации в куль-ура фиброблаетов эмбрионов кур - недостаточно чувствительны я рудоемки при исполнении, особенно реакция нейтрализации ин вит-¡0.

В зарубежной и отечественной литературе имеются сообщения о все возрастающей роли в диагностике инфекционных болезней квотных кммун'>[1врмеи^ного метода, обладающего высокой специ-мчнос^ью, чувствительностью и лишенного недостатков, отмечен-1ых при названных вше методах. Более перспективен в этъм на-[равлении "•нордофазнкй иммуноферментный анализ /ГФ ИФА/.

Придавая важное значение данному вопрооу Государственный юмитет СССР по науке и технике в 1583 году принял постановлено 1!> 6 "О расширении научно-исследовательских работ в области издания диагностических препаратов и оборудования для ишуно-¡юрментного анализа и их применен в медицине, сельсчом хозяйстве, промышленное*« и научных исследованиях".

Цель ц задачи исследования. Основная цель исследования заключается в разработке, изучении и апробации в экспериментальных и практических условиях метода диагностики лейкоз-сар-комных болезней птиц на оонове твердофазного иммуноферментцого анализа /ТФ Шк/.

В задачи исследования входило:

- экспериментально найти активный антиген из группы вирусов лейкоза-саркомы для конструирования Шк тес-системн при определении антител к названным вирусам;

- получить высокоактивную гипериммунную сыворотку к вирусу оаркомы Рауса;

- установить оптимальные иммунохимические и физико-химические параметры режима постановки твердофазного ИФА при определе нии антител к вирусам лейкоза-саркомы;

- оценить чувствительность, специфичность и диагностическую вффективность твердофазного ИФА в сравнении с.реакцией нейтрализации в культуре фибробластов эмбрионов кур;

- апробировать и оценить целевое назначение непрямого варианта ИФА для лабораторного контроля птиц на наличие антител к лейкоз-оаркомным вирусам.

Научно-иоолддоьательская работа по *еме диссертации проведена в 1986-1390 годы при выполнении плановой государственной и межведомственной программ по решению научно-технических проблем 0.69.05 и 0.51,09.

Научная новизна. Экспериментально обоснована целесообразность использования в ИФА тест-системе при оирпдолении антител к 4-м серологическим подгруппам вирусов лейкоа-спркомной группы очищенного вируса миелоблаотоза птиц - irumw amy, ocho-

шнная на группоспецифзтческой общности антигенов указанного ви->уса с антигенами вирусов лейкоз-саркомной группы и вырабатыва-)Мых в организме птиц антител.

Научно обоснованы и разработаны критерии, обеспечивающие юлучение высокоактивной специфической гипериммунной сыворотки < вирусу саркомы Рауса штаммы вн-нзу(1иу-1) и вн-йЗУ(ЯАУ-г).

Установлены оптимальные параметры постановки твердрфазного варианта ИФА для определения антител.

Разработанная и внедренная а лабораторную практику ИФА тест-система при создании пород и линий кур, устойчивых к лейкозу, и при контроле СПФ-стад кур и перепелов на стабильность статуса СПФ в отношении онкогенных лейкоз-саркомных вирусов превосходит ло чувствительности реакцию нейтрализации ин витро я позволяет о особой надежностью.обеспечивать стабильность статуса СПФ при увеличенных интервалах взятая крови от птицы для яо-следования по сравнению о контролем птицы реакцией нейтрализации ин вк^ро.

Полученные нами данные позволяют рассматривать разработанную ИМ ^ест-систему в качестве универсального метода контроля чур и перепелов на наличие антител к вирусам лейкоза-саркомы.

Практическая ценность работы и внедрение результатов исследования. Практическая ценность работы заключается в разработке оптимальных параметров твердофазного ИФА для определение антител при исследования птицы на контаминацию вирусам* лейкоз-саркомной группы.

Использование разработанной нам* Шк тест-системы позволяет осуществлять эффективный прижизненный лабораторный контроль п^иць на наличие или отсутствие антител к вирусы! леЯйоввнмцн

комн. Этот контроль проводят в стадах кур, селекционируемых на устойчивость к лейкозу, при отборе кур, петухов и перепелов для С№-отад и изучении эпизоотической обстановки в птицеводческих хозяйствах промышлеиного типа на онкогенные болезни птицы.

Результаты проведенных исследований включены наш в методические рекомендации "Создание устойчивых к неоплазмам линий и пород птицы" /одобрены ГУВ Госагропрома СССР 13.08.1986 г./, "Методические рекомендации по отбору, контролю и эксплуатации СПФ-птицы" /рекомендованы ГУВ Госагропрома СССР 13.08.1986 г./ и "Ветеринарно-санитарные требования к перепелиным СП5-фермам, продающим биопредприя^иям инкубационное яйцо" /согласованы с Управлением ветеринарии Госагропрома Эстонской ССР и упюрвдены зам. председателя Госагропрома Эстонской ССР 22.12. li'87 г./.

Основные научные положения диссертационной работы вошли в "Методические рекомендации по определению методом шлиунофермент-ного анализа антител к вирусам лейкоз-саркомной группы птиц", одобренные Ученым Советом Всесоюзного научно-иеследоватольско-го ветеринарного института птицеводства 4.07.1989 г.

Основные положения, выносимые яа зашцту:

- результаты получения и испытания специфических компонентов для Ш>А: концентрированного антигена вируса миолобластоза птиц

и специфической гипериммунной сыворотки и установленные при этом оптимальные параметры постановки твердсИшного иммунсх^рм'ентио-го анализа /ГФ Ш>А/;

- анализ разработанной твердофазной И*>А tgot-ohrtômw, пмех'-щей высокую чувствительность, иравшиатщун чуистци''ч>лыюст1, РН и 1Ш-1Ш раз, специфичность У7 % и воспроизводимость с чо;>¡>!>ици-ентом вариации, не превышающим 3 %.

- результаты апробация ИФА тест-системы, как ценного диагностического теста при селекции птицы на устойчивость к лейкоз-саркомиим болезням птиц, создании и контроле СВД-стад !сур в перелелов и при выяснении эпизоотической, обстановки а хозяйствах по онковирусным болезням птиц, имеющим общий гс-антиген.

Апробация работы. Материалы работы доложены на методических советах отделов вирусных и опухолевых болезней птиц /1988, 1389, 1990/ и ученом совете Всесоюзногонаучно-исследователь-зкого ветеринарного Института птицеводства /1990/, 2-ой научной шнференции молодых ученых Ленинградского ветеринарного иясти-•ута /1988/, 9-ой научно-практической конференции молодых сяе-даалистов Ленинградского ордене Трудового Красного Знамени на-'чно-исслодовательского института эгадемиологиии микробиологи* и. Пастера /1988/, республиканской конференции "Достижения ве-еринарной науки и практики по повышению продуктивности сель-кохозяйственннх животных* /г, Тарту,,1988/, Всесоюзной коифв-енции "Актуальные вопроси диагностики заболеваний системы крои" /г. Сухуми, 1988/, Всесоюзной научно-производственной кои-ерёнции "Комплексная система ветеринарных мероприятий в птице-одстве - резерв повышения эффективности производства* /г. Леям град, 1189/. '

публикации: По материалам диссертации опубликованы 2 рабО-и и 2 работы находятся в печати.

Объем и структура работы? Диссертация изложена на 168 границах машинописного текста и состоит и* введения, обвора ртдратуры /глава 1/, собственных исследований /главы 2-6/, об-даения результатов, вколов, практических предложений, прало->няй и сокращений, пгикятых в диссертаций.

- а -

Работа иллюстрирована 14 рисунками и 18 таблицами. Список литературы содержит 60 отечественных и 165 зарубежных источнике МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Вирусные антигены. Использовали типовые штаммы вируса cap комы Рауса: BH-SSV(ÍUV-I) подгруппы A; bh-R3Y(RAV-2) подгруппы BH-RSY{HAV-49) подгруппы С; BH-R3V<RAY-50) подгруппы Д.

Вирус миелобластоаа птиц ВШ1 штамм íkv, очищали в градиент плотности сахарозы и инактивировали раствором бис-я-этиленимино этилоксамвдом в конечной концентрации 0,01 М в течение 18 u при температуре +37 °С.

Сыворотки. Гипериммунныв сыворотки получали путем иммунизация кур, проверенных на отсутствие кон^аминантов-возбудигелей болезней птиц вирусом саркомы Рауса ВСР 2-х серологических подгрупп BH-RSV(RAV-I), -(RAV-2)»

В качестве референс-негативных сывороток использовали коммерческие иммунные сыворотки к вирусам болезней чур инфекционно го ларинготрахеита, ныокаслской болезни, болезни Марека, гриппа птиц, инфекционного бронхита, аденовирусной инфокции п^иц /производства ВНИВИП, Ленинград/, а также нормальные сыворотки крови кур, которые получали от клинически здоровых, невакцинирован ных птиц, проверенных на отсутствие антител к нирусам лейчоз-саркомнсй группы и других возбудителей птиц, предусмотренных в "Методических рекомендациях по отбору, контролю и эксплуатации СШ-птицы", утверждены ГУВ Госагропрома СССР 13.08.1986 г.

Иммуноглобулины класса IgO выделяли *^ремн методами: сульфатом аммония, полиэтиленгликолем /М.м. 6000/, ионообменной хроматографией.

Xpotnaforp-l-lw П}10П0ДИЛК ПОД ЧОН^рОлег," ИрофИХ»' ЯЧЩИИ с по-

эщыо спектрофотометра "Увикорд-2"; запись профиля - на само-исцо двухканальном "Рекордер"; сбор фракций - на автоматичво-эм коллекторе "Ультрарак" ЛКВ, Швеция.

Концентрирование выделенных фракций осуществляли с.помо-ью полиэтилеигликоля ПЭГ /М.м. 20000/.

Концентрацию белка определяли по методу o.Lowry et ai. 1951/, а также спектрофотометрическа расчетным способом по эрмуле:

ca^OQ х разведение ^ °б = 1,3

це Cg - концентрация белка; Oflggg - оптическая плотность при айне волны 280 нм; 1,3 - коэффициент поглощения.

Иммуноферментныв конъюгаты получали по методу окисления зрмента до альдегидной формы перйодатом натрия /Паклив ?74/ в модификации и.вЛ/ll eon /1978/.

Использовали пероксидазу хрена производства "Биохимреак-îb" г. ОлаИне /Латвия/, марка A,HZ а 2,7; "Serra", ФРГ; R2 « 2,9.

Концентрацию фермента определяли спектрофотометрически 1СЧ8ТНЫМ способш по 'формуле:

Сд^ * ОП^з х 0,44 х разведение »

хе Ст - концентрация пероксидазы; 0,44 - коэффициент погло-шия; ОП^з - оптическая плотность при длине волны 403 нм.

Постановку ИФА проводили в непрямом варианте в полистяро-звых микро^итрационных 96-луночных планшетах производства отв-ic-венного /Ленинградский завод медицинских полимеров я ВНИИ УШ0ЛИМ2Р - г. Москва/ и зарубежного "Dynetech" /Шввйцдрия/.

- 10 -

В качестве конъюгатов использовали антикуриные иммунопер-оксвдазные препараты, меченные пероксидазой хрена. В качества субстрата использовали 5-аминосалиияловую кислоту в концентрации 0,8 иг/ил в присутствии перекиси водорода о конечной концентрацией 0,006 рН 6,0.

Учет результатов проводили визуально по четырехкрастовой оис^вме и спектрсфотометричвоки на приборе Лип1гса<<«г-11" при длине волны 450 ни.

Для сравнительной оценки диагностической эффективности использовали реакцию нейтрализация а культуре фибробластов эмбрионов кур, а также проводили гистологическое изучение внутренних органе^ подопытных кур, экспериментально зараженных ЗСР.

, Статиотическую обработку результатов исследований осуществляли о использованием методов вариационной статистики, корреляционного и регрессивного анализов /Бессмертный Б.С., 1967/,

Всего в ходе исследований с помощью разработанной ИФА теот-системы было исследовано 2428 проб сывороток крови кур.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИСООДОВАШ

Педггсниэ штФич^ш иомпонэотор для РА тввт-стстеед

и оптимизация параметров ее постановки. В работе подробно изложены результаты опытов по сравнительной оценке различных антигенных препаратов из группы лейкоза-саркомы, имеющих разную степень очистки и полученных разными методами.

Для конструирования ИФА тест-системы на основании проведенных опытов отобрали вируо миелоблаотоза птиц штамм аиу, очищенный в градиенте плотности сахарозы и концентрированный ультрафильтрацией, получали на Омутнинеком химическом заводе.

- 11 -

Для выбора подходящего и доступного в лабораторных условиях метода концентрирования вируса с целью получения препаративных количеств антигена было использовано 3 метода кояцентри-рования: осаждение вируса полиэтиленхликолен /М.м. 6000/ по B.y.v«jde /1978/, сернокислым аммонием по У.?.Cleric et ах. /1941/ и метод ультрацентрифугирования по Н» .u.«b«reann /1981/.

В ходе оптимизации технологической схемы производства ям-муноформентных препаратов обоснованы критерии оценки качества промежуточных и конечных продуктов, в частности:

- установлена целесообразность использования а Й$А тест-системе при определении антител к ВЛСП 4-х серологических подгрупп очищенного вируса миелобластоза птиц штамм A^V, основанная на группоспецифической общности указанного вируса и ВЛСП .я вырабатываемых в организме птиц антител к этим вирусам! '

- подтверждена целесообразность применения в технологии производства иммуноферментных препаратов вероксидазы хрена отечественного производства, марка А, "Биохиыреактив" /г, Олайне Латвия/. Основной критерий качества фермента служил показатель R2, который должен быть не менее 2,5.

- установлены оптимальные концентрации иммунологически активных компонентов: для антигена в качестве сеноитина - 20 мкг/ мл и для иммуно<|)врмонтного конъюгатя - рпэведение 1:400, обео-пвчипакхцив наибольшую активнооть и специфичность ИФА.

- подобран в качества наполнителя для лиофилизацим иммуно-формеитних препаратов комплексный белкови-сахарозный стабилизатор, который позволил добиться сохранения активности и стандартизации препарата с. коск^шшзитом вариации 3,08

На основе изучения кинетики взаимодействия компонентов

тест-системы на каждом этапе постановки Шк дана оценка влияния на чувствительность и специфичность системы физико-химических факторов при подборе оптимальных: концентрационных соотношений и сорбирующей буферной системы« температуры, продолжительности инкубации и типа полистироловых планшет. Это позволило обосновать оптимальный режим проведения анализа и сформулировать диагностические критерии учета и интерпретации опытов как при опектрофотометрической, так и визуальной оценке результатов реакции.

Ртшшшш давка чгагешелшсти., <отпшФтаорти и

ДЮТРИЧТООК<?а ЭФФЭСТРИРСТИ РйЭРйЗРТОТРЙ ДОА Т9<?Т-СТСТ?МЧ

Наши опыты показали, что разработанная ИФА тест-система характеризуется высокой специфичностью. При постановке ИФА с гетерологячиюш сыворотками кур перекрестных реакций не отмечено. Значение оптической плотности иммуноферментной реакции при этом не превышало значений "контроля конъюгата" /0,00 -0,,03/, что свидетельствовало о специфичности результатов ИФА.

При титровании гипериммунных сывороток крови к вирусу саркомы Рауса в ИФА и РН в культуре фибробластов эмбрионов кур было установлено, что чувствительность ИФА превышает чувствительность РН в 100-150 раз.

Результаты Сравнительной оценки диагностической ценности двух реакций - твердофазного И&А и РН в культуре фибробластов вибрионов кур при исследовании сывороток крови от 120-дн цыплят на наличие антител я ВДСП приведены в табл.1.

Из табл.1 видно, что выявляемость антител к ВЛСП методами 05А и РН равнялось соответственно: в 1-м опыте - 40 и 10 %, во 2-м опыте - 72 я 16 % и в 3-м опыте - 32 и 6 %, иными словами

- 13 -

твердофазный ИФА показал высокую диагностическую ценность.

При сравнительной оценке этих методов диагностики отмечена выраженная корреляционная зависимость /т * -Л,8$0Г011; Р<0,01/.

Таблица 1,

Результаты выявления антител к ВСР в ИФА тест-системе к РН ин ви^ро в сыворотках крови 120-дн цыплят

Совпадение результатов № Исследо- Методы Положитель- ифа и*РН опы- пано исследо- ные резуль- абс.Д та цыплят вания таты,абс./>-■- ■ ............ ■положи- отрицательных тельных

1 30 ИФА РН 12/40 3/10 3/25 18/100

2 25 ИФА РН 18/72 4/16 4/22 6/86

3 34 ИФА РН 11/32 2/6 2/18 23/100

Результаты апробации диагностической ИФА тест-системы в условиях промышленного птицеводству

В ходо апробации исследовано 1404 пробы сывороток крови кур и перепелов на наличие антител к ВЛСП, полученных из 8 пти-цохоэя:1с,в страны. Б щол.2 приведены результаты апробации ИФА о 8 птицеводческих хознисл-пах. Антитела к ВЛСП обнаружены в 27^ пробах, ч*о сосншше4, 24,6 % от оо ;вго количеств проб, ¡¡лиоо.шп!;) цроцшг ;:ачож«''<мьш.,х сшзороток чаб.шлгили у яйценоских чур, ч осношш, ,ч но.чнчсто выше 186 дн по сравнению с мяо-

кыкк курами.

Таблица 2.

Результаты апробация И&А тест-системы а реакции нейтрализации в культуре фибробластов эмбрионов кур

ИФА

РН

База апробация

Исоледова- • но проб Положительные результаты

абс.Д

абс.Д

1. ГППЗ "Большевик* • мясная птица» молодки родительского стада

2. 0Ш Казахское ЗОСП, яичная птица, молодик родительского стада

3. "IT, куры породы белу& леггорн.возраот .

4. Виварий ВНИВЩ, под-

опытнал цтича, белыа

■ леггорн. /v.

5. Каарепервоокая лэсовод-•ческая опытная станция, перепела кэ СЮ-стада

6» Рыбшшстй мемптицасоь-

СССР,;

' тельско» стадо* возраст • 186 да

7. Ломоносовская птицефвб-мд», кгом«_во*раот 180 як Лен. обл.

б. Кировская пт возраст 68-11 tv Кяров

ика

да

574

120

247

112

120

125

20

86

58/10,1 12/2,0

21/17,5 3/2,5

37/15,1 0/0

52/46,8 17/15,1

0/0

50/40

.1/5

54/62,7

0/0

5/4

1404 273/24,6 37/3,9

- 15 -

При сопоставлении результатов исследования сывороток крови на наличие антител к ВЛСП методами РН в культуре фябробластов эмбрионов кур и ИФА отметили постоянное преимущество последнего метода: процент положительных сывороток 3,9 и 24,6 соответственно названным методам.

Из табл.'г видно, что в ходе апробации ИФА тест-системы уо-тановлено широкое распространение птиц-носитолей антител к вирусам лейкоз-саркомных болезней п*иц во всех стадах птицефабрик и племзаподов отдельных регионов страны. Кроме того, в наших производи ценных опнтах было такие подтверждено, что чувствительность им превышает чунствительность РН: процент выяаляемо-с'и антител к Ш1СП в ИФА намного выше, чем в PH.

В табл.3 приведены результаты исследования сывороток крови от молодняка кур прародительского стада с помощью ИФА тост-системы. Цель о ""их исследований - установить по данным наличия или отсутствия литя^ол ВЛСП чувствительность молодняка прародительского стада к заражению вирусами лейкоза-саркомы птиц.

Из табл.3 видно, что 15 % петушков 120-дн возраста от общего количества взятых в опыт, содержат в сыворотке крови антитела к ВЛСП, в то время как количество курочек, содержащих те же актитола, составляот 9,16 %. Как известно, у петушков редко обнаруживаются антитела к ВЛСП. Факт наличия антител к ВЛСП у п»-тушчоп, как и у взрослых петухов, является показателем ослабления естественной и специфической устойчивости птицы к заражению вирусами .''mit<o:m-caj)Kouu п*иц. Появление такого показателя ука-зип'шт н;i ослаблотю естественной и специфической защиты организма птицы, что часто случаптся при селекции птицы на высокую продуктивность.

Таблица 3.

Исследование оывороток крови от молодняка кур прародительского стада о помощью ИФА тест-системы

Хозяйство

Количество проб

Положительные результаты абс.А

I. РСФСР, ГППЗ "Большевик",

курочки 120 ДН 120

петушки 120 ДН 20

Всего*.

140

11/9,16 3/15

14/12,08

2. Казахская ССР, Алма-Атинская бройлерная птицефабрика: *.

куря 180 дн • 220

курочки 120

петушки 40

Всего:

380

57/25,9 6/6,6 5/12,5

70/15,0

• Результаты апробации Ш, тест-системы свидетельствуют о целесообразности применения разработанной иммуноферментной еяотеш в практических условиях. Они могут быть использованы ветеринарным врачей для организации борьбы с лейкоз-саркомкы-мж болезнями птиц, а селекционером - для совершенствования селекционной работы, При этом следует подчеркнуть, что преи-¿удеотво ИВА твст-сяотвмы веред РН в культуре фибробластов ембриоиой кур подтверждено во всех опытах - комиссионных и производственных, в таи жа при постановке контролей к ним о

- 17 -

многочисленными гетерогенными антигенами - возбудителями на»-более распространенных в птицехозяйствах болезней п^иц.

ВЫВОДЫ

1. Экспериментально обоснована целесообразность использования в Шк таст-системе при определении антител к 4-м серологическим подгруппам вирусов лейкоз-саркомной группы очищенного вируса миолобластоза птиц /штамм Ai.iV/, основанная на группо-специ^ической общности указанных вирусов и вырабатываемых в организме птиц антител.

2. Научно обоснованы и разработаны критерии, обеспечивающие получение высокоактивной специфической гипериммунной оы-норотки к вирусу саркомы Рауса штаммы ВН-113У(НЛУ-1} и

вн-нзу»иу-г).

3. Оптимизированы условия получения основных компонентов ИФА тест-системы; концогс-риропанного антигена вируса миело-блаоюза птиц, иммуноперокендазного чонъюгата, а также обоо-нопаны имкунохимичосчио и физико-химические критерии, определяющие высокую чувствительность, специфичность и воспроизводимость достоверного анализа.

4. Вперено в стране разработан ме*од диагностики лейкоза [тип на основе твердофазного ИФА. Сконструированная 1№А тест-система для индикации антител к Ш!СП обеспечивает высокую специфичность - 97 % и воспроизводимость точного анализа /ко-п|>!)ШВ1ент пар падая 3 55/.

5. Апробация в широком опыте разработанной ИФА тест-системы спидгт'льещуат о высоко!! чувствительности метода при оп-родр.чонии ан-нгел к МОП н сшюротках крови одних й тех же

- 18 -

кур, превышающей чувствительность РН в культуре фиброблаотов вибрионов кур в 100-150 раз. Установлено широкое распространение носителей антител к возбудителям лейкоз-саркомных болезней птиц в различных регионах страны.

6. При необходимости серотипирования выявленных в сыворотках крови антител к вирусам лейкоза-саркомы птиц целесообразно использовать РН ин витро, что экономически выгодно.

7. Полученные данные позволяют рассматривать разработанную ИФА тест-систему как универсальный метод контроля кур и перепелов на наличие антител к вирусам лейкоз-саркомной группы птиц.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ «

На основании проведанных исследований предложены методические рекомендации "Определение методом иммуноферментного анализа антител к вирусам лейкоз-саркомной группы птиц", одобренные ученым советом Всесоюзного НИВИ птицеводства 4.07.1989 г. для использования в лабораториях и научно-исследовательских учреждениях Государственной комиссии при С1Л СССР по продовольствию я закупкам при индикации антител к вирусам лейкоз-саркомной группы птиц.

Рекомендовано применять отработанную нами ИФА тест-систему длЯ индикации антител к вирусам лейкоза-саркомы п^иц в соответствии с разработанными в соавторстве рекомендациями:

"Методические рекомендации по отбору, контролю и эксплуатации Шб-птицв", рекомендованы ГУВ Госагропрома СССР 13.08.1986

"Создание устойчивых к неоплазмам линий и пород птицы", одобрены ГУВ Госагропрома СССР 13.08.1986 г.;

- 19 -

"Ветпринарно-санитарные требования к перепелиным СШ-фер-мам, продающим биопредприятиям инкубационное яйцо", утверждены Управлением ветеринарии Госагропрома Эстонской ССР 22,12.1987г.

СПИСОК НАУЧ1ШХ РАБОТ, ОПУШКОВЛННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зеленский В.И., Козлова Н.И., Абдукалнкова С.Т., Бор«-сенко С.В., Зарецкая Л.И., Горбачев E.H. Антигены онкорнави-русов в иммуноферментном анализе //Достижения ветеринарной науки и практики по повышению продуктивности е.-х. животных: Тез. докл,республ.конф. - Тарту, 1988. - Т.2. - С. 97-98.

2. Абдукшшкова СЛ., Зеленский В.П., Горбачев В.Н.,. Артю-хов А.И, Индикация антител к вирусам лейкоз-саркомной группы птиц ИМ методом //Комплексная система нет.мероприятий в пти-цеводстпе - резерв нопчшения эффективности производства: Тез. докл. Псесоюз.науч.-проиэводст.конф,, сентябрь 1989 г. - Л., 1982. -С. 22-23.

3. Абдукалыковя С.Т,, Зелонский В.П., Горбачев E.H., Артю-хов А,И, Иммуноформентный метод диагностики лейкоза птиц //Доклады ВЛСХШ. - 1920, - /в печати/.

4. Абдукалыкова С.Т,, Горбачев E.H. Иммуноферментный анализ при диагностике лейкоза птиц //Сб.иаучн.тр. /Омский госуд. вот,ян—«г. - /в печати/.