Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологические свойства препарата эридин



На правах рукописи

ШУКЛИН ВЛАДИМИР ПЕТРОВИЧ

ФАРМАКО-ТОКСЖОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРЕПАРАТА ЭРИДИН

16.00.04. - Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

Работа выполнена в Всероссийском научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации

Научный руководитель - кандидат ветерианрных наук В.Ф.Ковалев

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Т.Н. РаКОВЗ

хандидат ветеринарных наук В.И.МОргуНОВ

Ведущая организация - Московский государственный университ прикладной биотехнологии.

Защита состоится 1Э97 Г В часов н

заседании диссертационного совета Д 020.65.02 при Всероссийском научно-исследовательском ветерианрном институте патологии, фарм кологии и терапии (394087, г.Воронеж, ул. Ломоносова. 114-6).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке института.

Автореферат разослан " __^^г^^ХС5!^!_____1997

Ученый секретарь диссертационного совета

М. Н. Аргунов

- 1 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Широко распространенные респираторные заболевания молодняка крупного рогатого скота наносят большой экономический ущерб (В.А Андросов, 1S78; Г.П. Бородай, 1981; В.М. Данилевский, 1974,1986; Л. Г. Демидчик, 1986; П. А. Лемехов,1994), который складывается из падежа телят, низкой энергии роста переболевших животных .и затрат, связанных с проведением лечебно-профилактических мероприятий (A.B. Драгомир,1981; Е.Ф. Дымко, 1992; С. П. Качаноза, 1979; Мс Kercher,1978).

В комплексе мероприятий по ликвидации респираторных заболеваний телят бактериальной этиологии большую роль играют антибиотики и сульфаниламиды (А.Д.Третьяков, 1985; И.Н.Гладенко, 1977, В.Ф. Ковалев и др., 1988; И.Е. Мозгов,1971,1979, 1985; П.П. Достоевский. 1986; Д. К. Червяков, 1977; A.L.Aronson, 1980; M.Brum-fitt 1979; G.M. Conzelmam, 1980; J.S. Glasby, 1979; L. Larson, 1980).

Широкое применение антибактериальных препаратов, привело к повсеместному распространению антибиотикоустойчивых микроорганизмов (Е.Ф.Дымко, 1992), В.Е.Завьянцев, 1977; В.Ф.Ковалев, 1993; В.М.Петров, 1978; В.М. Подкопаев,1977; Е. Т. Тришкина, 1975; Л. А. Нечаева, 1981; E.S.Anderson, 1975; W.H.Chang, 1976), вызывающих заболевания легких.

Ванными направлениями современной химиотерапии бактериальных инфекций является предотвращение или замедление развития резистентности микроорганизмов, а также борьба с ухсе сформировавшейся лекарственноустойчивой микрофлорой.

Наиболее успешно эта проблема решается с помощью использования комбинированной антибиотикотерапии и в частности, применения комплексных антибактериальных препаратов (Ковалев 3. Ф. (1988), На-Вашин С.М.(1982),Кузнецова С.М.(1983), Eliopouloz G.M.(1982).

При разработке новых комплексных антибактериальных препаратов, помимо влияния на резистентность, ставится задача повышения терапевтической эффективности путем подбора антимикробных соединений в таком сочетании, которое обладает синергидным или аддитивным действием в отношении многих штаммов микроорганизмов-возбудителей заболеваний. При этом особое внимание должно быть обращено на то, чтобы входящие в состав комплексного препарата ингри-диенты, не усиливали отрицательного влияния на макроорганизм. Антимикробные соединения комплексного препарата не должны взаимо-

действовать друг с другом в разработанной лекарственной форме и сохранять стабильность в период всего срока хранения препарата.

Цель и задачи исследований.

- обосновать состав и разработать лекарственную форму нового комплексного антибактериального препарата на основе эритромицина и диоксидина для лечения респираторных заболеваний телят;

- изучить острую и хроническую токсичность, фармакокинетику ( с определением сроков зыведения остаточных количеств диоксидина и эритромицина из организма животных ) и терапевтическую эффективность нового препарата в опытах на лабораторных и сельскохозяйственных животных;

- изучить мутагенную активность нового препарата

- разработать методику применения и наставление по применению нового комплексного антибактериального препарата в ветеринарки.

Научная новизна.

Теоретически и экспериментально обоснован состав новогс комплексного антибактериального препарата, получившего название эридин, для лечения респираторных заболеваний телят.

Изучена острая и хроническая токсичность эридина, его мутагенная активность, фармакокинетика, определены сроки выведеню остаточных количеств диоксидина и эритромицина из организма животных, а так же изучена терапевтическая эффективность эридин; при бронхопневмонии телят в производственных условиях.

Состав препарата и способ его применения защищены авторски] свидетельством СССР и патентом Российской Федерации.

Практическая ценность работы.

Разработан и изучен новый комплексный антибактериальный пре парат эридин.

Разработаны методы контроля качества эридина.

Разработана схема применения и определены оптимальные доз эридина при лечении респираторных заболеваний телят. ^

Определены сроки возможного убоя животных на мясо после ле чения эридином.

Разработана и утверждена нормативная документация на препг рат эридин (технические условия ка опытную партию, временное нас тавление по применению препарата при респираторных заболевали* телят, постоянные технические условия и наставление по применен! эридина в ветеринарии).

Эридин внедрен з ветеринарную практику. Регистрационный Ii 0.07.32-92 овфп. Промышленный выпуск препарата организован на АО Ветпрепарат".

Публикация.

По теме диссертации опубликованы 3 статьи.

На защиту выносится:

- теоретическое и экспериментальное обоснование состава пре-арата эридин;

- результаты изучения острой и хронической токсичности эри-ина в опытах на лабораторных и сельскохозяйственных животных;

- результаты изучения мутагенной активности эридина;

- исследование фармакокинетики эридина и определение сроков ыведения остаточных количеств диоксидика и эритромицина из орга-изка телят;

- изучение терапевтической эффективности эридина при респи-аторных заболеваниях телят;

- практические предложения по применению эридина в ветерина-

ки.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста и остоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, Зсуждения результатов, рекомендаций, списка литературы, исполь-:ванной в работе, приложений. Работа содержит 39 таблиц, 2 ри-унка. Список литературы включает 384 источника, в том числе 115 ^рубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в течение 1985-1992 гг. во Всероссийском аучно-исследовательском институте контроля, стандартизации и эртификации ветеринарных препаратор, экспериментально-производс-зенной лабораторий "Сигфарм" и хозяйствах Рязанской, Смоленской Московской областей РСФСР и Латвийской ССР.

В опытах использовали 850 беспородных белых мышей массой 5-20 г,270 беспородных белых крыс массой 100-120 г, 150 белых зыс линии "Вистар" массой 100-110 г и 49 телят в возрасте от 1 ) 6 месяцев. Клиническое испытание препарата в производственных зловиях проведено на 476 телятах.

Обоснование состава препарата в опытах In vitro. Определение 1нимальных ингибирующих концентраций эритромицина и диоксидина

(МИК) проводили на мясо-пептонном агаре (МПА) методом серийных разведений с использованием следующих штаммов микроорганизмов: Е. coll 1308 серовар 026, Е.coli 320 серовар 078, Strepococcus pneumoniae штамм N102 серогруппы "С", Staphilococcus aureus штамм N 1. Штаммы получены из коллекции ВГНКИ и были в разное время выделены от павших телят.

Определение влияния диоксидина на формирование устойчивости к эритромицину при последовательных пассажах на МПА, содержащем увеличивающиеся количества антибиотика, проводили со штаммами Staph, aureus N1 и Str.pneumoniae N102. В среду с эритромицином добавляли диоксидин в концентрации, не оказывающей синергидного или аддитивного действия в сочетании с антибиотиком на микроорганизмы. Материалом для каждого последующего пассажа служила культура, давшая рост на среде, содержавшей .наибольшее количество эритромицина. В качестве контроля использовали пассани микроорганизмов на тех же питательных средах с возрастающим количеством эритромицина, но без диоксидина. Увеличение МИК эритромицина в отношении стафилококков и стрептококков в 10-15 раз считали уровнем сформировавшейся резистентности к антибиотику.

Обоснование состава препарата в опытах in vivo. Определение эффективных терапевтических доз эритромицина, диоксидина, а также этих компонентов в различных соотношениях проводили при экспериментальной пневмонии белых мышей, вызванной стрептококком, стафилококком и кишечной палочкой. С этой целью 400 белых мышей массоГ 18-20 г разделили на 20 групп по 20 голов в каждой и заразили животных смертельным дозами каждого возбудителя: 1-5 группы - Е.coli 1308 серовар 026(500 млн.микр.тел/мышь), 6-10 группы - E.col: 320 серовар 078 (250 млн.микр.тел/мышь), 11-15 группы St. aureu: штамм N 1 (300 млн. микр.тел/мышь), 16-20 группы - Str.pneumoniaf штамм N 102 (250 млн.микр.тел /мышь).

Заражение животных проводили смывом суточных агаровых культур возбудителей интраназально под легким эфирным наркозом. Культуры разводили физиологическим раствором. Концентрацию мик робных тел определяли по стандарту мутности.

Лечение мышей начинали при кокковой инфекции через 2 часа, при колибактериальной через 6 часов. Препараты в различных доза вводили 1 раз в сутки через зонд внутрихелудочно в 0,5 мл 1 раствора крахмала.

О терапевтической эффективности испытанных доз препарато

гдили по количеству выживших мышей и числу мыие-дней жизни для икдой группы через 10 суток после инфицирования.

Для определения биодоступности эритромицина и диоксидина из юдложенной лекарственной формы и определения их концентраций в шоротке крови мы провели следующие исследования. Трем телятам 1Ссой 55-55 кг однократно ВЕели препарат (с компонентами 1:1) в >зе 200 мг/кг массы тела. Эта доза была эквивалентна 10 мг/кг ¡итромицика и 10 мг/кг диоксидина. Через 0,5; 1; 3; 6; 9; 12; 18 24 часа после введения у телят из яремной вены брали крозь и юводили определение содержания эритромицина и диоксидина.

Содержание эритромицина в сьшоротке крови определяли микро-[ологическим методом, а диоксидина - газохроматогафическим мето->м, разработанным з ЗПЛ "Сигфарм" с помощью хроматографа "Пвет".

На основании проведенных опытов был приготовлен препарат )идин следующего состава: эритромицин-7,5%, диоксидин-5% и лак-|зы до 100%.

Изучение острой токсичности в опытах на лабораторных жквот-[X. Острую токсичность эридина изучали на 214 беспородных белых плах обоего пола массой 18-20 г, на 70 беспородных белых крысах .ссой 100-120 г. Препарат вводили однократно через зонд в желу-к в 1» растворе крахмала в различных дозах. Наблюдение за кли-:ческим. состоянием подопытных животных проводили в течение 14 ток после введения препарата. Павших.животных подвергали пато-гоанатомическому вскрытию. Опыт на белых мышах провели в двух вторностях осенью и весной.

В процессе опыта учитывали количество погибших животных з висимости от дозы препарата и рассчитывали ЛД50 по методу тчфилда-Уилкоксона для белых мышей и крыс.

Изучение хронической токсичности в опытах на лабораторных вотных. Хроническую токсичность эридина изучали на 250 беспо-дных белых мышах обоего пола с массой 18-20 г и 200 беспородных лых крысах с массой тела 100-110 г. Подопытных животных раздели на 5 групп аналогов по 50 мышей и 40 крыс. Препарат вводили едкевно в течение 20 суток через зонд в 1% растворе крахмала в едующих дозах. Белым мышам I группы - 1/5 ЛД50 (5700 мг/кг), II уппы 1/10 ЛД50 (2850 мг/кг), III группы - 1/20 ЛД50 (1425 /кг), IV группы-ориентировочную терапевтическую дозу (200 /кг), а мышам V (контрольной) группы вводили 0,5 мл 1 % растзо-крахмала. Белым крысам - I группы - 1/5 ЛД50 (5400 мг/кг), II

группы - 1/10 ЛД50 (2700 иг/кг), III группы - 1/20 ДД5о (1350 мг/кг), IV группы- ориентировочную терапевтическую дозу (200 мг/кг). Крысам V (контрольной) группы вводили 3 мл 1% раствора крахмала.

Наблюдение за клиническим состоянием животных вели на протяжении 31 суток от начала опыта. Определение массы тела у животных проводили до начала введения препарата и на 7, 14, 21 и 31 сутки.

На 21 сутки от начала введения эридина на 10 мышах и 10 крысах проводили определение детоксицирующей функции печени с помощью гексеналовой пробы (В.Н.Гадура, 1976).

В этот же срок на других 10 мызах проводили пробу с плаванием (В.Н.Гадура, 1976), а на 10 крысах бромсульфалеиновую пробу с целью оценки экскреторной функции печени (Д. И. Израйлет, 1976). На 21 сутки у 10 крыс из каждой группы определяли относительную массу (коэффициенты) внутренних органов - печени, почек, легких, сердца, селезенки и надпочечников (В.Н.Гацура, 1976).

Изучение мутагенной активности. В связи с наличием противоречивых сведений о наличии у диоксидика мутагенных свойств мь провели собственные исследования. Мутагенную активность изучал? на 160 белых крысах линии Вистар массой 100-110 г по методике Ja-ра. Животных разделили на 8 групп по 20 голов в каждой. Крысам 1 группы вводили эркдин в дозе 1/5 ЛД50 (5400 мг/кг), II группы1/1( ЛД50 (2700 мг/кг). III группы - ориентировочную терапевтическую дозу (200 мг/кг). Препарат вводили внутрижелудочно в 2-3 мл 15 раствора крахмала один раз в сутки в течение 20 дней. Крысам Г (контрольной) группы вводили по 3 мл раствора крахмала. Животным V группы вводили дисксидин в дозе 270 иг/кг (эквивалент содержания диоксидина б дозе эридина, равной 5400 мг/кг), VI группы- диоксидан в дозе 137 мг/кг (эквивалент дозы эридина, равно] 2700 мг/кг), VII группы- диоксидин в дозе 10 мг/кг (эквивален1 терапевтической дозы эридина равной 200 мг/кг). Животным VII (контрольной) группы вводили по 3 мл 1% раствора крахмала. Кры убивали на 20 день.

В приготовленных мазках костного мозга регистрировали числ митозов (для подсчета митотического индекса) и анализировали хро мосомные аберрации на стадии анателофазы.

Изучение острой токсичности в опытах на телятах. Острую ток сичность эридина изучали на 6 клинически здоровых телятах чер но-пестрой породы массой тела 40-45 кг. Препарат вводили в вид

звеси на водопроводной воде в объеме 1 л внутрижелудочно с по-.ощью зонда з различных дозах. Теленку N 1 ввели препарат з дозе ,0000 мг/кг массы тела (100 - кратная ориентировочная терапезти-еская доза), теленку N 2 в дозе 1SG00 мг/кг (80 - кратная ориен-ировочная терапевтическая доза), телятам М 3 и Н 4 по 10000 г/кг (50 - кратная ориентировочная терапевтическая дога). теля-ам N 5 и N 6 по 8000 мг/кг (40 - кратная ориентировочная тера-евтическая доза). За подопытными животными вели ежедневное кли-ическое наблюдение в течение 7 суток. Павших животных подвергали атологоанатомическому вскрытию. На основании полученных резуль-атов рассчитывали ориентировочную ЛД50 по Дейхману и Ле-Бланку.

Изучение хронической токсичности в опытах на телятах. Хрони-ескую токсичность препарата изучали на 20 клинически здоровых елятах черно-пестрой породы массой 48-55 кг, находившихся в оди- ' аковых условиях кормления и содержания. Подопытных животных раз-елили на 4 группы по 5 голов з каждой. Эридин вводили перорально ерез зонд в 200 мл 1 % раствора крахмала один раз в сутки ежед-евно в течение 20 дней в следующих дозах: телятам I группы - 200 г/кг массы тела (ориентировочная терапевтическая доза), II груп-ы - 1/5 ЛД50 (1800 мг/кг), III группы - 1/10 ЛД50 (900 мг/кг). елятам IV (контрольной) группы вводили по 200 мл 1% раствора рахмала.

Наблюдение за клиническим состоянием телят вели в течение 31 уток от начала опыта. До опыта, а также на 11, 21 и 31 сутки осле начала введения эридика проводили клиническое исследование рови (количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, лейкопи-арная формула).

В эти же сроки оценивали функциональное состояние почек по нализу мочи (в которой с помощью диагностических полосок "Окта" ирмы "Хемапол" определяли содержание белка, углеводов, билируби-а, уробилина, кетоновых тел, восстанавливающих веществ, рН), а акже по определению в сыворотке крови количества креатинина и очевины (А.А.Крылов, 1Э81, В.С.Ронин, 1989).

О функциональном состоянии печени судили по изменению актив-ости гепатоспецифических ферментов, являющихся высоксчузстви-ельными индикаторами состояния гепатоцитов. В указанные выше роки у всех телят определяли активность аспартатаминотрансфера-ы, аланинаминотрансферазы, холинэстеразы и щелочной фосфатазы в ыворотке крови (Б.В.Уша, 1979; Н.И.Иванов, 1988).

До опыта, а так же на 21 сутки исследовали экскреторную функцию печении с помощью бромсульфалеиновой пробы и определяли содержание билирубина в сыворотке крови (А.И.Хазанов, 1968).

На 21 сутки также проводили определение общего белка, общих липадов, пировиноградной и молочной кислот в сыворотке крови (Б.Б.Уыа, 1979; В.С.Ронин, 1989; А.А.Крылов, 1981).

Изучение фармакокинетики зридина и определение сроков выведения остаточных количеств эритромицина и диоксидина из организма телят. Фармакокинетику эридина изучали в двух опытах. В первом использовали 5 телят массой 60-65 кг. Эридин вводили однократно перорально в дозе 200 мг/кг массы тела: Через 0,5; 1; 2; 3; 4; 6; 9; 12; 18 и 24 часа после введения препарата у животных из яремной вены брали кровь и в сыворотке крови определяли содержание эритромицина и диоксидина. Второй опыт проводили на 24 телятах массой 60-65 кг. Препарат животным вводили однократно в дозе 200 мг/кг, затем через 1; 3; 6; 9; 12; 18 и 24 после введения препарата животных убивали. Концентрацию эритромицина и диоксидина определяли в скелетной и сердечной мышцах, легких, печени, почках и моче. В каждый срок исследовали образцы органов, тканей и биологических жидкостей от трех телят.

Сроки выведения остаточных количеств эритромицина и диоксидина определяли на 12 телятах массой 65-70 кг, которым в течение 10 суток вводили эридин в дозе 400 мг/кг. Через 48; 72 и 96 ^ после последнего введения препарата убивали по три теленка и определяли содержание эритромицина и диоксидина в скелетной и сердечной мышцах, печени, почках, легких, сыворотке крови и моче.

Содержание эритромицина в биосубстратах определяли микробиологическим методом (В.Ф.Ковалев и др., 1988), а диоксидин - га-зохроматогафическим методом, разработанным в ЭПЛ "Сигфарм" с помощью хроматографа "Цвет". Чувствительность медотов составляла 0,001 мкг/г/мл и 0,01 мкг/г/мл соответственно.

Изучение терапевтической эффективности. Терапевтическую эффективность эридина изучали в хозяйствах Московской, Смоленской i Рязанской областей РСФСР и Латвийской ССР при бронхопневмония] телят. Диагноз заболевания ставили на основании эпизоотически: данных, клинических признаков болезни. В ряде случаев диагно: подтверждал! результатами клинического исследования крови и бактериологическими исследованиями.

Лечебное действие эридина изучали в сравнении с наиболее эф-

активными препаратами аналогичного назначения, применявшимися в :озяйствах. Больных животных делили на группы аналоги по возрасту, массе тела, тяжести заболевания. Подопытные животные находились в одинаковых услсеиях содержания и кормления. Препараты пе-1вд употреблением смешивали с подогретой водой и выпаивали теля-■ам. Эркдин применяли 1- 2 раза з сутки в доза 150, 200 и 250 ¡г/кг, препараты сравнения назначали в соответствии с наставлени-ми по их применению, утвержденными ГУВ Минсельхоза СССР. Кроме .нтибактериальных препаратов применяли патогенетические средства, мезшиеся в хозяйствах. За подопытными животными вели ежедневное линическое наблюдение, регистрируя температуру тела, частоту ульса и дыхания. Периодически проводили аускультацию больных жи-отных.

У 10 больных бронхопневмонией телят в возрасте 2-3 месяца рали смывы содержания трахеи до начала лечения и через 5-7 дней осле начала применения эридина и проводили определение чувстви-ельности выделенной микрофлоры к препарату и его компонентам ме-одом диффузии в агар. Микроорганизмы считали устойчивыми при зое задержки роста менее 13 мм, среднечузствительными при зоне за-ержки роста 13-18мм и высокочувствительными при зонах более 18мм.

При определении терапевтической эффективности эридина и пре-аратов-сравнения учитывали сохранность животных, длительность урса лечения (выздоровевшими считали животных, у которых клини-ескоэ выздоровление наступило к 10 суткам от начала применения репаратов), кратность применения препаратов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Обоснование состава препарата в опытах in vitro. Для штамма .coll 1308 серовара 025 с уровнем резистентности к эритромицину диоксидину более 200 мкг/мл, совместное применение антибиотика диоксидина позволило уменьшить минимальную ингибирующую (МИК) ритромицина до 2-5 мкг/мл (в 50-1С0 раз) , а для диоксидина - до 0-100 мкг/мл (в 2-4 раза).

Аналогичный результат отмечен в опытах с E.coli 320 серовара 78: исходный уровень резистентности которого к диоксидину равен 00 мкг/мл, а к эритромицину - > 200 мкг/мл. МИК эритромицина кеньшилась до 2-5 мкг/мл (в 30-50 раз), а диоксидина до 20-40 кг/мл (в 5-10 раз).

Минимальная ингибирующая концентрация эритромицина в отноше-ии штамма St. aureus, штамм N 1 была равна 0,75 мкг/мл, а для ди-

оксидина - 150 мкг/мл. При совместном применении этих препаратов МКК для эритромицина снизилась до 0,01-0,05 мкг/мл (в 3-20) раз, а для диоксидина до 60-80 мкг/мл (в 2-3) раза.

В отношении штамма Str.pneumoniae штамм 11 102 МИК эритромицина составляла 0,1 мкг/мл, а диоксидина - 240 мкг/мл. Совместное применение антибиотика с диоксидином позволило уменьшить КИК эритромицина до 0,005-0,01 мкг/мл, (в 10-50 раз), а для диоксидина до 60-80 мкг/мл (в 3-4 раза).

Изучение антибактериального действия сочетаний эритромицина и диоксидина позволило установить наличие взаимоусиливащего действия в отношении указанных штаммов стрептококка, стафилококка и эшерихий.

Резистентность St. aureus N 1 и Str. pneumoniae lí 102 через 4-5 пассажей на средах с эритромицином возросла быстро и достигла уровня 10,0 и 1,75 мкг/мл соответственно. При внесение в питательную среду с эритромицином диоксидина через Ю последовательных пассажей чувствительность к антибиотику практически не изменялась и была у St. aureus N1 и Str.pneumoniae N 102 равной 1,5 i 0,2 мкг/мл соответственно. Полученные результаты свидетельствуют что, диоксидин замедляет развитие резистентности к эритромицину j изученных штаммов микроорганизмов.

Обоснование состава препарата в опытах in vivo. При экспериментальной пневмонии белых мышей, вызванной чувствительными i эритромицину культурами Str.pneumoniae штамм N 102 серогруппы "С и St.aureus штамм N1, лечение эритромицином одновременно с диок: сидином обеспечивало сохранность животных в пределах 85-100%, чтi было на 30-40% выше по сравнению с раздельным применением препаратов.

Лечение пневмонии, вызванной эритромицинорезистентными штам мами Е.соП, эритромицином в дозах 1,5-3 мг/мышь способствовал сохранению 0-10% животных, а диоксидином в дозах 1-2 мг/мышь 60-70Х соответственно. В то же время использование комплекс. зритромицин+диоксидин в дозе 1,5+1,0 мг/мышь сохранило жизнь 80 белых мышей, применение комбинации этих препаратов в дозе 3+ мг/мышь обеспечило сохранность 95-100% животных.

Отмечено увеличение суммарной продолжительности жизни мыше на 15-44 дня также в группах, подвергнутых лечению диоксидино совместно с эритромицином.

В опытах in vivo было установлено, что эритромицин при со

местном применении с диоксщшком обладает высокой активностью при экспериментальной пневмонии мышей, вызванной как чувствительными, гак и резистентными к эритромицину штаммами микроорганизмов.

Таким образом, в результате изучения антимикробного действия эритромицина з сочетании с диоксидинсм в опытах In vivo и In vitro нами установлено, что препараты обладают взаикоусилиЕаюшим действием в отношении изученных штаммов микроорганизмов: Str. pneumoniae N 102, Staph, aures штаммы N 1, E.coll 1308-026, E.coli 320-078 и замедляют развитие резистентности к эритромицину.

Результаты изучения биодсступности эритромицина и диоксидина из первоначальнопредлоясенной лекарственной формы представлены в таблице 1.

Таблица 1

Содержание эритромицина и диоксидина в сыворотке крови телят после однократного введения препарата с соотношением эритромицина и диоксидина 1:1 (мкг/мл)

1 1 Сроки исследования I (часы) j i ! Препарат 1 i

эритромицин 1 i диоксидин 1 j

1 Лс введения 0 0 1

1 0,5 0 0,49+ 0,07 1

[ -1 j X 0,17+ 0,08 1,41± 0, 10 1

1 з 0, 75± 0, 12 3, 67+ 0, 11 1

1 6 0,96+ 0,09 2.43+ 0, 08 ¡

1 9 0,72+ 0.05 ■ 1,47+ 0, 08 1

1 12 0,47+ 0.04 0,86+ 0,07 1

1 18 0, 29+ 0,08 0, 39± 0,05 1

1 24 i 0,08+ 0,02 0, 14+ 0, 06 1 i

В результате проведенных исследований было установлено, что после однократного введения препарата диоксидин обнаруживали в сыворотке крови уже через 0,5 часа после введения, максимальная концентрация достигалась к 6 часам. Препарат в концентрации 0,14 мкг/мл обнаруживали через 24 часа.

После однократного введения исследуемого препарата эритромицин обнаруживали в сыворотке крови через 1 час. Максимальная концентрация достигалась к 3 часу. Препарат обнаруживали в крови на

протяжении 24 часов, но терапевтические концентрации сохранялись в крови лишь в течение 12 часов. На основании этих данных была проведена корректировка состава препарата б сторону увеличения (расчетного) содержания эритромицина до соотношения 1,5:1.

Токсичность и кумулятивные свойства эридина. Результаты изучения острой токсичности эридина представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты изучения острой токсичности эридина

1 |Вид ¡животного 1 | Показатель (мг/кг) I 1

I"Максималь-1 ноперено-1 симая" деза 1 лд16 лд50 лд84 'Абсолютно! смертель-| ная"доза |

I Белые 1 мыши 1 I 22000 1 1 25400 '28500 32400 (26360-31900) 36570 |

1 Белые 1 крысы 1 I 18750 1 1 23500 27000 34200 (26460-31860) 50000 |

I Телята | 1 1 8000 ! 9000 - 10000 | 1

По общепринятым понятиям эридин относится к VI классу токсичности (относительно безвредным соединениям), т.к. ЛД50 для белых мышей превышает 15000 мг/'кг массы тела.

При изучении куммулятивных свойств суммарно введенные дозь эридина - 114000 мг/кг для белых мышей и 108000 мг/кг для белых крыс не вызвали гибели животных. Это не позволило рассчитать коэффициент куммуляции по показателю смертельный эффект. Учитывая однако, что полученные дозы составляют примерно 4 ЛД50, (т.е. возможный коэффициент куммуляции превышает 4). эридин следует отнести к веществам со слабо выраженной куммуляцией.

Хроническая токсичность эридина в опытах на лабораторных животных. При изучении хронической токсичности эридина гибели мыше£ и крыс во всех группах на протяжении всего опыта не регистрировали. У мышей I группы, получавших препарат в максимальной дозе, на протяжении всего опыта отмечали наименьший прирост массы тела. Однако через 11 суток после прекращения введения препарата пока-

затели прироста массы приблизились к контрольным. Отмечавшееся на L4 сутки опыта снижение прироста массы тела животных II группы гакже можно интерпритировать как проявление токсического эффекта препарата. В то же время у животных IIî-IV групп на протяжении зсего опыта регистрировали наибольшие увеличения массы тела.

Во все сроки исследования привесы опытных групп белых крыс превышали привесы контрольной, однако у крыс I группы, получавших наибольшую дозу препарата, отмечали наименьший прирост массы тела.

У животных III и IV групп, получавших с-ридин в дозах 1/20 ПД50 и терапевтической, продолжительность медикаментозного сна не отличалась от. контрольной (р>0,05) во все сроки исследования.

Введение белым мышам препарата в дозе 1/10 и 1/5 ЛД50 оказало существенное влияние на антитоксическую функцию печени. На 21 день опыта продолжительность медикаментозного сна была в 2, 05 и 2, 65 раза больше, по сравнению с контролем. На 31 день опыта показатели продолжительности сна мышей опытных групп не отличались достоверно от показателей контрольной группы, т.е. изменения в функции печени были обратимыми.

Введение препарата крысам II, III и IV групп не вызвало выраженного изменения относительной массы внутренних органов (р>0,05). В отличие от этого, у животных I группы, получавших препарат з максимальной дозе (1/5 ЛД50), отмечали достоверное увеличение весовых коэффициентов печени и легких.

У белых крыс I группы регистрировали статистически достоверное повышение задержки бромсульфалеина (р<0,05) с одновременным увеличением среднего времени медикаментозного сна. Эти данные свидетельствуют о нарушении экскреторной и детоксицирующей функции печени. Препарат в дозах 1/10,1/20 ЛД50 и терапевтической не влиял на результаты функциональных проб.

Изучение хронической токсичности эридина в опытах на лабораторных животных показало, что препарат в терапевтической (200 мг/кг) дозе и 1/20 ЛД50 (1350 мг/кг для белых мышей и 1425 мг/кг для белых крыс) при дзадцатидневнсм введении не вызывал Функциональных изменений в организме белых мышей. При применении эридина в дозе 1/5 (5400-5700 мг/кг), и 1/10 ЛД5С (2700-2850 мг/кг) отмечали обратимые изменения в организме белых мышей и белых крыс.

Хроническая токсичность эридина в опытах на телятах. Показатели клинического состояния телят всех групп в течение всего опыта находились в пределах физиологической нормы.

Гематологические исследования, проведенные до начала введения, препарата свидетельствовали об отсутствии достоверных различий в показателях картины крови у опытных и контрольных телят (р>0,05).

Данные некоторых биохимических исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3

Биохимические показатели крови телят после 20-ти дневного введения зридина

1 1 Показатели i -1 Дозы эридина 1

I 1 (терапевт. I 1/5 ЛД50 1/10 лд 50 контроль |

1 1 Глюкоза (ичоль/л) 1 ' 4 7 ±0 г 4 6±0 , 2 4, 9 +0 3 4 8 ±0 з 1

¡Мочевина (ммоль/л) ' 6 .1+0 3 5 9±0. 2 6. 2 ±0 3 6 1+0 2 1

¡Креахинин (мхмоль/л) ¡96 ,4+6 6 94 3±7 . 2 91 , 9 ±8,1 92 6 ±7 7 1

¡Аспартатаминотранс- 1

¡фераза (ед/мл) ¡43 .6+4 6 41 8±г, 9 42, 9 ±4 1 1 4 2 . 7 ±3 3 1

¡Аланинаминотранс- 1

1 фе раза (ед/мл) ¡27 ,1±2 2 26 7±2, 0 28. 0 ±2 5 27 3±2 3 1

¡Общий белок (г/л) ¡65 7±3 3 63 4+4. г 64. 3 ±3 9 1бЗ 3±3 4 1

¡Пировиноградная 1

1 к - т а (мкмоль/л) ¡83 .2+4 3 87 1+6. 7 84. 7 + 5 2 82 .3+5 1 1

¡Молочная (ммоль/л) •l . 2 5±0 03 1 3±0 , 02 1 . 2 ±0, 02 ¡1, 2 6 ±0 02 1

¡Общие липиды (г/л) I 1 3 1 . 7±0 5 3 9—0 3 3. 8 ±0 4 3 7 ±0 3 1 1

В результате опыта установили, что показатели крови телят всех опытных групп во все сроки исследования находились в пределах физиологической нормы и достоверно (р>0,05) не отличались от показателей контрольной группы.

Во всех испытанных дозах эридин не влиял на экскреторнун функцию печени и процент задержки бромсульфалеина (0,5-1,4%) находился в пределах физиологической нормы (2,8-4,9%).

До начала введения препарата, а также через сутки после окончания его введения активность сывороточных аминотрансфераз, г таете содержание билирубина у животных Есех опытных групп находились в пределах физиологической нормы и достоверно не отличалис! от показателей контрольной группы (р>0,05).

Моча животных всех опытных (1,11 и III группы) и контрольно!

"рупп во все периоды исследования соответствовала физиологической юрме: прозрачная, желтого цвета, рН 7,2-8,1, Удельный вес :,016-1,033. Белок, углеводы, билирубин, уробилин, индикан и кетоновые тела не регистрировали.

Отсутствие изменений в моче, нормальный уровень креатинина и мчевины в сыворотке крови свидетельствуют о том, что эридин не жазызал нефротоксического действия во всех испытанных дозах.

В результате - проведенных исследований установлено, что длительное введение эридина телятам в дозах 1/5, 1/10 ЛД50 и тера-тевтической не вызывает функциональных изменений в организме те-чят.

Мутагенная активность эридина. 3 результате проведенных исследований установили, что зридин во зсех испытанных дозах и диок-зидин в дозе 10 мг/кг не обладал мутагенной активностью. Диокси-дан в дозе 135 и 270 мг/кг при двадцатидневном введении оказал лутагенное действие. Наши исследования подтвердили предположения (78) о возможности снижения мутагенной активности диоксидина при 5гс совместном применении с другими препаратами.

Фармакокинетика зшдика и определение сроков выведения эритромицина и диоксидина из организма телят.

С

•1кг/мл !

6 . о

5 . 5

5 . О

4, О 3. О

2 . О

1 . О

Рис.1 Фармакокинетика диоксидина в крови телят

П—I—I—г

12 3 4

1 2

1 8

24 Т(часы)

х

х

X

X

/

9

О

Динамика изменения содержания диоксидина в сыворотке крови телят в течение суток после однократного введения эридика в дозе 200 мг/кг массы тела представлена на рисунке 1.

Динамика изменения содержания эритромицина в сыворотке крови телят после однократного введения эридина е дозе 200 мг/кг представлены на рисунке 2.

с

мкг/мл

1.6

Рис.2 Фармакокинетика эритромицина в крови телят

1 . 4

1 . 2

1 . О

О . 8

О . 6

О . 4

0. 2

!—!-Г

1 2 3

->

О 1 2 3 4 6 а 18 Т(часы)

В результате проведенных исследований было установлено, что после однократного введения эридина диоксидин обнаруживался в сы воротке крови уже через 0,5 часа после введения, максимальна концентрация достигалась к 4 часу. Препарат е концентрации 0,1 мкг/мл обнаруживали через 24 часа. В результате наших опытов был установлено, что после однократного введения эридина эритромици обнаруживался в сыворотке через 1 час после введения. Максималь ная концентрация достигалась между 4 и 6 часом. Препарат обнару живали в крови на протяжении 24 часов.

При изучении сроков выведения компонентов эридина было устг новлено, что через 2 суток после последнего введения эридика ос

точные количества эритромицина обнаруживаются в печени, а диок-дина - в мышцах, легких, печени, сердце, почках и крови. Через суток после окончания применения препарата в печени и почках наруживали следы диоксидина. Через 4 суток во всех исследован-х образцах остаточных количеств эритромицина и диоксидина обнажено не было. Таким образом, срок возможного убоя животных на со после применения эридина должен быть не менее 4 суток.

Терапевтическая эффективность эридина в производственных ловиях. Подбор оптимальной дозы и схемы применения эридина при спираторных заболеваниях телят провели в хозяйствах Рязанской и сковской областей и Латвийской ССР. Диагноз был поставлен на давании эпизоотической обстановки, клинической картины заболе-.ния, результатов микробиологических исследований и патологоана-шческих вскрытий. •

Микробиологическими исследованиями, проведенными на базе ЗПЛ :игфарм" в носовой слизи и ткани легких обнаружена ассоциация 1Ктериальной флоры: стафилококки, стрептококки, диплококки, па-яки. В большинстве случаев культуры бактерий, выделенных из ;гких больных телят обладали гемолитическими и вирулентными юйстзами.

У группы телят помимо клинических проводили гематологические ¡следования до начала и в процессе лечения. Результаты гематоло-¡ческих исследований представлены в таблице 4.

У большинства телят опытных групп уже через сутки после Еве-;НИя эридина отмечалось снижение температуры тела, урежение ды-щия и пульса. Нормализация общего состояния телят сопровождать снижением количества лейкоцитов. Наиболее существенные изме-эния в общем состоянии телят произошли через трое-четверо суток зеле начала применения эридина. Температура тела понизилась до •миологической нормы, дыхание стало реже. Морфологический состав зови в течение 3-5 дней пришел з корму.

Для определения наиболее эффективной схемы применения зриди-з. при респираторных заболеваниях телят провели 5 серий опытов на ■шотных, подобранных по принципу аналогов.

В первой серии эридин назначали внутрь по 150 кг/кг живой юсы 2 раза в сутки, во второй - по 200 мг/кг 2 раза в сутки, в эетьей -по 200 мг/кг 1 раз з сутки, в четвертой по 250 мг/кг 1 аз в сутки, з пятой -по 250 мг/кг 2 раза в сутки. Телятам конт-эльной группы применяли для лечения наиболее эффективные препа-

Влияние эридина в дозе 200 мг/кг на некоторые клинические и гематологические показатели при лечении бронхопневмонии телят

Таблица 4

I I г

По казатели I Единицы I ¡измере-Ь

Сроки исследования

¡ния i до лечения! во время лечения I I I-

i-1-

I через 1 I через 3| через 5 I сутки 1 суток ! суток

j_L

1 Температура с 40,1+0,02 39,0+0,14 38,5+0, 07 38 4+0 03

1 Пульс уд/мин 80, 8+5,2 64, 7+5, 5 56, 3+4, 6 54 2+3, 4

1 Дыхание дых/мин 67,2+3,2 51,2+3,9 48,2+3, 8 42 8+5 3

¡Гемоглобин г/л 88,3+7,3 89,0+6,3 96,7+3, 9 102 3+8. 3

1 Эритроциты 109 /Л 8, 0Z0;38 7,95+0,63 8, 75+0, 72 9, 38+0, 80

1 Лейкоцита 106 /Л 16,9+4,61 14,8+3,91 11,6+2, 96 10 2+3, 38

IЛейкоформула

1 Эозинофилы % 0,8+0,35 0,8+0,06 0,4+0, 02 0 1+0. 01

¡Нейтрофилы от /с

1 Юные 0г /0 6, 0+0, 30 5,5+0, 17 2, 3+0, 08 0 7+0, 02

¡Палочкоядерные % 26, 5+5, 36 20, 8+3, 84 17,3+6, 21 14 6+2, 76

1Сегментоядерные % 18,6+3,47 18.3+3,21 16,8+4, 20 17 2+6, 27

1 Лимфоциты 45, 3+8, 04 52,0+7,27 59,6+8, 39 63 2+9, 37

¡Моноциты % 3, 8+0, 81 2,6+0,12 3,8+0, 22 4 2+0, 31

раты аналогичного назначения в соответствии с наставлениями по их применению (тетраолеан, тримеразин, тетраолеандомицин).

Результаты испытания эффективности эридина в различных дозах при респираторных заболеваниях телят представлены в таблице 5.

Применение эридина при респираторных заболеваниях в дозах 250 и 200 мг/кг массы тела 2 раза в сутки обеспечивало высокую сохранность телят, (соответственно 97,8 и 96,6 %), доза 250 мг/кг

1 раз в сутки оказала более слабое действие (94,8%). Выраженный терапевтический эффект (92,8%) был получен и при лечении телят препаратом в дозе 200 мг/кг 1 раз в сутки, но длительность курса лечения при этом была на 2,0-2,4 дня больше. Разница в зффектив-

сти между дозами 200 мг/кг 2 раза в сутки к 250 мг/кг 2 раза в тки была статистически недостоверна (Р>0.05).

Таблица 5

Терапевтическая эффективность различных доз эридина при респираторных заболеваниях телят

Доза I 1 1 I Кратность 1Количес-1 1 Срок лече-| ■ Пало 1 (Выздо- 1 1 I (Процент )

репа- 1примене- !тво жи- 1 ния одного| голов ровело 1выздоро-1

ата, I нения пре !вотных 1 теленка I ! голов |вевших !

г/кг 1 парата 1(голов) i (суток) [ I 1 животных 1

1(раз/сут) I 1 1 I 1 1 ! 1 1 1 1 1

150 2 34 10,1 5 29 85,3 I

200 2 116 6,9 112 96.6 |

200 1 14 8,9 1 13 92,8 |

250 о 79 6, 5 2 77 97, 5 |

250 1 45 8, 3 1 44 34,8 | 1

Клинические наблюдения за телятами, больными бронхопневмони-показали, что вЕеденке эридина в дозе 200 мг/кг 1-2 раза в тки вызывало значительное улучшение общего состояния больных :вотных. У большинства телят опытных групп уже через сутки после .едения эридина отмечалось снижение температуры тела, урежение ¡хания и пульса. Нормализация общего состояния телят сопровождать улучшением аппетита, животные становились более подвижными. I третий-четвертьй день исчезали хрипы и признаки сердечно-сосу-¡стой недостаточности. Существенные изменения происходили в кро-!. Так, на второй день после начала лечения у 90% животных отме-1лся нейтрофильный лейкоцитоз с умеренным сдвигом ядра влево, 1еньшение количества лимфоцитов. Наиболее существенные изменения общем состоянии телят произошли через трое-четверо суток после ¡чала применения эридина. Температура тела находилась в пределах [зиологической нормы. Морфологический состав крови в течение 3-5 [ей пришел в норму.

Применение эридина и симпсиатических и патогенеических >едств позволило добиться полного выздоровления в 6-8 дневный зок у 90-9555 телят.

- 20 -ВЫВОДЫ

1. Теоретически разработан и экспериментально обоснован новый оригинальный комплексный антибактериальный препарат эридин на основе эритромицина и диоксидина, предназначенный для лечения респираторных заболеваний телят.

2. Компоненты эридина - диоксидин и эритромицин обладают взаимоусиливающим антимикробным действием в отношении микроорганизмов вызывающих неспецифические респираторные заболевания у телят.

3. Эридин относится к классу малотоксичных препаратов. ЛД50 для белых мышей при пероральном введении составляет 28500 мг/кг. При двадцатидневном введении телятам эридина в дозах: терапевтической, 1/20 ЛД50, 1/10 ЛД50 и 1/5 ЛД50 не выявлено функциональных изменений в организме животных.

4. При пероральном введении эридина эритромицин и диоксидин быстро всасываются в кровь и проникают во многие органы и ткани. Максимальные концентрации эритромицина и диоксидина обнаруживаются в легких через 6 часов после введения препарата. Однократное введение телятам эридина в терапевтической дозе (200 мг/кг массы тела ) обеспечивает антибактериальные концентрации эритромицина и диоксидина в сыворотке крови на протяжении 21-24 часов, а в легких не менее 24 часов.

5. Остаточные количества эритромицина и диоксидина полностью выводятся из организма телят через 4 суток после окончания курса лечения эридином.

6. Экспериментально доказано, что препарат стабилен в течение 12 месяцев при хранении при температуре от 5 до 25 С. Прк хранении в течение 18 месяцев отмечено снижение активности эритромицина.

7. В комплексе мероприятий при респираторных заболевания? телят бактериальной этиологии применение эридина совместно с симптоматическими и патогенетическими средствами способствует выздоровлению 85 - 97,5 %'заболевших животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Разработан, изучен и внедрен в ветеринарную практику новь» высокоэффективный комплексный антибактериальный препарат эриди для лечения респираторных заболеваний телят бактериальной этиологии.

Для этого разработана и утверждена в установленном порядке следующая нормативная документация:

1) Технические условия на опытную партию ТУ 64-10-108-87, /твержденные Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 26 дюня 1987 года.

2) Технические условия ТУ 10.07007-93, утвержденные Главным /правлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации 25 января 1993 года.

3) Временное наставление по применению эридина при бронхоп-1езмонии телят, утвержденное Главным управление ветеринарии Го-:агропрока СССР 5 мая 1987 г.

4) Наставление по применению эридина в ветеринарии, утвержденное Главным управлением ветеринарии Минсельхоза РФ 18 января 1993 года. Регистрационный N 10.07.32-92 овфп.

Промышленное производство эридина организовано на АО "Ветп-эепарат".

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Новый препарат для лечения бронхопкезмоний телят. / Тези-;ы докладов Всесоюзной конференции "Разработка и применение анти-Зиотиков немедицинского назначения",- Москва, 9-10 декабря 1987 \ -С. 84.

2. Эридин - новый препарат для лечения бронхопневмоний те-тят. Новые фармакологические средства в ветеринарии. / Тезисы юкладов 1-й Межвузовской научно-практической конференции.- Ле-шнград.: 1989.

3. Патент РФ М 1424170 от 30 июня 1993 г "Препарат для лече-¡ия бронхопневмоний телят - эридин".