Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Гистометрическая характеристика поросят и их плацентпри фетоплацентарной недостаточности у свиноматок

14 фЕВ 1997

На правах рукописи

ЕГУНОВА Алла Владимировна

Гистометрическая характеристика поросят и их плацент при фетоплацентарной недостаточности у свиноматок

16. 00. 02 - Патология, онкология и морфология

Автореферат

диссертации на соискание степени кандидата биологических наук

Саратов 1997

Работа выполнена на кафедре акушерства, гинекологии и биотехники размножения сельскохозяйственных животных Саратовской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии и в лаборатории биофизических методов исследований Рос НИПЧИ «Микроб».

Научные руководители:

Доктор ветеринарных наук, профессор,

Заслуженный ветеринарный врач РФ Авдеенко B.C.

Доктор биологических наук Коннов Н.П.

Официальные оппоненты:

1. Доктор медицинских наук, профессор Степанов С. А.

2. Доктор ветеринарных наук, профессор Сулейманов СМ

Ведущая организация - Воронежский государственный аграрный университет.

Защита состоится « $ »„¿¿ff/ftffi 1997г. « !У» часов на заседании диссертационного совета К-120.97.02 при Саратовской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии (410005, г. Саратов, ул. Б. Садовая, 220).

С диссёртацией можно ознакомиться в библиотеке СГАВМ и Б.

Автореферат разослан <t£-AiJ&SjXM1997г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат ветеринарных наук, доцент Салаутин В. В.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность проблемы. Дальнейшее развитие свиноводства, в настоящее время ориентируются на рыночную экономику, сдерживается мапогсподием и массовой гибелью новорожденных поросят в анаталь--1ЫЙ и неоанатальный периоды (A.A. Кудряшов, 1992; В.А. Кокорев, 1993; \.Е. Кузнецов, 1993 и др.). В этой связи одной из наиболее серьезных про-элем является снижение заболеваемости и падежа свинопоголовья, в особенности новорожденных поросят. В последние годы отход новорожденных поросят, включая мертворождаемость (т.е. смертность в ранний неоанатальный и интранатальный периоды), в различных хозяйствах соста-шл, по свидетельствам А.Г. Шекватова (1988) 37%; В. Рыбалко (1988) - до 50%; A.C. Фомичева (1990) из 18.6% общего падежа свиней к обороту ста-\а 78-80%.

Меры по предупреждению падежа часто не дают положительного ре-|ультата, поскольку не основывается на точной диагностике, методах ле-1ения и профилактики, вследствие недостаточного знания патогенеза и 1атоморфологии заболеваний, обусловливающих падеж.

При выращивании высокопродуктивных животных очень важно обес-1ечить во внутриутробный период хорошее развитие не только тела пло-[а, но и всех его внутренних органов. Всякое нарушение в их развитии ¡риводит к значительному изменению обмена веществ, рождению слабых сивотных (Н.Г. Шарабрин, 1975). Поэтому знание закономерностей разви-ия плодов и их органов во все периоды представляет большой практи-еский и научный интерес. Учитывая их, можно воздействовать на рост и азвитие плода определенными факторами и получать здоровых живот-ых с высокой будущей продуктивностью (Г.А. Шмидт, 1968; А.Д. Малов, 971; Л.П. Тельцов, 1989). Физиологическими, биохимическими и иммужь огическими следствиями такого состояния являются стойкие изменения яда морфофункциональных процессов, с которыми прямо или косвенно вязан период внутриутробного развития (Г.А. Шмидт, 1968; А.Д. Малов, 971; Л.В. Давлетова, 1975). Полноценность внутриутробного периода по-осят и физиологическая зрелость приплода полностью зависят от состо-ния обмена веществ в организме супоросных свиноматок (Х.В. Кюбар, Э74; В.А. Кокорев, 1977; Ю.П. Люкова, С.М. Сулейманов, 1993; Ю.П. Лю-

кова, 1994).

О физиологической полноценности приплода судят по продолжительности внутриутробного периода, массе тела, жизнеспособности и клиническому состоянию новорожденных поросят (Ф.И. Крутыпорох, 1970; Л.С. Волкова, 1970; A.A. Кудряшов, 1987; A.A. Буянов и др. , 1991; В.В. Семин, 1995).

Низкая жизнеспособность поросят в период новорожденное™ обусловлена морфофункциональными и биохимическими особенностями их развития, которые еще недостаточно изучены (В.А. Антонова, 1985; Б. Бек-кер, 1985; А.П. Постовалов, 1988; В.А. Соколов и др., 1991; Ю.П. Люкова, 1993; Т.И. Сергеева, 1995).

Особого обсуждения заслуживает вопрос о механизме нарушения обмена веществ в системе мать-плацента-плод (В.А. Кокорев, 1977, Н.Е. Папин, 1988), следствием которого является повышенное число в приплодах мертворожденных (Ф.И.'Крутыпорох, 1968; A.A. Кудряшов, 1988), живых поросят с малой массой тела, со слабо выраженным ориентировочным и сосательными рефлексами (И.Ф. Заянчковский, 1969). Ключевая роль в возникновении патологического состояния поросят в неоанатальный период развития все-таки принадлежит морфофункциональному состоянию фетоплацентарной системы, которая определяет обмен веществ и энергии (Н.И. Цирельников, 1980; Э.Р. Баграмян, 1983; Е.М, Вихляева, C.B. Новикова, 1984; Р,И. Шалина, Г.Д. Дживелегова, И.Б. Кущ, 1986; В.Е. Рад-зинский, П.Е. Смалько, 1987; С.А. Степанов, Л.А. Барков и др., 1988).

Если исходить из изложенной концепции о ведущей роли обмена веществ и энергии во внутриутробный период, с отдаленными последствиями для физиологического состояния матери и приплода, то следует согласиться с представлением о существовании особого механизма регуляции, основой которого является плацента. Вместе с тем, большинство авторов ограничивается анализом усредненных показателей массы новорожденных поросят, реже - плаценты, хотя в акушерстве целесообразно было бы проводить дифференциацию новорожденных на runo-, нормотрофиков и макросомов (М.А. Калугина, 1966; Н.И. Цирельников, 1976; Л.Н. Солда-тов, В.А. Михалина, 1976; B.C. Авдеенко, 1993; В.А. Кокорев, 1993).

Описанные в литературе (М.Я. Субботин, 1968; Х.В. Кюбар, 1974) гистологические и гистохимические особенности плаценты носят сугубо

фрагментарный характер, практически не разработаны морфометричес-кие подходы к изучению плаценты свиньи. Однако значение и позитивная роль плаценты в регуляции обмена веществ и энергии, до сих пор является областью, сравнительно мало исследованной и дискуссионной.

Следовательно, изучение морфофункционального состояния фетоп-пацентарной системы свиноматок найдет полезные приложения в ветеринарной практике. При этом сведения, полученные при гистометрической гарактеристике поросят и их плацент, особенно в состоянии функционального напряжения необходимы для создания теоретической базы при организации рациональных мер профилактики патологии перинатального периода и исключение технологических приемов несоответствующих эволю-дионно обоснованной морфологии и физиологии свиньи.

1.2. Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы состо-?ла В'определении гистометрических показателей поросят и их плацент 1ри фетоплацентарной недостаточности у свиноматок, а также в изучении гльтраструктуры плаценты свиньи, главным образом, с использованием лорфометрии основных компонентов ее фетальной части. Для ее реше-(ия были поставлены следующие задачи:

1. Выявить особенности поведения фетоплацентарной системы при крушении роста и развития плодов свиней;

2. Определить характер ультраструктурной организации и количес-венных изменений плаценты в процессе онтогенетического развития.

3. Изучить гистометрические показатели новорожденных поросят с четом данных массы, длины тела и органометрии у мертворожденных, /1по-, нормотрофиков и макросомов.

Исследования выполнены в соответствии с утвержденной научно-ехнической программой СГАВМ и Б в 1993-96 гг. с № госрегистрации 1920001965.

1.3. Научная новизна работы. Детально изучена ультраструкту-а плаценты, количественные показатели ее фетальной части в процессе нтогенеза и на фоне фетоплацентарной недостаточности. Дана сравни-;льная оценка морфофункционального состояния новорожденных пороет при нарушении роста и развития плодов во внутриутробный период. В етальной части плаценты свиньи описаны новые структурные образова-

ния -" недифференцированные мембранные комплексы" - микрокотиледоны, которые являются отражением активных биосинтетических процессов в условиях функциональной нагрузки системы мать-плацента-плод.

1.4. Научно-практическая ценность работы. Практическому ветеринарному акушерству предлагается проводить дифференциацию новорожденных поросят на гипо-, нормотрофиков и макросомов с учетом показателей длины, массы тела и плодно-плацентарного коэффициента.

Знание ультраструктурной организации плаценты свиньи при различных функциональных состояниях новорожденных создает теоретическую базу для проведения отъема поросят и для организации лечебно-профилактических мероприятий при перинатальной патологии. Полученные данные могут быть использованы при составлении методических рекомендаций по ультраструктуре плаценты, а также при написании соответствующих разделов по гистологии и эмбриологии.

1.5. Реализация основных положениьй работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Всероссийской научной и учебно-методической конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных (Воронеж, 1994), на XIII региональной научно-практической конференции молодых ученых и специалис тов, посвященной 60-летию Оренбургской области и 250-летию Оренбур гской губернии (Оренбург, 1994), на 41-й научно-производственной конференции профессорско-преподавательского состава, аспирантов и стаже ров (Саратов, 1995), на юбилейной конференции посвященной 70-летик факультета ветеринарной медицины ВГАУ (Воронеж, 1996), на l-ой меж дународной научно-практической конференции (Витебск, 1996).

1.6. Основные положения, выносимые на защиту.

1. На фоне фетоплацентарной недостаточности изменяется ультра структура плаценты, в основном ее фетальная часть;

2. В фетальной части плаценты свиней установлены специализиро ванные образования на хорионе-микрокотиледоны;

3. Обнаруженные нами коррелятивные связи между уровнем хрома тина фибробластов плаценты и лимфоцитами периферической крови, могу быть использованы в диагностике фетоплацентарной недостаточности

свиноматок во второй половине супоросности.

1.7. Публикация результатов исследований.

По теме диссертации опубликованы: 5 статей и методические рекомендации «Методика исследования ультраструктуры плаценты свиньи» (Саратов, 1996).

1.8. Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, результатов исследования и их анализа, выводов и научно-практических предложений.

Список литературы включает 204 источника, в том числе 64 иностранных.

Работа содержит 16 таблиц, иллюстрирована 21 рисунком. П. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования выполнялись в течение 1993-96 гг. Материал собран на свиноводческих комплексах «Кпеновский» Волгоградской области и племенной свиноферме фирмы «Нитрон» Саратовской области.

Материал отбирался целенаправленно в соответствии с задачами работы.

Полевые наблюдения и клинико-экспериментальные исследования проведены на 266 основных и 80 проверяемых свиноматках, а также 25973 новорожденных поросят. Была установлена степень распространения гес-гоза супоросных свиноматок, патологии родов и болезней новорожденных.

Материалом для экспериментов служили матки с плодными пузырями и плодами, полученные при убое свиней белой крупной породы в раз-пичные сроки супоросности. Всего было проанализировано 25 супоросных маток.

Для дифференциации внутриутробного периода была использована методика предложенная Г.А. Шмидтом (1951). Возраст плодов определя-пи по шкале-таблице, приведейной в руководстве по акушерству А.П. Сту-^енцова (1980).

Были проведены клинические наблюдения за опоросами 346 свиноматок и 25973 родившимися у них поросятами с хронометрированием про-

должительности родов, регистрации количества и качества родившихся поросят, очередности рождения.

Методом кластерного анализа были выявлены группы поросят (нор-мо-, гипотрофики, макросомы, мертворожденные и с признаками гипоксии), для морфометрии: длина, масса и объем тела поросят; масса печени, почек, селезенки. Определяли относительную массу органов к общей массе тела, рассчитывали плодно-плацентарный коэффициент (ППК), объем плаценты, площади маточной поверхности, диаметр, толщину феталь-ной части плаценты.

Гестоз у супоросных свиноматок регистрировали методом полного клинического исследования по классической триаде и лабораторными методами. Фетоплацентарную недостаточность определяли клинико-лабора-торными методами, а также по морфологическим характеристикам плаценты и морфофункцнональному состоянию новорожденных поросят.

Гликоген и нейтральные гликозаминогликаны выявляли с помощью ШИК - реакции и реактивом Хэйла. Цитофотометрическое исследование ДНК и интерфазного хроматина в ядрах клеток хориона и лимфоцитов периферической крови проводили методом ОСМА на комплексе «Протва». В задачу наших исследований входило разработать методику подготовки отбора, взятия и исследования полученного материала на электронном микроскопе.

Для электронной микроскопии использовали 96 животных, у которых образцы брали из фетальной части плаценты, а также легких плодов, сразу после убоя животных. Обработку проб проводили по общепринятой схеме, используя охлажденный 2.5% глютаровый фиксатор на какодилат-ном буфере. Обезвоживание проводили по нарастающему градиенту спиртов (от 50е до 100е). В качестве заливочного материала использовали эпон-арапдитную смолу. Тонкие и ультратонкие срезы изготавливали на ультратоме 1.КВ 8800 (Швеция) изучали и фотографировали в электронном микроскопе УЕМ-7А, НХ/-12А (Япония). Полученные материалы также исследовали на сканирующей приставке НЗЕ-2.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Гистометрическая характеристика матки и плаценты при внутриутробных нарушения развитиях роста и развития новорожденных поросят.

В результате проведенного нами статистического анализа, сгруппированных по морфофункциональным признакам, 25973 новорожденных поросят оказалось, что нормотрофики составляют 69.1 ± 3.5%, макросомы -6.3 ± 0.3% и гипотрофики 24.6 ± 1.3%.

Таким образом, для нормального развития плода большое значение имеет морфологическое состояние фетоплацентарной системы, поскольку материнское окружение плодов у свиней представляет собой разной степени условия внутриутробного развития, что у 30% характеризует дефицит массы и длины тела плода, а в последствии новорожденного.

Для подтверждения данного положения мы провели изучение гистологических и гистохимических изменений эндометрия в течении супорос-ности. Нами были получены следующие результаты, так в конце 1-го месяца супоросности средняя толщина покровного эпителия матки составляет 13.2 ± 1.29 мкм. Среди клеток эпителия превалируют цилиндрические и кубические клетки, к которым прибавляются плоские клетки. Между свободными краями эпителиальных клеток видны глубокие углубления, где базируются цитоплазматические выросты клеток хориального эпителия. Интенсивность пиронинофилии эпителиальных клеток больше, а содержание липидов меньше, чем в течение последующих месяцев супоросности.

В течение 3-го и 4-го месяцев супоросности средняя толщина эпителия продолжает уменьшаться (9.2 ± 1.01 мкм), проявляется тенденция к уменьшению величины ядер. Углубления между эпителиальными клетками почти исчезают. В конце супоросности интенсивность пиронинофилии цитоплазмы клеток заметно падает. Митозы встречаются редко и практически отсутствуют. Гликогена в покровном эпителии в течение супоросности не встречается, диастазо-резистентного ШИК-положительного вещества имеется мало, активность гликозоаминогликанов очень низкая. Секреторная активность маточных желез увеличивается в течение супоросности (табл. 1).

Оказалось, что в течение двух последних месяцев супоросности в

интенсивный синтез секрета включались кроме поверхностных частей желез, концевые части желез. Об этом свидетельствовали интенсивная пи-ронинофилия цитоплазмы почти всехжелезистых клеток, обилие ШИК-положительных диастазо-резистентных зерен во многих железистых клетках (преимущественно в супрануклеарной части клетки) и куполо- и каплеобразные выросты на свободной поверхности многих железистых клеток, а также высокая интенсивность кислых гликозоаминогликанов в маточных железах.

Таблица 1.

Гистоструктура матки свиней в период супоросности

Измеряемая структура М±м км

Толщина покровного эпителия, в мкм 20,4+4,3 14,9-34,4

Диаметр желез, в мкм 35,2+4,2 20,7-69,8

% желез в эндометрии 9,9±0,51 5,8-12,2

Высота железистых клеток, в мкм 14,4+0,3 6,8-20,6

Средняя величина ядер клеток железистого эпителия, в планиметрических единицах 46,9+4,2 34,3-62,8

Таким образом гистометрические показатели эндометрия у супоросных свиноматок представлены структурами ответственными за выполнение трофической функции, которая во многом определяет рост и развитие плодов.

Следовательно на развитие и жизнеспособность новорожденных поросят влияют не только наследственные факторы, но и плацентарные условия внутриутробного периода, а также состояние плодовых оболочек. В плодовместилищах рогов матки мы находили разное количество плодных пузырей. Так, на 28 сутки внутриутробного развития их насчитывается 16, на 77 день развития плода соответственно 12.

Аллантоис к концу первого месяца супоросности расположен против головы эмбриона, позднее он лежит справа или слева от него. Аллантоис состоит из короткого тела 6.8 ± 0.2 см и двух рукавов, оканчивающихся пергаментовидными отростками, которые хорошо видимы в конце супоросности и незадолго до опоросов запустевают.

Плоды свиньи омываются амниотической жидкостью и заключены в амниохорион. Хорион имеет форму вытянутого мешка, суживающегося к юнцам в виде рогов. Один рог направлен в сторону яичника, другой в сто-эону шейки матки. Хорион располагается в плодовместилище таким обра-5ом, что его большая кривизна совпадает с большой кривизной беременного рога матки, а последняя своей большой кривизной обращена в сторону вентральной брюшной стенки матери. Наружная поверхность хориона иершавая, а внутренняя - гладкая и блестящая. Одной стороной хорион трилегает к амниону, другой - к аллантоису.

На наружной поверхности хориона наблюдается скопление ворсинок. Зорсинки формируютхориальные узелки округлой формы, едва заметные з конце первого месяца. К рождению плода размер их увеличивается.

Хориальные узелки расположены по обе стороны от магистральных сосудов рядами, так, что вся поверхность хориона оказывается разбитой на множество небольших клеток.

Число хориальныхузелков правой и левой стороны неодинаково, имеется также различие в их размерах и форме. В амниотической области <ориона, ближе к пуповине, хориальные узелки крупнее, по направлению к эогам они мельче, в бессосудистых участках - отсутствуют.

Процесс внедрения хориальных узелков в слизистую крипт эндомет-эия начинается в амниотических областях, а затем распространяются и по направлению к рогам хориона.

Плацента при доношенной беременности и рождении нормотрофных "тодов у свиней имеет форму вытянутого, суживающегося к концам меш-са, диаметром 14.9 ± 1.41 см. Толщина фетальной ее части составляет в ;реднем 3.42 + 0.08 см, масса 367.1 ± 13.6 г, объем (по вытесненной воде з мерном сосуде) - 330.4 ± 13.4 мл, площадь материнской поверхности -203.8 ±11.7 см2, а плодово-плацентарный коэффициент - 3.17 ± 0.72 табл. 2).

Перечисленные выше показатели характеризуют гистофункциональ-ное состояние плаценты. Есть все основания считать, что такая плацента юлностью обеспечивает нормальное внутриутробное развитие плода и зождение нормотрофного поросенка.

Материнская поверхность в плаценте имеет дольчатое ячеистое строение. Количество узелков микрокотиледонов достигает 17-25 штук. В цен-

тре плаценты располагаются более крупные и толстые микрокотиледоны, а к периферии дольки уплощаются, в результате этого плацента принимает веретенообразную форму.

Масса плаценты у гипотрофиков всегда была ниже, чем у нормотро-фиков и макросомов, соответственно 292.5 ± 12.7 против 367.1 ± 13.6 -403.8 + 14.2 г.

Таблица 2.

Характеристика плаценты при внутриутробных нарушениях роста и развития новорожденных (р<0.05).

Характеристика новорожденных Масса, (г) Объем, (мл) Диаметр, (см) Толщина фетальной части, (см) Площадь материнской поверхности, (см ) ппк

Нормотро-фики 367,1 ±13,6 330,4+13,44 14,9+14,1 3,42+0,08 203,8+14,7 3,17+0,72

Гипотро-фики 292,5+12,7 106,9+11,2 10,2+2,10 3,28+0,07 162,5+15,8 2,74+0,53

Макросомы 403,8±14,2 363,4+18,2 15,3±1,23 3,67±0,11 224,3+11,5 3,28+0,32

В результате проведенных морфометрических исследований плаценты было установлено (табл. 3), что масса материнской части плаценты варьировала в зависимости о г морфофункциональной зрелости новорожденных поросят. Так у нормотрофиков масса плаценты в среднем составляла 122.4 ± 11.1 г, макросомов - 124.0 ± 13.41, а гипотрофиков - 97.5 ± 9.23 г, что свидетельствует о врожденной гипотрофии плодов. Фетальная часть плаценты имела еще более выраженные различия в массе (195.0 ± 11.5 против 244.7 ± 13.2 - 279.8 ± 44.0 г).

Результаты измерений удельного объема фетальной плаценты также соответствовали трем кластерным группам. Объем ворсин хориона составлял в большинстве плацент 65% всей фетальной части, однако, максимальные показатели были зарегистрированы у макросомов и нормотро-фиков. У мертворожденных данный показатель не превышал 45%.

Хориальные сосуды плодных оболочек, равно и как соединительнотканная основа попадали в срез гистологического препарата довольно редко и удельный объем этих показателей невелик, особенно у гипотрофиков. У

нормотрофиков площадь хориальных узелков микрокотиледонов возросла более, чем в 5 раз. Удельный объем трофобласта межворсинчатого хориона довольно стабильная величина во всех группах. Однако, в группе гипотрофиков имело место его значительное возрастание (более 18%). В то время как у макросомов данный объем не превышал 9%.

Таблица 3.

Морфологические показатели плаценты по данным кластерного

анализа (р<0.05).

Кластерные группы Масса, г Удельный объем фетальной плаценты, %

материнская часть феталь-ная часть Площадь микрокотиледона Межкотлледонная зона

ворсин сосудов трофо-бласт• соединительнотканная основа

Нормотро-фики 122,4+11,1 244,7+13,2 28,91+8,09 25,95+3,87 27,87+6,23 17,27+1,82

Гипотро-фики 97,5+9,23 195,0+11,5 18,5±4,23 22,9+2,91 23,1+5,05 35,5+1,74

Макросомы 129,0+13,41 279,8±14,0 28,94+5,02 25,96+3,12 28,04+6,02 17,06+1,93

Таким образом, результаты исследований показали, что морфо-фун-кциональное состояние новорожденных определяется особенностью строения морфологических структур матки и плаценты.

3.2. Ультраструктура плаценты свиньи при фетоплацентарной недостаточности.

Результаты исследований эпителиостромальных взаимоотношений в плацентомах показали, что хориальные узелки микрокотиледоны, при фетоплацентарной недостаточности, имеют уплощенную форму, представляются отечными, общее количество их на амниохорионе фетальной части уменьшено, в сравнении с таковыми при не осложненной супоросности. При морфологическом исследовании плаценты свиней выделены две зоны: базальная и апикальная, то есть накопления и физиологического обмена.

Трофобластическая выстилка ворсин хориона, сгруппированных в микрокотиледоны, представлена несколькими типами клеток, находящихся на различных стадиях дифференцировки. Это прежде всего столбча-

тые клетки, предиплокариоциты и диплокариоциты. На протяжении тро-фобластической выстилки наблюдаются участки, миграции диплокарио-цитов по направлению к криптальной выстилки.

При этом количество диплокариоцитов с характерной апикальной поверхностью на ворсинах хориона в норме составляет 7.3 ± 1.24 и резко превышает число гигантских клеток на единицу площади (табл. 4). Диплокариоциты в большом количестве двуядерные и встречаются среди цилиндрических клеток, особенно на верхушках ворсин. Ядра клеток содержат крупноглыбчатый хроматин и четко выявляются в эпителиальной выстилке ворсин. Некоторые гигантские клетки определяются в пространстве между микрокотиледонами.

Таблица 4.

Морфометрия трофобластической выстилки плаценты свиньи (сетка Автандилова 5=0.073 мл).

Показатели Неосложненная супоросность Фетоплацентарная недостаточность

Диплокариоциты 7,3+1,24 2,3±0,85

Интраэпителиальные капилляры 0,8+0,08 3,7+0,73

Капилляры соединительной ткани ворсин 2,7±0,11 0,2+0,08

В микрокотиледонах обращает на себя внимание наличие интраэпи-телиально расположенных капилляров, которые максимально приближены к трофобластическим элементам и к эпителию маточной крипты. Подсчет количества капилляров на единицу площади показал, что их при не осложненной супоросности составляет 0.18 ± 0.08. При фетоплацентар-ной недостаточности количества капилляров до 3.7 ± 0.73, при этом среднее число капилляров терминальных ворсин возрастает более чем в 30 раз и увеличилась параллельно нарастанию к степени фетоплацентарной недостаточности. Появляются участки, в которых кровь плода была отделена от крови матери лишь эндотелием и узкой полоской хориального сим-пласта лишенного ядер.

Расширение этих зон интенсивного обмена на ряду с увеличением числа сосудов, а также участков истонченного эндотелио-сосудистых мембран, по видимому, способствует коррекции нарушенных обменных про-

цессов.

В хориальной пластинке соединительная ткань выглядит уплотненной, содержит много волокнистых структур, объединенных в пучки идущие перпендикулярно ходу ворсины. Среди них располагаются фибробласты, макрофагоподобные клетки с пенистой цитоплазмой, фестончатыми и четкими краями, а также редкими скоплениями клеток крови. Здесь много кровеносных сосудов среднего диаметра и капилляров.

В стволовых ворсинах соединительная ткань представлена скудными и рыхло расположенными волокнами. Фибробласты центральной части ворсины лежат свободно, контактируя своими отростками, под хори-альным эпителием и вблизи сосудов уплощаются, втягиваются, группируются подстилая базальную мембрану.

В строме ворсинчатого хориона наблюдается коллагенизация. Увеличивается число и диаметр кровеносных сосудов в хориальной пластинке и в стволовых ворсинах. Возрастает число кровеносных капилляров, расположенныхинтраэпителиально. Соединительнотканная основа выглядит плотной очень четко дифференцируется подэпителиальный слой.

Мелкая нитевидная зернистость хейл-положительного материала в препаратах полученных от клинически здоровых супоросных свиноматок, выявляется апикальных участках клеток, образуя нежную «каемку». Цитоплазма таких клеток имеет светло-розовую окраску за счет небольшого количества мелких пылевидных Хейл-позитивных субстраций, диффузно рассеянных по клетке.

При фетоплацентарной недостаточности в апикальных участках цитоплазмы эпителиальных клеток «крипт», углубленный в строме зндомет-риальных желез, встречаются значительно меньше примерно в 4 раза количество мелких голубоватых гранул. При этом в соединительной ткани эндометрия вовсе нет Хейл-позитивного материала.

Маточный эпителий имеет кубическую форму, в некоторых местах слущен, цитоплазма его светлее окрашивается, чем трофобластический эпителий. Базальная мембрана криптисепт эндометриальныхжелез стерта и неясно выражена.

В соединительнотканной строме матки обнаруживается нежное окрашивание в зонах, контактирующих с ворсинками амниохориона. В цитоплазме призматических эпителиальных клеток были выявлены гликоп-

ротеиды и гранулы гликогена локализующегося преимущественно в над-ъядерных зонах, причем количество их резко снижается в материале полученного от супоросных свиноматок с фетоплацентарной недостаточностью.

Необходимо отметить, что в клеточных элементах, располагающихся в непосредственном контакте с тканями материнского организма вышеуказанные вещества отсутствуют. При выявлении веществ белковой природы (суммарные белки) маточный эпителий имеет гораздо более выраженное окрашивание, чем поверхностные структуры эндометральных желез.

С целью выявления более тонких механизмов фетоплацентарной недостаточности нами были проведены цитометрические исследования ДНК и интерфазного хроматина в ядрах лимфоцитов и хориона на субклеточном уровне. В результате исследований оказалось, что суммарная оптическая плотность ядер составила 7.34 ± 0.13 усл. ед. и соответствовала диплоидным цифрам (2с) содержания ДНК. Интересно отметить, что пред-иплокариоциты по содержанию ДНК являются неоднородной популяцией большинство из них в норме и у животных с фетоплацентарной недостаточностью укладываются в классы 8с-16с. При этом, отмечается выраженный разброс значений ДНК в отдельных элементах. Так, при неослож-ненной супоросности выделяются две группы ядер с количеством ДНК, соответствующим^интерклассным значениям 8с-16с (таких ядер свыше 90%) и даже встречаются ядра с содержанием ДНК, достигающим 32с при оптико-структурном анализе.

Характер гистограмм при фетоплацентарной недостаточности заметно меняется. В выборке преобладают ядра с количеством ДНК, равным 16с в то время как ядра со значением 32с не встречаются вовсе при почти одинаковом среднем содержании ДНК на ядро (47.24 ± 3.46 - 46.13 ± 2.43). Тогда как площадь ядер при фетоплацентарной недостаточности возрастает более, чем в двое. Параллельно увеличивается степень аухромати-зации гигантских одноядерных клеток, что может быть отражением фазы напряжения тканевых механизмов адаптации, в частности, активация особо важных участков генома.

На оснований проведенных нами исследований мы пришли к выводу, что диплокариоциты, представляющие конечную стадию дифференциа-

ции клеточных элементов трофобластического ряда, также могут быть причислены к участкам адаптивной реакции.

Количество ДНК в отдельных элементах диплокариоцитов возрастает с 32.3 ± 2.05 до 57.23 ± 1.97 усл. ед. , но еще более возрастает их площадь с 97.3 ± 4.26 до 187.2 ± 5.15 мкм. В ядрах диплокариоцитов более, чем в два раза увеличивается содержание менее компактного хроматина, близкого по своим морфологическим характеристикам к аухроматину.

Если принять во внимание, что основная масса диплокариоцитов в апикальных слоях трофобластической выстилки имеет высокую активность большинства выявленных гистохимических соединений, то описанные нами изменения представляются закономерными.

Визуальное изучение (в поле зрения электронного микроскопа), соединительнотканного компонента стромы нами выявлена меньшая колла-генизация хориальных ворсин при фетоплацентарной недостаточности. Причем обнаружены два класса ядер: овальной формы с четко очерченными границами и плотной упаковкой хроматина и относительно крупные ; более рыхлой его структурой. Такие ядра встречались как в норме, так и три фетоплацентарной недостаточности. Однако в последнем случае обнаружена тенденция увеличения доли крупных ядер с меньшей плотностью упаковки хроматина. Так, площадь ядер фибробластов достоверно возрастала с 32.28 ± 2.34 до 47.12 ± 2.09 мкм. Меняется и характер гистограммы, свидетельствующей об увеличении доли ядер большой площади. Здкако, интегральная оптическая плотность - отражение плотности ядра -меняется не столь существенно с 12.03 ± 0.32 до 11.9 ± 0.52 при фетоп-1ацентарной патологии. При этом более чем в двое возрастает число ядер, шеющее близкое к тетраплоидному количеству ДНК (16.32 до 37.4%).

Аналогичная тенденция обнаруживается и в фибробластах, которые 'аким образом, не остаются инертными и реагируют на морфофункцио-гальные изменения в фетоплацентарной системе гиперрепликацией ДНК. }ля остальных показателей, можно отметить ее четкий практически во всех ¡лучаях сдвиг в право, что подтверждает общность механизмов адапта-4ии клеток различного происхождения.

Таким образом, фетоплацентарная недостаточность у свиноматок [риводит к заметному снижению в эпителии хориальных ворсин функцио-1ально активных трофобластических гигантских клеток-диплокариоцитов.

При этом наблюдается Достоверное возрастание содержания ДНК по интегральной оптической плотности в ядрах лимфоцитов и в ядрах-партнерах диплокариоцитах, при увеличении площади хроматина интерфазных ядер.

Следовательно, обнаруженные нами коррелятивные связи между уровнем хроматина фибробластов плаценты и лимфоцитами периферической крови могут быть использованы в диагностике фетоплацентарной недостаточности у свиноматок во второй половине супоросности.

3.3. Особенности морфологии фетоплацентарной системы при различных состояниях свиноматок.

Проведенный анализ полевого материала, а также клинические исследования и наблюдения определяли частоту возникновения распространения гестоза супоросных свиноматок.

Учитывая вышеизложенное обстоятельство мы провели морфологические исследования плаценты у клинически здоровых и переболевших гестозом супоросных свиноматок.

Масса плаценты варьировала от 367.1 ± 13.6 до 319.7 ± 10.4 г, при объеме 330.4 ± 13.4 - 298.5 ± 11.6 мл, что характеризует внутриутробные условия для роста и развития плодов при различных состояниях свиноматок в период супоросности (табл. 5).

Анализ показателей площади материнской плаценты показал зна-' чительную вариабельность данного показателя. Так у переболевших гестозом площадь материнской поверхности составила 177.7 ± 8.34. В то время как у клинически здоровых 203.8 ± 4.2 см2.

Таблица 5.

Органометрическая характеристика плаценты при различных состояниях свиноматок.

Состояние свиноматок в период супоросности Масса, г Объем, мл Площадь материнской поверхности ппк

Переболевшие гестозом 330,9+12,8 309,8+10,9 177,7+8,34 ■ 3,11+0,74

Клинически здоровые 367,1+13,6 330,4+13,4 203,8±14,2 3,35+0,51

При фетоплацентарной недостаточности маточная поверхность плаценты выглядит неровной, бугристой, это обусловлено тем, что в центре плаценты располагаются тонкие мелкие микрокотиледоны, в то время как на периферии, наоборот крупные, толстые.

При этом плацента на разрезе губчатая, красно-розового цвета. В отдельных случаях наблюдается анемия, имеющая диффузный или очаговый характер. На материнской поверхности в толще плаценты обнаруживаются разной величины бледные участки, как правило, округлой формы, губчатого строения.

Диффузная анемия плаценты характеризуется значительным поблед-нением ее ткани, что на разрезе отчетливо контрастируется с более полнокровной материнской поверхностью.

В толще плаценты, преимущественно в периферических микрокоти-педонах, при гестозах обнаруживаются белые инфаркты. Обычно они располагаются ближе к маточной поверхности. Как правило, они клиновидной формы, белого цвета. Значительно реже выявляются межворсинчатые тромбы. Локализуются они преимущественно в толще плаценты, не выступая над поверхностью ни базальной, ни хориальной пластинки.

Хориальная пластинка имеет толщину от 85 до 450 мкм. Со стороны плодовой поверхности она покрыта амнионом, цилиндрический эпителий которого отделен базальной мембраной от соединительной ткани пластинки. В толще последней располагаются ветви артерий и вены пуповины. Стенки сосудов, особенно артерий, при гестозах склерозированы.

Хориальная пластинка от межворсинчатого пространства отделена фибриноидом толщиной от 15 до 62 мкм с сохранившимися в нем элементами трофобласта. При этом ворсины покрыты синцитиотрофобластом. Встречаются ворсины, полностью лишенные хориального эпителия.

При гипотрофии плода самого различного происхождения и вида наблюдается выраженная пролиферация синцитиотрофобласта количество синцитиокапиллярных мембран снижено.

Строма ворсин образована соединительной тканью, которая в основном представлена ретикулиновыми волокнами, среди которых имеются единичные, редко расположенные коллагеновые, но преобладают мно-гоотростчатые клетки типа фибробластов. Особенно много фиброзной ткани выявляется в крупных ворсинах, меньше - в ворсинах среднего и со-

всем мало в терминальных ворсинах.

При гестозе супоросных свиноматок в плаценте также обнаруживается склерозированные ворсины. Склероз стромы ворсин характеризуется избыточным появлением коллагеновых волокон в интерстиции, в стенках сосудов, что сопровождается их утолщением, сужением с явлениями гиалиноза до облитерации просвета, с выраженной пролиферацией эндотелия.

Параллельно с развитием коллагеновых волокон в толщу ворсин со стороны хориальной пластинки входят ветви пупочной артерии, которые распадаются на капиллярную сеть. Капилляры переходят в венозную систему плаценты. В артериях стволовых ворсин мышечная стенка состоит из одного гипертрофированного циркулярного слоя. Вены отмечаются лишь меньшей толщиной мышечного слоя. Внутренний слой стенки сосудов представлен однослойным эпителием, подэндотелиального слоя нет.

Избыточное образование кровеносных сосудов может иметь диффузный или ограниченный характер. Диффузная форма характеризуется наличием в строме многих ворсин, преимущественно крупных и средних, большого числа капилляров и сосудов более крупного калибра с расширенными, заполненными кровью просветами.

Проведенные нами исследования показывают, что отек ворсины проявляется увеличением их в объеме при этом форма их становится фестончатой. Строма отечнцх ворсин разрыхлена, капилляры чаще малокровны и сдавлены. Стенки кровеносных сосудов отечны.

При анализе показателей абсолютной массы внутренних органов у новорожденных, рожденных от матерей, страдающих гестозом во время супоросности масса внутренних органов была значительно ниже, чем у клинически здоровых новорожденных поросят.

Не смотря на то, что печень новорожденных поросят имеет относительно высокую массу, ее дефицит, как относительный, так и абсолютный наиболее выражен у поросят гипотрофиков, рожденных от матерей страдавших в период супоросности гестозом. При этом печень умеренного кровенаполнения, тогда как у нормотрофиков, рожденных от клинически здоровых супоросных свиноматок - резко полнокровная, с мелкими субкапсу-лярными кровоизлияниями.

При гистологическом исследовании обнаруживается умеренно вы-

шженный отек, сопровождающийся утолщением и пропитыванием плаз-юй стенок кровеносных сосудов. Нередко отмечался перекапиллярный >тек, расширение пространств Диссе, разволокнение междольковой сочинительной ткани пропитывание ее плазмой. Выявлены дистрофичес-:ие изменения в гепатоцитах - увеличиваются в размерах, набухают. Ци-оплазма таких клеток приобретает сетчатый вид, в ней появляются ваку-1ЛИ, включения белковой и жировой природы. В междольковой соедини-ельной ткани печени, а также внутри долек походу капилляров выявляют-я скопления эритробластов и миелобластов.

В то же время у поросят рожденных от клинически здоровых супо-осных свиноматок печень харастеризуется резким застойным полнскро-ием, особенно з венах расположенных в междольковой соединительной кани. Гепатоциты имеют обычное строение, лежат плотно, относительно редних размеров и имели полигональную форму. Васкулярный пояс ге-атоцитов преобладал над билиарным, наблюдались многочисленные ко-откие выпячивания цитоплазмы, которые вдавались в узкое пространст-о Диссе. Желчные капилляры локализовались между двумя гепатоцита-1И. Очаги кроветворения в дольках и в междольковой соединительной ткани редставлены соединительными клетками.

Масса легких у новорожденных поросят достоверно снижена (р<0.05) днако различий этого показателя между поросятами, рожденных от кли-ически здоровых свиноматок и переболевших гестозом в период супо-осности в каждый исследуемой группе выявить не удалось. Легкие ин-оанатально погибших поросят плотные, слегка поджаты к корню, гисто-огически отмечается неравномерное полнокровие, спадение большинст-а альвеол легких. Легкие неонатально погибших поросят- гипотрофиков асправлены, на поверхности разреза выявляются темно окрашенные учас-<и, местами уплотненные, что создает пестрый вид.

При микроскопическом изучении таких участков легких выявляется езкое неравномерное полнокровие, наличие очагов аталектазы и эмфи-эмы, расплавленных и полурасплавленных альвеол, а также гиалиновых ембран. У новорожденных поросят - нормотрофиков и макросомов пос-е гибели гиалиновых мембран в легких не наблюдалось.

Масса почек у новорожденных поросят не превышала 8.95 ± 0.17 г была снижена у гипотрофных поросят, рожденных от гестозных свино-

маток.

Почки имели характерное дольчатое строение, которое особенно хорошо выражено в случаях гестоза супоросных свиноматок и гипотрофи-ков.

В разрезе строение коркового и мозгового вещества выражено отчетливо. Микроскопически у новорожденных отмечается выраженное полнокровие, дистрофические изменения в эпителии извитых канальцев.

При гестозах рождаются новорожденные у которых в корковом слое почек выявляются недифференцированные клубочки. Они располагаются не только в субкапсулярном слое, но и в толще коры.

Таким образом полученные нами данные свидетельствуют о том, что процессы происходящие в организме супоросных свиноматок, а в основном в материнской и плодной плаценте, определяют ход роста и развития плодов и отражают функциональное состояние фетоплацентарной системы.

ВЫВОДЫ

1. Исследования особенностей гистометрии плаценты в различные периоды.внутриутробного развития свиней, в норме и патологии, позволяет объединить их в единую фето-плацентарную систему, взаимоотношения в которой можно представить как мать- (плацента-плод), которая предопределяет рождение нормо-, гипотрофных и макросомных новорожденных.

2. Основным критерием свидетельствующим о нарушении роста и развития плодов во внутриутробный период при ФПН являются дефицит его антропометрических показателей: масса и длины тела в период рождения, абсолютных и относительных показателей массы внутренних органов у новорожденных поросят.

3. Плацента при ФПН и рождение гипотрофных плодов у свиней характеризуется:

а) веретенообразной формы, диаметром 10.2 ± 2.10 см против 15.3 + 1.23 см в норме. Толщиной ее фетальной части - 3.28 ± 0.27 против 3.42 ± 0.08 в норме, массой 292.5 ± 12.7 г против 367.1 ±13.6 г в норме, объемом 106.9 ± 11.2 мл против 330.4 ± 13.4 мл в норме, площадью материнской поверхности 162.5 ± 15.8 см2 против 203.8 ± 14.7 см2 в норме, при ППК

2.74 ± 0.53% против 3.28 ± 0.32% в норме;

б) фетальная поверхность в плаценте имеет дольчатое (ячеистое) строение. Удельный объем трофобласта межворсинчатого хориона воз-растаетдо 18% против 9% в норме. Микрокотиледоны имеют уплощенную форму, отечные, общее их количество на амнио-хорионе фетальной части уменьшено (4 - 8) в сравнении с таковыми при не осложненной супорос-ности (17 - 25).

4. Морфологические исследования плаценты свиней свидетельствуют о том, что в ней выделяются две зоны: базальная и апикальная.

а) Трофобластическая выстилка ворсин хориона, сгруппированных в микрокотиледоны представлена несколькими типами клеток, находящихся на различных стадиях дифференцировки: столбчатые предиплокарио-циты и диплокариоциты. Количество диплокариоцитов с характерной апикальной поверхностью на ворсинах хориона в норме составляют 7.3 ± 1.24 и резко снижена при ФПН (2.3 ± 0.85);

б) интраэпителиально расположенные капилляры максимально приближены к трофобластическим элементам и эпителию маточной крипты, причем в норме их на единицу площади составляет 0.8 ± 0.08, а при ФПН достигает до 3.7 ± 0.73, при нарастании числа капилляров терминальных ворсин более чем в 13 раз. Появляются участки в которых кровь плода отделяется от крови матери лишь эндотелием и узкой полоской хориаль-ного симпласта, лишенного ядер.

5. В хориальной пластинке, при фетоплацентарной недостаточности:

а) соединительная ткань выглядит уплотненной, содержит много волокнистых структур, объединенных в пучки, идущие перпендикулярно ходу ворсины. Среди них расположены фибробласты, макрофагоподобные клетки с пенистой цитоплазмой и фестончатыми краями. Фибробласты центральной части ворсины лежат свободно, контактируя своими отростками, вблизи сосудов уплощаются, вытягиваются, группируются подстилая ба-зальную мембрану;

б) в апикальных участках цитоплазмы эпителиальных клеток - крипт в строме эндометральных желез встречается в 4 раза меньше мелких голубых гранул, а в соединительной ткани эндометрия вовсе нет Хейл-пози-тивного вещества. Интенсивность секреторных процессов маточных желез резко снижается, о чем свидетельствует низкая пиронинофилия ци-

топлазмы железистых клеток. Исчезают куполообразные выросты в суп-рануклеарной части клеток, а каплеобразные запустевают. Интенсивность гликозоаминогликанов снижена в 3.5 раза.

6. Цитофотометрические исследования ДНК интерфазного хроматина в ядрах клеток лимфоцитов и хориона на субклеточном уровне показали:

а) Суммарная оптическая плотность ядер лимфоцитов составляет 7.34 ± 0.13 усл. ед. и соответствуетдиплоидным цифрам (2с) содержания ДНК. При ФПН она укладывается в классы 8с - 16с и таких ядер свыше 90%, при среднем содержании ДНК на ядро 46.13 ± 2.43 усл. ед. . Площадь ядер возрастает более чем в два раза против нормы;

б) количество ДНК в диплокариоцитах возрастает с 32.5 ± 2.05 до 57.23 ± 1.97 усл. ед., но еще больше возрастает их площадь с 97.3 + 4.26 до 187.2 ± 5.12 мкм. В ядрах диплокариоцитов более чем в два раза увеличивается содержание менее компактного хроматина, близкого по своим морфологическим характеристикам к аухроматину.

7. Выявлена при ФПН меньшая коллагенизация хориальных ворсин с повышенным количеством крупных ядер с меньшей плотностью упаковки хроматина. Площадь ядер фибробластов возрастает с 30.28 ± 2.34 до 47.12 ± 2.09 мкм при возрастании в два раза ядер, имеющих близкое к тетраплоидному количеству ДНК (с 16 - 32 до 37.4%). В ядрах лимфоцитов и фибробластов возрастает площадь, количество конденсированного хроматина и индекс хроматина.

8. На фоне гестоза супоросных свиноматок возрастает частота появления врожденной гипотрофии новорожденных при ППК 3.11 ± 0.74 при 3.25 + 0.51% у клинически здоровых свиноматок. Маточная поверхность выглядит неровной, бугристой, в центре располагаются тонкие, мелкие микрокотиледоны, в то время как на периферии крупные, толстые, наблюдается анемия плаценты. Хориальная пластинка от межворсинчатого пространства отделена фибриноидом толщиной от 15 до 62 мкм. Встречаются ворсины полностью лишенные хориального эпителия.

9. У поросят, рожденных от матерей страдавших гестозом: а) печень умерено кровонаполненна, с мелкими субкапиллярными кровоизлияниями. Отмечается умеренно выраженный отек, сопровождающийся утолщением, пропитыванием плазмой стенок сосудов, расширением пространств

}иссе, разволокнением междольчатой соединительной ткани. Выявлены (истрофические изменения в гепатоцитах, цитоплазма которых приобретет сетчатый вид; б) в легких отмечено неравномерное полнокровие, на-!ичие очагов ателектаза, эмфизема, а также гиалиновых мембран; в) поч-:и имели характерно дольчатое строение и дистрофические изменения в шителии извитых канальцев, а также недифференцированные клубочки располагаются не только в субкапиллярном слое, но и в толще коры.

10. Изучение гистометрических показателей новорожденных породят и особенно структуры рожденной плаценты не только облегчит уста-ювление диагноза перенесенного заболевания гестозом свиноматок в период супоросности, но и в определенной мере поможет в прогнозировали состояния плодов в постнатальный период в случаях с неблагоприят-ым анамнезом и осложнениями в течение внутриутробного развития пло-ов.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты исследований, изложенные в диссертации, рекомен-уются для использования в учебном процессе по гистологии, цитологии, мбриологии и ветеринарному акушерству, а также при написании соот-етствующих глав учебников и учебных пособий по ультраструктурной ор-энизации органов и тканей в процессе индивидуального развития живот-ых.

2. Выявленные особенности строения плаценты в процессе онтоге-еза, проявляющиеся образованием специализированных микрокотиледо-ов фетальной ее части, необходимо учитывать и использовать в прове-ении научных исследований с помощью электронной микроскопии.

3. Обнаруженные нами корреляционные связи между уровнем хро-¡атина фибробластов плаценты и лимфоцитами периферической крови югут быть использованы в диагностике фетоплацентарной недостаточ-ости у свиноматок во второй половине супоросности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Авдеенко B.C., Егунова A.B., Рыбалкина Л.П.. Гистометрическая характеристика новорожденных поросят и их плацент при физиологическом течении беременности // Материалы Всероссийской научной и учебно-методической конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных. -Воронеж, 1994. -С. 23.

2. Егунова A.B., Рыбалкина Л.П.. Морфоструктура легких у новорожденных поросят // Тезисы докладов XIII региональной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 60-летию Оренбургской области и 250-летию Оренбургской губернии: Резервы увеличения производства и повышения качества продукции. -Оренбург,

1994. -С. 186.

3. Авдеенко B.C., Егунова A.B.. Функциональная морфология новорожденных поросят и их плацент во временной ретроспективе // Материалы научно-производственной конференции профессорско-преподавательского состава, аспирантов, стажеров и студентов СГАВМ и Б. -Саратов,

1995.-С. 42.

4. Егунова A.B., Коннов Н.П.. Методические подходы к изучению ультраструктуры плаценты свиней // Научные аспекты профилактики и терапии болезней сельскохозяйственных животных / Материалы научной конференции, посвященной 70-летию факультета ветеринарной медицины ВГАУ им. К.А. Глинки. -Воронеж, 1996. С. 71.

5. Егунова A.B., Шмелев М.В.. Морфометрическая характеристика фетоплацентарного комплекса при физиологическом течении беременности у свиноматок // Ветеринарные и зооинженерные проблемы животноводства / Материалы I Международной научно-практической конференции. -Витебск, 1996. -С. 32.

6. Егунова A.B.. Методика исследования ультраструктуры плаценты свиньи: Рекомендации для специалистов ветеринарного и биологического профиля. -Саратов, 1996. 15с.