Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммунодефициты и их коррекция у животных из экологически неблагоприятных регионов

N

СО

е-» с>-^ О

/

На правах рукописи

ЯНГУРАЗОВА Земфира Ахметовна

ИММУНОДЕФИЦИТЫ И ИХ КОРРЕКЦИЯ У ЖИВОТНЫХ ИЗ ЭКОЛОГИЧЕСКИ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ РЕГИОНОВ

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология,эпизоотология,

микология и иммунология 03.00.19 - Паразитология, гельминтология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

На правах рукописи

ЯНГУРАЗОВА Земфира Ахметовна

ИММУНОДЕФИЦИТЫ И ИХ КОРРЕКЦИЯ У ЖИВОТНЫХ ИЗ ЭКОЛОГИЧЕСКИ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ РЕГИОНОВ

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология,эпизоотология,

микология и иммунология 03.00.19 - Паразитология, гельминтология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Работа выполнена в Башкирском Государственном Университете.

Научные консультанты: член-корреспондент РАСХН, доктор

ветеринарных наук, профессор А.Н.Панин, доктор ветеринарных наук, профессор Э.Х.Даугалиева

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор Душук Р.В. (ВГНКИ)

2. Доктор медицинских наук, профессор Атауллаханов Р.И. (ИИ МЗ РФ)

3. Доктор биологических наук, профессор Бенедиктов И.И. (ВИГИС)

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко (ВИЭВ)

соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов по адресу: 123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВГНКИ.

часов на заседании специализированного Совета Д - 12 0.

Защита состоится " 1597 г. в

120.85.0' на

Автореферат разослан ".

1997 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета кандидат ветеринарных наук

Ю.А. Козырев

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

Окружающая среда - это сложная природная экосистема, оказывающая влияние на все процессы живого организма. Урбанизация обширных территорий, бессистемное использование ядохимикатов (инсектицидов, пестицидов, гербицидов), препаратов бытового назначения и др., безответственное отношение к вопросам природопользования привели к формированию новой ранее неизвестной химической среды, к которой оказались неприспособленными не только люди, животные, но и растительный мир, что явилось причиной негативных изменений не только отдельных видов, но и целых природных комплексов и климата. В биосфере циркулирует огромное число ксенобиотиков техногенного происхождения, имеющие исключительно высокую токсичность - суперэкотоксиканты, многие из них проявляют канцерогенную и мутагенную активность, вызывают серьезные заболевания человека и животных, способствуют вторичным иммунодефицитам, которые не поддаются традиционному лечению (Майстренко В.Н. с соавт., 1996; Федоров Ю.Н.. 1996,"Панин А.Н. 199б) .

Источниками химической опасности, загрязняющих почву, воздушные и водные бассейны, являются выбросы нефтехимических, нефтеперерабатывающих и др. предприятий, на которых суммарный выброс вредных веществ в атмосферу отмечен в пределах 63,5 млн. т., что составляет 203/о от общего количества выбросов: сернистого газа 18,6 млн. т., углеводорода - 8,6 млн. т., окислов азота - 4,5 млн.т.

В экологически неблагоприятных регионах возникают условия, которые существенно влияют на иммунобиологическую резистентность организма. Так, соотношение уровней заболеваемости в районах со значительной загрязненностью к средним показателям заболеваемости составляет : по болезням крови и кроветворных органов от 0,1 до 6,4; болезни органов дыхания от 0,5 до 2,2; болезни органов пищеварения от 0,1 до 3,1; болезни кожных покровов от 0.2 до 4 °ь (Берлянда М.Н., 1988; Рафель Ю.Б. с соавт., 1991).

По отчету ветеринарного отдела МСХ Башкортостана за последние годы наибольший падеж скота выявлен в Ишимбайском, Мелеузовском, Кумертауском районах. которые входят в единый промышленный узел, где отмечаются высокие концентрации загрязнения химическими агентами, как в воздушном, так и в водном бассейнах. Причинами падежа в 44,9 - 45,2 - 39.6 - 26% у крупного рогатого скота.

овец и коз, свиней, лошадей соответственно, являются заболевания органов дыхания, а в 43,2 - 44,3 - 48,7 - 54,8% у животных тех же видов, соответственно, падеж определен заболеваниями органов пищеварения.

Высокие показатели падежа животных от заболеваний органов дыхания и желудочно-кишечного тракта, позволяет отметить, что окружающая среда, локальная защита животных и взаимосвязь между ними является актуальной проблемой иммунологии. У животных из экологически неблагоприятного района не изучен вопрос влияния экзогенных химических токсигенов на иммунобиологическую реактивность животных, микроэкологию желудочно-кишечного тракта, нет данных о состоянии локального иммунитета, показателей популяций и субпопуляций иммунокомпетент-ных клеток, гуморальных факторов неспецифической резистентности. Особый интерес к изучению данного вопроса диктуется важностью иммуной системы для поддержания генетического постоянства организма и серьезного риска возникновения патологических состояний при нарушении ее функций (Петров Р.В., 1976). Не выявлены взаимосвязь и взаимозависимость секреции, деградации, экскреции секреторных иммунных белков, качественного и количественного состава микрофлоры кишечника, что является важным для выяснения механизма формирования иммунитета и оценки глубины патологического процесса, поскольку в результате любых стрессовых воздействий эндо- или экзогенного происхождения ответная реакция организма носит охранительно-приспособительный характер (Бессонов A.C. с соавт.. 1984; Трубицина Т.П., 1995; Аринкин A.B., 1996; Бочкарев А.Н., 1997; Kent J.E. с соавт., 1983; Pavlasek J. с соавт,, 1983) или со сдвигами в сторону патологии и явлениями иммунодефицитных состояний и иммунодефицитов. Кроме того, отдельные препараты непосредственно или опосредованно подавляют иммунобиологическую резистентность организма (Демидов Н.В., 1970; Веселова Т.П., 1979; Мамыкова О.И., 1989; Даугалиева Э.Х., Филиппов В.В., 1991; Богоявленский Ю.К. с соавт., 1994). Без учета бактерицидной активности антигельминтных препаратов общепринятая терапия является дополнительным иммунодепрессивным фактором и, как правило, не всегда оказывает желаемый эффект в силу стойких взаимоотношений паразита и его симбионтов, а также выраженному иммунодефицитному состоянию животного.

Актуальность проблемы иммунодефицитных состояний, при различных токси-когенах и паразитоценозах, отсутствие коррегнрующих их методов и способов, определили задачи наших исследований.

Цель работы: Изучение иммунобиологической реактивности животных в экологически неблагополучных районах в зависимости от сезона года.

Изучение формирования и течения паразитоценозов у животных из экологически неблагоприятного района. Разработка принципов иммунокоррекции для лечения и профилактики иммунодефицнтов различной этиологии.

Задач» исследования:

1.Изучить иммунобиологическую реактивность и иммунный статус у животных из экологически неблагоприятного и условно чистого районов Башкирии.

2. Воспроизвести в условиях эксперимента на лабораторных и с/х животных "вторичные иммунодефициты", возникающие на фоне фенолосодержащих соединений и определить их зависимость от длительности экспозиции токсикогенами.

3. Определить влияние экзогенных химических токсикогенов на локальный иммунитет опосредовано через микроэкологию желудочно-кишечного тракта овец.

4. Изучить влияние пробиотиков и определить бактерицидную активность производных тиазолов и продуцентов актиномицет на энтеробактерии, типичные для кишечного нормобиоза.

5.Изучить возможность совместного введения антгельминтика с 1Ь.р1аШагит и 1Ь.Гегтепп для установления приживаемости последних в кишечнике животных.

6. Изучить эффективность дегельминтизации при применении энтеральной пассивной иммунизации, используя

7. Изучить влияние комплексного применения пробиотиков, иммунокорреги-рующей терапии и специфических противогельминтных средств на иммунобиологический статус животного при паразитоценозах в экологически неблагоприятных районах.

8. Разработать принципы лечения паразитоценозов и предложить для использования в ветеринарной практике.

Научная новизна. Впервые установлено, что в экологически неблагополучных зонах у животных развиваются вторичные иммунодефициты. Выраженность их зависит от длительности воздействия токсикогена.

Впервые установлено, что длительное воздействие экзогенных химических токсикогенов вызывает Т-супрессию иммуной системы, сннжение гуморального фактора иммунитета и неспецифической резистентности. Нарушение в физиологическом равновесии микробных популяций кишечника под воздействием токсикогенов способствует экскреции иммунных белков пищеварительного тракта из организма животного и понижению секреторного иммуного белка класса А при нарастании количества условно-патогенной флоры.

Впервые изучен и определен качественный и количественный состав секреторных иммунных белков в секрете поджелудочной железы, желчного пузыря, 12-перстной кишки, тонкого отдела кишечника и копрофильтрате овец. Установлена взаимосвязь и взаимозависимость секреции, деструкции и экскреции иммунных белков пищеварительного тракта от количественного и качественного состава интести-нальной микрофлоры. Выявлено, что работа компонентов иммунной системы подвергнута сезонным биоритмическим колебаниям. Определен индекс напряженности иммунитета у условно здоровых овец из экологически благоприятного региона, где установлено, что изменения носят приспособительный характер.

Воспроизведен экспериментальный паразитоценоз на фоне воздействия феноло-содержащих соединений. Показано, что химические токсикогены создают благоприятные предпосылки для бурного развития паразитарного процесса опосредованно через микрофлору кишечника хозяина паразита. В свою очередь, увеличение количества симбионтов паразита способствует интенсивности инвазии, атипичной локализации паразита и является катализатором в их биологическом развитии.

Впервые установлено, что нарушения в иммунной системе, выражающиеся а атипичной выработке SIgA в комплексе со сдвигами в сторону патологии в микробной флоре кишечника, вызывают нарушения в локальной защите организма от паразитарных инвазий.

Впервые установлено, что санация желудочно-кишечного тракта высокоанта-гонистическми штаммами Ib.piantarum и lb.fennenti препятствует формированию паразитоценозов. Показано действие экстракорпорально активированных аутолей-коцитов поливинилпирролидоном на разблокировку популяций и субпопуляций Т-лимфоцитов и фагоцитов.

Впервые in vitro установлено бактерицидное действие производных тиазолов и продуцентов актиномнцет на энтеробактерии, типичные для кишечного нормобиоза и подтверждена бактерицидная активность в отношении данных микроорганизмов нилверма in vivo.

Впервые отработана комплексная терапия, сочетающая специфическое анти-гельминтное лечение с иммунокоррегирующей терапией при паразитоценозах овец.

Практическая ценность. В результате проведенных исследований доказано, что фенолосодержащие соединения вызывают иммунодефициты, сопровождающиеся глубокими патологическими сдвигами в локальном или местном иммунитете, формируясь опосредованно через микробную флору желудочно-кишечного тракта, находясь в прямом зависимости от экологических условий. Длительное воздействие

экзогенных химических токсикогенов способствует выведению из под контроля адаптационно-приспособительных механизмов и процесс из местного переходит в генерализованный, нарушая координированную работу отдельных звеньев иммунной системы и неспецифических гуморальных факторов защиты, рост экстенсивности и интенсивности инвазии.

Разработаны методические рекомендации по применению биологических препаратов с учетом острых и хронических интоксикаций животных.

Доказана целесообразность использования пробиотиков с целью повышения резистентности животных и профилактики паразитозов. Разработана, апробирована и внедрена комплексная терапия, включающая специфические противогельминтные препараты с высоко антагонистическими штаммами Ib.plantarum, lb.fermenti и экстракорпорально активированными аутолейкоцитами. Практические предложения.

Разработаны следующие нормативно-технические документы:

!. Рекомендации по применению имуностимуляторов для профилактики гельминто-зов и повышения резистентности животных. Утверждены Отделением ветеринарной медицины ВАСХНИЛ 28 августа 1990 года.

2. Иммунокоррегирующая терапия паразитарных заболеваний животных из экологически неблагоприятных регионов (рекомендации). Утверждены Отделением ветеринарной медицины ВАСХНИЛ 30 января 1990 года.

3. Пробиотические препараты, их влияние на локальную защиту животных из экологических неблагоприятных регионов (рекомендации). Утверждены Департаментом ветеринарии МСХ и ПРФ 17 июня 1995 года.

4. Иммунодефиииты у животных из экологичски неблагоприятных регионов и их коррекция пробиотиками и активировнными аутолейкоцнтами(рекомендации). Утверждены Департаментом ветеринарии МСХ и ПРФ 20 мая 1996 года.

5. Методические рекомендации по определению бактерицидной активности анти-гельминтных препаратов. Утверждены Отделением ветеринарной медициной РАСХН (1997г.).

6. Комплексная коррегирующая терапия паразитарных заболеваний при острых и хронических интоксикациях, вызванных экзогенным химическим токснкогеном (рекомендации). Утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН (1997г.).

Результаты исследований в форме методических указаний используются в учебном процессе при подготовке ветеринарных врачей биологов и микробиологов.

7. Экологические системы, их взаимосвязь и взаимозависимость. (Уфа, 1994г.).

8. Локальная зашита животных при воздействии экзогенных токсикогенов. (Уфа, 1995г.).

9. Влияние неблагоприятных факторов окружающей среды на иммунобиологическую реактивность организма. (Уфа, 1996г, ).

10. Локальный иммунитет животных и окружающая Среда. (Уфа. 1996г).

11. Разработанные методы борьбы паразитарных заболеваний используются в ряде районов Башкортостана (акты прилагаются).

Основные положения, выносимые на защиту:

- иммунобиологическая реактивность животных из экологически неблагополучных к условно чистых районов Башкирии;

- действие фенолосодержащих соединений на иммунобиологическую реактивность лабораторных и сельскохозяйственных животных;

- иммунологические, бактериологические и гельминтологические показатели, их взаимосвязь и взаимозависимость на фоне токсикогенов и паразитоценозов;

- принципы комплексного лечения и профилактики паразитоценозов животных с использованием пробнотиков, пассивно активированных аутолейкоцитов со специфическоГ антгельмиитной терапией.

Апробация работы. Результаты исследования доложены и обсуждены на: -XIX конференции Всесоюзного общества гельминтологов (Москва, 1981 г.);

- IX конференции Украинского Паразитологического Общества (Львов, 1980г.);

- Юбилейной конференции, посвященной 50-летию БСХИ (Уфа, 1980 г.);

- Научной конференции БСХИ (Уфа, 1981 г.);

- Научно-практической конференции БСХИ (Уфа, 1981 г.);

- Зональной научно-практической конференции штаба ГО РСФСР (Уфа. 1988 г.):

- VII Международном Конгрессе Паразитологов (Париж. 1990 г.) (3 сообщения);.

- Всесоюзной научно-практической конференции "Современные проблемы иммуно логии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в ветеринарной медицине' (Нижний Новгород. 1990 г);

- Международном совещании "Экологические проблемы патологии: фармакологии i терапии животных" (Воронеж, 1997 г.);

- И Международной научно-практической конференции, посвященной 55-летию ве-теринарно-санитарного факультета М ГУПб (Москва, 1997 г.);

- Научных конференциях профессорско-преподавательского состава Башгосу-ниверситета (Уфа 1980, 1984, 1985, 1990, 1992, 1995, 1996 гг).

Публикации : по теме диссертации опубликовано 28 научных работ.

Объем и струкггура диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, состоящих из 7 глав, обсуждения, выводов, практических предложений. Диссертация изложена на 282 страницах машинописного текста, иллюстрирована 7 рисунками и 50 таблицами. Список литературы включает 284 источников, из них 84 - иностранных авторов.

А. ЛИТЕРАТУРНАЯ СПРАВКА

Глава I - приводятся литературные данные об экологических системах, их взаимосвязи и взаимозависимости. Рассмотрен вопрос о влиянии окружающей среды на иммунобиологическую реактивность организма и ее взаимосвязь с паразитоценоза-ми.

Б. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава II. Материалы и методы исследования. Работа выполнялась в 1982 -1996 гг. а Башкирском Государственном университете на кафедре охраны окружающей среды и безопасности жизнедеятельности, методика по сбору секрета отработана на кафедре зоогигиены и кафедре паразитологии, микробиологии, вирусологии Башкирского Аграрного университета, в ряде хозяйств Башкортостана.

В работе использовано 1219 лабораторных животных, 4362 овцы, из которых 99 овец с фистулами.

Для установления физиологических параметров и патологических сдвигов в микроэкологии кишечника у животных из условно-чистого и экологически неблагоприятного регионов, в эксперименте по действию экзогенных химических токсикоге-нов. бактерицидному действию антгеяьминтных препаратов, влиянию пробиогиков на микробный состав кишечника и его антагонистическую активность были использованы методы бактериологических исследований (Минкевич И.Е ., 1950; Перетц Л.П., 1955; Вильшанская Ф.Л., 1964; Эпштенн-Лнтвак Р.В. с соавт., 1969), в модификации Петровской В.Г. с соавт.(1976). Определение бактерицидной активности препаратов проведено по Седовой И.Н. с соавт. (1973). Проведено 6709 бактериологических исследований, из них 4370 на овцах и 2339 на лабораторных животных .

Неспецифическую резистентность животных определяли по комплементарной и бактерицидной активности сыворотки (БАС), функциональную активность нейтро-филов: (АФ) - активность фагоцитоза, (ИФ) - индекс фагоцитоза, (ИП) - завершенность фагоцитоза и индекс переваривания - по реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) по методу Нагоева Б.С. (1983), Берман B.C. с соавт. (1958) и Понякиной И.Д. с соавт. (1983). При определении иммунобиологического статуса использованы методики, отработанные в лаборатории иммунологии ВИГИС для сельскохозяйственных животных. Локальный иммунитет охарактеризован составом и концентрацией иммуноглобулинов класса A,G, М, Е. Определение иммуноглобулинов G, М, А проведено методом иммунодифузии (Понякина И.Д. с соавт., 1983). При определении Ig Е использован радиоиммунологический метод (Ткачева Т.А. с соавт., 1983). Местная аллергическая реакция ДНФ с АсА проведена на лабораторных животных (Николаенко Г.В. с соавт., 1978). Всего проведено 2329 иммунологических исследований, из них 1503 на овцах и 826 - на лабораторных животных.

Для гельминтологических исследований использованы методы Бермана, Ко-тельникова, нативного мазка, перианального соскоба и неполного гельминтологического вскрытия. Жизнеспособность инвазионного материала определялась методом Котельникова Г.А. (1974).

Определение функционального состояния желудочно-кишечного тракта проведено с использованием фистульного устройства из инертного материала и методом, разработанным нами совместно с кафедрой зоогигиены и паразитологии, микробиологии, вирусологии БАУ (авт. свид. 1523149; i 523i48 кл.А 61 7/00/).

Исследования по влиянию иммунокоррегирующих комплексов на иммунобиологический статус и эффективность лечения паразитоценозов проведены на 3879 животных, из которых 200 овцам проведена коррегирующая терапия микробного состава кишечника прсбногическими препаратами в комплексе со специфическим препаратом против стронгилятозов.

Энтеральная пассивная иммунизация лактоглобуликом в сочетании с нилвер-мом проведена на 252 животных.

Санация желудочно-кишечного тракта биологическим препаратом из Lb. fermenti и Lb.piantarum в комплексе с иммунокоррекцией активированными ауто-лейкоцитами в сочетании с нилвермом проведена экстракопрорально на 3427 овцах. Всего проведено в эксперименте 6349 гельминтологических исследований.

Весь материал статистически обработан по методу Монцевичюте-Эрингене Е.В. (1964); Ашмарина И.П.,Васильева Н.Н.,Амбросова В.А. (1975). Вероятность различии считалась достоверной при условии Тг >Тяпо Стюденту (Р<0,05).

Глава 3. Иммунобиологическая реактивность животных из экологически неблагоприятного и условно чистого районов Башкирии.

Влияние неблагоприятных факторов окружающей среды на организм устаноле-но многочисленными исследователями (Андреева Л.Н., 1980; Шмутер Л.М., 1980; Мальков Ю.И. с соавт., 1988; Янышева Н.Я. с соавт., 1990).

Известно, что состояние иммунной системы - один из ранних и чувствительных показателей вредного действия иа организм факторов окружающей среды малой интенсивности, в результате чего возможен дефект одного или нескольких механизмов иммунного ответа в виде вторичных иммунодефицитов. Болезни с иммунологической недостаточностью не поддаются традиционному лечению (Козлюк А.С. с соавт., 1987; Федоров Ю.Н. с соавт., 1996). Поэтому важным является выявление нарушений функциональной активности пороговых иммунологических и бактериологических критериев, перехода от нормы к патологии для своевременной профилактики и предупреждения развития патологических процессов в организме животных.

Для установления у овец средних величин иммунологических и бактериологических показателей были отобраны овцы и им вживлена фистула для сбора желчно-поджелудочно-дуоденальных секретов. Сложность получения чистого секрета поджелудочной железы из-за анатомического строения ее протока не позволили определить концентрацию иммунных белков в хроническом опыте, поэтому они были определены в момент вживления фистулы. Исследования на наличие иммунных белков в составе секретов пищеварительного тракта проведены в хронических опытах.

Локальный иммунитет у овец из условно чистого района.

Бактериологические исследования у овец показали, что общее количество аэробных представителей кишечной микрофлоры у одной и той же особи вариабельно, но при этом процентное соотношение внутри микробных популяций относительно стабильно. Из кишечника животного выделены бактерии, принадлежащие к роду протея, что составляет 0,03°о от общего количества микробных тел. Из 53 исследуемых штаммов про гея установлено 2 вида; Proteus mirabilis - 69,8% и Proteus vulgaris -30,2%. Определена антагонистическая активность лактозопозитивных эшерихий . Из 143 выделенных штаммов 31.4" о культуры обладают высокоактивными свойствами (коли-индекс - до "50''). Эширихии с антагонистически активными свойствами (коли-

индекс - 101 и более) составляют 26,3% из числа всех штаммов. У 5.5% культур выяв>-лено наличие глюцидо-липидо-протеинового комплекса. Свойствами не характерными для типичных эшерихий обладают 5 из 143 штаммов, т.е. 3,4° о культур.

Таким образом, в кишечнике овец из условно чистого района условно-патогенные микроорганизмы не превышают допустимых физиологических норм согласно классификации Богданова И.Н. в модификации Аюпова Х.В. с соавт., (1980).

При исследовании 26 проб от фистульных животных из средней части тонкого отдела кишечника с интервалом 5-8 дней на протяжении 60 суток выявлено, что 1%А имеется во всех образцах, причем от следов до 6,1*10-2 г/лв65,38% проб и от 7,1*10 2 г/л до 18,66*10-1 г/л в 34,6% проб. Среднее содержание IgA составляет 8,9+ 3,1* 102 г/л.Иммуноглобулин класса О выявлен в 26,9% проб, в среднем составил 14,7+1,7*10-2 г/л; в 15,3% проб обнаружен ^М в среднем 1,37*!0-2 г/л. Средний показатель ^Е находится в пределах 41,8+7,2 МЕ/мл в 7,6% проб. Скорость секреции иммунных белков составила в среднем для ^А 0,71+0,16; для - 0,86+0,24; для 1дМ -0,05+0,012 мг/ч. В секрете поджелудочной железы IgA присутствуют от 3.6* К)-2 г/л до 7,8*10-2 г/л, ^О от 7.1*10 2 г/л до 16,4*10 2 г/л, иммуноглобулин класса М обнаружен в 2 исследуемых пробах от следов до 3,1*10'2 г/л. Общий пул иммуноглобулинов секрета поджелудочной железы составляет 19,07*10~2 г/л.

Исследования желчи позволяют отметить, что из содержимого желчного пузыря высеян протей в количестве 8* 105 м.т./г секрета, а при исследовании на содержание иммунных белков выявлено, что ^О в среднем составляет 26,1+2,7*10-2 г/л. 1уА во всех исследуемых пробах желчи в среднем находился в концентрации 15,9+2,4*10"2 г/л, а ^М 12,8+1,9*10-! г/л в 65.6%. ^Е в 3,4% проб составляет 96,9 МЕ/мл. Соотношение к ^А составляет в кишечном содержимом, поджелудочной железе и желчи 1,65- 2,09- 1,64 соответственно.

С целью изучения экскреции и деструкции иммунных белков пищеварительного тракта исследовано 14 проб копрофильтратов при одновременном контроле 13 проб фекалий за микроэкологией толстой кишки. Так, среднее количество лактозопози-тивных эшерихий в 1 грамме исследуемого материала составило 2,354+0,87 млрд.м.т., энтерококков - 1,85+0.33 млрд.м.т., лактобактерий - 7,9+1.1* Ю-3 млрд. м.т.. протея - 2.1+6,1 ♦Ю-' млрд.м.т.

При исследовании копрофильтратов на наличие иммуноглобулинов установлено, что ^А присутствует в 31,8° о проб в виде интактной молекулы. В 15.4" о проб выявлен ^О в виде И-ав - фрагмента. 1^М - не обнаружен ни в одной из исследуемых проб. выявлен в 2-х пробах в концентрации 54 МЕ/мл и I 10 МЕ/мл. Следователь-

но, по мере продвижения IgG по желудочно-кишечному тракту в составе химуса происходит его расщепление на крупные фрагменты, а затем только он выделяется в составе фекальных масс из организма животного. Выявление незначительных концентраций IgA и только в отдельных пробах свидетельствует о его деструкции в более высоких отделах пищеварительного тракта.

Таким образом, при физиологическом состоянии микрофлоры кишечника осуществляется деструкция иммунных белков в пищеварительном тракте и создается возможность их использования для синтеза новых биологически активных веществ, необходимых для нормального функционирования организма животного.

Гуморальные факторы специфической и неспецифической защиты.

При определении уровня комплемента сыворотки крови по 50% гемолизу (CHso) установлено, что между показателями проб отдельных животных и показателями проб одного и того же животного существует вариабельность от 37,1+4.3 (CH»>) до 66,7+4.1 (CHso), В среднем для всех исследуемых групп (CHso) равен 43,9+2,2.

Все гуморальные факторы неспецифической резистентности, присутствующие в сыворотке крови, обладают бактерицидной активностью в отношении многих микробов. Бактерицидная активность сыворотки составила от 47,1 до 48,5% в 16,7% проб. В 56% проб БАС составила 64,9° о, в среднем ее активность по отношению к E.coli составляет 59,6+2,8%. Концентрация лизоцима в сыворотке крови в 46 исследуемых пробах составляет от 7,4 до 11,8 мкг/мл, средний показатель - 9,71 + 1,21 мкг/мл. Титр естественных антител животных из условно чистого района находится в пределах от 3,0+0,2 до 4,2+0,1 со средним значением Iog2 3,6+0,3.

Отмечена значительная вариабельность количества лейкоцитов у отдельных особей. Так, количество лейкоцитов в 1 мкл колеблется от7200 до 9800, количество сегментоядерных нейтрофилов - от 3024 до 4256,8, лимфоцитов - от 2966 до 3881, эозинофилов - от 515,1 до 715,3, базофилов - от 46.8 до 69,7, моноцитов - от 216 до 294 в 1 мкт, но процентное соотношение внутри отдельных популяций стабильно.

БАС-РОК представлены значениями 389,4-587,8 кл/мкл, а Е-РОК 2577:-32<й,1 кл/мкл. Учитывая, что лимфоциты, способны с ауто- или аллогенными эритроцитами образовывать розетки, принадлежат в основном к популяции Т-супрессоров (Понякина И.Д. с соавт., 1983), мы сочли возможным суммарно отнести 785 - 1043 клеток лимфоцитов в мкл к Т-хелпериым и "О" популяциям, Е-РОН составляет 1166.4 - 1411,2 кл/мкл. индекс напряженности находится в пределах 1,7+0.09 (в среднем 1,5+0.05). Функциональная активность нейтрофилов оценена по фагоцитарной

активности (АФ), которая в среднем составляет 47,6+2,5 при ее интенсивности (ИФ) -3,9+0,8, с ИЗФ - 1,97+0,07. Окислительно-восстановительный потенциал нейтрофи-лов характеризуется НСТ-тестом, который в среднем составляет при спонтанном поглощении 0,14+0,02, а стимулированном 1,04+0,1. Показатель повреждения ней-трофилов (ППН) у овец составляет в среднем 0,05.

Таким образом, полученные результаты основных, наиболее информативных и объективных показателей иммунобиологического статуса здоровых животных находятся в пределах физиологической нормы.

Иммунобиологический статус животных из экологически неблагоприятного района.

Мы не нашли в доступной литературе данных о влиянии окружающей среды, загрязненной промышленными химическими отходами, на иммунобиологическую реактивность животных опосредованно через микрофлору желудочно-кишечного тракта, которая является важным компонентом иммунитета (Петров Р.В., 1962; FreterR., 1974; Петровская В,Г. ссоавт.. 1976).

Для выяснения влияния экологически неблагоприятных факторов окружающей среды на иммунобиологический статус обследованы животные из района со значительной степенью загрязненности, который представлен Кумертауско-Стерлитамакско-Ишимбайским "промышленным узлом", где сосредоточены гиганты нефтехимии. Всего исследовано 52 животных, из них 11 овец с желчно-панкреатическо-дуоденальной фистулой и 41 животное с фистулой в средней части тонкого отдела кишечника.

Секреторные белки и антагонистическая активность кишечника овец.

При иследовании фистульных животных выявлено, что IgA имеется во всех пробах 12-перстной кишки, содержимого поджелудочной железы и желчного пузыря, со значительной вариабельностью по периодам года, суммарная концентрация данного иммуного белка составляет36,8+78.1*10 2 г/л, что в 1,62 раза меньше, чем у животных из условно-чистого района (44,27*10-2 г/л). Увеличилось количество проб с наличием IgE, что составляет 45% ( 51.4+7,5 МЕ/мл).При исследовании 48 проб содержимого тонкого отдела кишечника установлено снижение содержания SigA у животных из экологически неблагоприятного района в 58.5%. до 7*10 2 г/л. в то время, как у здоровых животных данные концентрации выявлены в 34,6"о проб. Колонизация >слойно-патогенными микроорганизмами не стимулирует выработку SigA. наоборот отмечено резкое снижение секреции данного иммунного белка до 3.t * 102 г/л, что в среднем составляет М+m - 6,2+1,4*10-: г/л. против условно здоровых животных. где концентрация SigA составляет М+гп - 8.9+3,1 *К)-2 г/л. С уменьшением

концентрации иммунного белка А, отмечено увеличение выработки . Концентрация гомоцитотропных антител составляет 50,6+8,9 МЕ/мл, против контроля, где ^Е представлен значением 41,8 МЕ/мл. Нарастание эозинофилов до 729,1 кл/мкл с увеличением секреции гомоцитотропных антител является показателем незавершенности иммунной реакции с ее аллергическим компонентом, о незаконченности патологического процесса свидетельствует и тот факт, что идет и увеличение штаммов со слабой и низкой антагонистической активностью в 2,6 раза. Штаммы с коли-индексом 50 и менее выявлены у ! 1,8% овец из экологически неблагоприятного района. У данной группы животных увеличилось количество штаммов малоактивных и неактивных в антагонистическом отношении. Средний показатель коли-индекса со слабой активностью у опытной группы составил 319,3+52,4, на которых приходится 35,5% исследуемых штаммов. Неактивные штаммы составляют 26,4%, со средним показателем коли-индекса 774,6+61,3, что в 2,5 раза превышает количество данных культур в контроле.

Помимо этого у овец из экологически неблагоприятного района в 5 раз увеличилось количество штаммов с наличием эндотоксина. Необходимо отметить увеличение высеваемости атипичных культур кишечной палочки. При изучении культу-рально-биохимических свойств лактозоположительных эшерихий установлено, что из 182 штаммов 31,3+8,4% обладают свойствами не характерными для типичных эшерихий, в то время как у животных из условно-чистого района на долю атипичных штаммов приходится лишь 3,5%. Необходимо отметить об увеличении штаммов со свойствами гемолиза, которые составляют 2,9+0,3*10-' млрд.м.т./г против контроля, где на долю данных культур приходится 2,0+0,7* 105 млрд.м.т,/г. Отмечена тенденция к нарастанию протея во все периоды исследования, а в среднем данные бактерии составляют 4,8+0,9*10 3 млрд.м.т./г, что 2,4 раза превышает данный показатель у животных из условно чистого района.

Таким образом, воздействие неблагоприятных химических факторов окружающей среды способствует ослаблению неспецифических механизмов защиты организма животного. Отмечено понижение антагонистической активности кишечника, увеличение штаммов с наличием эндотоксина и условно-патогенной флоры.

Гуморальные специфические и неспецифнческие факторы защиты.

Исследование гуморальных факторов неспецифической защиты показало снижение титра комплемента у животных в экологически неблагоприятном районе до 33,6+3,2(СНя>), что в 1,3 раза^ниже такового у животных с из экологически благоприятного района. У этих же животных понижена способность лейкоцитов синтез»-

ровать лизоцим, о чем свидетельствует понижение его титра в сыворотке крови, где концентрация составляет 7,2+1,Змкг/мл против 9,7+1,21 мкг/мл у здоровых. Понижена и бактерицидная активность сыворотки крови до 46,2+2,7% против 59,6+2,8 в контрольной группе. Выявлены различия в физиологической активности нейтрофи-лов. Активность нейтрофилов составляет 36,6+3,1% против 47,6+2,6% в контроле. Интенсивность фагоцитоза также ниже у этих животных и составляет 2,4+0,8 клеток ; в то время как у овец из условно чистого района 3,9+0,85 клеток. Не отмечено существенных различий в завершенности фагоцитоза, как у животных из условно чистого района, так и из экологически неблагоприятной зоны. У животных из экологически неблагоприятного региона отмечена нейтропения, где сегментоядерные нейтрофилы составляли от 2771,4 до 3228,9, при количестве лейкоцитов от7450 до 8680. Следовательно удельный вес нейтрофилов представлен 37,3%, что в среднем 1,2 раза ниже, чем у животных из экологически чистого района. Обращает внимание сдвиг лейко-граммы влево, где увеличены палочкоядерные нейтрофилы до 567,4-668,6 клеток, что составляет 7,5% и 7,1% , против 6,0+0,47% у контрольных животных. Установлен незначительный лимфоцитоз до 44,7%, уменьшением нулевых и Т-хелперных популяций до 5,8+0,1%. и увеличением Т-супрессорных до 29,4+4,9° о. Количество Е-РОН клеток у животных из "промышленного узла" в 1,6 раза меньше, чем у овец из условно чистого района.

Одним из объективных показателей состояния организма в целом является величина связанности компонентов, отражающая уровень напряженности системы. По нашим данным индекс напряженности (ИН) у животных из "промышленного узла" составляет 2,3+0,07, что в 1,6 раза превышает показатель у овец из чистого района, что в комплексе с другими показателями также может свидетельствовать о снижении сопротивляемости организма животного. По данным Лебедева К.А. (1990) степень напряженности является важнейшим критерием нормы и патологии. На вопрос, является ли данный индекс нагрузки физиологичным для овец их экологически неблагоприятного района или является результатом хронизацин процесса можно будет ответить после экспериментального воздействия химическими реагентами.

Таким образом, наблюдаемые сдвиги в гематологических и иммунологических показателях у овец возможно являются приспособительными реакциями организма в ответ на длительное воздействие неблагоприятных факторов и вероятно необходимы в интересах целостности иммунной системы для выживания животного, однако они довольно резко отличаются отданных полученных у животных из чистого района.

Глава 4. Действие фенолосодержащих соединений в эксперименте на иммунобиологическую реактивность лабораторных животных.

Для выяснения влияния неблагоприятных факторов окружающей среды на организм, необходимо установить пределы физиологических колебаний показателей функционирования органов и систем животного в различные сезоны года. Исходя из полученных результатов, можно установить средние физиологические нормы. Учитывая, что микроэкология кишечника и локальный иммунитет являются "первым звеном зашиты" (Земсков М.В. с соавт.,1974; Freter R.,1974; Бережная Н.М. с со-авт.,1983) при экзогенных воздействиях и наиболее чувствительны к неблагоприятным воздействиям, исследованы микроэкология кишечника, локальный иммунитет и их взаимосвязь. Кроме того, изучены специфические и неспецифические факторы защиты у лабораторных животных.

Показатели секреторных иммунных белков, иммунокомпетентных клеток, неспецифических факторов защиты у здоровых лабораторных животных по сезонам года.

Учитывая взаимообусловленность иммунологического статуса и состояния микрофлоры желудочно-кишечного тракта животного, в своих исследованиях мы считали необходимым выяснение состояния локального иммунитета, качественного и количественного состава микроорганизмов кишечного тракта, гуморальных факторов неспецифической защиты, иммунных реакций клеточного типа.

Анализ полученных данных проведен путем сравнения результатов, как со средними параметрами групп (1 группа - зимняя - 42 животных; 2 группа - летняя- 31 животное), так и с индивидуальными показателями внутри групп.

В результате исследования секрета средней части тонкого кишечника установлено, что IgE присутствовал в секретах у животных зимней группы в 66,60/о проб, средний показатель которого составлял 49,4+4,1 ME/мл. В группе животных, обследованных в летний период - у 72,7%, со средним показателем 63,2+5,9 МЕ/ мл. Увеличение IgE в летний период можно рассматривать как физиологический сдвиг, реакцию локального характера на поступление возможно незначительных доз антигена в пищевом рационе и его нейтрализации. Это подтверждается тем, что у жнвотных увеличение IgE в секретах произошло без увеличения его в крови, где данный иммуноглобулин выявлен в концентрациях 19,1 + 1,1 ME/мл и 24,4+2,2 ME/мл в летней и зимней группах, соответственно. Концентрация IgA в секрете средней части тонкого кишечника выявлена без значительных различий, как в летней группе от0,4 до 0,7 г/л (в среднем по группе - 0,65+0,1 г/л), так и зимней - от 0.3 до 0,8 г/л (в среднем показа-

тель на группу 0,61+0,2 г/л). Следовательно, средний показатель у здоровых лабораторных животных составляет 0,63+0,2 г/л.

При значительной вариабельности показателей форменных элементов крови как между животными исследуемых групп, так и внутри групп процентное соотношение между различными популяциями оставалось стабильным. Среднее количество форменных элементов составили: лейкоциты - 6,8+0,4*10® до 9,1+0,7*109, лимфоциты - 2,86+0,27*10« до 3,49+0,2*103, нейтрофилы сегментоядерные - 2,96+0,21*10» до 4,37+0,42*10» , зозинофилы - 0,25+0,02*10« до 0,46+0,03*10«, Активность фагоцитов (АФ) составляет 44,9+3,66, фагоцитирующий индекс (ФИ) - 3,9+0,4, индекс ИЗФ -1,77+0,6.

При спонтанном и стимулированном поглощении и восстановлении НСТ нейтрофилами в перифирической крови выявлено, что у здоровых мышей он составляет 0,18+0,01 и 0,52+0,2, соответственно.

Микроэкология кишечника здоровых лабораторных животных.

Бактериологические исследования кишечного содержимого у лабораторных животных проведены в различные периоды года. Общее количество аэробных представителей кишечной микрофлоры у отдельных особей весьма вариабельно и колеблется в пределах от 0,94+0,3 млрд.м.т./г в осенний, до 1,06+0,54 млрд.м.т./г в зимний и 1,21+0,67 млрд.м.т./г в весенне-летний периоды года. Количество кишечных палочек в 1 г испражнений у отдельных особей подвержено значительным колебаниям не только в различные периоды года, но и в одной и той же исследуемой группе. Так, в 9,1% проб кишечных палочек высеяно до 100 млн., у 36,3% от 100 млн. до 1 млрд. и у более половины (54,5%) животных обнаружено более 1 млрд. микробных тел.

В основном у всех животных во все периоды года в посевах преобладали лакто-зопозитивные кишечные палочки (85% и более от общего количества микробных тел). Зимой энтеробактерии со слабыми ферментативными свойствами составляют 7,9% от общего числа микробных тел, в весенне-летний - 8,2% , что в 1,7 раза превышает обнаружение их по сравнению с осенью, где на данные микрорганизмы приходится 4,8° о. Лактозоотрицательные эшерихии достигают максимума в летний период и составляют 0,108+0,07 млрд.м.т./г, что в 1,2 раза превышает их среднее количество по сравнению с зимним периодом года. Увеличивается высеваемость гемоли-зирующих бактерий, если в весенне-летний период микробы со свойствами гемолиза выделены 2,4* 10-5+9*10-5 млрд.м.т./г, то зимой - 1,1*10-5+0,8*10 5 млрд.м.т./г , что в 2 с лишним раза меньше количества гемолизирующих микроорганизмов по сравнению с теплым периодом года. Количество грамположительных аэробных бацилл, как аб-

солютное, так и относительное, не претерпевает существенных изменений по сезонам года, и составляют 4*10-' + 1*10 4 млрд.м.т./r, что соответствует 0,03% от общего количества микробных тел.

Среднее количество лактозопозитивных кишечных палочек варьирует в течение года, в осенне-зимний период в пробах толстого отдела кишечника они составляли 1,9+0,75 млрд.м.т./г - 1,6+0,48 млрд.м.т./г, а в летний период отмечено их увеличение почти в два раза по сравнению с зимним периодом. Нарушение соотношения отчетливей наблюдается в пробах химуса тонкого отдела кишечника. Количество типичных эшерихий во все периоды года составляло: в толстом отделе кишечника 1,53+0,57 млрд.м.т./г, в каудальной 2/3 тонкого - 8+3*10-3 млрд.м.т./г и в краниальной 1/3 - 5+0,9* Ю-4 млрд.м.т./г . Наряду с лактозопозитивными эшерихиями у 52,9% исследуемых животных, выделены лактозонегативные эшерихии от 7* 103 до 1 млрд.м.т./г и более. Микробы из рода протей в толстом отделе кишечника составляют 7,5*10-3 млрд.м.т./г. В пробах, из тонкого отдела кишечника, их количество достигало 9+3* К)6 млрд.м.т./г.

Антагонистическая активность кишечника и токсичность культур у здоровых белых мышей.

Учитывая влияние сезонного фактора на кишечную микрофлору, мы провели

исследования в ноябре-декабре и в мае-июне и определяли антагонистическую активность эшерихий на протяжении 30 дней. Выделяли по 3 культуры E.coli из одной и той же порции исследуемого материала.

Контролем служила культура антагонистически полноценного стандартного штамма E.coli М-17. Наряду с активными культурами E.coli, высеваются микроорганизмы, обладающие слабоантагонистическими свойствами. Однако, следует отметить, что количество активных штаммов кишечной палочки преобладает над слабо-антагоннстическимн. Так, бактерии с коли-индексом до 50, за все периоды года в среднем составляют 56,7%: от 51 до 100 - 16,7%; от 101 до 500 - 13,3%; и от 501 и более - 13.3° о. При сопоставлении результатов исследований по периодам года можно отметить, что в теплый период незначительно увеличилось число слабоантагонистических штаммов. При оценке токсичности культур кишечных палочек, выделенных от здоровых животных установлено, что резкая и полная агглютинация наступила у 74,7 - 68,7% испытуемых культур. Неагглютинирующие штаммы с наличием эндотоксина увеличиваются в весенне-летний период, на долю которых приходится 10,8%, что в 1,4 раза превышает их количество по сравнению с весенне-летним периодом.

Показатели дисбиотических сдвигов в кишечнике лабораторных животных.

Для нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта допустимым считается содержание не более 15% условно-патогенных, 85° о облигатных мнкрорганиз-мов и их ассоциаций (Р.В.Эпштейн-Литвак, 1967; Р.В.Эпштейн-Литвак, Ф.П. Виль-шанский, 1969). В наших исследованиях результаты бактериологических исследований лабораторных животных позволяют отметить , что у 95,4% лабораторных животных микрофлора желудочно-кишечного тракта оказалась в пределах средней физиологической нормы и лишь у 4,5% мышей обнаруживали сдвиги за пределами кишечного нормобиоза. Изменения в кишечной микрофлоре максимума достигают в осенний период. Лабораторные животные с измененной микрофлорой желудочно-кишечного тракта в сторону интестинального дисбактериоза выявлены в осенний период года, где отмечены более глубокие ее изменения, т.е. обнаружено понижение антагонистической активности кишечника, увеличение штаммов с наличием эндотоксинов, гемолизируюшей флоры и протея.

Таким образом, компоненты иммунной системы и, следовательно, функционирование местного или локального иммунитета подвержены сезонным биоритмическим колебаниям. При значительной вариабельности отдельных показателей иммунной системы, соотношение между популяциями и субпопуляциями сохраняются стабильно. Влияние сезонного фактора на микрофлору желудочно-кишечного тракта более выражено в осенний период. Однако, мы считаем, что все эти изменения находятся в пределах физиологической нормы.

Локальная защита кишечника при воздействии фенолосодержащими соединениями.

Желудочно-кишечный тракт выполняет роль многообразных защитных механизмов, направленных против патогенных факторов. Тонкий отдел кишки подвержен воздействию бактериальной флоры и адаптация кишки к флоре является важной функцией этой части пищеварительной трубки. Доказано, что выработка иммуноглобулинов желудочно-кишечного тракта создается под влиянием антигенной стимуляции нормальной микрофлорой. Особенно важное значение микрофлора имеет для синтеза секреторного IgA (Toroasi T.B. с соавт., 1968; Земсков М.В. с со-авт., 1972; Freier R., 1973; Reng С.Е. с соавт., 1979; Magnussem К.Е. et al„ 3984; Kagnoff M.F., 1987; Гребнев А.Л. с спавт., 1994). Учитывая, вышеизложенное, мы провели изучение влияния фенолосодержащих соединений на иммунобиологическую реактивность организма животного опосредованно через микрофлору желудочно-кишечного тракта. Опыты провели на 207 мышах. Опытным животным в течение 50

сутс]к 3 раза в день перорально вводили фенолосодержащую смесь. Бактериологические, иммунологические исследования проводились на 10 - 30 -50 дни в период введения химического реагента и через 20 дней после прекращения премирования (70 сутки). Первая группа животных в количестве 69 особей получала смесь фенолосодер-жащего соединения в концентрации 0,003 мг в 0,3 мл раствора. Вторая группа, состоящая из 76 мышей, премирована в концентрации 0,01 мг в 0,3 мл смеси. Третья группа - 62 особи - контрольная (чистая). Установлено, что во второй группе, начиная с 10 дня премирования фенолосодержащей смесью, уменьшение высеваемости лактозоположительных кишечных палочек в толстом отделе кишечника до 0,59+0,09 млрд.м.т./г, что в 1,8 раза меньше исходного (1,07+0,5 млрд.м.т./г); на 30 день исследования до 0,34+0,07 млрд.м.т./г, что ниже исходного в 3,1 раз; на 50 день - в 3,5 раза. В последующие дни исследования (70) больших различий в высеваемости лактозоположительных эшерихий не выявлено. Следует отметить о резком снижении общего количества микробной флоры во второй группе животных. Достаточно достоверным является увеличение высеваемости лактозоотрицательных эшерихий с 3 этапа (50 день) исследования, которая достигает максимума на 70 день (3,4+0,6* I О'2 млрд.м.т./г против 1,9+0,04*10"* млрд.м.т./г. Необходимо отметить увеличение высеваемости протея, как в первый, так и во второй опытных группах, но со значительным нарастанием его титра у животных, премированных фенолосодержащей смесью в концентрации 0,01 мг с 0,6+ 0,02*10+млрд.м.т./г до 1,2+0,3*10г млрд.м.т./г. Отмечено увеличение микробов со свойствами гемолиза во второй группе на 70 сутки исследований в 17 раз против 3 этапа исследования, где они составляют 0,7+0,03*10'5 и 1,2+0,6*104 млрд.м.т./г соответственно. Претерпевают изменения высеваемости и анаэробная микрофлора, где количество лактобактерий в первой группе уменьшилось в 1,5 раза (составило 6,5+1,7* 10! млрд.м.т./г против 9,7+2,1*10г исходного), во второй группе в 24 раза (с 9,7+2,1 *10 : до 0,4+0,01 *10 2 млрд.м.т./г), против исходного. В количестве высеваемости клостридий отмечается стабильность в первой и третьей исследуемых группах с небольшими колебаниями в пределах 6+1* Ю-4 млрд.м.т./г - 8+2.0*10'4 млрд.м.т./г. Во второй группе отметили уменьшение количества данного анаэроба до 0,4+0,02*10-' млрд.м.т./г и грамположительных споро-образующих аэробных бацилл. У 18,4° о животных второй группы условно-патогенные микробы в посевах составили от 24,9% до 31,3% от общего количества микроорганизмов, что по классификации Богданова с соавт, (1974) можно расценнть как дисбактериоз 2 степени. Изменению соотношений внутри микробных ассоциаций, проявляющееся уменьшением высеваемости лактобактерий, типичных эшерихий

и увеличением условно-патогенных микроорганизмов, по-видимому, способствует развитие воспалительного процесса в результате раздражающего действия феноло-содержащих соединений. По данным Walker P.D. (1965), Брюхина И.Л. с соавт., (1989) химические вещества, попадающие извне, являются внешним фактором, приводящим к нарушению экосистемы желудочно-кишечного тракта.

Для установления влияния фенолосодержащих соединений на микрофлору тонкого отдела кишечника провели вскрытие мышей из каждой группы на 10-30 -50 - 70 дни. Начиная с первого дня, премирования фенолосодержащими соединениями во 2 опытной группе животных, отмечено понижение лактозопозитивных эшерихий на 50 сутки до 9,1 + 1,3 млн.м.т./г, что в 2,8 раза ниже исходного. К 4 этапу исследований нарастает титр лактозоотрицательных кишечных палочек в 2,3 раза по сравнению с 3 этапом, где их количество составляет 3,0+0,5* 10 3 млн.м.т./r. Оценивая достоверность разности показателей лактозоотрицательных эшерихий 3 и 4 этапа исследований (во 2-ой группе животных), необходимо отметить, что увеличение данных микроорганизмов на 70 сутки статистически достоверно (Р<0,05). Отмечено увеличение высе-ваемости протея, з опыте у 67,8% животных на 4 этапе исследований в количестве 15,2+4.2*10-" млн.м.т./г, что в 24 раза превышает данные контроля. Необходимо отметить о количественных изменениях в показателях стафилококков, где к 50 дню исследования количество его уменьшилось в 2,5 раза во 2 опытной группе. Установлено уменьшение количества лактобактерий с 0,8+0,5 млн.м.т./г, до 0,45+0.09 млн.м.т./г на 50 сутки исследования, что в 2 раза ниже, чем у контрольных животных, где на данные бактерии приходится 0.9+0,3 млн.м.т./г. Таким образом, сдвиг в микробном ценозе животных во 2 опытной группе выявлены как в толстом, так и в тонком отделах кишечника.

При изучении влияния фенолосодержащих соединений на антагонистическую активность кишечника выделено 65 лактозопозитивных кишечных палочек от 21 мыши опытной группы и 69 штаммов от лабораторных животиых контрольной группы. Установлено, что штаммов с резко выраженной антагонистической активностью как в качественном, так и в количественном отношении в опытной группе меньше и составляет 46,8+4,3, что на 11,5 порядка ниже контроля - 35.3+6,7, а количество штаммов с коли-индексом 50 и менее - в опыте 16,9% (против контроля -17,4%). На средний показатель в опытной группе с коли-индексом 101 - 500 приходится 404,6+59,9 с количеством животных 35,4° о, с разницей 1,5 раза в количественном отношении с животными контрольной группы и ниже на 155,5 порядка. Увеличилось количество неактивных штаммов с коли-индексом 501 и более, составляющих

9,2% культур со средним показателем 861,4 +75,3, а в контроле 714,8+56,8, что говорит о разнице в антагонистической активности на 146,6 единиц. Следовательно, в период интоксикации фенолосодержащими соединениями понижается антагонистическая активность кишечника.

Для выявления энтеробактерий с наличием эндотоксина, выделено 517 штаммов от животных, премированных фенолосодержащим соединением и 348 штаммов от здоровых мышей. Резкоположительные штаммы в контроле составляют 58,6% культур, что 2,6 раза превышает их количество в опыте, на долю которых приходится 22,05%. В 2 раза увеличилось количество штаммов с наличием эндотоксина в опытной группе., что составляет 31,9% (против 12,06% в контроле). Трипафлавин-негативныи индекс равен 6,8+0,9.

Таким образом установлено, что фенолосодержашие соединения способствуют появлению штаммов с наличием эндотоксина, что находится в прямой зависимости от концентрации и длительности контакта животного с экзогенным химическим ток-сикогеном.Для выяснения влияния фенолосодержащих соединений на иммунобиологическую реактивность лабораторных животных подвергли воздействию химическим реагентом в концентрации 0,01 мг в 0,3 мл раствора (в течение 50 суток). У мышей определяли наличие и концентрацию иммунных белков в секрете тонкого отдела кишечника. Исследования животных на наличие иммунных белков в пищеварительном тракте показали, что ^Е выявлен у 79,03% особей, из них: на первом этапе - у 30,6%. Концентрация ^Е с учетом всех этапов исследования выявлена от 41,9 МЕ/мл до 19 8 МЕ/мл. При анализе содержания иммуноглобулина Е установлено, что на ¡0 день воздействия фенолосодержащих соединений концентрация его составила 91,3+2 2 МЕ/мл, что в 1,5 раза выше, чем у контрольных животных. Тенденция к повышению концентрации 1йЕ прослеживается на всех этапах исследования: на 30 сутки ^Е составил 133,7+29,4 МЕ/мл, на 4 этапе - 174,6+31,3 МЕ/мл, что превышает в 2,7 раз концентрацию данного иммуноглобулина у контрольных животных. Средняя концентрация в целом по всей группе составляет 129,1+28,05 МЕ/мл, которая достоверно повышена (Р<0,05) у животных, премированных фенолосодержащим соединением. У 53.2% мышей в крови выявлен иммуноглобулин класса Е, со средней концентрацией 48,4+5,1 МЕ/мл.

Концентрация иммуноглобулина класса А в секрете гонкого отдела кишечника выявлена во всех пробах от следового содержания до 1.2; г/л. Возросла частота обнаружения повышенных концентраций со 2 этапа исследований, что значительнее сказалось на 3 этапе исследований(0,98+0,21 г/л), что в 1,6 раза превышает концент-

рацию 1&А в контроле. На 70 сутки отмечено снижение концентрации иммуноглобулина класса А, что в среднем составляет 0,72+0,1 г/л. Возможно, понижение концентрации IgA предрасполагает проницаемость слизистой кишечника, о чем свидетельствует выявление 1цЕ в крови лабораторных животных, что является предвестником появления аллергического компонента (Бережная Н.М. с соавт., 1983), подтверждением тому является нарастание количества эозинофилов до 11,7+1,05% в периферической крови. Увеличилось количество лабораторных животных, содержащих высокие концентрации ¡£0, что сказалось на концентрации средних показателей данного иммунного белка. Необходимо отметить, что выявлена разница в частоте обнаружения и концентрации ^М у отдельных особей. Так, выявлен в 29,2% проб, с максимальной концентрацией на 3 этапе исследований, что составляет 0,32+0,09 г/л.

При исследовании копрофильтратов выявлено, что при увеличении количества гемолизирующих микробов в сочетании с протеем и уменьшением количества лакто-бактерий имеет место повышенная экскреция иммуноглобулина А. Так, в 47,6% пробах ^ выявлен от 1,05+0,03*102 мг/л до 2,4+0,05*10 г г/л. Аналогичная картина имеет место и с концентрация которого составляет от следов до 0,42*10 2 г/л в 28,5% проб.

Следовательно, нарушения в физиологическом равновесии микробных популяций кишечника способствуют экскреции иммунных белков пищеварительного тракта из организма животного.

Таким образом, воздействие фенолосодержащих соединений вызывает сдвиги в сторону патологии в микроэкологии кишечника, начиная с первых дней контакта животного с химическим токсикогеном. В результате мощной антигенной стимуляции со стороны условно-патогенных микроорганизмов увеличивается концентрация Б^А. Кроме того, фенолосодержащие соединения при контакте через амино-или сульфгидрильные группы образуют комплексный антиген с белком, который как конъюгированный антиген способствует стабильной выработке ^Е. Длительный контакт с химическим реагентом усугубляет патологический процесс, стимулируя переход дисбиотических явлений в стадию дисбактериоза, приводящую к нарушению координированной работы отдельных звеньев иммунной системы, вызывая иммуно-дефицитные состояния, способствуя переходу компенсаторного функционирования органов и систем в стадию декомпенсации. Можно констатировать, что понижение иммунобиологической резистентности организма начинается с первой линии защиты - локального иммунитета с вытекающими из этого патологическими сдвигами в организме животного.

Глава 5. Влияние фенолосодержащих соединений на иммунобиологическую реактивность сельскохозяйственных животных.

Изучение влияния фенолосодержащих соединений на иммунобиологический

статус лабораторных животных убедительно показал, что экзотоксикогены вызывают патологию иммунной системы и сдвиги в микроэкологии кишечника.

В связи с этим мы решили продолжить исследования на сельскохозяйственных животных. Фенолосодержащие соединения вызывают дерматоксичное, гепато-токсичное, нейротоксичное действие с отдаленным воздействием на генотип, способствуют извращенной реакции фармакологических препаратов . (Корнев Ю.Е., 1967; БСЭ, 1985; Федоров Л., 1991). Однако, в литературе не затронут вопрос о влиянии фенолосодержащих соединений на интестинальную микрофлору желудочно-кишечного тракта, которая определяет локальный иммунитет за счет своих высоких иммуногенных свойств.

Влияние фенолосодержащих соединений на локальный иммунитет и микрофлору кншечникз.

Для установления влияния фенолосодержащих соединений на иммунобиологическую реактивность организма овец опосредованно через микрофлору кишечника мы изучили качественный и количественный состав микробной флоры в период орального введения фенолосодержащей смеси. Десять животных были разделены на 2 группы. Первую группу представили 3 овцы (контроль) с фистулой в тонком отделе кишечника. Во 2 опытную группу вошли 7 овец также с фистулой в средней части тонкого кишечника. Всех животных три раза в день выпаивали в течение 50 дней фенолосодержащей смесью, в которой содержалось 0,01 мг/л вещества.

Микрофлора тонкого и толстого отделов кишечника изучалась на 10 - 30 - 50 -70 дни.

Результаты исследования свидетельствуют о значительном уменьшении количества микробных популяций во 2 группе в период воздействия фенолосодержашими соединениями. Так, в толстом отделе кишечника отмечена вариабельность в высе-ваемости лактозоположительных эшерихий при низком титре этих бактерий, содержание которых составило от 0.620 млрд.м.т./г до 1.296 млрд.м.т./г, а в среднем на группу 0,804+0,234 млрд.м.т./г (против контроля - 2.354+0,87 млрд.м.т./г на 70 день исследований), что в 2,9 раза меньше, чем у контрольных животных; увеличение лак-тозоотрицательных эшерихий в 2,1 раза к 70 суткам по сравнению с 3 этапом исследования и составил 7,1 + 1,4*10-2 млрд.м.т./г. В химусе тонкого отдела кишечника увеличение лактозоотрицательных эшерихий отмечено на 70 день, что в 1,8 раза выше, чем на 50 день исследований.

Обращает на себя внимание и то, что у животных премированных химическим токсикогеном увеличился удельный вес протея как в тонком, так и в толстом отделах кишечника в 23 и 3,6 раза на 70 сутки исследования, количество которого в тонком отделе кишечника составляло 0,023+0,009 млн.м.т./г, а в толстом - 2,9+ 0,9* НИ млрд.м.т./r (Р<0,05).Бактерии со свойствами гемолиза выявлены в посевах из проб кишечника и фекального содержимого на всех этапах исследования, максимум высе-ваемости во 2 группе отмечено на 70 день исследований, в количестве 2,1+0,6*10 5 млрд.м.т./г и 0,39+0,02*10"2 млн.м.т./г, соответственно.

Количество лактобактерий как в толстом, так и в тонком отделах кишечника уменьшилось в 2,7 и 6 раз, соответственно до 2,9+1,01*10 г млрд.м.т./г (против контроля - 7,9+1,1*10-2 млрд.м.т./г ) и 0,03+0,005млн.м.т./г (против контроля - 0,18+0,04 млн.м.т/г.) В количестве высеваемости клостридий также отмечены изменения, более выраженные в тонком отделе кишечника на 50 день, которые составляли 0,01+0,008 млн.м.т/г, что в 3 раза меньше их количества в контрольной группе животных.

Таким образом, воздействие фенолосодержащих соединений способствует изменению соотношений отдельных видов внутри ассоциаций, уменьшению лактозо-положительных эшерихий, лактобактерий, увеличению условно-патогенной микрофлоры к 70 дню исследований.

Изучение культурально-биохимических свойств эшерихий позволяют отметить что 24,2% штаммов обладали свойствами не характерными для эшерихий, в то время как у контрольных животных данные культуры не превышают 5%. Введение в организм животных фенолосодержащих веществ вызывает увеличение числа атипичных штаммов, количество которых определяется длительностью воздействия химико-токсических реагентов. Микробы рода протея обнаруживаются во внешней среде и в фекалиях здоровых животных. Однако, имеются сообщения, свидетельствующие о выделении их в большом количестве в патологическом материале при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, мочевыделительной системы и желчевыводящих органов, при раневых осложнениях (Смирнов Т,В. с соавт., 1968; Пауликас В.Ю., 1990).

Нами изучены биохимические свойства у 71 штамма рода Proteus. Установлено, что 41 штамм образовал индол и ферментировал мальтозу. Все штаммы не разлагали лактозу, расщепляли глюкозу до кислот и газа, проявляли подвижность, давали положительную реакцию с мочевиной и цитратом аммония. К Pr.vulgaris относится 4' культура, что составляет 57,7° о и 30 культур (42,2° о) - к виду Pr.mirabilis. Изучение 47 штаммов, выделенных от животных опытной группы и 62 штамма, полученных от контрольных животных позволяет отметить, что с резко выраженной антагонисти-

ческой активностью (50 и менее) у овец представлены значением коли-индекса 37,1 +3,6 на количество которых приходится 8,5%, что в 1,7 раза меньше, чем в контроле (14,5%), с антагонистической активностью от 50 до 100 в опыте составляют 25,5% в то время, как в контроле - 45,2%, со средним показателем коли-индекса 83,4±7,9. С лоли-индексом 101 -500 количество штаммов составляет 53,3%, что а 1,5 раз превышает количество данных культур в контроле. Средний показатель опытной группы с коли-индексом 101 - 500 - 342,6+51,3, вто время как в контроле 261,6+49,4, что выше на 81 единицу. На основании полученных данных выявлено, что у животных, премированных фенолосодержащим соединением, преоблаюдают эшерихии антагонистически малоактивные и неактивные. В результате исследований с помощью трипафла-виновой реакции агглютинации испытаны 622 культуры, полученные от животных, премированных фенолосодержащей смесью и 325 штаммов, выделенных от условно-здоровых животных. На долю резкоположительных штаммов в контроле приходится 71,07% культур, что в 5,4 раза превышает количество резкоагглютинирующих штаммов опыта. Значительно увеличилось количество штаммов с наличием глюцидо-липидо-протеинового комплекса, на которые приходится 27,9%, что в 2,6 раза превышает их количество в контроле. Трипафлавин - негативный индекс культур E.coli у овец составляет 13,3+1,2. Следовательно, фенолосодержащие вещества способствуют появлению штаммов с наличием эндотоксина. Количество указанных культур увеличивается на 70 сутки воздействия фенолосодержащей смесью.

Таким образом, фенолосодержащие соединения проявляют токсикогенное воздействие на организм животного опосредованно через микрофлору желудочно-кишечного тракта. Нарушения в микропроцессе проявляются изменениями соотношений среди отдельных представителей микрофлоры кишечника, как в содержимом толстого, так и тонкого отделов кишечника. Отмечено увеличение концентрации атипичных штаммов энтеробактерий, микроорганизмов с более патогенными свойствами (гемолитическими, токсическими). Отмечено нарушение защитной роли микрофлоры за счет понижения антагонистической активности эшерихии. Отмечается определенная зависимость между степенью изменения микрофлоры и длительностью воздействия фенолосодержащей смесью.

При изучении влияния фенолосодержащих соединений на механизм локальной защиты исследован секрет тонкого отдела кишечника на 10 - 30 - 50 - 70 дни. В результате исследования секрета из тонкого отдела кишечника животных, премированных фенолосодержащей смесью, установлено, что 1»Е на протяжении всего периода исследования присутствовали в концентрации от27,3 МЕ/мл до 182,6 МЕ/мл.

На первом этапе исследований данный иммунный белок выявлен в 7,05% проб от 27,3 МЕ/мл до 54,8 МЕ/мл, что составляет 41,05 МЕ/мл. На втором этапе исследований, при относительно неизмененной средней концентрации ^Е, где на него приходится 55,35+11,2 МЕ/мл, увеличилось количество животных, с наличием гомоцито-тропных антител, что составило 42,8%, у которых присутствовал ^Е от 42 МЕ/мл до 68,7 МЕ/мл.

Необходимо отметить, что на 3 этапе исследований при неизмененной частоте проб, с содержанием ^Е, увеличилась в 1,8 раз средняя концентрация данного иммунного белка по сравнению со 2 этапом исследования. На 4 этапе исследований в опытной группе животных увеличилось в 1,7 раза количество проб с содержанием ^Е, что составило 17,5%, с концентрацией данного иммунного белка от 72,2 МЕ/мл до 182,6 МЕ/мл, что в среднем представляет 145,8+21,4 МЕ/мл. Возможно, феноло-содержащие соединения, попав в кишечник, вызывают первичное тканевое повреждение слизистой, что является пусковым механизмом для развития воспаления в стенках кишечника и сенсибилизации рецепторов продуктами воспалительного процесса, с последующими специфическими морфологическими иммунобиологическими изменениями. Как предполагают исследователи, при аппликации слизистой химически простыми веществами, как динитрохлорбензол, производные пикриновой кислоты, динитрохлорфенол и другими, приобретение ими свойств полноценных антигенов возможно только после их соединения с крупномолекулярными веществами. Вероятно, при контакте через амино или сульфгидрильные группы образуется комплексный антиген с белком, который как конъюгированный антиген способствует выработке 1>Е (Хорст А., 1982; Серов В.В., 1983; Кульберг А.Я., 1985; Петров Р.В., 1987; Ерюхин И.А. с соавт.1989; Йегер, 1990).

У овец, премированных фенолосодержащим соединением, отмечены нарушения в выработке секреторного иммуноглобулина А. Количество проб с высоким содержанием 1£А увеличивается в зависимости от длительности воздействия химическим реагентом.

На 1 этапе исследований количество проб с концентрацией ^А 7*10 2 г/л и более составило 42,8°о, что в 1,3 раза превышает исходную величину. На 2 этапе - концентрация ^А составляет 15,6+4,1*10-2 , на 3 - 17,5+3,8* 10 г г/л, что более, чем в два раза превышает его концентрацию у животных 4 этапа исследований, где данный иммунный белок выявлен в количестве 7,2+1,8*102 г/л. С уменьшением проб с высокой концентрацией ^А увеличивается концентрация и количество проб, содержащих иммуноглобулин класса Е. На 4 этапе количество проб с содержанием ^Е увеличи-

лось в 2 раза, а количество проб, содержащих IgA, снизилось 2,7 раза. Необходимо отметить также, что с понижением концентрации IgA увеличивается концентрация IgE, что ярче выражено на 4 этапе исследований, где концентрация иммуноглобулина класса Е составляет 145,8+21,4 ME/мл, a IgA снижена до 7,2+1,8*10-2 г/л. Длительное воздействие фенолосодержащих соединений предрасполагает к выработке иммуноглобулинов класса Е, который в обычных условиях у овец обнаруживается в следовых количествах с минимальной частотой выявления. Помимо иммуноглобулинов класса А и Е в секрете тонкого отдела кишечника выявлен IgG в 29,8% из 57 проб (средний показатель всех этапов исследования). Концентрация IgG на ! этапе в опытной группе составляет 26,1+4,9* 102 г/л, что 1,6 раза превышает данный показатель контрольной группы. Имеются различия на 4 этапе исследований между контроле и опытом в количестве проб, содержащих IgG. В опытной группе иммуноглобулин класса G выявлен в 33,3% проб, что в 3 раза превышает данный показательА в контрольной группе животных - 11,5% . Общий пул IgG на всех этапах исследования составляет 23,9+4,9* 10-2г/л, в то время как в контроле - 14,7+3,4*102. Ig G выявлен в тех пробах, где нет наличия IgE. Возможно, IgG обладает супрессориым действием на синтез IgE или, как предполагает Toda Т. (1975) небольшие дозы антигена стимулируют синтез иммунных белков класса Е, без образования IgG. Иммуноглобулин класса M выявлен в 19,2% на 2 и 4 этапе исследования. Так, в 12,2% проб он обнаружен в следовых количествах, а в 7,01% проб от 1,4*10"2 г/л до 2,8*10-2 г/л. Воздействие фенолосодержащих соединений отражается на скорости секреции иммуноголо-булинов классов А и G, которая достоверно повышена (Р<0,05), что составляет 0,88+0,32 мг/час и 1,09+0,48 мг/час, соответственно. Выявлена взмаимообусловлен-ность в присутствии IgE , IgG и IgA. В пробах с присутствием IgG, IgE не выявлен. Понижение концентрации IgA ведет к повышению IgE в кишечнике животных. Как считают исследователи, IgA также как IgE, выделяется B-лимфоцитами собственного слоя стенки тонкой кишки. Возможно, нарушение продукции IgA приводит к компенсаторному повышению выработки IgE, что в свою очередь способствует проницаемости стенки кишечника и увеличению его концентрации в крови (Mc.Donald G.В., 1985: Jager L„ 1990).

Показатели гуморальных специфических и неспецифических факторов защиты.

При исследовании гуморальных факторов неспецифической защиты овец, премированных фенолосодержащим соединением установлена активация иммунных реакций, начиная с первого этапа исследований, что четче проявляется на 50 сутки воздействия химическим реагентом. Уровень комплемента сыворотки крови овец на

Первом этапе исследований составляет 46,61+2,4 СНЬо , а на 50 сутки он увеличвается в 1,2 раза против контроля. На 3 этапе исследований в 1,3 раза увеличилась фагоцитарная активность нейтрофилов, что составляет 62,2+2,1, отмечен подъем интенсивности фагоцитоза до 6,7+0,8. Об активации иммунитета свидетельствует и увеличение в 1,5 раза титра естественных антител. На 70 сутки исследований идет угнетение резистентности организма животных, которое выражается снижением уровня неспецифических факторов защиты: показателя уровня комплемента в 1,5 раза и 1,2 раза концентрации лизоцима. На первом и втором этапах исследования установлено повышение функциональной активности нейтрофилов, а на четвертом этапе исследования АФ снизилась в 1,4 раза, что составляет 42,9+3,2, в 2 раза уменьшилась интенсивность фагоцитоза (3,1+0,4)

Таким образом, фенолосодержащие соединения способствуют понижению гуморальных факторов неспецифической защиты. С момента действия химического реагента отмечается нейтрофиле-з.Так, количество нейтрофилов с первого по третий этап исследований увеличилось в 1,2 - 1,7 раза, что составляет 3528+321,3 до 4536+401,2 - 5527,2+789,1 - 6090+741 клеток. Необходимо отметить и о повышении адгезивной активности нейтрофилов, увеличение значения индекса нагрузки (ИН) равное 2,8+0,09 - 4,2+0,08 - 3,6+0,07, соответственно, на 1 - 2 - 3 этапах исследования. Индекс напряженности на 70 сутки повышается до 4,1+0,07, повышенное содержание нейтрофилов сменяется увеличением количества лимфоцитов с одновременным угнетением фагоцитарной активности нейтрофилов. Помимо этого, с увеличением соотношений ассоциаций условно-патогенной флоры, параллельно повышается секреция и концентрация иммуноглобулинов пищеварительного тракта с первого по третьей этапы исследования. Однако, несмотря на то, что микробные популяции кишечника обладают высокой антигенной стимуляцией и в достаточно высоком количестве присутствуют в кишечнике, отмечено угнетение выработки иммуноглобулина класса А на 70 сутки, что дает основание предположить о начале патологического функционирования иммунной системы, т.к. идет неадекватная реакция, Возможно, данный процесс происходит за счет подавления клонов, синтезирующих данный иммунный белок. Патологические процессы на слизистых оболочках протекают преимущественно с увеличением количества 1§А. Понижение же иммуноглобулинов класса А является показателем иммунологической недостаточности. Следовательно, нарастание напряженности иммунитета при длительном воздействии неблагоприятных факторов окружающей среды носит неохранительный или при-

слособительный характер, а являются дефектом иммунной системы животного и требует целенаправленной иммунокоррегирующей терапии.

Глава 6. Формирование паразитозов при экспериментальных нематодозах у животных, премированных фенолосодержащими соединениями. Влняиие санации желудочно-кишечного тракта и иммунокоррекции на течение паразитоценозов.

О глубине патологических процессов при паразитозах (в том числе и стронгилятозах), протекающих на фоне различных токсикогенов, сведений нет, за исключением наших работ.

Полученные нами данные по изучению влияния различных химических токсикогенов показывают, что сдвиги в иммунной системе носят не охранительный или приспособительный характер, а является дефектом иммунной системы, ведут к нарушениям в микроэкологии тонкого и толстого отделов кишечника, при этом увеличиваются концентрации атипичных штаммов энтеробактерий, нарушается локальный иммунитет. А поскольку стронгилятозы паразитируют в кишечнике, мы решили определить глубину поражений при стронгилятозах на фоне хронического отравления животных химическими токсикогенами.

Для этого провели опыт на 30 животных: первая группа (7 животных) заражена инвазионными личинками стронгилят в количестве 2000+200 экз. на фоне нормобио-за кишечника; вторая группа (12 животных) в течение 70 дней премирована феноло-содержащей смесью 3 раза в день по 0,01 мг/л, затем заражены инвазионными личинками стронгилят в количестве 2000+200 экз.; третья группа (11 животных) в течение 70 дней премирована фенолосодержащей смесью 3 раза в день по 0,01 мг/л, но за 10 дней до заражения вводили перорально лактобактерин 0,5 дозы 3 раза в день, за 3 суток до заражения проведена иммунокоррекция с аутолейкоцитами, который вводился внутримышечно по 0,2 мл/кг, 2 инъекции с интервалом в 2 дня. После чего, проведено заражение инвазионными личинками стронгилят и продолжено перораль-ное введение лактобактерина в течение последующих 20 суток, с той же кратностью и дозой, что и до заражения. До заражения проведено бактериологическое исследование для учета приживаемости 1_ь.р!ашагшт1 и ЬЬ.ГегшепИ. Исследования проведены до заражения и после на 10- 20 - 40 -60-80 дни. В результате исследований установлено, чго до заражения у животных 1-2-3 групп составляют лактозопозитивные эшерихии 59,3+6,8 - 22,4+5,2 - 32,5+7,9% соответственно. По мере развития паразитарного процесса уменьшается количество типичных эшерихин, что ярче проявляется во 2 группе, с минимальной высеваемостью на 80 сутки инвазии, на долю которых

приходится 13,6+4,01% . В 1-ой и 2-ой группах отмечено стабильное снижение титра антител, в 3-ей группе количество лактозопозитивных кишечных палочек было постоянным до 44,6+6,1%. Необходимо отметить увеличение слабо ферментирующих кишечных палочек во всех опытных группах животных. Во 2 опытной группе максимум увеличения отмечено на 3 этапе и составляет 7,8+2,1% м.т./г, против исходного 5,6+1,7% м.т./г. В 3 - отмечено увеличение на протяжении всего паразитарного процесса с 1,4+0,2% м.т./г (исходный показатель) до 5,7+0,7% м.т./г на 80 день инвазии. Значительно увеличилось количество условно-патогенной флоры как в первой, так и во второй опытных группах с максимумом на 60 день (в первой группе в 8 раз, что составляет 14,6+1,9%м.т./г, во 2 - 19,1+7,4% м.т./г. Низкому уровню условно-патогенных бактерий в кишечнике животных 3 группы возможно способствует высокое процентное содержание лактобактерий, количество которых также претерпевают изменения. Значительное уменьшение лактобактерий выявлено во 2 опытной группе животных в 2,5 - 4 раза по сравнению с 1-ой группой, где их количество составляло 0,04+0,005 - 0,02+0,003 - 0,03+0,004 - 0,04+0,006% м.т./г. В 3 опытной группе лакто-бактерии в 4 разапревышают данный показатель первой, и в 1*6 раз - второй групп. Высокий титр микроорганизмов в 3 группе объясняется интенсивным введением ЬЬ.ГегшепИ, ЬЬ.р1атагиш и высокой их приживаемостью, начиная с первых суток введения пробиотика. В ходе паразитарного процесса значительных изменений в их количественном отношении не отмечено.

Необходимо отметить, что в первой группе животных, условно-патогенная микрофлора максимум составляет 14,6+1,9% м.т./г. Однако у 28,5% овец на долю данных микроорганизмов приходится !9и23,2 процента, что говорит о явлениях дисбактериоза. Максимальное количество стронгилят в 1 группе составляет 817 особей, во 2 - 1419 особей, в 3 - 711 особей.

Сдвигам в составе микрофлоры в сторону патологии, по-видимому, способствует механо-токсическое и аллергическое действие личинок, которые вызывают воспалительные процессы в слизистой, подслизистой оболочке кишечника, что, в свою очередь, способствует аппликации условно-патогенной флоры и ведет к стабильному увеличению концентрации 81§А в I и 3 опытных группах. В первой группе увеличение иммунного белка максимум отмечено на 60 день исследования и составляет 27,4+4,8*1(И г/л, в тот же период зарегистрирована максимальная высевае-мость условно-патогенной флоры. В 3 группе идет стабильное увеличение концентрации Б1£А параллельно нарастанию титра условно-патогенной флоры.

Адекватная реакция указывает на мобильность иммунной системы у животных 1-ой и 3-ей трупп, чего нельзя сказать о животных из 2-ой опытной группы. Так, при анализе результатов исследований, концентрация SigA снижается в 1,3 - 3,1 раза, что составляет 6,8±!,6 - 4,7+1.8 - 4,2+1,4 - 3,1±0,9 - 2,8+0,8* 10'2 г/л - соответственно против исходного (11,3+3,1 *10-2 г/л), а титр условно-патогенной флоры растет на всех этапах исследования. Следовательно, течение гельминтозов на фоне экзогенных химических токсикогенов способствует угнетению выработки секреторного иммуноглобулина А, Снижение концентрации SigA при достаточно высоком количестве микробных популяций кишечника, обладающих высокой антигенной активностью является показателем иммуной недостаточности. Подтверждением этому является высокая интенсивность инвазии у животных второй группы.

Кроме количественных, отмечены и качественные изменения в кишечной микрофлоре при паразитировании стронгилят. Так, антагонистическая активность кишечных палочек претерпевает изменения: увеличение антагонистически слабых штаммов и уменьшение антагонистически активных эшерихий. В первой опытной группе на 20 день исследования антагонистически активные штаммы уменьшились в 1,2 раза, где коли-индекс равен 42,4+5,9, что составляет 31,8+4,8%, с увеличением к 60 дню заболевания слабоактивных штаммов в 1,7 раза с коли-индексом 732,4+1 ¡4,1, что составляет 15,7+2,3. Аналогичная картина отмечена во 2-ой группе, где средняя величина коли-индекса по ходу паразитарной инвазии стабильно увеличивается на несколько порядков. Антагонистическая активность кишечных палочек более стабильна в 3-ей группе животных с предварительной биоиммунологической коррекцией. У данных животных преобладают антагонистически активные штаммы и со средней ее активностью, где с коли-индексом 41,3+6,5 составляет 45,0+7,5% культур, с коли-индексом 67,4+6,1 - 31,6+4,4%, с 641+89,0 составляют 8,3+1,6% культур. К 60 дню заболевания штаммы 501 и > с коли-индексом 620,5+80,5 составляют 6,6+0,9%, что на 111,9 и 239, ! порядка ниже, чем I и во 2 группах. Исследованиями доказано увеличение штаммов с наличием глюцидо-липидо- протеинового комплекса при паразитировании стронгилят. Резкая и полная агглютинация выявлена на 10 день исследований в 1 - 2 - 3 группах до 66,1 - 53,8 - 75,1% соответственно, а трипафлавин-негативные штаммы - 12,5 - 15,3 - 5,3%. На 60 день уменьшилось количество штаммов с резкой агглютинацией и увеличились кишечные палочки с содержанием эндотоксина во всех группах животных, что составляет 50,8 - 42,7 - 54,2% и 17,7 - 22,9 -14,8%. Следовательно стронгилятозы способствуют появлению и увеличению кишеч-

ных палочек с признаками патогенности, что значительнее проявляется у животных с предварительным премированием фенолосодержащим соединением.

В литературе имеются данные о высокой вирулентности и токсичности микроорганизмов из группы эшерихий - коли, выделенные при аскаридозе, свиней, а также об изменчивости биохимических свойств (Панасюк Д.И. с соавт., 1969). Однако нет данных о влиянии паразитарного процесса, протекающего на фоне воздействия экзогенных химических токсикогенов на культурапьно-биохимические свойства Е.соН. Для изучения данного вопроса выделено 66 штаммов у овец, зараженных личинками стронгилят с предварительным премированием фенолосодержащим соединением и 72 штамма от животных, также премированных фенолосодержащим соединением, но с санацией желудочно-кишечного тракта 1.Ь.р1ап£агит, ЬЬ.ГегтеШ! и с иммунокор-рекцией до заражения личинками стронгилят. В результате исследований выявлено, что у животных 2-ой группы через сутки лактозу ферментировали 69,9% культур, 9,09% разлагали лактозу через 2-3 суток и 21,2% более чем 3 суток, в то время как в 3 опытной группе не выявлены штаммы, ферментирующие лактозу более чем через 72 часа,.Отмечены различия и в разложении других углеводов. Так, слабоферменти-руюшие штаммы кишечных палочек по отношению к глюкозе и мальтозе во 2 опытной группе в 2,05 раза больше, чем в 3, где они составляют 25,7% и 12,5%. У животных 2 группы выявлены штаммы не ферментирующие маннита, на долю которых приходится 7,6%; 9,09% культур ферментирующих лактозу, разлагают сахарозу, не образуют индола, подвижны, а 4,5% штаммов тоже не образуют индола, но неподвижны и ми одна из этих культур не ферментирует маннит. 9,09% культур обладают свойствами утилизировать цитрат аммония, из них 4 штамма дают отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра и положительную с метиловым красным, что также не определяет их принадлежности к эшерихиям. 4,5% дают щелочную реакцию лакмусовой сыворотки, остальные окрашивают среду в розовый цвет, 1,5°,о образуют сероводород и разжижают желатину, 6,06% культур не вступают в реакцию с сульфани-ловой кислотой и Ь-нафтил-амином. в результате чего не образуются нитриты. Все культуры окрашивают в желтый цвет среду, в состав которой помимо индикатора и мочевины входит глюкоза, последняя под воздействием испытуемых культур выделяет кислые продукты. Это указывает на то, что ни одна культура не расщепляет мочевину. Таким образом, можно отметить, что лишь 69,7% штаммов, выделенных у животных второй опытной группы можно отнести к типичным эшерихиям, остальные обладают свойствами, не характерными для данных микроогранизмов. Следовательно, паразитирование стронгилят сопровождается изменениями в сапрофитной мик-

рофлоре кишечного тракта, вызывая дисбиотические процессы и явления дисбакте-риоза . Из чего следует, что между животным и гельминтом устанавливаются антагонистические взаимоотношения опосредованно через интестинальную микрофлору кишечника. В свою очередь, наличие в значительном количестве условно-патогенных бактерий и их ассоциаций способствует более бурному паразитарному процессу. Следовательно гельминты способствуют разрушению экосистемы желудочно-кишечного тракта, данная патология усугубляется при заражении личинками строн-гилят на фоне воздействия экзогенным химическим токсикогеном.

Влияние фенолосодержащих соединений на локальный иммунитет и микрофлору кишечника. Показатели отдельных популяций и субпопуляций иммунокомпетент-ных клеток овец.

Установлены значительные сдвиги внутри популяций и субпопуляций иммуно-компетентных клеток, лейкоцитов у животных 2 группы. Нейтропения прослеживается на всех этапах исследования в период паразитарного процесса. Если до инвазии сегментоядерные нейтрофилы составляют 3,0+3*10' /л, то на 60 сутки количество их уменьшилось до 2,09+0,4* 10® /л, что 1,5 раза ниже исходного. Количество фагоцитирующих нейтрофилов также уменьшается в 2,8 раза. Нарушению внутриклеточного процесса переработки латекса возможно способствует колонизация кишечника каталазоположительными Е.соП, по всей вероятности дефект внутриклеточного процесса переработки нарушен главным образом из-за процесса, вызванного грамотри-цательными возбудителями, стафилококками, которые являются каталазоположительными агентами. Помимо нейтропении установлен значительный сдвиг ядерной формулы влево, а в сочетании с нормальным содержанием лейкоцитов, которые наблюдаются у инвазированиых стронгилятами на фоне фенолосодержащих соединений, можно говорить о подавлении защитных сил организма животных. Значительных изменений в показателях популяций нейтрофилов в 1 и 3 группах не отмечено. Однако, у животных всех трех опытных групп выявлена эозинофилия. Количество данных иммунокомпетентных клеток стабильно увеличивается. Лейкоцитоз с высоким количеством эозинофилов определен на всех этапах исследования (7,2+1,02 -8,9+1,5 - 10,5+2,6 - 10,2+2,1 - 9,6+2.0 - 9,0+1,9 - 4,1+0,7 - 6,7+0,9 - 7,8+0.8 - 6,2±0,9 -6,8+0,7 - 7,5+1,1% соответственно). Эозинофилия идет пропорционально увеличению концентрации ^Е. Максимум гомоцитотропных белков в 1 и 3 группах определены на 1 - 2 этапах исследования, что составляет 88,9+16,9 - 100,4+19,5 МЕ/мл и 38,1+5,5 - 31,8+5,1 МЕ/мл. пик эозинофилов определен также на этих этапах исследования. Динамическое увеличение уровня ^Е в начальном периоде, стабильность в

последующие дни исследования с повышенным количеством эозинофилов на последующих этапах может рассматриваться как незаконченность иммунной реакции с ее аллергическим компонентом. Вероятно, через ^Е эозинофилы и макрофаги реализуют более высокий потенциал цитотоксичности, направленный против паразитарной инвазии, о чем свидетельствуют показатели интенсивности инвазии - в первой группе она составляет 576,3+210,5, во 2-ой - 828,5+362,8, в третьей -424,8+199,5 экземпляров на одну особь. Повышению количества эозинофилов возможно способствует и интоксикация фенолосодержащими соединениями, которые вызывают воспалительные процессы, кроме того, данные химические реагенты через амино- или сульфгидрильные группы образуют комплексный антиген с белком кишечника, который может расцениваться, как конъюгированный аллерген, обладающий иммуно-токсичностью. Подтверждением тому, угнетение активности клеток-супрессоров, увеличение уровня в ходе премирования фенолосодержащим соединением до 145,5+21,4 МЕ/мл. Гиперпродукция 1§Е в данной группе возможно связана с недостаточностью элиминации антигена секреторным ^А и фагоцитирующими клетками, что приводит к его накоплению в подслизистом слое и стимуляции ígE-продуцируюших клеток. Заражение животных гельминтами на фоне гиперпродукции гомоцитотропных антител ведет к дальнейшему антигенному раздражению, а запо-роговые дозы (высокие) стимулируют антигензависимую Т-супрессию, подавляющую синтез ^Е с 132,6+ 26,1 до 84,3+9,8 - 50,9+14,1 - 68,1±9,3 - 38,4+7,1 МЕ/мл. Большие дозы аллергена стимулируют Т-супрессоры. Отмечена тенденция к увеличению Т-сулрессорных клеток у животных в 1-ой - 2-ой группах на всех этапах исследования. Установлено достоверное снижение В-лимфоцитов: в 1 группе с 14,4+1,66 до 9,6+1,6%, во 2 - с 26,6 до 20,3+3,5% и в 3 - с 16,4+2,6 до 11,5+1,5 на 2 этапе исследований, Отмечено, что у животных 1 и 3 групп при понижении концентрации ^Е (100,4+19,5 - 80.6+16,4 - 71,6+11,6 МЕ/мл) идет подъем концентрации секреторного иммунного белка А (15,3+4,6 - 21,3+5,1 - 27,4+5,8*10 ' г/.л), возможно это происходит из-за того, что иммуноглобулины этих двух классов преимущественно синтезируются в слизистых оболочках. У животных 2 группы концентрация иммунных белков резко снижается, несмотря на все показатели в составе микробных популяций кишечника и антигенной стимуляцией паразитарным фактором. Возможно, гельминтозная инвазия на фоне токсических химических соединений, является пусковым фактором предрасполагающим переход к патологии.

Увеличение моноцитов на протяжении всех периодов исследования с 0,1+0,02*10®/л до 0,4+0,04*10% у животных 2-ой группы можно рассмотреть, как

переход воспалительной реакции во вторую фазу, а в комплексе с повышением Т-супрессоров и увеличением ИН в 1,5 раза - о снижении сопротивляемости организма. У овец зараженных стронгилятами в 1 и 3 группах, наблюдали ИН до 3,5+0,09 и 2,3+0,03 соответственно. На последующих этапах показатель напряженности идет к снижению, что указывает на активацию иммуной системы. Во 2 опытной группе по мере развития паразитарного процесса ИН увеличивается до 3,2+0,09 (на 3 этапе) и до 3,9+0,07 (на 4 этапе). Стабильно низкая фагоцитарная активность до 2,1 констатирует факт разбалансировки работы разных звеньев иммунной системы, выражающееся в увеличении сопряженности в 2,6 раза, что свидетельствует о снижении иммунобиологической резистентности организма.

Таким образом, химические токсикогены создают благоприятные предпосылки для бурного развития гельминтозного процесса опосредованно через микрофлору кишечника хозяина паразита, что проявляется в увеличении лактозонегативных, атипичных эшерихий, гемолизирующей флоры, протея, уменьшением количества лактозопозитивных кишечных палочек, снижением антагонистической активности кишечника. В свою очередь, ассоциация условно-патогенных бактерий способствует интенсивности инвазии. Недостаточность иммунной системы, выражающаяся в атипичной секреции БГ^, в комплексе со сдвигами в сторону патологии в микробной флоре кишечника вызывает нарушения в локальной защите организма от паразитарной инвазии.

Иммунобиологический статус и течение паразитарной инвазии, вызванной БурЬааа оЬуеЫа на фоне воздействия химических токсикогенов.

Учитывая хорошую приживаемость у мышей БурЬааа оЬуеЫа, быстрый темп их развития в кишечнике хозяина, мы сочли, что данный объект является оптимальной экспериментальной моделью для отработки схем санации желудочно-кишечного тракта при паразитозах. Для этого отобраны 3 группы лабораторных животных: в 1 группе, состоящей из 152 мышей, инвазированные яйца сифаций вводились на фоне спонтанного нормобпоза кишечника; вторую группу животных, в количестве 132 особей, перед заражением яйцами 5,оЪуе1а1а в течение 50 суток премировали фе-нолосодержащей смесью в концентрации 0.0! мг в 0,3 мл раствора на одно введение, с 3-х кратным воздействием в течение суток; третья группа животных состоящая из 73 мышей, также премирована в той же дозе фенолосодержащей смесью, однако перед заражением инвазионными яйцами сифачий в течение 10 дней вводили перораль-но по 1 дозе на 10 мышей 2 раза в день лиофилизированную микробную массу живых антагонистически активных лактобактерий (ЬЬ.Гегтепи и ЬЬ.р1ашагит). Бактерио-

логическими исследованиями На 7-10 день определяли приживаемость микробных культур в кишечнике мышей. Животных всех групп заражали яйцами нематод сифа-

72-76-г7

чий в количестве 1200+100. При убоёХЖ'ивотных на 15 день после заражения количество прижившихся гельминтов в ! группе составляло на одну особь 618,4+86,4 экземпляров, во второй группе - 801,6+105,4 экземпляров, а количество обнаруженных гельминтов в группе мышей, где заражение проведено на фоне полноценного высокоантагонистического штамма ЬЬ/егтепп и ЬЬ.р!ал1агит, составляет 428+92,1 экземпляров. Нами отмечена выраженная зависимость срока достижения половой зрелости паразита от веществ, которыми премировали животное. У половины животных 1 и 2 групп паразиты достигли половой зрелости к 16 - 18 дням, в третьей группе гельминты достигли половой зрелости на 19 - 21 день и в более поздние сроки.

Влияние пробиотиков на приживаемость и интенсивность инвазии ЭЬурЬааа оЫеЫа.

Полученные результаты побудили нас к проведению исследований, с помощью которых можно установить существование непосредственной или опосредованной взаимозависимости между гельминтами в преимагинальной стадии их развития и лактобактериями. Исходя из этого мы исследовали влияние ЬЬ.Гегтелп и ЬЬ.р1атагит на приживаемость и развитие БурЬа^а оЬ\ге1а1а в условиях естественного биоценоза кишечника лабораторных животных. Для этого нами были отобраны 2 группы мышей. Первая группа - 65 животных, вторая - 62 мыши, которых инвази-ровали яйцами сифачий в количестве 1200+100 экземпляров. В первой группе, перед инвазированием в течение 10 дней и после заражения, в период исследований вводили биологический препарат лактобактерин 2 раза в сутки по 1 дозе на ¡0 животных, объем вводимого препарата - 0,3мл. Во 2 группе - заражение лабораторных животных проведено на фоне спонтанного кишечного нормобиоза.

Установлено, что в 1 группе животных во все дни исследования интенсивность отхождения яиц гельминтов значительно превышают аналогичные показатели 2 группы. Так, через сутки после заражения у 23,07% животных было выделено до 148 яиц, на 2 день у 38,4% животных также обнаружено высокое отхождение яиц до 200 экземпляров. На 3 день у 4,6° о мышей выявлено до 30 экземпляров яиц паразита. Во 2 группе аналогичное количество яиц было выявлено у 17,75 животных, что в 3,5 раза меньше, чем в 1 группе. Следовательно, пробиотики обладают овостатическим действием.

Секреция, деструкция и экскреция иммунных белков и микрофлора кишечника животных, инвазированных 5урЬас1а оЬуеЫа. Влияние фенолосодержаших соединений на иммунобиологическую реактивность организма.

При экспериментальном заражении 357 белых мышей яйцами 5.оЬ\,е!а(а в количестве 1200+100 экземпляров, где 152 особи заражены на фоне спонтанного нормо-биоза, 132 - на фоне премирования фенолосодержащими соединениями и 73 - на фоне фенолосодержащих соединений в комплексе с пероральным введением пробиотиков. Установлено, что до заражения у всех мышей количество микробных тел в одном грамме исследуемого материала весьма вариабельно от сотни миллионов до нескольких миллиардов, но среднее значение по группам колеблется в незначительных пределах. У животных 1 и 3 групп преобладают лактозопозитивные эшерихии, на которые приходится более 85 % от общего количества м.т./г - 1,22+0,7 млрд.м.т./ г и 1,1+0,2млрд.м.т./ г соотвественно. В третьей опытной группе, где животным проведена предварительная санация желудочно-кишечного тракта пробиотиком, слабо-ферментирующие кишечные палочки представлены количеством 9,1 + 1,4 *10'г млрд.м.т./г, что составляет 7,6% от общего числа микробных тел. Оносительное количество условно-патогенной флоры выявлено за счет высеваемости, как в 1, так и в 3 группах лактозоотрицательных эшерихий, что составляет 5,2+0,8*10° - 4,9+0,9* Ю3 млрд.м.т./ г соответственно. Отмечено присутствие в посевах лактобактерий в первой группе в количестве 9,75+2,!*10! млдр.м.т./г, в 3 группе - !8,4+1,9*10"2 млрд.м.т./г. Увеличение лактобактерий в 1,8 и в 2,7 раза у животных 3 группы по сравнению с контролем и первой опытной, объсняется тем, что до заражения сифа-чиями, мышей интенсивно премировали пробиотическим препаратом, содержащим лиофилизироваиную микробную массу живых антагонистически активных лактобактерий ЬЬ.Гегтепи и ЛЬ.р1атагит, приживаемость которых установлена с первых суток дачи препарата. Во 2 опытной группе на долю лактозонегативных эшерихий приходятся до 22,6+2,1% или 18,2+3,3* 103 млрд.м.т./г. Отмечено значительное увеличение протея и гемолизирующей флоры с суммарным содержанием в количестве 18,5+2,7° о от общего числа. В первой и третьей группах уменьшение количества эшерихий идет с нарастанием титра слабоферментирующих штаммов, а во второй группе - увеличение за счет лактозонегативных штаммов. Данным изменениям, возможно. способствует развитие воспалительного процесса в результате раздражающего и провреждающего действия фенолосодержащих соединений, приводящего к нарушению экосистемы желудочно-кишечного тракта, вызывая дисбиотические явления и дисбактериозы.

При изучении микрофлоры в процессе развития сифачий в кишечнике хозяина, необходимо отметить, что сдвиг в сторону патологии происходит, как в толстом, так и в тонком отделах кишечника с тенденцией увеличения слабоферментирующих, микроорганизмов со свойствами гемолиза и протея, с одновременным уменьшением как абсолютного, так и относительного количества типичных эшерихий. Данные изменения ярче протекают у животных, предварительно премированных фенолосо-держащими смесями.

Следовательно, фенолосодержащие соединения являются токсикогенными эк-зогенами и вызывают значительный сдвиг в сторону патологии в микроценозе кишечника животных, что , в свою очередь, способствует высокой интенсивности и экстенсивности инвазии, атипичной локализации паразита и является катализатором их биологического развития, что подтверждено экспериментальными исследованиями, где достоверно доказано, что гельминты во 2 группе достигают половой зрелости на 3-4 дня раньше особей из других опытных групп. Необходимо отметить атипичную реакцию иммунной системы у животных, зараженных Б.оЬуеЫа на фоне премирования фенолосодержащими соединениями. В 1 опытной группе животных с нарастанием условно-патогенной флоры увеличивается концентрация иммуноглобулина класса А, что составляет на 14 день исследования 0,1 г/л, на 25 день - 0,3 г/л, а у животных зараженных на фоне фенолосодержащего соединения, несмотря на прогрессирующее нарастание титра условно-патогенных штаммов и увеличения общего количества микробной флоры, отмечено угнетение локального иммунитета, где секреторный IgA выявлен на 14 день в концентрации 0,05 г/л, на 25 - 0,04 г/л.

Установлена зависимость распада иммуноглобулинов от состава микробных ассоциаций в кишечнике. У животных 1 и 3 опытных групп из иммунных белков в копрофильтрате присутствовали только ^О в количестве 5,7+1,3*10 - мг/.г. У мышей 2 группы выявлен - 0,01 ' ыг/г и -0,02 мг/г , Следовательно, паразитарный процесс, осложненный дисбактериозом способствует экскреции гликопро-теинов из организма животного, которые не используются для синтеза новых биологически активных веществ. В присутствии значительных концентраций SígA {3 группа), лактобактерии имплантируются и пролиферируются в дистальные отделы тонкого кишечника. Обладая высокоантагонистической активностью, ОзЛегтегШ и ЬЬ.р1ап1агит подавляют рост и размножение условно-патогенной флоры, тем самым лишая гельминтов его симбионтов, разрушая систему паразитоценозов. Введение пробиотиков обеспечивает местную иммунологическую защиту желудочно-кишечного тракта.

После заражения животных нематодами, в I группе концентрация 1§Е постепенно увеличивается и максимума достигает на 14 день исследования, что составляет 72,6+18,ЗМЕ/мл, тогда как у животных 2 группы данный иммунный белок с незначительными колебаниями находился на одном уровне на всех этапах исследования (от 69,4+17,6 до 88,1+21,2 МЕ/мл.). Следовательно, основные клетки мишени - тучные и базофилы, не способны продуцировать биологически активные вещества, которые коррегируют напряженность противопаразитарного иммунитета, что также может явиться причиной высокой интенсивности инвазии.

Таким образом, экзогены - химические соединения способствуют иммунодефи-цитным состояниям, которые проявляются в атипичных реакциях со стороны секреции гомоцитотропных антител. Поскольку секреторный ^Е продукт лимфоидных элементов, то атипичная его выработка может рассматриваться как одно из проявлений функциональной недостаточности Т-системы.

В результате исследований установлено, что паразитирование сифачий сопровождается увеличением условно-патогенной флоры и уменьшением типичных эше-рихий. Установлена неадекватная реакция со стороны локальной иммунной системы у животных второй группы. Если в норме при повышении титра кишечных палочек усиливается продукция ^А, что отмечено в 1 группе животных, то у зараженных на фоне фенолосодержащих соединений - с увеличением количества ассоциаций условно-патогенных штаммов, концентрация иммунного белка класса А снижается или остается в пределах исходной величины. Уменьшение продукции иммуноглобулинов класса А ведет к понижению локального иммунитета желудочно-кишечного тракта, т.к. 1§А осуществляет защитную функцию либо путем прямого действия на бактерии, что приводит к их иммобилизации и препятствует внедрению микроогранизмов в слизистую оболочку, либо посредством контакта с продуктами бактериального распада, дезактивуруя их и способствуя в дальнейшем их деструкции протеолитиче-скими ферментами. При воздействии фенолосодержащими соединениями создаются предпосылки для интенсивности и экстенсивности инвазии за счет заселения желудочно-кишечного тракта симбионтами паразита. Дефицит 1§А способствует проницаемости слизистой оболочки кишечника, тем самым вызывая атопические осложнения, несмотря на высокую концетрацию ^Е (145,5+21,4 МЕ/мл) и эозинофилию (7,6+0,9%). которые в сочетании проявляют свойства противопаразитарной защ;<гы. выявлены инвазии с высокой и средней степенью интенсивности. Учитывая полученные данные можно сделать вывод, что для развития бурного паразитарного процесса необходимы симбионты паразита, где эволюционно сложившиеся стойкие взаи.мо-

связанные и взаимозависящие отношения способствуют более тяжелому клиническому течению гельминтозов.

Своевременная санация желудочно-кишечного тракта пробиотическими препаратами восстанавливает и сохраняет физиологический баланс в микробном пейзаже кишечника, препятствует формированию паразитоценозов, лишая его сочленов оптимальных условий. А иммунокоррегирующая терапия способствует разблокировке всех популяций и субпопуляций Т-лимфоцитов и фагоцитов. В результате со-четанной работы всех звеньев иммунной системы восстанавливается локальный иммунитет, что способствует противопаразитарной защите. Доказательством тому является экспериментальное заражение животных с предварительно иммунобиологической коррекцией, в результате чего выявлена инвазия с низкой и средней степенью интенсивности, с наименьшим количеством паразита на одну особь, без глубоких изменений в аутохтонной микрофлоре, без напряжения в иммунной системе.

Глава 7. Иммунокоррегирующая терапия при паразитоценозах животных из экологически неблагоприятного района.

Гельминты и их метаболиты на фоне воздействия экзогенных химических ток-

сикогенов приводят к разрушению экосистемы и колонизации атипичной, условно-патогенной флорой, к частичной разобщенности и нескоординированности отдельных звеньев иммунной системы, тем самым способствуя нарушению адаптационно-компенсаторной работы органов и систем животного.

Полученные данные послужили основанием к разработке комплекса лечебно-профилактических мероприятий, направленных на сохранение и восстановление локального иммунитета опосредованно через микрофлору кишечника, разблокировку популяций и субпопуляций Т-лимфоцитов, повышению фагоцитарной активности, в комплексе со специфической антгельминтной терапией.

Сравнительная оценка бактериальной активности антгельминтных препаратов. совместное применение с пробиотиками.

С целью изучения антимикробного действия панакура, ивомека. нилверма провели исследования in vitro (по Седовой И.П. с соавт., 1973). Для определения бактерицидной активности применен метод диффузии в МПА. Исследования показали, что бактерицидным действием к энтеробактериям обладают все препараты. Более выраженным угнетающим действием обладает ивомек. несмотря на то, что минимальный показатель данного препарата - минус роста вокруг колодца составляет 0,7 см, что меньше на 0,2 см зоны задержки роста панакура. Однако в М+ш отмечены значительные различия, где в 1,3 раза у ивомека зона задержки роста вокруг

4S

"колодцев" превышает данный показатель нилверма, что составляет 0,64+ 0,12 см и в 1,2 раза панакура, на который приходится 0,71+0,14 см.

Таким образом, можно утверждать, что испытанные in vitro антгельминтики с вероятностью ошибки не более 0,5% (Р<0,05) обладают бактерицидными свойствами по отношению основного представителя аэробной кишечной микрофлоры -E.coli. Результаты антибактериальной активности препаратов, полученных in vitro, подтвердили in vivo, используя препарат нилверм.

Для этого отобрано 46 лабораторных животных, которых по принципу аналогов разделили на 2 группы: в первой - 22 животных, премированных нилвермом в дозе 15 мг/кг 2 раза с интервалом 7 дней; во второй группе - 24 мыши, антгельминтик введен в той же дозе и схеме, но на фоне пробиотиков, которыми премированы животные за 10 дней до назначения препарата и в течение последующих 12 дней по 1 дозе на 10 особей 2 раз в день. Бактериологические исследования проведены до дачи антгельминтика и после введения на 2 - 4 - 8 - 12 дни (учет дней с момента первого введения). Установлено в обеих группах уменьшение на второй день после применения нилверма лактозоположительных эшерихий. На 4 день в первой группе увеличивается удельный вес энтеробактерий, слабоферментирующих до 16,7% и лактозоот-рицательных до 17,2%, что 2,7 раз превышает количество данных микроорганизмов во второй группе животных. В первой группе после повторного введения нилверма количество лактозоотрицательных эшерихий остается довольно высоким и составляет 11,6+2,9*10 3 млн.и.т./г. Во второй группе до нилверма отмечен сравнительно высокий титр лактобактерий, что объясняется высокой приживаемостью Lb.plantarura it Lb.fermenti у всех исследуемых животных. После дачи антгельминтика количество лактобактерий на 8 - 12 сутки снижается у 54,1% в 1.5 раза, (до 0,37+0,08 млн.м.т./г против исходной 0,65+0,13 млн.м.т./r), у 12% мышей данные микроорганизмы выявлены от 0,81 до 0,94 млн.м.т./.г, у остальных с незначительной вариабельностью от 0,48 до 0,77 млнм.т./г. Возможно нилверм отрицательно влияя на типичные эшери-хии,- понижает антагонизм кишечника, тем самый способствуя приживаемости Lb.plantarum и Lb.fermenti.

При изучении антагонистической активности 47 лактозоположительных эшерихий из первой и 45 культур из второй групп установлено, что введение нилверма понижает антагонистическую активность кишечника у животных как в перпой, так и во второй группах. В первой группе на 12 день исследования коли-индекс равен 47,4+6,9, а количество штаммов составляет 17.02±1.У% , что в 2,2 раза меньше, чем во второй группе (37,7+5,5° о). Во второй группе, несмотря на количественное

уменьшение высокоантагонистических штаммов, произошел сдвиг влево коли-индекса на 6,3 порядка, что представлено значением 38,3+4,1. Возможно введение лактобактерий стимулирует бифидус-фактор, что, в свою очередь, в сочетании с в^А способствует созданию благоприятной среды по всему пищеварительному тракту путем имплантации и пролиферации лактобактерий в дистальные отделы тонкого и толстого кишечника. Очевидно, в силу своей высокоантагонистической активности ЬЬ.р1амагит и ИэТегтепи препятствуют росту и размножению условно-патогенных бактерий. Повторное введение нилверма способствует увеличению количества слабоактивных штаммов в первой группе животных в 2,3 раза, на долю которых приходится 61,7+7,6% и в 2,7 раза превышает данный показатель второй группы.

Таким образом, испытуемые антгельминтики обладают бактерицидным действием по отношению к типичным эшерихиям, наименьшей активностью обладает ннлверм. Введение антгельминтика на фоне пробиотического препарата является более физиологичным, так как способствует сохранению качественного и количественного состава микрофлоры кишечника, поддерживая его антагонистическую активность, тем самым лишая гельминта сочленов паразитоценоза. Достаточно высокая приживаемость лактобактерий при введении их в комплексе с антгельминти-ком позволяет совместное их назначение при дегельминтизации. При этом является важным то, что назначение пробиотика способствует санации кишечника хозяина, что необходимо для восстановления и сохранения сапрофитной флоры, в составе которой, в результате гельминтозного процесса отмечаются сдвиги за пределы физиологических норм. Как полагают В.Г.Петровская с соавт. (1976). Х.В.Аюпов с со-авт. (1976; 1978) заселение микрорганизмами тонкой кишки, как и изменения эволю-ционно сложившегося состава микрофлоры толстой кишки, нарушают существующий баланс и не могут не повлиять на процессы пищеварения, всасывания и выделения. Это указывает, что сохранение и восстановление микробиоценоза ведет к нормализации обменных процессов, повышению иммунобилогической раективности организма и др.

Руководствуясь результатами наших экспериментальных исследований, мы сочли обоснованным проведение лечебно-профилактических мероприятий при гель-минтозах комплексно, сочетая специфическую терапию - непосредственное воздействие на паразита с биоиммунокоррекцией.

Пассивная энтеральная иммунизация как способ противопаразитарной защиты.

Учитывая, что секреторный иммуноглобулин А абсорбируясь на слизистой оболочке препятствует прикреплению патогенных, условно-патогенных микроорганизмов и пищевых агентов к рецепторам эпителиальных клеток, усиливает их элиминацию или дезактивирует посредством контакта с продуктами бактериального распада, способствуя в дальнейшем их деструкции протеолетическим ферментом, а также активность SjgA против стафилококков, вирусов, поли- и ротавирусов (Хазисов Л.Б. с соавт., 1980; Федоров Ю.Н. , 1987; Сапроненко П.М., 1987; Ededo Н. с соавт., 1975, Magnusson К. с соавт., 1979; Watson D., 1980), сочли возможным использовать данный иммунный белок в лечении стронгилятозов.

Для этого мы провели опыт на 108 спонтанно зараженных стронгилятами овцах. Перед началом опыта животных разделили на 3 группы; первой группе (56 овец) задали нилверм в дозе 15 мг/кг, дважды с интервалом в 7 дней и пробиотик 0,5 дозы 3 раза в день в течение 10 дней; вторую группу (35 овец) продегельминтизиро-вали нилвермом по той же схеме; третьей группе (17 овец) проведена энтеральная пассивная иммунизация лактосывороткой по 0,5 г/л 2 раза в день в течение 10 дней, затем животных дважды продегельминтизировали нилвермом (согласно инструкции). При исследовании животных через 15 дней после последней дегельминтизации установлено, что коррекция пробиотиками дает эффективность дегельминтизации 95%. Энтеральная пассивная иммунизация в сочетании с нилвермом показала ИЭ 94,1%, а дегельминтизация только нилвермом - 91,8%.

Анализируя полученные результаты считаем, что комплексная антгельминтная терапия с участием пробиотиков оказывает положительный эффект, как в остром периоде, так и при хроническом течении процесса, она более удобна и проста в исполнении, не требует дополнительных экономических затрат. Учитывая бактерицидную активность нилверма при совместном его введении с пробиотиками, отмечаем высокую приживаемость Lb.fermenti и Lb.planíarum. По-видимому это способствует санации кишечника, предохраняет от колонизации симбионтами паразита, препятствует формированию паразитоценозов. Полученные положительные результаты по санации кишечника при стронгилятозах проверили на животных в различных экологических регионах.

Иммунокоррекция паразитоценозов, эффективность лечения.

Для определения эффективности комплексной терапии антгельмитиком в сочетании с пробиотиками и экстракорпорально активированными аутолейкоцитами провели опыты на 640 овцах спонтанно зараженных стронгилятозами. из которых

251 животное из условно-чистого и 389 овец из экологически неблагоприятного региона. Животные из разных регионов были разделены на 2 группы: первые группы дегельмитизировались, вторые получали пробиотик совместно с аутолейкоцитами и дегельминтизировались. Эффективность препаратов учитывалась на 10 день после последней дегельминтизации. Установлено: ИЭ у овец только дегельминтизирован-ных нилвермом составило от 93,8 до 95,4% у животных из экологически чистого района и от 78,1 до 91,6% у животных из экологически неблагоприятных регионов. В группе животных из неблагополучной зоны при проведении комплексного лечения ИЭ составила от 96,5 до 97,7%, в условно чистой от 95,6 до 100%.

Опыты повторили на 3452 овцах спонтанно зараженных стронгилятами из экологически неблагоприятного региона. 252 овцам провели энтеральную пассивную иммунизацию лактоглбулином по 0,5 г 2 раза в день, в течение 10 дней с нилвермом по 15 мг/кг дважды с интервалом в 7 дней; 200 овцам по той же схеме перорально введен анттельминтик в сочетании с пробиотиком по 0.5 дозы 3 раза в день в течение 10 дней, 3000 животным проведена коррекция микрофлоры кишечника и иммунной системы (лактобактерином по 0,5 дозы 3 раза в день в течение 10 дней, на 7 и 10 сутки введены в/м по 0,2 мг/кг аутолейкоциты и перорально нилверм по 15 мг/кг дважды с интервалом в 7 дней).

В результате дегельмитизации установлено, что комплексная коррегирующая терапия включающая сохранение и восстановление микроэкологии кишечника, стимуляцию отдельных звеньев иммунной системы, способствует снижению интенсивности и экстенсивности инвазии.

Таким образом, введение лактобактерина отрицательно воздействует на микробы симбионты паразита, 2-х разовая внутримышечная иммунокоррегирующая терапия обеспечивает образование напряженности местного иммунитета. Специфическая терапия в комплексе с биоиммунокоррекцией способствует понижению экстенсивности и интенсивности инвазий, сохраняет и восстанавливает микроэкологию желудочно-кишечного тракта, координирует работу отдельных звеньев иммунной системы, стимулирует выработку секреторных иммунных белков.

Глава 8. Обсуждение полученных результатов.

В результате исследований считаем, что состояние окружающей среды имеет большое значение для нормального функционирования всех органов и систем животного.

Изучение иммунобиологической резистентности животных из экологически чистого региона позволяет отметить, что в микроэкологии кишечника отмечены незначительные сдвиги проявляющиеся заселением лактозонегативными эшерихиями, протеем верхние отделы кишечника, но они находятся в пределах физиологической нормы. Нами также установлено, что работа компонентов иммунной системы и, следовательно, функционирование местного или локального иммунитета подвергнуты сезонным биоритмическим колебаниям. При значительной вариабельности отдельных показателей иммунной системы, работа между отдельными ее звеньями скоординирована, подтверждением ее является величина связанности компонентов иммунной системы, отражающая уровень напряженности или индекс нагрузки (ИН), который составляет 1,55+0,05. Следовательно сдвиги в иммунологических и гематологических показателях в различные сезоны года носят приспособительно-охранительный характер.

Неблагоприятные экологические факторы, такие как экзогенные химические токсикогены, согласно нашим данным, вызывают значительные сдвиги в микроэкологии желудочно-кишечного тракта, за счет увеличения условно-патогенной флоры, появления значительного числа слабоферментирующих штаммов, атипичных культур кишечной палочки и резким уменьшением типичных эшерихий. Помимо этого, нам удалось обнаружить наличие большого числа бактерий антагонистически мало активных или совсем неактивных с одновременным уменьшением высеваемости антагонистически активных штаммов, что, в свою очередь, способствовало понижению антагонистической активности микрофлоры кишечника хозяина, а следовательно, вело к нарушению физиологического баланса микроорганизмов и к понижению резистентности макроорганизма к инфекционным процессам.

Следовательно, воспалительный процесс слизистой, подслизистой кишечника в результате действия фенолосодержащим соединением способствует увеличению и поддержанию в кишечнике присутствия условно-патогенных бактерий, что, в свою очередь, может понизить интенсивность регенерации эпителия, а этот факт ведет к прогрессирующей атрофии слизистой. Помимо этого, данные явления могут способствовать нарушениям ферментативной активности микрофлоры, восстановлению образования секреторных иммуноглобулинов, которые необходимы для действия антибактериальных антител и др. (Abrams Gérai D., 1977; Benveniste Je. A., 1971; Ca-проненков П.M.. 1987; Морозов И.А. с соавт., 1988; Уголев A.M., 1991; Гребнев А.Л. с соавт., 1977; Григорьев П. Я. с соавт., 1996).

Иммунологические исследования животных из экологически неблагоприятного региона позволяют отметить снижение неспецифических факторов защиты. Так, содержание комплемента в сыворотке крови в 1,3 раза ниже, чем у животных из чистого региона с максимальным показателем 40,2 (СШо). Отмечено понижение титра ли-зоиима в сыворотке крови до 7,2+1,3 мкг/мл, понижена бактерицидная активность сыворотки крови в отношении Е.соН. В 1,3 раза понижен показатель активности фагоцитов, который равен М+щ 36,6+3,1, интенсивность фагоцитоза также понижена в 1,6 раза, где средний показатель фагоцитирующего числа равен 2,4+0,8 клеток. Отмечена нейтропения, обращает внимание сдвиг лейкограммы влево, чему свидетельство увеличение палочко-ядерных нейтрофилов, установлен лимфоцитоз, Е-РОН клеток в 1,6 раз меньше , Индекс напряженности у животных из промышленного "узла" составляет 2,4+0,08, что в 1,6 раза превышает показатель у овец из условно чистого региона, что в комплексе с другими показателями свидетельствует о снижении сопротивляемости организма животного. Следовательно, длительное воздействие экзогенными химическими токсикогенами способствует хронизации процесса. Кроме того, отмечено увеличение эозинофилов в 1,2 раза, на долю которых приходится 8,4+0,9%, итмечены нарушения в микроэкологии кишечника, которые проявляются в уменьшении типичных эшерихий и увеличении в 2,6 раза кишечных палочек с низкой антагонистической активностью , в 5 раз увеличилось количество штаммов с наличием эндотоксина с достоверностью (Р<0,01), увеличение культур с атипичными культурально-биохимическими свойствами.

Таким образом, воздействие неблагоприятных факторов окружающей среды способствует ослаблению неспецифических факторов защиты, понижению антагонистической активности кишечника, увеличению штаммов с наличием эндотоксина и условно-патогенной флоры. Начиная с первых дней премирования фенолосодержа-щими соединениями выявлены сдвиги в микробном ценозе как в толстом, так и в тонком отделах кишечника.Установлено уменьшение абсолютного и относительного количества типичных эшерихий, увеличение слабоферментирующих и нефермети-рующих лактозу, увеличение микроорганизмов со свойствами патогенности, ати~ личных эшерихий, кишечных палочек с низкой антагонистической активностью, увеличение условно-патогенной флоры за пределы кишечного нормобиоза. Выявлены дисбиотические явления и дисбактериозы, которые в процессе длительного введения фенолосодержащих соединений переходят с латентной фазы в локальный период. Глубина сдвигов е сторону патологии в микроэкологии кишечника находится в

прямой зависимости от концентрации экзогенного химического токсикогена, кратности и длительности воздействия.

Следовательно, химический реагент, попав извне, является внешним факторов, приводящим к нарушению экосистемы желудочно-кишечного тракта в результате раздражающего и повреждающего действия, способствует развитию воспалительного процесса, что вызывает иммуноглобулинемию Е, в результате сенсибилизации рецепторов продуктами воспалительного процесса. Аппликация слизистой феноло-содержащими соединениями через амино- и сульфгидрильные группы (способствует его соединению с крупномолекулярными веществами), образует комлексный антиген с белком, который как конъюгированный антиген способствует выработке ^Е. Нарушение продукции 51£А ведет к компенсаторному повышению ^Е, что, в свою очередь, способствует проницаемости стенки кишечника. Установлено, что экскреция SIgA, 1ёО с фекалиями осуществляется при увеличении количества условно-патогенной флоры. Так, 1еА в 47,6% пробах выявлен от 1,05+0,03* 10'2 мг/г. до 2,4+0,05*10 2 мг/ г, а 1«С до >5,17 * 102 мг/.г в 28,5% пробах. Следовательно, нарушение в физиологическом равновесии микробных популяции кишечника приводит к нарушению секреции и способствует экскреции иммунных белков пищеварительного тракта из организма животного.

Результаты исследования гуморальных факторов неспецифической защиты позволяют констатировать, что активация иммунных реакций начинается с первых дней премирования фенолосодержащей смесью, но четче проявляется на 50 день введения химического реагента, отмечено повышение и адгезивной активности, чему свидетельствует значение индекса иммунной нагрузки 2,8+0,9 - 4,2+0,08 -3,6+0,07. Кроме того, с увеличением условно-патогенной флоры повышается секреция и концентрация иммуноглобулина класса А. Однако, длительное введение фе-нолосодержащих соединений приводит к снижению резистентности организма животного, что выражается в снижении показателей уровня комплемента в 1,5 раза, в 1,4 раза лизоиимной активности, в 2 раза ИН.

Таким образом, длительное воздействие неблагоприятных факторов окружающей среды ведет к снижению напряженности иммунитета, сопровождающееся нарушениями в его функционировании и серьезностью риска в возникновении патологических состояний.

Комплексное, динамическое изучение иммунобиологического статуса и естественной резистентности животных экспериментально зараженных личинками стронгилят на фоне токсикогенов позволяют отметить, что химические токсикогены

создают благоприятные предпосылки для бурного развития гельминтозного процесса опосредованно через микрофлору кишечника хозяина паразита, что проявляется увеличением лактозонегативных, атипичных эшерихий, гемолизирующей флоры, протея, уменьшением лактозопозитивных эшерихий, снижением антагонистически активных штаммов, в свою очередь, ассоциации условно-патогенных бактерий способствуют интенсивности инвазии. Недостаточность иммунобиологической системы, выражающаяся атипичной секреции иммунного белка А в комплексе со сдвигами в сторону патологии в микроэкологии кишечника вызывает нарушение локальной защиты организма от паразитарной инвазии. Максимальное количество паразитов обнаружено у животных, зараженных на фоне премировани фенолосодержа-щим соединением, в 1,7 раза больше, чем у животных зараженных на фоне нормо-биоза кишечника. При заражении на фоне экзогенного химического токсикогена отмечена нейтропения с уменьшением в 2,8 раз фагоцитирующих клеток. В свою очередь, паразитирование гельминтов усугубляет имевшиеся уже нарушения в микроэкологии кишечника, проявляющееся в увеличении абсолютного и относительного количества слабоферментирующих, лактозоотрицательных эшерихий, антагонистически неактивных и малоактивных штаммов, атипичных кишечных палочек, культур с наличием глюцидо-липидо-протеиновым комплексом, ассоциаций условно-патогенных бактерий, что приводит к формированию паразитоценоза с прочными синергитическими взаимосвязями, паразит-симбионты.

Анализируя данные исследования, неспецифических и специфических факторов защиты, учитывая индекс напряженности, можно сделать вывод, что изменения в показателях работы отдельных звеньев иммунной системы носят не приспособительно-охранительный характер, а являются следствием нарушения адаптационно-компенсаторной функции организма, вызывая вторичные иммунодефицита.

Следовательно, разработка и усовершенствование патогенетических методов лечения паразитарных заболеваний у животных из экологически неблагоприятного региона является важной задачей паразитарной патологии. Это обусловлено тем, что специфическая этиотпропная терапия не всегда оказывает желаемый эффект в силу стойких взаимоотношений паразита и его симбионтов, а также выраженному имму-нсдефицитному состоянию животного. Антгельминтное лечение строится главным образом на патогенетической основе.

Своевременная санация желудочно-кишечного тракта высокоантагонистическими штаммами ЬЬ^егтепН и Ыхр1атагит для восстановления и сохранения физиологического баланса в микробном пейзаже кишечника препятствует формирова-

нию ларазитоцеяоза, лишая его сочленов оптимальных условий. А иммунокорреги-руюшая терапия иммунокомпроментированного животного способствует разблокировке всех популяций и субпопуляций Т-лимфоцитов и фагоцитов. В результате со-четанной работы всех звеньев иммунной системы восстанавливается локальный иммунитет, что способствует противопаразитарной защите. Доказательством тому является экспериментальное заражение животных с предварительно иммунобиологической коррекцией, в результате чего выявлены инвазии с низкой и средней степенью интенсивности, с наименьшим количеством паразита на одну особь, без глубоких изменений в аутохтонной микрофлоре, без напряжения в иммунной системе.

Применный метод лечения при кишечных нематодозах, включающий биологическую, иммунологическую коррекцию и специфический антгельминтный препарат, способствует сохранению и восстановлению микроэкологии кишечника, нормализации и координированной работе всех звеньев иммунной системы, снижению экстенсивности и интенсивности инвазии, высокой эффективности дегельминтизации от 96+1,3 до 100%. Способ физиологичен, прост в исполнении, приемлем в любых условиях, экономически не требует больших затрат.

ВЫВОДЫ

1. На основании изучения влияния среды обитания на иммунобиологический статус условно-здоровых животных в разные сезоны года установлено, что функционирование местного или локального иммунитета подвергнуты сезонным биоритмическим колебаниям:

- выявлено влияние сезонного фактора на микроэкологию кишечника с более выраженными изменениями в осенний период;

- величина связанности компонентов иммунной системы по индексу напряженности составляет 1,5 +0,05. Сдвиги иммунобиологических показателях носят приспособительно-охранительный характер;

- слабый иммунный ответ на выработку гомоцитотропных антител у условно- здоровых овец связан не с особенностями механизма синтеза ^Е, а с эффективной супрес-сорной функцией Т-лимфоцитов. Элиминация Т-супрессоров повышает образование гомоцитотропных антител.

2. Концентрация иммунных белков в пищеварительном тракте у условно-здоровых овец составляет в содержимом протока поджелудочной железы - Б^А-4,87 +1.46; 1йО-10,2 ± 3,07; 1<'М-2,55хЮК желчного пузыря - 15,9 ± 2.4 - 26,1 + 2,7 - 12,8 + 1,9x10; двенадцатиперстной кишки- 14.6 + 2,3 - 15,9 + 2.4 - 11.6 + 2.1. средней трети тонкого

кишечника - 8,9 + 3,1 - 14,7 ± 1,7х10"2 соответственно и ^Е - в копрофильтрате- 77,5 МЕ /мл.

3. Установлено, что пребывание животных в экологически неблагоприятных зонах способствует возникновению вторичных иммунодефицитов, сопровождающихся супрессией системы иммунитета, понижением концентрации А до 3,1 х 10 г г/л(М ±ш -6,12 х Ю-2 г/л) в тонком отделе кишечника, несмотря на мощную антигенную стимуляцию.

4. Установлено снижение неспецифических гуморальных факторов защиты у овец из экологически неблагоприятного района по показателям комплементарной активности до 33,1 ± 3,2 ( СН5о), титру лизоцима до 7,2 + 1,3 мкг/мл, БАС - до 46,2 +_3,1 %, активности фагоцитов до 36,6 ±3,1, интенсивности фагоцитоза до 2,4 + 0,8.

5. Понижение иммунобиологической реактивности животных из экологически неблагоприятного района сопровождаются нейтропенией со сдвигом лейкограммы влево и уменьшением Е-РОН клеток в 2,6 раза, увеличением индекса напряженности в 1,6 раз (до 2,4 + 0,07), увеличением штаммов со слабой и низкой антагонистической активностью в 2,6 раз; с коли- индексом 50 и менее до 11,8 % неактивных - 26,4 , с коли-индексом 774,6 + 61,3, что в 2,6 раза превышает показатель животных из условно -чистого района; в пятикратном увеличением культур с наличием эндотоксина, атипичных штаммов Е.соН до 31,3 + 8,4 %, увеличением гемолизирующих штаммов до 2,9 + 0,3х10-5 млрд.м.т.т / г, колонизацией протеем до 4,8 +0,9 х 10 5 млрд.м.т./г.

6. Установлено, что фенолосодержащие соединения вызывают иммунодефициты, которые стимулируют выработку гомоцитотропных антител у овец и мышей. Аппликация слизистой кишечника фенолосодержащим соединением способствует воспалительному процессу, где через амино- и сульфгидрильные группы создаются предпосылки его соединения с крупномолекулярными веществами, образуя коньюгированный аллерген (комплексный антиген с белком ), обладающий иммунотоксичностью:

- выраженная иммуноглобулинемия класса Аи Е в кишечнике животных носит компенсаторный характер, увеличение секреции секреторного глобулина Б^А вызывает уменьшение выработки ^ Е и наоборот;

- в острый период интоксикации у овец, в результате воздействия фенолосодержа-щими соединениями до 60 суток отмечена незавершенность иммунной реакции с ее аллергическим компонентом, свидетельством чему является динамическое увеличение ^Е в начальном периоде воздействия фенолосодержащими соединениями, стабильностью в последующие дни с повышением количества эозинофилов до 0,72 х 109/л;

- сдвиги в сторону патологии в микроэкологии кишечника С увеличением абсолютного и относительного количества ассоциаций условно - патогенной флоры, штаммов с наличием эндотоксина , понижением антагонистической активности кишечника;

- активация ( до 60 суток премирования фенолосодержащими соединениями ) специфических и неспецифических факторов гуморальной защиты организма.

7. Степень нарушения иммунобиологической реактивности организма зависит от дозы и длительности воздействия фенолосодержащими соединениями. Концентрация в пределах 10 ПДК при длительном воздействии фенолосодержащими соединениями в течении 50 суток и более, способствует переходу адаптационно - компенсаторной работы органов и систем в стадию декомпенсации:

- переход дисбиотических явлений в микрофлоре кишечника в стадию локального дисбактериоза;

- аномальная выработка А в ответ на мощную антигенную стимуляцию;

- экскреция 51цА и ^ О с фекалиями вследствие нарушения физиологического равновесия в микробных популяциях кишечника;

- угнетение фагоцитарной активности нейтрофилов, нарастание напряженности иммунитета до 4,1 +0,07.

8. На фоне воздействия фенолосодержащих соединений создаются предпосылки для повышения интенсивности и экстенсивности паразитарных инвазий;

- разрушение экосистемы вследствие колонизации кишечника животных условно-патогенными бактериями - симбионтами паразитов, понижение антагонистической активности кишечника;

- понижение локальной противопаразитарной защиты за счет уменьшения выработки SígA и понижения концентрации гомоцитотропных антител;

- заражение на фоне воздействия фенолосодержащими соединениями способствуют ускоренному развитию нематод.

9. Высокоантагониетическ-ие штаммы ИхТегшеШ!, ЬЬ.р!ап:агит сохраняют и восстанавливают экологию кишечника, лишая его сочленов оптимальных условий, способствуют понижению интенсивности и экстенсивности инвазии.

10. Бактерицидной активностью по отношению лактозоположительных эшерихий обладают антгельминтные препараты, производные тиазолов, и продуценты актиноми-цет. Наименьшая бактерицидная активность установлена у нилверма.

11. Установлено, что у животных из экологически неблагоприятного района эффективны в период хронического течения, энтеральная пассивная иммунизация , а так же профилактика и лечение паразитарных заболеваний.

12. Установлена высокая приживаемость лактобактерий в кишечнике животных при комплексном их введении с нилвермом.

13. Комплексная антигельминтная терапия со специфическим препаратом из лактобактерий эффективна как в острый период, так и в хронический процессы.

14. Установлено, что введение в организм животного активированных аутолейко-цитов способствует понижению экстенсивности и интенсивности инвазии за счет повышения локального иммунитета по средствам разблокировки всех популяций Т- лимфоцитов и фагоцитов.

15. Установлена экстенсивность инвазии стронгилятозами у животных из экологически неблагоприятного района - 93,4 + 2,4 % и из условно - чистого -87,7 + 4,5 %.

16. Разработаны принципы лечения паразитоценозов у животных из экологически неблагоприятных районов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработаны следующие нормативно-технические документы:

1. Рекомендации по применению имуностимуляторов для профилактики гель-минтозов и повышения резистентности животных. Утверждены Отделением ветеринарной медицины ВАСХНИЛ 28 августа 1990г.

2. Иммунокоррегирующая терапия паразитарных заболеваний животных из экологически неблагоприятных регионов (рекомендации). Утверждены Отделением ветеринарной медицины ВАСХНИЛ 30 января 1990г.

3. Пробиотические препараты, их влияние на локальную защиту животных из экологически неблагоприятных регионов (рекомендации). Утверждены Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 17 июня 1995 г.

4. Иммунодефкцитные состояния животных из экологически неблагоприятных регионов и их коррекция пробиотиками и активированными аутолейкоцитами (рекомендации). Утверждены Департаментом ветеринарии 20 мая 1996 г.

5. Методические рекомендации по определению бактерицидной активности ан-тигельминтных препаратов. Утверждены Отделением ветеринарной медициной РАСХН (1997г. ).

6. Комплексная коррегирующая терапия паразитарных заболеваний при острых и хронических интоксикациях, вызванных экзогенным химическим токсикогеном (рекомендации). Утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН (1997г.).

7. Результаты исследований в форме методических указаний используются в учебном процессе при подготовке ветеринарных врачей биологов и микробиологов:

- Экологические системы, их взаимосвязь и взаимозависимость ( Уфа, 1994г.);

- Локальная защита животных при воздействии экзогенных токсикогенов ( Уфа, 1995г.);

- Влияние неблагоприятных факторов окружающей среды на иммунобиологическую реактивность организма (Уфа, 1996г.);

-Локальный иммунитет животных и окружающая среда (Уфа, 1996г. ).

8. Разработанные методы борьбы паразитарных заболеваний используются в ряде районов Башкортостана (акты прилагаются).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Аюпов Х.В., Янгуразова З.А. Влияние микроценоза кишечника хозяина паразита на течение гельминтозного процесса. С.б. тезисов IX Конференции Украинского паразитологического обшества.Киев "Наукова Думка", 1980 г., часть 1,с. 45-46.

2. Аюпов Х.В., Янгуразова З.А. Влияние отдельных представителей нематод и антигельминтиков на кишечную микрофлору животных. С.б. повышение эффективности сельскохозяйственного производства Башкирии в условиях его индустриализации. Уфа, 1980 г., с. 93-95.

3. Янгуразова З.А., Поляков В.Н. Загафуранова Ф.Ф., Хазиев Г.З., Млис А.У.. Способ отбора желчно-подаселудочно-дуоденального секрета. Официальный бюллетень государственного комитета по изобретениям и открытиям при ПСН СССР, 1989 г., № 43, с. 24.

4. Янгуразова ЗА.,Поляков В.Н, Загафуранова Ф.Ф.,Хазиев Г.З.,Млис А.У.Фистульная трубка. Официальный бюллетень Государственного комитета по изобретению и открытиям при ГКН СССР 1989 г., № 43, с.24.

5. Янгузарова З.А. Деградация иммуноглобулинов в кишечнике овец при стронгилятозах. С.б. Всесоюзной научно-технической конференции "Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в ветеринарной мецицине".М., 1990 г.. с. 143-144.

6. Янгузарова З.А. Патогенетическая иммуномодуляция как профилактика и лечение кишечных стронгилятозов овец в экологически неблагоприятных реионах. С.б. Всесоюзной научно-технической конференции " Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в ветеринарной медицине". М., 1990 г., с. 144-145.

7. Jangurazova Z.A. L'excretion des immunoglobulines de l'nteatin des anímaux lous strongylatosae des matons. De la societe frangaise de parasito!ogie.(VII Congr.parasitol.) Paris,1990, r.2, p.827.

8. Jangurazova Z.A. La marche des invasions interstinales de nemathodosae au cours de l'msuffisance dimunite secondaire et sa correction.De la societe frangaise de parasitología. París, 1990, r.2, p.460.

9. Jangurazova Z.A. Le role des immunoglobulines secretoires dans la prophylaxe de la strongylatosae digestív des animaux. De la societe frangaise de parasitologie. Paré, 1990,r.l,p. 527.

10. Янгуразова З.А. Влияние отдельных нематодозов на иммуноглобулины пищеварительных секретов и их взаимосвязь с микрофлорой кишечника. Сб.: Диагностика, профилактика и меры борьбы с инфекционными и инвазионными болезнями сельскохозяйственных животных и птиц на северном Кавказе. Новочеркасск, 1990 г., с. 131-134.

! 1. Янгуразова З.А. Санация желудочно-кишечного тракта с пассивной иммунизацией, как метод профилактики кишечных гельминтозов. Сб: Диагностика, профилактика и меры борьбы с инфекционными и инвазионными болезнямн сельскохозяйственных животных и птиц на Северном Кавказе. Новочеркасск, 1990 г., с. 134-136.

12. Даугалиева Э.Х.,Янгуразова З.А. и др. Применение иммуностимуляторов для профилактики гельминтозов и повышения резистентности животных.

^рекомендации). М., 1990г.

13. Янгуразова З.А. Иммунокоррегирующая терапия паразитарных заболеваний животных в экологически неблагоприятных регионах, i ^"рекомендации). М., 1991 г.

14. Янгуразова З.А. Экологические системы, их взаимосвязь и взаимозависимость. Уфа, 1994 г.

15. Янгуразова З.А. Локальная защита животных при воздействии экзогенных токсикогенов. Уфа, 1995 г.

16. Янгуразова З.А. Влияние неблагоприятных факторов окружающей среды на иммунобиологическую реактивность организма. Уфа, 1996 г.

17. Янгуразова З.А. Локальный иммунитет животных и окружающая Среда. Уфа, 1996 г.

18. Янгуразова З.А..Панин А.Н., Серых Н.И. Пробиотические препараты, их влияние на локальную защиту животных из экологически неблагоприятных регионов. ^рекомендации^М., 1995, 8 с.

19. Я]нгуразоьа 3.А,,Панин А.Н., Серых Н.И. Иммунодефицитные состояния животных из экологически неблагополучных регионов и их коррекция пробиотика-ми и активированными аутолейкоцитами. Рекомендации, М., 1996, 8 с.

20. Янгуразова З.А. Отдельные показатели иммунокомпетентных клеток и секреторных белков при строгилятозах овец премированных фенолосодержащими соединениями. М., 1997 г.

21. Янгуразова З.А. Санация кишечника и иммунокоррекция как профилактика стронгилятозов овец, зараженных на фоне воздействия фенолосодержащими соединениями. М., 1997 г.

22. Янгуразова З.А. Пассивная энтеральная иммунизация овец из экологически неблагоприятного района. М., 1997 г.

23. Янгуразова З.А. Иммунобиологическая резистентность животных из экологически неблагоприятных районов Башкирии. Тезисы докладов Международного совещания "Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных", Воронеж, 1997 г.

24. Янгуразова З.А. Влияние фенолосодержащих соединений на течение паразитарного процесса, вызванного Siphacia obvelate. Тезисы докладов Международного совещания "Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии.'' Воронеж. 1997 г.

25. Янгуразова З.А. Комплексная коррегирующая терапия паразитарных заболеваний при острых и хронических интоксикаций, вызванных экзогенным химическим токсикогеном. . (рекомендации). М., 1997 г.

26. Янгуразова З.А. Методические рекомендации по определению бактерицидной активности антигельминтных препаратов. .М., 1997 г.

27. Янгуразова З.А. Отдельные показатели иммунокомпетентных клеток и секреторных белков овец премированных фенолосодержащими соединениями. Сб.тез. "Ветеринарные и зооинженерные проблемы животноводства и научно-методическое обеспечение учебного процесса", Витебск, 1997 г.

28. Янгуразова З.А. Секреция, экскреция секреторных иммунных белков кишечника при нематодозных инвазиях. Сб.тез."Ветеринарные и зооинженерные проблемы животноводства и научно-методическое обеспечение учебного процесса", Витебск. 1997 г.