Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Гистоморфологическая характеристика эндометрия у коров при субинволюции матки, эндометрите и воздействии антибактериальных препаратов

На правах рукописи /Л

ВОЛКОВА Диана Валерьевна

□□3487017

Гистоморфологическая характеристика эндометрия у коров при субинволюции матки, эндометрите и воздействии антибактериальных

препаратов

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных 16.00.07 - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

- 3 ДЕК 2009

Воронеж - 2009

003487017

Работа выполнена во Всероссийском НИВИ патологии, фармакологии и терапии.

Научные руководители: - доктор ветеринарных наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ СУЛЕЙМАНОВ Сулсйман Мухитдинович - доктор ветеринарных наук МИХАЛЁВ Виталий Иванович

Официальные оппоненты: - доктор биологических наук, профессор,

КАРТАШОВ СЕРГЕЙ НИКОЛАЕВИЧ - кандидат ветеринарных наук, СОТНИКОВ АЛЕКСАНДР АЛЕКСАНДРОВИЧ

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Донской государственный

аграрный университет»

Защита диссертации состоится 18 декабря 2009 года в 10 часов на заседании диссертационного совета ДМ 220.010.05 при ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки» (394087, г. Воронеж, ул. Мичурина 1, тел/факс (4732) 53-86-51).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки»

Автореферат разослан « /У» 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

ХРОМОВА Л.Г.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРТИКА

1.1. Актуальность темы. Одной из причин бесплодия коров в 60-80% случаев являются акушерско-гинекологические болезни, которые наносят большой экономический ущерб (А.И. Сергиенко, 1978; Н.И. Полянцев, 1978; И.Ф. Заянчковский, 1982; В.Г. Гавриш, 1996; А.Н. Турченко, 1997 и др.).

Задержка инволюционных процессов (субинволюция) в половых органах сопровождается развитием глубоких гистоморфологических изменений, отражающихся на воспроизводительной способности и нередко приводящих к бесплодию коров (A.M. Вайнтрауб, 1954; А.Я. Батраков, 1973; А.Г. Нежданов, 1987; А.Н. Турченко, 1999; В.Г. Гавриш, 1997; Р.Г. Кузьмич, 2000 и др.). ___

Из болезней половых органов коров наибольший процент приходится на задержание последа, субинволюцию матки и острый послеродовый эндометрит, степень распространения которого колеблется от 5,0 - 20,0% (А.П. Студенцов, 1953; B.C. Шипилов, В.А. Чирков, ¡987; А.Г. Нежданов, 1987; В.Д. Мисайлов, 1990; А.Н. Турченко, 2001; Р.Г. Кузьмич, 2000; R. Smith, 1981; A. Vallet, 1984; L.A. Lee, S.D. Ferguson, D.T. Gallidan, 1989) до 40,0 - 57,0% (Ю.Г. Ткаченко, 1990; Б. Кейта, 1992; В.П.'Иноземцев, Б.Г. Танер, 1993; А.Н. Турченко, A.A. Лимаренко, 1994; Y. Sieffan, 1987 и др.).

Для предупреждения возникновения острого послеродового эндометрита у коров используется система профилактических мероприятий, включающие общие (сбалансированное, полноценное кормление, оптимальные условия содержания) и специальные ветеринарные мероприятия (применение средств, повышающих сократительную способность матки, этиотропных средств, антиоксидантов, средств антимикробного действия).

Однако до настоящего времени недостаточно изучена морфофункциональная характеристика эндометрия при нормальном и патологическом течении инволюционных процессов у коров на 2-3,6,7,8 и 10 дни после отела, а также при оценке эффективности соответствующих лечебных мероприятий при патологии половых органов у коров.

Поэтому вопросы, связанные с изучением как морфологических изменений при нормальном и патологическом течении инволюционных процессов, так и разработки методов диагностики и терапии этих процессов является актуальной задачей, позволяющей раскрыть причины массового бесплодия у коров, а также его профилактики.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью данной работы являлось изучение морфофункционального состояния эндометрия при нормальном и патологическом течении инволюционных; процессов, а таюке определение эффективности комплексного способа лечения острого послеродового эндометрита у коров.

Для достижения поставленной цели ставились следующие задачи.

1. Изучить структурную организацию эндометрия матки при физиологическом течении инволюционных процессов у коров на 2,3,6,7,8 и 10 дни после отёла.

2. Дать клинико-морфологическую характеристику эндометрия при патологическом течении послеродового периода (послеродовая субинволюция и эндометрит).

3. Определить эффективность комплексного способа лечения послеродового эндометрита.

4. Разработать морфологический критерий эффективности комплексного способа лечения послеродового эндометрита у коров.

1.3. Научная новизна. Впервые в полутонких срезах и электронограммах дана морфологическая оценка эндометрии у коров при нормальном и патологическом течении инволюционных процессов. У клинически здоровых коров после отёла на слизистой оболочке эндометрия наблюдались высокие (25,8+1,54 мкм) призматические эпителии с высокими множественными микроворсинками со средней электронной плотностью на апикальной поверхности их, а ядра клеток строго ориентировались на базальной мембране. Функциональный слой эндометрия диффузно инфильтрировался единичными гистиоцитами, тучными, макрофагальными и лимфоидными клетками, находящимися в состоянии дистрофии. При патологическом течении инволюционных процессов в матке у коров в эндометрии усиливались дистрофические и некробиотические процессы, снижалась высота покровного эпителия (21,55+0,92 мкм), увеличивалась толщина эндометрия (524,75+4,1 мкм против 384,73+29,8 мкм в норме), в функциональном слое появлялся воспалительный инфильтрат с кровоизлияниями, гранулоцитами и бактериями. При гнойно-катаральном эндометрите покровный эпителий десквамировался, подвергался некрозу и превращался в некротический детрит. Определена эффективность комплексного способа терапии коров, больных острым послеродовым эндометритом, включающего в себя средства общестимулирующей неспецифической (ПДЭ и 7% ихтиол), симптоматической (синестрол, окситоцин) и этиотропной (энроцид) терапии и дана его морфологическая оценка.

1.4. Научно-практическая значимость и внедрение. Выявленные светооптические и ультраструктурные критерии клеток эндометрия матки у коров при нормальном и патологическом течении инволюционных процессов позволяют разработать научно-обоснованные подходы к диагностике и профилактике эндометритов у коров. Морфологически обосновано предложение производству терапии острого послеродового эндометрита у коров с комплексным применением плаценты денатурированной эмульгированной (ПДЭ) и 7% ихтиола совместно с применением окситоцина на фоне синестрола и внутриматочным введением антимикробного препарата энроцид. Данный способ терапии обеспечил оплодотворение 91,6-92,9% выздоровевших коров через 54,5-

60,6 дней после отёла. Результаты исследований использованы в методических рекомендациях «Методы морфологических исследований», 2-е издание, переработанное и дополненное (одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН 30.03.07). Материалы исследований используются в учебном процессе и в работе научно-исследовательских учреждений.

1.5. Апробация результатов исследования. Основные положения диссертации представлены, обсуждены и одобрены на: отчётных сессиях Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии (20062009гг.); международной конференции, посвящённой 100-летию со дня рождения профессора Авророва A.A. (Воронеж, 2006г.); 16-ой всероссийской конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Ставрополь, 2007г.); международной конференции ветеринарных акушеров (Ставрополь, 2007г.); международной конференции преподавателей, молодых учёных и аспирантов аграрных вузов РФ (Москва, РУДН, 2008г.); международной конференции, посвящённой 125-летию ветеринарии Курской области (Курск, 2008г.).

1.6. Публикация. Основные научные материалы диссертации опубликованы в 9 научных работах, в том числе 3 статьи, в журналах, рекомендованных перечнем ВАК РФ.

1.7. Основные положения, выносимые на защиту:

- структурная организация эндометрия матки у коров при нормальном и патологическом течении инвалюционных процессов;

- клинико-морфологическая характеристика эндометрия у коров при послеродовой субинволюции и эндометрите;

- эффективные методы лечения послеродового эндометрита у коров и их морфологическая оценка.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 199 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, выводы, практические предложения и список использованной литературы, который включает 173 источника, в том числе 22 зарубежных. Работа иллюстрирована 13 таблицами и 84 рисунками.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Работа выполнена в 2005-2009 годы в лаборатории патологической морфологии в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ГНУ «Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии» РАСХН по заданию 04 «Программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК РФ» (N гос. регистрации: 01.9.90001257; 01.200.117018).

Исследования проводились на коровах голштино-фризской породы 3-5 отёла с массой 400-450 кг, принадлежащих ООО «Воронежпищепродукт» Новоусманского района Воронежской области.

Изучение клинико-морфологической характеристики половых органов у коров проводилось на 2-3 дни после отела, а изучение структурной организации эндометрия - на 2,3, 6, 7, 8 и 10 дни после отела проводилось на 30 коровах, в том числе: на клинически здоровых (п-10), с острой субинволюции матки (п-10), и с остром гнойно-катаральном эндометритом (п-10).

Эффективность разработанного комплексного способа терапии коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом определялась в опытных (п-27) и производственных (п-51) условиях. Коров по принципу аналогов разделяли на две группы. Первой группе (п-15 в опытных и п-26 в производственных условиях) внутриматочно вводили энроцид с 48-часовым интервалом не более 5 раз, в дозе 150 мл первые 2 введения и 100 мл - в последующем, а также 7% ихтиол, ПДЭ, синестрол и окситоцин. Второй группе (п-12 в опытных и п-25 в производственных условиях) внутриматочно использовали суспензию неофура приготовленную из расчёта 3-4 суппозитория на 150 - 200 мл дистиллированной воды в дозе 150 мл - первые два введения и по 100 мл - в последующем с 48 - часовым интервалом, подкожно 7% раствор ихтиола в подогретом до 37-40?С виде в повышающе-понижающихся дозах 4, 5, 6, 7, 6 и 5 мл/100 кг массы тела, а также синестрол и окситоцин.

Для морфологических исследований использовался материал отобранный методом биопсии. Материал для световой микроскопии фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа, обезвоживали в спиртах, хлороформе, заливали в парафин, готовили срезы на микротоме МПС-2 толщиной 5-7 мкм, депарафинировали и окрашивали гематоксилин-эозином, по Ван-Гизон и толлуидиновым синим. Морфометрические исследования проводились по Г.Г. Автандилову с помощью окулярмикрометра - MOB-15.

Фиксацию материала для электронной микроскопии проводили в 2,5% -ном растворе глютарового альдегида на 0,114 М коллидиновом буфере (pH -7,3) на холоде с постфиксацией в 1% - растворе тетраокиси осмия на том же буфере. Для достижения осмиомолярности 360 моем во второй фиксатор вводили 0,05 М железосинеродистого калия и раствор Рингера. Материал заключали в смолу Эпон - 812. готовились полутонкие срезы, окрашенные азур-2 в сочетании с фуксином основным, которые просматривались в световом микроскопе «Leica». Ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме Ultracut «Leica», монтировали на вольфрамовые сетки, контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом и просматривали в электронном микроскопе ЕМ-208 фирмы Philips.

Результаты исследований были подвергнуты статистической обработке, используемой в биологии и медицине, на персональном компьютере IBM

(программа Microsoft Exel 2003), с оценкой достоверности отличий при Р < 0,001 (Г.Ф. Лакин, 1968).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Клинико-морфологическая характеристика половых органов у коров на 2-3 дни после отёла

У клинически здоровых коров на 2-3 сутки после отёла на поверхности матки выявлялась выраженная поперечная и продольная складчатость, она становилась бугристой, имела плотную (каменистую) консистенцию. Выделения из матки отсутствовали или были в незначительном количестве в виде густой мутной тягучей слизи желтовато-белого или светло-коричневого цвета, которая обнаруживалась как в полости влагалища, так и в канале шейки матки, образуя слизистую пробку.

У 47,1% коров отсутствовало выделение из матки в виде лохий, а у 42,9% они были представлены в небольшом количестве в виде мутной тягучей слизи желтовато-белого или светло-коричневого цвета, находящейся как в полости влагалища, так и в канале шейки матки.

У клинически здоровых коров на 2-3 дни после отёла структурные элементы эндометрия подвергались дистрофическим процессам. Покровный эпителий в эндометрии в большинстве своём имели призматическую или кубическую форму с вакуолизацией цитоплазмы и пикнозом ядер. Строма функционального слоя эндометрия диффузно инфильтрировалась многочисленными круглоядерными клетками, находящимися в состоянии дистрофии, а цитоплазма их была с вакуолизацией. Маточные железы преимущественно находились в пределах нормы, но просвет их значительно был сужен. Наблюдалась фрагментация мышечных волокон с уменьшением их объёма и приобретением спиралевидной формы. В сосудистом слое значительно уменьшался просвет кровеносных сосудов.

В первые сутки после родов у 82,4% коров, предрасположенных к острой субинволюции матки, было отмечено обильное выделение жидких кровянистых лохий из матки, а у 88,2% коров отсутствовала слизистая пробка в канале шейки матки.

В структурной организации эндометрия у коров с субинволюцией матки на 2-3 дни после отёла наблюдались дистрофические процессы клеток покровного эпителия, маточных желёз и функционального слоя. Здесь же клетки вакуолизировались, а ядра их находились в состоянии пикноза.

Строма эндометрия была отёчной, разрыхлённой и инфильтрированной клеточными элементами. Мышечные волокна выглядели отёчными, а кровеносные сосуды содержали кровь (Рис. 1).

Рис. 1. Структурная организация эндометрия у клинически здоровых коров на 2-3 дни после отёла: А) Вакуолизация кубического эпителия с пикнозом ядер; Б) Дистрофия призматических клеток маточных желёз; В) Уменьшение в объёме и приобретение спиралевидной формы мышечных волокон; Г) Уменьшение просвета кровеносных сосудов.

Морфометрически у клинически здоровых коров высота покровного эпителия эндометрия варьировала в пределах 25,38=Ы,54 мкм, а толщина эндометрия достигала 335,96±7,70 мкм, а при субинволюции матки составляли 21,49±0,71 мкм и 402,81±10,16 мкм соответственно. То есть, высота покровного эпителия у больных достоверно уменьшалась, а толщина эндометрия увеличивалась (табл. 1).

Таблица 1

Морфометрические показатели эндометрия матки _ у коров на 2-3 дни после отёла___

Течение инволюционных процессов Высота покровного эпителия, мкм Толщина эндометрия, мкм Высота покровного эпителия маточных желёз, мкм

Клинически здоровые 25,38±1,54 335,96±7,70 8,82±0,35

Острая субинволюция 21,49±0,71* 402,81±10,16*** 10,08±0,42*

Примечание: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001.

На 2 день после отёла у коров, больных субинволюцией матки покровный эпителий был ниже нормального на 18,1%, но эндометрий был толще на 19,9%, а эпителий маточных желёз выше на 14,3%.

3. 2. Клинико-морфологическан характеристика половых органов у коров при субинволюции матки на 6-7 дни после отёла

У коров с нормальным течением послеродового периода на 6-7 сутки после отёла лохии представляли собой густую гомогенную массу с примесью слизи грязно - бурого цвета.

На 6-7 сутки после отёла у больных коров матка имела большие размеры, не обхватывалась рукой, не реагировала на массаж и имела мягкую эластичную консистенцию. После массажа матки из половых органов выделялись лохии жидкой консистенции грязно-серого цвета с примесью крошковатой массы карункулов.

При развитии острой субинволюции матки в структурной организации эндометрия наблюдалось усиление дистрофических процессов. В связи со слабовыраженными инволюционными процессами сохранившиеся маточные железы выглядели отёчными, набухшими, а просвет их несколько расширялся (Рис. 2).

На 6-7 дни после отёла у коров с острой субинволюцией матки морфометрически наблюдалось снижение высоты покровного эпителия, увеличение до 1,5 раза толщины эндометрия, а высота покровного эпителия маточных желёз достоверно повышалась (табл. 2). То есть, у клинически здоровых коров высота клеток покровного эпителия была выше на 8,1%, эндометрий был меньше на 75,7%, а высота эпителия маточных желёз была ниже на 33,6%, чем у коров, больных субинволюцией матки.

Рис. 2. Структурная организация эндометрия матки коров при субинволюции на 2-3 (А,Б) и 6-7 (В,Г) дни после отёла: А) Дистрофия клеток покровного эпителия, маточных желёз и функционального слоя эндометрия; Б) Отёчность мышечных волокон и множественные кровеносные сосуды с кровью; В) Усиление дистрофических процессов в структуре эндометрия; Г) Отёчность и набухание маточной железы с расширенным просветом.

Таблица 2

Морфометрические показатели эндометрия матки коров _на 6-7 дни после отёла_ _ _

Течение инволюционных процессов Высота покровного эпителия, мкм Толщина эндометрия, мкм Высота покровного эпителия маточных желёз, мкм

Клинически здоровые 23,39±0,47 397,65±3,76 10,58±0,25

Субинволюция матки 21,55±0,92 524,75±4,1 14,15±0,23

Примечание: * - Р<0,05; ** - РОД)!; *** - Р<0,001.

3.3. Ультраструктурная организация эндометрия у клинически здоровых коров

Структурная организация эндометрия в полутонких срезах характеризовалась наличием выраженной эпителиальной выстилки из призматических клеток на слизистой оболочке и соответствующих структурных элементов функционального слоя. Покровный эпителий эндометрия состоял из высоких призматических эпителий, плотно прилегающих друг к другу.

В функциональном слое эндометрия наблюдались стромальные, фибробластические и лимфоидные клетки. Здесь же наблюдались единичные клетки макрофагального ряда. В глубоких слоях эндометрия в различной степени выявлялись маточные железы и кровеносные сосуды.

На слизистой оболочке эндометрия нередко наблюдалась контаминация бактериями (Рис. 3).

-г■ ■1 ■ А V» /'.'т1 V * : 4 ■ IV •I-.'-. /- * V • * • » • .- ^ а» $ , 4 ч * V. 1 . ж . •» о ТЕ ■• : ¡к

Рис. 3. Структурная организация эндометрия в полутонких срезах у клинически здоровых коров на 8-10 дни после отёла: А) Ряд функционально активных призматических эпителий в покровном слое эндометрия; Б) Функциональный слой эндометрия с клетками макрофагального, лимфоидного и тканевого ряда; В) Маточная железа на границе с миоэпителиальными клетками; Г) Контаминация бактериями на слизистой оболочке эндометрия.

В ультраструктуре покровного эпителия на апикальной части выявлялись множественные высокие микроворсинки средней электронной плотности. Здесь же, т.е. в апикальной части эпителиоцитов выявлялись полиморфные электронно-плотные митохондрии, контактирующие с комплексом Гольджи. Эти органоиды в эпителиоцитах располагались преимущественно над ядром. Ядра эпителиоцитов строго ориентировались на базальной мембране клеток. Бокаловидные слизистые клетки преимущественно встречались в маточных железах. Здесь же наблюдались фибробласты и гладкомышечные клетки. Нередко в клеточном инфильтрате функционального слоя эндометрия наблюдались тучные клетки. Здесь же наблюдались клетки макрофагального ряда. В эндометрии кровеносные капилляры преимущественно были артериальными, реже - венозными. Вокруг капилляров иногда отмечалось диапедезное кровоизлияние. Здесь же можно было отметить наличие в капилляре эритроцитарного тромба. Нарушение микроциркуляторного русла в эндометрии в виде кровоизлияния сопровождалось наличием воспалительного инфильтрата. Наряду с этим, на границе воспалительного очага в эндометрии наблюдалась бактерии, как в слизи, так и в цитоплазме гранулоцитов (Рис. 4).

$1 Шяс&М - шШЗ ' ".А гЗ- ■

Рис. 4. Ультраструктурная организация эндометрия у клинически здоровых коров на 8-10 дни после отёла: А) Покровный эпителий; Б) Бокаловидные клетки в маточной железе; В) Тучные клетки в функциональном слое; Г) Бактерии в цитоплазме гранулоцита.

3.4. Клинико-морфологическая характеристика половых органов у коров при остром гнойно-катаральном эндометрите на 8-10 дни после отёла

Общее состояние коров, больных послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, в большинстве случаев, находилось в пределах нормы, а у некоторых коров наблюдалось лёгкое угнетение и небольшое снижение молочной продуктивности. Температура тела больных находилась в пределах 37,8-39,3°С. Количество дыхательных движений составляло 13-18 в минуту,

частота сердечных сокращений - 71-80 в минуту, а сокращений рубца - 3 - 5 в 2 минуты.

У больных коров наблюдалось выделение из половых органов гнойно-слизистого экссудата полужидкой консистенции с желтоватым или буроватым оттенком в количестве от 100—150 до 400-500 мл. Особенно большое количество экссудата обнаруживалось утром на полу, после ночного отдыха животных. Экссудат отмечался также на корне хвоста и в нижнем углу вульвы в виде засохших корочек. Нередко больные коровы выгибали спину и становились в позу для мочеиспускания.

Наблюдалась гиперемия и отёчность слизистой оболочки преддверия влагалища и влагалища, наличие ссадин, точечных и полосчатых кровоизлияний, разрывов тканей. В просвете влагалища имелся гнойно-слизистый экссудат, выделяющейся из канала шейки матки. Складки влагалищной части шейки матки увеличивались в размере, были отёчными, гиперемировались, содержали точечные и реже полосчатые кровоизлияния. Канал шейки матки был открыт.

На 8-10 сутки после отёла матка имела большие размеры, свойственные 3,5-4 - месячной беременности, находилась в брюшной полости, слабо реагировала на массаж. При этом из половых органов выделялись лохии жидкой или полужидкой консистенции тёмно-бурого цвета с примесью незначительного количества слизи.

Морфологически в слизистой оболочке матки отмечалось нарушение целостности покровного эпителия, его некроз и десквамация, а отдельные участки полностью были лишены эпителиальной выстилки. В подслизистом слое эндометрия преобладали экссудативно-инфильтративные процессы, характеризующиеся отёком и клеточной инфильтрацией ткани. Она, в основной своей массе, лишённая покровного эпителия, выглядела набухшей и была обильно инфильтрирована эмигрировавшими клетками.

В толще стромы эндометрия были расположены маточные железы с различной степенью поражения. Начальный воспалительный процесс в маточных железах характеризовался отёком их стромы и скоплением в ней единичных гистиоцитарных клеток. Эпителий, выстилающий внутреннюю поверхность маточных желёз, ещё сохранял свою целостность. Кроме того, маточные железы были расположены неравномерно, их просвет несколько был увеличен, железистый эпителий был однорядный, эпителиальные клетки имели призматическую форму. Ядра клеток железистого эпителия находились преимущественно в средней части, местами отмечалось уменьшение ядер в размерах и их пикноз. Более глубокие поражения маточных желёз эндометрия сопровождались некробиозом клеток железистого эпителия и их отторжением от стромы маточной железы в её просвет. В подслизистом слое слизистой оболочки матки отмечался отёк и диффузная клеточная инфильтрация - лейкоцитов, гистиоцитов, лимфоцитов (Рис. 5).

Зис. 5. Структурная организация эндометрия у коров при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите на 8-10 дни после отёла: А) Выраженные яекробиотические процессы в эндометрии, лишённом эпителиальной |выстилки; Б) Некробиотические процессы и клеточная инфильтрация; В) Разрушение маточной железы в глубоких слоях; Г) Десквамативный катар даточных желёз.

гнойно-катарального эндометрита у коров на 8-10 сутки после отела.

Морфометрически в эндометрии значительно уменьшалась высота клеток покровного эпителия и маточных желёз (табл. 3).

Таблица 3

Морфометрические показатели эндометрия матки коров на 8-10 дни после отёла

Группа коров Высота покровного эпителия, мкм Толщина эндометрия, мкм Высота покровного эпителия маточных желёз, мкм

Клинически здоровые 31,14±0,07 384,73±29,8 10,59±0,25

Острый послеродовой гнойно-катаральный эндометрит 25,21±0,06*** 664,43±8,8*** 12,6±0,21 *

Примечание: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001.

На 8-10 дни после отёла высота клеток покровного эпителия эндометрия коров с острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом уменьшалась на 19% (Р<0,001). Толщина эндометрия у этих коров была больше, чем у клинически здоровых животных на 57,9% (Р<0,001), а высота клеток железистого эпителия маточных желёз была выше на 18,9% (Р<0,05). Стереометрические исследования показали, что через 8-10 дней после отёла при остром послеродовом эндометрите эпителиоциты маточных желёз

больше на 12,7% (Р<0,01), чем при нормальном течении послеродового периода, а их ядра не имели существенных различий.

3.5. Ультраструктурная организация эндометрия у коров при эндометрите

В эндометрии происходило оголение слизистой оболочки. На оголённой поверхности эндометрия выявлялось большое количество кровянистой слизи с обилием бактерий и десквамированных клеток. В дальнейшем верхний слой эндометрия превращался в клеточный детрит с воспалительным инфильтратом. Клетки функционального слоя эндометрия в большинстве своём набухали, находились в состоянии некробиоза и вакуолизировались, а ядра их местами набухали или, наоборот, были пикнотичны. Здесь же эндотелий кровеносных капилляров набухал, а капилляры содержали гнойный инфильтрат. Местами покровный эпителий эндометрия, находясь в состоянии некробиоза, значительно просветлялся, набухал и вытягивался по высоте в несколько раз, который базировался на слое с дегенеративными и гипертрофированными клетками. В сосудистом слое эндотелии сосудов набухали, заполняли просвет их, а в периваскулярных зонах наблюдались очаговые скопления лимфоцитов. Значительно изменялись гладкомышечные клетки, фибробласты и другие тканевые элементы эндометрия. Местами строма эндометрия была отёчной, а маточные железы находились в состоянии некробиоза. Уцелевшие железы находились в состоянии выраженной дистрофии (Рис. 6).

Рис. 6. Структурная организация эндометрия в полутонких срезах у коров при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите на 8-10 дни после отёла: А); Клеточный детрит с воспалительным инфильтратом; Б) Дистрофические процессы в клетках слизистой оболочки и подслизистого слоя; В) Очаговое скопление лимфоцитов в периваскулярной зоне; Г) Дистрофия гладкомышечных клеток, фибробластов и тучных клеток.

Эти структурные преобразования в эндометрии нашли соответствующие подтверждение в ультраструктуре клеток слизистой оболочки. Так, в апикальной части клеток появлялся секрет, предвестник функционального нарушения клеток эндометрия. Апикальная часть эпителиев полностью разрушалась, теряла микроворсинки и вакуолизировалась. В покровном эпителии эндометрия наблюдались некротические процессы, которые проникали в базальную часть клеток.

Воспалительный инфильтрат состоял из клеточного детрита и содержал единичные лимфоциты в функциональном слое эндометрия. Здесь же наблюдались гранулоциты фагоцитировавшие бактерии. Защитная реакция в эндометрии осуществлялась плазматическими клетками, но, в виду остроты патологического процесса, они сами подвергались агрессии и погибали. Наблюдалось большое количество дистрофических клеток белой крови, реже - гипертрофированных лимфоцитов. Значительно изменялось микроциркуляторное русло в паренхиме органа. При этом наблюдалось резкое набухание эндотелия артериол и кровеносных сосудов.

Кроме того, наблюдалось набухание коллагеновых волокон и клеток фибробластического ряда. В патологический процесс вовлекались миофибробласты, фибробласты, гладкомышечные клетки и коллаген (Рис. 7).

Рис. 7. Ультраструктурная организация эндометрия у коров при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите на 8-10 дни после отёла: А) Ультраструктура секрета в апикальной части эпителия; Б) Макрофаги, фагоцитирующие бактерии; В) Слипание лимфоцитов в воспалительном инфильтрате; Г) Набухание коллагена и клеток фибробластического ряда.

Таким образом, в ультраструктурной организации эндометрия у коров, больных эндометритом, наблюдались глубокие дистрофические и некробиотические процессы в клетках паренхимы и стромы эндометрия, а также экссудативные процессы с изменением целостности микроциркуляторного русла в виде кровоизлияний и тромбоза сосудов.

3.6. Лечебная эффективность курса лечения острого гнойно-катаралыюго эндометрита в опытных условиях

Наибольшая эффективность лечения коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, за наименьший период времени достигается при комплексной их терапии, включающей внутриматочное введение энроцида, инъекции 7% раствора ихтиола и плаценты денатурированной эмульгированной, а также введение окситоцина на фоне синестрола.

Эффективность комплексного лечения больных коров с использованием энроцида составила 93,3%. Клиническое выздоровление животных наступило в среднем через 10,7±0,63 дней. На курс лечения потребовалось 3,0+0,20 внутриматочных введения энроцида, инъекции окситоцина на фоне синестрола, 7% раствора ихтиола и плаценты денатурированной эмульгированной (Таб. 4)

Таблица 4

Эффективность комплексного лечения коров больных острым послеродовым

Группа Выз Сроки Крат Оплодотворил Период Коэ Количе

живот дор выздоро ность ось, % от отела ффи ство

ных ове в введе к к ДО циен дней

ло, ления, ния вызд числу оплодот т бесплод

% дней преп орове живот ворения, опло ия

арато вшим ных дней дотв

в групп орен ия

Первая 93,3 10,7+0,1 3+0,2 100 93,3 54,6+1,5 1,33 24,6+1,

(энроцид ) 4 9-11 4 46-68 ±0,0 7 84

Вторая 83,3 13,4+0,3 4,85+ 80,0 66,7 68,9+2,8 1,77 38,9+2,

(неофур) 4 13-17*** 0,24* ** 4 61-94*** +0,1 у* 84 3154***

Примечание: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001.

Клиническое выздоровление коров было подтверждено улучшением структурной организации эндометрия на биоптатах, взятых в конце опыта.

Установлено, что структурная организация эндометрия у коров первой группы находилась в стадии восстановления, хотя покровный эпителий не полностью был восстановлен. Во второй группе коров покровный эпителий эндометрия был замещен слоем молодых эпителиальных клеток. Оптимальная структурная организация эпителиального пласта была выявлена у коров первой группы. Отмечалось одновременно и восстановление структурной организации и маточных желёз (рис. 8).

Рис. 8. Структурная организация эндометрия у коров после лечения острого послеродового гнойно-катарального эндометрита: А) Восстановление эпителиальной выстилки;

Б) Замещение эпителиального пласта эндометрия молодыми клетками;

|В) Структурная организация эндометрия; Г) Восстановление структурной

организации маточной железы.

3.7. Производственные испытания комплексного способа лечения коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом

Более высокий терапевтический эффект получен при лечении коров первой группы с использованием нового способа терапии с применением в качестве антимикробного средства энроцида.

Таким образом, разработанный метод обеспечил выздоровление 92,3% коров с последующим оплодотворением 91,6% выздоровевших в среднем через 60,6 дней после отёла, при коэффициенте оплодотворения равном 1,35.

Результаты производственных испытаний эффективности применения разработанного комплексного способа лечения острого послеродового эндометрита у коров представлены в таблице 5.

Таблица 5

Эффективность комплексного способа терапии коров, больных _послеродовым гнойно-катаральным эндометритом _

Группы животных Вы-здор овел 0,% Сроки выздоро в-ления, дней Оплодотворило сь, % Период от отёла ДО оплодот ворения, дней Коэфф ициент оплодо творен ия Количес тво дней бесплод ия

к выздо ро-вевш им к числу животн ых группы

1. Первая (энроцид), п=26 92,3 11,2+0,0 8 10-12 91,6 84,6 60,6+0,8 7 46-69 1,35+0, 07 30,6+0,8 7 16-39

2. Вторая (неофур), п=25 80,0 13,8+0,1 4*** 10-13 75,0 60,0 72,4+1,6 63-98 1,83±0, 42,4+1,6 ^ *** 33-68

Примечание: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001.

3.8. Морфометрические критерии оценки курса лечения острого послеродового гнойно-катарального эндометрита

Были проведены сравнительные морфометрические исследования лечебной эффективности препаратов энроцид и неофур после проведения комплексного курса терапии острого гнойно-катарального эндометрита у коров (табл. 6).

Таблица 6

Препараты Высота покровного эпителия, мкм Толщина эндометрия, мкм Высота покровного эпителия маточных желёз, мкм

Энроцид 16,8±3,24 389,15±2,6 13,86±2,42

Неофур 12,34±0,74 434,5±3,1 10,08+2,4

При лечении энроцидом высота покровного эпителия увеличилась на 36%, толщина эндометрия была меньше на 9,5%, а высота покровного эпителия маточных желёз на 37,5% по сравнению с группой коров которым применяли неофур.

3.9. Сравнительная классификация классов ядер эпителиоцитов маточных желёз и покровного эпителия у коров в норме, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом и после его лечения на 8-10 дни после отёла

Установлено, что при нормальном течении инволюционных процессов на 8-10 дни после отёла преобладали ядра эпителиоцитов маточных желёз и покровного эпителия, относящиеся к 3 и 4 классу, у больных животных - к 5 и 6 классу, после проведения курса лечения - к 3 и 4 классу (Рис. 83,84).

% 5 л д,

больные после лечения норма

I......... 1 'I II И IНИИ НШИЩИ'—И Н|11' Ии11Ч II |11Я III II

Рис. 83 Сравнительная классификация классов ядер эпителиоцитов маточных желёз у коров в норме, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом и после его лечения

больные

норма

Рис. 84 Сравнительная классификация классов ядер эпителиоцитов покровного эпителия эндометрия матки коров в норме, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом и после его лечения

При нормальном течении инволюционных процессов на 8-10 дни после отёла преобладали ядра эпителиоцитов маточных желёз и покровного эпителия, относящиеся к 3 и 4 (от 75-94 мкм3 в среднем 85 мкм3 и от 95-114 мкм3 в среднем 105 мкм3) классу, у больных животных - к 5 и 6 (от 115-134 мкм3 в среднем 125 мкм3 и от 135-154 мкм3 в среднем 145 мкм^) классу, после проведения курса лечения - к 3 и 4 классу.

ЗЛО. Экономическая эффективность способа терапии острого послеродового гнойно-катарального эндометрита у коров

Эффективность способа терапии острого послеродового эндометрита у коров определена на базе ЗАО «Славянское» Верховского района Орловской области. Среднесуточный удой на корову в ЗАО «Славянское» составил 21,2 кг, а цена реализации 1 ц молоко (ЦР) рана 900 рублей.

Экономический ущерб за один день бесплодия определяют по формуле:

Цр х (360 х 0,003 + 0,637 х Уср) у=-----------------------------------------------------,

100

где: У - экономический ущерб за 1 день бесплодия, руб.;

Цр - реализованная цена 1 ц молока, руб.;

360 - эквивалентная стоимость телёнка;

0,003 - коэффициент недополучения телят за 1 день бесплодия;

0,637- коэффициент потери молочной продуктивности за 1 день бесплодия;

Уср - среднесуточный удой, кг;

100 - переводимая величина в центнерах молока. Экономический ущерб за 1 день бесплодия в ЗАО «Славянское» равен: 900 х (360 х 0,003 + 0,637 х 21,2) у =-------------------------------------------------------= 131,26 руб.

100

Продолжительность бесплодия в опытных условиях при лечении коров, больных послеродовым эндометритом с использованием комплексного способа и базового варианта составило соответственно 24,6 и 38,9 дней, а в условиях производства - 30,6 и 42,4 дней (в среднем 27,6 и 40,7 дней).

Производственные затраты и экономический ущерб при лечении острого послеродового гнойно-катарального эндометрита разработанным способом (ПДЭ, ихтиол, синестрол, окситоцин, энроцид), а также с использованием базового варианта (ихтиол, синестрол, окситоцин, неофур) представлены в таблице 7.

Таблица 7

Экономический ущерб и производственные затраты при лечении эндометрита с использованием разработанного способа терапии и базового

варианта

№№ п/п Показатели (в расчёте на 1 голову) Способ лечения коров

Базовый вариант Разработанн ый способ

1. Количество дней бесплодия 40,7 27,6

2. Экономический ущерб, руб. 5342,3 3622,8

3. Стоимость препаратов, руб. 48,2 173,6

4. Себестоимость лечебных обработок, руб. 29,3 27,2

Экономический эффект от комплексного лечения коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, с применением энроцида на 1 голову составил:

Э = (5342,3 + 48,2 + 29,3) - (3622,8 + 173,6 + 27,2) = 1596,2 руб.

Экономический эффект от комплексного лечения коров с применением энроцида на 1 рубль затрат составил:

1596,2

Эр =----------------= 7,95 руб.

200,8

Таким образом, проведение лечебных мероприятий при остром послеродовом эндометрите с использованием разработанного способа терапии является обоснованным с экономической точки зрения. Экономический эффект на 1 корову при лечении послеродового эндометрита с использованием разработанного способа терапии составляет - 1596,2 руб., а экономический эффект на 1 рубль затрат - 7,95 руб.

4. ВЫВОДЫ

1. У клинически здоровых коров на 2-3 дни после отёла структурные элементы эндометрия подвергались незначительным дистрофическим процессам. Строма функционального слоя эндометрия диффузно инфильтрировалась единичными лимфоидными и многочисленными круглоядерными клетками, находящиеся в состоянии дистрофии. Маточные железы эндометрия преимущественно находились в пределах нормы, а в миометрии мышечные волокна фрагментировались, уменьшались в объёме и приобретали . спиралевидную форму. Высота покровного эпителия эндометрия составила 25,8+1,54 мкм, а толщина эндометрия - 335,96+7,70 мкм.

2. В структурной организации эндометрия у коров при острой субинволюции матки на 2-3 дни после отёла наблюдались дистрофические процессы клеток покровного эпителия, маточных желёз и функционального слоя с вакуолизацией и пикнозом их ядер. Строма эндометрия была отёчной, разрыхлённой и инфильтрирована клеточными элементами. Высота покровного эпителия уменьшалась до 21,49+0,71 мкм, толщина эндометрия увеличивалась до 402,81+10,16 мкм, что подтверждалось объёмными показателями клеток и их ядер эндометрия.

3. На 6-7 сутки после отёла у коров при острой субинволюции матки в структурной организации эндометрия наблюдалось усиление дистрофических и некробиотических процессов в клетках, отёчности стромы и расширении кровеносных сосудов. Снижалась высота покровного эпителия (21,55+0,92 мкм), увеличивалась толщина эндометрия (524,75+4,1 мкм), а высота эпителия маточных желёз повышалась (14,15+0,23 мкм против 10,58+0,25 мкм в норме).

4. В полутонких срезах структурная организация эндометрия у клинически здоровых коров на 8-10 дни после отёла характеризовалась

наличием выраженной эпителиальной выстилки из высоких призматических клеток на слизистой оболочке, наличием стромальных, макрофагальных, фибробластических и лимфоидных клеток в функциональном слое эндометрия, обилием маточных желёз и кровеносных сосудов на границе с функциональным слоем. На слизистой оболочке эндометрия у клинически здоровых коров редко наблюдалась контаминация бактериями.

5. В ультраструктурной организации эндометрия у клинически здоровых коров апикальная поверхность покровного эпителия была покрыта множественными высокими микроворсинками средней электронной плотности. Органоиды цитоплазмы призматических эпителий из полиморфных митохондрий и комплекса Гольджи располагались в апикальной части, а ядра ориентировались на базальной мембране клеток. Бокаловидные слизистые клетки с типичной ультраструктурой наблюдались в маточных железах. В клеточном инфильтрате функционального слоя эндометрия наблюдались тучные и макрофагальные клетки, нарушение микроциркуляторного русла с кровоизлияниями, также фибробласты и гладкомышечные клетки. Бактерии наблюдалась в слизи и цитоплазме гранулоцитов.

6. В структурной организации эндометрия у коров на 8-10 сутки после отёла при гнойно-катаральном эндометрите покровный эпителий десквамировался, подвергался некрозу и превращался в некротический детрит. Местами слизистая оболочка оголялась полностью, а в подслизистом слое усиливались экссудотивно-инфильтративные процессы, связанные с инфильтрацией лейкоцитами, макрофагами, гистиоцитами, клетками лимфоидного ряда и др. Преобладали некротические процессы в маточных железах, а в просвете их наблюдалось скопление гнойных телец. Толщина эндометрия почти вдвое увеличивалась (664,43+8,8 мкм против 384,73+29,8 мкм в норме).

7. В структурной организации эндометрия коров больных эндометритом в полутонких срезах наблюдались острые гнойно-катаральные дистрофические процессы, которые характеризовались наличием на оголённой поверхности эндометрия значительной кровянистой слизи, содержащей бактерии и десквамированные клетки. Верхний слой эндометрия состоял из гнойно-воспалительного инфильтрата и клеточного детрита. Некротические процессы проникали в клетки функционального и сосудистого слоя. Гнойные инфильтраты преимущественно наблюдались в периваскулярных зонах.

8. В ультраструктурной организации клеток слизистой оболочки эндометрия у коров больных эндометритом наблюдались глубокие некробиотические процессы микроворсинок покровного эпителия, эндоПлазматической сети, митохондрий и других цитоплазматичнских органоидов с последующим нарушением ядерной мембраны и кариоплазмы. В воспалительном инфильтрате преимущественно наблюдались гранулоциты, фагоцитирующие бактерии. Наряду с макрофагами

наблюдались плазматические клетки, нередко оказывающиеся в состоянии апоптоза. В строме наблюдалось набухание клеток фибробластического ряда и коллагеновых волокон. В патологический процесс вовлекалась ультраструктура миофибробластов, фибробластов, гладкомышечных клеток и коллагена.

9. Комплексная терапия коров с острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, предусматривающая использование ПДЭ, 7% раствора ихтиола, окситоцина на фоне синестрола и внутриматочное введение энроцида обеспечивает выздоровление 92,3 — 93,3% животных в течении 10,7 - 11,2 дней с их оплодотворением в среднем через 54,6 - 60,6 дней после отёла.

10. Лечение острого послеродового гнойно-катарального эндометрита с использованием комплексного способа терапии сопровождалась восстановлением структурной организации покровного эпителия, маточных желёз, уменьшением клеточной инфильтрации и отёка стромы эндометрия. В процессе лечения происходило увеличение высоты покровного эпителия в сравнении с базовым вариантом и их объёма соответственно на 36% и 16,5% (Р<0,001), а эпителиоцитов маточных желёз и их объёма на 37,5% и 23,2% (Р<0,01) при уменьшении толщины эндометрия на 9,5%.

11. У коров с острым послеродовым эндометритом в процессе их выздоровления, после проведённого комплексного лечения в 70% случаев сопровождалось восстановлением ядер эпителиоцитов маточных желёз и в 62% случаев - ядер эпителиоцитов покровного эпителия.

12. При комплексном лечении острого послеродового гнойно-катарального эндометрита у коров с применением двух средств общестимулирующей неспецифической (ПДЭ и 7% ихтиол), симптоматической (синестрол и окситоцин) и этиотропной (энроцид) терапии объём ядер клеток покровного эпителия в среднем составлял 85 — 105 мкм3 (3 и 4 класс), а ядер эпителиоцитов маточных желез в среднем составляли 105 мкм3 (4 класс), свойственного клинически здоровым животным.

13. Экономическая эффективность применения комплексного способа терапии острого послеродового эндометрита у коров составляет 1596,2 руб. на корову и 7,95 руб. на 1 рубль затрат.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для лечения коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, использовать комплексный способ терапии, включающего в себя подкожное введение плаценты денатурированной эмульгированной (ПДЭ) в дозе 5мл/100 кг массы тела животного в первый, пятый и девятый дни курса лечения совместно с 7% ихтиолом, приготовленным на 0,85% растворе натрия хлорида, в дозе 5,6,7 и 6 мл/100 кг в первый, третий, пятый и седьмой дни лечения в сочетании с

двукратной инъекцией 2% раствора синестрола в дозе 0,6 мл/100 кг в первый и второй день, четырёхкратным введением окситоцина с 24 -часовым интервалом в дозе 10 ЕД/100 кг начиная со второго дня терапевтического курса и внутриматочное введение энроцида в дозе 150 мл первые два введения и по 100 мл в последующем.

2. Критерием выздоровления считать восстановление ядер покровного эпителия на 62% (3-4 класс) и ядер эпителиоцитов маточных желёз на 70% (4 класс).

6. Список работ, опубликованных по теме диссертации

из перечня ВАК РФ

1. Волкова Д.В. Клинико-морфологическая характеристика острой послеродовой субинволюции матки у коров / Д.В. Волкова, В.И. Михалёв // Российский ветеринарный журнал: специальный выпуск,-М.: Колосс, май-2007.- с. 14-15.

2. Волкова Д.В. Способ лечения острого послеродового эндометрита у коров / Д.В. Волкова //Международный вестник ветеринарии: тематический выпукск. - С.-Пб., 2008. - Вып. 3. - С. 55.

3. Волкова Д.В. Изменение ядер эпителиоцитов матки при лечении эндометрита энрофуром у коров / Д.В. Волкова //Международный вестник ветеринарии: тематический выпукск. - С.-Пб., 2008. - Вып. 3. -С. 50.

Остальные публикации

4. Волкова Д.В. Сравнительная морфометрическая характеристика эндометрия коров в норме и при острой субинволюции матки / Д.В. Волкова, И.С. Толкачёв, В.И. Михалёв // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных: Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Авророва A.A. - Воронеж, 22-23 июня 2006,- с. 864-867.

5. Гистоморфологическая характеристика матки коров в норме и при подострой субинволюции / Д.В. Волкова, В.Д. Мисайлов, С.М. Сулейманов и др.// Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных: Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Авророва A.A. - Воронеж, 22-23 июня 2006,- с. 168-171.

6. Волкова Д.В. Морфофункциональное состояние матки коров при различном течении послеродового периода / Д.В. Волкова, И.С. Толкачёв, В.И. Михалёв // современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных: Сборник научных трудов по материалам 16-й Всероссийской научно-

методической конференции.- Ставрополь: Агрус, 20-22 сентября 2007.-с. 136-139.

7. Волкова Д.В. Морфометрическая характеристика эндометрия у коров в норме, при патологии и её комплексной терапии / Д.В. Волкова, И.С. Толкачёв, В.И. Михалёв, С.М. Сулейманов // Сборник статей международной научно-практической конференции преподавателей, молодых учёных и аспирантов аграрных вузов РФ: Актуальные проблемы современного аграрного производства.- М.: Российский Университет Дружбы Народов, 13-14 мая 2008.-с. 125-127.

8. Волкова Д.В. послеродовые эндометриты и их морфологическая характеристика у коров /Волкова Д.В., Сулейманов С.М. // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 125-летию Курской области: Актуальные проблемы ветеринарной медицины.- Курск.- 22-23 мая 2008.- с. 64-67.

9. Методы морфологических исследований (методическое пособие) /С.М. Сулейманов, C.B. Шабунин, Д.В. Волкова и др.- Воронеж: ФГУ Воронежский ЦНТИ, 2007,- 87с.

На правах рукописи

ВОЛКОВА Диана Валерьевна

Гистоморфологическая характеристика эндометрия у коров при субинволюции матки, эндометрите и воздействии антибактериальных

препаратов

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных 16.00.07 - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Подписано в печать 11.11.2009. Формат 60x84 1/16. бумага офсетная. Ризография. Объём 1,0 пл. Тираж 100 экз. Заказ № 1001

Полиграфическое подразделение Издательства Липецкого государственного технического университета. 398600 Липецк, ул. Московская, 30.

1.1. Актуальность темы. В решении проблемы увеличения производства продуктов животноводства в сельскохозяйственных предприятиях страны стоит задача первостепенной важности — предупреждение бесплодия крупного рогатого скота. Одной из причин бесплодия коров в 60-80% случаев являются акушерско-гинекологические болезни, которые наносят большой экономический ущерб (А.И. Сергиенко, 1978; Н.И. Полянцев, 1978; И.Ф. Заянчковский, 1982; В.Г. Гавриш, 1996; А.Н. Турченко, 1997 и др.). Восстановление воспроизводительной способности коров после отёла во многом зависит от течения инволюционных процессов в их половом аппарате и, прежде всего, в матке.

Одной из основных форм бесплодия коров является симптоматическое бесплодие, обусловленное различными болезнями половых органов (А.П. Студенцов, 1953; В.Д. Мисайлов, 1990; A.M. Семиволос, 1999 и др.).

Из болезней половых органов коров наибольший процент приходится на задержание последа, субинволюцию матки и острый послеродовый эндометрит. Наибольшая заболеваемость коров регистрируется в условиях молочных комплексов, особенно при отсутствии или недостаточности моциона животных, однообразном неполноценном их кормлении.

Послеродовая инволюция матки - это процесс обратного её развития, до состояния, свойственного небеременным животным. При физиологическом течении послеродового периода инволюция половых органов завершается к концу первого месяца после отёла (В.Г. Мартынов, 1963; И.Ф. Заянчковский, 1964; А.Г. Нежданов, В.Д. Мисайлов, 1996; N.O. Rasbesh, 1950 и др.).

Задержка инволюционных процессов (субинволюция) в половых органах сопровождается развитием глубоких гистоморфологических изменений, отражающихся на воспроизводительной способности и нередко приводящих к бесплодию коров (A.M. Вайнтрауб, 1954; А.Я. Батраков,

1973; А.Г. Нежданов, 1987; А.Н. Турченко, 1999; В.Г. Гавриш, 1997; Р.Г. Кузьмич, 2000 и др.).

При развитии острой послеродовой субинволюции резко нарушается сократительная функция и ретракция мышечных волокон матки, в результате в её полости скапливаются лохии, что приводит к интоксикации организма животного. При этом создаются благоприятные условия для проникновения через открытый канал шейки в полость матки потенциально патогенных и патогенных микроорганизмов, их размножения, вследствие чего субинволюция матки может осложняться гнойно-катаральным или гнойным эндометритом. По данным многочисленных авторов из болезней репродуктивных органов коров наибольший процент приходится на острый послеродовый эндометрит, степень распространения которого колеблется от 5,0 — 20,0% (А.П. Студенцов, 1953; B.C. Шипилов, В.А. Чирков, 1987; А.Г. Нежданов, 1987; В.Д. Мисайлов, 1990; А.Н. Турченко, 2001; Р.Г. Кузьмич, 2000; R. Smith, 1981; A. Vallet, 1984; L.A. Lee, S.D. Ferguson, D.T. Gallidan, 1989) до 40,0 -57,0% (Ю.Г. Ткаченко, 1990; Б. Кейта, 1992; В.П. Иноземцев, Б.Г. Танер, 1993; А.Н. Турченко, А.А. Лимаренко, 1994; Y. Steffan, 1987 и др.).

Для лечения коров, больных острым послеродовым эндометритом, используются разнообразные средства и методы патогенетической (новокаинотерапия), общестимулирующей (тканевая терапия, ауто- и изогемотерапия, ихтиолотерапия), этиотропной (средства антимикробного действия) и симптоматической терапии, а также методы физиотерапевтического воздействия: УВЧ — терапия, электромагнитное поле, аку- и электропунктура, лазеротерапия и сапропелевая терапия (Ю.В. Василькова, 2004; В.К. Копытин, 2003).

В качестве средств этиотропной терапии, направленной на подавление патогенной микрофлоры в матке и организме животного в целом, используют нитрофурановые, сульфаниламидные и антибиотические препараты в различных сочетаниях, приготовленные в виде растворов, эмульсий, но не всегда они дают ожидаемые результаты. Лучший результат достигается при применении готовых лекарственных форм антимикробных препаратов, вводимых внутриматочно в виде растворов, свечей, пенообразующих палочек, эмульсий.

Кроме того, необходимо учесть, что снижение терапевтического эффекта при использовании антибиотических препаратов происходит в связи с развитием антибиотико-резистентных штаммов микроорганизмов (Н.Н. Михайлов, 1975; Е.В. Ильинский, 1983; Д.Д. Логвинов, 1986; А.Г. Нежданов, 1994 и др.).

Для предупреждения возникновения острого послеродового эндометрита у коров используется система профилактических мероприятий, включающие общие (сбалансированное, полноценное кормление, оптимальные условия содержания) и специальные (применение средств, повышающих сократительную способность матки, этиотропных средств, антиоксидантов, средств антимикробного действия) ветеринарные мероприятия.

Поэтому вопросы, связанные с изучением как морфологических изменений при нормальном и патологическом течении инволюционных процессов, так и разработки методов диагностики и терапии этих процессов является актуальной задачей, позволяющей раскрыть причины массового бесплодия у коров, а также его профилактики.

6. ВЫВОДЫ

1. У клинически здоровых коров на 2-3 дни после отёла структурные элементы эндометрия подвергались незначительным дистрофическим процессам. Строма функционального слоя эндометрия диффузно инфильтрировалась единичными лимфоидными и многочисленными круглоядерными клетками, находящиеся в состоянии дистрофии. Маточные железы эндометрия преимущественно находились в пределах нормы, а в миометрии мышечные волокна фрагментировались, уменьшались в объёме и приобретали спиралевидную форму. Высота покровного эпителия эндометрия составила 25,8+1,54 мкм, а толщина эндометрия — 335,96+7,70 мкм.

2. В структурной организации эндометрия у коров при острой субинволюции матки на 2-3 дни после отёла наблюдались дистрофические процессы клеток покровного эпителия, маточных желёз и функционального слоя с вакуолизацией и пикнозом их ядер. Строма эндометрия была отёчной, разрыхлённой и инфильтрирована клеточными элементами. Высота покровного эпителия уменьшалась до 21,49+0,71 мкм, толщина эндометрия увеличивалась до 402,81+10,16 мкм, что подтверждалось объёмными показателями клеток и их ядер эндометрия.

3. На 6-7 сутки после отёла у коров при острой субинволюции матки в структурной организации эндометрия наблюдалось усиление дистрофических и некробиотических процессов в клетках, отёчности стромы и расширении кровеносных сосудов. Снижалась высота покровного эпителия (21,55+0,92 мкм), увеличивалась толщина эндометрия (524,75+4,1 мкм), а высота эпителия маточных желёз повышалась (14,15+0,23 мкм против 10,58+0,25 мкм в норме).

4. В полутонких срезах структурная организация эндометрия у клинически здоровых коров на 8-10 дни после отёла характеризовалась наличием выраженной эпителиальной выстилки из высоких призматических клеток на слизистой оболочке, наличием стромальных, макрофагальных, фибробластических и лимфоидных клеток в функциональном слое эндометрия, обилием маточных желёз и кровеносных сосудов на границе с функциональным слоем. На слизистой оболочке эндометрия у клинически здоровых коров редко наблюдалась контаминация бактериями.

5. В ультраструктурной организации эндометрия у клинически здоровых коров апикальная поверхность покровного эпителия была покрыта множественными высокими микроворсинками средней электронной плотности. Органоиды цитоплазмы призматических эпителий из полиморфных митохондрий и комплекса Гольджи располагались в апикальной части, а ядра ориентировались на базальной мембране клеток. Бокаловидные слизистые клетки с типичной ультраструктурой наблюдались в маточных железах. В клеточном инфильтрате функционального слоя эндометрия наблюдались тучные и макрофагальные клетки, нарушение микроциркуляторного русла с кровоизлияниями, также фибробласты и гладкомышечные клетки. Бактерии наблюдалась в слизи и цитоплазме гранул оцитов.

6. В структурной организации эндометрия у коров на 8-10 сутки после отёла при гнойно-катаральном эндометрите покровный эпителий десквамировался, подвергался некрозу и превращался в некротический детрит. Местами слизистая оболочка оголялась полностью, а в подслизистом слое усиливались экссудотивно-инфильтративные процессы, связанные с инфильтрацией лейкоцитами, макрофагами, гистиоцитами, клетками лимфоидного ряда и др. Преобладали некротические процессы в маточных железах, а в просвете их наблюдалось скопление гнойных телец. Толщина эндометрия почти вдвое увеличивалась (664,43+8,8 мкм против 384,73+29,8 мкм в норме).

7. В структурной организации эндометрия коров больных эндометритом в полутонких срезах наблюдались острые гнойно-катаральные дистрофические процессы, которые характеризовались наличием на оголённой поверхности эндометрия значительной кровянистой слизи, содержащей бактерии и десквамированные клетки. Верхний слой эндометрия состоял из гнойно-воспалительного инфильтрата и клеточного детрита. Некротические процессы проникали в клетки функционального и сосудистого слоя. Гнойные инфильтраты преимущественно наблюдались в периваскулярных зонах.

8. В ультраструктурной организации клеток слизистой оболочки эндометрия у коров больных эндометритом наблюдались глубокие некробиотические процессы микроворсинок покровного эпителия, эндоплазматической сети, митохондрий и других цитоплазматичнских органоидов с последующим нарушением ядерной мембраны и кариоплазмы. В воспалительном инфильтрате преимущественно наблюдались гранулоциты, фагоцитирующие бактерии. Наряду с макрофагами наблюдались плазматические клетки, нередко оказывающиеся в состоянии апоптоза. В строме наблюдалось набухание клеток фибробластического ряда и коллагеновых волокон. В патологический процесс вовлекалась ультраструктура миофибробластов, фибробластов, гладкомышечных клеток и коллагена.

9. Комплексная терапия коров с острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, предусматривающая использование ПДЭ, 7% раствора ихтиола, окситоцина на фоне синестрола и внутриматочное введение энроцида обеспечивает выздоровление 92,3 — 93,3% животных в течении 10,7 — 11,2 дней с их оплодотворением в среднем через 54,6 - 60,6 дней после отёла.

10. Лечение острого послеродового гнойно-катарального эндометрита с использованием комплексного способа терапии сопровождалась восстановлением структурной организации покровного эпителия, маточных желёз, уменьшением клеточной инфильтрации и отёка стромы эндометрия. В процессе лечения происходило увеличение высоты покровного эпителия в сравнении с базовым вариантом и их объёма соответственно на 36% и 16,5%

Р<0,001), а эпителиоцитов маточных желёз и их объёма на 37,5% и 23,2% (Р<0,01) при уменьшении толщины эндометрия на 9,5%.

11. У коров с острым послеродовым эндометритом в процессе их выздоровления, после проведённого комплексного лечения в 70% случаев сопровождалось восстановлением ядер эпителиоцитов маточных желёз и в 62% случаев — ядер эпителиоцитов покровного эпителия.

12. При комплексном лечении острого послеродового гнойно-катарального эндометрита у коров с применением двух средств общестимулирующей неспецифической (ПДЭ и 7% ихтиол), симптоматической (синестрол и окситоцин) и этиотропной (энроцид) терапии объём ядер клеток покровного эпителия в среднем составлял 85 — 105 мкм (3 и 4 класс), а ядер эпителиоцитов маточных желез в среднем составляли 105 мкм (4 класс), свойственного клинически здоровым животным.

13. Экономическая эффективность применения комплексного способа терапии острого послеродового эндометрита у коров составляет 1596,2 руб. на корову и 7,95 руб. на 1 рубль затрат.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для лечения коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, использовать комплексный способ терапии, включающего в себя подкожное введение плаценты денатурированной эмульгированной (ПДЭ) в дозе 5мл/100 кг массы тела животного в первый, пятый и девятый дни курса лечения совместно с 7% ихтиолом, приготовленным на 0,85% растворе натрия хлорида, в дозе 5,6,7 и 6 мл/100 кг в первый, третий, пятый и седьмой дни лечения в сочетании с двукратной инъекцией 2% раствора синестрола в дозе 0,6 мл/100 кг в первый и второй день, четырёхкратным введением окситоцина с 24 -часовым интервалом в дозе 10 ЕД/100 кг начиная со второго дня терапевтического курса и внутриматочное введение энроцида в дозе 150 мл первые два введения и по 100 мл в последующем.

2. Критерием выздоровления считать восстановление ядер покровного эпителия на 62% (3-4 класс) и ядер эпителиоцитов маточных желёз на 70% (4 класс).