Иммуноферментная тест-система для диагностики хламидиоза пушных зверей

Моисеев, Александр Викторович

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммуноферментная тест-система для диагностики хламидиоза пушных зверей

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Моисеев, Александр Викторович Щелково 2000 г.

Ученая степень: кандидата ветеринарных наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Иммуноферментная тест-система для диагностики хламидиоза пушных зверей

На правах рукописи УДК 619:616-07

Моисеев ^ександр Викторович

РГБ ОД

1 У АПР 2СГ-П

ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ (ЛИСА, НОРКА И ПЕСЕЦ)

16.00.03 — Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Щелково - 2000

Работа выполнена в отделе обеспечения качества лекарственны средств для. ветеринарии и животноводства Всероссийского научнс исследовательского и технологического института биологическо промышленности (ВНИТИБП) и институте вирусологии им. Д.Р Ивановского.

Научный руководитель - БЕЛОУСОВ Василий Ивановичудоктор ветеринарных наук.

Научный консультант - КАРАВАЕВ Юрий Дмитриевич,Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор.

Официальные оппоненты:

- КУЗНЕЦОВА Светлана Владимировна, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник (ВНИТИБП, г. Щелково).

- ГРУЗДЕВ Константин Николаевич, доктор ветеринарных наук, профессор (ВГНКИ, г. Москва).

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательски! институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (г. Москва).

Защита диссертации состоится (ХоЦрС2000 года в 10 часо1 на заседании специализированного совета К 120. 17. 01 по защит! диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук пр! Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институт« биологической промышленности по адресу: 141142, п/о Кашинцево Московская обл., Щелковский район, ВНИТИБП.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИТИБП. Автореферат разослан Д// марта 2000 года.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук / Ю.Д. Фролов

1.1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1. Актуальность темы. Хламидиозы - группа контагиозных болезней человека, млекопитающих и птиц, вызываемых антигеннородственными и морфологически аналогичными микроорганизмами - хламидиями (Терских И.И., 1979; Хазипов Н.З. и др., 1984; Белоусов В.И/, 1997; Хамадеев Р.Х., Ра-вилов А.З., 1997; Обухов И.Л. и др., 1998; Караваев Ю.Д. и др., 1999; Garon et al., 1954, 1955; Schachter et al., 1975 и другие).

Антигены, присутствующие на поверхности хламидий, классифицируют на родо-, видо- и подвидоспецифические (Караваев Ю.Д. и др., 1998). Все виды хламидий имеют общий термостабильный родоспецифический антиген (ЛПС-липополисахарид). Видо- и типоспецифические антигены - термолабильные белки (Обухов И.Л. и др., 1998).

Для сельского хозяйства существенное значение имеет возбудитель хламидиоза животных Chlamydiaceae psittaci - облигатный внутриклеточный паразит, который обладает уникальным циклом развития. У сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот, овцы, свиньи и птицы), в зависимости от места локализации возбудителя, регистрируют пневмонию, конъюнктивит, артрит, энтерит, энцефаломиелит (Терских И.И, 1954, 1979; French, 1959; Blanco, 1968; Iohnsen F.W.A., 1984; Ishida Т. et al.,1987; Horchler H., 1987; Караваев Ю.Д., 1976-1998; Митрафанов П.М., 1980; Гаффоров X.3., 1984; Равилов А.З., 1984; Конопаткин А.А., 1989; Хамадеев Р.Х. и др., 19911997 и другие).

В последние годы появились данные о возможной роли Chlamydiaceae psittaci в этиологии абортов у пушных зверей в звероводческих хозяйствах нашей страны (Равилов Р.Х, 1988-1999; Набиев Ф.Г., Литвиненко И.И., 1989; Шелим О.С., 1990). Это связано с неблагополучной эпизоотической обстановкой среди сельскохозяйственных животных, а также с ухудшением или отсутствием контроля за кормовой базой, так как установлено, что обостре-

ние хламидиоза регистрируется при снижении качества кормления и использовании в качестве кормов отходов от продукции птицефабрик, неблагополучных по орнитозу.

У нас в стране имеются единичные сообщения об обнаружении хламидиоза у пушных зверей (Равилов Р.Х.,1999).

Выделены возбудители хламидиоза от песцов и серебристо-черных лисиц, однако иммуноферментная диагностика хламидиоза пушных зверей не разработана и в звероводческой практике не применяется. Все это определяет значимость и актуальность данной работы.

1.1. Цели и задачи исследований. Отсутствие надежной диагностики и методов классификации внутри видов определяют цель и задачи данного исследования. Цель настоящих исследований - разработка иммуноферментной тест-системы для диагностики хламидиоза пушных зверей (лиса, норка, песец).

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

- выделить и провести идентификацию хламидий от пушных зверей;

- отработать методы очистки и концентрирования хламидий;

- получить специфические к хламидиям сыворотки;

- оптимизировать процесс получения конъюгатов антител с пероксидазой хрена (норка, песец, лисица);

- отработать оптимальные условия постановки ИФА;

- разработать тест-систему для выявления антител к хламидиям методом ИФА;

- испытать тест-систему ИФА для диагностики хламидиоза у пушных зверей в лабораторных условиях.

1.2. Научная новизна. Впервые изучены биологические свойства хламидий, выделенных от пушных зверей (лиса, норка и песец); сконструирован набор ИФА для диагностики хламидиоза у пушных зверей; отработаны тех-

нологические процессы производства компонентов набора и условия постановки ИФА.

Основные положения научной новизны работы защищены получением из Российского агентства по патентам и товарным знакам (Роспатент) Федерального института промышленной собственности уведомления о положительном результате формальной экспертизы № 98110904/13 (011874) с приоритетом 02.06.98 г.

1.3. Практическая значимость работы. Впервые в нашей стране разработана высокочувствительная и специфичная иммуноферментная тест-система для диагностики хламидиоза пушных зверей (лиса, норка, песец). Разработаны дополнения к «Временной инструкции по изготовлению имму-ноферментной тест-системы для диагностики хламидиоза пушных зверей (лисица, норка, песец)» и дополнения к «Наставлению по проведению ИФА при диагностике хламидиоза пушных зверей», утвержденных директором ВНИТИБП.

1.4. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены

на:

Международной научно-практической конференции, посвященной ЮОлетию открытия вируса ящура (Владимир, 1997);

- Всероссийской конференции к 100-летнему юбилею ВИЭВ (Москва, 1998);

- Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 70-летию со дня рождения профессора В.А. Першина (Щелково, 1998).

- Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения Н.Ф. Чуклова (Щелково, 1998);

- заседаниях ученого совета ВНИТИБП (1996-2000).

1.5. Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 8 статей, получено положительное решение о выдаче патента на изобретение.

1.6. Основные положения диссертации, выдвигаемые для защиты:

- изолирование, выделение и идентификация возбудителей хламидиозов пушных зверей, изучение их свойств;

- разработка иммуноферментной тест-системы для диагностики хламидиоза пушных зверей (лиса, норка, песец).

1.7. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на /'¿"/ стр. машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы и приложения. Диссертация иллюстрирована

¡2 таблицами и ¿^графиками. Список литературы содержит 465 источников, в т.ч. 284 зарубежных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

Исследования по разработке диагностики хламидиозов плотоядных (лиса, норка, песец) проводились в 1996-2000 годах в ВНИТИБП, ВИЭВ и институте вирусологии им. Д.И. Ивановского.

В работе были использованы 3 изолята хламидий - возбудителей хламидиозов лисы, норки, песца и штамм «Улетово-96» крупного рогатого скота, выделенные в неблагополучных хозяйствах и полученные от других исследователей. Все изоляты адаптированы к размножению в куриных эмбрионах. В качестве бактериальной массы использовали очищенные суспензии желточных оболочек КЭ, инфицированные хламидиями. Использованы:

- антихламидиозные и антивидовые сыворотки белых мышей, морских свинок, лисиц, норок и песцов - 231 проба;

- сыворотки лисиц, песцов, норок, подозрительных по заболеванию, поступившие из хозяйств, ветеринарных учреждений - 687 проб;

- 27 проб патологического и клинического материала, полученного от больных животных, "неблагополучно" ощенившихся плотоядных (лисиц, норок, песцов), абортированных плодов и павших в первые дни жизни щенков;

- 6-7 - дневные развивающиеся куриные эмбрионы - 1500;

- белые мыши массой 10-25 г - 20;

- морские свинки массой 150-350 г -18;

- кролики массой 2,5-3 кг - 22;

- лисицы в возрасте 1-2 года - 8;

- щенки лисицы 5-6-месячного возраста - 53;

- щенки норки 3-6-месячного возраста -67;

- щенки песца 3-5-месячного возраста - 51.

При выделении хламидий первичным инфекционным материалом служили: органы абортированных плодов; плодные оболочки; органы щенков, павших в первые дни жизни; смывы с конъюнктивы и со слизистой оболочки влагалища; истечения из мочеполового канала.

Из патологического материала готовили 10%-ные суспензии, в которые для подавления сопутствующей микрофлоры добавляли стрептомицин (до 500 мкг/мл) и гентамицин (150 мкг/мл). Контакт с антибиотиками составлял 1-2 часа при комнатной температуре или 16-18 часов при 4 С. Выделение возбудителей проводили на 6-7-дневных развивающихся куриных эмбрионах после заражения в желточный мешок но общепринятой методике, доза заражения составляла 0,3 мл.

Павшие в течение первых 3 дней после заражения эмбрионы уничтожали, считая их гибель неспецифической. Начиная с 4-го дня погибшие эмбрионы вскрывали и извлекали желточные мешки, готовили мазки-отпечатки и окрашивали по модифицированному методу Стемпа. Вскрытые эмбрионы проверяли на отсутствие посторонней контаминации путем световой микроскопии и посева на питательные среды.

При отсутствии гибели КЭ или элементарных телец хламидий в мазках-отпечатках проводили 2 слепых пассажа. В случае, если КЭ не погибали при трех последовательных пассажах или результаты микроскопических исследований были отрицательными, считали, что исследуемый материал хламидий не содержит.

Инфекционные свойства выделенных изолятОв хламидий поддерживали последовательными пассажами на КЭ. Идентификацию выделенных агентов осуществляли на основе изучения морфологических, тинкггориальных, биологических и антигенных свойств. Инфекционный титр (ЭЛДзо/О.З мл) изолятов определяли титрованием на КЭ заражением их десятикратными разведениями хламидиосодержащих взвесей. .

Для длительного хранения используемые или вновь выделенные изоля-ты хламидий высушивали методом лиофильной сушки. Для этого из желточных мешков готовили 20%-ную суспензию на 0,2 М фосфатном буфере и центрифугировали при 2000 g в течение 30 минут. К надосадочной жидкости в равном объеме добавляли среду высушивания, состоящую из обезжиренного молока, содержащего 15% сахарозы в конечной концентрации.

Выделение хламидий и изучение биологических свойств изолятов проводили совместно с Э.Ф. Токарик, Л .С. Люльковой, С.С. Ямниковой и В.И.Клкжиной.

Для изучения патогенности изолятов использовали тест на белых мышах. В этих целях готовили 10%-ную суспензию инфицированных хлами-диями желточных оболочек КЭ, имеющих инфекционный титр не менее 10"5 ЭЛДзо/0,3 мл.

Перед заражением приготовленные суспензии выдерживали при 4 С в течение 24-48 часов для снятия токсичности и затем центрифугировали при 2000g в течение 30 мин для осаждения балластных тканевых частиц. С целью подавления размножения неспецифических микроорганизмов к суспензиям добавляли стрептомицин (500 мкг/мл) и гентомицин (150 мкг/мл). Кон-

троль стерильности в отношении бактериальной и грибковой микрофлоры осуществляли путем высева на МПА, МПБ,МПГТБ под вазелиновым маслом, среду Сабуро.

Контрольным животным вводили суспензию, приготовленную аналогично из неинфицированных желточных мешков КЭ теми же способами и в тех же дозах. За зараженными животными наблюдали 30 дней.

У оставшихся в живых мышей изучали наличие в сыворотке крови противохламидийных антител в реакциях связывания комплемента и энзим-меченных антител.

Из тканей и органов зараженных животных (павших и убитых) проводили реизоляцию возбудителя на КЭ, а также индикацию возбудителей при помощи специфического антигена методом РСК.

Антигенную активность изолятов хламидий, выделенных от лисицы, норки и песца, определяли в реакции связывания комплемента путем сравнения титров антител гипериммунных сывороток морских свинок, полученных к вновь выделенным штаммам и штамму крупного рогатого скота (Улетово-96) при перекрестном взаимодействии их с антигенами из этих же изолятов.

Учет результатов реакции проводили согласно "Методическим указаниям по лабораторным исследованиям на хламидийные инфекции сельскохозяйственных животных", утвержденным ГУВ Госагропрома СССР 15 апреля 198б г.

Для получения гипериммунных сывороток использовали морских свинок, которых иммунизировали суспензиями хламидий, очищенными и сконцентрированными дифференциальным и на градиенте сахарозы центрифугированием. Иммунизацию проводили трехкратно с интервалом 3 и 20 дней; материал вводили внутрибрюшинно в дозе 1 мл; животных обескровливали на 10-й день после последней иммунизации.

Комплементсвязывающие антигены готовили согласно «Временной инструкции по изготовлению и контролю набора антигенов и сывороток для

серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных», утвержденной ГУВ Госагропрома СССР в 1987 году, а также применяли "Диагностикум хламидийный для РСК", изготавливаемый ВНИТИБП.

В процессе экспериментальных исследований использовали следующие серологические реакции: РСК и ИФА.

РСК ставили согласно "Методическим указаниям по лабораторным исследованиям на хламидийные инфекции сельскохозяйственных животных", утвержденным ГУВ Госагропрома СССР 15 апреля 1986 года.

ИФА ставили согласно методике, разработанной во ВНИТИБП.

Статистическую достоверность полученных данных определяли по методу Стьюдента.

Экономическую эффективность применения разработанного диагностического набора по выявлению больных лисиц, норок и песцов методом ИФА определяли в сравнении с использованием "Диагностикума хламидий-ного для РСК", изготавливаемого ВНИТИБП

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Выделение возбудителен хламидиоза от пушных зверей (лиса, норка, писец) на куриных эмбрионах

Выделение, идентификация и подбор изолята возбудителя заболевания - один из основных этапов в процессе разработки метода диагностики.

Основываясь на предварительных серологических исследованиях в качестве патологического материала использовали абортированные плоды, плодные оболочки и органы абортировавших самок, а также органы павших щенков пушных зверей. В качестве клинического материала использовали выделения из половых органов самцов и самок, смывы с конъюнктивы.

В 1997 г. из зверохозяйств Московской и Тульской областей были получены два абортированных плода от самок лис, которые доставили в лабораторию после аборта. Для выделения были использованы: печень, легкие и

желудок с содержимым от первого плода; печень, почки и легкие от второго. Из полученных 6 проб патологического материала готовили, в трех повторах, 10%-ные суспензии на 0,2 М фосфатном буфере (рН 7,2-7,4) и заражали в желточные мешки б-7-дневных развивающихся куриных эмбрионов, полученных из птицеводческих хозяйств, благополучных по респираторному ми-коплазмозу и орнитозу. Возбудитель (хламидии) был выделен при первом же пассаже в КЭ изолята из тканей легкого абортированного плода лисицы. При вскрытии их отмечали гиперемию, отек желточного мешка и ХАО, а также множественные кровоизлияния в области головы и конечностей эмбриона. При микроскопировании мазков-отпечатков, приготовленных из кусочков желточного мешка павших эмбрионов и окрашенных по модифицированному методу Стемпа, выявлялись фиолетово-красные элементарные тельца кокковидной формы на зеленовато-синем фоне препарата. При окраске мазков-отпечатков флуоресцирующими иммуноглобулинами в цитоплазме клеток обнаруживали специфическое свечение антигена хламидии. В дальнейшем из очищенной культуры изолята готовили комплемент-связывающий антиген, который испытывали в РСК в параллельных реакциях со стандартным хламидийным диагностикумом и позитивными сыворотками. В качестве стандартных использовали антигены, изготовленные из возбудителя хлами-диоза крупного рогатого скота (Улетово-96 ВНИТИБП).

Полученный изолят был назван "Л-1". Изолят адаптирован к размножению в желточной оболочке куриных эмбрионов. Погибшие зараженные КЭ были бактериологически стерильными.

Учитывая результаты выделения и идентификации в РСК, а также данные предварительных серологических исследований "полевых" сывороток, выделенный изолят микроорганизмов был отнесен к роду СЫатуёорЫ1а.

В 1998 г. в зверохозяйствах Московской, Тульской и других областей от абортировавших самок песца и норок был получен патологический мате-риал:паренхиматозные органы и плодные оболочки вынужденно убитых

абортировавших самок. Хламидии были выделены из плодных оболочек. Идентификацию изолятов проводили в РСК, как описано выше. Изоляты были названы соответственно "П-3" и "Н-3", они также адаптированы к размножению в желточной оболочке развивающихся КЭ.

В последующем хламидии были выделены и идентифицированы из плодных оболочек и органов абортировавших самок, абортированных плодов и павших щенков пушных зверей.

Из 11 проб, подвергнутых исследованию, хламидии удалось выделить в 7 случаях, что составляет 64%. Частота и скорость выделения возбудителей зависела от своевременности взятия, условий доставки и хранения до исследования, контаминированности сопутствующей микрофлорой и вирулентности возбудителя. В большинстве случаев 50-90% инфицированных КЭ погибали на 7-12-й день уже в первом пассаже, а в последующих вызывали 100%-ную гибель КЭ на 5-8-е сутки после заражения.

3.2. Биологические свойства изолятов хламидий В данном разделе работы были использованы изоляты хламидий, выделенные от лисиц, норок и песцов. Краткая характеристика этих изолятов представлена в таблице. -

Все изучаемые изоляты были адаптированы к размножению в желточных оболочках развивающихся куриных эмбрионов.

Номер п/п Вид животных Число ГЦ) об Патологический материал Число изолятов

плодные оболочки органы

абортировавших самок абортированных плодов павших щенков

1 Лисица 4 - - + + 1

2 Норка 4 - • - + - 3

3 Песец 3 - - + - 3

Итого: 11 з 3 3 7

Обозначения: " + " - хламидии выделены;

" -" - хламидии не выделены.

3.2.1. Изучение морфологии хламидий

Морфологию элементарных телец и цитоплазматических скоплений антигена изолятов хламидии "Л-1", "Н-3" и "П-3" изучали с помощью обычной световой,а также люминесцентной микроскопии.

При исследовании под иммерсионной системой светового микроскопа мазков-отпечатков, приготовленных из желточных-оболочек развивающихся КЭ, инфицированных вышеназванными изолятами и окрашенных по модифицированному методу Стемпа, элементарные тельца хламидий обнаруживались в виде красно-фиолетовых точек на зеленовато-синем фоне препарата. Возбудитель находился как внутри, так и вне клеток, располагаясь одиночно и группами.

3.2.2. Патогенность изучаемых изолятов хламидий для куриных эмбрионов п лабораторных животных

Все изучаемые нами изоляты вызывают гибель развивающихся куриных эмбрионов на 5-10-й день после заражения, вызывая у них генерализованную форму инфекции при инфицировании в желточный мешок по общепринятой методике и инкубации в термостате при температуре +37-3 8°С, относительной влажности воздуха - 60-75%. При вскрытии павших куриных эмбрионов отмечали: утончение и гиперемию желточных оболочек, разжижение желтка, отек аллантоисной оболочки и подкожной клетчатки зародыша, точечные кровоизлияния в области головы, шеи и туловиша. В мазках-отпечатках, приготовленных из желточных оболочек павших КЭ и окрашенных по модифицированному методу Стемпа, обнаруживали значительное количество элементарных телец, располагающихся внутри и вне клеток, и идентифицированные по тинкториальным свойствам как хламидии.

Инфекционный титр для КЭ изолятов составляет: "Л-1" - 10"6, "Н-3" и "П-3" - Ю-6 - Ю-7 и Улетово-96 - 10"7 - 10"9 ЭЛД 5о/0,3 мл.

Патогенность изолятов, выделенных от пушных зверей, изучали на белых мышах и морских свинках. Исследования проводили в сравнении друг с другом и с штаммом Улетово-96.

Наиболее подходящей моделью для лабораторного изучения возбудителей группы хламидии считаются белые мыши, которых заражали интрана-зально и внутрибрюшинно.

Несколько большую патогенность для белых мышей показали изоляты, выделенные от крупного рогатого скота, при интраназальном заражении. При этом штамм Улетово-96 вызвал гибель 80-90% инфицированных лабораторных животных при введении хламидиосодержащей суспензии, тогда как хламидии, изолированные от пушных зверей, вызывали гибель мышей, зараженных вышеназванным способом, лишь в 50-70% случаев. Таким образом, изоляты "Л-1", "Н-3" и "П-3" при внутрибрюшинном и интраназальном заражении отличались меньшей патогенностью (Р<0,05).

При интраназальном инфицировании белые мыши заболевали на 3-4-й день. У них развивалась вялость, отсутствие пищевой возбудимости, шерсть теряла блеск, наблюдался конъюнктивит. Гибель зараженных наступала на 67-е сутки после введения возбудителя. При вскрытии наблюдали очаговое или генерализованное поражение легких. Из патологического материала от павших белых мышей во всех случаях хламидии были реизолированы и идентифицированы.

При внутрибрюшинном заражении у животных отмечали развитие слабых признаков заболевания на 4-7-е сутки после инъекций в виде угнетения, отсутствия пищевой возбудимости, малоподвижности. У 50% из них болезнь приобретала злокачественный характер и они погибали на 8-12-е сутки. При вскрытии у павших обнаруживали скопление жидкости в брюшной полости и увеличение селезенки (внутрибрюшинное заражение), увеличение и кровенаполнение печени и селезенки (подкожное инфицирование). Возбудитель также был реизолирован и идентифицирован.

Оставшиеся в живых зараженные белые мыши через месяц после введения хламидий были убиты. От них путем декапитации брали кровь для выявления специфических антител в РСК и ИФА. Следует отметить, что в опытах проводился контроль с помощью плацебо и спонтанной гибели белых мышей. Введение 0,2 М фосфатного буфера (рН 7,2-7,4) всеми вышеназванными способами не вызывало никакой реакции.

При изучении патогенности изолятов возбудителей хламидиозов пушных зверей (лисица, норка, песец) и крупного рогатого скота при разных способах заражения также использовали морских свинок. При внутрибрюшин-ном и интраназальном введении 10%-ных хламидиосодержащих суспензий у морских свинок наблюдалась слабовыраженная реакция в виде повышения температуры тела до 39,4-39,6 °С, угнетенного состояния, снижения пищевой возбудимости, развития конъюнктивита на 2-3-и сутки после инфицирования, однако на 4-5-е сутки клиника заболевания исчезала и гибели этих животных ни один из вышеназванных изолятов не вызывал.

Выжившие после заражения лабораторные животные были убиты через месяц после инфицирования. Пробы сывороток крови от морских свинок были испытаны в реакции связывания комплемента и иммуноферментном анализе на наличие антихламидийных антител.

Установленно, что однократное парэнтеральное введение хламидиосо-держащего материала приводит к образованию в сыворотках крови специфических антител, выявляемых в РСК и ИФА, особенно со штаммом Улетово-96. Это говорит о высокой антигенной активности этого штамма.

При анализе результатов серологических исследований искусственно инфицированных лабораторных животных (белых мышей и морских свинок), можно сделать вывод, что ИФА в несколько раз чувствительнее РСК.

Таким образом, в результате сравнительного изучения установлена чувствительность лабораторных животных к введению трех изолятов, выде-

ленных от пушных зверей, и одного штамма, выделенного от крупного рогатого скота.

3.2.3. Антигенные свойства возбудителен хламидийных инфекций пушных зверей (лисица, норка, песец) и крупного рогатого скота

Антигенные свойства изолятов хламидий, выделенных от пушных зверей и крупного рогатого скота, изучали по способности инфекционного агента индуцировать формирование специфических антител, выявляемых в реакции связывания комплемента. Для сравнительного анализа в перекрестных реакциях были использованы антигены, приготовленные из изолятов: "Л-1" -возбудитель хламидиоза лисиц, "Н-3"- хламидиоза норки, "П-3" - хламидиоза песцов и Улетово-96 - хламидиоза крупного рогатого скота, а также гипериммунные сыворотки морских свинок, полученные к вышеназванным изо-лятам.

Установили, что изоляты, выделенные от пушных зверей, обладают меньшей антигенной активностью по сравнению с производственным штаммом Улстово-96.

Таким образом, мы сочли целесообразным использовать для промышленной разработки и дальнейшего производства диагностикума хламидиоза пушных зверей (лисица, норка, песец) штамм Улетово-96.

Однако антигены хламидий, полученные из штаммов, выделенных от пушных зверей, также были пригодны для постановки ИФА.

3.3. РАЗРАБОТКА ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ 3.3.1. Проведение исследований по получению мажорного белка наружной мембраны хламидии

Для приготовления антигена из хламидий использовали штамм Улетово-96, адаптированный к куриному эмбриону заражением в желточный ме-

шок. При проведении исследований по культивированию хламидий, с целью получения специфических антигенных структур, использовали нативный и лиофилизированный материал.

Нами установлено, что для восстановления высокой репродуктивной способности необходимо провести 2-3 пассажа. Это позволит увеличить в 10100 раз количество специфического материала.

Мажорный белок наружной мембраны выделяли по методу Coldweel H.D. и др. Электрофорез в ДСН-ПААГ проводили по прописи Li и Magee.

■ Для выделения мажорного'белка наружной мембраны хламидии инкубировали с 2 %-ным Саркосилом (N-лауроилсаркозин, Sigma Chemical Co., St. Louis, МО) при 37,1°C. Надосадочную жидкость центрифугировали при 100000g, 1ч. Осадок ресуспендировали, инкубировали и центрифугировали, как описано выше. Осадок промывали 10 мл ФБР (10 мМ фосфатный буфер, рН 7,4) дважды и ресуспендировали в ФБР до концентрации по белку 1 мг/мл.

Далее МБНМ выделяли электрофорезом в ДСН-МБНМ. Белок концентрировали осаждением 10%-ной трихлоруксусной кислотой (ТХУ) при 0°С. Осадок собирали центрифугированием при 5000g в течение 15 минут, ресуспендировали в ацетоне и осаждали вновь. Затем его ресуспендировали в дезинтегрирующем буфере (62,5 мМ Трис, 2,25% ДСН, 12,5% глицерин, 5% 2-меркаптоэтанол и 0,01% бром-фенол голубой рН 6,8) до конечной концентрации 1 мг/мл и инкубировали 3 минуты на кипящей водяной бане. Образцы по 50 мкл наносили на концентрирующий 5%-ный гель при 60 V в течение 20 минут, затем разделяли белки в 10-15 %-ном линейном градиенте ДСН-ПААГ в течение 6 часов при 140 V. Гель охлаждался циркулирующей водой при 4°С. После проведения электрофореза белковые полосы окрашивали 0,2 M КС1, вырезали соответствующий неокрашенный слой МБНМ и хлорировали элюционным буфером (10 мМ ФБР с 0,25 % додецилсульфата натрия и

0,5 % 2-меркаптоэтанол) при 4 С в течение 48 ч. Образец диализовали против ФБР 48 ч и концентрировали по белку до 1 мг/мл.

3.3.2. Получение иммунных антнхламидийных, специфических антител

и АНТИ- IgG пушных зверей (лиса, норка и песец) 3.3.2.1. Изучение динамики уровня хламидийных антител в сыворотках крови пушных зверей, иммунизированных вакциной при получении сывороток

Для получения иммунных сывороток использовали 3-5 месячных самцов лис (53самца), норок (67самцов) и песцов (51 самец). Неиммунных (не содержащих специфических антител) пушных зверей иммунизировали эмульсинвакциной (ВИЭВ) внутримышечно в объеме 2 мл. Затем через 20, 30 и 50 дней после вакцинации у пушных зверей брали кровь. Отобранные сыворотки с наибольшим титром после очистки использовали для изготовления наборов ИФА. Сыворотки пушных зверей (лисица, норка и песец), не содержащие специфические антитела к хламидиозному антигену, получали от животных из контрольной группы.

3.3.2.2. Выделение иммуноглобулинов класса G из сыворотки лисиц,

норок и песцов

Известны методы выделения иммуноглобулинов из сыворотки крови норки хроматографией на колонке с ДЕАЕ-целлюлозой и сефадексом G-200 (Яковлева К.Е., 1981; Шеленок Л.В. ссоазт., 1986).

В основу нашего метода положен способ выделения иммуноглобулина G из сыворотки крови пушных зверей (лисица, норка и песец) с помощью ионообменника ДЕАЕ-сефаде"кса А-50.

Выход иммуноглобулина G лисиц, норок и песцов определяли, исходя из величины ОП28о объединенного элюата.

Выход очищенного иммуноглобулина класса в лисы составил 260 мг, норки -180мг, песца - 230мг. Чистоту препарата проверяли электрофорезом в полиакриламидном геле (ПААГ) - 7,5 % в Трис-НС1-буфере, рН 8,3. По окончании электрофореза гелевые столбики окрашивали 1 %-ным раствором амидо-черного в 7%-ном растворе уксусной кислоты и отмывали 7%-ным раствором уксусной кислоты.

3.3.2.3. Получение анти-^ в лисиц, норок и песцов

из гипернммунной сыворотки

Гипериммунную анти-^О лисиц, норок и песцов сыворотку крови получали от кроликов массой 2,5-3,0 кг, приобретенных из благополучного по инфекционным болезням хозяйства, прошедших 12-дневный карантин.

В качестве антигена использовали 1§0 из сывороток крови лисиц, норок и пгсцов, полученный как описано выше. Сыворотку получали по схеме получения гипериммунной сыворотки.

Кровь, полученную от кроликов, выдерживали в течение часа при комнатной температуре, затем отстаивали 14 часов при 4°С, сливали сыворотку и центрифугировали при 2000g, разливали во флаконы по 10 мл. Далее определяли иммуноэлектрофорезом специфичность и преципитирующую активность в реакции диффузионной преципитации. Хранили при -20°С.

После третьей ревакцинации были получены анти-^в сыворотки лисиц, норок и песцов с 'титром в РДП от 1:32 до 1:256.

3.3.2.4. Выделение антивидовых иммуноглобулинов

(анти-^С лисиц, норок и песцов)

Выделение антииммуноглобулинов проводили афинной хроматографией. Иммуносорбенты готовили методом иммобилизации очищенных препаратов ^О пушных зверей на ВгСп Сефарозе 4В по стандартной методике.

Синтезированный иммуносорбент хранили в колонке при 4°С в физиологическом буферном растворе, содержащем 0,01 % мертиолята.

Объем наносимой на колонку антисыворотки зависел от ее титра в РСК: чем ниже титр, тем больший объем.

Ход хроматограммы контролировали проточным ХФ-детектором "1ЫсогсГ, (диапазон оптической плотности 0-2)'и самописцем (скорость движения ленты 1 мм/мин). Смену элюирующих растворов осуществляли при достижении стационарного состояния по величине оптической плотности ОПао-

3.3.3. Меченне антивидовых иммуноглобулинов (анти-^ в лисиц, норок и песцов) ферментом пероксидазой В качестве фермента для маркирования антител использовали перокси-дазу из хрена (ПХ). Коньюгаты антииммуноглобулинов с ПХ синтезизовали периодатным методом.

Рабочее разведение полученных иммунопероксидазных конъюгатов варьировало от 1:8000 до 1:12000. При данных разведениях величина ОП490 в реакции с гомологичным антигеном составила не меньше 1,48 оптических единиц, с гетерологичным, соответственно - 0,02.

Получены стабильные конъюгаты, сохраняющие свою активность после лиофильного высушивания. Срок хранения конъюгатов 1,5 года.

3.3.4.Тест-система нммунофермсптиого анализа для диагностики хламидиозов пушных зверей Для выявления специфических антител к хламидиям в сыворотках животных нами получены очищенный и концентрированный антиген, специфическая и отрицательная антихламидиозная сыворотки и конъюгат анти-^О лисиц, норок и песцов с ПХ.

4.4.1. Оптимизация условий проведения иммунофермеитного анализа С целью оптимизации процесса постановки реакции, для увеличения точности, чувствительности и уменьшения расхода реактивов, необходимо подобрать концентрации используемых реагентов. Для определения оптимальной концентрации антигена при постановке ИФА его титровали с положительной сывороткой в разведении 1:200.

Постановку непрямого ИФА проводили по следующей схеме. Двукратные разведения антигена, начиная с 1:50 в объеме 100 мкл, адсорбировали в лунках полистирольных микроштат в течение 18 часов при +4°С, после чего микропланшеты пятикратно промывали ФБР, содержащем 0,05 % тритона Х-305, рН 7,2-7,4, и вносили по 100 мкл положительной сыворотки. Микропланшеты помещали в термостат на 1 час при 37°С и промывали, как описано выше. На следующей стадии микропланшеты обрабатывали антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом в объеме 100 мкл на лунку. Затем микропланшеты промывали. Реакцию проявляли субстратным раствором 0-фенилендиамина 30 минут и учитывали по показаниям ОП490 на считывающем устройстве «ОутШесЬ».

Оптимальное разведение антигена составило 1:400 (ОП49о равен 0,81,0), что обеспечивало высокий уровень оптической плотности и достоверное различие результатов со специфической и контрольной сывороткой.

Для определения пороговой чувствительности ИФА определяли зависимость величины ОП490 продукта реакции от разведения сыворотки. Опыт проводили при оптимальной концентрации сорбированного антигена вируса. Двукратные разведения положительной сыворотки начинали с разведения 1:200 до 1:51200. Достоверно регистрируемое различие в показаниях ОП490 (более чем в 2 раза) наблюдалось при разведениях специфической и контрольной сывороток с 1:200. При разведении ниже 1:200 наблюдается неспецифическое взаимодействие, что сказывается на результатах реакции.

Таким образом, была определена доза хламидий и положительных сывороток, которые могут быть использованы для диагностики хламидиозов пушных зверей иммуноферментным методом.

Проведенные нами исследования позволили разработать иммунофер-ментную универсальную тест-систему для диагностики пушных зверей (лиса, норка, песец) и на основе единого антигена готовить диагностикум не только для пушных зверей, но и сельскохозяйственных животных.

4.4.2. Диагностика хламидиоза пушных зверей методом иммуноферментного анализа Методом ИФА было исследовано более шестисот сывороток пушных зверей, полученных из различных хозяйств страны, и определены благополучные и неблагополучные хозяйства.

Из всех исследованных сывороток произвольно взяли 67 положительных в ИФА сывороток лис, 84 — норок и 72 - песца с установленными титрами и исследовали их в реакции связывания комплемента:

Сравнительные исследования сывороток в ИФА и в РСК показали, что образцы, котрые имели в РСК титр антител 1:2 и выше, давали в ИФА значение ОП490 (при разведении сывороток 1:200) выше 0,15. Кроме того, 14 отрицательных в РСК сывороток имели в ИФА небольшие положительные значения (ОП490- 0,166-0,178).

Из данных, полученных в результате исследований, видно, что чувствительность ИФА выше, чем РСК. Это показано выявлением большого числа антителосодержащих сывороток и показателями титров их активности. 14 сывороток, давшие отрицательный результат в РСК, оказались положительными в ИФА. Титр антител в ИФА был в 100-500 раз выше, чем в РСК.

Дисперсия результатов титрования сывороток двумя методами показывает выраженную корреляцию между титрами, полученными в ИФА и РСК.

Коэффициент корреляции между двумя методами высок: г= 0,94±0,06, Р < 0,01.

Результаты сравнения титров в РСК и значений ОП490 при фиксированном разведении сывороток - 1:200 показывает, что корреляция между титром сывороток в РСК и значениями ОП49о равна г= 0,82±0,1, Р < 0,01позволяет судить о наличии заболевания и ориентировочно судить по оптической плотности о титре в РСК.

Простой визуальный учет результатов ИФА позволяет оценивать положительные сыворотки, в связи с чем анализ может быть проведен в отсутствии спектрофотометра.

1. ВЫВОДЫ

1. Изоляты микроорганизмов Л-1, Н-3 и П-3, выделенные соответственно от лисиц, норок и песцов, по своим биологическим характеристикам (морфологическим, патогенности для лабораторных животных, токсичности, антигенным и иммуногенным свойствам) идентифицированы как представители рода СЫатус1орЫ1а.

2. При сравнительном изучении изолятов Л-1, Н-3, П-3 и штамма Улетово-96 наибольший спектр антигенного родства установлен у штамма Улето-во-96.

3. Доля восстановления высокой репродуктивной способности лиофильно высушенных хламидиозных штаммов необходимо перед промышленной расплодкой предварительно проводить 2-3 пассажа, что позволит увеличить выход специфического материала в 10-100 раз.

4. Разработанный способ очистки, концентрирования хламидий и выделения мажорного белка позволил получить эффективный специфический компонент для ИФА.

5. Двукратная иммунизация эмульсинвакциной (ВИЭВ) лисиц, норок и песцов вызывает накопление через 50 дней необходимого уровня специфических антител для использования их в ИФА.

6. Перйодатным методом получены антивидовые конъюгаты анти-IgG лисицы, анти-IgG норки и анти-IgG песца на основе аффинноочищенных антител, меченных пероксидазой. Показана их высокая активность и специфичность в ИФА. Отработана технологическая схема их получения.

7. Технология получения реагентов положена в основу производственного изготовления наборов для иммуноферментной индикации антител к хла-мидиям пушных зверей

2. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Изменения и дополнения вошли в инструкцию по изготовлению иммуноферментной тест-системы для диагностики хламидиозов овец, утвержденную в 1997 году.

2. Разработано дополнение к временному наставленшо по применению набора для иммуноферментной диагностики хламидиоза овец (в части диагностики хламидиоза пушных зверей).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Самуйленко А.Я., Албулов А.И., Бирюков А.Г., Моисеев A.B., Еремец В.И., Скичко Н.Д. Совершенствование промышленной технологии производства противоящурных вакцин с целью создания ассоциированных биопрепаратов.// Тезисы докладов конференции, посвященной 100-летию открытия вируса ящура «Проблемы инфекционной патологии сельскохозяйственных животных». -Владимир, 1997, с. 71.

2. Шишкин K.M., Усольцев В.М., Моисеев A.B., Пономарев А.Б. Диагностика и специфическая профилактика хламидиоза овец в Читинской области.// Всероссийская научно-производственная конференция «Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов», посвященная 70-летию со дня рождения профессора Першина В.А. -ВНИТИБП, Щелково, 1998, с. 33-34.

3. Моисеев A.B., Пономарев А.Б. Разработка иммуноферментной тест-системы для диагностики хламидиоза пушных зверей.// Всероссийская научно-производственная конференция «Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов», посвященная 70-летию со дня рождения профессора Першина В.А. -ВНИТИБП, Щелково, 1998, с. 35-36.

4. Моисеев A.B., Пономарев А.Б., Бирюков А.Г., Клюкина В.И., Белоусов В.И., Самуйленко А.Я. Разработка ИФА для .диагностики хламидиоза пушных зверей. // Всероссийская научно-производственная конференция «Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов», посвященная 75-летию со дня рождения Чуклова Н.Ф.-ВНИТИБП, Щелково, 1998, с. 24-25.

5. Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., Албулов А.И., Бирюков А.Г., Иванов B.C., Соловьев Б.В., Моисеев A.B. Потенциальные возможности использования современной биотехнологии в биологической промышленности России.// Тезисы докладов к 100-летнему юбилею ВИЭВ. - Москва, 1999, с.

6. Моисеев A.B. Хламидиоз пушных зверей.// Тезисы докладов к 100-летнему юбилею ВИЭВ. - Москва, 1999, с.

7. Белоусов В.И., Клюкина В.И., Самуйленко А.Я., Груздев К.Н., Бирюков А.Г., Токарик Б.И., Лмникова С.С., Моисеев A.B. Набор для серологической диагностики хламидиоза животных. / Уведомление о положительном решении формальной экспертизы по заявке на патент [№ 98110904/ (011874)]. Приоритет от 02.06.98 г.

8. Белоусов В.И., Самуйленко А.Я., Моисеев A.B. Выделение и изучение свойств штаммов хламидий животных в России.// Международная конференция «Хламидиозы». - Хельсинки, 2000 (в печати).

Оглавление диссертации Моисеев, Александр Викторович :: 2000 :: Щелково

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика возбудителя хламидиоза

1.2. Устойчивость к физико-химическим факторам и антимикробным веществам

1.2.1. Химический состав

1.2.2. Антигенная структура

1.3. Репродукция хламидий в культурах клеток, на куриных эмбрионах и лабораторных животных

1.3.1. Индикация и идентификация антигенов хламидий в патологическом материале

1.3.2. Серологические реакции

1.4. Тест-система ИФА при диагностике инфекционных болезней животных

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

2.1.1. Изоляты хламидий

2.1.2. Сыворотки и патологический материал

2.1.3. Подопытные животные и куриные эмбрионы

2.1.4. Выделение и идентификация возбудителей

2.1.5. Изучение биологических свойств изолированных микроорганизмов

2.1.5.1. Патогенность

2.1.5.2. Антигенные свойства

2.1.6. Серологические свойства

2.1.7. Статистическая обработка результатов исследований

2.2. Результаты собственных исследований

2.2.1. Выделение возбудителей хламидиоза от клеточных и домашних плотоядных на куриных эмбрионах

2.2.2. Биологические свойства изолятов хламидий

2.2.2.1. Изучение морфологии хламидий

2.2.2.2. Патогенность изучаемых изолятов хламидий для куриных эмбрионов и лабораторных животных

2.2.2.3. Антигенные свойства возбудителей хламидийных инфекций пушных зверей (лисица, норка и песец) и крупного рогатого скота

2.2.3. Разработка иммуноферментной тест-системы для диагностики хламидиоза пушных зверей

2.2.3.1. Проведение исследований по получению мажорного белка наружной мембраны хламидий

2.2.4. Получение иммунных антихламидийных, специфических антител и анти-^О пушных зверей лисица, норка и песец)

2.2.4.1. Изучение динамики уровня хламидийных антител в сыворотках крови пушных зверей, иммунизированных вакциной при получении сывороток

2.2.5. Выделение иммуноглобулинов класса О из сыворотки лисиц, норок и песцов

2.2.6.Получение анти-^О лисиц, норок и песцов из гипериммунной сыворотки

2.2.7. Выделение антивидовых иммуноглобулинов (анти-

§0 лисиц, норок и песцов)

2.2.8. Мечение антивидовых иммуноглобулинов (антикв лисиц, норок и песцов) ферментом пероксидазой

2.2.9. Тест-система иммуноферментного анализа для диагностики хламидиозов пушных зверей

2.2.9.1. Оптимизация условий проведения иммуноферментного анализа 88 2.2.10.Диагностика хламидиоза пушных зверей методом

Иммуноферментного анализа

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

4. ВЫВОДЫ

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Моисеев, Александр Викторович, автореферат

Актуальность темы. Хламидиозы - группа контагиозных болезней человека, млекопитающих и птиц, вызываемых антигеннородственными и морфологически аналогичными микроорганизмами - хламидиями (10, 133, 407 и др.). Комиссия Международной ассоциации микробиологических обществ (США) в 1980 г. отнесла их к бактериям семейства Chlamydiaceae, род Chlamydia, разделенного впоследствии на 4 вида: С. psittaci (болеют люди и птицы, у животных наблюдают аборты и другую патологию); С. trachomatis (патогенны для человека, регистрируют трахому, лимфогранулему, поражение урогенитальных органов); С. pneumoniae (пневмонию человека); С. pecorum (у животных аборты, полиартриты, энцефалиты, кератоконъюнктивиты, пневмонии, энтериты, маститы) (9, 100 И др.).

В 1999 году при изоляции целого ряда бактерий с жизненным циклом, аналогичным хламидиям, их сравнительное изучение с 60 штаммами хламидий всех видов позволил создать новую классификацию (180, 316) (таблица 1).

Антигены, присутствующие на поверхности хламидий, классифицируют на родо-, видо-, подвидо- и сероспецифические. Все виды хламидий имеют общий термостабильный родоспецифический антиген (ЛПС - липополисахарид). Видо- и типоспецифические антигены -термолабильные белки.

Возбудитель хламидиоза животных С. psittaci - облигатный внутриклеточный паразит, который обладает уникальным циклом развития. У сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот, овцы, свиньи и птицы) в зависимости от места локализации возбудителя регистрируют пневмонию, конъюнктивит, артрит, энтерит, энцефаломиелит (66, 69, 71, 72, 73, 94, 133, 141, 145, 146, 151 и др.). 6

Таблица 1

Новая классификация хламидий

Порядок Chlamy-diales

Семейства Chlamy-diaceae Parachla-mydiaceae Simaka-niaceae Wadd-liaceae

Род Chlamydia Chlamydo-phila Parachlamy-dia Simakania Waddlia

Виды Chlamydia trachomatis Chlamydophila pecorum Parachlamy-dia acantha-moebae Simakania negevensis Waddlia chondro-phila

Chlamydia suis Chlamydophila pneumonia

Chlamydia muridarum Chlamydophila psittaci

Chlamydophila abortus

Chlamydophila caviae

Chlamydophila felis

Биовары Chlamydia trachomatis Biovar Trachoma Biovar LGV Chlamydophila pneumonia Biovar TWAR Biovar Koala Biovar Equine 7

В последние годы зарегистрированы аборты хламидийной этиологии в звероводческих хозяйствах нашей страны (120, 121, 122, 123). Это связано с неблагополучной эпизоотической обстановкой среди сельскохозяйственных животных, а также с ухудшением кормовой базы, так как установлено, что обострение хламидиоза регистрируется при снижении качества кормления и содержания.

У нас в стране проводятся отдельные работы по вопросам диагностики хламидиоза пушных зверей (123). Выделены штаммы хламидий от песцов и серебристо-черных лисиц, однако диагностика хламидиоза пушных зверей не разработана и в звероводческой практике не применяется.

Цели и задачи исследований

Целью настоящих исследований явилась разработка иммуноферментной тест-системы для диагностики хламидиоза пушных зверей (лиса, норка, песец).

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: выделить и провести идентификацию хламидий от пушных зверей; отработать методы очистки и концентрации хламидий; получить специфические антигены хламидий; получить специфические к хламидиям сыворотки; оптимизировать процесс получения конъюгатов антител с пероксидазой из хрена (норка, песец, лисица); отработать оптимальные условия постановки ИФА; разработать тест-систему для выявления антител к хламидиям методом

ИФА; испытать тест-систему ИФА для диагностики хламидиоза у пушных зверей в лабораторных условиях. 8

Научная новизна

Впервые в нашей стране разработана высокочувствительная и специфичная иммуноферментная тест-система для диагностики хламидиоза пушных зверей, позволяющая выявлять инфицированных хламидиями животных.

Практическая значимость работы

Результаты, полученные при выполнении диссертации, позволили разработать дополнения к "Временной инструкции по изготоволению иммуноферментной тест-системы для диагностики хламидиоза пушных зверей (лисица, норка, песец)" и дополнения к "Наставлению по проведению ИФА при диагностике хламидиоза пушных зверей", утвержденных директором ВНИТИБП.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на: 1. Международной научно-практической конференции, посвященной

100-летию открытия вируса ящура (Владимир, 1997); 9

3. Всероссийской научно- практической конференции, посвященной 70-летию со дня рождения профессора В.А. Першина (Щелково, 1998);

4. Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения Н.Ф. Чуклова (Щелково, 1998);

5. Заседаниях ученого совета ВНИТИБП (1996-2000).

Публикация результатов исследования

По теме диссертации опубликовано 8 статей, получено положительное решение о выдаче патента на изобретение.

Основные положения диссертации, выдвигаемые для защиты: изолирование, выделение и идентификация возбудителей хламидиозов пушных зверей, изучение их свойств; разработка иммуноферментной тест-системы для диагностики хламидиоза пушных зверей (лиса, норка, песец).

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 151 странице машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы и приложения. Диссертация иллюстрирована 18 таблицами и 27 графиками. Список литературы содержит 465 источников, в т.ч. 284 зарубежных.

Заключение диссертационного исследования на тему "Иммуноферментная тест-система для диагностики хламидиоза пушных зверей"

4. ВЫВОДЫ

2. При сравнительном изучении изолятов Л-1, Н-3, П-3 и штамма Улетово-96 наибольший спектр антигенного родства установлен у штамма Улетово-96.

3. Для восстановления высокой репродуктивной способности лиофильно высушенных хламидиозных штаммов необходимо перед промышленной расплодкой предварительно проводить 2-3 пассажа, что позволит увеличить выход специфического материала в 10-100 раз.

6. Перйодатным методом получены антивидовые конъюгаты анти-^ в лисицы, анти-1§ в норки и анти-^ в песца на основе аффинноочищенных антител, меченных пероксидазой хрена. Показана их высокая активность и специфичность в ИФА. Отработана технологическая схема их получения.

7. Технология получения реагентов и методики проведения ИФА положены в основу производственного изготовления наборов для иммуноферментной индикации антител к хламидиям пушных зверей.

103

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Предложена для ветеринарной практики иммуноферментная тест-система для диагностики хламидиоза пушных зверей.

Использование метода ИФА дает возможность быстро и надежно установить диагноз на хламидиоз у лисиц, норок и песцов.

104

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2000 года, Моисеев, Александр Викторович

1. Абишева Ш.Б. К диагностике эпизоотического аборта овец // Вестник с/х науки. Алма-Ата, 1972. - № 7. - С. 52-56.

2. Абрамова Л.Н., Оболадзе Д.Б., Терских И.И. Характеристика хламидий, выделенных от домашних животных. Вопр. вирус. 1975.- 6.- С. 727-739.

3. Багдонас И., Лабутинас А. Изучение экспериментальной пневмонии телят, зараженных возбудителем группы хламидий / Труды Литовского НИИВ,- 1976. -С.5-14.

4. Байтурина О.Ш. Лечебно-профилактическая эффективность дибио-мицина при хламидиозе овец / Тр. Алма-Атинского зооветинститута. -1976.-Т. 34.-С. 85-89.

5. Байтурина О.Ш. Материалы к серологической диагностике вирусного аборта овец в хозяйствах юга Казахстана / Труды Алма-Атинского зооветинститута. 1969. - № 16. - С.48-53.

6. Бакулов И.А., Макаров В.В. Методы борьбы с вирусными болезнями животных.- Россельхоинздат.- М.-1976.- С.48-60.

7. Беклешова А.Ю. Болезни, вызываемые хламидиями. Хламидиозы.- В105кн.: инфекционные болезни животных.- М., Агропромиздат, 1987.- С. 141.

8. Белоусов В.И. Разработка промышленной технологии производства препаратов для специфической профилактики и диагностики хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза животных / Дисс. докт. биол. наук. М., 1997. - 371 с.

9. Белоусов В.И., Клюкина В.И., Кочиш И.И. Разработка набора для иммуноферментной серодиагностики хламидиоза овец / Вирусн. болезни с/х животных Владимир, 1995. - С.76.

10. Бескина С. Р., Панкратова В.Н., Попов В.П. Индикация антигенов гальпровий (хламидий) иммунопероксидазным методом / Сб. науч. тр.: Экология вирусов. Баку, 1976. - С.208-209.

11. Боровик Р.В., Курбанов И.А. Динамика содержания гуморальных и секреторных антител у крупного рогатого скота при хламидийной инфекции / Материалы X симпозиума по экологии вирусов. Баку, 1976. -С.206-208.

12. Боровик Р.В., Хамадеев Р.Х., Гаффаров Х.З., Шафикова P.A. Получение антигена энзоотического аборта овец с помощью РСК // Ветеринария. 1975. - №6. -С.51-53.

13. Бортничук В.А. Значение реакции иммунофлуоресценции при диагностике хламидиоза свиней // Микробиол. Ж. 1989,- № 1. - С. 12.106

14. Бортничук В.А. Хламидиоз свиней Киев: Урожай, 1991. - 192с.

15. Брагина Е.Е., Дмитриева Г. А. Морфологическое обоснование персистентного или латентного течения урогенитального хламидиоза / Тез. докл. 7 Рос.съезда дерматол. и венерол. Казань, 1996. - С 106.

16. Васильев A.B., Непоклонова И.В. Иммуноферментный метод в диагностике вирусных инфекций // Ветеринария. 1982. - № 8. - С. 63-65.

17. Введение в прикладную энзимологию. Иммобилизованные ферменты / Под ред. И.В. Березина и К. Мартенека. М.- МГУ.- 1982. -384 с.

18. Вишняков И.Ф., Цыбанова Л.Я. Иммуноферментный анализ // Ветеринария. 1983. - № 9. - С. 68-70.

19. Вишняков И.Ф., Цыбанова Л.Я., Молчанова Т.В. Иммуноферментный анализ при диагностике инфекционных болезней сельскохозяйственных животных / Вопр. вет.вирусол., эпиз. и микроб.: Тез.докл.научн.конф. Покров, 1983.-С.66-76.

20. Вишнякова Л.А. Иммунология орнитоза: Автореф. дис. докт. мед. наук. Ленинград, 1974. - 3 с.

21. Вустина У.Д., Воробьева В.Я. Источники инфекции клеточных пушных зверей / Экспресс-информация Казахского НИИНТИ. Алма-Ата, 1979.-С. 1-10.

22. Выбор метода получения конъюгатов стафилококкового белка А с пероксидазой для иммуноферментного анализа /Е.В.Перельман, В.Ф.Булк, Е.В.Щетинина и др. //ЖМЭИ. 1986. - № 10. - С. 68-71.

23. Гаврилова Е.М. Гомогенный иммуноферментный анализ /Методы иммуноферментного анализа в биологии и медицине: Сб. тр. / Моск. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; научн. ред. Н.В. Цветкова. М.: Моск. НИИВС, 1983. - С. 25-36.

24. Гаффаров Х.З. Выделение вируса из группы пситтакоза-лимфо-гранулемы от телят, больных бронхопневмонией / Ученые записки КВИ.1071969.-№ 104.-С. 47.

25. Гаффаров Х.З., Хамадеев Р.Х., Шафикова P.A. и др. Итоги широкого производственного испытания диагностикума хламидийного аборта овец / Болезни овец и меры борьбы с ними: Тез. докл. Всесоюз. конф. Чита, 1980.-С. 33-36.

26. Голубев Д.Б., Сомина A.A. Руководство по применению культур клеток в вирусологии.-JI., Медицина.- 1976.- С. 17-30.

27. Горовиц Э.С., Тимашева O.A. Обоснование рациональной схемы серодиагностики спорадического орнитоза / Хламидии (гальпровии) и хламидиозы. M ., 1982. - С. 27-30.

28. Горовиц Э.С., Тимашева O.A. Использование реакции непрямой гемагглютинации при изучении орнитозной инфекции // Ж. Микробиол., эпидемиология и иммунобиология. 1979. - № 3. - С. 108-112.

29. Горовиц Э.С., Касатова О.Л. Реакция непрямой гемагглютинации при парариккетсиозе (орнитозе) / Вопросы риккетсиологии Пермь, 1974. -С.87-90.

30. Горовиц Э.С., Тимашева O.A. Использование реакции непрямой гемагглютинации для изучения орнитозной инфекции //Ж. Микробиол. -1976. -№ 12.-С. 120-124.

31. Горовиц Э.С., Тимашева O.A. Реакция непрямой гемагглютинации как метод серодиагностики орнитоза / Тезисы докл. XVI Всес. съезда микробиологов и эпидемиологов. Ульяновск, 1977. - С.37-38.

32. Горовиц Э.С., Тимашева O.A., Петров В.Ф., Карпунина Т.И. Диагностика хламидийных инфекций человека и животных //ЖМЭИ. -1998. -№2.-С.72-75.

33. Горовиц Э.С., Тимашева О.Л. Использование реакции непрямой гемагглютинации для изучения орнитозной инфекции // Ж. Микробиол., эпидемиол. и иммунобиология. 1978. -№ 2. -С.68-71.

34. Гришаев М.П., Гришаева О.Н., Косова Е.Ю., Липатникова C.B.,108

35. Сыщенко И.А. Комплексная лабораторная диагностика хламидийной инфекции, обусловленной Chl.trachomatis/ ПЦР в диагностике и контроле лечения инфек. заболев.: Сб.тр. 2-й Всерос. науч.-пр.конф. М., 1998. -С.51-52.

36. Громыко Л.Г., Терских И.И. Применение иммуноферментного метода (ELISA) при хламидийных инфекциях // Вопр. Вирусол. 1981. - № 2. - С. 245-248.

37. Гусев A.A., Панин А.Н. Методические указания по диагностике заболеваний сельскохозяйственных животных иммуноферментным методом. Владимир, 1998. - 179 с.

38. Девришов Д.А. Иммунофлуоресцентная диагностика вирусных респираторных инфекций телят // Ветеринария. 1985. - № 3. - С. 67-68.

39. Деханов A.A. Выделение при энзоотической бронхопневмонии телят микроорганизмов из группы орнитоза-пситтакоза / Профилактика и лечение заболеваний сельскохозяйственных животных: Труды Ульяновского с.-х. ин-та. -1970.- № 16. -С.26-28.

40. Дзантиев Б.Б. Гетерогенные методы иммуноферментного анализа // Бюл. ВИЭВ. 1985. - Вып. 58. - С. 10-22.

41. Дзантиев Б.Б., Егоров А.М. Современное состояние и перспективы развития иммуноферментного анализа // ЖВХО. 1982. - Т. 27.- № 4. - С. 442-449.

42. Диагностика, лечение и профилактика заболеваний, передаваемых половым путем: Методич. матер. / Под ред. Борисенко К.К. и др. -М.:Асс."Сенам". 1997.

43. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. М.: Мир.- 1982. - Т. 1-3. - 1118 с.

44. Домейка М.А. Биологическая характеристика хламидий возбудителя энзоотического энтерита телят: Автореф. дис. канд. вет. наук. -Тарту, 1986. -25с.

45. Домейка М.А. ЭЛИСА для индикации антител и антигена хламидий109энтерита и пневмоний телят // Бюлл. ВНИИ экспер.вет. 1985. - № 58. -С.58-61.

46. Домейка М.А., Абрамова JI.H., Мальцева H.H., Терских И.И. Использование иммуноферментного метода для исследований антихла-мидийных сывороток // Вопр. Вирусол. 1985. - № 4. - С. 474.

47. Домейка М.А., Терских И.И. Применение реакции ELISA для индикации антител и антигена хламидий энтерита и пневмонии телят / Вопр. груп. профилакт. заболеваний животных и птиц: Тез.докл. Межресп. конф. Вильнюс, 1987. - С. 46-48.

48. Дьяконов JI.II. Культуры клеток и тканей, как модель для изучения инфекционной патологии животных. / Бюлл. ВИЭВ. 1978.- 33 с.

49. Дьяконов Л.П., Глухов В.П. Культивирование клеток и тканей животных. Учебно-метод. пособие.- Ставрополь. -1986.

50. Дьяконов Л.П., Глухов В.П. Культуры клеток и тканей животных. -Ставрополь.-1980.

51. Евстифеев В.В., Хамадеев Р.Х., Хусаинов Ф.М., Равилов А.З. Выявление хламидийных антител и антигенов в РНГА / Матер. Между нар. науч. конф., поев. 125-летию академии. Казань, 1998. - 4.1. -С.37-38.

52. Заиров Г.К. Развитие цитоплазматических включений вируса орнитоза под влиянием тетрациклина.- Вопросы вирусологии.- 1966.- 2.-С.166.

53. Зайцев Н.С. Трахома. М.: Медицина. - 1976. - 247с.

54. Иммуноферментная тест-система на основе (Fab)2 -фрагментов антител для индикации гемагглютинина вируса гриппа /С.В. Леонов,110

55. Ю.А.Закомырдин, Г.И.Эггерт и др. //Вопр. вирусол. -1987. № 4. - С. 498502.

56. Иммуноферментный анализ / Под ред. Т.Т. Нго, Г. Ленхоффа. М.: Мир, 1988.-446 с.

57. Исмаилов А.Ш. Индикация вирусов и выявление антител при экспериментальных исследованиях и изучении очагов арбовирусов методом РИГА. / Автореф. дис. канд. биол.наук М., 1979.

58. Казанцев А.П. Орнитоз. Л., Медицина, - 1973.

59. Калугина И.А. Дис. кандидата биологических наук, 1992.

60. Калугина И.А., Караваев Ю.Д., Кекух И.Г.Адаптация хламидий к различным клеточным культурам./ Бюлл. ВИЭВ.-1991.- в.77-78. С.31-33.

61. Караваев Ю.Д. Изучение комплементсвязывающей активности различных штаммов возбудителя аборта овец / Профилактика и меры борьбы с болезнями овец: Тез. докл.науч.совещания. М., 1973. - С. 162164.

62. Караваев Ю.Д. Активность диагностических положительных сыворо-ток, полученных от различных видов животных, гипериммунизированных возбудителем аборта овец // Бюлл. ВИЭВ. 1972. -№ 14. -С.60-61.

63. Караваев Ю.Д. Автореф. дис. док. вет. наук,- М. -1985. V

64. Караваев Ю.Д. Агглютинирующая активность штаммов возбудителя, выделенных при массовых абортах овец // Бюлл. ВИЭВ. 1972. - № 14. -С.62-63.

65. Караваев Ю.Д. Лиофилизация диагностических препаратов для РДСК и длительность сохранения высушенных штаммов возбудителя энзоотического аборта овец // Бюлл. ВИЭВ. 1972. - № 14. - С.57-59.

66. Караваев Ю.Д. Хламидиозный аборт овец (этиология, диагностика, специфическая профилактика): Автореф. дис. докт. вет.наук. М., 1987. -39с. (ДСП).1.l

67. Караваев Ю.Д., Дзиова H.H., Крюков H.H. Сравнительное изучение чувствительности РСК и микроагглютинации при диагностике энзоотического аборта овец // Бюлл. ВИЭВ. 1971. - II. - С.77-78.

68. Караваев Ю.Д., Исатаева Ш.И., Налетов И.И. Сравнительное изучение РСК, РИГА и РНИФ при диагностике хламидиозного аборта овец //Бюлл. ВНИИэкспер.вет. 1986. -№62 -С.14-18.

69. Караваев Ю.Д., Калугина И.А. Адаптирование хламидий штамма К-8 ВИЭВ к перевиваемой культуре клеток. Культивирование клеток животных и человека.- Пущино.- 1990.- С.99.

70. Караваев Ю.Д., Налетов Н.И., Калугина И.А. Хламидиозы меры борьбы и профилактика./ Вет. Газета.- 1994.- 26 (36).- С. 4.

71. Каральник Б.В. Научные основы изготовления эритроцитарных диагностикумов // Ж. Микробиол. 1977. - № 4. - С.29-34.

72. Ковалев B.JI. Исследование сыворотки крови в РСК при диагностике вирусного аборта овец // Вирусные болезни сельскохозяйственных животных: Матер. 1 Межвузовской ветеринарной вирусол. конф. М., 1970. -С.130-131.

73. Ковалев B.JI. Схема выделения хламидий от животных / Труды Тадж. НИВИ. -Душанбе, 1977. Т. 7. - С. 11-14.

74. Ковалев B.JI., Андреева Р.Х., Степанова С.Н. Дикие животные -резервенты возбудителей хламидиозов / Вопросы природ. Очаговости болезней. 1978. - № 9. - С. 138-143.

75. Колкова Н.И., Мартынова В.Р. К вопросам диагностики хламидийных инфекций//Ж. Клин. Лаб. диагн. 1998. -№ 2. - С.20-21.

76. Коромыслов Г.Ф., Авилов B.C. Иммуноферментный анализ и применение его в ветеринарии //Бюл. ВИЭВ. 1985. - Вып. 58. -С. 6-9.

77. Кравченко Т.Ф. Серологическая диагностика при хламидиозе свиней / Матер. Всесоюзн.конф.: Эпизоотол., эпидемиол., средства диагн., терапии и спец. профил.инф. бол .,общих для чел. и жив. Львов, 1988. - С. 114112115.

78. Кузнецов Д.П. Разработка набора для диагностики ИРТ КРС методом ИФА // Диссертация. Щелково. - 1990.

79. Кузьменко В.П. Особенности взаимодействия хламидий с клетками/ Микроб. Журнал.-1980.-2.- с.250-260.

80. Кузьменко В.П., Купчинский Л.И. Ультраструктурные особенности размножения хламидий/ Микробиол. Журнал.-1978.- 40.- С. 64-70.

81. Кульберг А.Я. Молекулярная иммунология. М.: Высшая школа, 1985.-287 с.

82. Кумалагова К.И. Инактивированная вакцина против хламидиоза кошек // Автореф. дисс. канд. вет наук. Москва. - 1999.

83. Кэрстак Э. Успехи в разработке иммуноферментных методов: получение реагентов, планирование экспериментальных исследований и интерпретация результатов // Бюл. ВОЗ. 1985. - № 4. - С. 118-139.

84. Маликова М.В., Громыко А.И., Катунцевская Г.П. Применение иммунофлуоресцентного метода для индикации вируса орнитоза в культуре ткани //Острые респир. забол. К., 1971. - Вып.5. - С. 124-126.

85. Мартынова В.Д. Чувствительность возбудителя паратрахомы к действию физико-химических факторов и химиотерапевтических препаратов. / Автореф. канд. дисс,- М.- 1969.

86. Мартынова Р.В., Шаткин A.A., Щербакова Н.И. Диагностическое выделение гальпровий (хламидий) в куриных эмбрионах при трахоме, паратрахоме и другой этиологически родственной патологии / Гальпровиозы (хламидиозы) человека и животных. М., 1979. - С. 36-40.

87. Маслак A.A., Маркова Е.В., Самуйленко А.Я., Сергиенко А.И. Компьютерные системы биотехнологических исследований. Москва, 1993.-432 с.

88. Мигунов В.Н., Позина И.М., Кутимова Л.Р. и др. Заявка СССР А 61 39/395 1109170 А от 30.03.82.113

89. Милютин В.И., Hey строев В. Д., Хандуев Ц.Ц. Микрофотография крупных вирусов и риккетсий под люминесцентным микроскопом // Вопр. вирусол. 1959. - № 4. - С. 502-506.

90. Митин Н.И., Лагуткин М.А., Зубаиров М.М. Влияние химических соединений на иммуногенность вируса при создании инактивированных вакцин. / Сб. Проблемы ветеринарной иммунологии. М.-1985.-С.133.

91. Митрофанов П.М. Меры борьбы с хламидиозом крупного рогатого скота // Ветеринария. 1980 - № 10. - С.33-34.

92. Михлин Д.М. Пероксиды и пероксидазы. Химизм медленного окисления. М. - Л.: АН СССР, 1948. - 220 с.

93. Николаева A.B. Об энзоотической пневмонии свиней, вызываемой вирусом из группы орнитоза лимфогранулемы - трахомы / Вирусные болезни сельскохозяйственных животных: Матер. I Межвузовской вет.вирусол.конф. - М., 1970.- с. 227-228.

94. Номенклатура ферментов //Рекомендации (1972 г.) Международного биохимического союза по номенклатуре и классификации ферментов, а также по единицам ферментов и символам кинетики ферментативных реакций (с дополнениями по 1975 год). М., 1979.- 321 с.

95. Оболадзе Д.Б. Инструктивно методические указания по профилактическим и эпизоотологическим мероприятиям при хламидийных инфекциях.- Сабчота Сакартвело. Тбилиси. -1981. С.

96. Оболадзе Д.Б., Терских И.И., Беклешова А.Ю. Биологические свойства возбудителя аборта овец / Актуальные вопросы вет. вирусол.: Матер.конф. М ., 1967. - 4.2. - С. 2,203-205.

97. Обухов И.Л. Молекулярный механизм паразитизма хламидий и их внутриклеточное развитие // С/х биол. Сер. Биол. животных. 1997. - № 2. - С.86-98.

98. Обухов И.Л., Груздев К.Н., Кумалагова К.И. Различные условия культивирования хламидий и влияние на них физико-химических фак114торов./ Сборник научных трудов ВГНКИ,- 1999 г.- т.61.

99. Обухов И.Л. Обнаружение Chi. psittaci при конъюнктивитах у собак / Сб. науч. тр. Всерос. гос. НИИ контроля стандартизации и сертификации вет. препаратов. 1996. - Т. 57. - С. 45-51.

100. Обухов И.Л., Панин А.Н., Груздев К.Н. Механизм иммунитета при хламидийных инфекциях // С.-х. биол. Сер. Биол. животных. 1997. - № 4. -С. 109-115.

101. Обухов И.Л., Панин А.Н., Груздев К.Н. Механизмы иммунитета при хламидийных инфекциях. / Сельхозбиология.- 1997 (4).- С. 103-116.

102. Обухов ИЛ. Хламидиоз кошек.- М.- 1994.

103. Овчинников М.Н., Делекторский В.В. Ультраструктура возбудителей венерических заболеваний и ее клиническое значение. М.: Медицина, 1986. - 175 с.

104. Орлова O.E., Шаткин A.A. Модели персистентной хламидийной инфекции в культурах клеток L-929 и McCoy./ Хламидийные инфекции.-М.- 1986.-С.20-26.

105. Осидзе Д.Ф. Неориккетсиозы / Малоизвестные заразн. болезни жив. -М, 1973,- С.164-183.

106. Осидзе Д.Ф. Получение культур клеток из тканей животных и их использование в вирусологии. М.- 1975.

107. Пиголкина В.В., Щербань Г.И. Ультраструктура хламидий. Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии, специфической профилактики. // Мат. Всесоюзн. конф. Львов. 1988.-С.118 -121.

108. Пинчук Л.М. Неспецифические эффекты в твердофазных им-муносорбентных методах //ЖМЭИ. 1987. - № 5. - С. 110-117.

109. Получение и сравнительная оценка пероксидазных конъюгатов на основе чистых антител и FaB-фрагмента IgG / С.С. Маренникова, H.A. Хабахпашева, H.H. Мальцева, Е.Е. Ефремова //ШМЭИ.- 1982.-№9.-С.99115103.

110. Поляков A.A., Купешев Т.Ш. Выживаемость возбудителя хлами-диозного аборта овец и режимы дезинфекци./ Ветеринария, 1983.- 7,- С. 24-26.

111. Попов B.JI, Шаткин A.A. Урогенитальные хламидиозы (гальпровиозы). Атипичные формы возбудителя и их возможное значение в этиологии и патологии инфекции. / Вестник дерматол. вененерологии,-1982.-2. С. 26-38.

112. Попов B.J1. Цикл развития и клеточный цикл у хламидий / Хламидии (гальпровии) и хламидиозы М., 1982. - С. 12-17.

113. Попов В.Л., Бескина С.Р., Панкратова В.Н. Иммунологические методы диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных XXII Всемирный вет. конгр.: Резюме (доклады и сообщения). М., 1979. - Т. 3.

114. Попова О.М., Багдонас И.И., Абрамова Л.Н., Терских И.И. Дифференцирование орнитоза от сходных возбудителей, поражающих домашний скот /Тез.докл. Всесоюзн.межвуз.науч.конф. по вет.вирусол. -М, 1973.-4.1.-С. 93-94.

115. Попович Г.Г. Антигенные свойства хламидий разного происхождения // Ж. Микробиол. 1978. - № 1. - С .69-72.

116. Попович Г.Г. Оценка серологических методов диагностики хламидиозов // Микробиол. журн. 1981. - Т.43. - № 2. - С. 188-192.

117. Применение иммуноферментных и некоторых других иммунологических методов в диагностике вирусных инфекций /Э.Курстак, П.Тийссен, К.Курстак, Р.Мориссет //Бюл. ВОЗ. 1986. - № 2. -С. 110-124.

118. Равилов Р.Х., Садриев А.Р. Экспериментальная хламидийная инфекция домашних плотоядных / Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзотическими болезнями животных.-Покров, 1998.-С.64.

119. Равилов Р.Х. Хламидиоз плотоядных животных // Докторская диссертация. Казань, 1998. - 302 с.

120. Реутова Е.Г., Чевелев С.Ф., Архипов Н.И. Иммуноферментный метод в вирусологических исследованиях (обзор литературы) // Ветеринария. 1976. - № з. - С. 53-55.

121. Рубцов И.В., Пименова Г.Н., Кулаков В.Н. Метод статистической обработки результатов иммуноферментного анализа //ЖМЭИ. 1985. - № 6. - С.44-48.

122. Рытик П.Г., Бойко В.И., Лямшев В.В., Смирнова Е.И. Выявление орнитозной инфекции при помощи прямой и ингибиторной реакции связывания комплемента // Здравоохранение Белоруссии. Минск, 1968. -№ 2. - С.60-62.

123. Савосина Н.С. Видоспецифический и группоспецифический антигены возбудителя орнитоза: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1980.

124. Савосина Н.С. Видоспецифический и группоспецифический антигены возбудителя орнитоза./Автореф. докт. дисс.- М.- 1987.

125. Савосина Н.С., Попова О.М. Обнаружение гуморальных антител к видосцецифическому и группоспецифическому антигенам орнитоза в динамике инфекции // Вопросы вирусологии. 1979. -№ 4. - С.422-427.

126. Сухова Л.И., Машеро В.В., Щербаков В.М. Сравнительный анализ117

127. ПЦР, иммуноферментного, иммунофлуоресцентного и культурального методов исследования ПЦР в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний: Сб. тр. 2-ой Всеросс. науч.-практ. конф. М., 1998.-С. 37.

128. Тарасишин Л.А. Иммуноферментный анализ и его модификации в исследовании вирусных антигенов // Микробиол. журнал. 1986. - Т. 48, №4.-С. 99-104.

129. Терских И.И. Орнитоз в СССР: Автореф. дис. докт.мед. наук М ., 1957.

130. Терских И.И. Орнитоз и другие хламидийные инфекции. М.: Медицина, 1979.

131. Терских И.И., Заиров Г.К. Сравнительное изучение вируса трахомы и орнитоза: 1. Данные люминесцентной микроскопии клеточной культуры // Вопр. Вирусол. 1964. - № 6. - С.674-677.

132. Токаревич К.Н., Красник Ф.И., Гольдин В.Б. Опыт серодиагностики орнитозной инфекции при помощи иммунофлуоресцентного метода // Вопр. мед. Вирусол. М., 1964. - № 68. - С.47-54.

133. Улендеев А.И., Деханов A.A. Материалы по изучению респираторных заболеваний телят // Тез. докл. Всесоюзной межвузовской конференции по вет. вирусологии. М., 1971. - 4.2. - С. 48-50.

134. Улендеев А.И., Деханов A.A. О роли микроорганизмов из ГРУППЫ ОЛТ при желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях телят / Труды Ульяновского с/х ин-та. 1971. -Т.16. -№ 4. -С.166-176.

135. Фомичева И.И., Баранов O.K. Локализация аллотипов американской норки на цепях иммуноглобулина G // Иммунология. 1982. - 5. - С. 2528.

136. Хамадеев Р.Х. Усовершенствование способа устранения антикомп-лементарности антигенов / Актуал.вопр.вет.вирусол : Тезисы докл. Всесоюз.конф. Казань, 1980. -С. 141.118

137. Хамадеев Р.Х., Хусаинов Ф.М., Евстифеев В.В., Равилов А.З. Получение эритроцитарного диагностикума для выявления антител при хламидиозе / Науч. основы техн. пром. произв. вет. биол. преп.: Тез.докл. V Всерос.конф. Щелково, 1996. - С. 153-154.

138. Хамадеев Р.Х., Боровик Р.В., Гаффаров Х.З., Шафикова P.A. Получение гипериммунных сывороток для диагностки энзоотического аборта овец // Ветеринария. 1975. - № 10. - С.36-38.

139. Хамадеев Р.Х., Габидуллина Р.Г., Полуянов В. Изыскание оптимальных условий лиофилизации комплементсвязывающего антигена хламидий // Тез. докл. респ.науч. -техн. конф. по пробл.вет. Казань, 1980. -С. 131-132.

140. Хамадеев Р.Х., Боровик Р.В., Гаффаров Х.З., Шафикова P.A. Способ получения антигена для серологической диагностики вирусных заболевании: Авторское свидетельство № 543259. 1976.

141. Хамадеев Р.Х., Хусаинов Ф.М., Равилов А.З. Использование РНГА для оценки поствакцинального иммунитета при хламидиозах / Вирусн. болезн. с/х животных. Владимир, 1995. - С. 132.

142. Хамадеев Р.Х. Хламидиозы рогатого скота и свиней: Автореф. дис. докт. вет. наук. Казань, 1991. - 40с.

143. Хамадеев Р.Х., Гаффаров Х.З., Докунина A.A. Накопление комплементсвязывающих антител при вирусном аборте овец // Ветеринария. -1973. -№ 5.-С. 113-115.

144. Хамадеев Р.Х., Гаффаров Х.З., Равилов А.З. Способ получения концентрированной биомассы хламидий: Авт. свид. № 1460786. 1988.119

145. Хамадеев Р.Х., Хусаинов Ф.М., Равилов А.З. Способ получения биомассы хламидий: Авторское свидетельство № 4497242. 1990.

146. Харитоненков И.Г., Христова M.JL Использование иммуноферментных методов в вирусологии // Мол. Генетика, микробиол. и вирусология. 1985. - № 6. - С. 3-15.

147. Хламидиоз (клиника, диагностика, лечение): Методические рекомендации / Под ред. Серова В.Н, Краснопольского В.И., Делекторского

148. B.В. и др. М.: Патент, 1996. -22 с.

149. Хламидиозы сельскохозяйственных животных / Под. Ред. Хазипова Н.З. и Равилова А.З. М .: Колос. - 1984. - 223с.

150. Хусаинов Ф.М., Хамадеев Р.Х., Равилов А.З., Хисматуллина H.A. Использование иммуноферментного анализа для диагностики хла-мидиоза свиней / Вирусн. болезни с/х животных. Владимир, 1995. - С. 67.

151. Червонский В.И. Выявление комплементсвязывающих антител у некоторых видов птиц и млекопитающих в РСК с антигеном вируса орнитоза // Вопр. вирусол. -1960. № 1. - С.80-83.

152. Червонский В.И., Попова О.М. Антиген для реакции связывания комплемента при орнитозе-пситтакозе // Вопр. вирусол. 1959. - № 1.1. C.68-71.

153. Червонский В.И. Иммунологические исследования при орнитозе // Вопр. мед. Вирусол. М., 1964. - С.39-47.

154. Червонский В.И. Приготовление иммунной сыворотки против вируса орнитоза для реакции связывания комплемента // Вопр. вирусол. -1962. -№ 2. -С.248-252.

155. Чутков H.A. Действие ультрафиолетового излучения на развитие возбудителя орнитоза./Вести, с-х науки.- 1969.- 7.- С.91.

156. Шаткин A.A., Авакян A.A. Взаимодействие хламидий с клеткой-хозяином. Цикл развития. Хламидиозы человека и животных,- М., Медицина.- 1979.- 2,- С. 17-24.120

157. Шаткин A.A. Проблемы диагностики гальпровиозов и совершенствование методов индикации гальпровий (хламидий) / Сб. науч.тр.:Экология вирусов. Баку, 1976. - С.244-245.

158. Шаткин A.A. Индикация антигенов гальпровий (хламидий) прямым иммунопероксидазным методом //Ж. Микроб., эпидем. и иммунобиол. -1976.-№ 9.-С.74-78.

159. Шаткин A.A. Гальпровии (хламидии) и вызываемая ими патология // Гальпровиозы (хламидиозы) человека и животных. М., 1979. - Вып.1. -С.5-12.

160. Шаткин A.A. Основные принципы лабораторной диагностики гальпровиозов (хламидиозов) / Гальпровиозы (хламидиозы) человека и животных. М., 1979. - Вып.1. - С.25-36.

161. Шаткин A.A. Хламидии и хламидиозы. / Медицина, 1982.- С.78.

162. Шаткин A.A., Караваев Ю.Д., Панкратова В.Н. и др. Испытание иммунных конъюгатов при энзоотическом аборте овец // Ветеринария. -1974. -№ 6. С. 43-45.

163. Шаткин A.A., Мавров И.И. Урогенитальиые хламидиозы.- Киев.-Здоровье,- 1983.-С. 199.

164. Шаткин A.A., Попов B.J1. Усовершенствование метода культивирования гальпровий (хламидий) в культуре клеток // Вестн. дерматологии и венерологии.- 1981.- № I. С.24 - 28.

165. Шаткин A.A., Бескина P.C., Панкратова В.Н. и др. Индикация антигенов гальпровий (хламидий) прямым иммунопероксидазным методом // Ж. Микроб., эпидемиол., иммунол. 1976. - № 9. - С.74-78.

166. Шафикова P.A., Гаффаров Х.З., Равилов А.З. Выявление антител к возбудителю хламидиозного аборта овец в РЭМА / Сб. науч. тр. КВИ: Актуал. вопр.инф. патол. в промышл. животн. -Казань, 1987. С.35-40.

167. Шафикова P.A., Гаффаров Х.З., Равилов А.З. Применение реакции энзиммеченных атител при диагностике хламидиозного аборта овец /121

168. Эпизоотол., эпидемиол., сред, диаг., терапии и спец.профил. инф .бол., общих для чел. и жив : Матер. Всесоюзн. конф. -Львов, 1988. -С. 107-108.

169. Шафикова P.A. Генетический признак специфичности возбудителя аборта овец / Сб. науч.тр.: Разработка эффект, методов профил. и лечен, жив. при инф забол. Казань, 1982. - С. 35-41.

170. Шафикова P.A. Иммунобиологическая характеристика хламидий, усовершенствование методов и средств лабораторной диагностики хламидиозов: Автореф. дис. докт. вет. наук. Казань, 1991. - 38с.

171. Шафикова P.A., Гаффаров Х.З., Равилов А.З. Диагностика эпизоотического аборта овец реакцией энзиммеченных антител / Науч. основы технол. и промыш. произв. вет.биол. преп. : Тез. докл. III Всесоюзн. конф. М., 1987. -С.204-206.

172. Шафикова P.A., Равилов А.З,. Гаффаров Х.З. Новое в диагностике хламидиозного аборта овец / Тез. докл.рес.науч -произв.конф. Казань, 1989.-С.4.

173. Шиленок Л.В., Скороходова Л.А., Кузнецова C.B., Бойко A.A., Слугин И.В. Выделение иммуноглобулина G из сыворотки крови норки / Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. Экспресс-информация. Вып. 10. - М., 1986. - 12 с.

174. Штефан М.К. Серологические исследования при энзоотическом аборте овец // Ветеринария. 1984. - № 10. - С.38-39.

175. Щербань Г.П., Щербань Н.Ф. Энзоотический (вирусный) аборт овец // Ветеринария: 1974. - № 8. - С.85-87.

176. Щербань Н.Ф., Щербань Г.П., Ирский А.Г. Об этиологии вирусного аборта овец /Сб. научн.тр.: Акт. вопр.вет. вирусол. 1967. - № 2. - С. 205.

177. Яковлева К.Е. Экспресс-метод выделения иммуноглобулина G у норок // Тезисы докл. III Всесоюз. Конф.- Петрозаводск. -1981.-115 с.

178. Ямникова С.С., Федякина И.Т., Непоклонова И.В. Новая классификация хламидий и их роль в заболевании мелких животных / Ж.122

179. Антибиотики, 2000 (в печати).

180. A microplate method of enzyme linked immunosorbent assay and its application to malaria / A. Voller, D. Bidwell, G. Huldt, E. Engvall // Bull. Wld. Hlth. Org. 1974. - V. 51. - P. 209-211.

181. Adams Т.Н., Wisdom G.B. Peroxidase labelling of antibodies for use in enzyme immunoassay// Biochem. Soc. Trans. 1979.- V. 7.- N 1. - P. 55-57.

182. Alexander E.R. Wang S.P., Grayston J.T. Father classification of TRIC agents from ocular trachoma and other sources by the mouse toxicity prevention test // Am J. Ophthal. 1967. - N63, - P.1469-1478.

183. Al-Kaissi E., Mostratos A. Assessment of substrates for horseradish peroxidase in enzyme immunoassay// J. Immunol. Meth. 1983. - V. 53.- N 1-2. - P.127-132.

184. An immunoglobulin-enzyme bridge method for localizing tissue antigens/ Т.Е. Mason, R.F. Phifer, S.S. Spicer et al. // J. Histochem. Cytochem. 1969. -V. 17. - P. 365-569.

185. Arens J.H., Weingarten M. Vergleichende Untersuchungen an Buffalo Green Monkey Zellen und Mausen zur Isolierung von Chlamydia psittaci aus Kot und Organproben von Vögeln. / Zbl. Vet. Med.-1981.-N.28,- P.301-309.

186. Armstrong J.A., Valentine R.C., Filds C. Structure and replication of the trachoma agent in cell cultures, as shown by electromicroscopy // J. Gen. Microbiol. -1963.- N30. P.59-73.

187. Asso M. et al. La chlamydiose abortiv ovine // Patre. 1981. - V/ 284. -P.25-26.

188. Avrameas S., Ternynck T. Peroxidase labelled antibody and Fab conjugates with enhanced intracelluar penetration// Immunochem. 1971. - V. 8. -P. 1175-1179.

189. Avrameas S. Coupling of enzymes to proteins with glutaraldehyde. Use of the conjugates for the detection of antigens and antibodies // Immunochem. -1969. V.6. - P. 43-52.123

190. Avrameas S. Enzyme immunoassays and related techniques: devrlopment and limitations // Curr. Top. Microbiol, and Immunol. 1983. - V. 104. - P. 9399.

191. Avrameas S. Immunoenzyme techniques: enzymes as markers for the localization of antigens and antibodies // Int. rev. cyt. 1970. - V. 27. - P. 439485.

192. Avrameas S., Ternynck T., Guesdon J.L. Coupling of enzymes to antibodies and antigens// Scand. J. Immunol. 1978. -V. 8, suppl., N 7. - P. 723.

193. Avrameas S., Guilbert B. Dosage enzyme-immunologique de proteines a Faide d"immunoadsorbant et d'antigenes marques aux enzymes // C.R. Acad. Sci. (Paris). 1971. - V. 273. - P. 2705-2707.

194. Avrameas S., Guilbert B. Enzyme-immunoassay for the measurement of antigens using peroxidase conjugates// Biochem. 1972. - V. 54. - P. 837-842.

195. Babudieri B. The slide microagglulination tests in the field of Rickettsial and viral serology. Its Advantages and Limitations // Path. Microbiol. 1961. -N24.-P. 11-20.

196. Banks J., Eddie B. Sung N. et al. Plague reduction technique for demonstrating neutralizing antibodies for Chlamydia // Infect. Immunol. 1970. . N4.- P.443-447.

197. Barbour H.M. Development of enzyme immunoassay for human placental lactogen using labelled antibodies// J. Immunol. Meth. 1976. - V. 11. - P. 1523.

198. Barron A.L., Collins A.R. Studies on trachoma agent by Double diffusion gel precipitation // Am. J. Ophthal. 1967. - N63. - P.46I-465.

199. Barron A.L., Gaste P.G., Paul B., Page L.A. Detection of chlamydiae antibodies in animal sera by double diffusion in gel // Appl. Microbiol. 1972. -V. 29. - N4. - P.770-774.124

200. Barron A.L., Zakay R.Z., Bornkopf H. Hemagglutination of chicken erythrocytes by the agent of the psittacosis // Proc. of the Sec. For Exp. Biol, and Med.- 1965.-V. 119.-N 2.-P. 377-391.

201. Becerra V. M., Storz J. Studies of conditions of interactions between chlamydia and cultural animal cells./ Zbl. Bakt. Abt. I. Orig.- 1970.- 214.- P. 250 259.

202. Becker J. The Molecular Biology of Trachoma Agent // J. Isr. Med. -1972. -N8.- P. 1134-1137.

203. Bedson S.P. Immunological studies with virus of psittacosis // Brit.J.Exp.Path.-1935.-N14.-P.165-170.

204. Bedson S.P., Bland J.O. Morphological study of the psittacosis virus, with a description of the developmental cycle // Brit. J. Exp. Path. 1932. - N13. - P. 461-466.

205. Beer I. Der Virusabort des Schafes // Mh. Vet. Med. 1961. - V. 16. - N1. - P.I-5.

206. Beer I. Untersuchungen an und mit complement bilden den Antigen des Virusabortus Schafe // Zbl. Vet. Med. 1958. - V.5. - N4. - S.305-328.

207. Beiden E.L., Mc Kercher D. Passive hemagglutination test tor bovine chlamydiae abortion // Infect, and Immun. 1973. - V.3. - N2. - P.141-146.

208. Benedict A.A., O ' Brien E.A. Antigenic studies on the psittacosis-lymphogranuloma venereum group of viruses. II. Characterization of complement fixing antigens extracted with sodium lauril sulfate // J. Immunol. -1956,-V.76.-N4.-P. 293-300.

209. Benedict A.A., CT Brien E.A. Passive hemagglutination reaction for psittacosis // J. Immunol. 1958. - V.80. - N2. - P.94-99.

210. Bidwell D.E., Bartlett A., Voller A. Enzyme immunoassays for viral diseases // J. Infect. Dis. 1977. - V. 136, suppl. - P. 274-278.125

211. Blanco L.A , Barrera P.J., Macrotegui M.A. Ultrastructura de una chlamydia de origen bovino // An. Inst. Nac. Investig. Agr. Ser. : Hig. Sanid anim.- 1975. -N2. -P.37-55.

212. Boorsma D.M., Streefkerk J.G. Peroxidase-conjugate chromatography isolation of conjugates prepared with glutaraldehyde or periodate using polyacrylamide-agarose gel// J. Histochem. Cytochem.-1976.-V.24.-P.481-486.

213. Boorsma D.M., Kalsbeek G.L. A comparative study of horseradish peroxidase conjugates prepared with a one-step and a two-step method// J. Histochem. Gytochem. 1975. - V. 23. - P. 200-207.

214. Boorsma D.M., Streefkerk J.G. Periodate or glutaral dehyde for preparing peroxidase conjugate. // J. Immunol. Meth. - 1979. - V. 30. - P. 245255.

215. Borman E.K., Rose M.R. Direct and undirect fluorescent antibody tecniks tor the psittacosis-lymphogranuloma venereum-trachoma group of antigens // J. Bact. 1963. -N85. - P.851-858.

216. Buckley S.M , Whitney E., Rapp F. Identification by fluorescent antibody of developmental from of psittacosis virus in tissue culture // Proc. Sec. Exp. Biol. And Med. 1955. - V.90. - N1. - P.226-230.

217. Bullock S.L., Walls K.W. Evaluation of some parameters of the enzyme-linked immunospecific assay // J. Infect. Dis. 1977. - V. 136, suppl. - P. 279286.

218. Burnet F.H., Rountree P. M. Psittacosis in the developing egg./ Path. Bact.- 1935,- 40.-P. 471 -481.

219. Butty Favre B., Nicolet J. La chlamydiose en suisse. Etude comparative des techniques de diagnostic./ Schweiz. Arch. Tierheilk. - 1987.- 129.- P. 1-13.126

220. Byrne C.I., Moulder J.W. Parasite-specificed phagocytosis of C. psittaci and C. trachoimatis by L and Hela cells./ J. Infect, and Immun.- 1978. N129.-P.l-13.

221. Byrne C.J., Moulder I.W. Parasite specified phagocytosis of Chi. psittaci and Chi. tmchomatis by L and Hela cells // J. Infect. And Immun. - 1978. -N19. - P.598-606.

222. Caldwell H.D., Hitchcock P.J. Monoclonal antibody against a genusspecific antigen of Chlamydia species: location of the epitope on chlamydial lipopolysacharide // Infect. Immunol. 1984. - N44. - P.306-314.

223. Caldwell H.D., Judd R.C. Structural analysis of chlamydial major outer membrane proteina // Infect. Immunol.- 1982. N38. - P.960-968.

224. Caldwell H.D., Kromhout J., Schachter J. Purification and partial characterization of the major outer membrane protein of Chi. trachomatis // Infect. Immunol. -1981. N31. - P. 1161-1176.

225. Campbell L.A., Kuo C.C., Grayston J.T. DNA analisis of a new chlamydial agent (TWAR) associated with acute respiratory disease / Abstr. Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol.: 87th Annu Meet. Atlanta, Ga, 1987.

226. Cantarero D.A., Butler J.E., Osborne J.W. The adsorptive characteristics of protein for polysterene and their significance in solid-phase immunoassays// Analyt. Biochem. 1980. - V. 105. - N 2. - P. 375-382.

227. Carlsson J., Drevin H., Axen R. Protein thiolation and reversible proteinprotein conjugation// Biochem. J. 1978. -V. 173.- N 5. - P. 723-737.

228. Catt K.J., Tregear G.W. Solid-phase radioimmunoassay in antibody-coated tubes// Science. 1967. - V. 158. - P. 1570-1572.

229. Cello R. M. Microbiological and immunologic aspects of feline pneumonitis./ J. Am. Vet. Med. Assoc.-1971.- 158, 932 938.

230. Cevenini R. Rumpianesi F., Donati M., Sarov I. A rapid immunoperoxidase assay for the detection of specific IgG antibodies to Chi. trachomatis // J. Clin. Pathot. 1983. - V.36. - N3. - P. 353-356.127

231. Chairares G.A., Klavano G., Nagge W., Christian R. Ovine chlamidial abortion in Alberta // Can. Vet. J. 1976. - N3. - P.7-8.

232. Chanock R.M., Murphy B.R. Live viral vaccines for respiratory and enteric tract diseases. / Vaccine. 1988.-6,- P. 129-133.

233. Characteristics and evaluation of antibody-horserasish peroxidase conjugates prepared by using a maleimide compound, glutaraldehyde and periodate/ M.Imagawa, S. Yoshitake, Y. Hamagushi et al. // J. Appl.- Biochem. -1982.-V. 4.-N 1.-P. 41-57.

234. Charan S., Gautam O.P. Applications of enzyme-linked immunosorbent assay in veterinary medicine: a bibliography// Vet. Res. Commun. 1984. - N 8.- P. 255-267.

235. Charton A. Chlamydioses des ruminants (bovine, ovine, caprine): etudes experimentales 2. Composition polypeptidique des corps elementaires de soches de diverses origines // Bull. Acad. Vet. Fr. 1976.- V.49. - N4. - P.401- 408.

236. Chassey D., Davies P., Dawson M. Immunoperoxidase detection of chlamydia ovis in experimentally infected cell culture // Brit. Vet. J. 1981. - V. 137 - N6. - P.634-638.

237. ChristensyT P.M., Nolkert M. Two complement fixing antigens from intected yolk sacs. II. The nature of the virus antigen and its relation to phosphatide antigen // Acta Path. Microbiol. Scand. 1955. - V.37. - N.3.-P.219-224.

238. Cutting J.A. Chlamydiosis in the cat: antibodies and immunity/ Vetrinary Reports, published by Solvay Animal Health. 1990.- 5.- P. 3-5.

239. Collard A. Isolation and purification of bovine immunoglobulins: use of sephacryl S-300 filtration avods protrein pricipitation steps // Ann. Rech., Veter.- 1984. V. 15,- N 4. - P. 497-501.

240. Collins A.R., Barron A.L. Demonstration of Group- and Species-specifie antigens of chlamydial agents by gel diffusion//.!. Infect. Dis. 1970. - V.121. -Nl.-P. 1-8.128

241. Colon J.I. The role of folie acid in the metabolism of members of the psittacosis group of microorganisms // Ann. N.Y. Acad. Sc. 1962.- N98. - P.243.

242. Computer-assisted rapid enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the serological diagnosis of aspergillosis/ M.D. Richardson, A. Turner, D.W. Warnock, P.A. Llewellyn// J. Immunol. Meth. 1983. - V. 56. - P. 201-207.

243. Conradie J.D., Govender M., Visser L. ELISA solid phase:partial denaturation of coating antibody yields a more efficient solid phase// J. Immunol. Meth. 1983. - V. 59,- N 3. - P. 289-299.

244. Curtis E.G., Patel J.A. Enzyme multiplied immunoassay technique: a review// C.R.C. Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 1978. -V. 9.- N 4. - P. 303-320.

245. Cutlip R.S. Electron microscopy of cell cultures infected with a chlamydial agent causing polyartritis of lambs // Infect. Immunity. 1970. - N1. - P. 499-502.

246. Dane S.P. Some observations on the complement-fixation test for psittacosis-lymphogranuloma venereum group of viruses // Med. J. Australia. -1955.-V.I. N42. - P.382.

247. Darougar S., Cubitt S., Jones B.R. Effect of high speed centrifugation on the sensitivity of irradiated McCoy cell culture for the isolation of chlamydia./ Br. J. Vener. Dis. 1974,- 50,- P. 308 - 312.

248. De Savighy D., Voller A. The communication of ELISA data from laboratory to clinician// J. Inmiunoassay. 1980. - V. 1.- N 1.- P.105-128.

249. Demiresan S., Kakudo K., Kawashima T. Et al. Immunocytochemical detection of Chi. trachomatis on cytological specimens // Tokai J. Exp. And Clin. Med. 1986. -V.ll.- N3.- P.229-234.

250. Development and use of ultrasensitive enzyme immunoassays G.E. Trivers, C.C. Harris, C. Rougeot, F. Dray// Meth. Enzymol. -1983. V. 103. - P. 409-434.129

251. Dhingra P.N., Agarwal L.P., Mahajan V.M. et al. Chlamydia group antigen//Zbl. Vet.Med. 1981.-B.28. - N4. - P.336-340.

252. Dhir S.P., Hakomori S., Kenny G.F. et al. Immunochemical studies on chlamydial group antigen // J. Immunl. 1972. - N109. - P. 116-122.

253. Dhir S.P., Kenny G.E., Grayston J.T. Characterization of the group antigen of Chi. trachomatis // Am. Soc. Microbiol. 1971. - V 4. N6. - P. 725730.

254. Dixit S.N., Kalra D.S., Sadana J.R., Purohi V.D. Neo on seroprevaleme of chlamydiosis in sheep and goats // Indian J. Anim. Sci.- 1980. V.50. - P. 786787.

255. Donaldson F., Davis D.N., Watkins J.R., Sulkin S.E. The isolation and identification of ornithosis infection in turkeys by tissue culture and immunocytochemical staining // Am. J. Vet. Res. 1958. - N19. - P.950-954.

256. Doughri A.M., Storz J., Altera K.P. Mode of Chlamydia in infections of intestinal epithelial cells // J. Infect. Dis. 1972. - V.126. - P.652-657.

257. Duggan M.A., Pomnoni C., Kay D. ,Pobby S.J. Infantile chlamydial conjunctivitis: A comparison of Papanicolaou, Giems and immunoperoxidase staining methods // Acta cytol. 1986. - V.30. - N4. - P.341-346.

258. Dvorakova D. Deterkce chlamydii immunofluorescencni metodon // Vet. Med. 1979. - V.24. -N10. - P.603-614.

259. Dwenger A. Radioimmunoassay: an overview // J. Clin Biochem. 1984. -V22.- N12.- P.883-894.

260. Ehlers U., Paul H.L. Binding of viruses from crude plant extracts to glutaraldehyde-treated plates for indirect ELISA// J. Virol. Meth. 1984. - V. 8,-N3.-P. 217-224.

261. Eissenberg L.G., Wyrick P.B., Davis C.H., Rumpp J.W. Chi. psittaci elementary body envelopes: Ingestion and inhibition of phagolysosome fusion // Infect, and Immunol. 1983. - V.40. - N2. - P.741-751.130

262. ELISA solid phase: stability binding characteristics / A.A. Ansari, N.S. Hattikudur, S.R. Joshi, M.A. Medeira // J. Immunol. Meth. 1985. - V. 84. - N 1-2.-P. 117-124.

263. Ence K.N, Liebermann N., Schuckmann B. Virusabort und Brucella abortus in einem schafbestand // Mh. Vet. Med. !959. - V.14.- P.473-475.

264. Engvall E. Preparation of enzyme-labelled staphylococcal protein A and its use for detection of antibodies // Scand. J. Immunol. 1978. - V. 8, suppl. -N7.-P. 25-31.

265. Engvall E., Jonsson K., Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay. II. Quantitative assay of protein antigen, immunoglobulin G, by means of enzyme-labelled antigen and antibodycoated tubes // Biochem. Biophys. Acta. -1971.-V. 251.-P. 427-434.

266. Engvall E., Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G // Immunochem. 1971. - V. 8. - P. 871-874.

267. Engvall E., Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay. Quantitation of specific antibodyes by enzyme-labelled antiimmunoglobulin in antigen-coated tubes // J. Immunol. 1972. - V. 109. - P. 129-135.

268. Enzyme-labelling of antibodies and their fragments for enzyme immunoassay and immunohistochemical staining/ E. Ishikawa, M. Imagawa, S. Hashida et al. // J. Immunoassay. 1985. - V. 4.- N 3. - P. 209-327.

269. Enzyme-linked sandwich immunoassay of macromolecular antigens using the rabbit antibody-coupled glass rod as a solid phase/ Y. Hamaguchi, K. Kato, H. Fukui et al. // Europ. J. Biochem. 1976. - V. 71- P. 459-467.

270. Erlandson R.A., Allen E.G. The ultrastructura of meningopneumonitis // Virology. 1964. - N22. - P.410-418.

271. Eugster A., Joyce B., Storz J. Immunofluorescent studies on the pathogenesis of intestinal chlamydial infections in calves // Infect, and Immunol. -1970.-N2.-P.351-359.131

272. Evans R.T., Chalmres W.S., Woolcock P.R. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of chlamydia antibody in duck sera//Avian Pathol. 1983. - V.12.-Nl. - P.l 17-124.

273. Fapnes K., Richard D.F., Groft G.F., Johnson F.B. Evaluation of a cell culture-immunoperoxidase stain method for the diagnosis of Chi. trachomatis infections / Abstr. Annu. Meet Am. Soc. Microbiol.- Waschington, D.C., 1986.

274. Farr A.G., Nakane P.K. Immunohistochemistry with enzyme-labelled antibodies: a brief review // J. Immunol. Meth. 1981. - V. 47. - N 2. - P. 129144.

275. Faye P. Quelques aspects practiques des problemes poses pamle virus de Favortement de in brebie // Recuel. Med. Vet. 1958. - V.134. - N6. - P.351-363.

276. Feigner P. A new technique of heterogenous enzyme-linked immunosorbent assay, stick-ELISA. I. Description of the technique // Zbl. Bact. I., Abt. Orig. A. 1978. -Bd 240, H. l.-S. 112-117.

277. Fey H., Peister H., Messerli I., Stursenegser, Crolimund F. Methods of Isolation, Purification and Quantitation of Bovine Immunoglobulins // Zbl. Vet. Med. 1976. -3.-23, 269-300.

278. Finney P.M., Bushell A.C. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for anti-chlamydial secretory immunoglobulin A in guinea pig tears // J. Immunol. Meth. 1986. - V.86.-N1. - P.71-74.

279. Frazer G., Berman D.T. Typospecific antigens in the PLV group of organisms // J. Bact. 1965. - N89. - P.943-948.

280. Friis R.R. Infection of L cells and Chi. psittaci, entry of the parasite and host responses to its development // J. Bacteriol. 1972. - V. 110. - P. 706-721.

281. Frilseen A.D. Process for preparing purified immunoglobulin G (IgG) // Path., 1201063, Canada, MK1 A 61 K/39/395.

282. Fukuchi H., Ogawa H., Ninamoto N. et al. Seroepidemiological surveillance of Chi. psittaci in cats and dogs in Japan // Vet.Res. 1985.1321. V.l 17. N19. - P.503-504.

283. Gallard E.T., Hargis A.M., Prieur D.J., Evermann J.F., Dhillon P.S. Palhogenesis of feline gastric chlamydial infection. / Am. J. Vet. Res.- 1984. -V.49, 11.- P.2314-2321.

284. Генчев Г. Серологични изследования на респираторните заболявания по телетата по отношению на Myxovirus parainfluenzae-З, аденовируси и неориккетсии //Вет. Мед. Науки. 1973. - Т. 10. - №8,- С.75-80.

285. Giauffret A., Russo P. Enquet serologique sur la ch'.amydiose des petits ruminants. Etude de la reaction de fixation du complement // Rec. Med. Vet. -1976. V.152. - N9. - P.535-541.

286. Gogolak F.M. The mouse hemagglutinin of feline pneumonitis virus // J. Infect. Dis. 1954. - N95. - P.220-225.

287. Gonsales S.J. Chi. psittaci varieded TWAR. Un nueve patogeno a considerar // Enferm. Infect. V Microbiol. Clin. 1987. - N5. - P.319-321.

288. Gordon F., Quan A.L. Isolation of Trachoma agent in cell culture / Procedings of the Society of Experimental Biolgy (New York).- 1985.-N 118. -P. 354-359.

289. Grayston J.T., Wang S.P., Kuo C.C., Campbell L.A. Current knowledge on Chi. pneumoniae, strain TWAR, an important cause of pneumonia and other acute respiratory diseases // Clin. Microbiol, and Infect. Dis. 1989. - V.8. -N3. - P.191-202.

290. Griffme J.M., Bertran M.A., Broud D.D. Separation and purification of immunoglobulins M, A and G from small villumce of numan sera by a continuous, inline chromatographic process // J. Chromatogr. 1978. - V.156.-N1.- P.121-130.

291. Guesdon J.L., Avrameas S. Lectin-immunotests: quantitation and titration of antigen and. antibodies using lectin-antibody conjugates// J. Immunol. Meth. 1980.-V. 39.-P. 1-13.133

292. Guesdon J.L., Avrameas S. Magnetic solid-phase enzyme-immunoassay// Immunochem. 1977. - V. 14. - N 6. - P. 443-447.

293. Guesdon J.L., Ternynck T., Avrameas S. The use of avidin-biotin interaction in immunoenzymatic techniques// J. Histochem. Cytochem. 1979. -V. 27.- N 28. - P. 1131-1139.

294. Hackstandt T. Identification and properties of chlamydial polypeptides that bind eucaryotic cell surface components // J. Bacteriol. 1986. - N165. - P. 13-20.

295. Haskizume S. Diagnosis of chlamydial infection //Asian Med. J. 1988. -V.31. -N2.-P.83-86.

296. Hencher Z., Wajcik A. Hemagglutining properties of Miyagawanella strains // Acta Microbiol. Polon. 1966. - V.15. - N4,- P.311-321.

297. Hendrick J.C., Franchimont P. New trends in radioimmunoassay / Prond. Biol. Fluids. Oxford, 1974. - P.619-624.

298. Hendry R.M., Herrmann J.E. Immobilization of antibodies on nylon for use in enzyme-linked immunoassay // J. Immunol. Meth. 1980. - V. 35. - N 34. - P.285-296.

299. Higachi N. Electron microscopic studies on the trachoma virus and psittacosis vims in cellcultures // Ex. Mol. Pathol. 1965. - N4. - P.24-29.

300. Hilleman M.K. Immunological studies on the psittacosis-lymphogranuloma group of viral agents // J. Infect. Dis. 1945. - V.76.- N96. -P.114.

301. Hilleman M.K., Haig D.A., Helmold R.I. The indirect complement fixation, hemagglutination and coagglutination tests for viruses of the PLV group // J. Immunol.- 1951. N66,- P. 115-130.

302. Hunter W.M. Radioimmunoassay: Handboookof experimental immunology / Weir D.M. ed Oxford: Blackwell Scient. Publ., 1978,- V.l. -N14. -P.l-40.134

303. Increased non-specific binding of heat-treated proteins to plastic surfaces analysed by ELISA and HPLC-fractionation / S. Husby, U. Holmskov-Nielsen, J.C. Jensenius, K. Erb // J. Immunoassay. 1985. - V. 6.- N 1-2. - P. 95-110.

304. Inman J.K., Dintzis H.M. The derivatization of cross-linked Polyacrylamide beads. Controlled introduction of functional groups for the preparation of special-purpose, biochemical adsorbents// Biochein. 1969. - V. 8.-N 10.-P. 4074-4082.

305. Jawetz B. Seasonal insuoceplility of embrionated eggs to viruses of Trachoma and Inclusion conyunctivitis. / Annals of the New York Academy./ Scinces.- 1962.- N98.- P.31-37.

306. Jeggo M.H. Diagnosis of viral diseases using ELISA techniques// Nucl. and Related Tech. Anim. Prod, and Health Proc. Int. Symp., Vienna, 17-21 March. 1986.-P. 289-301.

307. Jenkin H.M. Chlamydia: biology and experimental pathology / Charman's report and discussion: Nongonococcal urethritis and relat. infect. Washington, D.C , 1977.- P.233-234.

308. Jenkin H.M. Preparation and properies of cell walls of agent of meningopneumonitis // J. Bacteriol. 1960. - V.80. - P.639-647.

309. Jenkin H.M., Ross M.R., Moulder J.W. Species-specific antigens from the cell walls of the agents of meningopneumonitis and feline pneumonitis //J. Immun. -1967.- N86. P. 123.

310. Jones H., Rake G., Stearne D. Studies on IGV. J. of Infections dieseases. -1959.-76,-P. 55-69.

311. Judd M.A., Britten K.J.M. Tissue preparation for the demonstration of surface antigens by immunoperoxidase techniques// Histochem. J. 1982. - V. 14.-N5.-P. 747-753.

312. Kaleta E.F. Aktuelle Fragen der Diagnose und Bekämpfung der Psittakose // Tierarztl. Umsch. 1997. - Jg.52. -Nl. - S.36-44.135

313. Kammer K. The antigenic reactivity in ELISA of the HAZ-subunit of the influenza A/FPV/Rostock/34(H7Nl) virus-hemagglutinin// Zbl. Bact. I. Abt. Orig. A. 1984.-Bd 257.-N 1. - S. 140-141.

314. Kellner S.G. Augenveranderungen bei Katzen durch Chlamydia psittaci/Kleintierpraxis.-1988.-33.-P.157-160.

315. Kenna J.G., Major G.N., Williams R.S. Methods for reducing nonspecific antibody binding in enzyme-linked immunosorbent assays// J. Immunol. Meth. -1985. V. 85,- N 2. - P. 409-419.

316. Kingsbery D.T., Weiss E. Lack of DNA homology between species of the genus Chlamydia//J. Bacteriol.- 1968.- V.96. N4.-P.1421-1423.

317. Kishimoto T., Kobota Y., Matsumoto A. et al. // J. Jap. Assoc. Infect. Dis. 1996.- V.70. - N8. - P.821-829.

318. Knecht E. Virusinfektionen der Korfschleimhaute sowie des Respiralionstraktes bei Katzen // Gieben, Vet. Med. Fakultat. Diss. 1979.

319. Kordova N., Martin C., Wilt J., et al. Immunofluorescence of peritoneal phagocytes öfter infection in vivo with egg attenuated Chi. psittaci 6 BC // Can. J. Microbiol. 1973.-V.I9. -Nil. - P.1425-1429.

320. Krauss H. Enzym Immuntest bei clilamydienfektionen der Weiderkaner // Wissenschaftliche Zeitschrift. 1980. - V.29.- N1. - P. 101-104.

321. Kuo C.C., Caldwell H.D., Wang S.P., Grayston J.T. Nongonococcal Urethritis and related infections / Washington, D.C., 1977. P. 176-185.136

322. Kurstak E. The immunoperoxidase technique: localization of viral antigens in cells // Methods in virology; Ed. K. Maramorosch, H. Koprowski. -N.Y., London: Academic Press, 1971. P. 423-444.

323. Kurstak E., Kurstak C. Application of the immunoperoxidase technique in virology and. cancer virology: light and electron microscopy// Viral Immunodiagnosis; Ed. E. Kurstak and. R. Morisset.- New York: Acad. Press, 1974.-P. 3-30.

324. Labsoffsky N.A. Rapid agglutination test as a possible aid in the laboratory diagnosis of ornithosis // J. Infect. Dis. 1946. - N79. - P.96-100.

325. Langone J.J. Applications of immunobilized protein A in immunochemical techniques// J. Immunol. Meth. 1982. - V. 55.- N 3. - P. 277-296.

326. Lehtonen O.P., Viljanen M.K. Antigen attachment in ELISA// J. Immunol. Meth. 1980. - V. 34,- N 1. - P. 61-70.

327. Lema F., Everaere S., Rougeot C. et al. ELISA for detection of human antibodies to Chlamydiae // J. Immunol. Meth. 1986. - V.94. - N1-2. - P. 153159.

328. Lepinay A., Robincaux R., Orfilla J. Ultrastructura et cytohimie ultrastructurale des membranes de Chi. psittaci // Arch. Des. Virus forsch.-1971. -N33. -P.261-270.

329. Levitt D., Barol J. The immunbiology of Chlamydia./ Immunology Today.- 1987,- 8,- P. 246-251.

330. Lewis V.J. Enzyme-linked immunosorbent assay for chlamydial antibodies // J. Clin. Microbiol. 1977. - V.6. - N5. - P.507-510.

331. Li Q.Z., Magee W.E. An antibody adsorption technique facilitates antigen selection for development of serotype-specific monoclonal antibodies to Jersinia enterocolitica. 1993. -14. - P.962-970.

332. Lincoln S., Kwapien R.P., Reed D.E. et al. Epizootic bovine abortion // Am. J. Vet. Res. 1969. - V.30. - N12. - P.2105-2113.

333. Lipine P., Sautter A. //Bull. Acad. Nat. Med. 1951. - V.332.- P. 19-20.137

334. Litwin J. The growth cycle of the psittacosis group of microorganisms // J. Infect. Dis.- 1959. N105. - P. 129-161.

335. Litwin J., Officer J., Brawn A., Moulder S. A comparative study of the different cycle of different member of the psittacosis group in different host cells // J. Infect. Dis. 1961. - V. 109. - N3. - P.251.

336. Mackaaness G.B. Resistance to intracellular infection. / J. Infect. Dis.-1971.- 123.- P. 439-445.

337. Maclean I.W., Peelino R.W., Bninham R.C. Characterization of Chi. trachomatis antigens with monoclonal antibodies // Can. J. Microbiol. 1988. -N34. -P.141-147.

338. Malik M.J., Daymon M.E. Improved, double immunoenzyme labelling using alkaline phosphatase and horseradish peroxidase // J. Clin. Pathol. 1982. - V.35.-N 10.-P. 1092-1094.

339. Manire C.P., Tamura A. Preparation and chemical composition of the cell walls of nature infections dense forms of meningopneumonitis organisms // J. Bact. 1967. - V.94. - N4. -P.l 178-1183.

340. Mannik M., Downey W. Studies of the conjugation of horseradish peroxidase to Fab fragments // J. Immunol. Meth. 1973. -V. 3. - P. 233.

341. Мартинов С. и др. Хламидийни полиартриты по телетата // Вет. Мед. Науки,- 1981.-T.18.-N3.-C.83-91.

342. Mason D.M. A capillary tube agglutination test for detecting antibodies against ornithosis in Turkey serum // J. Immunol. 1959. - N83. - P.661-666.

343. Meinerhofer W.A., Frank F.W , Scrivner L. Ovine virus abortion //J. Am. Vet. Med. Ass. 1962. - V.140. - N5. - P.448-450.

344. Meissler M. Untersuchungen zun Nachweis von Chlamydien in der Zeilkultur./ Gieben. Vet. Med. Fakultat. Diss. 1980.

345. Mendlowski В., Segre D. Purification of the virus ovine abortion and its use in agglutination test // Am. J. Vet. Res. 1963. - N25. - P.627-645.

346. Meyer K., Bedie В. Группа пситтакоза венерической138лимфогранулемы. / Пер. с англ.- М.- Медицина, 1964.- С. 603 639.

347. Meyer K.F. Early diagnosis of infections by the PLV group / Dynamics of virus Rickettsial Infections. N.Y.: Blakiston C°, 1954. - V.259. - N4. - P.323.

348. Meyer K.F., Eddie B. The value of the complemet fixation test in the diagnosis of psittacosis // J. Infect. Dis. 1939. -N11.- P.225-233.

349. Meyer K.F. Pigeons and barn yard fowls as possible sources of human psittacosis or ornithosis // Schweis. Med.- Wochnrsech, 1941. N71.- P. 13771380.

350. Mields W. Hentchke J., Becker W., Teufel P. Die Immunoperoxidasemethode zum Nachweis von Virus-and Chlamydienantigenen // Zbl. Vet. Med. B. -1974.- V.21.- S.48-58.

351. Mitscherlich E. Der Virusabort des Schofes in Deutschland // Dtsch. Tierarztl. Wsch. 1954. - N5. - S.42-46.

352. Mitscherlich E.Die Bekämpfung des Virusabort der Schofes // Berl. und Munch. Tierarztl. Wochen. 1965. - B.78. -N5. - S.81.

353. Mohr J., Franz H. Some properties of Con A-antibody conjugates// Acta Histochem. 1982. - V. 71.-N 1. - P. 23-27.

354. Moos В., Flexner C. Vaccina virus expression vectors. / Ann. Rev. Immunol.- 1987,- 5.- P. 305-324.

355. Morland В., Byrne G.I., Jones T.C. The effect of ultracellular Chi. psittaci on Lysosomal enzyme activities in mouse peritoneal macrophages // Acta Path., Microbiol, et Immunol. Scand. 1987. - V.95. - N6. - P.291-293.

356. Morrel J.I., Greenberger L.M., Pfaff D.W. Comparison of Horseradish peroxidase visualization methods: quantitative results and further technical specifics// J. Histochem. Cytochem. 1981.- V. 29.- N 8. - P. 903-916.

357. Morter R. Chlamydial diseases // Mod. Vet. Pract. 1981,- V.62. - N6,-P.467-468.

358. Moulder J.W. Metabolic capabilities and deficiencies of rickettsiae and psittacosis group // Int. J. Leprosy. 1965. - V.33.- P. 494.139

359. Moulder J.W. The contribution of model system to the studying of infections disease // Persp. Biol. Med. 1971. - N14. - P.486-502.

360. Moulder J.W. The relation of the Psittacosis group to bacteria and virusis./ Ann. Rev. Microbiol.- 1966.- 20.-P. 107 127.

361. Moulder J.W., Grissa D.L., Cho H.J. Endogenous metabolism of protein and ribonucleic acid in a member of the psittacosis group // J. Infect. Dis . -1965.-V.115. N3.-P.254.

362. Moulder J.W., Levy N.J., Schulman L.P. Persistent infection of mouse fibroblasts (L-cell) with Chi. psittaci: evidence for a cryptic chlamydial from // Infect, and Immunol. 1980. - V.30. - N3. - P.874-883.

363. Nabli B. The complement fixation and microimmunofluorescence tests in chlamydia diagnosis // Rev. Infect. Trachoma. 1984. - V.61. - N1. - P.53-56.

364. Nakamura R.M., Hahon N. Quantitative assay of psittacosis virus by the fluorescent cell counting technique // Virol. - 1964. - V. 64. - № 3. - P. 203 -208.

365. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labelled antibody: a new method of conjugation// J. Histochem. Cytochem. 1974. -V. 22.- N 12. - P. 1084-1091.

366. Neuvonen E., Pyoralla E. Serological observation on Chi. psittaci infection in Finnish dairy herds // Acta Vet. Scand. 1981. - V.22. - N 1. - P. 18.

367. Nietfeld J.C., Leslie-Steen P., Zeman D.H., Nelson D. Prevalence of intestinal chlamydial infection in pigs in the Midwest, as determined by immunoperoxidase staining // Am. J. Vet. Res. 1997.- V.58. - N3. - P.260-264.140

368. Nigg С., Helleman M.R. Viral and rickettsial infections of man // J. Immunol. 1946,- V.53.-N2. - P.259-268.

369. Nilson P., Bergquist N.R., Grundy M.S. A technique for preparing defined conjugates of horseradish peroxidase and immunoglobulin// J. Iminunoi. Meth.- 1981. V. 41.-N 1. - P. 81-93.

370. Nygren H. Conjugation of horseradish peroxidaise to Fab fragments with different homobifunctional and heterobifunctional cross-linking reagents// J. Histochem. Cytochem. 1982. - V. 30. - P. 407-411.

371. Огнянов Д. Изолироване на вируса и някой проучвания въерху вирусния аборт на овците у нас // Изв. ЦНИВИ по вирусол. 1962. - Т.1.-С.37-51.

372. Огнянов Д. Неориккетсиозите катозоонози // Вет Сб. 1976. - Т.74.-N9,- С.12-15.

373. Огнянов Д. Някой вирусологичне проучвания на вируса на аборта по овците // Изв. На вет. Инстит. по вирусол. (Болгария) 1963. - N. 11. - С.39-45.

374. Огнянов Д.Принос към проучване на комплемента при вирусния аборт по овците у нас // Изв. ЦНИВИ по вирусол. 1960. - Т.2. - С.107-113.

375. Ohana В., Prankratova V., Groh A. el al. Sero CT™-e new peptide based ELISA lest for specific defection of Chi. trachomatis ntibodies // Infect. Dis. Obstet. And Ginecol. 1996. - V.4.- N3.-P.I92.

376. Ориэл Д.Д., Риджуей Д.JI. Хламидиоз. М.: Медицина, 1984. 191 с.

377. Oriel J.D., Ridgway G.L. Genital infection by chlamydia trachomatis./ Edward Arnold. 1982.

378. Page L. Revision of the Family Chlamydiacae Rake. / Inter-nation J. Syst. Bact.-1966.-16.-P. 223 -252.

379. Page M., Andette M., Garon M. A rapid method for the purification of antibody-enzyme conjugates// Can. J. Biochem. -1979. V. 57.- N 3. - P. 286288.141

380. Parker C.W. Radioimmunoassay of biologically active compounds. New Jersey: Prentice-Hall Inc., 1976.

381. Patricon M.C. Technique ELISA // Pharm. Biol. 1981. -V. 15,- N 131, suppl. - P. 15-19.

382. Pepin M., Bailly L., Souriau A., Rodolakis A. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of chlamydial antibodies in caprine sera // Ann. Rech. Yet. 1985. - V.16.- N4. - P.393-398.

383. Petersen E.E. Chlamydien infektionen // MTA. 1996. - V.ll. - N5. -S.354,356-358,360,362.

384. Piccinini R., Sola V., Turri F., Pozzi N. Evidenziazione di Chi. psittaci in caprini infetti e portatori medionte prove immunoenzimatiche// Selez. Vet. -1987,- V.28. N10. -P.1557-1559.

385. Piriano F.F., Abel C. Plague assay for psittacosis virus in monolayers of chick embryo fibroblasts // J. Bacteriol 1964. -N87. - P. 1503-1511.

386. Poffenroth L., Costerton J.W., Kordova N., Wilt J.C. Ultrastructural studies of Chi. psittaci 6BC strains // Can. J. Microbiol.- 1973.-V.19.-N8,-P.887-894.

387. Popovici V. Contributions to the Epizootology of virus abortion in ewes // Ins. Cer. Bioprep. Pasteur. 1966. -N 1. - P. 29-39.

388. Quantitative enzyme immunoassay: currente statue / L.S. Schärpe, W.M. Cooreman, W.J. Blomme, G.M. Laekeman // Clin. Chem. 1976. - V. 22. - N 6.-P. 733-738.

389. Reed D.K., Lincoln S.D., Kwaplan R.P., et al. Comparison of antigenic structure and pathogenicity of bovine intestinal Chlamydia isolate with an agent of epizootic bovine//Am. J. Vet Res. 1975. - V.36. - N8. - P.l 141-1143.

390. Riera M.C., Barron A.L. Reaction with hemagglutinin of psittacosis agent in gel diffusion //Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1970. - V.135. -Nl. - P.594-597.

391. Rodolakis A., Souriau A. Clinical evaluation of a commercial vaccine against chlamydial abortion of ewes // Ann. Rech. Vet. 1979. - N10. - P.41-48.142

392. Roger A. Contribytion microscopique a lelute cytologique des virus du gruop trachoma psittacose limphogranulomatose // Bul. Soc. Pat. Exot. -1958.-V. 51.-№4. -P. 408-484.

393. Romer W., Rauterberg E. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with covalently bound protein on glass bubes: I. Stable antigenicity and binding of IgG as a model antigen after repeated use // Immunobiology. 1984. -V.166.-N1.-P.24-34.

394. Rozeik C., Schulz H.B. The competitive antigen stop test (CAST). A rapid and simple means of quantitatively screening antisera // J. Immunol. Meth. 1986. - V. 91.-N l.-P. 91-97.

395. Rubenstein K.E., Schneider R.S., Ullman E. "Homogeneous" enzyme-immunoassay: a new immunochemical technique// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1972. - V. 47. - P. 846-851.

396. Ruppanner R., Behymer D.E., De Long III W.J. et al. Enzyme immunoassay of chlamydia in birds // Avian Dis. 1984. - N28.- P.608-615.

397. Sarkar M., Mandai C. Immunobilization of antibodies on a new solid phase for use in ELISA // J. Immunol. Meth. 1985. - V. 83. -N 1. - P. 55-60.

398. Sarov J., Becker Y. Trachoma agent DNA // J. Mol. Biol.- 1969. N42,-P.581-584.

399. Schachter J. Are chlamydial infection the prevalent venereal disease // Am. J. Med. Ass. 1975. - V.231. - P.1252-1255.

400. Schachter J., Banks J. Serotyping of Chlamydia./ Infect Immun. 1975.-11.-P. 904-907.

401. Schachter J., Banks J., Nancy S., Storz J. Serotypiny of Chlamydia // Am. J. Soc. Microbiol. 1974. - V.9. - NI. - P.92-94.143

402. Schachter J., Banks J., Sugg N. et al. Serotyping of Chlamydia: isolates of buvine origin // Infect, and Immunol. 1975. -V.il.- N5. - P.905-907.

403. Shachter J., Grossmann M. Chlamydial infections // Ann. Rev. Med. -1981.-N32. -P.45-61.

404. Schachter J., Ostler H.B., Meyer K.F. Human infection with the agent of feline pneumonitis./Lancet.-1969.-I.-P. 1063-1065.

405. Schachter J., Storz J., Tarizzo M.L., Bodel K. Chlamydiae as agents of human and animal diseases // Bull. Wrld. Hlth. Org. 1973. - V.43.- P.443-449.

406. Schilow W.F., Meyer U., Reimann Y. Praparation von Antirinder-IgG-Konjugaten mit verschiedenen Spezifitatsgraden fur den Enzyme immunoassay// Arch. Exper. Vet. Med. 1983. - Bd 37, N2. - S. 685-691.

407. Schlossberger H., Kolle W., Hetsch H. Experimentelle Bakteriologie und Infektionskrankheiten. München, 1952.

408. Schmeer N., Adami M., Dopfer B. u.a. Zur humoralen Immunantwort von Ziegen, Kaninchen und Meerschweinchen hach der Vakzination mit einem Q-Fieber-Impfstoff // Berl. Munch. Tierarztl. Wschr. 1985. - N98. - S.20-24.

409. Schmeer N., Busche R. Seroepidemiologische Untersuchungen auf Ornithose und Salmonellose mittels Enzym-immunotest in mittelhessischen Taubenbestanden // Fortschr. Vet. Med. 1983. - N37. - P.l 15-120.

410. Schmeer N., Krauss H., Apel J. et al. Analysis of caprine IgGl and IgG2 subclass responses to Chi. psittaci infection and vaccination // Vet. Microbiol.-1987.- V.14. -N2. P. 125-135.

411. Schuurs A.H.W.M., Van Weemen B.K. Enzymeimmunoassay // Clin. Chim. Acta. 1977. - V. 81. - P. 1 -40.

412. Seffner W. Erffanrung in zum virusabort der Diagnose mittels komplementbingungsreaktion // Berl. Munch. Tierarztl. Wschr. 1960. - V.73. -N15. - S.284-287.

413. Shewen P.E. Chlamydial infection in animals a review // Canad. Vet. J. -1980.-V.21. -№ l.-p. 2- 11.144

414. Shewen P.E., Povey R.C., Wilson M.R. A survey of the conjunctival flora of clinically normal cats and cats wihi conjunctivitis./ Can. Vet. J. 1980.- 21.-P.231 -233.

415. Smadel J.A., Wall M.Y., Greeg A. An outbreak of psittacosis in pigeons, involing the production of inclusion bovines and transfer of the disease to man // J. Exp. Mod. 1943.- N78. - P. 189-203.

416. Spears P., Storz J. Biotyping of Chi. psittaci based on inclusion morphology and response to Diethylaminoethyl-dextran and Cycloheximide // Infect. Immunol. 1979. - N24. - P.224-232.

417. Stamp J.T. Abortion of sheep // Vet.Res. 1950. - V.62. - P.779-785.

418. Stamp J.T., Mc Ewen A.D., Watt A.A., Nisbet D.I. Enzootic abortion in ewes: 1. Transmission of the disease // J. Vet. Res. 1950. - N62. - P.251-259.

419. Stephens R.S., Kuo C.C. Chi. trachomatis species-specific epitope detected on mouse biovar outer membrane protein // Infect. Immunol. 1984. -N45. -P.790-791.

420. Sternberger L.A. Immunocytochemistry. N.Y. : Englowood Clifts, 1974.- 246 p.

421. Sting R. Chlamydia-psittaci-Infektionen bei Kuhun und weiblichen Schafen im nordlichen Baden-Werttemberg // Tierarztl. Umsch. 1997. - Jg.52.- N6.- S.332-339.

422. Storz J. Chlamydia and Chlamydia induced disease. Springfield, llinois, Charles C. Thomas Publish.- 1971.

423. Storz J. Chlamydia and chlamydia-included diseases Illinois, USA, 1971.

424. Storz J. Microbiologi of Chlamydia. Ed A.L. Barron./ CRC Press.- P. 168.

425. Storz J. Superinfection of pregnant ewes latently infected with a psittacosis lymphogranuloma agent // Cornell Vet. 1963. - N53,- P.469-480.

426. Stuart E.S, Tirrel S.M. Characterrization of an antigen secreted by chlamydia-infected cell culture./ Immunology.- 1987.-61.- P. 527-533.145

427. Studdert M.J., Mc Kercher D. Bedsonia abortion of sheep III. Immunological studies // Res. Vet. Sc. 1968. - N9. - P. 331-336.

428. Taylor C.R. Immunoperoxidase techniques // Arch. Pathol. And Labor. Med. 1978. - V. 102.-N3.-P. 113-121.

429. Terzin A.L., Matuka S., Fomazaric M.R., LTLaca D.M. Preparation of group specific Bedsonia antigens for use in complement-fixation reaction // Acta Virol.- 1961.-N5.-P.78-83.

430. Tessler J., Stone S., Paye L. Direct immunofluorescence tests with Chi. psittaci in infected avian tissues // Can. J. Comp. Med. 1979. - V. 43. - N2. -P. 117-126.

431. Todd W.J., Caldwell H.D. The infection of Chi. trachomatis with host cell. Ultrastructural studies of the mechanism of release of biovar II stain from Hela229 cells //Infect. Dis. 1985,- V. 151. - N6. - P. 1037-1044.

432. Truszcezynski M., Sadowski M. Ocene metod identyfikacji drobnoustrojow z rodzajn Chlamydia (Miyagawanella) w materide pochodzenia bydlecego // Med. Wet. 1973. - V.29. - N7. - S.389-391.

433. Urnovitz H.B., Gottfried T.D., Robinson D.J. Immunoassays for the detection of antibodies to Chi. trachomatis in the urine: Pat. 5516638 USA, 1996.

434. Use of rabbit antibody IgG-loaded silicone pieces for sandwich immunoassay of macromolecular antigens / K. Kato, Y. Hamaguchi, S. Okava et al.//J. Biochem.- 1977.-V. 81.-P. 1557.

435. Van Weeman B.K., Schuurs A.H.W.M. Immunoassay using antigen-enzyme conjugates // FEBS Lett. 1971. - V. 15. - P. 232-236.146

436. Varju L. A komplementkotesi proba un LBCF modszere tuljesito-kepessegene osszuhason lito vizsdalata // Magyar allatory Lapja. 1981.- V. 36. - N5. - S.325-327.

437. Veznik Z., Svecona D., Pospisil L., Diblikova I. Detection of Chlamydia spp. In animal and human semen by direct immunofluorescence // Vet. Med. -Praha, 1996.-V.41.- N7.-S.201-206.

438. Vitu C., Russo P., Giauffret A. Application du test ELISA a la serologie des chlamydioses des ovins et des caprine: Edu de comparative avec la reaction de fixation du complement // Bull. Lab. Vet. P 1984. N13. - P.55-69.

439. Volkert M., Christensen P.M. Studies on Ornithosis in Denmark // Acta Path. Microbiol. Scand. 1954. - V.35. - N6. - P.584-590.

440. Voller A., Bidwell D.E., Bartlett A. Enzyme immunoassays in diagnostic medicine. Theory and practice // Bull. World. Health Organ. 1976. - V. 53. -N l.-P. 55-65.

441. Voller A., Bidwell D.E., Bartlett A. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). A guide with abstracts of microplate applications. London, 1979,- 128 p.

442. Wachendorfer C., Valder W.A., Luthgen W. Erfahrungen mit der Vakzination gegen den Chlamydienabort des Schafes // Wiss. Z. Humb. Univ. Berk- 1980.-R. 29. S. 105-111.

443. Wang S.P., Grayston J.T.T'rachoma and related disorders coused by chlamydial agents / Amsterdam, 1971.- P.305-321.

444. Weiss E.J., Wilson N. Role of excrenous adenosine triphosphate in catabolic and synthetic activities of Chi. psittaci // J. Bacteriol.- 1969. V.97.-P.711-725.

445. Wenman W.M., Meuser R.U. Chi. trachomatis elementary bodies possess proteins which bind to eucaryotic cell membranes // J. Bacteriol. 1986. -V.165. - P.602-607.

446. Werner G. The Bedsonia Group of Agents. / In Basic Medical Virology.147

447. Edited by J.E. Prier. Williams and Wilkins Company, Baltimore, Md. 1966.

448. Werth D., Schmeer N.H.P., Muller H. u. a. Nachweis von Antikörpern gegen Chi. psittaci und Coxiella burnettii bei Hungen und Kaisen // J. Vet. Med. -1987.-B. 34.-N3. S.165-176.

449. Wills J. M., Timothy J.Gruffydd Jones., Richmond S. J., Gaskel R. M., Bourne F. J. Effect of Vaccination on Feline Chlamydia psittaci Infection. / Infection and immunity. Nov.- 1987.- P. 2653 - 2657.

450. Wills J.M. Chlamydial infection in the cat. Thesis submitted to the University of Bristol. 1986.

451. Wisdom B.G. Ensyme-immunoassay // Clin. Chem. 1976. -V. 22.- N 8. -P. 1243-1255.

452. Yalow R.S., Berson S.A. Immunoassay of endogenous plasma insulin in man // J. Clin. Invest. -1960. V. 39. - P. 1157-1175.

453. Yolken R.H. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) : a practical tool for rapid diagnosis of viruses and other infections agents // Yale J. Biol. Med. 1980. - V. 53.-P. 85-92.

454. Yolken R.H., Leister F.J. Staphylococcal protein A-enzyme immunoglobulin conjugates: versatile tools for enzyme immunoassays // J. Immunol. Meth. 1981. - V. 43,- N 2. - P. 209-218.

455. York C.J., Baker J.A Miyagawanella bovis infections in calves // An. N.Y. Acad. Sei. 1956. - V.66. - P.210-214.

456. York C.J., Baker J.A. A new member of the PLV group viruses that causes infection in calves //J. Exp. Med. 1951,- V.93. - P.587-604.

457. Zelenkova L., Strauss J. Test fluorescencnich protilatek diagnoetice ornitozy // Cesk. Epidem. Microbiol. Immunol. 1963. - N3. - P. 140-144.148

458. Христофоров Л., Пашков И., Иванчева Л.Вьерху титри при неориккетсиоза у животнете //Вет. Мед. Науки. 1979. - N3.- С.3-8.

459. Обухов И.Л. Молекулярно-генетическая характеристика хламидий и экспресс-диагностика хламидиоза // Докторская диссертация. Москва, 2000. - С. 351.1. Щелково 1999