Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Характеристика микрофлоры и патоморфологические изменения молочной железы при маститах у свиноматок

На правах рукописи

СЕМЕНОВ АНАТОЛИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ

ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОФЛОРЫ И ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ МАСТИТАХ У СВИНОМАТОК

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

степени кандидата ветеринарных наук

»2292«

Омск 2004

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии Института ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук

профессор В.И. Плешакова

Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор Н.М. Колычев

доктор биологических наук, профессор Т.Н. Сидоров

доктор ветеринарных наук, профессор Л.И. Дроздова

Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РОССХ

Зашита диссертации состоится 20 декабря 2004 года в 1000 часов на заседании диссертационного совета Д 220.050.03 при ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет» в Институте ветеринарной медицины ОмГАУ по адресу:

644122, г. Омск- 122, ул. Октябрьская, 92, тел./факс 24-15-35,25-05-49

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Омского государственного аграрного университета

Автореферат разослан 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат ветеринарных наук, доцент ^Ц-я}ЖабинН.П.

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Свинина занимает первое место в объеме мирового производства мяса. Свиноводство является одной из наиболее высокоэффективных и рентабельных отраслей животноводства, успешное развитие которой зависит от получения жизнеспособного приплода и здорового молодняка (Кононов В.Н., 2000).

Перевод свиноводства на промышленную технологию резко изменил условия содержания животных, а воздействие разнообразных неблагоприятных факторов привело к снижению резистентности и увеличению числа послеродовых болезней свиноматок, среди которых значительное место занимает мастит (Селиванов А.В., Ивановский Э.В., Борисевич Ю.Ф., 1984). Вследствие мастита у свиноматок снижается или полностью прекращается секреция молока, ухудшается качество единственного и незаменимого источника питания поросят в первые дни жизни - молозива. Это приводит к высокой заболеваемости новорожденных поросят диспепсией и гибели приплода (до 80%). Мастит является одной из основных причин выбраковки свиноматок и достигет 25% от общего числа случаев (Спиридонов B.C., 1978; Черкасова А.В., Данилко Л.М., Понамарева М.И., Гладун Н.П., 1978: Мисайлов В.Д.. Шахов А.Г.. Лесных В.И., 1985: Мисайлов В.Д., Коновалов Н.Н., Сотников А.В., 1994: Шахов AT., 2001; Bertschinger H.U., Burgi E., Eng V., Wegmann P., 1990).

Одним из ведущих этиологических факторов в возникновении маститов принято считать контаминацию молочной железы условно-патогенной микрофлорой. Серьезную проблему представляют ассоциации условно-патогенной микрофлоры, где этиологическую основу составляют несколько видов возбудителей (Вербитский П.И., 1995; Шахов А.Г., 2001).

При гнойно-воспалительном процессе, обусловленном условно-патогенной микрофлорой, в молочной железе свиноматок происходят необратимые изменения, причем одни и те же виды возбудителей могут вызывать различные формы мастита (Черкасова А.В.. Пономарева М.И., 1965).

До настоящего времени нет единого мнения о том, какие условно-патогенные микроорганизмы играют ведущую роль в патологии молочной железы у свиноматок. Недостаточно данных о роли ассоциаций микроорганизмов в развитии послеродовых осложнений и влиянии этой микрофлоры на функцию молочной железы свиноматок.

Все вышеизложенное послужило основанием для выбора темы научно-исследовательской работы, определения цели и задач исследования.

Диссертационная работа является самостоятельным разделом комплексной темы кафедры

БНБЛИОТЕКА I

4 ¿п&т

ИВМ ОмГАУ «Разработка методов и средств диагностики, профилактики и лечения инфекции мочеполовой системы и молочной железы у свиней» (№ гос. регистрации 01.2.00100603).

Цель исследования - определить видовой состав и основные биологические свойства микроорганизмов, выделенных от свиноматок при послеродовых маститах, а так же патоморфологические изменения в молочной железе.

Задачи исследования:

1. Установить распространение маститов в послеродовой период среди свиноматок в хозяйствах Омской. Тюменской и Томской областей:

2. Определить видовой состав и биологические свойства выделенных культур микроорганизмов;

3. Определить устойчивость выделенных культур к ряду химио-терапевтических препаратов;

4. Установить патоморфологические изменения в тканях молочной железы у свиноматок при маститах;

5. Разработать методы диагностики послеродовых маститой у свиноматок.

Научная новизна. Установлено, что послеродовые маститы свиноматок имеют широкое распространение. В хозяйствах Омской, Тюменской и Томской областей количество свиноматок заболевших маститом после опороса варьирует от 3,4% до 86,9% животных. Результаты исследований расширяют и дополняют сведения о видовом составе микрофлоры молочной железы свиноматки. Так, наиболее часто при мастите свиноматок выделяются S.aureus (28,1%) и E.coli (15,3%). в удельном весе ассоциативной микрофлоры преобладают Staphylococcus и Streptococcus (35.7%). Гнойно-катаральный, серозный, геморрагический и фибринозный воспалительные процессы в молочной железе свиноматок чаще обусловлены ассоциациями Staphylococcus + Streptococcus, абсцедируюший мастит - ассоциациями, включающими микроорганизмы - E.coli, P.vulgaris и Ps. aeruginosa.

Проведенные патоморфологические исследования молочной железы свиноматок показали, что преобладают хронически протекающие, смешанные формы мастита, характеризующиеся гнойно-катаральным и ката-рально-геморрагическим воспалением.

Т^р?™"»?«« и "рятгнческая значимость работы.

Результаты исследований положены в основу методических рекомендаций «Диагностика маститов бактериальной природы у свиноматок» (утверждены ГУСХ адм. Омской области 26.06.03, пр. № 5).

Основные материалы диссертационной работы используются в учебном процессе Ижевской государственной сельскохозяйственной академии: Уральской государственной академии ветеринарной медицины:

Томского государственного сельскохозяйственного университета: Санкт Петербургской Государственной Академии ветеринарной медицины

Материал, изложенный в диссертации, может быть использован при составлении соответствующих разделов учебников и руководств по микробиологии для студентов ветеринарных специальностей, а так же для практической работы специалистов районных и областных ветеринарных лабораторий.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных условиях» (Барнаул, 2001); Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002); Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2003); Международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам агропромышленного комплекса (Казань. 2003); ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ОмГАУ (2002, 2003).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано шесть научных статей.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 15 таблицами. 37 рисунками. Список литературы включает 191 источник, из них 34 зарубежных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Характеристика микрофлоры при маститах свиноматок в послеродовой период.

2. Устойчивость выделенных микроорганизмов к химио-терапевтическим препаратам.

3. Патоморфологические изменения в молочной железе свиноматок при маститах.

4. Диагностика послеродовых маститов свиноматок обусловленных ассоциациями микроорганизмов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал и методы

Работа выполнена в 2001-2004 гг. на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии Института ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета в рамках НИР «Разработка методов и средств диагностики, профилактики и лечения бактериальных инфекций мочеполовой системы и маститов свиноматок (№ гос. регистрации 01.2.00100603).

Первичный материал для микробиологического исследования был получен от свиноматок пород ландрас и крупная белая с клиническими признаками мастита в хозяйствах Омской, Тюменской и Томской областей.

Для прижизненного бактериологического исследования молочный секрет сдаивали в стерильные пробирки, после предварительного обмывания пакета железы теплой водой и обработки 70% раствором этилового спирта.

Культуральные свойства микроорганизмов изучали на обычных и специальных питательных средах, учитывая скорость и характер роста, форму, размер, края колоний, рельеф, поверхность, структуру колоний, прозрачность и блеск. Консистенцию и пигментообразование определяли на плотных средах. В жидких питательных средах определяли наличие или отсутствие поверхностной пленки и пристеночного кольца, прозрачность среды, образование осадка и его характер.

Морфологические и тинкториальные свойства выделенных микроорганизмов изучали в мазках-препаратах, окрашенных по Граму, Цилю-Нильсену, Шефферу-Фултону, Ольту. Подвижность микроорганизмов определяли в препаратах «висячая капля». Наличие цитоплазматических включений выявляли окраской мазков-препаратов по методу Нейссера. Измерение микробных клеток проводили в мазках, окрашенных по Граму. с помощью светового микроскопа фирмы «Jenaval» и микрометра окулярного винтового (МОВ-1).

В зависимости от морфологических и культуральных свойств выделенные культуры пересевали на элективные среды: Эндо, Сабуро, ЖСА. КБА, МПБ с содержанием 6.5% NaCl. Для идентификации выделенных культур микроорганизмов использовали биохимические методы.

Ферментативную активность определяли путем посева культур в полужидкие углеводные среды Хью-Лейфсона с индикатором Андреде.

По результатам микроскопического, бактериологического и биохимического исследований делали заключение о родовой и видовой принадлежности выделенных микроорганизмов, используя «Определитель бакте-

рий Берджи» (1997) и «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» (Сидоров М. А. и др.. 1995).

Резистентность выделенных культур микроорганизмов к химиотера-певтическим средствам изучали дискодиффузионным методом.

Патогенность выделенных культур микроорганизмов изучали постановкой биологической пробы на белых мышах. Для эксперимента было сформировано семь групп, по шесть животных в каждой. Животных заражали внутрибрюшинно. взвесью односуточных агаровых культур, в дозе 1,0х109 и 1,5ХЮ9 м.т., в объеме 1 мл. Животным контрольной группы вводили внутрибрюшинно физиологический раствор в том же объеме. Определение LDso/^ проводили по методу Рида-Менча в модификации Троицкого В.Л.( 1950).

Для гематологических исследований брали кровь у здоровых (n=10) и с клиническими признаками мастита (n=10) свиноматок после опороса. Исследования проводили по общепринятым методикам.

Для цитологического исследования молочного секрета использовали окраску мазков-препаратов азур-эозином по Романовскому-Гимзе, с фиксацией в 0,25% растворе метилового спирта.

Материал для гистологического и гистохимического исследований фиксировали в 12%-ном растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа. Обезвоживание проводили в спиртах возрастающей концентрации. Уплотнение и заливку тканей проводили, с использованием парафина. Срезы толщиной 7-8 мкм изготавливали на санном микротоме марки МС-2. Морфологические исследования проводили на срезах, окрашенных гематоксилином-эозином, коллагеновые волокна выявляли окраской по Маллори (Меркулов ГА. 1961). С целью дифференциальной характеристики углеводов использовали ШИК-реакцию по Шабадашу (1947). реакцию с альциановым синим - по Стидмену (Э. Пирс. 1962), основным коричневым - по Шубичу (1961).

Статистическую обработку полученного цифрового материала проводили на ПК с помощью программы Microsoft Excel 98.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Распространение и некоторые клинические аспекты проявления маститов у свиноматок в хозяйствах Омской, Тюменской и Томской областей.

В результате проведенных исследований нами установлено, что количество свиноматок, с клиническими признаками мастита в послеродовой, в хозяйствах разных районов варьирует. Так, максимальное количество заболевших было в ЗАО "Цветнополье", Азовского района - 86.95%

животных, а минимальное - в ЗАО "Племзавод-Юбилейный". (г. Ишим) -3.74%. Заболеваемость свиноматок клинически выраженным маститом составила 21.5 на 100 животных (табл. 1).

При клиническом исследовании 862 свиноматок, было выявлено 186 больных маститом. У 29 (15.59%) животных мастит классифицирован как серозный, у 98 (52.68%) - катарально-гнойный. у 46 (24.73%) -абсцедирующий. у девяти (4.8%) - геморрагический, и у четырех (2.15%) —фибринозный.

Таблица1

Результаты клинического исследования свиноматок после опроса

Количество Выявлено с клиниче-

Наименование хозяйств исследованных скими признаками

животных мастита

ЗАО "Племзавод-Юбилейный" 455

ОПХ "Новоуральское" 20 6

ЗАО"ОША" 48 14

ЗАСК "Измайловское" 21 5

АПФ"Омь" 61 21

ЗАСХО "Племзавод Северо- 9 5

Любинский"

УЧХОЗ "Харламове" 6 3

ЗАО "свинокомплекс Томский" 100 20

ЗАО "Цветнополье" 92 80

ЗАО "Новоазовское" 50 15

ВСЕГО 862 186

У свиноматок, больных маститом чаще воспалению подвержены задние брюшные пакеты (52,14% случаев). 32% случаев приходится на единичное поражение пакетов. Первая пара грудных пакетов молочной железы поражается в меньшей степени (2,15%) (рис. 1).

Свиноматки наиболее подвержены заболеванию маститом в возрасте от 2-х до 3-х лет - количество заболевших в этом возрасте составило 24,92 %. менее от 3-х до 4-х лет (15.41%), от 4-х лет и старше количество заболевших маститом возрастает и составляет 23,98%.

Цитологические исследования показали, что микроскопическая картина молочного секрета от здоровых свиноматок характеризуется умеренным количеством жировых шариков, преимущественно средних размеров, которые располагаются чаще скоплениями, особенно по краям мазка В молочном секрете, отмечали небольшое количество нейтрофильных лей-

коцитов (5 - 10), которые так же располагались скоплениями. Среднее количество лейкоцитов в поле зрения составляло 8.7±1,76, некоторые из них содержали жировые включения различного размера. У большинства лейкоцитов ядра находились в состоянии распада, в виде отдельных фрагментов.

У свиноматок, больных маститом, микроскопическая картина молочного секрета характеризовалась большим количеством, равномерно расположенных нейтрофильных лейкоцитов, (30-80 в поле зрения), в среднем 61,6±18,87 клеток в поле зрения. Лейкоциты имели различную структуру: они либо сохраняли присущие им морфологические признаки, либо представляли разрушающиеся клетки. Кроме того, в молочном секрете резко снижалось количество жировых шариков, до 3-5 в поле зрения.

Рисунок 1

Частота поражений молочных пакетов при мастите у свиноматок

Первая пфа Вторая пара Передние Средние брюшше Задние брючпюе грудных пакетов грудных пакетов брюшные пакеты пакета пакеты

□Одиночно IПарно 1 Всего

_I

В результате гематологического исследования периферической крови здоровых свиноматок после опороса, установлено небольшое снижение количества эритроцитов (5.91±0.123 10п/л). При этом содержание гемоглобина в крови составило 109.23±3,11 г/л. У свиноматок с клиническими

признаками мастита наблюдали значительное снижение количества эритроцитов (3.75±0,31 1012/л), а содержание гемоглобина уменьшалось до 62,84 ±5.67 г/л. СОЭ у всех больных животных была увеличена 25.6±1,51 мм/ч.

У здоровых, супоросных свиноматок количество эозинофилов составляло 2.1% 1,1. тогда как у животных с клинически выраженными признаками мастита этот показатель был значительно выше - 10.8% ±1,48.

Изменения лейкоцитарной формулы крови у свиноматок с признаками мастита, характеризовались увеличением количества палочкоядер-ных нейтрофилов до 6.42%±0,34, и незначительным изменением количества сегментоядерных - 43,4%±2,46, тогда как у здоровых животных количество сегментоядерных составляло - 42,7%±2.66. В крови больных свиноматок выявлен лейкоцитоз 20,45±1.16"109/л и снижение количества лимфоцитов до 44,14% ±0,63.

Содержание моноцитов в крови больных животных уменьшалось до 1,19%±0,307.

Таблица 2

Морфологические показатели крови здоровых и больных маститом

свиноматок

Видовой состав микрофлоры молочного секрета при мастите у свиноматок

Из 305 проб молочного секрета от 186 свиноматок больных маститом было изолировано 587 культур микроорганизмов. В микробном пейзаже преобладали ассоциации микроорганизмов - 519 культур из 587.

Изучение микрофлоры молочной железы выявило преобладание грамположительных микроорганизмов 72.23%. Из молочного секрета преимущественно выделяли S.aureus (54.09%). St.agalactiae (22.29%). St.pyogenes (18.03%). S.aureus выделяли как в ассоциациях (84.85%). так и в монокультуре (15.15%). Стрептококки изолировали в основном в ассоциациях и реже в монокультурах.

Грамотрицательная микрофлора была представлена в основном Kcoli (29,05%) и P.vulgaris (17,37%), которые чаще выделяли в ассоциациях (26,22% и 14,09% соответственно).

В удельном весе ассоциативной микрофлоры молочного секрета больных маститом свиноматок ассоциации Staphylococcus + Streptococcus составили 35,73%, Exoli + Proteus 6,55%. Staphylococcus + Е.coli 5.57%, Staphylococcus + Streptococcus + ß.coli 4,26%.

Таблица 3

Количественное соотношение культур микроорганизмов, выделенных при маститах у свиноматок

Микроорганизм Общее кол-во выделенных культур % от 305 проб Выделено

в монокультуре в ассоциациях

Кол-во % Кол-во %

S. aureus 165 54,09 25 15,15 140 84,85

S.epidermidis 46 15,08 - - 46 100

S.haemoHticus 48 15,73 5 10,41 43 89,59

S.hromogenes 1 0,32 1 100 - -

St.agalactiae 68 22,29 2 2,94 66 97,06

Stpyogenis 55 18,03 8 14,54 47 85,46

Stdysgalactiae 41 13,44 4 9,75 37 90,25

Rcoli 90 29,05 10 11,11 80 88,89

P. vulgaris 53 17,37 10 18,86 43 81,14

P. mirabilis 4 1,31 - - 4 100

Ps.aeruginosa 12 3,93 3 25 9 75

Kb. pneumoniae 4 1.31 - - 4 100

Анализ полученных данные свидетельствуют, о том что в молочной железе серозный, гнойно-катаральный, геморрагический и фибринозный воспалительные процессы обусловлены ассоциациями грамположительной кокковой

микрофлоры, при абсцедирующем мастите в ассоциациях преобладает грамот -рицательная микрофлора, в частности E.coli и Proteus.

У животных с гнойно-катаральным маститом было выделено 79 ассоциаций Staphylococcus + Streptococcus, восемь — Staphylococcus - Streptococcus + E.coh, шесть ассоциаций Staphylococcus + Streptococcus + Proteus, Streptococcus + E.coli и Staphylococcus + Staphylococcus, пять - Staphylococcus + E.coli, четыре - E.coli + Proteus, в единичных случаях было выделено еще десять различных ассоциаций. При абсцедирующем мастите наиболее часто изолировали Staphylococcus + E.coh (14), E.coli + Proteus (13), Staphylococcus т E.coli + Proteus (8), по четыре ассоциации - Staphylococcus + Streptococcus + E.coli, Streptococcus + E.coh и Staphylococcus + Streptococcus + Pseudomonas. При серозном мастите было выделено всего 18 ассоциаций, из них десять Staphylococcus + Streptococcus, пять Staphylococcus + Pseudomonas. Геморрагическая и фибринозная формы мастита в 90% случаев характеризовались наличием в молочном секрете ассоциации Staphylococcus + Streptococcus.

Таблица 4

Ассоциации микроорганизмов выделенных при различных формах мастита у свиноматок

Выделено культу р (форма мастита) [

Ассоциации Общее количество Серозный 1 ! i : ж I , I ° 5 i 1 S S , о 2 5 £ { * ■X X а | f 1 ä Геморрагический 1 ж 3 = 3 1 ю J j

Staphylococcus-rStreptococcus 109 10 ! 79 •ч 3 13 4 t

Staphylococcus+Streptococcus+E coli 13 - ■ 8 4 1 1 1

E.coh+Proteus 17 - 4 13 _

Staphylococcus+ Proteus 3 3 _ i

Staphylococcus* E.coh 20 - 5 14 - i I

Staphylococcus+E.coh+ Proteus И - з 8

Staphylococcus+Streptococcus+ Proteus 7 I ' 6

Streptococcus+ E.coh 10 - 6 4 - ! - 1

Staphylococcus^ Pseudomonas 5 5 - ! - 1

Staphylococcus+Streptococcus+Pseudomonas 4 - - 4 - i - 1

Streptococcus+■ Klebstella 4 - 3 1 * ! " t

Staphylococcus~Streptococcus+E coli- Prteus 1 „ - 1 . 1 _ .

Staphylococcus+Streptococcus+Klebsiella I 1 - i - :

Staphylococcus-r Klebsiella 1 1 -

Staphylococcus ^Staphylococcus 6 6 - -i.i

Streptococcus* Proteus - 2 - - '

Патогенность выделенных культур микроорганизмов при экспериментальном заражении лабораторных животных

Для эксперимента были взяты шесть культур микроорганизмов, которые мы наиболее часто высевали при микробиологическом исследовании молочного секрета желез больных маститом свиноматок Staphylococ-cus aureus. Streptococcus agalactiae, E.coli. Proteus vulgaris. Pseudomonas aeruginosa. Klebsiella pneumoniae.

Результаты проведенных исследований показали, что для S.aureus LDso/ыл = 0.5: для St.agalactiae LDso/мл = 1.75: для E.coli LD50„j, = 1: для P. vulgaris LDjoxm = 2; для Ps.aeruginosa LDjo-w, = 1.25; для Kb. pneumonia LDso/мл = 1,75 x 109 м.т./мл

При патологоанатомическом вскрытии трупов мышей, зараженных культурой S.aureus, обнаруживали точечные кровоизлияния в подкожной клетчатке. увеличение селезенки и печени, острое расширение сердца. В селезенке, печени, легких, почках наблюдали множество мелких абсцессов.

У мышей, зараженных культурой St.agalactiae обнаруживали обезвоживание организма, кровоизлияния в подкожной клетчатке и на паренхиматозных органах, увеличение селезенки и дистрофию печени.

При вскрытии трупов мышей зараженных культурой E.coli.. обнаруживали кровоизлияния в подкожной клетчатке и кишечнике, увеличение печени и селезенки, острое расширение сердца, абсцесс в месте введения суспензии и в паренхиматозных органах (печень, легкие, селезенка, почки).

Кровоизлияния в подкожной клетчатке и кишечнике, наличие крови в брюшной полости, увеличение селезенки, единичные абсцессы в кишечнике и почках, отмечали при вскрытии трупов мышей зараженных культурой P.vulgaris.

У мышей зараженных культурой Ps.aeruginosa, при вскрытии обнаруживали кровоизлияния в подкожной клетчатке и на паренхиматозных органах. Селезенка и печень были увеличены, обнаруживали множественные абсцессы.

При вскрытии мышей, зараженных, культурой КЬ.рпеитота отмечали обезвоживание организма животного, кровоизлияния в подкожной клетчатке. В печени, легких и кишечнике обнаруживали единичные абсцессы. Так же, отмечали увеличение селезенки, расширение сердца и дистрофию печени.

Устойчивость микрофлоры к химиотерапевтическим препаратам

Для определения устойчивости микрофлоры секрета молочных желез, больных маститом свиноматок использовали химиотерапевтические препараты, наиболее часто применяемых в ветеринарной практике.

Результаты исследований свидетельствуют о том. что большинство выделенных культур микроорганизмов высокочувствительны к цефопера-зону и офлоксацину резистентны к оксацилину, линкомицину и эритромицину и слабочувствительны к пенициллину.

Таблица 5

Резистентность к некоторым химиотерапевтическим препаратам микрофлоры молочной железы выделенной в лактационный период у свиноматок больных маститом

П репараты

X X x X г X X X X а Я X о X

Микроорганизмы Ж о x я X x л 1 h & si s s я X s X —f 3 X ч ц X 5 X а. и> 3 О, ZS X s

с? s Л x x S ь н s о s s 3 о и S =г г; X •©< <и с о с.

О fc* i> £ и 1 о a <u s 1» X X X о CO и ü е; •е- X X V О а. н л с? -е о £ а

CO U - s; о о с U и О

Staphylococcus sp. + X + - + - - - + X X + + .

Streptococcus sp. X + + + + + - X + X + + + X

E-coli + X - + + - - - + - X + -

P. vulgaris X X - X X - - - + X - X + -

Ps. aeruginosa + - X - - - X - + X + + + -

Kb. pneumoniae X X X - + - - - + X - X + -

Применение: «+» - высокочувствительны более 90% культур, «-» - резистентны более 90% культур, «х» - чувствительны от 11-80% культур.

Патоморфологические и гистохимически изменения молочной железы при маститах у свиноматок

При гистологическом исследовании проб патологического материала от 16-ти свиноматок с поражением молочной железы гнойного характера, в двух случаях (16.7%) установлен хронический очаговый интерстициаль-ный гнойно-катаральный мастит, в шести (50%). хронический очаговый паренхиматозный гнойно-катаральный, в четырех (33,3%) хронический гнойно-катаральный, в трех случаях (75%) хронический очаговый инва-

лютивный гнойный мастит, и в одном случае (25%) абсцедирующий мастит. При гистологическом исследовании патологического материала от трех свиноматок с поражение молочной железы геморрагического характера, в 100% случаев классифицировалась нами как, катарально-геморрагический мастит

Мастит у свиноматок, в большинстве случаев, характеризуется поражением задних пакетов молочной железы и сопровождается их увеличением. При гнойно-катаральном воспалительном процессе характерно значительное уплотнение паренхиматозных тканей. Появление точечных и разлитых кровоизлияний, как в подкожных участках, так и в железистой ткани молочной железы регистрируется при катарально-геморрагическом мастите. Абсцедирующий мастит характеризуется формированием единичных и множественных абсцессов. Кроме того, при выявленных формах мастита, в молочных ходах и железистой ткани, обнаруживается экссудат, содержащий хлопья, а так же примеси гнойного и геморрагического характера. Экссудат серого цвета при гнойно-катаральном, красновато-желтого при катарально-геморрагическом и серо-зеленого при абсцеди-рующем мастите.

Гнойно-катаряльный воспалительный процесс протекает в паренхиматозной, соединительной, а так же одновременно в обеих тканях молочной железы, характеризуется деформацией, потерей структуры и отторжением альвеолярного эпителия. В некоторых участках активной пролиферацией эпителиальных клеток молочных ходов. Выраженным отеком кровеносных сосудов и инфильтрацией интерстициальной ткани. Скоплением в просвете альвеол и молочных ходов лимфоцитов, эозинофилов, сегмен-тоядерных лейкоцитов, слущенного эпителия и лактата. Кроме того, установление воспалительного процесса только интерстициальной ткани молочной железы косвенно свидетельствует о том, что возникновению мастита предшествовал эндометрит.

Для катарально-геморрагического мастита характерно скопление в просвете альвеол и молочных протоков геморрагического экссудата, в котором обнаруживаются перерожденные эпителиальные клетки, лимфоциты, полиморфноядерные лейкоциты и большое количество эритроцитов. В интерстициальной ткани наблюдается интенсивная гиперемия кровеносных сосудов, инфильтрация межальвеолярной соединительной ткани лимфоцитами, гистиоцитами и эритроцитами.

При абсцедирующем процессе в тканях молочной железы отмечается возникновение полостей с гнойным содержимым. В окружающих его тканях проходит активное формирование грануляционного вала с инфильтрацией гистиоцитами и нейтрофильными лейкоцитами. Так же, обнаруживаются участки тканей в виде зон полного расплавления с секвестрацией.

Кроме того, при выявленных формах мастита, в тканях молочной железы свиноматок, наблюдаются в различной степени, выраженные ин-волютивные процессы, характеризующиеся уменьшением количества альвеолярной ткани и замещением на жировую.

Гистохимические исследования пораженных тканей молочной железы пораженных маститом, показали, что в зависимости от выраженности воспялительного процесса в молочной железе усиливается и окрашивание ШИК-положительных образований. При этом характерную для гликопро-теидов окраску приобретает содержимое альвеол. Нами установлено, что при хроническом течении мастита, преобладают явления экссудации и пролиферации, содержимое альвеол с сохранившимся секреторным эпителием приобретает более интенсивную ШИК-реакцию. Преобладание деструктивных изменений паренхимы молочной железы и альвеол, сопровождается ослаблением интенсивности ШИК-реакции и утратой характерной окраски.

Полученные нами в результате исследований данные указывают, что преобладают хронически протекающие, смешанные формы мастита, характеризующиеся гнойно-катаральным, катарально-геморрагическим воспалением. Глубокие дегенеративные изменения сопровождающиеся инво-лютивными, пролиферативными и экссудативно-инфильтративными процессами наблюдаются при хроническом течении мастита.

ВЫВОДЫ

1. Маститы бактериальной этиологии широко распространение среди свиноматок в хозяйствах Западной Сибири и не имеют выраженной сезонности. Регистрируются в среднем у 21,57% опоросившихся свиноматок, преимущественно 2-3-х летнего возврата. Заболеваемость на 100 свиноматок составляет 21,5.

2. Маститы у свиноматок в послеродовой период характеризуются общими клиническими показателями (угнетение, повышение температуры тела), изменением состава крови (эритроцитопения, лейкоцитоз, эозино-филия, ускорение СОЭ), а так же снижением секреции молока с повышенным содержанием нейтрофильный лейкоцитов.

3. Микрофлора секрета молочных желез больных маститом свиноматок представлена преимущественно микроорганизмами S.aureus и E.coli. В микробном пейзаже преобладают ассоциации, где доминирующее положение занимают роды Staphylococcus и Streptococcus 35,7%.

4. Значительная часть выделенных микроорганизмов показала высокую чувствительность к антибиотикам группы цефалоспоринов и фторхи-нолонов.

5. Выделенные из секрета молочных желез свиноматок, пораженных маститом Staphylococcus aureus. Streptococcus agalactiae. Pseudomows aeruginosa. Escherichia coll Klebsiella pneumoniae характеризуются высокой патогенностью. которая подтвердилась результатами заражения белых мышей.

6. Выделенные ассоциации микроорганизмов напрямую коррелируют с формой течения мастита. Ассоциации Staphylococcus aureus и Streptococcus чаше обуславливают гнойно-катаральный и катарально-геморрагический маститы, a Escherichia coli + Proteus и Staphylococcus + E.coli абсцедирующий мастит.

8. Для каждой формы мастита характерны типичные гистологические изменения. Серозный мастит сопровождается активным экссудатив-ным воспалением, иногда с геморрагическим компонентом и полиморфно-клеточной инфильтрацией. Гнойно-катаральный характеризуется альтера-тивными процессами и полиморфноклеточной инфильтрацией тканей молочной железы с образованием гнойных телец. Для катарально-геморрагического мастита, наряду с выраженной гнойной и геморрагической инфильтрацией, характерны дистрофические изменения эпителия просвета альвеол и протоков, его десквамация и активная пролиферация клеточных популяций. Отличительной особенностью абсцедирующего мастита является наличие в молочной железе некротических очагов, формирование грануляционной ткани и ее секвестрация.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны методические рекомендации «Диагностика маститов бактериальной природы у свиноматок», утверждены научно-техническим советом ГУСХ администрации Омской области, № 5 от 26.06.03. методические рекомендации «Диагностика маститов бактериальной природы у свиноматок».

2. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по микробиологии, эпизоотологии и патологической анатомии, а так же рекомендуются НИУ ветеринарной медицины для решения вопросов диагностики, профилактики и лечении болезней молочной железы свиней.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБО!

1. Плешакова В.И., Семенов А.В. Этиопатогенетическая роль услов-но-патоегнной микрофлоры при маститах свиноматок//Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных экологических условиях: Материалы межрегион, научн.-практ. конф. -Барнаул, 2001. - С. 119-121.

2. Семенов А.В., Конина А.А. Лечение свиноматок, больных метрит-мастит-агалактиейУ/ Материалы Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. - Казань, 2002. - С. 42- 43.

3. Плешакова В.И., Семенов А.В. Роль условно-патогенной микрофлоры при маститах свиноматок// Проблемы и перспективы развития науки в Институте ветеринарной медицины ОиГАУ: Сб. науч. тр. - Омск, 2002.-С. 197-199.

4. Конина А.А., Семенов А.В., Зигунов В.В. Микрофлора, выделенная от свиноматок при синдроме метрит-мастит-агалагтия (ММА) // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Материалы Рос. науч.-практ. конф. - Новосибирск, 2003. - С. 83-85.

5. Плешакова В.И., Конина А.А., Семенов А.В. и др. Некоторые этиологические и эпизоотологические особенности инфекции мочеполовых органов и молочной железы свиноматок// Материалы международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса. — Казань, 2003. - 4.1. - С. 109-115.

6. Плешакова В.И., Семенов А.В., Машнин Д.В. Микрофлора при маститах свиноматок // Роль ветеринарного образования в подготовке специалистов агропромышленного комплекса: Сборник науч. тр. ИВМ ОмГАУ - Омск, 2003. - С. 207-211.

Отпечатано: «Копи-Центр», г. Омск-24, пр. Маркса, 4, к. 136 20.11.2004 г. Бумага ксероксная. Тираж 100 экз.

•25224

к

4 В настоящее г~емя свшшна занимает первое место в объеме мирового производства мяса. Свиноводство является одной из наиболее высокоэффективных и рентабельных отраслей животноводства, успешное развитие которой зависит от получения жизнеспособного приплода и здорового молодняка (Кононов В.Н., 2000).

Перевод свиноводства на промышленную технологию резко изменил условия содержания животных, а воздействие разнообразных неблагоприятных факторов привело к снижению резистентности и увеличению числа по-^ слеродовых болезней свиноматок, среди которых значительное место занимает мастит (Селиванов А.В., Ивановский Э.В., Борисевич Ю.Ф., 1984). Вследствие мастита у свиноматок уменьшается или полностью прекращается секреция молока, ухудшается качество единственного и незаменимого источника питания поросят в первые дни жизни - молозива (Мисайлов В.Д., Коновалов Н.Н., Сотников А.В., 1994). Это приводит к высокой заболеваемости новорожденных поросят диспепсией и гибели приплода (до 80%) или отставанию их в росте и развитии от здоровых поросят аналогичного возраста на 3-4 кг (Черкасова А.В., Пономарева М.И., 1966; Черкасова А.В., Данилко * JI.M., Понамарева М.И., Гладун Н.П., 1978; Мисайлов В.Д., Гридяев Е.П.,

Сотников А.В., 1981; Мисайлов В.Д., Шахов А.Г., Лесных В.И., 1985; Шахов А.Г., 2001; Bertschinger H.U., Burgi Е., Eng V., Wegmann P., 1990).

По данным Шахова А.Г. (2001), послеродовой мастит у свиноматок считается преобладающим заболеванием и наносит экономический ущерб, исчисляющийся десятками миллиардов рублей. Так, на крупных свинофермах зарубежных стран заболевание маститом составляет до 70%, а в условиях российских свиноводческих хозяйств мастит регистрируется у 30-50% и более опоросившихся свиноматок (Пономарева М.И., 1965; Гыльбинов Г.Н., Божкова Г.П., Джурова Й.В., 1983; Лалов II.А., Наков С.Г., 1983; А Волынец Л.К., 1995; Шахов А.Г., 2001; Armstrong С.Н., Hooper В.Е.,

Martia C.E., 1978; Lutter К., 1983). Мастит является одной из основных причин выбраковки свиноматок и достигает 25% от общего числа случаев (Спиридонов Б.С., 1978; Черкасова А.В., 1978).

Причины послеродовых маститов у свиноматок многообразны, но, в конечном счете, они сводятся к тесному взаимодействию трех факторов: резистентности животных, микробного пейзажа и функционального состояния молочной железы.

Одним из ведущих этиологических факторов в возникновении послеродовых маститов принято считать контаминацию молочной железы условно-патогенной микрофлорой. Серьезную проблему в последние годы приобрели ассоциации условно-патогенной микрофлоры, где этиологическую основу составляют несколько видов возбудителей (Вербитский П.И., 1995; Шахов А.Г., 2001).

При гнойно-воспалительном процессе, обусловленном условно-патогенной микрофлорой, в молочной железе свиноматок происходят необратимые изменения, причем одни и те же виды возбудителей могут обуславливать различные формы мастита (Черкасова А.В., Пономарева М.И., 1966).

До настоящего времени нет единого мнения о том, какие условно-патогенные микроорганизмы играют ведущую роль в патологии молочной железы у свиноматок. Недостаточно данных о роли ассоциаций микроорганизмов в развитии процессов послеродовых осложнений и влияния этой микрофлоры на молочно-секреторную функцию свиноматок.

Все вышеизложенное послужило основанием для выбора темы научно-исследовательской работы, определения цели и задач исследования.

Диссертационная работа является самостоятельным разделом комплексной темы кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ИВМ ОмГАУ «Разработка методов и средств диагностики, профилактики и лечения инфекции мочеполовых путей и молочной железы у свиней» (№ гос.рсгистрации 01.2.00100603).

Цель и задачи исследования. Целью работы является определение видового состава и основных биологических свойств микроорганизмов, выделенных от свиноматок при различных клинических формах мастита, а так же патоморфологических изменений в молочной железе.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространение маститов в послеродовой период среди свиноматок в хозяйствах Омской, Тюменской и Томской областей.

2. Определить видовой состав и биологические свойства микроорганизмов, выделенных из секрета молочной железы здоровых и больных клинически выраженными формами мастита свиноматок.

3. Определить устойчивость выделенных культур к ряду химио-терапевтических препаратов.

4. Изучить патоморфологические и гистохимические изменения в тканях молочной железы у свиноматок при маститах.

5. Разработать средства диагностики послеродовых маститов у свиноматок.

Научная новизна. Установлено, что послеродовые маститы свиноматок имеют сравнительно большое распространение. В хозяйствах Омской, Тюменской и Томской области количество свиноматок заболевших маститом после опороса варьирует от 3,4% до 86,9% животных. Результаты исследований расширяют и дополняют сведения о видовом составе микрофлоры молочной железы свиноматки, так, наиболее часто при мастите свиноматок выделяются S.aureus (28,1%) и E.coli (15,33%), в удельном весе ассоциативной микрофлоры преобладают Staphylococcus и Streptococcus (35,73%). Гнойно-катаральный, серозный, геморрагический и фибринозный воспалительные процессы в молочной железе чаще обусловлены ассоциациями Staphylococcus + Streptococcus, абсцедирующий мастит ассоциациями включающие микроорганизмы - E.coli, Proteus vilgaris и Pseudomonas aeruginosa.

Проведенные сравнительные патоморфологнческие и гистохимические исследования молочной железы свиноматок показали, что преобладают хронически протекающие, смешанные формы мастита, характеризующиеся гнойно-катаральным и гнойно-геморрагическим воспалением.

Практическое значение работы. Результаты исследований положены в основу методических рекомендаций «Диагностика маститов бактериальной природы у свиноматок» (утверждены ГУСХ адм. Омской области от 26.06.03, пр. № 5).

Основные материалы диссертационной работы используются в учебном процессе Ижевской государственной сельскохозяйственной академии; Уральской государственной академии ветеринарной медицины; Томского государственного сельскохозяйственного университета.

Материал, изложенный в диссертации, может быть использован при составлении соответствующих разделов учебников и руководств по микробиологии для студентов ветеринарных специальностей, а так же для практической работы специалистов районных и областных ветеринарных лабораторий Западно-Сибирского региона.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных условиях», (Барнаул, 200 J); Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002); Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины», (Новосибирск, 2003); Международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса (Казань, 2003); ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ОмГАУ (2002, 2003).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано шесть научных статей, методические рекомендации «Диагностика маститов бактериальной природы у свиноматок».

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 15 таблицами, 37 рисунками. Список литературы включает 191 источник, га них 34 зарубежных.

выводы

1. Маститы бактериальной этиологии широко распространение среди свиноматок в хозяйствах Западной Сибири и не имеют выраженной сезонности. Регистрируются в среднем у 21,57% опоросившихся свиноматок, преимущественно 2-3-х летнего возврата. Заболеваемость на 100 свиноматок составляет 21,5.

2. Маститы у свиноматок в послеродовой период характеризуются общими клиническими показателями (угнетение, повышение температуры тела), изменением состава крови (эритроцитопения, лейкоцитоз, эозинофилия, ускорение СОЭ), а так же снижением секреции молока с повышенным содержанием нейтрофильный лейкоцитов.

3. Микрофлора секрета молочных желез больных маститом свиноматок представлена преимущественно микроорганизмами S.aureus и E.coli. В микробном пейзаже преобладают ассоциации, где доминирующее положение занимают роды Staphylococcus и Streptococcus 35,7%.

4. Значительная часть выделенных микроорганизмов показала высокую чувствительность к антибиотикам группы цефалоспоринов и фторхинолонов.

5. Выделенные из секрета молочных желез свиноматок, пораженных маститом Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae характеризуются высокой патогенностью, которая подтвердилась результатами заражения белых мышей.

6. Выделенные ассоциации микроорганизмов напрямую коррелируют с формой течения мастита Ассоциации Staphylococcus aureus и Streptococcus чаще обуславливают гнойно-катаральный и катарально-геморрагический маститы, a Escherichia coli + Proteus и Staphylococcus + E.coli абсцедирующий мастит.

8. Для каждой формы мастита характерны типичные гистологические изменения. Серозный мастит сопровождается активным экссудативным воспалением, иногда с геморрагическим компонентом и полиморфноклеточной инфильтрацией. Гнойно-катаральный характеризуется альтеративными процессами и полиморфноклеточной инфильтрацией тканей молочной железы с образованием гнойных телец. Для катарально-геморрагического мастита, наряду с выраженной гнойной и геморрагической инфильтрацией, характерны дистрофические изменения эпителия просвета альвеол и протоков, его десквамация и активная пролиферация клеточных популяций. Отличительной особенностью абсцедирующего мастита является наличие в молочной железе некротических очагов, формирование грануляционной ткани и ее секвестрация.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны методические рекомендации «Диагностика маститов бактериальной природы у свиноматок», утверждены научно-техническим советом ГУСХ администрации Омской области, № 5 от 26.06.03.

2. Материалы диссертационной работы могут быть использованы:

- в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по микробиологии, эпизоотологии и патологической анатомии.

- в научно-исследовательских учреждениях ветеринарной медицины при решении вопросов диагностики, профилактики и лечении болезней молочной железы свиней.