Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Фармакокоррекция иммунитета телят

На правах рукописи

оозоввзт1

ДОМИ ИГОРЬ АЛЕКСАНДРОВИЧ

ФАРМАКОКОРРЕКЦИЯ ИММУНИТЕТА ТЕЛЯТ

Специальность 16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Краснодар, 2007

003068371

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Кубанский государственный »

аграрный университет», на кафедре паразитологии, ветсанэкспертизы и зоогигиены факультета ветеринарной медицины

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Гугушвили Нино Нодариевна

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор

Дорофеев Виталий Иванович

кандидат ветеринарных наук

Схатум

Аминет Кадыровна

Ведущая организация - ФГОУ ВПО «Донской государственный

Защита состоится 2 мая 2007 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044 , Краснодар, ул. Калинина, 13, корпус факультета ветеринарной медицины, аудитория №

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»

Автореферат разослан 30 апреля 2007 г. Ученый секретарь

диссертационного совета, .

доктор ветеринарных наук^., Родин

профессор Игорь Алексеевич

аграрный университет»

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Необходимость проведения иммунологических исследований объясняется тем, что при современной системе ведения скотоводства, телята рождаются с низким иммунным статусом и, чаще всего, высокой предрасположенностью к различного рода заболеваниям. Известно немало случаев появления вторичных иммунодефицитов из-за нехватки в рационе животных белковых, витаминных и минеральных компонентов.

Исследованиями отечественных и зарубежных ученых (В.М. Шубик, 1976; Н.Г. Дмитриев, А.И. Жигачев, С.М. Федорова, 1986; Н.М. Костомахин, 1986; С.И. Джупина, 1988; Ram S. Lachhiraman, 1981; J. Gavora, J. Spencer, 1987) установлено, что с самого рождения организм животного испытывает воздействие экологических и антропогенных факторов, вызывающих мобилизацию защитных реакций организма. Усиленная мобилизация важнейших систем организма обеспечивает поддержание гомеостаза или адаптацию к действию неблагоприятных факторов внешней среды, которые приводят к нарушению функций жизненно важных систем, и, как следствие, к различным функциональным нарушениям, снижению резистентности и появлению различных заболеваний, особенно у новорожденных телят.

В связи с этим требуются углубленные исследования по обоснованию физиологических основ адаптации при воздействиях стресс-факторов, изучению биохимических и иммунологических процессов жизнедеятельности организма и разработке принципов коррекции его иммунологических и адаптационных механизмов. Поэтому, изучение коррекции механизма резистентности имеет целью обосновать интенсивность защитных функций организма, что составляет одну из актуальных проблем современной биологии, медицины и ветеринарии (Р.В. Петров, 1976, 1987; С.И. Плященко и соавт., 1979, 1982, 1983, 1991; И.М. Карпуть, 1997, 1998).

С учетом изложенного, разработка средств и способов повышения иммунобиологических факторов неспецифической резистентности организма новорожденных телят является весьма актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

Так как до настоящего времени не установлен диапазон показателей

физиологического статуса организма, представляется важным изучение адаптивных и защитных механизмов у телят, в период новорожденности как с теоретической, так и с практической точки зрения.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы было изучение особенностей формирования неспецифической резистентности организма новорожденных телят в возрастном аспекте и разработка средств иммуно-коррекции.

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить характер изменений гематологических показателей, уровня общего белка и белковых фракций сыворотки крови телят до месячного возраста.

2. Изучить состояние фагоцитарного, клеточного и гуморального звена иммунитета у телят, определить наиболее значимые диагностические критерии оценки иммунодефицитного состояния.

3. Испытать новые средства иммунокоррекции у телят на основе использования лекарственных трав и ионов серебра.

4. Определить эффективность применения экологически безопасных препаратов в постнатальный период у телят.

Научная новизна. Впервые изучены и установлены параметры изменения показателей крови и иммунной системы у телят. Установлено, что у телят постнатальный период сопровождается изменениями в клеточном иммунитете (Т- и В-лимфоциты) и снижением фагоцитоза. Апробированы фитопрепарат содэхин, который обладает иммунотропным действием благодаря биологически активным веществам (оксикоричные и глицирризиновая кислоты) и катис с широким антибактериальным свойством, за счет ионов серебра.

Установлено, что комплексный препарат содэхин К-75 стимулирует выработку Т- и В-лимфоцитов, повышает фагоцитарную активность нейтро-филов, усиливает эритропоэз, увеличивает уровень гемоглобина в крови и содержание общего белка, обладает противовоспалительным действием. Обоснована теоретическая и практическая необходимость проведения иммунопрофилактики телят в период новорожденности.

Практическая значимость диссертационной работы состоит в установлении характера изменений неспецифического и специфического звена иммунной системы организма телят. Эти сведения могут быть

иммунной системы организма телят. Эти сведения могут быть использованы в практике для контроля состояния здоровья телят, а также в курсах лекций по ветеринарной иммунологии и фармакологии.

Практически подтверждена коррекция иммунобиологической реактивности организма телят в период новорожденное™, позволяющая предотвращать диспепсии и обеспечить повышение жизнеспособности телят.

Практическая значимость результатов исследований состоит в разработке и внедрении в ветеринарную практику препаратов - содэхин, катис и содэхин К-75 для повышения иммунной защиты в критический период (но-ворожденность) с целью профилактики заболеваний у молодняка.

Разработана нормативно-техническая документация - временные наставления и технические условия на содэхин, утвержденные Департаментом ветеринарии Минсельхоза Российской Федерации (№ 13-4-03/0288 от 27.12.01г. и № 13-4-03/0297 от 29.12.01г.), «Катис» - Гигиенический сертификат № 23.КК.01.915.П.003234.05.06, сертификат соответствия № РОСС РИ. АЮ77. В00156, ТУ 9154-001-10073810-2002 производитель -ООО Предприятие «Кубаньагроток».

Результаты исследований внедрены в условиях производства в четырех хозяйствах Краснодарского края на молочно-товарных фермах (учебно-опытное хозяйство «Краснодарское» Кубанского государственного аграрного университета, ПСК «Предгорье Кавказа» Северского района, КФХ «Чалов В.Н.» Мостовского района, СПК КПЗ «Россия» Красноармейского района).

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертации доложены и обсуждены на III Международном симпозиуме (Санкт-Петербург, 2005); на VIII Международной конференции (Майкоп, 2006); на Международной научно-практической конференции (Краснодар, КНИВИ, 2006), на научных и методических конференциях факультета ветеринарной медицины КубГАУ (Краснодар, 2003-2007).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в т.ч. в журнале: «Труды Кубанского государственного аграрного университета».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Особенности исследования морфобиохимических показателей крови у телят в возрастном аспекте.

2. Закономерности изменения клеточного и гуморального иммунитета у телят в возрастном аспекте.

3. Эффективность использования препаратов содэхин, катис и содэ-хин К-75 телятам в качестве иммуномодуляторов.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 131 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, заключения, выводов, предложений производству, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 30 таблицами, 5 рисунками. Список литературы включает 417 источников, в том числе 93 зарубежных автора.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась в период с 2003 г. по 2007 г. на базе кафедры паразитологии, ветсанэкспертизы и зоогигиены Кубанского государственного аграрного университета, лейкозном отделе Межобластной ветеринарной лаборатории, и в биохимическом отделе краевой клинической больницы им. Очаповско-го. Экспериментальная часть исследований проводилась в четырех хозяйствах Краснодарского края на молочно-товарных фермах (учебно-опытное хозяйство «Краснодарское» Кубанского государственного аграрного университета, ПСК «Предгорье Кавказа» Северского района, КФХ «Чалов В.Н.» Мостовского района, СПК КПЗ «Россия» Красноармейского района).

Исследования проведены на клинически здоровых новорожденных телятах черно-пестрой породы, линии Рефлекшн-Соверинг. Животные были подобраны по принципу аналогов (по породной принадлежности, линии, возрасту, физиологическому состоянию, упитанности).

Изучение гематологических и иммунологических показателей у клинически здоровых 60 новорожденных телят осуществляли на 1-е, 3-е, 14-е сутки и в месячном возрасте.

Оценку гематологических показателей проводили по общепринятым методикам. Общий белок сыворотки крови определяли рефрактометрически, содержание белковых фракций - на электрохроматографе «Капель -103 Р».

Для определения факторов неспецифической резистентности использовали тест бактериального фагоцитоза нейтрофилов с учетом степени его завершенности по отношению к бактериям Staphylococcus aureus - № 209 Р (И.В. Нестерова и соавт., 1996), спонтанный и стимулированный NBT-тест (И.В. Нестерова и соавт., 1980). Оценивали также лизоцимную активность сыворотки крови - ЛАСК (В.И. Стогник, В.П. Голик, 1989) и бактерицидную активность сыворотки крови - БАСК (Н.П. Смирнова, Т.А. Кузьмина, 1966). В нейтрофилах определяли активность миелопероксвдазы по Sato (1928), в модификации Н.Н. Гугушвили с соавт. (2000); щелочной фосфатазы - по М.Г. Шубичу (1965) в модификации Н.Н. Гугушвили (2000); кислой фосфатазы - по М.Г. Шубичу (1980) в модификации Н.Н. Гугушвили (2000); уровень лизо-сомапьно-катионных белков устанавливали по методу В.Е. Пигаревского (1979).

Количество Т-, В-, NK-лимфоцитов крови определяли по методу Пирса (1962) в модификации Н.Н. Гугушвили и соавт. (2000). Содержание иммуноглобулинов основных классов (IgA, IgM, IgG) в сыворотке крови определяли по методу Манчини и соавт. (1965) в модификации Nazayanan Sh. (1982).

Физико-химические свойства препаратов изучали по методикам, регламентированным ГФ XI. Определение содержания оксикоричных кислот проводили по ВФС 42-2371-94. Количественное определение глицирризиновой кислоты проводили по ГФ XI (статья 73).

Фармакотоксикологическую оценку препаратов содэхин, катис и содэхин К-75 осуществляли на основании изучения их острой и хронической токсичности, влияния на рост и развитие, а также на гематологические, биохимические и иммунологические показатели.

Определение острой токсичности проводили на 20 белых мышах (масса 18-20 г) и 20 белых крысах (масса 130-170 г). Препараты вводили перорально в максимально возможном объеме, белым мышам 0,8 мл, белым крысам -

Изучаемые животные (телята)

Гематологические исследования:

1. Количество эритроцитов

2. Уровень гемоглобина

3. Количество лейкоцитов

4. Лейкоцитарная формула

Иммунологические исследования: Фагоцитарная активность

2. Определение иммуноглобулинов: А,М, в

3. Цитологические исследования: количество Т-, В-, МС- лимфоцитов определение щелочной и кислой фосфатаз определение миелопероксидазы, лизосомально-катионовых белков

Биохимические исследования:

1. Общий белок

2. Фракции белка: альбумины а-глобулины (З-глобуяины у-глобулины

Рисунок 1 - Схема опыта

8 мл. После введения препаратов в течение 10 дней за животными осуществляли наблюдение. При этом у лабораторных животных отмечали общее состояние организма, аппетит, подвижность, поведенческие реакции (по методикам А.Н. Кудрина и др., 1967; Г. Н. Першина, 1971).

Исследование хронической токсичности проводили на белых крысах массой 130-170 г. Было сформировано 7 групп по 10 животных в каждой. Первой опытной группе белым крысам ежедневно в течение 30 дней перо-рально вводили содэхин в дозе 0,08 мл/кг, второй опытной группе - содэхин в дозе 0,8 мл/кг, третьей - катис с содержанием серебра 12,5 мкг/кг, четвертой - катис с содержанием серебра 125 мкг/кг, пятой - содэхин К—75 — 0,25 мл/кг, шестой - содэхин К-75 - 2,5 мл/кг. Седьмая группа животных была контрольной (интактной).

Взятие крови у новорожденных телят осуществляли перед кормлением на 1-е, 3-е, 14-е и 30-е сутки, показатели крови изучались до и после применения иммуномодулирующих препаратов.

Для выявления иммуномодулирующих свойств содэхина, катиса и со-дэхина К-75 были сформированы пять групп животных: первая - контрольная (интактные) 15 голов; в опытных группах - 60 животных (по 15 голов в каждой). Новорожденным телятам первой опытной группы вводили препарат тималин; животным второй опытной группы - фитопрепарат содэхин; третьей - катис, четвертой - содэхин К-75. Тималин вводили внутримышечно в течение 5 суток по 0,5 мкг на 1 кг живой массы; содэхин применяли в дозе 0,08 мл на 1 кг массы животного; катис - 5-7 мл (375-525 мкг ионов серебра) на животное, содэхин К-75 - 0,25 мл на 1 кг массы животного один раз в сутки перорально в течение 14-ти дней. Для удобства применения препараты разводили в 100-120 мл кипяченой воды.

Гематологические, биохимические и иммунологические исследования проводили как в контрольной группе телят, так и у опытных животных.

Полученные результаты подвергнуты биометрической обработке по И.А. Ойвину (1960), степень достоверности установлена по распределению Стьюдента.

3. Результаты собственных исследований

3.1 Динамика иммуногенеза телят иормотрофиков до месячного возраста

Анализ морфологических показателей крови телят показал, что количество эритроцитов, гемоглобина достоверно возрастало в возрастном аспекте. Данные изменения вполне оправданы, так как с развитием организма увеличивалась потребность в кислороде, следовательно, увеличение структур, отвечающих за функцию доставки его в органы и ткани. Количество лейкоцитов было подвержено периодическим колебаниям в период роста и развития телят, однако, к месячному возрасту, оно достоверно повышалось.

При изучении лейкоцитарной формулы у телят нами было установлено достоверное увеличение количества сегментоядерных лейкоцитов с максимумом повышения с третьих до четырнадцати суток постнатального периода, коррелирующее с максимальным увеличением количества лимфоцитов к тридцатым суткам. Среди других показателей лейкоцитарного ряда следует выделить эозинофилы, количество которых достоверно снижалось в данный период и вновь повышалось к 30-м суткам, а количество юных и палочкоя-дерных нейтрофилов, напротив, плавно снижалось (в 4,3 и 2,2 раза) в течение наблюдаемого периода. У телят в ранний постнатальный период (1-3-е сутки) по сравнению с 30 сутками обнаруживался нейтрофилез (юные, палоч-коядерные и сегментоядерные нейтрофилы), достоверно более высокое содержание эозинофилов и моноцитов.

Следовательно, у телят с возрастом отмечалась общая закономерность увеличения количества клеток крови, которые могут осуществлять фагоцитоз. В более поздние сроки увеличивалось количество лимфоцитов - клеток, регулирующих иммунный ответ и продуцирующих гуморальные факторы защиты.

Изменения общеклинических показателей крови напрямую связаны с физиологическим состоянием (ростом и развитием) телят, по которым в определенной мере можно судить и об иммунной реактивности организма.

Полученные данные свидетельствуют о пластичности внутренней среды организма телят, различных приспособительных и компенсаторных механизмах, позволяющих обеспечить жизнеспособность в постнатальный период развития.

Немаловажное значение при общебиологической оценке имеет уровень общего белка и его фракции, так как белковые молекулы участвуют практически во всех звеньях гомеостаза.

Результаты проведенных исследований свидетельствовали о весьма выраженной динамике изменений в показателях, характеризующих белковый обмен у телят в возрастном аспекте. В ранний постнатальный период (1-е сутки) содержание общего белка было минимальным (51,10±0,21 г/л), но с ростом и развитием организма заметно повышался его уровень (62,69±0,23 г/л) в крови телят. Данное положение вполне оправдано, так как после выпойки животным молозива, в котором находится повышенная концентрация иммуноглобулинов (защитных белков), в организме новорожденных телят происходит интенсивный синтез общего белка, и особенно у-глобулиновой фракции. Мобилизация противовосполотельных белков способствовала повышению устойчивости организма телят.

К месячному возрасту по сравнению с первыми сутками увеличивался уровень альбуминов и у-глобулинов в 1,3 раза, Р-глобулинов - в 1,6 раза и, напротив, происходило снижение а-глобулинов в 1,2 раза. Катионный компонент и муцин снижались в 1,4 и 2 раза соответственно, что связано с повышением иммунобиологической реактивности организма телят.

Проведенные исследования позволили установить динамику изменений фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов в зависимости от сроков постнатального периода телят. Рост активности фагоцитоза наблюдался на протяжении всего периода исследования (с момента рождения до месячного возраста). Так, на третьи сутки постнатального периода наблюдалось достоверное увеличение активно-фагоцитирующих нейтрофилов на 11%, поглотительной способности нейтрофильных гранулоцитов - на 2%, переваривающей способности - на 5%.

Р исунок 2 - Динамика изменений фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов

Однако необходимо отмстить недостоверное повышение фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов крови телят после прекращения приема молозива. К 30-м суткам наблюдалась достоверная активизация ФАИ на 29%, ФЧ - на 15%, %П - на 20%, следовательно, и коэффициента мобилизации фармазач-позитивных клеток (на 23%), Данное обстоятельство свидетельствует о формировании иммунитета телят с увеличением возраста.

При исследовании микробицидных систем нейтрофильных гранулоцитов у телят, а именно активности щелочной (ЩФ) и кислой (КФ) фосфатаз, миелопе-рокевдазы (МП) и содержания неферментных лизосо мал ьн о- кати о н н ых белков (КБ) нами отмечен во многом аналогичный характер изменений,

В первые Т[юе суток изменения активност и щелочной и кислой фосфатаз были достоверно высокими (1,49-1,52 и 1,35-1,38 единиц), а затем наблюдалась обратная корреляция между этими ферментами, однако, к месячному возрасту вновь ггроисходило возрастание кислой фосфатазы. Кроме того, необходимо отметить, что средний цитохимический индекс щелочной фосфатазы был выше кислой фосфатазы (1,30±0,01 и 0,51±0,01 единиц соответственно). С возрастом наблюдалась активизация фермента миелопсроксчдазы, что свидетельствовало о повышении реактивности орг-анизма телят к 3-м суткам в период приема молозива (с 2,36±0,02 до 2.49Т-Д01 единиц). После прекращения его приема происходило

снижение активности фермента к 14-м суткам (с 2,49±0,01 до 2,34±0,02 единиц). В более поздние сроки постнатального периода (14-30-е сутки) развиваются механизмы защиты организма и, в связи с этим, происходит активизация кислородзависимой системы фагоцитоза, в частности, фермента мие-лопероксидазы (с 2,34±0,02 до 2,53±0,03 единиц).

Рисунок 3 - Цитохимические показа- Рисунок 4 - Цитохимические показатели щелочной и кислой фосфатаз тели миелопероксидазы и лнзосо-

мально-катионных белков

Анализ уровня лизосомально-катионных белков неферментной кислородзависимой системы выявил, что происходили изменения, аналогичные другим системам фагоцитоза. В то же время необходимо отметить, что изменения уровня лизосомально-катионных белков происходили более плавно, чем активность кислой фосфатазы и миелопероксидазы.

Таким образом, снижение КФ к месячному возрасту можно считать существенной особенностью при росте и развитии организма телят, так как в большинстве случаев наблюдался аналогичный характер изменений КФ и ЩФ. Кроме того, снижение активности КФ с возрастом можно считать отражением компенсаторно-приспособительной реакции на фоне активации МП. Миелопероксидаза, как и лизосомально-катионные белки представляют собой мощную антибактериальную разрушающую систему, подавляющую рост микроорганизмов, в связи с этим, физиологически оправдан их высокий уровень при развитии механизмов защиты у телят в возрастном аспекте.

Исследованиями было выявлено, что в первые сутки постнатального периода содержание Т-лимфоцитов составляло 55,47±0,34%, В-лимфоцитов -24,67±0,13%, количество ЫК-лимфоцитов - 19,87±0,29%. К месячному воз-

расту повышалось содержание Т-лимфоцнтов (56,47±0,38%) и В- лимфоцитов (27,б7±0,21%), а количество NK-лимфоцитов снижалось (15,87±0,41%), однако данные изменения находились в пределах физиологической нормы (рисунок 5),

100% 90% -80% -70% - -60% -50% -А0% -30% - -20% -10% -0% -

1-е сутки 3-« сутки 14-е сутки 30-е сутки

Рисунок 5-СодержаниеT-, B-, NK- лимфоцитов и кров» телят

Результатами исследований установлено, что бактерицидная и лизо-цимная активности повышались с увеличением срока п о стнатальн о го периода телят. К 30-м суткам показатели бактерицидной и лизоцимной активности были самыми высокими и составляли 44,40±О,31% и 37,20±0,б ¡% соответственно. Низкие показатели бактерицидной и лизоцимной активности и ранний постнатальный период относительно позднего срока указывают на несовершенную систему иммунитета новорожденных телят. С возрастом происходило приспособление новорожденного организма к окружающей среде, формирование механизмов естественной заши ты организма.

Анализируя к целом результаты опенки показателей гуморального иммунитета у телят в различные возрастные периоды (содержание иммуноглобулинов основных классов А, Ми G), следует заключить, что начиная с выпойки молозива уровни IgA и IgG достоверно повышались. К месячному возрасту отмечалось значительное повышение всех изучаемых классов иммуноглобулинов: IgA - в 2,3 раза; ígM - в 1,3 раза; !gü - в 1,5 раза, относительно первых суток.

Нами установлено, что в постнатальный период (1—30 сутки) с развитием организма активизируется гуморальный иммунитет, а это указывает на становление естественной резистентности организма новороиеденных телят.

Кроме того, ранний постнатальный период (1-3-е сутки) у телят сопровождается достаточно выраженными спадами иммунобиологической реактивности. Очевидна целесообразность применения препаратов, способных обеспечить высокую устойчивость животных в данный период их жизни.

3.2 Испытание и характеристика новых иммуномодуляторов

Фитопрепарат содэхин, предлагаемый телятам в качестве иммунномо-дулирующего средства, представляет собой спиртовую настойку трав: эхи-нацеи пурпурной (Echinaceae purpureae) и корня солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.). По внешнему виду это жидкость темно-коричневого цвета с травянистым запахом и сладковато-горьким вкусом. Растительное сырье получали из Северо-Кавказского ЗОС ВИЛАР.

Для приготовления фитопрепарата содэхин использовались: трава эхи-нацеи пурпурной (по ВФС 42-2371-94), корень солодки голой (по ГФ X статья 573). Растительное сырье закупали на предприятии Северокавказского ЗОС ВИЛАР. Водно-спиртовую настойку готовили из высушенного сырья, которое предварительно измельчали: стебли, листья - до 3 мм, цветки - до 5 мм.

Суть данного метода сводится к экстракции активно действующих веществ 30% этиловым ректифицированным спиртом.

Технологический процесс получения препарата состоит из следующих стадий:

1. смешивание сбора эхинацеи пурпурной и корня солодки с 30% этиловым ректифицированным спиртом в соотношении 1:5;

2. экстрагирование в термостате при температуре 37°С в течение 10 дней;

3. фильтрация;

4. фасовка в стеклянные флаконы из темного стекла объемом 100-200 мл;

5. упаковка резиновыми пробками и закатка алюминиевыми колпачками.

Препарат, изготовленный на основе сбора из эхинацеи пурпурной и

корня солодки голой получил название «содэхин».

В процессе длительного хранения (в течение трех лет) препарат содэхин не изменял свои свойства (таблица 8). По внешнему виду содэхин представляет собой жидкость темно-коричневого цвета со специфическим травяным запахом и вкусом. В препарате содэхин содержится 1,0±0,1% оксикоричных кислот, глицирризиновой - 3±0,3%.

Препарат катис получают в однородном электрическом поле между серебряными электродами (Ср-9,999). Заданные параметры режима (расстояние между электродами, температура процесса электролиза, сила тока и напряжение), обеспечивают переход ионов серебра в дистиллят с образованием вокруг них, предположительно, сольватной оболочки из дипольных молекул воды. Накопление (концентрация) в жидкости своеобразных «прикрепленных» к молекулам воды ионов серебра производится в движущемся потоке жидкости, находящейся в режиме периодического торможения.

Препарат катис представляет собой концентрат гидратированного серебра - химический чистый прозрачный раствор без цвета и запаха с металлическим вкусом. Действующим веществом катиса являются активные ионы серебра (А§+) 75 мг в одном литре дистиллированной воды. Допустимое отклонение массовой концентрации ионов серебра от номинальной ±5%.

Гигиенический сертификат катиса № 23.КК.01.915.П.003234.05.06, сертификат соответствия № РОСС РИ. АЮ77. В00156, ТУ 9154—00110073810-2002, поставлен производителем - ООО Предприятием «Кубань-агроток».

При испытании препаратов на стабильность было установлено, что хранение в темном сухом месте в течение 3-х лет не изменяло их свойств. Действующими веществами катиса являются ионы серебра (А§+) в количестве 75 мг в одном литре дистиллированной воды.

Препарат катис обладает высоким антибактериальным свойством при концентрации ионов серебра от 0,001 мг/л, что значительно ниже допустимой санитарной нормы (0,01 г/л), проявляет высокую устойчивость при хранении. Устойчивые антисептические свойства ионов серебра усиливаются его кислой реакцией. При бактериологическом исследовании различных концентраций активных ионов серебра в дистиллированной воде при разве-

дении 0,2 мг/л; 0,4 мг/л; 0,8 мг/л и 1,0 мг/л установлено, что рост культур Candida albicans, Staphylococcus aureus 209-P, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli не обнаружен.

Комплексный препарат содэхнн К-75 получали путем смешивания со-дэхина (0,08 мл/кг) и катиса (12,5 мкг/кг). Препарат содэхин К-75 представляет собой 30%-ную спиртовую настойку лекарственных растений эхинацеи пурпурной и корня солодки, активных ионов серебра. Действующим веществом содэхина К-75 является глицирризиновая и оксикоричные кислоты, ионы серебра. Активные ионы серебра получены электрохимическим способом в дистиллированной воде. Содержание ионов серебра (Ag+) составляет 75 мг в одном литре дистиллированной воды.

В процессе длительного хранения (в течение трех лет) препарат содэхин К-75 не изменял свои свойства (таблица 10). По внешнему виду содэхин представляет собой жидкость темно-коричневого цвета со специфическим травяным запахом и вкусом. В препарате содэхин К-75 содержится 1,0±0,1% оксикоричных кислот, глицирризиновой - 3±0,3%, активных ионов серебра (Ag+) 75 мг в одном литре дистиллированной воды. Допустимое отклонение массовой концентрации ионов серебра от номинальной ±5%.

При перорапьном введении белым мышам препаратов в тест-дозе 0,08 мл/кг (содэхин), катис - 12,5 мкг/кг и содэхин К-75 - 0,25 мл/кг случаев токсикоза или побочного действия не наблюдали. Полученные результаты позволили сделать заключение о стабильности и безвредности препаратов при длительном хранении.

Фармакотоксикологическую оценку содэхина, катиса и содэхина К-75 проводили на лабораторных животных (белые мыши и крысы). Данные препараты при введении даже в максимально возможных объемах не вызывали гибель лабораторных животных, что свидетельствовало об их малой токсичности.

Анализ результатов изучения хронической токсичности показал отсутствие у них отрицательного органотропного и общетоксического действия.

Изучение иммуномодулирующих свойств содэхина, катиса и содэхина К-75 первоначально определяли in vitro с периферической кровью телят.

В качестве эталона был использован известный иммуномодулятор тимиче-ского происхождения -тималин.

Полученные данные позволили установить, что тималин, содэхин, ка-тис и содэхин К-75 проявляли сходные иммунокорригирующие эффекты при инкубации с иммунокомпегентными клетками. Причем максимальное стимулирующее влияние на количество лимфоцитов, образующих розетки с эритроцитами барана (Т-лимфоциты) и СЗ-компонентом комплемента (B-лимфоциты) отмечено при инкубации лимфоцитов с тималином. В то же время препарат содэхин К-75 оказывал более выраженное влияние на количество поздних Е-РОН и ЕАС-РОН, что, по всей видимости, связано с механизмом действия антисептика катис, содержащего ионы серебра. Препарат катис активизировал действие содэхина, в состав которого входят иммуностимулирующие лекарственные растения. Данное положение свидетельствовало о позитивном влиянии рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток.

3.3 Эффективность применения препаратов для повышения резистентности телят

Проведенные исследования морфоиммунологических показателей крови телят подтвердили полученные клинические результаты. Данное обстоятельство послужило основанием для испытания фармакологических препаратов тималина, содэхина, катиса и содэхина К-75 с целью коррекции иммунобиологической реактивности у новорожденных телят (таблица 1).

Назначение телятам препаратов: тималин в дозе 0,5 мкг/кг внутримышечно в течение 5 суток, содэхин - 0,08 мл/кг, катис - 12,5 мкг/кг и содэхин К-75 — 0,25 мл /кг один раз в сутки перорально в течение 14-ти дней позволило снизить заболеваемость и предупредить возникновение диспепсии (таблица 1).

Испытания тималина показали, что заболеваемость животных на 3-е сутки составила 13,3%, содэхина - 26,7%, катиса - 13,3% и содэхина К-75 - 6,7% от общего количества телят. На 14-е сутки после применения препа-

para тималина заболевших животных было 40%, содэхина и катиса - 6,7%, содэхина К-75 - не выявлено.

Таким образом, применение новорожденным телятам содэхина К-75 в дозе 0,25 мл /кг в течение 14-ти дней исключает возможность возникновения диспепсии.

Результаты проведенных исследований на телятах показали, что содэ-хин и содэхин К-75 оказывали стимулирующее влияние на лейкоэритропоэз, популяционную дифференцировку клеток белой крови, содержание гемоглобина в крови за счет повышения активности эритроцитов. Действие тимиче-ского препарата - тималина, обладающего позитивным влиянием на лейко-поэз, характеризовалось отсутствием иммунотропного свойства в отношении клеток красной крови. Это ограничивает его применение при тех физиологических и клинических ситуациях, когда функциональная способность эрит-роидного роста недостаточна.

Таблица 1 - Профилактическая эффективность применения препаратов

Группы животных Количество животных в группе Количество не заболевших Количество заболев-

диспепсией ших диспепсией

абс. % абс. »/о ..

1-е сутки

Контрольная 15 15 - - -

OiТималин 15 15 - - -

Ог Содэхин 15 15 - - -

Оз Катис 15 15 - - -

04 Содэхин К-75 15 15 - - -

3-е сутки

Контрольная 15 12 80 3 20

Oi Тималин 15 13 86,7 2 13,3

Ог Содэхин 15 11 73,3 4 26,7

Оз Катис 15 13 86,7 2 13,3

04 Содэхин К-75 15 14 93,3 1 6,7

14-е сутки

Контрольная 15 5 33 10 67

Oi Тималин 15 9 60 6 40

Ог Содэхин 15 14 93,3 1 6,7

Оз Катис 15 14 93,3 1 6,7

04 Содэхин К-75 15 15 - - -

Между тем, выявленное нами иммунотропное влияние препаратов характеризовало их как иммуномодуляторов широкого спектра, производящих коррекцию дефектов гемопоэза в целом. При этом следует подчеркнуть, что наиболее позитивные результаты у телят (четвертая опытная группа) были получены при использовании содэхина К-75. Так, достоверно увеличивалось количество эритроцитов с 5,77±0,12 до 6,63±0,12Т012/л (Р>0,001), гемоглобина - с 109,51±1,24 до 120,34±0,31 г/л (Р>0,001), лимфоцитов - в 1,5 раза, и, напротив, снижение палочкоядерных нейтрофилов в 3 раза.

Изучение влияния препаратов на белковый спектр крови показал, что в опытных группах, особенно во второй и в четвертой (применение препарата содэхин К-75) содержание общего белка было достоверно выше в 1,4 раза, альбуминов - в 1,7 раза и у-глобулина в 1,6 раза относительно контрольной группы.

Выявленные изменения были также более значительными во всех изучаемых периодах у животных опытной группы, где в качестве иммуномодулятора применялся тимический препарат тимапин. Кроме того, фитопрепарат содэхин, особенно, содэхин К-75, оказывал благоприятное действие на синтез белка и на соотношение его фракций, на формирование естественной резистентности в период роста и развития телят.

Установлено влияние препаратов на фагоцитарную функцию нейтро-фильных гранулоцитов. В частности, после применения препаратов, увеличивалось количество активно-фагоцитирующих клеток, особенно у телят в месячном возрасте. В четвертой опытной группе были получены высокие значения поглотительной (5,63±0,06) и переваривающей способности (73,44±0,35) нейтрофильных гранулоцитов (таблица 2).

Исследования показали, что возрастание активности процесса фагоцитоза свидетельствует о повышении естественной резистентности и приспособлении организма к постнатальному периоду жизни. Так как у новорожденных телят первые дни жизни являются критическими, необходимо в связи с этим своевременно применять экологически безопасные препараты с целью предупреждения нарушения иммунобиологической реактивности организма.

Таблица 2 - Показатели активности бактериального фагоцитоза крови телят (М±ш;п=15)

Группы животных %ФАН ФЧ %П ФПН

1-е сутки

Контрольная 36,60±0,20 4,32±0,14 51,96±0,27 1,46±0,09

О) Тим алии 36,10±0,21 3,84±0,12 51,24±0,29 1,43±0,07

Ог Содэхин 35,20±0,31 3,76±0,15 50,89±0,36 1,41±0,11

Оз Катис 35,50±0,29 3,72±0,14 51,05±0,48 1,44±0,09

04 Содэхин К-75 35,10±0,36 3,69±0,15 50,87±0,43 1,42±0,10

3-е сутки

Контрольная 40,59±0,44 4,38±0,13 54,68±0,56 1,48±0,08

0[ Тималин 49,50±0,58*** 5,01±0,14*** 63,40±0,41*** 1,55±0,06

Ог Содэхин 48,67*0,81*** 4,89±0,13** 59,89±0,29*** 1,62±0,07

Оз Катис 43,27±0,33*** 4,84±0,12* 57,45±0,37*** 1,71±0,08*

04 Содэхин К-75 52,28±0,37*** 5,№0,11*** 64,63±0,24*** 1,91±0,10***

14-е сутки

Контрольная 42,82±0,29 4,67±0,18 59,30±0,51 1,51±0,07

О1 Тималин 48,90±0,81*** 5,17±0,13* 62,69±0,26*** 1,82±0,06**

Ог Содэхин 53,87±0,29*** 5,21±0,12* 66,43±0,31*** 1,89±0,05***

Оз Катис 51,67±0,39*** 4,98±0,13 61,39*0,42*** 1,92±0,08***

О4 Содэхин К-75 53,13±0,38*** 5,57±0,16*** 66,38±0,30*** 2,32±0,09***

30-е сутки

Контрольная 47,33±0,48 4,97±0,05 62,31±0,34 1,78±0,10

О) Тималин 50,27±0,61*** 5,06±0,11 67,53±0,38*** 2,10±0,03***

Ог Содэхин 53,26±0,33*** 5,14±0,09 70,72±0,33*** 2,31±0,10***

Оз Катис 48,40±0,49 4,92±0,07 68,91±0,31*** 2,20±0,04***

04 Содэхин К-75 51,33±0,50*** 5,63±0,06*** 73,44±0,35*** 2,50±0,08"»

*Р<0,05; **Р>0,01; ***Р>0,001. К-котрольные группы; О1-первая опытная; Ог- вторая опытная; Оз - третья опытная. %ФАН - процент активно-фагоцитирующих нейтрофилов; ФЧ - фагоцитарное число; %П - процент переваривания

Изучение интралейкоцитарной системы имеет особое значение для теоретической и клинической ветеринарии в связи с важной ролью этих клеток в осуществлении защитных реакций организма. Препараты не только по-

вышали фагоцитарную активность, но и активизировали их ферментную и неферментную системы.

Уровень активности ферментных и неферментных систем следует рассматривать как надежный индикатор функционального напряжения системы нейтрофильных лейкоцитов, играющий важную роль в развитии защитно-приспособительных процессов при самых различных заболеваниях.

Из результатов исследований следует, что препараты тималин, содэхин и содэхин К-75 проявили иммуномодулирующий эффект, при этом катис оказывал косвенное воздействие на стимуляцию как кислородзависимой системы фагоцитоза, так и кислороднезависимой. К месячному возрасту у телят четвертой опытной группы наблюдалась достоверная активизация щелочной фосфатазы в 1,3 раза, кислой фосфатазы и миелопероксидазы - в 1,4 раза, повышение уровня лизосомально-катионных белков в 2 раза.

Изучение активности кислой и щелочной фосфатаз, миелопероксидазы и уровня лизосомально-катионных белков как одних из важных показателей иммунного статуса организма животных позволяет своевременно проводить иммунопрофилактику препаратами содэхин, содэхин К-75 и катис. Их действующие вещества способствуют повышению защитных сил организма в период новорожденное™.

Применение экологически безопасных препаратов новорожденным телятам оказывало благоприятное воздействие на гуморальный и клеточный иммунитет. В опытных группах телят после применения препаратов наблюдалось увеличение Т- и B-лимфоцитов, и напротив, снижение NK-лимфоцитов. В опытных группах у телят на 30-е сутки отмечалось повышение Т- и B-лимфоцитов в первой опытной группе на 7% и 14%, во второй опытной - на 11% и 17%, в третьей опытной - на 5% и 10%, в четвертой опытной - на 14% и 21% соответственно. Количество NK-лимфоцитов снижалось в первой опытной группе в 1,6 раза, во второй опытной - в 2 раза, в третьей опытной - в 1,4 раза, в четвертой опытной - в 3 раза, но при этом находилось в пределах физиологической нормы (таблица 3).

Таблица 3 - Содержание Т-, В- и NK-лимфоцитов у новорожденных телят (М±ш;п=15)

Группы животных Т-лимфоциты, % В-лимфоцигы, % NK-лимфоциты, %

1-е сутки

Контрольная 55,47±0,34 24,67±0,13 19,87±0,29

Oi Тималин 54,40±0,25 23,80±0,22 21,80±0,42

Ог Содэхин 54,60±0Д1 24,73±0Д8 20,67±0,29

Оэ Катис 54,27±0,21 24,33±0,19 21,40±0,27

04 Содэхин К-75 55,80±0,31 23,60±0,16 20,60±0,38

3-е сутки

Контрольная 54,40±0,25 26,20±0,24 19,40±0,31

Oi Тималин 57,40±0,38*** 26,27±0,23 16,33±0,47***

О2 Содэхин 56,60±0,51*** 27,47±0,19*** 15,93±0,49***

03 Катис 55,87±0,27*** 26,27±0,23 17,87±0,29***

04 Содэхин К-75 57,20±0,47*** 27,33±0,16*** 15,47±ß,52***

14-е сутки

Контрольная 55,67±0,27 26,80±0,17 17,53±0,32

Oi Тималин 58,20±0,28*** 27,40±0,16* 14,40±0,36***

Ог Содэхин 59,40±0,24*** 27,27±0,18 13,33±0,32***

Oj Катис 56,87±0,41* 26,67±0,23 16,47±0,40

04 Содэхин К-75 60,27±0,18*** 28,53±0Д7*** П,20±0,35***

30-е сутки

Контрольная 56,47±0,38 27,67±0,21 15,87±0,41

OiТималин 59,33±0,21*** 28,20*0,24*** 12,47±0,26***

Ог Содэхин 61,53±0,19*** 28,80±0,20*** 9,67±0,32***

Оз Катис 58,33±0,23*** 27,27±0,18*** 14,40±0,36***

04 Содэхин К-75 63,40±0,29*** 29,73±0,23*** 6,87±0,36***

*Р<0,05, **Р>0,001; ***Р>0,001. К - контрольные группы; О] - первая опытная; Ог- вторая опытная; Оз - третья опытная

Установлена функциональная активность клеток Т- и B-систем, что способствовало повышению естественной резистентности организма телят.

Результаты исследования бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови телят показали, что применение тималина, содэхина и особенно содэхина К-75 позволили не только поддерживать уровень бактерицидной и лизоцимной активности у телят после прекращения приема молозива, но и

были на достаточно (Р>0,001) высоком уровне, как в ранний (49,60±0,31% и 42,40±0,42% соответственно), так и поздний постнатальный период (57,67±0,29% и 47,33±0,29%), в то время как у интактных животных данные показатели повышались незначительно.

Использование содэхина К-75 показало наилучшие результаты, поскольку позволили поддерживать факторы гуморального иммунитета на высоком уровне длительное время, даже после отмены препаратов (таблица 4).

Таблица 4 - Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови телят (M±m; п = 15)

Группы животных IgAiMr/ил) IrM (мг/мл) IgO (мг/мл)

1-е сутки

Контрольная 0,18±0,02 1,53±0,03 12,49+0,22

Oi Тим алии 0,16+0,01 1,48±0,04 12,42+0,52

Ог Содэхин 0,17+0,01 1,42+0,03 12,57+0,30

Оз Катис 0,14±0,01 1,43±0,05 11,59+0,35

О4 Содэхин+Катис 0,15±0,04 1,41±0,02 11,31+0,29

3-е сутки

Контрольная 0,21±0,01 1,62+0,04 13,70+0,27

Oi Тималин 0,25+0,03*** 1,81±0,04*** 14,84+0,22**

Ог Содэхин 0,26+0,01*** 1,82+0,02*** 15,35+0,19***

Оз Катис 0,23+0,01** 1,65±0,05 14,02+0,29

О4 Содэхин+Катис 0,27+0,01*** 1,85±0,02*** 15,64+0,23***

14-е сутки

Контрольная 0,29+0,02 1,77+0,03 14,87+0,39

Oi Тималин 0,36+0,01*** 1,87+0,03* 17,53+0,28***

Ог Содэхин 0,38+0,03*** 1,93+0,03*** 18,70+0,17***

Оз Катис 0,33+0,02*** 1,79±0,04 15,81+0,21

О4 Содэхин+Катис 0,41+0,04*** 1,97+0,02*** 19,59+0,30***

30-е сутки

Контрольная 0,42+0,02 2,06+0,04 18,37+0,24

Oi Тималин 0,53+0,04*** 2,26+0,04*** 20,19+0,27***

Ог Содэхин 0,57+0,01*** 2,29+0,06** 21,80+0,34***

Оз Катис 0,47*0,01*** 2,20+0,04** 18,77+0,25

О4 Содэхин+Катис 0,59+0,05*** 2,41+0,10*** 22,58+0,36***

*Р<0,05, **Р>0,01, ***Р>0,001. К - контрольные группы; 0| - первая опытная, Ог-вторая

опытная; Оз - третья опытная. ^А - иммуноглобулин А, - иммуноглобулин М, - иммуноглобулин О

Анализируя показатели гуморального иммунитета у телят в различные сроки постнатального периода (содержание иммуноглобулинов основных

классов - А, М и G), можно констатировать их достоверное повышение после приема молозива. По сравнению с первыми сутками в месячном возрасте наблюдалось увеличение IgA, IgM, IgG в первой опытной группе - в 3,3 раза, 1,5 раза и 1,6 раза; во второй опытной - в 3,4 раза, 1,6 раза и 1,7 раза; в третьей опытной - в 3 раза, 1,5 и 1,6 раза, в четвертой опытной группе - в 4 раза, 1,7 раза и 2 раза соответственно (таблица 4).

Применение тималина, содэхина и особенно содэхина К-75 позволило выявить иммунокорригирующий эффект препаратов по отношению к показателям гуморального иммунитета. Об этом, в частности, свидетельствовало увеличение уровней исследуемых иммуноглобулинов.

Кроме того, в опытных группах, где применяли содэхин К-75, наблюдалось снижение диспепсии у телят, что свидетельствовало о повышении естественной резистентности организма в период новорожденное™.

Таким образом, проведенные исследования показали, что период ново-рожденности у телят сопряжен с изменениями состава крови и физиологической активностью иммунокомпетентных клеток, обеспечивающих специфическую и неспецифическую защиту организма от негативных воздействий внешней среды.

Наиболее существенные изменения происходили у интактных животных в результате развития иммунодефицитного состояния и проявления различного рода острых патологических процессов. В связи с этим, нивелирование иммунодефицитных состояний у новорожденных телят за счет применения препаратов с иммуномодулирующими свойствами, является необходимым и обоснованным технологическим приемом, позволяющим обеспечивать устойчивость организма.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что у телят с возрастом достоверно увеличивается количество лимфоцитов в 1,6 раза, за счет снижения сегментоядерных нейтрофи-лов в 1,5 раза, палочкоядерных - в 2,2 раза, юных — в 4,3 раза.

2. Концентрация общего белка сыворотки крови у телят с возрастом повышается на 23%, альбуминов и у-глобулинов - в 1,3 раза, р-глобулинов -в 1,6 раза и, напротив, происходит снижение а-глобулинов в 1,2 раза. Ка-тионный компонент и муцин снижаются в 1,4 и 2 раза соответственно.

3. С увеличением срока постнатапьного периода повышается ФАН на 29%, ФЧ - на 15%, %П - на 20%. Активность МП и уровень КБ повышается к месячному возрасту, тогда как ЩФ и КФ с возрастом снижаются.

4. Определено, что показатели бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови достигают максимального значения в месячном возрасте и составляют 44,40±0,21 и 37,20±0,46%, в то время как в первые сутки постнатапьного периода - 35,33±0,30 и 28,27±0,53% соответственно.

5. Уровень Т- и В-лимфоцитов постепенно повышается, достигая максимума в месячном возрасте, в то время как количество ЫК-клеток снижается. В ранний постнатальный период на фоне количественного снижения Т- и В-лимфоцитов имеет место повышение содержания 1^К-кпеток на 20%. С увеличением возраста в сыворотке крови концентрация ^А повышается в 1,6-2,3 раза, 1§М - в 1,2-1,3 раза и - в 1,2-1,5 раза.

6. Установлено, что содэхин и, в особенности, содэхин К-75 оказывает наиболее выраженное влияние на Т-систему иммунитета и микробицидные свойства нейтрофильных гранулоцитов, а также усиливает в 1,2 раза способность лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов к спонтанному и комплементарному розеткообразованию, способствуя увеличению количества В-лимфоцитов в 1,4 раза.

7. Выявлено активное действие препаратов на фагоцитарную функцию нейтрофильных гранулоцитов. В частности, получены достоверно высокие значения поглотительной (5,63±0,06) и переваривающей (73,44±0,35) способности нейтрофильных гранулоцитов. Отмечена активизация щелочной фосфатазы в 1,3 раза, кислой фосфатазы и миелопероксидазы - в 1,4 раза, повышение в 2 раза уровня лизосомапьно-катионных белков.

8. При использовании препаратов, в особенности, содэхина К-75 отмечено повышение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови у телят, на первые сутки (49,60±0,31% и 42,40±0,42% соответственно), и 30-е сутки постнатального периода (57,67±0,29% и 47,33±0,29%).

9. Установлено, что применение содэхина К-75 способствовало увеличению 1§А в 4 раза, ^М - в 1,7 раза, - в 2 раза, повышению Т- и

B-лимфоцитов на 14% и 21% соответственно, в то же время снижению количества NK-лимфоцитов в 3 раза. Ю.Экономически целесообразно применение иммуномодуляторов телятам с целью повышения естественной резистентности, а также снижения заболеваемости диспепсией на 73-93%. Наиболее высокая экономическая эффективность достигнута при применении препарата содэхина и содэхина К-75 на 5,9 и 0,1 руб. соответственно по сравнению с препаратом катис.

Предложения производству

1. Для выявления иммунодефицитного состояния новорожденных телят целесообразно проводить экспресс-диагностику по следующим показателям: по количеству нейтрофилов, T-, В-, NK-лимфоцитов, бактериального фагоцитоза и его ферментных и неферментных систем.

2. Для профилактики диспепсии, повышения иммунобиологической реактивности у телят предлагается использовать препараты содэхин в дозе

0.08.мл/кг, катис - 12,5 мкг/кг и содэхин К-75 - 0,25 мл/кг массы животного.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гугушвили Н. Н. Применение фитоиммуномодуляторов телкам /H.H. Гугушвили, В.М. Мирцхулава, Ю.И. Власенко, И.А. Доми //Соврем, пробл. вет. диетологии и нутрициологии: 3-й Междунар. сим-поз. - С-Пб., 2005. - С. 215-219.

2. Доми И.А. Динамика изменения общего белка и белковых фракций в сыворотке крови телят в возрастном аспекте /И.А. Доми //Актуал. Пробл. ветеринарии в современных условиях: Материалы Междунар. науч.-произв. конф. - посвящ. 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ. - Краснодар, 2006. - С. 276-278.

3. Доми И.А. Влияние фитопрепарата содэхина и антисептика катис на гематологические показатели телят /И.А. Доми //Актуал. Пробл. ветеринарии в современных условиях: Материалы Междунар. науч.-произв. конф. - посвящ. 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ. - Краснодар, 2006. -С. 48-51.

4. Доми И.А. Особенности клеточного иммунитета телят /И.А. Доми //Актуал. Пробл. ветеринарии в современных условиях: Материалы Ме-ждунар. науч.-произв. конф. - посвящ. 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ. - Краснодар, 2006. - С. 395-397.

5. Доми И.А. Роль иммуноглобулинов в формировании естественной резистентности у новорожденных телят /И.А. Доми //Экологические проблемы современности: VII Между нар. науч.-практич. конф. - Майкоп, 2006. С. 288-289.

6. Доми И.А. Активация микробицидной системы крови у новорожденных телят /И.А. Доми //Экологические проблемы современности: VII Между-нар. науч.-практич. конф. - Майкоп, 2006. С. 289-291.

7. Доми И.А. Показатели бактериального фагоцитоза у новорожденных телят /И.А. Доми //Экологические проблемы современности: VII Между-нар. науч.-практич. конф. - Майкоп, 2006. С. 291-293.

8. Гугушвили Н. Н. Применение препаратов для повышения резистентности телят /H.H. Гугушвили, И.А. Доми //Тр./ КубГАУ. - 2007. - Вып. № 2 (6)-С. 121-129.

Подписано в печать 30.03.2007 г. Формат 60x84 ^

Бумага офсетная Офсетная печать

Печ.л. I Заказ №184 Тираж 100 экз.

Отпечатано в типографии КубГАУ 350044, г. Краснодар, ул Калинина, 13

Актуальность работы. Необходимость проведения иммунологических исследований объясняется тем, что при современной системе ведения скотоводства, телята рождаются с низким иммунным статусом и, чаще всего, высокой предрасположенностью к различного рода заболеваниям. Известно немало случаев появления вторичных иммунодефици-тов из-за нехватки в рационе животных белковых, витаминных и минеральных компонентов.

Исследованиями отечественных и зарубежных ученых (В.М. Шубик, 1976; Н.Г. Дмитриев, А.И. Жигачев, С.М. Федорова, 1986; Н.М. Костомахин, 1986; С.И. Джупина, 1988; Ram S. Lachhiraman, 1981; J. Gavora, J. Spencer, 1987) установлено, что с самого рождения организм животного испытывает воздействие экологических и антропогенных факторов, вызывающих мобилизацию защитных реакций организма. Усиленная мобилизация важнейших систем организма обеспечивает поддержание гомеостаза или адаптацию к действию неблагоприятных факторов внешней среды, которые приводят к нарушению функций жизненно важных систем, и, как следствие, к различным функциональным нарушениям, снижению резистентности и появлению различных заболеваний, особенно у новорожденных телят.

В связи с этим требуются углубленные исследования по обоснованию физиологических основ адаптации при воздействиях стресс-факторов, изучению биохимических и иммунологических процессов жизнедеятельности организма и разработке принципов коррекции его иммунологических и адаптационных механизмов. Поэтому, изучение коррекции механизма резистентности имеет целью обосновать интенсивность защитных функций организма, что составляет одну из актуальных проблем современной биологии, медицины и ветеринарии (Р.В. Петров, 1976, 1987; С.И. Плященко и соавт., 1979, 1982, 1983, 1991; И.М. Карпуть, 1997, 1998).

С учетом изложенного, разработка средств и способов повышения иммунобиологических факторов неспецифической резистентности организма новорожденных телят является весьма актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

Так как до настоящего времени не установлен диапазон показателей физиологического статуса организма, представляется важным изучение адаптивных и защитных механизмов у телят, в период новорожденное™ как с теоретической, так и с практической точки зрения.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы было изучение особенностей формирования неспецифической резистентности организма новорожденных телят в возрастном аспекте и разработка средств иммунокоррекции.

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить характер изменений гематологических показателей, уровня общего белка и белковых фракций сыворотки крови телят до месячного возраста.

2. Изучить состояние фагоцитарного, клеточного и гуморального звена иммунитета у телят, определить наиболее значимые диагностические критерии оценки иммунодефицитного состояния.

3. Испытать новые средства иммунокоррекции у телят на основе использования лекарственных трав и ионов серебра.

4. Определить эффективность применения экологически безопасных препаратов в постнатальный период у телят.

Научная новизна. Впервые изучены и установлены параметры изменения показателей крови и иммунной системы у телят. Установлено, что у телят постнатальный период сопровождается изменениями в клеточном иммунитете (Т- и B-лимфоциты) и снижением фагоцитоза. Апробированы фитопрепарат содэхин, который обладает иммунотропным действием благодаря биологически активным веществам (оксикоричные и глицирризиновая кислоты) и катис с широким антибактериальным свойством, за счет ионов серебра.

Установлено, что комплексный препарат содэхин К-75 стимулирует выработку Т- и B-лимфоцитов, повышает фагоцитарную активность нейтрофилов, усиливает эритропоэз, увеличивает уровень гемоглобина в крови и содержание общего белка, обладает противовоспалительным действием. Обоснована теоретическая и практическая необходимость проведения иммунопрофилактики телят в период новорожденности.

Практическая значимость диссертационной работы состоит в установлении характера изменений неспецифического и специфического звена иммунной системы организма телят. Эти сведения могут быть использованы в практике для контроля состояния здоровья телят, а также в курсах лекций по ветеринарной иммунологии и фармакологии.

Практически подтверждена коррекция иммунобиологической реактивности организма телят в период новорожденности, позволяющая предотвращать диспепсии и обеспечить повышение жизнеспособности телят.

Практическая значимость результатов исследований состоит в разработке и внедрении в ветеринарную практику препаратов - содэхин, катис и содэхин К-75 для повышения иммунной защиты в критический период (новорожденность) с целью профилактики заболеваний у молодняка.

Разработана нормативно-техническая документация - временные наставления и технические условия на содэхин, утвержденные Департаментом ветеринарии Минсельхоза Российской Федерации (№ 13-403/0288 от 27.12.01г. и № 13-4-03/0297 от 29.12.01г.), «Катис» - Гигиенический сертификат № 23.КК.01.915.П.003234.05.06, сертификат соответствия № РОСС РИ. АЮ77. В00156, ТУ 9154-001-10073810-2002 производитель - ООО Предприятие «Кубаньагроток».

Результаты исследований внедрены в условиях производства в четырех хозяйствах Краснодарского края на молочно-товарных фермах (учебно-опытное хозяйство «Краснодарское» Кубанского государственного аграрного университета, ПСК «Предгорье Кавказа» Северского района, КФХ «Чалов В.Н.» Мостовского района, СПК КПЗ «Россия» Красноармейского района).

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертации доложены и обсуждены на III Международном симпозиуме (Санкт-Петербург, 2005); на VIII Международной конференции (Майкоп, 2006); на Международной научно-практической конференции (Краснодар, КНИВИ, 2006), на научных и методических конференциях факультета ветеринарной медицины КубГАУ (Краснодар, 2003-2007).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в т.ч. в журнале: «Труды Кубанского государственного аграрного университета».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Особенности исследования морфобиохимических показателей крови у телят в возрастном аспекте.

2. Закономерности изменения клеточного и гуморального иммунитета у телят в возрастном аспекте.

3. Эффективность использования препаратов содэхин, катис и содэхин К-75 телятам в качестве иммуномодуляторов.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 131 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, заключения, выводов, предложений производству, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 30 таблицами, 5 рисунками. Список литературы включает 417 источников, в том числе 93 зарубежных автора.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что у телят с возрастом достоверно увеличивается количество лимфоцитов в 1,6 раза, за счет снижения сегментоядерных ней-трофилов в 1,5 раза, палочкоядерных - в 2,2 раза, юных - в 4,3 раза.

2. Концентрация общего белка сыворотки крови у телят с возрастом повышается на 23%, альбуминов и у-глобулинов - в 1,3 раза, Р-глобулинов - в 1,6 раза и, напротив, происходит снижение а-глобулинов в 1,2 раза. Катионный компонент и муцин снижаются в 1,4 и 2 раза соответственно.

3. С увеличением срока постнатального периода повышается ФАН на 29%, ФЧ - на 15%), %П - на 20%. Активность МП и уровень КБ повышается к месячному возрасту, тогда как ЩФ и КФ с возрастом снижаются.

4. Определено, что показатели бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови достигают максимального значения в месячном возрасте и составляют 44,40±0,21 и 37,20±0,46%, в то время как в первые сутки постнатального периода - 35,33±0,30 и 28,27±0,53% соответственно.

5. Уровень Т- и В-лимфоцитов постепенно повышается, достигая максимума в месячном возрасте, в то время как количество ЫК-клеток снижается. В ранний постнатальный период на фоне количественного снижения Т- и В-лимфоцитов имеет место повышение содержания 1МК-клеток на 20%. С увеличением возраста в сыворотке крови концентрация ^А повышается в 1,6-2,3 раза, ^М - в 1,2-1,3 раза и ^С - в 1,21,5 раза.

6. Установлено, что содэхин и, в особенности, содэхин К-75 оказывает наиболее выраженное влияние на Т-систему иммунитета и микроби-цидные свойства нейтрофильных гранулоцитов, а также усиливает в 1,2 раза способность лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов к спонтанному и комплементарному розеткообразованию, способствуя увеличению количества В-лимфоцитов в 1,4 раза.

7. Выявлено активное действие препаратов на фагоцитарную функцию нейтрофильных гранулоцитов. В частности, получены достоверно высокие значения поглотительной (5,63±0,06) и переваривающей (73,44±0,35) способности нейтрофильных гранулоцитов. Отмечена активизация щелочной фосфатазы в 1,3 раза, кислой фосфатазы и миело-пероксидазы - в 1,4 раза, повышение в 2 раза уровня лизосомально-катионных белков.

8. При использовании препаратов, в особенности, содэхина К-75 отмечено повышение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови у телят, на первые сутки (49,60±0,31% и 42,40±0,42% соответственно), и 30-е сутки постнатального периода (57,67±0,29% и 47,33±0,29%).

9. Установлено, что применение содэхина К-75 способствовало увеличению ^А в 4 раза, ^М - в 1,7 раза, ^С - в 2 раза, повышению Т- и В-лимфоцитов на 14% и 21% соответственно, в то же время снижению количества 1МК-лимфоцитов в 3 раза.

10. Экономически целесообразно применение иммуномодуляторов телятам с целью повышения естественной резистентности, а также снижения заболеваемости диспепсией на 73-93%. Наиболее высокая экономическая эффективность достигнута при применении препарата содэ-хина и содэхина К-75 на 5,9 и 0,1 руб. соответственно по сравнению с препаратом катис.

Предложения производству

1. Для выявления иммунодефицитного состояния новорожденных телят целесообразно проводить экспресс-диагностику по следующим показателям: по количеству нейтрофилов, T-, В-, NK-лимфоцитов, бактериального фагоцитоза и его ферментных и неферментных систем.

2. Для профилактики диспепсии, повышения иммунобиологической реактивности у телят предлагается использовать препараты содэхин в дозе 0,08 мл/кг, катис - 12,5 мкг/кг и содэхин К-75 - 0,25 мл/кг массы животного.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Интенсивное использование сельскохозяйственных животных в промышленных комплексах и их высокая концентрация, а также односторонняя селекция по признакам продуктивности способствуют снижению резистентности и возникновению инфекционных заболеваний.

Изучение естественной резистентности организма новорожденных телят в настоящее время имеет важное значение для своевременного выявления иммунодефицитного состояния и проведения коррекции с целью предупреждения возникновения различных патологий.

Необходимость исследований в области ветеринарной иммунофар-макологии объясняется тем, что при современной системе ведения животноводства телята нередко находятся в состоянии депрессии иммунного статуса и чувствительны к различного рода заболеваниям, вследствие чего у них существенно снижается продуктивность. Известно немало случаев появления вторичных иммунодефицитов из-за неполноценного белкового, витаминного и минерального питания животных.

Установлено, что в процессе роста и развития, особенно после рождения, животному приходится сталкиваться с действием экологических и антропогенных факторов, которые вызывают приспособительные реакции организма. Усиленная мобилизация важнейших систем организма обеспечивает поддержание гомеостаза и его адаптацию к действию факторов внешней среды. Если организму не удается поддерживать гомеостаз и адаптироваться к изменившимся условиям окружающей среды, то чрезмерный неблагоприятный фактор приводит к нарушению функций жизненно важных систем и, как следствие, к функциональным различным нарушениям, снижению общей резистентности и вызывает развитие заболеваний, падеж, особенно у новорожденных телят (Р.П. Маслянко, 1975а,б,

1983; В.Н. Денисенко, 1999; В.И.Иванов и др., 2000, 2001; Бузлама и др., 2001; A.C. Кашин, 2003).

В связи с этим требуются углубленные исследования по обоснованию физиологических основ коррегирования адаптации при воздействиях стресс-факторов, изучению биохимических и иммунологических процессов жизнедеятельности организма и разработке принципов коррекции его иммунологических и адаптационных механизмов. Ключевое значение в решении этих вопросов имеет проблема резистентности, актуальность которой связана с раскрытием механизмов устойчивости в норме и при патологии. Поэтому, изучение механизма резистентности имеет конечной целью обоснование усиления интенсивности защитных функций организма, что составляет одну из актуальных проблем современной биологии, медицины и ветеринарии (Р.В.Петров, 1976; С.И. Плященко и соавт., 1991; И.М. Карпуть, 1997, 1998, 2000; Л.П. Шешуков, 1993).

Свои исследования мы спланировали и провели таким образом, чтобы оценить в целом состояние внутренней среды организма телят в возрастном аспекте в первые сутки, на 3-е, 14-е и 30-е сутки, выявление фаз физиологического иммунодефицита в период роста, а, следовательно, периодов повышенного риска, а также поиск безопасных и экологически оправданных средств иммунокоррекции и иммунопрофилактики. В качестве соответствующих индикаторных систем были выбраны клетки крови и ее белковая компонента, так как именно они наиболее четко реагируют на те или иные изменения, происходящие в макроорганизме.

Проведенный общий анализ крови показал, что с момента рождения и до месячного возраста в организме телят происходили существенные изменения, как в количественном, так и в качественном составе клеток.

Анализ морфологических показателей крови телят показал, что количество эритроцитов, гемоглобина достоверно возрастало в возрастном аспекте. Данные изменения вполне оправданы, так как с развитием организма увеличивалась потребность в кислороде, следовательно, увеличение структур, отвечающих за функцию доставки его в органы и ткани. Количество лейкоцитов было подвержено периодическим колебаниям в период роста и развития телят, однако, к месячному возрасту, оно достоверно повышалось.

Это коррелировало с уже имеющимися данными Г.С. Петровского (1965), Р.П. Маслянко (1982), М.И. Немченко (1983), С.Г. Лумбунова и P.P. Игнатьева (1999), R. Moberg (1955) Н. Bostedt (1974) о том, что у телят в ранний постнатальный период по сравнению с поздним наблюдались более низкие показатели красной крови - эритроцитов и гемоглобина.

При изучении лейкоцитарной формулы у телят нами было установлено достоверное увеличение количества сегментоядерных нейтрофилов с третьих до 14-х суток постнатального периода, коррелирующее с максимальным увеличением количества лимфоцитов к 30-м суткам. Среди других показателей лейкоцитарного ряда следует выделить эозинофилы, количество которых достоверно снижалось в данный период и вновь повышалось к 30-м суткам, а количество юных и палочкоядерных нейтрофилов, напротив, плавно снижалось (в 4,3 и 2,2 раза) в течение наблюдаемого периода.

У телят в ранний постнатальный период (1-3-е суток) обнаруживался нейтрофилез (юные, палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофйлы), достоверно более высокое содержание эозинофилов и моноцитов, чем на 30-е сутки.

Следовательно, у телят с возрастом отмечалась общая закономерность увеличения количества клеток крови, которые могут осуществлять фагоцитоз. В более поздние сроки увеличивалось количество лимфоцитов клеток, регулирующих иммунный ответ и продуцирующих гуморальные факторы защиты.

Изменения общеклинических показателей крови напрямую связаны с физиологическим состоянием (ростом и развитием) телят, по которым в какой-то мере можно судить и об иммунной реактивности организма.

Полученные данные свидетельствуют о пластичности внутренней среды телят, различных приспособительных и компенсаторных механизмах, позволяющих обеспечивать жизнеспособность в постнатальный период развития.

Немаловажное значение при общебиологической оценке состояния внутренней среды организма животных имел уровень общего белка и его фракций, так как белковые молекулы участвуют практически во всех звеньях гомеостаза. Так, С.Г. Лумбунов и P.P. Игнатьев (1999), Б.З. Цалие-вым и др., (1989), P.M. Torre (1989), установлено, что у телят в период потребления молозива содержание общего белка увеличивалось, к 15-ти суткам несколько снижалось, и вновь возрастало к 30-м суткам.

Результаты проведенных исследований свидетельствовали о весьма выраженной динамике изменений в показателях, характеризующих белковый обмен у телят в возрастном аспекте. В ранний постнатальный период (1-е сутки) содержание общего белка было минимальным, но с ростом и развитием организма заметно повышался его уровень в крови телят. Данное положение вполне оправдано, так как после выпойки животным молозива, в котором находится повышенная концентрация иммуноглобулинов (защитных белков), в организме новорожденных телят происходит интенсивный синтез общего белка, и особенно у-глобулиновой фракции. Мобилизация противовоспалительных белков способствовала повышению устойчивости организма телят.

В наших исследованиях также было предусмотрено изучение системы нейтрофильных гранулоцитов (НГ), от функциональной состоятельности которых во многом зависела реализация специфического иммунного ответа (Р.П. Маслянко, 1977; И.В. Нестерова, 1980, 1981; И.И. Некрасова, 1998; Н.П. Высокое, 1984; В.Н.Денисенко, 1999; Н.В. Колесникова, 1999; P.M. Хаитов и др., 1995; Г.А. Чудилова, 1995; К. Agner, 1950).

Проведенные исследования позволили установить динамику изменений фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов в зависимости от сроков постнатального периода телят. Рост активности фагоцитоза наблюдался на протяжении всего периода наблюдения (с момента рождения до месячного возраста). Однако необходимо отметить недостоверное повышение фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов крови телят после прекращения приема молозива. К 30-м суткам наблюдалась достоверная активизация процессов фагоцитоза, следовательно, и коэффициента мобилизации фармазанпозитивных клеток. Данное обстоятельство свидетельствует о формировании иммунитета телят с увеличением возраста.

При исследовании микробицидных систем нейтрофильных гранулоцитов нами установлено, что у телят в отношении активности щелочной (ЩФ) и кислой фосфатаз (КФ), миелопероксидазы (МП) и содержания неферментных лизосомально-катионных белков (КБ) отмечен во многом аналогичный характер изменений.

Изменения активности щелочной и кислой фосфатаз, с первых до трех суток достоверно были высокими, а затем наблюдается обратная корреляция между этими ферментами, однако, к месячному возрасту наблюдалось вновь возрастание кислой фосфатазы. Кроме того, необходимо отметить, что средний цитохимический индекс щелочной фосфатазы выше кислой.

С возрастом наблюдалась активизация фермента миелопероксидазы, что свидетельствовало о повышении реактивности организма телят к 3-м суткам после приема молозива, и после прекращения его происходило снижение к 14-м суткам. В более поздние сроки постнатального периода (14-30-е сутки) развиваются механизмы защиты организма и, в связи с этим, происходит активизация кислородзависимой системы фагоцитоза, в частности, фермента миелопероксидазы.

Аналогичные данные были получены Г.И. Печниковой и П.А. Емельяненко (1977), которыми установлено, что изменения активности пероксидазы у новорожденных телят связано с возрастом. В период приема молозива оно было более высокой, после его отмены происходило некоторое снижение, а затем после некоторой адаптации вновь повышалось. Активность щелочной фосфатазы с возрастом снижалась.

Анализ уровня лизосомально-катионных белков неферментной кислородзависимой системы выявил, что происходили изменения, аналогичные другим системам фагоцитоза. В то же время необходимо отметить, что изменения уровня лизосомально-катионных белков происходили более плавно, чем активность кислой фосфатазы и миелопероксидазы.

Характеризуя динамику изменений исследуемых ферментов и неферментных КБ, следует учесть ее позитивность с точки зрения функциональной значимости показателей (М.Г. Шубич, 1965, 1966, 1968, 1980; В.Е. Пигаревский, 1975, 1979; И.В. Нестерова, В.А. Тараканов 1981; В.В. Лебедев и соавт., 1994).

Таким образом, снижение КФ к месячному возрасту можно считать существенной особенностью при росте и развитии организма телят, так как в большинстве случаев наблюдался аналогичный характер изменений КФ и ЩФ. Кроме того, снижение активности КФ с возрастом можно считать отражением компенсаторно-приспособительной реакции на фоне активации МП. Миелопероксидаза, как и лизосомально-катионные белки представляют собой мощную антибактериальную разрушающую систему, подавляющую рост микроорганизмов, в связи с этим, физиологически оправдан их высокий уровень при развитии механизмов защиты у телят в возрастном аспекте.

Исследованиями было выявлено, что пролиферация иммунокомпе-тентных клеток (Т- и В-лимфоциты) в ранний постнатальный период была минимальной, в то же время количество 1МК-лимфоцитов было высоким. До месячного возраста содержание Т- и В- лимфоцитов постепенно повышалось, при этом количество 1МК-лимфоцитов снижалось в пределах физиологической нормы.

Исследованиями Р.П. Маслянко (1979а,б) установлено, что факторы неспецифической защиты играют важную роль в устойчивости организма теленка от различных экзогенных неблагоприятных факторов до появления активного специфического иммунитета.

Помимо фагоцитоза, огромную роль в системе неспецифической защиты отводится гуморальному фактору - бактерицидной и лизоцимной составляющей, поскольку они обеспечивают киллинг и растворение микробной клетки (Л.Е. Бриан, 1984; Р.П. Маслянко, 1979а б; Ф.П. Петрянкин, 1997; В.Н.Денисенко, 1999).

По данным П.А. Емельяненко (1977) установлено, что с возрастом у новорожденных телят происходит увеличение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови.

Результатами исследований установлено, что бактерицидная и лизо-цимная активности повышались с увеличением срока постнатального периода телят, однако необходимо отметить, что после прекращения приема молозива (с пятых-седьмых суток), а на 14-е сутки вновь их активность восстанавливалась. К 30-м суткам показатели бактерицидной и лизоцимной активности были самыми высокими и составляли 44,40±0,31% и 37,20±0,61% соответственно. Низкие показатели бактерицидной и лизоцимной активности в ранний постнатальный период цимной активности в ранний постнатальный период относительно позднего срока указывают на несовершенную систему иммунитета новорожденных телят. С возрастом происходило приспособление новорожденного организма к окружающей среде, формирование механизмов естественной защиты организма.

Специфическая защита организма в основном обеспечивается иммуноглобулинами, продуцентами которых являются В-лимфоциты (П.А. Емельяненко и др., 1980; В.Н. Денисенко, 1992; А. Ройт и др., 2000). Поэтому по содержанию в сыворотке крови иммуноглобулинов можно судить не только о степени защиты, но и функциональной активности В-лимфоцитов.

Анализируя в целом результаты оценки показателей гуморального иммунитета у телят в различные возрастные периоды (содержание иммуноглобулинов основных классов А, М и в), следует заключить, что начиная с выпойки молозива уровни ^А и достоверно повышались. К месячному возрасту отмечалось значительное повышение всех изучаемых классов иммуноглобулинов: 1§А - в 2,3 раза; ^М - в 1,3 раза; - в 1,5 раза, относительно первых суток.

Нами установлено, что в постнатальный период (1-30 сутки) с развитием организма активируется гуморальный иммунитет, а это указывает на становление естественной резистентности организма новорожденных телят. Аналогичные данные были получены П.А. Емельяненко (1977), В.Н.Денисенко, 1994)

С учетом проведенных исследований установлено, что ранний постнатальный период у телят сопровождается достаточно выраженными спадами иммунобиологической реактивности. Очевидна целесообразность применения животным препаратов, способных обеспечить высокую жизнеспособность в данный период их жизни.

В связи с этим большое значение имеет выбор иммуномодулирую-щих препаратов, поэтому одной из задач настоящего исследования был поиск и разработка соответствующих средств. Наиболее предпочтительными могут быть лекарственные растения, которые, как известно, являются наилучшими адаптогенами. Механизм действия адаптогенов сводится не только к улучшению энергетического обмена, нормализации функций центральной нервной системы и положительному влиянию на эндокринный статус, но и к активизации иммунной системы - повышение выработки интерферонов, количества и активности иммунокомпетентных клеток, фагоцитоза (Н.Д. Придыбайло, 1991; A.A. Воробьев, 1999; H.H. Гугушви-ли, 2001).

С этой целью были использованы уже известные препараты тима-лин, содэхин - действующими веществами, которого являются глицирри-зиновая и оксикоричные кислоты и катис - ионы серебра. Препарат катис обладает высокой антибактериальной активностью вещества при концентрации ионов серебра от 0,001 мг/л, что значительно ниже допустимой санитарной нормы (0,01 г/л) и проявляет высокую устойчивость при хранении. Устойчивые антисептические свойства ионов серебра усиливаются его кислой реакцией.

Анализ результатов оценки острой и хронической токсичности фитопрепарата содэхин, катис и содэхин К-75 показал их низкую токсичность и безопасность. Исследование гематологических показателей периферической крови у крыс не позволило выявить у препаратов достоверного влияния на общее количество эритроцитов, уровень гемоглобина, величину цветового показателя, СОЭ, количества лейкоцитов. Обращало на себя внимание достоверное возрастание (на 15%) количества лимфоцитов у крыс, получавших препарат содэхин К-75.

Результаты фармакологической оценки содэхина и катис, также их сочетание проведенные на лабораторных белых крысах, показали, что применение этих препаратов стимулируют некоторые обменные процессы в организме животных и повышает их естественную резистентность.

Изучение иммунопротективных свойств содэхина, катиса и содэхина К-75 первоначально осуществляли in vitro с периферической кровью телят. В качестве эталона был использован известный иммуномодулятор тимического происхождения -тималин.

Анализ полученных данных позволил установить, что тималин, со-дэхин, катис и содэхин К-75 проявляли сходные иммунопротективные эффекты при инкубации с ними иммунокомпетентных клеток. Причем максимальное стимулирующее влияние на количество лимфоцитов, образующих розетки с эритроцитами барана (Т-лимфоциты) и СЗ-компонентом комплемента (В-лимфоциты), отмечено при инкубации лимфоцитов тима-лином, тогда как препарат содэхин К-75, оказывал более выраженное влияние на количество поздних Е-РОН и ЕАС-РОН, что, по всей видимости, связано с механизмом действия катис, содержащего ионы серебра. Препарат катис активизировал действие содэхина, в состав которого входят иммуностимулирующие лекарственные растения (эхинацея и корень солодки). Данное положение свидетельствовало о позитивном влиянии ре-цепторного аппарата иммунокомпетентных клеток.

Результаты проведенных исследований на телятах показали, что содэхин и содэхин К-75 оказывали значительное влияние на лейкоэритро-поэз, популяционную дифференцировку клеток белой крови, содержание гемоглобина в крови за счет повышения активности эритроцитов. Наиболее выраженный иммунотропный эффект наблюдался в зимний и ранне-весенний период, когда животные в наибольшей мере были подвержены различным стрессорным факторам. Действие тимического препарата - тималина, обладающего позитивным влиянием на лейкопоэз, характеризовался отсутствием иммунотропного эффекта в отношении клеток красной крови. Это ограничивает его применение при тех физиологических и клинических ситуациях, когда функциональная способность эритроидного роста недостаточна.

Между тем, выявленное нами иммунотропное влияние препаратов характеризовало их как иммуномодуляторов широкого спектра, захватывающих коррекцию дефектов гемопоэза в целом. При этом следует подчеркнуть, что наиболее позитивные результаты у телят (четвертая опытная группа) были получены при применении содэхин К-75.

Изучение влияния препаратов на белковый спектр крови показал, что в опытных группах, особенно во второй и в четвертой (применение препарата содэхин К-75) содержание общего белка, альбуминов и белковых фракций было достоверно выше относительно контрольной группы.

Выявленные изменения были также более значительными во всех изучаемых периодах с опытной группой, где в качестве иммуномодулятора применялся тимический препарат тималин. Кроме того, фитопрепарат содэхин, особенно, содэхин К-75, оказывало благоприятное действие на синтез белка и на соотношение его фракций, на формирование естественной резистентности в период роста и развития телят.

Установлена высокая потенцирующая активность препаратов на фагоцитарную функцию нейтрофильных гранулоцитов. В частности, после применения препаратов, увеличивалось количество активно фагоцитирующих клеток, особенно у телят в месячном возрасте. Между тем, в отношении поглотительной и переваривающей функции активных фагоцитов достоверно были получены высокие значения ФЧ и %П в четвертой опытной группе. В других опытных группах прослеживалась сходная динамика изменений показателей фагоцитарной функции гранулоцитов, однако при сравнении с данными четвертой группы %ФАН, ФЧ и %П были сравнительно низкими.

Исследования показали, что возрастание активности процесса фагоцитоза свидетельствуют о повышении естественной резистентности и приспособлении организма к постнатальному периоду жизни. Так как у новорожденных телят первые дни жизни являются критическими, необходимо, в связи с этим, своевременно применять экологически безопасные препараты с целью предупреждения нарушения иммунобиологической реактивности организма.

Изучение интралейкоцитарной системы имеет особое значение для теоретической и клинической ветеринарии в связи с важной ролью этих клеток в осуществлении защитных реакций организма. Препараты не только повышали фагоцитарную активность, но и активизировали их ферментативную и неферментную системы.

Уровень активности ферментных и неферментных систем следует рассматривать как надежный индикатор функционального напряжения системы нейтрофильных лейкоцитов, играющей важную роль в развитии защитно-приспособительных процессов при самых различных заболеваниях.

Из результатов исследований следует, что препараты тималин и со-дэхин оказали иммуномодулирующий эффект, при этом катис - косвенное воздействие на стимуляцию кислородзависимой системы фагоцитоза в большей степени, чем на кислороднезависимую. Применение содэхин К-75 оказал больший иммуномодулирующий эффект.

Изучение уровней активности кислой и щелочной фосфатаз, миело-пероксидазы и уровень лизосомально-катионных белков как одних из важных показателей иммунного статуса организма животных позволяет своевременно проводить иммунопрофилактику фитопрепаратом, полученного из натурального растительного сырья - содэхин, катис и содэхин К-75, действующее начало которых способствует повышению защитных сил организма в критические периоды жизни телят.

Применение экологически безопасных препаратов новорожденным телятам оказывало благоприятное воздействие на гуморальный и клеточный иммунитет. В опытных группах телят после применения препаратов наблюдалось увеличение Т- и B-лимфоцитов, и напротив, снижение NK-лимфоцитов. По полученным данным можно судить о функциональном состоянии клеток В- и Т-систем. Повышение концентрации иммуноглобулинов указывает на увеличение количества Т- и В-лимфоцитов.