Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармакокоррекция нитроксидергического и иммунно-биохимического статуса у телят, больных бронхопневмонией

На правах рукописи

ТАЗЕТДИНОВ МАКСИМ НАДИКОВИЧ

I

ФАРМАКОКОРРЕКЦИЯ НИТРОКСИДЕРГИЧЕСКОГО И ИММУННО-БИОХИМИЧЕСКОГО СТАТУСА У ТЕЛЯТ, БОЛЬНЫХ БРОНХОПНЕВМОНИЕЙ

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

I

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Троицк-2003 г.

[ Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования - Уральской государственной | академии ветеринарной медицины. |

| I

I '

1 1 ( • Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Ермолин Александр Васильевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Сунагатуллин Фарук Ахмадуллович

доктор ветеринарных наук Грибовскяй Юрий Геннадьевич

Ведущая организация: Уральская государственная сельскохозяйственная академия

Защита состоится « 22 » октября__2003 г. в час. на заседании

диссертационного совета Д. 220. 066. 01 при Уральской государственной академии ветеринарной медицины (457100, г. Троицк, Челябинская область, Гагарина, 13, тел. 2-53-84,2-64-75).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО -Уральской государственной академии ветеринарной медицины.

Автореферат разослан « » ¿"сг^^и^е/сл? 2003 г.

Учёный секретарь

диссертационного совета

Прокофьева Т.В

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Открытая в последние голы ранее неизвестная биорегуля-торная система, в которой главную роль играет оксид азота (N0) вызвала многочисленные исследования в области сосудистой физиологии, патфизиологии, биохимии, фармакологии, иммунологии и других направлениях указанной проблемы (И.С. Северина, 1995; А.Ф. Ванин, 1998; А.Х. Уразаев, 1999; А.А. Сосунов, 2000; R.F. Furchgott, J.V. Zawadski, 1996; C.F. Broasnan et all., 1994; B.Y. Winter et all., 1995 и др.).

Установлено, что молекула оксида азота в небольших и умеренных концентрациях обладает широким спектром биорегуляторного действия: снимает спазм сосудов, принимает участие в бактерицидном и противоопухолевом эффектах лейкоцитов, выполняет роль сигнальной молекулы в различных нейрональных функциях и др. (И.Ю. Малышев, Е.Б. Матухина, 1998; В.Г. Башкатова, К.С. Раевский, 1998; JI.H. Кубрина с соавт., 1990; D.S. Bredt et all., 1992; Т. Nakak, 1994).

В то же время гиперпродукция оксида азота в организме приводит к образованию комплекса N0 с супероксидным анионом, в результате чего происходит нитрирование и окисление многих структурных и ферментных белков, блокируются важнейшие сигнализационные коммуникации, что обуславливает существенное повреждение тканей (Х.М. Марков, 1996; С.А. Поленов, 1998; R.L. Lauterbach et all., 1995; A. Rehraan et all., 1997).

Сведения о состоянии нитроксидергических процессов у животных при легочной патологии малочисленны. Известно, что гиперстензия легких во многом связана с недостаточной выработкой оксида азота (Р.С.А. Каш, Z. Zovender,1994), а бактериальная пневмония у бычков - с активизацией индуцированной формы NO-синтазы и образованием больших количеств оксида азота (K..J. Coodrum, J.Poulson-Dunlap, 2002; J.M. Fligger et all., 1999; W.R. Fracey et all., 1994; R. Memandez-Panolo et all., 2001).

Поэтому изучение взаимосвязей нитроксидергических процессов с морфо-функциональными изменениями в органах и системах при болезнях животных и применение в комплексной терапии средств, корригирующих эти нарушения является актуальным, позволяющим уточнить патогенез болезни и повысить эффективность лечения.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось изучение состояния нитроксидергических процессов и иммунно-биохимического статуса у телят, больных различными формами бронхопневмонии до и в процессе лечения.

На разрешение были поставлены следующие задачи:

1. Установить взаимосвязь в изменениях нитроксидергических процессов и иммунно-биохимическом статусе телят, больных различными формами бронхопневмонии.

2. Испытать эффективность комплексной терапии у телят, больных бронхопневмонией, включающей антибиотик гентамицина сульфат и препараты с антинитроксидергиче-ской направленностью: аскорбиновая кислота, дексаметазон и натрия тиосульфат.

3. Выявить динамику изменений в нитроксидергических процессах и иммунно-биохимических показателях крови в процессе лечения.

4. Рассчитать экономическую эффективность лечебных мероприятий.

Научная новизна. Установлено, что у телят, больных бронхопневмонией неспецифической этиологии в крови и моче возрастают уровни стабильных метаболитов эндогенного оксида азота, степень выраженности которых зависит от тяжести болезни. Повышенная активность нитроксидергических процессов сопровождается существенными изменениями в иммунно-биохимическом статусе больных животных, что вносит коррективы в патогенез болезни и обосновывает целесообр^рр^щ^щю^ц^урАменения в комплексной терапии препаратов с антинитроксидфгачесв^додоздодостьф.

! \

Практическая значимость работы. Результаты работы могут быть использованы ветеринарными специалистами при разработке лечебных мероприятий у телят, больных бронхопневмонией, чтении лекций по курсам фармакологии и терапии для студентов ветеринарных факультетов, а также написании учебников и монографий.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Взаимосвязь в изменениях нитроксидергических процессов и иммунно-биохимическом статусе у телят, больных бронхопневмонией.

2. Результаты комплексной терапии при бронхопневмонии у телят, включающей антибиотик гентамицина сульфат и препараты с антинитроксидергической направленностью: аскорбиновая кислота, дексаметазон и натрия тиосульфат.

3. Экономическая эффективность терапии у телят, больных бронхопневмонией.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Межвузовской научно-практической и научно-методической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины, животноводства, товароведения, обществознания и подготовки кадров на Южном Урале на рубеже веков» (Троицк, 2001 г.); на Международной научно-практической конференции «Новые энтеросорбенты и фармакологически активные вещества и их применение в ветеринарии и животноводстве», посвященной восьмидесятилетию Заслуженного деятеля науки РФ, доктора ветеринарных наук, профессора М.И. Рабиновича (Троицк. 2002 г.); на межкафедральном заседании профессорско-преподавательского состава факультета ветеринарной медицины УГАВМ, февраль, 2003 год; ил Мейсдукародпай научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной юбилею П.С. Лазарева (Троицк, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано четыре научные статьи.

Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований и их результатов, заключения, выводов и практических предложений, списка литературы и приложения. Диссертация изложена на 144 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 22 таблицами и 11 рисунками. Список литературы включает 205 источников, в том числе 95 иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ РЕЗУЛЬТАТЫ 2.1. Материалы и методы исследований

Экспериментальную часть работы выполняли на базе межкафедральной лаборатории Уральской государственной академии ветеринарной медицины и частично в иммунно-фармакологической лаборатории при Челябинской государственной медицинской академии согласно плана НИР кафедры клинической диагностики, основ ветеринарии и радиобиологии (номер госрегистрации 01.9.90002362).

Материалом для исследования служили цельная кровь, стабилизированная гепарином, сыворотка крови, суточная моча и испытуемые препараты, а объектом наблюдения - подопытные телята: клинически здоровые и больные бронхопневмонией.

Научно-производственный опыт проводили в СХП ТОО «Карсы» Троицкого района Челябинской области в период 2001 - 2002 годов.

Клиническому обследованию было подвергнуто 170 телят возрастом от 3 месяцев и старше, черно-пестрой породы, по результатам которого сформировали 5 групп подопытных животных (по 10 голов в каждой).

Первая группа включала клинически здоровых телят и служила контролем, вторая и третья — с признаками острой формы бронхопневмонии, а четвертая и пятая - с хронической формой.

В хозяйстве применяют традиционную технологию получения, выращивания и откорма молодняка крупного рогатого скота. Животных содержат без привязи в типовом телятнике по 8 - 10 голов в клетке на полах с деревянным покрытием. Кормление осуществляют согласно технологии производства, поение - в волю. Основной отел маточного поголовья приходится на зимне-весенний период.

Согласно данных отчетной документации ветеринарной службы, наибольшая заболеваемость телят бронхопневмонией, приходится на весенне-летний период.

Диагностику бронхопневмонии у телят осуществляли с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве, а также характерных признаков, выявленных при клиническом обследовании поголовья: серозное, серозно-слизистое или слизисто-гнойное истечение из носовых полостей, сухой или влажный кашель, особенно в утренние ■ часы, жесткое везикулярное или бронхиальное дыхание, сопровождаемое сухими или влажными хрипами, наличие очагов притупления в легких, чаще в предлопаточной полости. Острая форма бронхопневмонии сопровождалась лихорадкой ремитирующего типа, а хроническая чаще носила постоянный характер.

Инфекционные болезни исключали по результатам бактериологических исследований носовой слизи и патматериала в Троицкой районной ветеринарной лаборатории. Здесь же определяли чувствительность микрофлоры к антибиотикам.

С целью определения состояния нитроксидергических процессов и иммунно- ■ биохимического статуса у подопытных телят брали кровь из краевой вены' ушной раковины для проведения морфологического анализа, а из яремной вены - иммунно-биохимического в утренние часы до кормления в динамике: исходный фон и на 5,10 и 20 сутки после окончания курса лечения. Одновременно вели сбор суточной мочи.

Больным телятам второй и четвертой опытных групп применяли схему терапии, принятую в хозяйстве: изоляция в отдельный станок, сбалансированный рацион, а в качестве антимикробного препарата внутримышечно вводили раствор гентами-цина сульфата из расчета 80 мг на животное утром и вечером, к которому была наиболее выражена чувствительность микрофлоры, выделенная из проб носовой слизи.

В качестве средств симптоматической терапии одновременно применяли: подкожно 20 %-ный раствор кофеина - натрия бензоэта в дозе 2,0 г (5 ампул по 2 мл) для стимуляции центральной нервной и сердечно-сосудистой систем; внутрь настой из листьев мать- и мачехи 1 : 10 в объеме 300 мл в качестве отхаркивающего средства с одновременной дачей кальция глюконата по одной таблетке (0,5 г) утром и вечером как антиаллергическое средство.

В сравнительном аспекте с базовым лечением и с целью коррекции нитроксидергических процессов и иммунно-биохимического статуса в третьей и пятой опытных группах телят с бронхопневмонией испытали комплексную схему терапии, включающую:

внутримышечное введение раствора гентамицина сульфата в той же дозе и кратности введения, что и при базисной терапии; .

внутримышечное введение натрия аскорбината в форме 10 %-ного ампулиро-ванного раствора из расчета 0,5 г на животное (5 ампул по 1 мл), дексаметазона в форме 0,4 % раствора по 1 мл один раз в сутки;

внутривенно натрия тиосульфат в форме 5 %-ного водного раствора в дозе 1мл на 1 кг массы животного один раз в сутки.

Одновременно применяли и симптоматическое лечение.

Курс терапии длился от 5 до 13 суток в зависимости от тяжести болезни.

Обоснованием к применению указанных препаратов являлось их выраженное

действие, направленное на снижение продукции эндогенного оксида азота в организме больных животных, в регуляции обменных процессов и иммуномодулирую-щие эффекты.

О состоянии нитроксидергических процессов у подопытных телят судили по суммарным уровням наиболее стабильных метаболитов оксида азота (нитратам и нитритам), содержащихся в крови и суточной моче, определяемых по методу J.C. Green et all. (1982), в модификации H.A. Емченко (1994).

В качестве тестов оценки иммунно-биохимического статуса у животных до и после лечения использовали:

определение содержания гемоглобина - гемоглобинцианидным методом; подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов меланжерным способом в камере Горяева;

в окрашенных по Романовскому-Гимза мазках крови вели подсчет клеток белой крови, используя трехпольный метод по Филиппченко, выводили лейкограмму; учет скорости оседания эритроцитов (СОЭ) проводили по методу Панченкова.

Популяции нейтрофилов периферической крови телят получали методом A.B. Зурочка (1984).

Изучение способности нейтрофилов крови к захвату частиц проводили на модели поглощения частиц полистерольного латекса диаметром 1,7 мкм по методу И.С. Фрейдлкн с соавт. (1976) в модификации Л.Я. Эберта с соавт. (1983). •

Подсчет лизосом вели полуколичественно в «крестах» (И.С. Фрейдлин, 1986).

Исследование внутриклеточного кислородозависимого метаболизма фагоцитов проводили, используя НСТ-тест (В. Park et al., 1968; А.Н. Маянский, М.Е. Вико-ман, 1979). Метод основан на учете интенсивности восстановления клетками нитро-синего тетразолия (HCT) в его нерастворимую форму - диформазан. Постановку метода осуществляли в модификации A.B. Зурочка (1984).

Определение Т- и B-лимфоцитов в крови осуществляли в реакции спонтанного розеткообразования по методу М. Jondal et al. (1972) в модификации P.B. Петрова с соавт. (1984) и A.B. Зурочка (1984). Механизм этой реакции заключается в адсорбции бараньих и мышиных эритроцитов соответственно на Т- и B-лимфоцитах. Розетками считается комплекс более чем из трех эритроцитов, адсорбированных на одном лимфоците.

Определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови проводили по методике, предложенной В. Гашковой с соавт. (1978), основанной на том, что полиэтиленгликоль (ПЭГ) с молекулярной массой 6000 при добавлении к сыворотке крови приводит к осаждению белков, пропорционально концентрации циркулирующих иммунных комплексов.

Об изменениях в белковом обмене судили по содержанию общего белка, определяемого рефрактометрически (И.М. Беляков, 1975), белковых фракций - нефе-лометрическим экспресс-методом (Б.И. Антонов с соавт., 1991), тиоловых (SH) групп белков - по Фаломееву(1981), активности ферментов переаминирования: аспа-рат-аминотрансферазы (АсАТ) и аланин-аминотрансферазы (АлАТ) по методу Рай-тмана и Френкеля (1994) с использованием набора «Био-ла-тест».

О состоянии углеводного обмена судили по количеству глюкозы, определяемой глюкооксидантным методом с набором «Глюкоза - ФДК (В.В. Меньшиков, 1994); жирового - по содержанию ß-липопротеидов по Бурштейну (A.A. Покровский, 1969).

Экономическую эффективность лечебных мероприятий рассчитывали по об-

щепринятой методике (И.Н. Никитин, В.Ф. Воскобейников, 1999; Ветеринарное законодательство, т. 1,2000).

Статистическую обработку полученных цифровых данных осуществляли методом вариационной статистики (A.M. Мерков, JI.E. Поляков, 1974; Т.Ф. Лакин, 1980), с использованием программы Exsel на PC IBM.

Вероятность ошибки (Р) определяли по таблице Стьюдента с учетом степеней свободы для трех уровней значимости. Различие между сравнительными величинами в эксперименте считали достоверными при Р < 0,05.

2.2. Состояние нитроксидергических процессов и иммунно-биохимического статуса у подопытных телят

У клинически здоровых телят суммарный уровень нитратов и нитритов в крови в среднем составлял 1,19 ± 0,10 ммоль/л, а в суточной моче -1,95 + 0,13 ммоль/л. В тоже время у телят с острой формой бронхопневмонии их уровень в крови возрастал до 2,68 ± 0,17 ммоль/л, или в 1,25 раза, а в моче - до 4,61 + 0,19 ммоль/л, или в 1,36 раза (табл. 1). При хронической бронхопневмонии содержание указанных метаболитов как в крови, так и в моче возрастало еще в большей степени. Так, в крови суммарный уровень NOx у больных животных по сравнению со здоровыми достигал 5,86 ± 0,21 ммоль/л или увеличился в 3,9 раза, а в моче - до 8,11±0,23 ммоль/л, или в 3,15 раза.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об интенсификации нитроксидергических процессов у телят, больных бронхопневмонией. Причем прослеживается прямая зависимость их содержания в крови и моче от тяжести заболевания.

При острой форме бронхопневмонии содержание гемоглобина по сравнению с контролем достоверно было снижено на 9,3 %, эритроцитов - на 11,8 %, СОЭ повышена в 1,8 раза, а содержание лейкоцитов превышало на 31,7 %.

При хронической форме бронхопневмонии количество гемоглобина снизилось на 13,5 %, эритроцитов - на 24,2 %, СОЭ превышала контроль в 5,3 раза, а количество лейкоцитов возрастало на 66,6 %.

В лейкограмме крови отмечали явления базофилии, эозинофилии, нейтрофи-лии со сдвигом ядра влево за счет возрастания процентного содержания юных и па-лочкоядерных нейтрофилов, а также моноцитоз. В большей степени указанные изменения в лейкограмме были выражены при острой форме бронхопневмонии и в меньшей - при хронической.

С возрастанием тяжести заболевания и его длительности течения изменялась и направленность в показателях крови: регенеративный сдвиг ядра переходил в дегенеративный, о чем свидетельствует возрастание сегментоядерных нейтрофилов и снижение палочкоядерных.

1. Содержание метаболитов оксида азота в крови и моче у подопытных телят, п=10

Группы

Показатели Статистич. показатели Здоровые Больные

Острая форма Хроническая форма

Суммарный уровень ЫОх в сыворотке крови, ммоль/л Х±5х % Р 1,19 ±0,10 2,68 ±0,17 + 125,2 < 0,001 5,86 ±0,21 + 392,4 <0,001

Суммарный уровень ИОх в моче, ммоль/л Х±8х % Р 1,95 + 0,13 4,61 ±0,19 + 136,4 <0,001 8,11 ±0,23 + 315,8 <0,001

Существенные изменения у больных бронхопневмонией телят отмечены и в ряде биохимических показателей сыворотки крови.

Так, если у клинически здоровых телят содержание общего белка в среднем составляло 72,4 ± 0,85 г/л, то у больных с острой формой бронхопневмонии наблюдали его снижение до 65,3 ± 0,91 г/л, или на 9,9% (Р < 0,05), а при хронической форме до 59,6 ± 0,66 г/л, или на 17,7% (Р < 0,01). Одновременно изменялся и фракционный состав белков: снижалось содержание альбуминов до 35,8 ± 0,22 г/л против 38,7+0,41 г/л в контроле, или на 7,5 % при острой форме и до 33,1 ± 0,19 г/л, или на 14,5 % (Р < 0,05) при хронической. В тоже время количество у-глобулинов достоверно снижалось при хронической форме бронхопневмонии с 13,8 ± 0,15 г/л до 11,2 ± 0,11 г/л, или на 10,9 % (Р <0,05). Количество глюкозы и сульфгидрильных групп белка при острой форме бронхопневмонии по сравнению с контролем было снижено на 20,0 и 35,3 % (Р < 0,05 0,01), а при хронической - на 27,1 и 47,1 % (Р <0,01) соответственно.

О нарушении ферментативной функции печени можно судить по одним из ключевых ферментов переаминирования - аминотрансферазам. У больных телят по сравнению со здоровыми активность аланинаминотрансферазы (АЛаТ) возрастала при острой форме на 44,7 %, а при хронической - на 76,3 % (Р < 0,01 - 0,001), аспар-татаминотрансферазы (АСаТ) - на 16,1 и 38,7 % соответственно.

Содержание р-липопротеидов у больных животных превышало контроль на 11,7 и 28,8 % в зависимости от формы течения болезни.

Полученные данные свидетельствуют о глубоких нарушениях белковообразо-вательной, гликолитической и других функций печени.

При исследовании показателей фагоцитарной функции нейтрофилов периферической крови у подопытных телят было отмечено, что если у клинически здоровых животных активность фагоцитоза составляла 42,7 ± 0,96 %, то у больных с острой бронхопневмонией она снижалась до 28,9 ± 0,48 %, а хронической - до 19,3 ± 0,61 %. Аналогичная картина прослеживается и со стороны интенсивности фагоцитарной реакции нейтрофилов. Так, при острой бронхопневмонии она по сравнению со здоровыми животными достоверно снижалась с 87,8 ± 1,69 до 64,3 ± 1,12, а с хро-

нической - до 47,3 ± 0,88 частиц латекса. Очевидно, что снижение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови у больных телят связано с ослаблением приспособительной реакции организма на бактериальную инфекцию, а следовательно, и снижением активности поглощения ими чужеродных клеток.

У здоровых телят спонтанная и индуцированная НСТ-активность составляют 22,3 ± 0,84 и 24,8 ±0,91 % соответственно. В тоже время у больных бронхопневмонией наблюдается снижение данных показателей до 19,9 ± 0,61 % при острой форме и до 11,5 ± 0,75 % - при хронической.

Отмеченный факт указывает на нарушение эффективности метаболических путей в фагоцитах, в которых нарабатывается супероксидный анион 02 и его производные с ярко выраженными антимикробными свойствами, поскольку при гиперпродукции оксида азота он вступает в связь с супероксидным анионом, блокируя его действие.

Индексы спонтанной и индуцированной интенсивности НСТ у здоровых телят составляли соответственно 0,67 ± 0,06 и 0,58 ± 0,03 усл. ед., а у больных они были достоверно снижены: при острой форме на 20,4 - 20,7 %, а при хронической - на 47,8 и 44,9 % соответственно.

Учитывая, что НСТ-тест является биохимическим и цитохимическим маркером антимикробных факторов нейтрофилов и интегрально отражает функциональное состояние ключевой ферментной системы, можно заключить, что повышенная' продукция эндогенного оксида азота нарушая кислородо-зависимый метаболизм цито-токсичности этих клеток, в частности мембранного НАДФ - Н2 - оксидазы, обуславливает снижение фагоцитарной активности нейтрофилов.

Анализируя лизосомальную активность нейтрофилов крови телят необходимо отметить, что у здоровых животных индекс общей люменесценции лизосом (ИОЛЛ) составлял 341,8 ± 19,3 усл. ед, в тоже время у больных с острой бронхопневмонией он снизился до 288,6+21,6 усл. ед., или на 15,6 %, а с хронической - до 232,9 ± 19,6 усл. ед., или на 31,9 %, что отражает подавление лизосомальной активности нейтрофилов крови и их способности к реагированию на внешние воздействия, и в частности, на депрессивное действие патогенной микрофлоры.

У клинически здоровых телят количество Т-лимфоцитов составляет 35,7 ± 1,89 %, или 3,19 ± 0,21 тыс./мкл от общего количества лейкоцитов. При острой форме бронхопневмонии происходит их увеличение до 52,8 ± 2,47 %, или в 1,47 раза, Т-хелперов - до 36,9 ± 1,28 % против 26,1 ± 0,93 % в контроле, или на 41,3 %, Т-супрессоров - до 27,6 ±1,12% против 18,7 ± 0,49 % у здоровых, или на 47,5 %.

Эти данные говорят о том, что в острую фазу воспаления происходит интенсивное выделение недеференцированных Т-кпеток под действием антигенной стимуляции, поступлении их в кровоток, а также на активацию Т - Т взаимодействия, конечным продуктом которого является образование Т-эффекторов ГЗТ и служит потенциалом для развития аутоиммунных процессов.

При хронической форме бронхопневмонии отмечали противоположную направленность в системе Т-лимфоцитов. Так, количество Т-лимфоцигов было снижено по сравнению с контролем на 35,8 %, Т-хелперов - на 39,9 и возрастание Т-супрессоров - на 21,4 %. На наш взгляд, это свидетельствует об истощении адаптационных возможностей кроветворных органов и угнетении пролиферативной активности недифференцированных клеток предшественников в костном мозге и лимфо-идных органах.

Содержание В-лимфоцитов в крови здоровых животных составило 6,84 ± 0,66 %, или 0,58 ± 0,07 тыс./мкл, в тоже время у больных бронхопневмонией их количество снижалось до 4,13 ± 0,29 % с острой формой и до 3,87 ± 0,31 % - с хронической, что указывает на иммунодефицит по системе В-лимфоцитов. Это возможно связано с тем, что большинство В-клеток подвергается пролиферации и дифференциации в плазматические клетки - продуценты антител различных классов в ответ на местную воспалительную реакцию.

Концентрация иммунных комплексов возрастала при острой форме бронхопневмонии в 1,6, а при хронической — в 2,5 раза, что свидетельствует о развитии деструктивных процессов в тканях и органах больных животных.

2.3. Фармакокоррекция нитроксидергических процессов и иммунно-биохимического статуса у телят, больных бронхопневмонией

При базисном способе лечения телят как с острой, так и с хронической формами бронхопневмонии (табл. 2) динамика содержания суммарных уровней нитратов и нитритов в крови и моче достоверных изменений не претерпевала, хотя и имела •. I нденцию к их некоторому снижению.

2. Содержание метаболитов оксида азота у телят при базисном способе лечения,

Х±8„ п=10

Показатель Исходный фон После лечения, дни

5 | 10 | 20

Острая форма

Суммарный уровень N0* в крови, ммоль/л 2, 68 ±0,17 2,51+0,29 2,39 ± 0,24 2,55 ±0,31

Суммарный уровень N0* в моче, ммоль/л 4,61 ±0,19 4,40 ±0,23 4,36 ±0,29 4,27 ± 0,21

Хроническая форма

Суммарный уровень N0* в крови, ммоль/л 5,86 ±0,21 5,77 ±0,17 5,43 ±0,22 5,99 ±0,19

Суммарный уровень N0* в моче, ммоль/л 8,11 ±0,23 7,46 ±0,33 7,60 ±0,41 7,99 ±0,48

Так, при острой форме бронхопневмонии на 5 сутки после 7-10-кратного курса терапии их суммарный уровень в крови снизился от исходного фона на 6,5 % (Р < 0,5), в моче - на 4,6 % (Р < 0,1), на 10 и 20 сутки в крови на 10,9 и 4,9 % и в моче - на 5,5 и 7,4 % (Р < 0,5).

При хронической форме бронхопневмонии базисная терапия также не изменя-

ла содержание уровней метаболитов как в крови, так и в моче. На 5 сутки после 10 -13-кратного курса лечения их уровень в крови практически не изменился, а на 10 сутки он снизился на 7,4% от исходного фона. Аналогичная картина прослеживалась и в их экскреции с мочой.

Следовательно, применение в комплексной терапии телятам, больным бронхопневмонией одного антибиотика со средствами симптоматического лечения не оказывает существенного влияния на динамику нитроксидергических процессов.

Более выраженные и достоверные изменения в динамике содержания метаболитов оксида азота в крови и моче получены при использовании в комплексной терапии средств с антинитроксидергической направленностью (табл. 3).

3. Содержание метаболитов оксида азота у телят после лечения с использованием препаратов с антинитроксидергическим действием, X ± 5„ п=10

Показатель Исходный фон После лечения, дни

5 | 10 | 20

Острая форма

Суммарный уровень >ЮХ в крови, ммоль/л 2,68 ±0,17 1,67+0,13** 1,41+0,19** 1,25+0,21**

Суммарный уровень N0, в моче, ммоль/л 4,61 ±0,19 2,13+0,18** 1,87±0,21** 1,64±0,11**

Хроническая форма

Суммарный уровень N0* в крови, ммоль/л 5,86 ±0,21 3,29±0,10** 2,41±0,15** 2,10±0,22***

Суммарный уровень N0, в моче, ммоль/л 8,11 ±0,23 4,45+0,35** 2,17+0,29*** 1,84±0,19***

Примечание: * - Р < 0,05; ** - Р < 0,01; *** - Р < 0,001

Так, у телят с острой формой бронхопневмонии после 5 - 7-кратного курса терапии суммарный уровень N0* в крови по сравнению с исходным фоном на 5 сутки снизился на 37,9 %, 10 и 20 сутки - на 47,4 и 53,4 % соответственно (Р < 0,01 - 0,001). К этому времени прослеживалась выраженная тенденция снижения их экскреции с мочой. На 5 сутки после проведенного курса лечения в группе телят с острой формой бронхопневмонии уровень выведения метаболитов оксида азота уменьшился по отношению к исходному фону на 53,8 %, с хронической - на 42,2 %, на 10 сутки - на 59,1 и 73,3 % и на 20 сутки - на 64,5 и 77,4 % соответственно.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что введение в комплексную терапию средств с антинитроксидергической направленностью способствует снижению продукции эндогенного оксида азота у телят, больных бронхопневмонией.

После 7 - 10-кратного курса базисной терапии, принятой в хозяйстве телятам с острой бронхопневмонией и 10 - 13-кратной - с хронической формой бронхопневмонии отмечали тенденцию к нормализации показателей крови.

Так, на 5 сутки после окончания курса терапии содержание гемоглобина у телят с острой бронхопневмонией возрастало с 103,7+3,11 г/л (исходный фон) до 108,1 ± 2,66 г/л, или на 4,2 % (Р < 0,5), а с хронической - с 98,9 ± 1,94 до 105,1 ± 2,13 %, или на 6,2 % (Р>0,5). На 10 и 20 сутки количество гемоглобина превышало исходный уровень на 6,6 и 8,6 - 9,8 и 10,9 % (Р < 0,5 - 0,05) соответственно. К этому времени увеличивалось и количество эритроцитов: у телят с острой формой бронхопневмонии на 5 сутки после окончания лечения на 8,4 %, 10 и 20 сутки - на 9,4 и 9,1 %, а с хронической - на 7,1, 11,6 и 26,9 % (Р < 0,5 - 0,05) соответственно. В тоже время количество лейкоцитов постепенно снижалось: к 5 суткам на 11,6 %, 10 и 20 суткам - на 14,9 и 15,4 % (Р < 0,05) у телят с острой бронхопневмонией и на 26,0, 28,7 и 32,3 % соответственно с хронической. Скорость оседания эритроцитов также постепенно снижалось, однако даже к 20 суткам еще не достигала показателей здоровых животных.

В лейкограмме крови у больных животных после применения указанного способа лечения наиболее заметные изменения касались возрастания процентного содержания палочкоядерных нейтрофиЛов, лимфоцитов как при острой, так и при хронической форме бронхопневмонии.

В группе телят, где применяли комплексную терапию, включающую препараты с антинитроксидергической направленностью изменения в показателях крови были более существенными и с большей степенью достоверности.

Так, на 10 сутки после 5 - 7-кратного курса лечения больных телят с острой формой бронхопневмонии содержание гемоглобина в крови увеличилось от исходного фона на 20,9 % (Р < 0,05), эритроцитов - на 31,3 % (Р < 0,01), СОЭ уменьшилась на 63,7% (Р < 0,001), а количество лейкоцитов снизилось на 36,2 % (Р<0,01).

К этому времени у телят с хронической бронхопневмонией после 7-10-кратного курса лечения гемоглобин повысился на 20,2 %, эритроциты - на 35,3 % (Р < 0,05), а лейкоциты снизились на 39,5 %, СОЭ снизилось на 62,7 % (Р < 0,001). К 20 суткам исследуемые показатели приближались к таковым здоровых животных.

Назначение данной схемы лечения способствовало в более ранние сроки по сравнению с базисной терапией нормализации показателей лейкограммы крови. Так, уже к 5 суткам после лечения телят с острой бронхопневмонией и к 10 суткам - с хронической, процентное содержание эозинофилов, палочкоядерных нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов приближалось к показателям здоровых животных.

Из результатов исследований сыворотки крови у больных телят до и после назначения различных способов лечения следует, что как базисная, так и комплексная терапия, оказывали положительное действие на показатели белкового, углеводного и жирового обменов, а также на активность ферментов переамини-рования. Однако степень выраженности этих изменений была также не одинаковой.

Так, на 5 сутки после проведенного курса лечения с применением базис-

ной терапии у телят с острой бронхопневмонией содержание общего белка существенных изменений не претерпевало, хотя и имела место тенденция к его повышению по отношению к исходному фону. Изменения во фракционном составе белка касались некоторого увеличения альбуминов и более достоверно Р-глобулинов: к 5 суткам в 2 раза, к 10 и 20 суткам - на 79,3 и 94,8 % соответственно. Содержание у-глобулинов существенно не изменялось.

Достоверные изменения в показателях БН-групп белка, глюкозы и Р-липопротеидов, а также активности ферментов АЛаТ и АСаТ отмечены на 10 и 20 сутки наблюдения, когда их значения приближались к уровню здоровых животных. Близкие результаты в изменениях указанных показателях отмечены и при лечении телят с хронической бронхопневмонией, однако их нормализация, как правило, наступала только к 20 суткам наблюдения.

Более существенные изменения в показателях сыворотки крови у опытных телят наступали при комплексной терапии с введением в нее препаратов с анти-нитроксидергической направленностью. Так, на 10 сутки после 5 - 7-кратного курса лечения телят с острой бронхопневмонией содержание общего белка достоверно повышалось от исходного урлкня на 13,5 % (Р < 0,05), к 20 суткам - на 16,3 %, альбуминов - на 11,0 и 16,6 % СР < 0,05) соответственно.' К этому времени возрастало количество Р- и у-глобулинов: к 10 суткам на 45,7 и 13,6 %, а к 20 суткам - на 46,1 и 5,7 % соответственно. Особенно рельефно изменялось содержание БН-групп белков: на 5 сутки их количество увеличивалось по сравнению с исходным фоном на 58,3 %, 10 и 20 сутки - на 91,6 и 75,0 % (Р < 0,01).

Активность ферментов АЛаТ и АСаТ после лечения достоверно снижалась, а количество глюкозы повышалось, достигая к 20 суткам нормативных показателей. Такая же закономерность прослеживается и при лечении данным способом телят с хронической бронхопневмонией.

Так, после 7 - 10-кратного курса терапии у опытных телят количество общего белка в сыворотке крови на 10 сутки наблюдения достоверно возросло по отношению к исходному фону на 16,2 %, а к 20 суткам - на 15,4 % и было близко к нормативным показателям. К этому времени увеличивалось и содержание альбуминов, Р- и у-глобулинов, а количество БН-групп к 5 суткам наблюдения по сравнению с исходным уровнем возрастало на 87,5 %, к 10 и 20 суткам - в 1,6 и 1,4 раза, происходила нормализация показателей глюкозы, р-липопротеидов и активности АЛаТ и АСаТ.

Таким образом, полученные данные о характере изменений в морфо-биохимическом составе крови у телят, больных бронхопневмонией до и после применения различных способов лечения свидетельствует о том, что введение в комплексную терапию препаратов с антинитроксидергической направленностью оказывает более эффективное действие, направленное на нормализацию статуса крови в более короткие сроки.

Включение в комплексную терапию препаратов, регулирующих продукцию эндогенного оксида азота оказывало более выраженное и достоверное влияние как на процессы фагоцитоза, так и клеточные механизмы иммунитета у больных животных по сравнению с базовым лечением.

Так, уже на 5 сутки после 5 - 7-кратного курса лечения телят с острой

формой бронхопневмонии и 7 - 10-кратного курса при хронической с включением в схему лечения препаратов с антинитроксидергической направленностью показатели активности и интенсивности фагоцитоза существенно возрастали по сравнению с исходным фоном: при острой бронхопневмонии активность фагоцитоза повысилась в 1,6 раза, а интенсивность фагоцитоза — в 2,1 раза; при хронической форме - в 1,4 и 1,2 раза соответственно. Индекс общей люминесценции лизосом (ИОЛЛ) к этому времени повысился в 1,1 раза при острой форме и в 1,32 раза - при хронической бронхопневмонии.

В последующие 10 и 20 сутки наблюдения указанные показатели нарастали и превышали исходный фон: активность фагоцитоза в 1,82 и 1,71 раза, интенсивность фагоцитоза - в 2,51 и 1,84 раза, ИОЛЛ - в 1,2 и 1,1 раза соответственно при острой бронхопневмонии и в 1,58 и 1,49 раза по активности фагоцитоза, и в 1,7 и 1,26 раза по интенсивности фагоцитоза, а по ИОЛЛ - в 1,4 и 1,36 раза при хронической форме соответственно.

Указанный способ лечения существенно способствовал восстановлению внутриклеточного кислородозависимого метаболизма фагоцитов^ о чем свидетельствуют показатели спонтанной и индуцированной НСТ-активности.

.Так, при острой бронхопневмонии уже на 5 сутки после проведенного курса терапии спонтанная НСТ-активность возросла от исходного уровня в 1,29 раза, а индуцированная - в 1,67 раза. В последующие 10 и 20 сутки увеличение спонтанной активности НСТ-теста составляло в 1,39 и 1,24 раза, а индуцированной - в 1,87 и 1,26 раза соответственно.

Аналогичные изменения в этих показателях отмечали и при хронической форме бронхопневмонии.

Так, спонтанная активность НСТ-теста на 5 сутки после 7 - 10-кратного курса лечения возрастала по отношению исходного фона в 2 раза, а индуцированная - в 1,7 раза, на 10 и 20 сутки - в 2,2 и 1,8 и в 1,9 и 1,6 раза соответственно. К этому времени увеличивался и уровень индекса индуцированной активности НСТ-теста при лечении животных как с острой, так и с хронической бронхопневмонией.

Применение базисного лечения, исключающего препараты с антинитроксидергической направленностью не оказывало столь существенного влияния как на активность, так и на интенсивность фагоцитоза, а также на показатели НСТ-активности, хотя и прослеживалась тенденция к их возрастанию. Так, достоверные различия в активности и интенсивности фагоцитарной реакции ней-трофилов периферической крови, а также НСТ-активности и ИОЛЛ наступали к 10-20 суткам с момента лечения.

В процессе лечения существенные изменения отмечены и в клеточном звене иммунной системы, причем они особенно были выражены при комплексной терапии, включающей препараты, снижающие продукцию эндогенного оксида азота и токсическое воздействие продуктов его метаболизма.

Так, если у больных телят с острой формой бронхопневмонии по сравнению с клинически здоровыми содержание как относительного, так и абсолютного количества Т-лимфоцитов и их субпопуляций - Т-хелперов и Т-супрессоров находилось на повышенном уровне, а В-лимфоцитов, наоборот, на пониженном.

В тоже время при хронической форме бронхопневмонии наблюдали смену

лимфоцитоза лимфоцитопенией. Очевидно, это связано с тем, что в острую фазу воспаления происходит ответная реакция кроветворных органов на раздражающее действие бактериальной инфекции, а также продуктов метаболизма оксида азота, как стресс-факторов, что проявляется выбросом этих клеток из костного мозга в периферическую кровь, а снижение В-клеток, возможно связано с их пролиферацией и дифференциацией в плазматические клетки - продуценты антител в ответ на воспалительную реакцию. В хроническую фазу воспаления происходит истощение адаптационных возможностей кроветворных органов и угнетение пролиферативной активности недифференцированных клеток - предшественников в костном мозге и лимфоидных органах.

После 5 - 7-кратного курса комплексной терапии телятам с острой формой бронхопневмонии отмечали существенные изменения в лимфоцитарном звене иммунной системы.

Так, уже на 5 сутки наблюдения относительное число Т-лимфоцитов снизилось с 65,3 ± 1,66 до 58,6 ±2,19 %, или в 1,1 раза, а абсолютное - с 5,06 ± 0,21 до 4,77 ±0,19 тыс/мкл, или на 5,8 % (Р<0,05), через 10 суток - на 22,4 и 15,9 % соответственно. К этому времени количество Т-хелперов также снизилось: относительное число на 9,8, а абсолютное -г-на 24,4 % и на 12,2 и 29,8 % (Р < 0,01) соответственно. Снижение относительного числа Т-супрессоров к этому времени составляло на 7,5 и 9,2 %, а абсолютное - на 7,6 и 22,6 %. К 20 суткам наблюдения количество Т-лимфоцитов и их субпопуляций - Тх и Тс приближалось к показателям здоровых животных. В тоже время количество В-клеток постепенно нарастало и по отношению к исходному фону увеличилось через 5 суток: относительное значение на 1,84, а абсолютное - на 17,9 %, через 10 суток - на 2,68 и 33,3 % соответственно.

После 7 - 10-кратного курса комбинированной терапии больным телятам с хронической бронхопневмонией уже к 5 суткам наблюдения количество Т-лимфоцитов относительно исходного фона возрастало: относительное число в 1,12 раза, абсолютное - на 41,7 % (Р < 0,01), 10 и 20 суткам - в 1,16 и 1,2 раза относительное количество и на 50,2 и 52,1% абсолютное значение соответственно.

К этому времени отмечена тенденция к нормализации как Т-хелперов, так и Т-супрессоров, а также В-клеток. Увеличение последних составляло к 5 суткам относительного числа в 1,4, а абсолютного - на 73,9 %, 10 суткам - в 1,65 и в 1,04 раза соответственно.

При назначении базовой терапии изменения в лимфоцитарном звене иммунной системы были менее выраженными, хотя и просматривалась тенденция к нормализации.

Так, на 5 сутки после проведенного курса лечения у телят с острой формой бронхопневмонии содержание Т-лимфоцитов снижалось с 52,8±2,47 до 45,6 ± 1,37 %, а их абсолютное значение с 4,18 ± 0,30 до 3,63 ± 0,19 тыс/мкл, или на 13,2 % (Р < 0,05). К 10 суткам наблюдения относительное число Т-лимфоцитов уменьшилось до 41,9 ± 1,51 %, а абсолютное - до 3,44 ± 0,21 тысУмкл, или на 17,8 %. К этому времени относительное значение Т-хелперов и Т-супрессоров уменьшилось с 36,9 ± 1,28 до 30,4 ± 0,93 % (Тх-лимфоциты на 5 сутки) и с 27,6

± 1,12 до 22,7 ± 1,15 % (Тс-лимфоциты на 5 сутки), а абсолютное число на 10,4 и 5,4 % соответственно. К 10 суткам как относительное, так и абсолютное число Т-хелперов и Т-супрессоров приближалось к показателям здоровых животных. В тоже время количество В-лимфоцитов постепенно нарастало: через 5 суток на 24,2 и 44,1 %, а через 10 суток - на 39,7 и 55,8 % соответственно. Индекс Тх/Тс к 10 суткам возрос с 1,33 ± 0,19 до 1,39 ± 0,42, а к 20 суткам - до 1,52 ± 0,39.

При хронической форме бронхопневмонии содержание Т-лимфоцитов постепенно нарастало. Так, к 20 суткам после окончания лечения их относительное значение увеличилось с 29,3 ± 1,1 до 33,6+1,17 %, а абсолютное - с 2,05 ± 0,13 до 2,99 ± 0,17 тыс./мкл, или на 45,8 % (Р < 0,01).

К этому времени шло постепенное восстановление Тх и Тс — лимфоцитов. Так, процент содержания Т-хелперов возрос с 19,6±0,17 до 23,6 + 1,12, а Т-супрессоров - с 12,9 ± 0,63 до 17,6 ± 0,55. одновременно отмечали и увеличение абсолютного количества этих клеток: Тх - лимфоцитов с 0,52 ± 0,08 до 0,79 ± 0,11 тыс./мкл, а Тс - лимфоцитов - с 0,48 ± 0,05 до 0,59 ± 0,10 тыс./мкл. К этому времени относительное число В-клеток увеличилось с 3,87 ± 0,31 до 5,62 ± 0,47 %, а их абсолютное число - с 0,26 ± 0,05 до 0,48 + 0,11 тыс./мкл, или на 84,6 % (Р < 0,001). Индекс Т/Гс снизился с 1,51 ± 0,19 до 1,34 ± 0,15.

Применение как базисного, так и комплексного способов терапии телят, больных бронхопневмонией способствовало снижению циркулирующих иммунных комплексов, однако эффект действия был в большей степени выражен при введении препаратов с антинитроксидергической направленностью.

Поскольку формирование иммунных комплексов представляет собой один из основных механизмов элиминации чужеродного антигена, можно предположить, что комплексная терапия, включающая препараты с антинитроксидергической активностью, способствует освобождению организма телят, больных бронхопневмонией от бактериальной микрофлоры, а также токсичных продуктов метаболизма оксида азота и тем самым восстанавливает нарушенный гомеостаз.

Следовательно, применение в комплексной терапии препаратов с антинитроксидергической активностью оказывает более выраженное действие, направленное на восстановление лимфоцитарного звена иммунной системы и элиминацию иммунных комплексов по сравнению с базисным лечением.

Таким образом, при выполнении настоящего диссертационного исследования раскрыт характер влияния ряда изученных препаратов на продукцию эндогенного оксида азота и обоснована целесообразность их использования с целью коррекции нитроксидергических нарушений у телят, больных как острой, так и хронической формами бронхопневмонии.

ВЫВОДЫ

1. Суммарный уровень стабильных метаболитов оксида азота (нитраты и нитриты) у телят больных бронхопневмонией превышает контроль при остром течение болезни в крови в 1,25 и моче 1,36 раз, хроническом-в 3,9 и 3,15 раз соответственно.

2. Повышенная активность нитроксидергических процессов у больных животных существенно изменяет их иммунно-биохимический статус:

- в крови по сравнению со здоровыми отмечены снижение содержания гемоглобина в зависимости от формы бронхопневмонии на 9,3 % (при острой форме) и на 13,5 % (при хронической форме), эритроцитов - на 11,8 и на 24,2 %, ускорение СОЭ - в 1,8 и 5,3 раз соответственно;

- в лейкограмме - явления базо- и эозинофилии, сдвиг ядра влево, лим-фоцитоз и моноцитоз;

- содержание общего белка в сыворотке крови снижено на 9,9 % при острой форме и на 17,7 % при хронической форме, альбуминов - на 7,5 % и 14,5 % соответственно, гамма-глобулинов - на 10,9 % при хронической форме, БН-групп - на 35,3 % (при острой форме) и 47,1 % (при хронической форме), глюкозы-на 20,0 и 27,1 % соответственно, возрастание активности АЛаТ и АСаТ-на 44,7 и на 16,1 % при острой бронхопневмонии и на 76,3 и 38,7 % - при хронической.

3. Изменение в фагоцитарном и лимфоцитарном звеньях иммунной системы характеризовались:

- снижением активности и интенсивности фагоцитарной реакции нейтро-филов крови, спонтанной и икдуцировчнной активности НСТ-теста;

- возрастанием Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций при острой бронхопневмонии и их снижением - при хронической;

- повышением уровней циркулирующих иммунных комплексов в 1,6 раза и 2,5 раза соответственно.

4. Базисная схема лечения, включающая гентамицина сульфат и средства симптоматической терапии не оказывала существенного влияния на продукцию эндогенного оксида азота у телят больных бронхопневмонией и удлиняла сроки восстановления их иммунно-биохимического статуса.

5. Включение в комплексную схему терапии телят больных бронхопневмонией препаратов с антинитроксидергической направленностью (натрия аскор-бинат, дексаметазон и натрия тиосульфат) в рекомендуемых дозах и кратностях введения снижала содержание метаболитов оксида азота в крови и моче, сокращала сроки нормализации нарушенных звеньев иммунно-биохимического статуса.

6. Экономическая эффективность на 1 рубль ветеринарных затрат составила:

- при базисном способе лечения у телят с острой бронхопневмонией 4,48 руб., хронической - 0,72 руб.;

- при комплексной терапии с включением препаратов с антинитроксидергической направленностью - 7,77 и 4,25 руб. соответственно.

7. Установленный факт синергизма в действии лекарственных препаратов открывает новые подходы к фармакологической коррекции легочной патологии у животных.

Практические предложения

В комплексную терапию телят, больных бронхопневмонией рекомендуем включать препараты, снижающие продукцию эндогенного оксида азота и активизирующие восстановление иммунно-биохимического статуса:

- внутримышечное введение раствора гентамицина сульфата из расчета 80 мг на животное два раза в сутки;

- внутримышечное введение натрия аскорбината в форме 10%-ного раствора из расчета 0,5 г на животное и дексаметазона в форме 0,4 %-ного раствора по 1 мл один раз в сутки;

- внутривенное введение натрия тиосульфата в форме 5 %-ного водного раствора в дозе 1 мл на 1 кг массы животного 1 раз в сутки.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ратников В.И., Ермолин A.B., Тазетдинов М.Н. О биологической роли оксида азота в организме / Актуальные вопросы фармакологии и иммунологии в новом тысячелетии: Тезисы докладов XV Российской научной конференции. - Челябинск: ЧГМА, 2000. -С. 168-169.

2. Тазетдинов М.Н., Ермолин A.B. Состояние нитроксидергических процессов у телят, больных бронхопневмонией / Актуальные проблемы ветеринарной медицины, животноводства, товароведения, обществознания и подготовки кадров на Южном Урале на рубеже веков: Материалы межвузовской научно-практической и научно-методической конференции. - Троицк: УГАВМ, 2001. - С. 119-121.

3. Тазетдинов М.Н., Ермолин A.B. Фармакокоррекция нитроксидергических процессов у телят, больных бронхопневмонией / Новые энтеросорбенты и фармакологически активные вещества и их применение в ветеринарии и животноводстве: Материалы международной научно-практической конференции, посвященной восьмидесятилетию Заслуженного деятеля науки РФ, доктора ветеринарных наук, профессора М.И. Рабиновича. -Троицк: УГАВМ, 2002. - С.98-100.

4. Тазетдинов М.Н., Ермолин A.B. Влияние различных способов терапии на уровень метаболитов оксида азота и показатели крови у телят, больных бронхопневмонией / Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Материалы международной научно-практической конференции, посвященной юбилею П.С. Лазарева.

На правах рукописи

Тазетдинов Мякгим Надикович

ФАРМАКОКОРРЕКЦИЯ НИТРОКСИДЕРГИЧЕСКОГО И ИМ-МУННО-БИОХИМИЧЕСКОГО СТАТУСА У ТЕЛЯТ, БОЛЬНЫХ БРОНХОПНЕВМОНИЕЙ

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Троицк-2003

Сдано в набор 28.03.2003 г. Подписано в печать 31.03.2003 г. Формат 60 * 84/16. Гарнитура Times New Roman. Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 1212. Отпечатано в типографии УГАВМ 457100, Челябинская область, г. Троицк, ул. Гагарина, 13.

2ооз~А РЧ969

i

Актуальность темы. Открытая в последние годы ранее неизвестная биорегуляторная система, в которой главную роль играет оксид азота (N0) вызвала многочисленные исследования в области сосудистой физиологии, патфизиологии, биохимии, фармакологии, иммунологии и других направлениях указанной проблемы (И.С. Северина, 1995; А.Ф. Ванин, 1998; А.К. Урзаев, 1999; А.А. Сосунов, 2000; R.F. Furchgott, J.V. Zawadski, 1999; C.F. ^ Brosnan et all., 1994; B.Y. Winter et all., 1995 и др.).

Установлено, что молекула оксида азота в небольших и умеренных концентрациях обладает широким спектром биорегуляторного действия: снимает спазм сосудов, принимает участие в бактерицидном и противоопухолевом эффектах лейкоцитов, выполняет роль сигнальной молекулы в различных нейрональных функциях и др. (И.Ю. Малышев, Е.Б. Матухина, 1998; В.Г. Башкатова, К.С. Раевский, 1998; JI.H. Кубрина с соавт., 1990; D.S. Bredt et all., 1992; Т. Nakak, 1994).

В то же время гиперпродукция оксида азота в организме * приводит к образованию комплекса NO с супероксидным анионом, в результате чего происходит нитрирование и окисление многих структурных и ферментных белков, блокируются важнейшие сигнализационные коммуникации, что обуславливает существенное повреждение тканей (Х.М. Марков, 1996; С.А. Поленов, 1998; R.L. Lauterbach et all., 1995; A. Rehman et all., 1997).

Сведения о состоянии нитроксидергических процессов у животных при легочной патологии малочисленны. Известно, что гиперстензия легких во многом связана с недостаточной выработкой оксида азота (Р.С.А. Каш, G. Govender, 1994), а бактериальная пневмония у бычков - с активизацией индуцированной формы NO-синтазы и образованием больших количеств оксида азота (K.J. Goodrum, J.Poulson-Dunlap, 2002; J.M. Fligger et all., 1999; W.R. Fracey et all., 1994; R. Mernandez-Panolo et all., 2001).

Поэтому изучение взаимосвязей нитроксидергических процессов с морфо-функциональными изменениями в органах и системах при болезнях животных и применение в комплексной терапии средств, корригирующих эти нарушения является актуальным, позволяющим уточнить патогенез болезни и повысить эффективность лечения.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось изучение состояния нитроксидергических процессов и иммунно-биохимического статуса у телят, больных различными формами бронхопневмонии до и в процессе лечения.

На разрешение были поставлены следующие задачи:

1. Установить взаимосвязь в изменениях нитроксидергических процессов и иммунно-биохимическом статусе телят, больных различными формами бронхопневмонии.

2. Испытать эффективность комплексной терапии у телят, больных бронхопневмонией, включающей антибиотик гентамицина сульфат и препараты с антинитроксидергической направленностью: аскорбиновая кислота, дексаметазон и натрия тиосульфат.

3. Выявить динамику изменений в нитроксидергических процессах и иммунно-биохимических показателях крови в процессе лечения.

4. Рассчитать экономическую эффективность лечебных мероприятий.

Научная новизна. Установлено, что у телят, больных бронхопневмонией неспецифической этиологии в крови и моче возрастают уровни стабильных метаболитов эндогенного оксида азота, степень выраженности которых зависит от тяжести болезни. Повышенная активность нитроксидергических процессов сопровождается существенными изменениями в иммунно-биохимическом статусе больных животных, что вносит коррективы в патогенез болезни и обосновывает целесообразность практического применения в комплексной терапии препаратов с антинитроксидергической направленностью.

Практическая значимость работы. Результаты работы могут быть использованы ветеринарными специалистами при разработке лечебных мероприятий у телят, больных бронхопневмонией, чтении лекций по курсам фармакологии и терапии для студентов ветеринарных факультетов, а также написании учебников и монографий.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Взаимосвязь в изменениях нитроксидергических процессов и иммунно-биохимическом статусе у телят, больных бронхопневмонией.

2. Результаты комплексной терапии при бронхопневмонии у телят, включающей антибиотик гентамицина сульфат и препараты с антинитроксидергической направленностью: аскорбиновая кислота, дексаметазон и натрия тиосульфат. 3. Экономическая эффективность терапии у телят, больных бронхопневмонией.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Межвузовской научно-практической и научно-методической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины, животноводства, товароведения, обществознания и подготовки кадров на Южном Урале на рубеже веков» (Троицк, 2001 г.); на Международной научно-практической конференции «Новые энтеросорбенты и фармакологически активные вещества и их применение в ветеринарии и животноводстве», посвященной восьмидесятилетию Заслуженного деятеля науки РФ, доктора ветеринарных наук, профессора М.И. Рабиновича (Троицк, 2002 г.); на межкафедральном заседании профессорско-преподавательского состава факультета ветеринарной медицины УГАВМ, февраль, 2003 год; на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной юбилею П.С. Лазарева (Троицк, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано четыре научные статьи.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ВЫВОДЫ

1. Суммарный уровень стабильных метаболитов оксида азота (нитраты и нитриты) у телят больных бронхопневмонией превышает контроль при остром течение болезни в крови в 1,25 и моче 1,36 раз, хроническом - в 3,9 и 3,15 раз соответственно.

2. Повышенная активность нитроксидергических процессов у больных животных существенно изменяет их иммунно-биохимический статус:

- в крови по сравнению со здоровыми отмечены снижение содержания гемоглобина в зависимости от формы бронхопневмонии на 9,3 % (при острой форме) и на 13,5 % (при хронической форме), эритроцитов - на 11,8 и на 24,2 %, ускорение СОЭ - в 1,8 и 5,3 раз соответственно;

- в лейкограмме - явления базо- и эозинофилии, сдвиг ядра влево, лимфоцитоз и моноцитоз;

- содержание общего белка в сыворотке крови снижено на 9,9 % при острой форме и на 17,7 % при хронической форме, альбуминов - на 7,5 % и 14,5 % соответственно, гамма-глобулинов - на 10,9 % при хронической форме, SH-групп — на 35,3 % (при острой форме) и 47,1 % (при хронической форме), глюкозы — на 20,0 и 27,1 % соответственно, возрастание активности AJIaT и АСаТ - на 44,7 и на 16,1 % при острой бронхопневмонии и на 76,3 и 38,7 % - при хронической.

3. Изменение в фагоцитарном и лимфоцитарном звеньях иммунной системы характеризовались:

- снижением активности и интенсивности фагоцитарной реакции нейтрофилов крови, спонтанной и индуцированной активности НСТ-теста;

- возрастанием Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций при острой бронхопневмонии и их снижением — при хронической; повышением уровней циркулирующих иммунных комплексов в 1,6 раза и 2,5 раза соответственно.

4. Базисная схема лечения, включающая гентамицина сульфат и средства симптоматической терапии не оказывала существенного влияния на продукцию эндогенного оксида азота у телят больных бронхопневмонией и удлиняла сроки восстановления их иммунно-биохимического статуса.

5. Включение в комплексную схему терапии телят больных бронхопневмонией препаратов с антинитроксидергической направленностью (натрия аскорбинат, дексаметазон и натрия тиосульфат) в рекомендуемых дозах и кратностях введения снижала содержание метаболитов оксида азота в крови и моче, сокращала сроки нормализации нарушенных звеньев иммунно-биохимического статуса.

6. Экономическая эффективность на 1 рубль ветеринарных затрат составила: при базисном способе лечения у телят с острой бронхопневмонией 4,48 руб., хронической - 0,72 руб.; при комплексной терапии с включением препаратов с антинитроксидергической направленностью — 7,77 и 4,25 руб. соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

В комплексную терапию телят, больных бронхопневмонией рекомендуем включать препараты, снижающие продукцию эндогенного оксида азота и активизирующие восстановление иммунно-биохимического статуса:

- внутримышечное введение раствора гентамицина сульфата из расчета 80 мг на животное два раза в сутки;

- внутримышечное введение натрия аскорбината в форме 10%-ного раствора из расчета 0,5 г на животное и дексаметазона в форме 0,4 %-ного раствора по 1 мл один раз в сутки;

- внутривенное введение натрия тиосульфата в форме 5 %-ного водного раствора в дозе 1 мл на 1 кг массы животного 1 раз в сутки.