Характеристика факторов патогенности Yersinia enterocolitica

Довбыш, Вера Сергеевна

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Характеристика факторов патогенности Yersinia enterocolitica

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Довбыш, Вера Сергеевна Москва 2004 г.

Ученая степень: кандидата ветеринарных наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Характеристика факторов патогенности Yersinia enterocolitica

На правах рукописи

Довбыш Вера Сергеевна

ХАРАКТЕРИСТИКА ФАКТОРОВ ПАТОГЕННОСТИ Yersinia enterocolitica

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

МОСКВА 2004

Работа выполнена на кафедре инфекционных и паразитарных болезней Московского государственного университета прикладной биотехнологии (МГУПБ) Министерства Российской Федерации

Научный руководитель — доктор ветеринарных наук,

Е.М. Ленченко (МГУПБ)

Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук, профессор

Д.И. Скородумов (МГУПБ)

— кандидат ветеринарных наук О.Д. Скляров (ФГУ ВГНКИ)

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский

институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ).

Защита состоится «с^¿/^^ЮОЛ г. часов на заседании

диссертационного совета Д212.149.03. в Московском государственном университете прикладной биотехнологии (109316, Москва, ул. Талалихина, 33).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГУПБ. Автореферат разослан ^^ — 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного

совета, доктор ветеринарных Смирнова И.Р.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из задач ветеринарной службы является контроль безопасности пищевых продуктов по микробиологическим показателям (СанПиН 2.3.2.1078-01).

В последнее десятилетие ассортимент пищевых продуктов непрерывно расширяется, увеличивается доля импортных основных и вспомогательных материалов, изменяется порядок заготовки сырья для изготовления мясных изделий. При этом холодильная обработка приобретает одно из первостепенных значений, что обусловливает необходимость изучения биологических свойств малоизученных психрофильных микроорганизмов, в частности Yersinia enterocolitica.

Благодаря исследованиям А.Б. Дайтера и соавт. (1987); Н.Ф. Тимченко (1989); Г.В. Ющенко (1989); Н.Н. Беседновой, Ю.Е. Полоцкого (1992); И.В. Смирнова (1992); Г.Г. Гурлевой (1994); В.Ю. Литвина (1999); ГЛ. Ценевой (2000); А.Р. Мавзютова (2001); R.R. Brubaker (1983); G. Кар-perud et al. (1987); R.M. Robins-Browne et al. (1993); B. China et al. (1994); G. Cornelis et al. (1994) и др., доказана роль Y.enterocolitica в этиологии болезней человека, протекающих по типу пищевой токсикоинфекции. Установлено, что генотип патогенных штаммов иерсиний включает хромосомные и плазмидные детерминанты, кодирующие образование факторов па-тогенности.

Для ветеринарной практики методы выделения Y.enterocolitica и определения патогенности не унифицированы, что приводит к получению противоречивых данных. При проведении эпизоотологических исследований в ряде регионов страны установлено, что микроорганизмы Y.enterocolitica могут явиться этиологическим фактором желудочно-кишечных заболеваний животных раннего постнатального периода. Наряду с этим указанные микроорганизма чрезвычайно широко распространены в объектах внешней среды (А.Ф. Бабкин и соавт., 1987; ЕА Кирьянов, И.И. Савчук, 1988; А.В. Куликовский и соавт., 1988; B.C. Ефремов, 1990; СИ. Куцевалов, 1991; М.П. Елезов, 1994; Л.С. Каврук, 1995; ВА Сабурин, 1995; К.В. Шумилов, Л.П. Мельниченко, 1996; В.Г. Скрыпник, А.В. Митрофанов, 1997; А.С. Собакин, Л.Ф. Зыкин, 1998; В.К. Тихонов, 1999; Е.М. Ленченко, 2000; З.Ю. Хапцев, 2000; Р.Б. Корочкин, 2003).

Наличие перекрестных серологических реакций Y.enterocolitica 09 с представителями рода Brucella обусловливает получение ложноположи-

j РОС. НАЦИОНАЛЬНА» ( библиотека !

тельных результатов при исследовании сыворотки крови животных из благополучных по бруцеллезу хозяйств (B.C. Ефремов, 1995; Л.П. Мельниченко и соавт., 2001; Т.С. Астахова, 2002; В.Б. Кузьмина, 2002).

Сельскохозяйственные животные являются основным источником возбудителя инфекции, а продукты животного происхождения - ведущими факторами передачи возбудителя иерсиниоза человеку (Санитарные правила. 3.1.094-96; Ветеринарные правила 13.3.1318-96). В этой связи изучение биологических свойств указанных микроорганизмов представляет социальную значимость. Изыскание эффективных дифференциально-диагностических питательных сред для индикации микроорганизмов Y.enterocolitica в различных объектах, а также научное обоснование определения патогенных свойств эпизоотических штаммов иерсиний, являются актуальными для ветеринарной медицины.

Цель исследований: изучить факторы патогенности для усовершенствования индикации вирулентных штаммов Y.enterocolitica.

Задачи исследований:

1. Определить оптимальную дифференциально-диагностическую питательную среду для выделения и первичной идентификации Y.enterocolitica.

2. Изучить морфологические, культуральные, биохимические и антигенные свойства энтеробактерий, выделенных из патологического материала, фекалий поросят и телят, кормов и продуктов животного происхождения.

3. Изучить чувствительность к антибиотикам и межвидовой антагонизм музейных штаммов и выделенных из различных объектов культур микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae.

4. Изучить адгезивные и инвазивные свойства Y.enterocolitica.

5. Подобрать доступный для воспроизведения в практических лабораториях метод определения энтеротоксигенности Y.enterocolitica.

6. Изучить морфологические изменения в тканях лабораторных мышей при воздействии энтеротоксина Y.enterocolitica.

Научная новизна. Научно обоснованы и предложены методы выявления энтеротоксигенности у культур Y.enterocolitica. Экспериментальными исследованиями установлены критерии оценки вирулентности у выделенных культур Y.enterocolitica. Определен видовой и количественный состав бактерий семейства Enterobacteriaceae, в том числе Y.enterocolitica,

выделенных из репрезентативной выборки объектов ветеринарно-санитарного надзора.

Практическая значимость. Установлено, что дифференциально-диагностическая среда с бромтимоловым синим (СБТС) является оптимальной для выделения и первичной идентификации УеМегосоШса от таксономически близких бактерий по сравнению со средами Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфит агаром.

Для определения энтеротоксигенности культур УеМегосоШса предложено использовать плантарный тест на лабораторных мышах.

Изданы и внедрены в учебный процесс МГУПБ: методические указания к самостоятельной работе студентов ветеринарно-санитарного факультета по теме «Иерсиниоз как пищевая токсикоинфекция» (М., МГУПБ, 2001).

Апробация материалов диссертации. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях кафедры инфекционных и паразитарных болезней МГУПБ (Москва, 2001-2003 гг.); Международной научно-практической конференции: «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» (Воронеж, 2002); 4-ой международной научно-практической конференции: «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (М., 2002); 2-ой международной научной конференции студентов и молодых ученых: «Живые системы и биологическая безопасность населения» (М., 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 работ.

Основные положения, выносимые на защиту:

• Сравнительная оценка дифференциально-диагностических питательных сред для выделения УейегосоШка.

• Видовой состав энтеробактерий, выделенных из объектов ветери-нарно-санитарного надзора.

• Характеристика факторов патогенности УеМегосоШса.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, библиографии. Работа изложена на 135 страницах машинописного текста, содержит 14 таблиц, 1 схему, 46 рисунков. Библиографический список включает 204 источника, из них 100 - иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена в период с 2000 по 2003 гг. на кафедре инфекционных и паразитарных болезней МГУПБ и на базе Подольской зональной ветеринарной лаборатории. Часть исследований проводили в ФГУ ВГНКИ.

В работе использовали паспортизированные штаммы: Y.enterocolitica 03, №134; Y.enterocolitica 09, №383; Y.enterocolitica 08, №161; Y.enterocolitica 05.27, №885; E.coli O141:K87:K88, №727; Cfreundii №33/57; E.aerogenes CCM 2531; S.typhimurium №5715; S.aureus №123; полученные из коллекции ФГУ ВГНКИ, Государственного НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тара-севича, а также культуры микроорганизмов, выделенные нами от поросят, телят, из кормов и продуктов животного происхождения.

С целью выделения микроорганизмов Y.enterocolitica исследовали патологический материал от 60 телят в возрасте до 14 сут. и 60 поросят в возрасте до 4 мес, павших от желудочно-кишечных заболеваний невыясненной этиологии, а также по 60 проб фекалий от поросят и телят с диареей; 45 проб кормов - комбикорм, мясокостная мука, СК-58, СК-5, овес, пшеница, ячмень, отруби, патока свекольная, добавка свиная, добавка детская для поросят, добавка для свиней, добавка для коров; 150 проб свинины замороженной и 40 проб языков свиных охлажденных и замороженных.

Исследования проводили в соответствии с «Методическими указаниями по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями» (1999).

Сравнительное изучение ростообеспечивающих и дифференциальных свойств сред Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфит-агара - ВСА (НПО «Питательные среды», г. Махачкала), «Среды с бромтимоловым синим» - СБТС (ГНЦ ПМ, г. Оболенск) проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями к контролю питательных сред по биологическим показателям» (1980) и «Инструкцией по бактериологическому контролю диагностических питательных сред для чумного микроба» (1984).

Отбор проб комбикормов и сырья, используемого при его производстве, проводили по ГОСТ 13496 0-80, зерна - по ГОСТ 13586.3-83, мясокостной муки - по ГОСТ 25311 -82.

Пробы пищевых продуктов для бактериологических исследований отбирали в количествах, предусмотренных нормативными документами:

ГОСТ 26668-85 (СТСЭВ 3013-81), ГОСТ 7269-79, СанПиН, исследовали в соответствии с ГОСТ 10444.15-94, ГОСТ 30518-97 (ГОСТ Р 50474-93), ГОСТ 30519-97 (ГОСТ Р 50480-93), «Методическими указаниями по выявлению УеМегосоШса и УрзеиёоШЬегсШозк в пищевых продуктах животного происхождения» (1998). На первом этапе проводили холодовое обогащение материала в 1%-ной пептонной воде с добавлением К2НРО4

Идентификацию выделенных культур проводили, руководствуясь «Определителем бактерий Берджи» (1997). Морфологические и культу-ралъные свойства изучали, используя общепринятые методы и стандартные питательные среды (Ф. Герхардт и соавт., 1984; М.А. Сидоров и со-авт., 1995).

Биохимические свойства бактерий изучали общепринятыми методами, а также с использованием СИБ (Н. Новгородский НИИ экспериментальной микробиологии) по прилагаемой инструкции.

Биовары УейегосоШса определяли по методике Г.В. Ющенко, В.И. Дунаева (1981).

Серологические варианты выделенных культур УеМегосоШса определяли в реакции агглютинации на стекле с помощью типовых адсорбированных кроличьих сывороток к эталонным штаммам иерсиний серова-ров 03 и 09 (производство СПб НИИЭМ им. Пастера).

Чувствительность к антибиотикам изучали методом диффузии в агар (СМ. Навашин, И.П. Фомина, 1974), антагонистические свойства — методом агаровых блочков на плотных питательных средах (Н.С. Егоров, 1979).

Вирулентность культур микроорганизмов определяли путем внутри-брюшинного заражения белых мышей массой 14-16 г и выражали в ЬБ50.

Свойства иерсиний, связанные с наличием плазмиды вирулентности: способность к аутоагтлютинации, зависимость бактериального роста от концентрации ионов Са2+ в среде при 37 °С, зависимость размеров колоний от температуры определяли согласно инструкции «Эпидемиология, лабораторная диагностика иерсиниозов, организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий» (1990).

Адгезивные свойства микроорганизмов изучали методом В.И. Бри-лис и соавт. (1986) с использованием формалинизированных эритроцитов барана.

Степень инвазивности и цитотоксичности иерсиний определяли путем заражения клеточной линии Нер-2 (ГЛ. Ценева и соавт., 1986).

Гемолитическую активность оценивали качественно после посева и культивирования суточной агаровой культуры на МПА с содержанием 5 % стерильной крови барана (А.С. Лабинская, 1984).

Энтеротоксигенность выделенных культур оценивали в плантарном тесте на мышах массой 14-16 г по методу Ю.П. Вартаняна и соавт. (1978) и на мышах-сосунках по методу Н.И. Романенковой и соавт. (1980).

Для гистологических исследований пробы обрабатывали общепринятыми методами (О.В. Волкова и соавт., 1987).

Результаты опытов подвергали статистической обработке общепринятым методом по И.П. Ашмарину, Л.А. Воробьеву (1962), константным методом по Н.В. Садовскому (1975) и с использованием компьютерной программы «Статистическая диалоговая система Stadia» (1992).

Выражаем благодарность д-ру вет. наук М.К. Пирожкову, под руководством которого выполнен раздел по апробации методов определения энтеротоксигенности на культурах эшерихий, и директору Подольской зональной ветеринарной лаборатории М.Е. Кузнецовой за оказание консультативной помощи.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Определение оптимальной дифференциально-диагностической питательной среды для выделения Y.enterocolitica

Объектом исследований служили культуры Y.enterocolitica, E.coli, S typhimurium, S.aureus, а также среды Эндо, Левина, Плоскирева, ВСА и СБТС. Результаты исследований представлены в табл. 1.

На среде Эндо через 18 ч культивирования бактериальные клетки Y.enterocolitica формировали круглые, выпуклые, с ровными краями, прозрачные, бесцветные, диаметром 0,2-0,5 мм колонии, 48-часовые культуры приобретали розовый оттенок в центре колоний и увеличивались в размере до 2,0 мм. E.coli росли, образуя круглые, темно-красные или малиновые, диаметром 1,0-4,0 мм колонии; S.typhimurium — прозрачные, слегка голубоватые или светло-серые, диаметром 1,0-4,0 мм. Дифференцировать иер-синии по характеру роста от лактозоотрицательных бактерий и эшерихий со слабой лактозной активностью оказалось затруднительным. Кроме того, нерсинии в первой генерации на среде Эндо росли в виде росинчатых, трудно различимых колоний, и зачастую их рост подавлялся сопутствующей микрофлорой.

Сравнительная оценка питательных сред

Среды Сравниваемые признаки

Характеристика типичных колоний, 28 "С Скорость роста У.е1Цегосо1Шса, ч Чувствительность среды при посеве 100 кл. Ингнбирующне свойства

У.егиегосо1Шса E.coli БЛурЫтипит

Эндо 1,5-2,0 мм, прозрачные, бесцветные 1,0-4,0 мм, прозрачные, темно-красные 1,0-4,0 мм, прозрачные, бесцветные Росинчатые колонии 0,2-0,5 мм вырастали через 18 ч; 48-часовые приобретали розовый оттенок в центре, диаметр до 2,0 мм 59,0±0,5 Подавляет рост тест-штамма S. aureus

Левина 1,0-4,0 мм, светло-сиреневые, иногда с темным центром, неправильной формы 1,0-2,0 мм, темно- фиолетовые 1,0-2,0 мм, прозрачные, с фиолетовым оттенком Отбор колоний затруднен из-за разной морфологии и окраски 22,0±1,3 Подавляет роет тест-штамма S. aureus

Плоскирева 1,0-1,5 мм, прозрачные бесцветные 1,5-2,5 мм, розовые 1-2 мм, бесцветные Незначительное количество колоний через 48-72 ч 18,0±1,5 Подавляет рост тестгштамма S. aureus

ВСА 0,5-1,0 мм, светло-коричневые 1,0-2,0 мм бесцветные, зеленоватые 2,0-3,0 мм, черные Колонии формировались через 48-72 ч 12,0±1,2 Подавляет рост тест-штамма S.aureus

СБТС 1,5-2,0 мм, непрозрачные, сине-зеленые 2,0-3,0 мм, непрозрачные, желтые 1,0-2,0 мм, непрозрачные, желтые Колонии 0,2-0,5 мм формировались через 18 ч, типичные колони - через 48 ч 62,0±2,0 Подавляет рост тест-штамма S. aureus

На среде Левина рост иерсиний проявлялся образованием колоний неправильной формы, светло-сиреневого цвета, иногда с темным центром, достигающих 1,0-4,0 мм в диаметре. E.coli на данной среде формировали темно-фиолетовые или черные колонии диаметром 2,0 мм; S.typhimurium -прозрачные, с легким фиолетовым или бледно-розовым оттенком, диаметром 1,0-2,0 мм. Варьирующие размеры и схожесть окраски колоний иерсиний с колониями других бактерий затрудняли идентификацию.

На среде Плоскирева Y.enterocolitica развивались замедленно. Через 48-72 ч росли гладкие, прозрачные, бесцветные, легко снимающиеся петлей колонии диаметром 1,0-1,5 мм; E.coli формировали колонии розового цвета, диаметром 1,5-2,5 мм; S.typhimurium — гладкие, с ровными краями, слегка выпуклые, влажные, бесцветные, диаметром 1,0-2,0 мм.

На ВСА иерсиний росли также замедленно, в виде мелких светло-коричневых, с ровными краями, диаметром до 1,0 мм колоний; E.coli - в виде мелких, бесцветных, зеленоватых или коричневых колоний. Рост S.typhimurium регистрировали через 24 ч, колонии были крупные, диаметром 2,0-3,0 мм, пастообразные, интенсивно-черного цвета, по краю колоний выявлялся прозрачный валик, на месте расположения колонии цвет среды изменялся на коричневый.

На СБТС иерсинии через 18 ч культивирования формировали круглые, с ровными краями, выпуклые, непрозрачные, сине-зеленого цвета колонии, размером 0,2-0,5 мм, через 48 ч диаметр колоний увеличивался до 1,5-2,0 мм. Е. coli на данной среде были представлены круглыми, с ровными краями, выпуклыми, непрозрачными, ярко-желтыми колониями, диаметром 2,0-3,0 мм; S.typhimurium - круглыми, с ровными краями, плоскими, непрозрачными, желтыми колониями, диаметром 1,0-2,0 мм.

Среднее количество колоний Y.enterocolitica, выросших при посеве суспензии, содержащей около 100 клеток, составило: на среде Эндо 59,0±0,5; Левина 26,0 ±1,3; Плоскирева 18,0±1,5; ВСА 12,0±1,2; СБТС 62,0±2,0. Биохимические свойства культур иерсиний после выращивания на указанных средах были одинаковыми и не изменялись.

На основании проведенных исследований можно сделать вывод о том, что наиболее благоприятной для иерсиний средой является СБТС, которая обладает более выраженными ростообеспечивающими свойствами и на этой среде морфология колоний более различима с другими энтеробак-териями.

3.2. Сравнительное изучепие дифференциально-диапюстическнх признаков культур У.еп1егосо1Шса и сходных энтеробактерим

Из патологического материала и фекалий от телят и поросят, замороженной свинины и свиных языков, а также комбикормов были выделены 367 культур микроорганизмов, отнесенных к семейству ЕМегоЬайепасеае, из них 11 культур идентифицировали как УеМегосоШса.

После холодового обогащения исследуемого материала в 1%-ной пептонной воде с добавлением К2НРО4 и последующего посева и культивирования на СБТС и среде Эндо были выделены соответственно 11 и 4 культуры УеЛетосоШса. Из патологического материала и фекалий от поросят - 5 культур, от телят - 1 культуру; из свинины и свиных языков -4 культуры; из комбикормов - 1 культуру. Следует отметить, что КМАФАнМ замороженной свинины было в пределах 2,0х104 КОЕ/г и 5,0 х104 КОЕ/г, что не превышало значений по СанПиН.

Наряду с иерсиниями из патологического материала и фекалий выделили 328 культур бактерий семейства ЕМегоЬайепасеае. Согласно результатам типирования к виду Е.соК были отнесены 192; Е.аегс^епе8 — 11, С.йеипёй - 44, С.Шуегеиз - 15, Р.штаЬПк - 62, М.шо^пй - 4 культуры. У поросят обнаружили культуры эшерихий серогрупп 08, О20 и 0141, у телят - 08, 09, 026,078,0115..

Из кормов выделили 28 культур бактерий, из них Е.соЦ - 5, Е.аегс^епе8 - 14, С.1геипёй - 7, Крпеишошае - 2 культуры.

В мазках из агаровых и бульонных культур УеМегосоШса были представлены грамотрицательными палочками с закругленными концами, овоидной или кокковидной формы, без капсул, одиночно расположенными.

Клетки УеМегосоШса по размеру достоверно не отличались от С.&еипёи, Р.ш1гаЬШ8 и Е.аегс^епев (^<4,6 при Р=0,01) (табл. 2).

Для иерсиний характерной особенностью являлась подвижность при культивировании в полужидком агаре при 28 °С; при 37 °С они утрачивали это свойство. Бактерии С.йеипёй и Р.ш1гаЬШ8 были подвижными при 28 и 37 °С; у Е.сой этот признак варьировал: 33 культуры микроорганизмов были неподвижными, 66 - умеренно подвижными, 98 - подвижными.

Размеры клеток энтеробактерий

Вид Энтеробактерий Признаки

Длина, мкм Ширина, мкм

(М±т) (М±т).

У етегосо1шса 1,85±0,15 - 0,64±0,02 -

В соК 3,72±0,38 4,56 1,34*0,06 11,11

Е аегооспез 2,01±0,11 0,86 0,84±0,07 2,74

С &еипсЫ 3,01±0,24 4,10 1,00±0,09 4,00

Р пигаЬПк 2,58±0,11 3,92 0,67±0,08 0,38

Примечание: ^ - коэффициент достоверности различий средних величин по отношению к размерам клеток Y.enteгocolitica.

На МПА через 24 ч культивирования при 28 °С Y.enteгocolitica формировали круглые с ровными краями, прозрачные с голубоватым оттенком, блестящие, мягкой консистенции колонии, диаметром 0,5-1,0 мм.

Выделенные культуры Y.enteгocolitica обладали каталазной, В-галактозидазной, уреазной активностью; цитохромоксидазу, лактазу, же-латиназу, фенилаланиндезаминазу, лизиндекарбоксилазу не образовывали; ферментировали глюкозу; мальтозу, сахарозу, маннит, сорбит, расщепляя их с образованием кислоты без газа; давали положительные реакции в тестах с метиловым красным и Фогес-Проскауэра при 28 °С; не выделяли сероводород; не утилизировали цитрат Симмонса.

По результатам изучения биохимических свойств выделенные культуры иерсиний были отнесены к различным биоварам (табл. 3).

При серологической идентификации из 11 изученных культур 5 отнесли к серовару 03; 3 - к серовару 09 и 3 - типировать

не удалось.

Чувствительность к антибиотикам и антагонистическая активность. Для более полной характеристики биологических свойств выделенных культур микроорганизмов определили спектр их чувствительности к антибиотикам.

Изученные культуры Y.enteгoco1itica были чувствительны к антибиотикам группы фторхинолонов (энрофлону, байтрилу), устойчивы к антибиотикам группы природных и полусинтетических пенициллинов (бен-зилпенициллину, оксациллину, ампициллину, карбенициллину), олеандо-мицину, линкомицину, ристомицину.

Биохимические свойства, дифференцирующие биовары Y.enterocolitica

№ Вид микроорганизмов, серовар- источник выделения Тест или субстрат с. es W О ¿5

Трегалоза <* о 5 à ч о ч >5 л г* « s £ s 1 ч б

1 Y.enterocolitica 09 Тонкий' кишечник, брыжеечные лимфатические узлы, кровь поросенка + + + + - 2

2 Y.enterocolitica 09 Тонкий кишечник, брыжеечные лимфатические узлы поросенка + + + + - 2

3 Y.enterocolitica 03 Тонкий кишечник теленка + - _ 4

4 Y.enterocolitica 03 Корень языка поросенка + _ _ _ 4

5 Y.enterocolitica н/т Фекалии поросенка + + _ _ 3

6 Y.enterocolitica н/т Фекалии поросенка + + + + + 1

7 Y.enterocolitica н/т Комбикорм + + + + + 1

8 Y.enterocolitica 03 Свиной язык + + + + _ 4

9 Y.enterocolitica 03 Свиной язык + + + + _ 4

10 Y.enterocolitica 03 Замороженная свинина + + _ _ _ 4

11 Y.enterocolitica 09 Замороженная свинина + + + + + 1

Примечание: н/т - нетипируемые.

С учетом того, что Y.enterocolitica могут вызывать желудочно-кишечные расстройства у животных раннего постнатального периода, протекающие как моно-, так и смешанные инфекции, было изучено наличие межвидового антагонизма между иерсиниями и микроорганизмами других видов с использованием метода агаровых блочков.

При этом установили, что рост тест-штаммов Y.enterocolitica подавляли биологически активные вещества (БАВ), продуцируемые Е.соЦ, о чем свидетельствовали четкие зоны задержки роста культур диаметром 17,5±0,74 мм вокруг агаровых блочков. В свою очередь культуры Y.enterocolitica подавляли рост S.typhimurium, зоны задержки роста при этом составили 19,2± 1,70 мм.

Культуры Y.enterocolitica, E.aerogenes, C.freundii, P.mirabilis, S.aureus не оказывали взаимного антагонистического влияния друг на друга.

3.3. Определение вирулентности и свойств Y.enterocolitica, связанных с плазмидой вирулентности

Вирулентность иерсиний определяли на лабораторных мышах массой 14-16 г, которых заражали виутрибрюшинно в дозах 2 млрд.; 400; 80; 16; 3,2 млн. микробных тел, используя по 5 мышей на дозу.

Средняя величина Ц^о варьировала в пределах от 543 млн. до 2 млрд. 374 млн. микробных клеток и не зависела от источника выделения культуры (табл. 4).

Таблица 4

Вирулентность Y.enterocolitica

№ культуры Вид, серовар Источник выделения 1Л)50, млн.м.к.

1 У.егЛегосо1шса 09 Патологический материал от поросенка 543,2±68,8

2 У.ейегосоШка 09 Патологический материал от поросенка 591,0±178,9

3 У.еМегосоШса 03 Патологический материал от теленка 660,2±112,6

4 У.епгегосоМса 03 Корень языка поросенка 945,6±74,5

5 У.ешегосоЫюа н/т Фекалии поросенка 726,2±85,2

6 У.епгегосЫШса н/т Фекалии поросенка 812,3±96,8

7 У.ейегосоШса н/т Комбикорм 2374,0±511,2

8 У.етегосоШса 03 Свиной язык 816,1±92,2

9 У.еШегосоЬиса 03 Свиной язык 1058,9±111,1

10 У.етегосоМса 03 Замороженная свинина 722,3±98,8

11 У.еШегосоииса 09 Замороженная свттна 931,2±83,1

При культивировании на специальных жидких и плотных питательных средах культуры У.еЩетосоШса, содержащие плазмиду вирулентности рУУ, проявляют связанные с ней следующие свойства: способность к аутоагтлютинации, зависимость бактериального роста от концентрации ионов Са2+ в среде при 37 °С, зависимость размеров колоний от температуры. С целью выявления культур У.еЩетосоШса, содержащих плазмиду вирулентности, выделенные культуры изучали в указанных тестах.

Наличие у культур признака аутоагтлютинации считали установленным, если при выращивании в среде Кларка при 37 °С на дне пробирки наблюдали образование рыхлого хлопьевидного осадка. В пробирке, культивированной при 22-28 °С, отмечали равномерное помутнение и небольшой компактный осадок. Свойством аутоагтлютинации обладали культуры №1, №2, №3, №5, №10 (табл. 5).

По результатам исследования зависимости роста иерсиний (слабый рост или его отсутствие) от низкой концентрации ионов Са2+ в среде и температуры культивирования 37 °С были получены следующие результаты. Культуры У.е^егосоННса №1, №2, №3, №5, №10 при указанных условиях через 24 ч либо не давали видимого роста, либо формировали точечные колонии менее 0,1 мм в диаметре. Через 48 ч колонии несколько увеличивались в размере, однако оставались значительно мельче колоний, выросших на той же среде при 22-28 °С (табл. 5).

Таблица 5

Результаты определения свойств, связанных с плазмпдой вирулентности

№ Вид микроорга- Маркеры вирулентности ■

куль- низмов Аутоагг- Завис- Зависимость размеров коло-

туры серовар лютнна- мосгь от конц.Са2+ и 37'С нии от температуры

ция Диаметр колоний, мм (М±ш), 48 ч

22-28 "С 37 "С

1 У.еШегосоПпса 09 + + 1,6±0,06 0,7±0,03 13,4

2 У.еШегосоНиса 09 + + 1,8±0,08 1,1 ±0,05 7,4

3 У.еШегосо1шса 03 + + 1,2±0,07 0,б±0,02 8,2

4 У.еМегосоЬиса 03 - - 1,3±0,04 1,4±0,04 2,5

5 У.еШегосоШгса н/т + 1,5±0,08 0,9±0,04 6,7

б У.еШегосоНиса н/т - - 1,6±0,10 1,9±0,10 3,0

7 У.еШегосЫШса н/т - - 1,3±0,05 1,8±0,09 5,0

8 У.еШегосо1шса 03 - - 1,4±0,10 1,8±0,07 3,3

9 У.еШегосо1Мса 03 - - 1,1±0,09 1,5±0,06 3,7

10 У.еШегосоЬиса 03 + + 1,1 ±0,08 1,2±0,05 1,1

11 У.еШсгосоИйса 09 - - 1,2±0,04 1,3±0,03 2,0

Примечание: + положительныйрезультат, - отрицательный результат;

^ коэффициент достоверности различий средних величин.

Для изучения зависимости размеров колоний бактерий от температуры выделенные культуры высевали на плотную питательную среду в чашки Петри и культивировали при 37 и 22-28 °С, что позволяло получить ориентировочную оценку.

С целью более глубокого изучения бактерии выращивали 48 ч на предметных стеклах, фиксировали в парах 25%-го глютарового альдегида,

после чего измеряли диаметр 5-ти типичных колоний. В ходе исследования было установлено, что через 48 ч культивирования диаметр колоний культур Y.enteгoco1itica №1, №2, №3, №5 при 37 °С составил 0,6-1,1 мм, при 2228 °С - 1,2-1,8 мм (табл. 5) (^>4,6; Р=0,01). Следует отметить, что при исследовании других культур иерсиний выявленной закономерности не наблюдали.

3.4. Факторы патогенности Y.enteгoco1itica (адгезвность, инвазивность, энтеротоксигенность)

Адгезивность культур иерсиний, выделенных из различных источников, изучали на эритроцитах барана, рассчитывая средний показатель адгезии (СПА). При СПА от 0 до 1,00 микроорганизмы считали неадгезивными; от 1,01 до 2,00 - низкоадгезивными; от 2,01 до 4,00 - среднеадгезив-ными и от 4,01 и более высокоадгезивными.

Наиболее выраженные адгезивные свойства выявили у культур выделенных из патологического материала и фекалий, СПА составил 4,61±0,35.

К среднеадгезивным отнесли культуры №2 и №10, выделенные из патологического материала и свинины, СПА составил 3,22±0,26.

Низкоадгезивными были культуры №4, №6, №7, №8, №9, №11, выделенные из фекалий, свинины, свиных языков и комбикорма, при СПА 1,41±0,077.

Степень инвазивности определяли у культур Y.enteгoco1itica на модели клеточной линии Нер-2. Культуры иерсиний №1 И №2, выделенные из патологического материала, обнаруживали слабую степень инвазивности - 10,3± 1,6 бактерий на клетку Нер-2 в сроки от 2-х до 5-ти ч после заражения. Через 24 ч монослои культуры клеток сохранились, цитопатиче-ских изменений обнаружить не удалось, количество бактерий в клетках уменьшилось. Культуры, выделенные из фекалий, кормов и продуктов животного происхождения, не проявляли признаков инвазии на данной культуре клеток.

При изучении гемолитической активности Y.enteгoco1itica установили, что ни одна из исследованных культур иерсиний не обладала способностью вызывать гемолиз эритроцитов на МПА с кровью.

Энтеротоксигенность выделенных культур иерсиний изучали в двух тестах: на мышах-сосунках и плантарном на мышах массой 14-16 г.

Культуры Y.enterocolitica выращивали при 22-28 °С. Группа мышей, которым вводили стерильный бульон, служила отрицательным контролем, а группа мышей, зараженных надосадочной жидкостью, полученной после центрифугирования (6000 об/мин, 30 мин.) бульонной культуры энтеро-токсигенного штамма E.coli 727 (О141:К87:К88), - положительным контролем.

Средние показатели коэффициента расширения кишечника у мышей-сосунков находились в пределах от 0,067±0,006 до 0,116+0,005. Энтеро-токсигенными оказались 4 культуры которые вызвали

статистически достоверное расширение кишечника по отношению к отрицательному контролю

Тест по определению коэффициента расширения кишечника мышей-сосунков является высокочувствительным, но трудоемким в практических условиях.

С целью изучения действия энтеротоксина in vivo было проведено определение изменений, развивающихся в тканях тонкого отдела кишечника. Слизистая оболочка тонкого отдела кишечника была гиперемирована и отечна. В просвете кишечника выявлялось небольшое количество серозного экссудата. На гистологических препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, отмечена слабо выраженная лейкоцитарная инфильтрация поверхностного эпителия и собственной пластинки слизистой оболочки. В целом установлено, что энтеротоксин в кишечнике вызывал развитие общей сосудистой реакции микроциркуляторного русла.

Результаты исследования культур в плантарном тесте согласовывались с результатами предыдущего теста и имели высокую степень корреляции (г=0,96). Умеренно и высокотоксигенными оказались культуры №1, средняя разность массы лапок опытных и контрольных мышей колебалась в пределах от 40,33+3,94 мг до 66,33+8,07 мг (табл. 6).

Морфологические изменения в тканях плантарной поверхности лап мышей после введения энтеротоксина характеризовались отеком и гиперемией. На гистологических срезах при окраске гематоксилином и эозином в сосочковом слое дермы между волокнами рыхлой волокнистой неоформленной соединительной ткани располагались бледноокрашенные гомогенные массы экссудата. Были обнаружены деструктивные изменения, сосудистые и инфильтративные нарушения.

Сравнивая два использованных теста при определении энтеротокси-генности, можно заключить, что плантарный тест на мышах массой 14-16 г обладает преимуществом перед тестом на мышах-сосунках, так как он является легковоспроизводимым в практических условиях.

Анализ полученных результатов свидетельствует, что изученные культуры иерсиний обладали адгезивностью, инвазивностью и энероток-сиге1гаостью в различной степени выраженности:

- культура №1 имела высокую степень адгезивности, была низко ин-вазивна и умеренно токсигенна;

- культура №2 характеризовалась средней степенью адгезивности, низкой инвазивностью и энтеротоксигенностью;

- культура №3 проявляла высокую степень адгезивности и энтеро-токсигенности;

- культура №5 характеризовалась высокой степенью адгезивности и умеренной энтеротоксигенностью;

- культура №10 обладала средней степенью адгезивности и высокой энтеротоксигенностью;

- культуры проявляли низкую степень адгезивности.

Таблица 6

Энтеротоксигенность выделенных культур Y.enterocolitica

.V; культуры Вид, серовар Плантарный тест Тест на мышах-сосунках

Средняя разность массы лапок, мг М±т Средний показатель расширения кишечника ta*

1 Y.enterocolitica 09 55,67±6,10 0,109±0,008 5,2

2 Y.enterocolitica 09 22,67±4,33 0,070±0,009 0,5

3 Y.enterocolitica 03 66,33±8»07 0,116±0,005 10,2

4 Y.enterocolitica 03 8,67±3,52 0,075±0,007 1,3

5 Y.enterocolitica н/т 40,33±3,94 0,105±0,007 5,3

6 Y.enterocolitica н/т 25,00±4,72 0,082^0,005 1,8

7 Y.enterocolitica н/т б,67±2,56 0,067*0,006 0,3

8 Y.enterocolitica ОЗ 13,67±1,97 0,080±0,008 1,8

9 Y.enterocolitica 03 14,00±2,36 0,068±0,005 0,5

10 Y.enterocolitica 03 65,33±6,88 0,112±0,010 4.7

11 Y.enterocolitica 09 12,67±4,84 0,072±0,007 0,9

12 K(+) E.coli 727 71,67±9,87 0,119±0,009 5,7

13 K(-) - 0,065±0,003 -

Примечание: * - коэффициент достоверности различий средних величин по отношению к отрицательному контролю К(-)Р<0,01 при ^4,6.

Тест на мышах-сосунках: средний показатель расширения кишечника 0,090 и более - положительный результат.

Плантарный тест: средняя разность массы лапок 15,00-34,00 - слаботоксиген-ные; 35,00-64,00 - умереннотоксигенные; 65 и более - высокогоксигенные.

Результаты наших исследований свидетельствуют, что адгезивность, определенная с использованием формалинизированных эритроцитов, выявлена у всех исследованных культур. У культур с высокой и средней ад-гезивностыо наблюдалась прямая зависимость с наличием культуральных свойств, контролируемых плазмидой вирулентности. Из 11 исследованных культур инвазивность выявлялась у двух культур У.еПетосоШса на модели клеточной линии Нер-2, причем в низкой степени. Энтеротоксигенность, определенная в тесте на мышах-сосунках и в плантарном тесте, присутствовала у четырех культур, что свидетельствует о немаловажной роли диа-рейного синдрома в иерсиниозной инфекции. Традиционный метод определения вирулентности на лабораторных мышах при парентеральном введении бактериальной взвеси не дает объективную оценку патогенности бактерий.

Для решения вопроса о патогенности культуры У.еПетосоШса рекомендуется определять культуральные свойства, связанные с плазмидой вирулентности (способность к аутоагглютинации и зависимость бактериального роста от наличия ионов кальция в среде и температуры 37 °С, а как дополнительный признак — определение зависимости размеров колоний от температуры). Учитывая, что У.еПегосоШса при определенных условиях может вызывать заболевания желудочно-кишечного тракта животных раннего постнатального периода, клинически проявляющиеся диареей, необходимо определение продукции энтеротоксина у выделенных культур микроорганизмов. Для практического применения рекомендуется использовать плантарный тест.

ВЫВОДЫ

1. Из патологического материала и фекалий поросят и телят, кормов, замороженной свинины и свиных языков выделены 367 культур микроорганизмов семейства ЕИегоЪайепасеае, в том числе 11 культур У.еПегосоШса.

2. Культуры микроорганизмов, идентифицированные как У.еПетосоШса, выделены из следующих объектов: 5 культур микроорганизмов - из патологического материала и фекалий поросят; 1 культура - из патологического материала телят; 4 культуры — из свинины и свиных языков; 1 культура — из комбикорма.

3. Для индикации У.еп1егосо1Шса из объектов ветеринарно-санитарного надзора оптимальной является среда с бромтимоловым синим (СБТС), которая обладает выраженными ростообеспечивающими свойствами, ингибирует ростграмположительной микрофлоры, позволяет дифференцировать У.еп1егосо1Шса от уреазонегативных бактерий.

4. Культуры У.еПетосоШса чувствительны к антибиотикам группы фторхинолонов (энрофлону, байтрилу), устойчивы к антибиотикам группы природных и полусинтетических пенициллинов (бензшшенициллину, ок-сациллину, ампициллину, карбенициллину), олеандомицину, линкомици-ну, ристомицину.

5. Адгезивной активностью обладают 11 культур У.еПетосоШса, из них 3 - высокоадгезивные; 2 - среднеадгезивные; 6 - низкоадгезивные; инвазивность в слабой степени характерна для 2-х культур, гемолитическая активность у всех культур отсутствует; энтеротоксигенность выявлена у 4-х культур микроорганизмов.

6. Плантарный тест является легко воспроизводимым в практических условиях, чувствительным, качественным методом определения энтеро-токсигенности культур У.еПетосоШса.

Практические предложения

1. При бактериологическом исследовании патологического материала от животных раннего постнатального периода, павших от болезней с невыясненной этиологией, следует учитывать как возможность первичной этиологической роли иерсиний, так и вероятность смешанной инфекции, при этом для выявления микроорганизмов У.еп1егосо1Шса рекомендуется использовать среду с бромтимоловым синим.

2. Для определения энтеротоксигенности эпизоотических штаммов иерсиний рекомендуется использовать плантарный тест, так как он является простым, чувствительным и легко воспроизводимым в условиях практических ветеринарных лабораторий.

3. Разработаны и применяются в учебном процессе - Иерсиниоз как пищевая токсикоинфекция: Методические указания к самостоятельной работе студентов спец. 310800 - Ветеринария, 072000 - Стандартизация и сертификация. - М.: МГУПБ, 2001. - 28 с.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Довбыш B.C. Активность аминогликозидов, цефалоспоринов, фторхинолонов по отношению к иерсиниям // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Материалы международной научно-практической конференции. - Воронеж, 2002. - С. 239-240.

2. Довбыш B.C. Критерии дифференциации иерсиний от таксономи-чески близких и сходных видов бактерий // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Материалы международной научно-практической конференции. - Воронеж, 2002. - С. 240-242.

3. Довбыш В С. Методы определения патогенных свойств Y.enterocolitica // Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветери-нарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции: Матеррглы 4-ой международной научно-практической конференции. - М., 2002. - С. 178-180.4. Ленченко Е.М., Довбыш В С Сравнительная оценка методов количественного учета бактерий // Сельскохозяйственная биология. - 2002. -№2.-С. 123-125.

5. Довбыш B.C. Оценка активности термостабильного энтеротокси-на условно-патогенных энтеробактерий // Практик. - 2003. - №9-10. - С. 30-33.

6 Довбыш В С. Патогенность и вирулентность Y.enterocohtica // Живые системы и биологическая безопасность населения: Материалы 2-ой международной научной конференции студентов и молодых ученых. - М., 2003.-С. 35-37.

Подписано в печать -12.01.2004 г. Формат 60x841/16 Печать лазерная. Объем 1,25 п.л. Заказ 36 Тираж 50

Государственное унитарное полиграфическое предприятие «Печатник», 109316 Москва, ул. Талалихина, 33

РНБ Русский фонд

2004-4 27342

Оглавление диссертации Довбыш, Вера Сергеевна :: 2004 :: Москва

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Таксономическое положение и краткая историческая справка изучения возбудителя иерсиниоза.

1.2. Распространение Yersinia enterocolitica в природе, источники и пути заражения животных и человека.

1.3. Свойства Yersinia enterocolitica и дифференциация от сходных энтеробактерий.

1.4. Факторы патогенности Yersinia enterocolitica.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Методы оценки дифференциально-диагностических питательных сред.

2.2. Методы изучения дифференциально-диагностических признаков культур Y.enterocolitica.

2.3. Методы определения вирулентности и свойств Y.enterocolitica, связанных с плазмидой вирулентности.

2.4. Методы определения адгезивности, инвазивности и гемолитической активности.

2.5. Методы оценки энтеротоксигенности.

2.6. Методы статистической обработки результатов исследований.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Определение оптимальной дифференциально-диагностической питательной среды для выделения Y.enterocolitica.

3.2. Сравнительное изучение дифференциально-диагностических признаков культур Y.enterocolitica и сходных энтеробактерий.

3.3. Определение вирулентности и свойств Y.enterocolitica, связанных с плазмидой вирулентности.

3.4. Факторы патогенности Y.enterocolitica (адгезивность, инва-зивность, энтеротоксигенность).

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Довбыш, Вера Сергеевна, автореферат

Благодаря исследованиям А.Б. Дайтера и соавт. (1987); Н.Ф. Тимченко (1989); Г.В. Ющенко (1989); Ю.Е. Полоцкого (1992); И.В. Смирнова (1992); Г.Г. Гурлевой (1994); Г.Я. Ценевой (1997); В.Ю. Литвина (1999); А.Р. Мав-зютова (2001); R.R. Brubaker (1983); G. Kapperud et al. (1987); R.M. Robins-Browne et al. (1993); B. China et al. (1994); G. Cornelis et al. (1994) и др., доказана роль Y.enterocolitica в этиологии болезней человека, протекающих по типу пищевой токсикоинфекции. Установлено, что генотип патогенных штаммов иерсиний включает хромосомные и плазмидные детерминанты, кодирующие образование факторов патогенности.

И.И. Савчук, 1989; И.И. Писаренко, 1990; М.П. Елезов, 1994; B.C. Ефремов, 1995; JI.C. Каврук, 1995; В.А. Сабурин, 1995; В.Г. Скрыпник, А.В. Митрофанов, 1997; К.В. Шумилов, Л.П. Мельниченко, 1998; А.С. Собакин, Л.Ф. Зыкин, 1998; В.К. Тихонов, 1999; Е.М. Ленченко, 2000; З.Ю. Хапцев, 2000; Р.Б. Корочкин, 2003).

Наличие перекрестных серологических реакций Y.enterocolitica 09 с представителями рода Brucella обусловливает получение ложноположитель-ных результатов при исследовании сыворотки крови животных из благополучных по бруцеллезу хозяйств (B.C. Ефремов, 1995; Л.П. Мельниченко и соавт., 2001; Т.С. Астахова, 2002; В.Б. Кузьмина, 2002).

Сельскохозяйственные животные являются основным источником возбудителя инфекции, а продукты животного происхождения — ведущими факторами передачи возбудителя иерсиниоза человеку (Санитарные правила. 3.1.094-96; Ветеринарные правила 13.3.1318-96). В этой связи изучение биологических свойств указанных микроорганизмов представляет социальную значимость. Изыскание эффективных дифференциально-диагностических питательных сред для индикации микроорганизмов Y.enterocolitica в различных объектах, а также научное обоснование определения патогенных свойств эпизоотических штаммов иерсиний, являются актуальными для ветеринарной медицины.

Задачи исследований:

4. Изучить адгезивные и инвазивные свойства Y.enterocolitica.

6. Изучить морфологические изменения в тканях лабораторных мышей при воздействии энтеротоксина Y.enterocolitica.

Практическая значимость. Установлено, что дифференциально-диагностическая среда с бромтимоловым синим (СБТС) является оптимальной для выделения и первичной идентификации Y.enterocolitica от таксоно-мически близких бактерий по сравнению со средами Эндо, Левина, Плоски-рева, висмут-сульфит агаром.

Для определения энтеротоксигенности культур Y.enterocolitica предложено использовать плантарный тест на лабораторных мышах.

Апробация материалов диссертации. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях кафедры инфекционных и паразитарных болезней МГУПБ (Москва, 2001-2003 гг.); международной научно-практической конференции: «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» (Воронеж, 2002); 4-ой международной научно-практической конференции: «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (М., 2002); 2-ой международной научной конференции студентов и молодых ученых: «Живые системы и биологическая безопасность населения» (М., 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 работ.

Основные положения, выносимые на защиту:

• Сравнительная оценка дифференциально-диагностических питательных сред для выделения Y.enterocolitica.

• Видовой состав энтеробактерий, выделенных из объектов ветеринар-но-санитарного надзора.

• Характеристика факторов патогенности Y.enterocolitica.

Заключение диссертационного исследования на тему "Характеристика факторов патогенности Yersinia enterocolitica"

выводы

1. Из патологического материала и фекалий поросят и телят, кормов, замороженной свинины и свиных языков выделены 367 культур микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, в том числе 11 культур Y.enterocolitica.

2. Культуры микроорганизмов, идентифицированные как Y.enterocolitica, выделены из следующих объектов: 5 культур микроорганизмов — из патологического материала и фекалий поросят; 1 культура — из патологического материала телят; 4 культуры - из свинины и свиных языков; 1 культура — из комбикорма.

3. Для индикации Y.enterocolitica из объектов ветеринарно-санитарного надзора оптимальной является среда с бромтимоловым синим (СБТС), которая обладает выраженными ростообеспечивающими свойствами, ингибирует рост грамположительной микрофлоры, позволяет дифференцировать Y.enterocolitica от уреазонегативных бактерий.

4. Культуры Y.enterocolitica чувствительны к антибиотикам группы фторхинолонов (энрофлону, байтрилу), устойчивы к антибиотикам группы природных и полусинтетических пенициллинов (бензилпенициллину, окса-циллину, ампициллину, карбенициллину), олеандомицину, линкомицину, ристомицину.

5. Адгезивной активностью обладают 11 культур Y.enterocolitica, из них 3 — высокоадгезивные; 2 - среднеадгезивные; 6 - низкоадгезивные; инва-зивность в слабой степени характерна для 2-х культур, гемолитическая активность у всех культур отсутствует; энтеротоксигенность выявлена у 4-х культур микроорганизмов.

6. Плантарный тест является легко воспроизводимым в практических условиях, чувствительным, качественным методом определения энтероток-сигенности культур Y.enterocolitica.

Практические предложения

1. При бактериологическом исследовании патологического материала от животных раннего постнатального периода, павших от болезней с невыясненной этиологией, следует учитывать как возможность первичной этиологической роли иерсиний, так и вероятность смешанной инфекции, при этом для выявления микроорганизмов Y.enterocolitica рекомендуется использовать среду с бромтимоловым синим.

3. Разработаны и применяются в учебном процессе — Иерсиниоз как пищевая токсикоинфекция: Методические указания к самостоятельной работе студентов спец. 310800 - Ветеринария, 072000 — Стандартизация и сертификация. - М.: МГУПБ, 2001. - 28 с.

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2004 года, Довбыш, Вера Сергеевна

1. Адамов А.К. Влияние на персистенцию возбудителей инфекции особенностей взаимодействия их детерминант вирулентности с метаболическими и специфическими механизмами иммунитета // ЖМЭИ. — 1994. — прил. авг/сент. С. 99-103.

2. Астахова Т.С. Разработка иммуноферментной тест-системы для диагностики иерсиниоза крупного рогатого скота: Дисс.канд. биол. наук. -Щелково, 2002.-91 с.

3. Белая О.Ф. Реакция коагглютинации при кишечных инфекционных заболеваниях: Методические рекомендации / О.Ф. Белая, B.JI. Черкасов, Ю.А. Белая и др. -М., 1990.-12 с.

4. Белова М.А. Случай выделения Yersinia enterocolitica от человека МЛ. Белова, Г.В. Ющенко // ЖМЭИ. 1968. - №9. - С. 148-150.

5. Блохина И.Н. Новое в классификации и идентификации энтеробак-терий /И.Н. Блохина, К .Я. Соколова, Г.Ф. Леванова //ЖМЭИ. 1992. - №1. -С. 49-52.

6. Бондаренко В.М., Волянский Ю.А., Бондаренко В.М. Питательная селективная среда ЭСГФК для выделения кишечных иерсиний: АС №1208807 А СССР. МКН с 12 № 1/20. Опубл. 07.06.84. Бюл. №21.

7. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса // ЖМЭИ. — 1999. №5. С. 34-39.

8. Бри лис В.И. Методические возможности изучения роли адгезии и колонизирующей способности микроорганизмов /В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Л.А. Левков // Теоретические и практические проблемы гнотобиологии. М.: Агропромиздат, 1986. - С. 206-212.

9. Вартанян Г.Г. Факторы патогенности энтеробактерий, выделенных при диареях новорожденных телят: Автореф. дисс.канд. биол. наук. — Або-вян, 1991.-23 с.

10. Вартанян Ю.П. Методы биологического тестирования энтеротокси-нов // ЖМЭИ. 1981. - №3. - С. 19-24.

11. Венедиктов B.C. Хемотаксис Yersinia pseudotuberculosis как механизм поиска тканевых мишеней организма хозяина / B.C. Венедиктов, Н.Ф. Тимченко, Ф.Ф. Антоненко, В.И. Степаненко // ЖМЭИ. 1988. - №5. - С. 77-81.

12. Вертиев Ю.В. Бактериальные токсины: биологическая сущность и происхождение // ЖМЭИ. 1996. -№3. - С. 43-45.

13. Водопьянов С.О. Феномен пилеобразования у Yersinia enterocolitica: Дисс.д-ра мед. наук. Ростов-на-Дону. - 1995. - 236 с.

14. Водопьянов С.О. Генотипическое изучение штаммов Yersinia enterocolitica в полимеразной цепной реакции с использованием универсальных праймеров / С.О. Водопьянов, И.П. Олейников, Г.Г. Гурлева, Б.Н. Мишань-кин // Биотехнология. 1995. - №3-4. - С. 35-37.

15. Габрилович И.М. Использование специфических бактериофагов для характеристики культур Yersinia enterocolitica / И.М. Габрилович, Т.Ч. Жуго-ва, Г.В. Ющенко, В.И. Дунаев // Актуальные вопр. профилактики ОКЗ. -Таллин, 1985.-С. 104-105.

16. Гаффаров Х.З. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят / Х.З. Гаффаров, А.В. Иванов, Е.А. Непоклонов, А.З. Равилов- Казань: Фэн, 2002.

17. Гефан Н.Г. Приготовление и использование агглютинирующих сывороток для идентификации и типирования Yersinia enterocolitica: Автореф. дисс. .канд. мед. наук. Иркутск, 1996. - 22 с.

18. Гинцбург A.JI. Плазмиды и мобильные генетические элементы патогенных бактерий рода Yersinia // Генетика. 1987. - т. XXIII. - №4. - С. 581-595.

19. Гордейко В.А. Пути циркуляции и эпидемиологическое значение иерсиний в агроценозах: Автореф. дисс.канд. мед. наук. — М., 1990.

20. Гурлева Г.Г. О бактериофагии и бактериоциногении Y.enterocolitica /Г.Г. Гурлева, Э.Г. Григорьян, Л.Н. Шашнев //ЖМЭИ. 1979. - №4. - С. 9-12.

21. Гурлева Г.Г. Сравнительная оценка роста Yersinia enterocolitica на разных элективных средах / Г.Г. Гурлева, Л.Д. Колпикова // Лабораторное дело.-1989.- №4.-С. 71-72.

22. Гурлева Г.Г. Коллекция представителей рода Yersinia: некоторые аспекты биологических свойств и лабораторной диагностики: Автореф. дисс.д-ра мед. наук. — Ростов-на-Дону, 1994.

23. Дайтер А.Б., Полоцкий Ю.Е., Ценева Г.Я. Патогенные свойства иерсиний и их роль в патологии иерсиниозов //ЖМЭИ. 1987. - №2. — С. 108-115.

24. Далин М.В., Фиш Н.Г. Адгезины микроорганизмов //Итоги науки и техники. Микробиология. 1985. — Т. 16. - С. 3-57.

25. Дегтяренко Л.Н. Некоторые морфологические и антигенные свойства L-форм бруцелл и иерсиний // Эпизоотология, диагностика и меры борьбы с инфекционными болезнями. Новосибирск, 1986. - С. 135-142.

26. Джентемирова К.М. Некоторые вопросы экологии Yersinia enteroco-litica в кормах // Тезисы НПК. Владивосток, 1989. - Ч. 1. - С. 81-83.

27. Догель JI.3. Свойства Yersinia enterocolitica и гигиеническая оценка технологии производства молока и молочных продуктов в связи с возможностью передачи иерсиниоза: Автореф. дисс.канд. мед. наук. — М., 1985. —19 с.

28. Довгаль Г.Д. Биологические свойства Yersinia enterocolitica в зависимости от источника их выделения: Автореф. дисс.канд. биол. наук. — Алма-Ата. 1988. - 25 с.

29. Домарадский И.В. Вирулентность бактерий как функция адаптации // ЖМЭИ. 1997. - №4. - С. 16-20.

30. Езепчук Ю.В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий. — М.: Наука, 1977.-216 с.

31. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул. — М.: Медицина, 1985.-240 с.

32. Елезов М.П. Иерсиниоз крупного рогатого скота в условиях северного экономического района РФ (эпизоотология, меры борьбы): Дисс.канд. вет. наук. Н.Новгород, 1994. - 157 с.

33. Ефремов B.C. Дифференциация перекрестных серологических реакций, обусловленных Yersinia enterocolitica 09 при диагностике бруцеллеза животных: Автореф. дисс.канд. вет. наук. -М., 1995.-22 с.

34. Желудков М.М. Характеристика антигенных комплексов, обусловленных перекрестными реакциями между бруцеллами и Yersinia enterocolitica 09 / М.М. Желудков, Е.А. Драновская // ЖМЭИ 1985 - №5 - С. 49-51.

35. Зароза В. Г. Эшерихиоз телят. М.: ВО "Агропромиздат", 1991. - С.15.32.

36. Зон М.Г. Иерсиниозные диареи кур // Материалы девятого Московского международного ветеринарного конгресса. М., 2001. - С. 91-92.

37. Исачкова JI.M. Псевдотуберкулез: Дисс.д-ра мед. наук. — Владивосток-Москва, 1990.-392 с.

38. Каврук JI.C. Тесты, критерии и методы ускоренной санитарно-бактериологической оценки репродукторных помещений животноводческих ферм и пути оптимизации в них микробиоценоза: Автореф. дисс.д-ра вет. наук. М.: ВНИИВСГЭ, 1994. -43с.

39. Каландадзе Е.П. Псевдотуберкулез и иерсиниоз в крупном птицеводческом комплексе: Дисс.канд. мед. наук. — М., 1991. 170 с.

40. Карплюк И.А. Обсемененность молока и молочных продуктов Yersinia enterocolitica на этапах технологического процесса их получения и производства / И.А. Карплюк, Г.В. Ющенко, JI.3. Догель и др. // Вопр. питания. 1985. - №6. - С. 57-59.

41. Кирьянов Е.А., Савчук И.И. Роль Y.enterocolitica в патологии сельскохозяйственных животных // Иерсиниозы (микробиология, эпидемиология, клиника, патогенез, лабораторная диагностика): Тезисы Всесоюзной НПК. — Владивосток, 1989.-Ч. 1.-С. 89-91.

42. Ковальчук Н.М. Иммунохимическое выявление термостабильного энтеротоксина эшерихий в кишечном содержимом телят: Автореф. дисс.канд. вет. наук. М., 1985. — 18 с.

43. Корочкин Р.Б. Иерсиниоз свиней (эпизоотология, диагностика, профилактика): Автореф. дисс.канд. вет. наук. — Минск, 2003. — 20 с.

44. Колос Е.Н. Сельскохозяйственные животные как источник иерси-ниоза / Е.Н. Колос, И.Н. Гнутов, Г.В. Ющенко, В.И. Дунаев // ЖМЭИ. 1985. - №4. — С. 77-80.

45. Костюкова Н.Н. Начальный этап инфекционного процесса — колонизация и пути ее предотвращения II ЖМЭИ. 1989. - №9. - С. 103-109.

46. Королюк A.M. Применение реакции коагглютинации для обнаружения и быстрой идентификации возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза // Лаб. дело. 1984. - №4. - С. 250-252.

47. Кузнецов В.Г. Роль рефрежераторов в распространении бактерий рода Yersinia / В.Г. Кузнецов, В.Н. Багрянцев, В.В. Клименко // Гигиена и санитария. 1992. - №2. - С. 43-46.

48. Кузнецов В.Г. Пиразинамидаза как маркер патогенности иерсиний // ЖМЭИ. 1999. - №11. - С. 107-111.

49. Кузнецов В.Г. Адгезия и аутогезия иерсиний: выявление и роль в экологии // Инфекции, обусловленные иерсиниями (иерсиниоз, псевдотуберкулез) и другие актуальные инфекции: Материалы межд. конф. СПб., 2000. -С. 28.

50. Кузнецов В.И. Дифференциально-диагностическая среда для выделения бактерий рода Yersinia // Лаб. дело. 1991. - №3. - С. 77-78.

51. Куликовский А.В. Иерсиниоз — актуальная проблема ветеринарной медицины / А.В. Куликовский, К.М. Джентемирова // Ветеринария. — 1993. -№11-12.-С. 28-35.

52. Кузьмина В.Б. Изучение зависимости диссоциации Yersinia entero-colitica от температуры выращивания и питательной среды // Сб. научных трудов ВГНКИ. 2002.

53. Ленченко Е.М. Биология и экология иерсиний — возбудителей пищевых токсикоинфекций: Автореф. дисс.д-ра вет. наук. М.: МГУПБ, 2000.-46 с.

54. Литвин В.Ю. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий / В.Ю.Литвин, А.Л. Гинцбург, В.И. Пушкарева, Ю.М. Романова, Б.В. Боев — М., 1999.-256 с.

55. Мавзютов А.Р. Молекулярно-генетические основы токсигенности условно-патогенных представителей Enterobacteriaceae: Дисс.д-ра мед. наук.-Уфа, 2001.-236 с.

56. Мельниченко Л.П. Влияние внешних факторов на рост и изменчивость Yersinia enterocolitica 09 // Тез. докл. конф., посвященной 100-летию открытия вируса ящура. Владимир, 1997. -. 205-206.

57. Мельниченко Л.П. Использование РА для дифференциальной диагностики иерсиниоза и бруцеллеза / Л.П. Мельниченко, К.В. Шумилов, А.Н. Панин, О.Д. Скляров, А.И. Климанов, И.Л. Обухов // Сб. научных трудов ВГНКИ. 2001. - Т. 62. - С. 156-161.

58. Михайлов Л.М. Использование моноклональных антител для выявления общих антигенных детерминант Brucella spp. и Yersinia enterocolitica 09 / Л.М. Михайлов, A.M. Титенко, М.П. Рудник, О.Д. Захлебная // ЖМЭИ. — 2000.-№3.-С. 63-66.

59. Наттерман X. Этиология и патогенез иерсиниоза //X. Наттерман, Ф. Хорш // Ветеринария. 1987. - №10.

60. Онищенко Г.Г. О состоянии инфекционной заболеваемости в Российской Федерации в 2000 г. и принимаемых мерах по ее стабилизации // ЖМЭИ. 2001. - №5. - С. 3-7.

61. Петровская В.Г. Проблема вирулентности бактерий (химические, метаболические, экологические и генетические аспекты). — Л.: Медицина, 1967.-247 с.

62. Петровская В.Г. Роль хромосомы и ее взаимодействие с внехромо-сомными детерминантами в процессе генетического контроля патогенности бактерий / В.Г. Петровская. В.М. Бондаренко // Молекулярная генетика. М.: Медицина, 1994. - №5. - С. 3-8.

63. Пирожков М.К. Биологические препараты для специфической профилактики и терапии эшерихиоза животных: Автореф. дисс.д-ра вет. наук. М: ВГНКИ, 2002. - 50 с.

64. Писаренко И.И. Характеристика иерсиний, выделенных от овец / И.И. Писаренко, С.И. Куцевалов, C.JI. Проценко // Ветеринария. 1990. - №2. -С. 43-46.

65. Подболотов К.В. К эпизоотологической оценке кишечного иерси-ниоза в Сахалинской области / К.В. Подболотов, B.C. Сурков // ЖМЭИ. -1984,-№2.-С. 71-73.

66. Покровский В.И. Патогенез кишечных инфекций как проявление взаимодействия возбудителей с организмом хозяина / В.И. Покровский, Ю.Е. Полоцкий, Н.Д. Ющук, В.М. Бондаренко // ЖМЭИ. 1989. - №4. - С. 80-87.

67. Полоцкий Ю.Е. Адгезивность, инвазивность и энтеротоксигенность возбудителей кишечных инфекций / Ю.Е. Полоцкий, Т.А. Авдеева // ЖМЭИ. -1981.-№5.-С. 23-32.

68. Полоцкий Ю.Е. Патогенез кишечных инфекций и морфологическая оценка вакцин / Ю.Е.Полоцкий, В.М. Бондаренко, В.Е. Ефремов // ЖМЭИ. — 1992.-№5-6.-С. 51-57.

69. Померанцев Д.А. Разработка методов бактериологической диагностики кишечного иерсиниоза сельскохозяйственных животных: Дисс.канд. биол. наук. Ульяновск, 2000. - 147 с.

70. Пушкарева В.И. Патогенные бактерии в почвенных и водных сообществах (экспериментально-экологическое исследование): Дисс.д-ра биол. наук. М., 1994.

71. Разник С.Д. Характеристика биологического действия термостабильного токсина Yersinia pseudotuberculosis: Дисс.канд. мед. наук. — Владивосток. 1999. - 127 с.

72. Ритшел Э.Т. Бактериальные эндотоксины / Э.Т.Ритшел, X. Браде //

73. В мире науки. 1992. - №9. с. 92-100.

74. Сабурин В.А. Иерсиниоз животных в правобережной части среднего Поволжья (эпизоотология, меры борьбы): Дисс.канд. вет. наук. — Н. Новгород. 1995. - 148 с.

75. Светличкин О.В. Разработка тест-систем обнаружения Y.enterocolitica с использованием полимеразной цепной реакции и ДНК-зондов // Тезисы докл. Всеросс. НПК, 8-9 июня. — Щелково, 2000. С. 388.

76. Серов Г.Д. Дифференциальная среда для выделения микроба псевдотуберкулеза / Г.Д. Серов, В.Г. Знаменский, А.К. Вишняков // ЖМЭИ. — 1968.-№6.-С. 146-149.

77. Скрыпник В.Г. Роль Yersinia enterocolitica в патологии КРС / В.Г. Скрыпник, А.В. Митрофанов // Тез. докл. конф., посвященной 100-летию открытия вируса ящура. — Владимир, 1997. С. 210.

78. Смирнов И.В. Фенотип возбудителя иерсиниоза и его значение для диагностики / И.В. Смирнов, Г.Я. Ценева // ЖМЭИ. 1992. - №1. - С. 60-65.

79. Смирнов И.В. Генетические аспекты вирулентности Y.enterocolitica и их значение для микробиологической диагностики иерсиниоза: Дисс.д-ра мед. наук.— Рязань, 1991. — 320 с.

80. Смирнова JT.A. Способ определения энтеротоксигенности у кишечных палочек на мышах-сосунках / Л.А. Смирнова, Т.А. Авдеева, В.Е. Ефремов // Дизентерия. Эшерихиозы. Сальмонеллезы: Труды института им. Пас-тера. — Л., 1978.-Т. 50.-С. 65-69.

81. Собакин А.С. Выявление кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза у животных / А.С. Собакин, Л.Ф. Зыкин, З.Ю. Хапцев, В.Ф. Оркин // Ветеринария. 1998. - №8. - С. 15-16.

82. Сомов Г.П. Псевдотуберкулез / Г.П. Сомов, В.И. Покровский, Н.И. Беседнова. — М.: Медицина, 2001. 2-е изд. перераб. и доп. — 256 с.

83. Старостина Н.В. Эпидемиологические и экологические особенности заболеваний, вызываемых Y.frederiksenii, Y.kristensenii и Y.intermedia: Автореф. дисс.канд. мед. наук. — М., 2000. — 22 с.

84. Субботин В.В. Биотехнология пробиотика лактобифадола (бифаци-добактерина) и его лечебно-профилактическая эффективность: Автореф. дисс.д-ра вет. наук. — М., 1999. 45 с.

85. Тец В.В. Роль температурозависимых систем в регуляции свойств патогенных бактерий // ЖМЭИ. 1993. - №1. - С. 106-111.

86. Тимченко Н.Ф. Патогенетическое значение психрофильности Yersinia pseudotuberculosis: Автореф. дисс.д-ра мед. наук. — Ленинград, 1989. — 45 с.

87. Хайруллина Р.Г. Изоляция культур Y.enterocolitica с объектов внешней среды за период с 1994 по 1999 гг. // ЖМЭИ. 2001. - №3. - С. 111 -112.

88. Хапцев З.Ю. Усовершенствование лабораторной диагностики кишечного иерсиниоза сельскохозяйственных животных: Дис.канд. биол. наук. Саратов, 2000. - 124 с.

89. Ценева Г.Я. Сравнительная оценка взаимодействия иерсиний с клетками Нер-2 / Г.Я. Ценева, Ю.Е. Полоцкий, М.С. Манохина, С.А. Лохма-това // ЖМЭИ. 1986. - №12. - С. 9-12.

90. Ценева Г.Я. Инвазивность и цитотоксичность как критерии оценки аттенуации иерсиний / Г.Я. Ценева, В.М. Бондаренко, Ю.Е. Полоцкий, И.В. Смирнов, В.Л. Попов, Н.С. Смирнова // ЖМЭИ. 1988. - №9. - С. 10-15.

91. Ценева Г.Я. Лабораторная диагностика псевдотуберкулеза и иерсиниоза. СПб, 1997. - 60 с.

92. Черневская О.М. Биологическая характеристика условно-патогенных энтеробактерий, выделенных в промышленных животноводческих комплексах: Автореф. дисс.канд. биол. наук. -М., 1995. 15 с.

93. Шумилов К.В. Современные данные об иерсиниозе животных / К.В. Шумилов, Л.П. Мельниченко, В.В. Селиверстов // Ветеринария. — 1998. -№4.-С. 7-13.

94. Ющенко Г.В. Об антигенном родстве возбудителей псевдотуберкулеза и иерсиниоза с некоторыми представителями семейства кишечных бактерий / Г.В. Ющенко, В.И. Дунаев // Эпидемиология и профилактика кишечных инфекций. Таллин, 1978. — С. 305-306.

95. Ющенко Г.В. Экологические аспекты эпидемиологии иерсиниоза и псевдотуберкулеза: Автореф. дисс.д-ра мед. наук. -М., 1989. -45 с.

96. Ющенко Г.В. Некоторые свойства иерсиний при различных условиях культивирования и их значение в эпидемиологии / Г.В. Ющенко, Ю.Б. Елкина, В.И. Дунаев // Материалы XVIII съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов. -М., 1989.

97. Ющук Н.Д. Патогенные свойства возбудителя и иммунологические показатели при экспериментальной иерсиниозной инфекции / Н.Д. Ющук, Т.В. Аленушкина, И.В. Смирнов, Е.А. Воскресенская // ЖМЭИ. — 1994. прил. авг/сент. - С. 122-126.

98. Aldova Е., Skorkovsky В., Kapinus J. i dr. On the ecology of Yersinia enterocolitica ОЗ. Yersinia in synanthropic animals // Zbl. Bacteriol., Parasitenk., Infectionskrankh und Hyg. 1980. - Abs. 1. - Orig. 246. - №3. - P. 344-352.

99. Asien P., Leibman A. Lacroferrin and transferrin: a comparativ study // Biochim. Biophis. Acta. 1972. - Vol. 257. - P. 314-323.

100. Bercovier H., Alonso J., Bentaiba Z. et al. Contribution to the definition and the taxonomy of Yersinia enterocolitica // In Contribution to Microbiology and Immunology. 1979. - Vol. 5. - P. 12-22.

101. Bielecka Z., Jakubczak a., Andziak J., Stypulkowska-Misiurewicz H. Temperatura-dependent production of enterotoxin by Yersinia enterocolitica isolated from healthy swines // Med. dosw. i microbial. 1988. - Vol. 40. - №3. - P. 124-129.

102. Bockemuhl I. Epidemiology and visk factors of Yersinia infections in humans // Working paper for WHO concultation emergini foodborne diseases agents. Berlin, 1995. - 20-24 March.

103. Bodnaruk Peter W., Williams Robert C., Golden David A. Survival of Yersinia enterocolitica during fermentation and storage of yogurt //J. Food Sci. — 1998. T. 63. - №3. - C. 535-537.

104. Bolin I, Portnoy D.A., Wolf-Watz H. Expression of the temperature-inducible outermembrane proteins of Yersiniae // Infection and Immunity. — 1985. Vol. 48. - №1. - P. 234-240.

105. Bolin I, Forsberg A., Norlander L. et al. Identification and mapping of the temperature-inducible, plasmid-encoded proteins of Yersinia spp. // Infect, and Immun. 1988. - Vol. 56. - P. 343-348.

106. Boyce J.M., Evans D.J., Jr. Evans D.G., DuPont H.L. Production of heat stable, methanol-soluble enterotoxin by Yersinia enterocolitica // Infection and Immunity . 1979. - Vol. 25. - №2. - P. 532-537.

107. Brubaker R.R. The Vwa+ virulence factor of yersiniae: molecular basis of the attendant nutritional requirement for Ca+ //Rev. Infect. Dis. — 1983. — Vol. 5.-P. 5748-5758.

108. Caprioli Т., Drapeau A., Kasatiya S. Yersinia enterocolitica: Serotypes and biotypes isolated from humans and the environment in Quebec, Canada //J. Clinical Microbiol. 1978. -№8. -P. 7-11.

109. Carniel E., Maziyh D., Mollaret H.H. Expression of iron-regulated proteins in Yersinia species and their relation to virulence //Infect, and Immun. — 1987. Vol. 55. - №1. - P. 277-280.

110. Caroff M., Bundle D.R., Perry M.B. Structure of the O-chein of the phenolphase soluble cellular lipopolisaccaride of Yersinia enterocolitica serotype 09 // Eur. J. Biochem. 1984.- Vol. 139. -№1. - P. 195-200.

111. Carter P.B. Pathogenicity of Yersinia enterocolitica for nice //Infect, and Immun.-1975.-Vol. 11.-№1.-P. 164-170.

112. China В., Soiy M-P., N'Guyen B.T., De Bruyere M., Cornelis G. Role of the YadA protein in prevention of opsonization of Yersinia enterocolitica by C3b molecules // Infection and Immunity . 1993 - Vol. 61- P. 3126-3129.

113. China В., N'Guyen B.T., De Bruyere M., Cornelis G.R. Role of YadA in resistance of Yersinia enterocolitica to phagocytosis by human polymorphonuclear leukocytes //Infection and Immunity. 1994. Vol. 62(4). - P. 1275-1281.

114. Christensen S.G. The prevalence of Yersinia enterocolitica in slaughter animals, water and raw milk in Denmark. — London: Academic Press, 1982.

115. Corbel M.J., Brewer R.A., Hunter D. Characterisation of Yersinia enterocolitica strains associated with ovine abortion // Veter. Rec. 1990. - Vol. 127. -P. 526-527.

116. Cornelis G., Laroche В., Balligand G., Sory M.-P., Wauters G. Yersinia enterocolitica, a primary model for bacterial invasiveness // Rev. Infect. Diseases. 1987. - Vol. 9. - № 1. - P. 64-87.

117. Cornelis G.R. Yersinia Pathogenicity Factors // Bacterial pathogenesis of plans and animals. Molecular and cellular mechanisms. 1994. - P. 243-261.

118. Croci L., De Filip G., Gazzarelli S. et al. Determination of Yersinia enterocolitica ST toxin in foods // Microbiol., alim., nutr. 1988. - Vol. 6. - №1. -P. 95-100.

119. Czernomysy-Furowicz D., Furowicz A.J., Karakulska J., Nawrotek P., Peruzynska A., Kalisinska E. A case of isolation Yersinia enterocolitica from duck muscles // Adv. in agr. Sc. Szczecin, 1999. - Vol. 6. fasc. 1. - P. 19-23.

120. Delor I., Cornelis G.R. Role of Yersinia enterocolitica Yst toxin in experimental infection of young rabbits // Infect, and Immun. 1992. - Vol. 60. -P. 4269-4277.

121. Finlay B.B., Falkow S. Common themes in microbial pathogenition and thermal resistance of Yersinia enterocolitica in milk // Appl. Environ. Microbiol. 1980. - Vol. 40.-P. 174-176.

122. Francis D.W., Spaulding P.L., Lovelt J. Enterotoxin production and thermal resistance of Yersinia enterocolitica in milk // Appl. Environ. Microbial. — 1980.-Vol. 40.-P. 174-176.

123. Fukushima H., Tsubokura M., Otsuki K., Kawaoka Y. Suppression of heat-stable enterotoxin production by Yersinia spp. in milk // Veter. Microbial. — 1986.-T. 11.-№1-2.-P. 163-172.

124. Gemski P., Lazare J.R., Casey T. Plasmid associated with pathogenicity and calcium dependency of Yersinia enterocolitica // Infection and Immunity. -1980. Vol. 27. - P. 682-685.

125. Hanna M.O., Stewart J.C., Zink D.L., Carpenter Z.L., Vanderzant C. Development of Yersinia enterocolitica on raw and cooked beef and pork at different temperatures // J. Food Sc. 1977. - Vol. 42. - P. 1180-1184.

126. Heesemann J., Griiter L. Genetic evidence that the outer membrane protein YOP 1 of Yersinia enterocolitica mediates adherence and phagocytosis resistance to human epithelia cells // FEMS Microbiol. Lett. — 1987. Vol. 40. - P. 37-41.

127. Heesemann J., Eggers C, Schroder J. Serological diagnosis of Yersinia by immunoblot technique using virulence-associated of enteropathogenic Yersinia // Contr. Microbiol. Immunol. 1987. - Vol. 9. - P. 285-289.

128. Hughes D. Isolation of Yersinia enterocolitica from milk and a dairy farm in Australia // J. Appl. Bacteriol. 1979. - Vol. 46. - P. 125-130.

129. Inoue Т., Okamoto K., Moriyama T. et al. Effect of Yersinia enterocolitica ST on cyclic guanosine-3'5 monophosphate levels in mouse intestines and cultured celes // Microbiol, and Immunol. - 1983. - Vol. 27. - №2. - P. 159-166.

130. Inoue M., Kurose M. Isolation of Yersinia enterocolitica from cows intestinal contents and beef // Japanese Journal of Veterinary Science. — 1975. -№37.-P. 91-93.

131. Irlarte M., Cornelis G.R. Yop T, a new Yersinia Yop effector protein, affects the cytoskeleton of host cells // Mol. Microbiol. 1998. - Vol. 29. - P. 915929.

132. Jakubczak A. Chorobotworczosc palecrek Yersinia enterocolitica izolowanych od trzody chlewnej ich wystepowanie // Acta Acad. Agriculturae ac technicae olstenensis, 501. Veterinaria №22, suppl. A. 1995. - 33 c.

133. Jones G.W., Isaacson R.E. Proteinaceous bacterial adhesions and their receptors //Crit. Rev. Microbiol. 1983. - Vol. 10. - №3. - P. 229-260.

134. Kandolo K., Wauters G. Pyrazinamidase activity in Yersinia enterocolitica and rerated organisms //J. Clinical Microbiol. 1985. - №6. - P. 980-982.

135. Kaneuchi C., Shibata M., Kawwasaki T. Occurrence of Yersinia spp. in migratory berds, seagulls and swallows in Japan // Japan J. veter. Sc. — 1989. -Vol. 51.-№4.-P. 805-808.

136. Kapperud G. Enterotoxin production at 4 °C, 22 °C and 37 °C among Yersinia enterocolitica and Yersinia enterocolitica-like bacteria // Acta pathol. et microbial. Scand. 1982. - Vol. B20. - №3. - P. 185-189.

137. Knapp W., Thai E. Differention of Yersinia enterocolitica by biochemical reactions //Contrib. Microbiol. Immunol. 1973. - Vol. 2. - P. 10-16.

138. Kwaga J. Plasmids and outer membrane proteins of Yersinia enterocolitica and related species of swine origin // Vet. Microbiol. — 1993. Vol. 36. -№3/4.-P. 205-214.

139. Laird W.J., Cavanaugh D.C. Correlation of autoagglutination and virulence of Yersiniae //J. of Clinic. Mocrobiol. 1980. - Vol. 11.- №4. - P. 430432.

140. Lambert de Rouvrioit C., Sluiters C., Cornelis G.R. Roul of transcriptional actinator, VirF, and temperature ib the expression of the pYV plasmid genes of Yersinia enterocolitica //Mol. Microbiol. 1992. - P. 395-409.

141. Lee W.H., McGrath P.P., Carter P.H., Eide E.L. The ability of some Yersinia enterocolitica strains to invade Hela cells // Canad. J. Microbiol. 1977. — Vol. 23.-P. 1714-1722.

142. Lian С .J., Pai C.H. Suppression of phagocytosis by plasmid associated outer membrane proteins of Yersinia enterocolitica // Abstr. Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol. 1986. - Washington, D.C. - 1986. - P. 51.

143. Lodish H., Baltimore D., Berk A. et al. In integrative and specialized cellular activities /In J.E. Darnel (ed), Molecular cell biology. Scientific American Books Inc. //New York, N.Y., 1995. P. 850-1342.

144. Lorenzo V.de., Martinez J.L. Aerobactin production as a virulence factor a reevaluation // Eur. J. Clin. Microbiol, and Infec. Diseases. — 1988. — Vol. 7. №5.-P. 621-629.

145. Маркик 3. Изолащца на бактерщата Yersinia enterocolitica серовар ОЗ од свиньи // Мак. Вет. преглед. 1993. - Г. 22, бр. '/з. - С. 13-16.

146. Могап А.Р. Structure bioactivity of bacterial-endotoxins // J. Toxicol. Toxin reviews. - 1995. - Vol. 14. - №1. - P. 47-83.

147. Michiels Т., Cornelis G. Nucleotide sequence and transcription analysis of yop51 from Yersinia enterocolitica W22703 // Microb. Pathog. 1988. -Vol. 5.-P. 449-459.

148. Miller V.L., Bliska J.B., Falkow S. Nucleotide sequence of the Yersinia enterocolitica ail gene and characterization of ail protein product // J. Bacteriol.- 1990.-Vol. 172. №2.-P. 1062-1069.

149. Mors V., Pai C.H. Pathogenic properties of Yersinia enterocolitica // Infect, and Immun. 1980. - Vol. 28. - P. 292-294.

150. Nattermann H., Horsch F., Seeger M. Epizootiolodie der Yersinia enterocolitica Infection in einem Schweinebestand // Mh. Veter. - Med. - 1985. -T. 40. - №11. — S. 366-370.

151. Nikolova S., Vesselinova A., Veljanov D. Role of irone in pathogenesis of guina pigs infected with Y.enterocolitica ОЗ // J. veter. Med. Ser. B. 1993. - Vol. 40. - №8. - P. 525-532.

152. Nilehn B. Srudies on Yersinia enterocolitica with special reference to bacterial diagnoses and occurrence in human acute enteric disease // Acta Pathol. Microbial. Scandinavica. 1969. - Vol. 206. - P. 1-48.

153. Okamoto K., Ichikawa H., Kawamoto Y., Miyama A., Yoshi S. Heat-stable enterotoxin produced by Yersinia enterocolitica isolated from patients //Microbiol, and Immunol. 1980. - Vol. 24. - P. 401-408.

154. Ohsone M., Kaneko K., Hayashidani H. et al. Growth and inhibition by acids of five spesies of pathogenic bacteria inoculated in salad vegetables // J. Food Hyg. Soc. Japan. 1999. - Vol. 40. - №4. - P. 297-303.

155. Pai C.H., Mors V. Production of enterotoxin by Yersinia enterocolitica // Infect, and Immun. 1978. - Vol. 19. - P. 908-911.

156. Pai C.H., Mors V., Omat E. Pathogenesis of Yersinia enterocolitica. Gastroenteritis in experimental infection // Abstrs 79th Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol., Los Angeles, Calif., 1979, Washington, D.C., 1979. 19 p.

157. Pai C.H., Mors V., Seemayer T.A. Experimental Yersinia enterocolitica enteritis in rabbits // Infect, and Immun. 1980. - Vol. 28. - №1. - P. 238244.

158. Павлов А. Проучвания вьрху наличието на Yersinia enterocolitica в сурово краве мляко //Ветер.-мед. Науки. 1985. — Т. 22. - №3. - С. 62-68.

159. Pedersen К.В., Winblad S. Studies on Yersinia enterocolitica isolated from swine and dogs // Acta Pathologica et Microbiologica Scandinavica Sections B. 1979. - Vol. 87. - №2. - P. 137-140.

160. Pederson K.J., Pierson D.E. Ail expression in Yersinia enterocolitica is affection by oxygen tension / /Infection and Immunity. — 1995. — Vol. 63. № 10. -P. 41999-4201.

161. Pepe J.C., Miller V.L. The biological role of invasin duting a Yersinia enterocolitica infection // Infect. Agents Diseases. 1993. - Vol. 2. — №4. — P. 236-241.

162. Pierson D.E., Falkow S. Nonpathogenic isolates of Yersinia enterocolitica do not contain functional inv-homologous sequences // Infection and Immunity. 1990. - Vol. 58.-№4.-P. 1059-1064.

163. Pilon J., Higgin R., Quessy S. Epidemiological study of Yersinia enterocolitica in swine herds in Quebec // Canad. Veter. J. 2000. - Vol. 41. - №5. — P. 383-387.

164. Platt-Samoraj A. A trial attempt to define the course of Yersiniosis in experimentally infected pigs // Advances in agricultural sciences . 1996. — Vol. 5. -Fasc. 1.-P. 37-45.

165. Platt-Samoraj A., Szweda W., Siwicki A.K. Wplyw zakazen Yersinia enterocolitica psow I kotow na wystepowanie jersiniozy u czlowicku // Med. Weter. 2000. - K. 56. - №6. - S. 379-381.

166. Popoff M.R. Interaction between bacterial toxins and intestinal cells // Toxicon.- 1998.-Vol. 36. -№4.-P. 665-685.

167. Rimpilainen M., Forsberg A., Wolf-Watz H. A novel protein, LcrQ, involved in the low-calcium response of Yersinia pseudotuberculosis showes extensive homology to Yop H // J. Bacteriol. 1992. - Vol. 174. - P. 3355-3363.

168. Robins-Browne R.M., Still C.S., Miliotis M.D., Koornhof H.J. Mechanism of action of Yersinia enterocolitica // Infec.and Immun. — 1978. — Vol. 25.-№2.-P. 680-684.

169. Rosqvist R., Forsberg A., Rimpalainen M. et al. The cytotoxic protein Yop E of Yersinia obstructs the primary host defence // Mol. Microbiol. — 1990. -Vol. 4.-P. 657-667.

170. Sears C.L., Kaper J.B. Enteric bacterial toxins: Mechanisms of action and linkage to intestinal secretion // Microbiol. Rev. 1996. - Vol. 60. — P. 167215.

171. Schiemann D.A. Isolation of Yersinia enterocolitica from surface and well waters in Ontario // Canadian Jornal of Microbiology. 1978. - Vol. 24. - P. 1048-1052.

172. Schiemann D.A. Isolation of toxigenic Yersinia enterocolitica from retail pork products // Journal of Food Protection. 1980. - Vol. 43. - P. 360-365.

173. Schiemann D.A. Yersinia enterocolitica in milk and dairy products // J. Dairy Sc. 1987. -T. 70. - №2. - P. 383-391.

174. Славчев Г. Проучвание на термостабилен ентеротоксин от щамо-ве на Yersinia enterocolitica серотип ОЗ // Ветер. Сб. 1990. — Т. 88. — №1. — С. 43-47.

175. Skurnik M., Bolin I., Heikkinen H., Piha S., Wolf-Watz H. Virulence plasmid-associated autoagglutination in Yersinia spp. //J. Bacteriol. 1984. - Vol. 158.-P. 1033-1036.

176. Skurnik M., Wolf-Watz H. Analysis of the yopA gene encoding the Yopl virulence determinants of Yersinia spp. // Mol. Microbial. — 1989. Vol. 3. -P. 517-529.

177. Slee K.J., Button C. Enteritis in sheep and goats due to Yersinia enterocolitica infection // Austral, veter. J. 1990. - Vol. 67. - №11. - P. 396-398.

178. Smith H.W. Microbial surfaces in relation to pathogenicity // Bact. Rev. 1977. - Vol. 41. - P. 475-500.

179. Stefanov I., Bozhkova K. Isolation of Yersinia enterocolitica and related species from retail minced meat // Bulg. J. agr. Sc.- 1998. Vol. 4. - №4. - P. 547-550.

180. Stern N.J., Pierson M.D., Kotula A.W. Effects of pH and sodium chloride on Yersinia enterocolitica growth at room and refrigeration temperatures // J. Food Sci. 1980. - Vol. 45. - №1. - P. 64-67.

181. Straley S.C., Piano G.V., Skrzypek E. et al. Regulation by Ca2+ in the Yersinia low- Ca2+ response// Mol. Microbiol. 1993. - Vol. 8. - P. 1005-1010.

182. Sugigawa Y., Takashima I. Adherence of Y.pseudotuberculosis and Y.enterocolitica to L929 cells association with virulence plasmid and effects of cultivation and adsorption temperatures // Jap. Vet. Sci. 1986. - V. 48. - №2. -P. 360-374.

183. Swaminathan В., Harmon M.C. & Mehlman I.J. A review Yersinia enterocolitica // Journal of Applied Bacteriology, 1982. Vol. 52. - P. 151-183.

184. Une T. Studies on the pathogenicity of Yersinia enterocolitica // Microbiol. Immunol. 1977. - Vol. 21. - №7. - P. 349-376.

185. Une Т., Brubaker R.R. Role of V-antigen in promotoring virulence and immunity in Yersiniae // J. of Immunology. 1984. - Vol. 133. №4. - P. 2226-2230.

186. Verma N.K., Misra D.S. Characterization of enterotoxin produced by four Yersinia enterocolitica strains of pig origin // Antonie van Leeuwenhoek. — 1984. Vol. 50. -№4. - P. 361-368.

187. Vokoun P. Depistoz Yersinia enterocolitica 03 u psu a kocek //Veterinarstvi. 1985.-T. 35. - №12. - S. 550-551.

188. Wauters G. Carraide of Yersinia enterocolitica serotyp 3 by pigs as source of human infection // Contributions to Microbiology and Immunology. — 1979.-Vol. 5. P. 249-252.

189. Wooley R.E., Shotts E.B., McConnell J.W. Isolation of Yersinia enterocolitica from selected animal species // American Jornal of Veterinary Research. 1980.-Vol. 41. - № 10.-P. 1167-1668.

190. Yanguela M.J., Herrera M.A., Kivas P.T., Brault J. Isolement de Yersinia enterocolitica de langues de pore et de carcasses de poullt // Microbiol. Aliments. Nutrit. 1987. - T. 5. - №4. - P. 339-343.

191. Zhang Z.Y., Clemens J.C., Schubert H.L. et al. Expression, parifica-tion and physicochemical characterization of recombinant Yersinia protein tyrosine phosphatase // J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267. - P. 23759-23766.

192. Zink D.L., Feeley J.C., Wells J.G., Vanderzant C., Vickery J.C., Roof W.D., O'Donovan G.A. Pasmid mediated tissue invasiveness in Yersinia enterocolitica // Nature, London. 1980. - Vol. 283. - P. 224-226.

193. Указанные результаты включены в курс лекций по дисциплине «Эпизоотология и инфекционные болезни животных»

194. Зав. кафедрой, профессор, Доктор ветеринарных наук1. Косминков Н.Е.

195. Учебно-методическое подразделение университета