Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологическая оценка педифена

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

Р Г Б О Д на яр323* рукописи

2 I АВГ 1555

ОНУФРИЕНКО МАРИАННА ЭРИКОВНА

УДК 615.9:516-003.96:636.5

ФАРМАКО- ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПЕДИФЁНА

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Санкт-Петербург 1995

Работа выполнена в Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, в лаборатории N2 института токсикологии АМН, на птицефабрике "Русско-Высоцкая".

Научные руководители: заслуженный деятель науки

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательский

Защита диссертации состоится " 21 " сентября 1995 г. в " 11 " часов на заседании специализированного Совета Л 120.20.02 при Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (196084, Санкт-Петербург, ул. Черниговская, 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Российской Федерации, доктор Еетеринарных наук, профессор Соколов В.Д.,

доктор медицинских наук, профессор Зацепин Э.П.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

старший научный сотрудник Андросов Н.С,

кандидат ветеринарных наук, доцент Соколова Л.Н.

ветеринарный институт птицеводства

Автореферат

Ученый секретарь специализированного совета, канд.биол.наук, доцент

Узюмова О.В.

ВВЕДЕНИЕ

Развитие птицеводства на индустриальной основе и внедрение промышленной технологии привело к ряду нежелательных, экстремальных воздействий на птицу, оказывающих отрицательное влияние на ее организм, снижающих иммуноактивность, продуктивность и качество продукции (Шитый А.Г., 1981; Соколов В.Д., 1987; Болотников И.А., Конопатов Ю.В., 1993; Ноздрин Г.А., 1995; Hill I.A., 1983; Freeman В.М., 1985; Darbyshire J.H., 1987).

Одно из важных последствий стресса в птицеводстве - это снижение иммунологической реактивности организма птиц (Edens F., 1978; Law G., 1977; Gross W.B., 1983; Jordan F.Т., 1986).

Вследствие угнетения иммунного ответа значительно ослабляет эффективность применения вакцин, увеличивается восприимчивость организма птицы к действию микроорганизмов, вирусов и других агентов (Kelley K.W., 1983).

Среди многообразия факторов, обуславливающих стрессорное повреждение тканей выделяется свободнорадикальное окисление липи-дов. Понижение антиоксидантного статуса приводит к нарушению роста, ослаблению регенераторных и пролиферативных процессов, а также к снижению адаптационных способностей организма (Журавлев А.И., 1975).

Можно выделить несколько основных этиопатогенетических факторов, усиливающих СРО липидов. Это прежде всего различные стрессовые воздействия, к числу которых относятся нарушения параметров микроклимата в животноводческих помещениях, технологические перегруппировки и перевозки, различные ветеринарные и зоотехнические мероприятия, резкая смена типов кормления (Меерсон Ф.З., 1986; Пантюшенко В.Т., 1988; Воскресенский О.Н., 1989).

В настоящее время коррекция стрессов осуществляется путем фармакотерапии с использованием стресспротекторов (нейтролепти-ков, транквилизаторов, седативных средств) и адаптогенов (Ники-тенко И.Н. и соавт., 1988; Пляценко С.И., Сидоров В.Т., 1987; Соколов В.Д., Андреева H.JI., 1990 и др.).

Многочисленные исследования показали, что препараты из перечисленного арсенала достаточно эффективны. Однако, они недостаточно елияют на ведущий механизм развития патологических последствий стресса - перекисное окисление липидов, а накопление данных веществ или их метаболитов в организме жиеотных может отрицатель-

но сказываться на здоровье людей.

Поэтому поиск препаратов, удачно сочетающих в себе стресс-протективные характеристики и антиоксидантные свойства, является актуальным и отвечает запросам современного птицеводства.

За последнее десятилетие накоплен определенный экспериментальный материал, свидетельствующий о том, что антиоксиданты, замедляя перекисное окисление липидов, повышают резистентность животных к стрессу и оказывают иммуностимулирующее действие (Воскресенский О.Н. , 1987; Меерсон Ф.З., 1986, 1988).

В сеязи с вышеизложенным заслуживает внимание педифен, обладающий многоплановым действием, в том числе антиоксидантным (Зацепин Э.П., Чураев H.H., 1987).

Цели и задачи исследований.

Целью настоящей работы явилось изучение возможности использования педифена в качестве антистрессорного и иммуностимулирующего препарата в птицеводстве.

В связи с этим необходимо было решить следующие задачи:

- установить оптимальную ростостимулирующую дозу педифена;

- изучить влияние аэрозолей педифена и этимизола на организм цыплят;

- изучить иммуностимулирующие характеристики педифена в сравнении с зтимизолом;

- определить антистрессовые свойства препарата;

- установить параметры токсичности педифена;

- испытать аэрозоль педифена в условиях производства.

Научная новизна работы.

Впервые в ветеринарии проделан мониторинг педифена.

На основании исследований установлена росто- и иммуностимулирующая активность аэрозолей педифена. Изучена возможность коррекции негативных последствий стресса птиц. Определена токсичность препарата, в том числе и ингаляционная.

Практическое значение работы.

Отработаны дозы, схемы и режим стимуляции роста и факторов неспецифической резистентности организма птиц и установлена возможность коррекции стресса педифеном.

Разработано временное наставление по применению аэрозолей педифена во время вывода цыплят.

Данные по антистрессовым и иммуностимулирующим свойствам педифена могут быть использованы в учебном процессе.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на V и VI межгосударственных, межвузовских конференциях "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Санкт-Петербург, 1993, 1994), на конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов СПВИ (1994).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 статей.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 151 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 28 таблицами и 11 рисунками. Список литературы включает 271 источник, в том числе 100 зарубежных исследований.

Вопросы, выносимые на защиту:

данные по изучению нового фармакологического препарата - пе-дифен и его использование в ветеринарии.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работы выполнена в 1993 - 1995 годах. Лабораторные исследования проводили на кафедре фармакологии и токсикологии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, лаборатории N2 института токсикологии АМН, производственные испытания - на птицефабрике "Русско-Высоцкая" Ленинградской области.

Ростостимулирующую активность различных доз аэрозолей педи-фена изучали в лабораторных условиях кафедры на белых мышах по методике Е.Л.Щедрина и соавт.(1980).

Препарат применяли однократно в дозах 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200 мг/м3 (0,25% раствор).

Одновременно изучали ростостимулирующий эффект педифена при внутримышечном введении в дозах 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 мг/кг. Животным контрольной группы внутримышечно вводили воду для инъекций.

Влияние аэрозоля педифена на общее состояние и показатели гомеостаза цыплят изучали в лабораторных условиях на суточных цыплятах кросса "Бройлер-6". Сформировали 5 групп цыплят по 28 голов в каждой. Животным первой группы ингалировали в аэрозольной камере педифен а дозе 25 мг/м3, 2-й группы - 50 мг/м3, 3-й группы

- 75 мг/м3 (0,25% раствор), 4-й группы - этимизол в дозе 30 мг/м3 (1,5% раствор), 5-й группы - аэрозоль дистиллированной воды. Экспозиция во Есех случаях составляла 20 минут. На 20-й день исследования провели гистологический мониторинг сердца, печени, почек, тимуса и бурсы (Меркулов Г.А., 1969).

В срезах тимуса и бурсы в 25 полях зрения подсчитывали лимфоциты в коре и мозговом слое тимуса и фолликулов фабрициевой сумки на условную единицу площади (окулярной сетки), митозы, определяли пролиферативную активность в % на 100 клеток.

Изучали следующие гематологические показатели цыплят: количество эритроцитов и лейкоцитов, С0Э, содержание гемоглобина по общепринятым методикам.

Общий белок сыворотки крови определяли рефрактометрически, белковые фракции - по Оллу и Маккорду в модификации Карпюка.

Оценку влияния препаратов на факторы естественной резистентности и иммунологический статус организма проводили по следующим показателям.

Активность лизацима в сыворотке крови определяли фотоэлект-роколориметрическим методом по А.Г.Дорофейчуку в модификации ВНИВИП. Активность ß-лизина в сыворотке крови тестировали фотоз-лектроколориметрическим методом по О.В.Бухарину, В.А.Фролову и

A.П.Луда в модификации ВНИВИП. Мониторинг бактерицидной активности сыворотки крови проводили фотоэлектроколориметрическим методом по О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой в модификации ВНИВИП.

Опсоно-фагоцитарную реакцию оценивали по методу В.М.Бермана и Е.М.Славской в модификации ВНИВИП (Колабская Л.С. и савт., 1980) по отношению к грамположительному тест-микробу St.aureus (штамм 112).

Реакцию торможения миграции лейкоцитоа исследовали по методу

B.Х.Хавинсона и соавт. (1980) в модификации А.А.Сухинина.

Количественную оценку содержания лизосомапьно-катионных белков проводили по тесту с последующим расчетом (Колабская Л.С. и соавт., 1980).

Оценку антиоксидантного действия педифена проводили в лабораторных условиях на белых крысах при воздействии транспортного стресса. Сформировали 4 группы крыс по 35 голов в каждой. Транспортный стресс вызывали с помощью шуттелирования, способного воспроизвести модель стресса, наиболее типичного для производственных условий (Горшков Г.И., Антипина М.П., 1980; Яковлева

Е.Г., 1985).

Животных 1, 2 и 3 группы подвергали стрессированию. Крысам второй группы за 1 час до воздействия стресс-фактора ингалировали педифен в дозе 50 мг/м3, 3-й группы - за 1 час до стресса аэро-зольно вводили этимизол (30 мг/м3). Крысы 4-й группы служили контролем. Им ингалировали аэрозоль дистиллированной воды. Через 15 минут, 1, 6, 12, 48 и 72 часа после воздействия стресс-фактора проводили мониторинг антиоксидантных свойств педифена.

Определяли активность каталазы крови по А.Н.Баху и С.Х.Зуб-ковой (Балаховский С.Д., 1956) и содержание витамина Е в сыворотке крови по Биери в модификации (Киселевич Р.Ш., Скварко С.И., 1972).

Для оценки уровня ПОЛ определяли концентрацию малоноЕого ди-альдегида в сыворотке крови в тесте с 2-тиобарбитуровой кислотой (Ishigama М., Mihara М., 1978).

Антистрессовую активность аэрозолей педифена и этимизола изучали в лабораторных условиях на цыплятах кросса "Бройлер-6". Сформировали 4 группы цыплят 10-дневного возраста по 35 голов в каждой. Цыплят 1-3 групп подвергли влиянию транспортного стресса' по описанной выше методике. Птице 2-й группы за 1 час до стресса ингалировали аэрозоли педифена в дозе 50 мг/м3, 3-й группы за 1 час до стресса и через 24 часа поле окончания его действия - этимизол в дозе 30 мг/м3.

В указанные сроки определяли гематологические показатели по описанным выше методикам.

Концентрацию общего холестерина определяли с помощью реактива Илька фотоколориметрическим усовершенствованным методом Харда Бухарда (Кондрахин И.П., 1985).

Определение концентрации глюкозы в крови осуществляли с помощью ортотолуидинового реактива.

Ионы калия и натрия в биологических жидкостях определяли методом прямой потенциометрии (Святковский A.B., 1986) с помощью натрий-чувствительного (ЭЛС-51-07) и калий-чувствительного (ЭМ-К-01) электродов. Измерение потенциала проводили на приборах И-120 и Н рН-340.

Для выявления антиоксидантных свойств определяли концентрацию МДА, витамина Е и активность каталазы по ранее описанным методикам, содержание витамина С в плазме крови проводили в реакции с й-а-дипиридилом (Петрова А.Т., Абрамова Т.К., 1979).

- б -

Токсичность педифена определяли на белых нелинейных мышах, белых крысах и суточных цыплятах. В опытах использовали молодых, но половозрелых мышей массой около 20 г, белых крыс массой около 200 г (самок).

Вычисление ЛД50 проводили методом Кербера (1931) (Беленький М.Л., 1963).

Острую ингаляционную токсичность педифена определяли при воздействии разовой дозы по методике В.Ф.Скворцова (1985) в лабораторных условиях. В опытах использовали белых крыс, самок, массой 125-200 г и суточных цыплят. Подопытные группы состояли из 35 крыс и 25 цыплят. Животных обрабатывали аэрозолями изучаемых препаратов в аэрозольной камере. Испытали дозы 750, 1500 и 2000 мг/м3. Группы контрольных животных подвергали воздействию аэрозолей дистиллированной воды.

Изучение хронической токсичности аэрозолей в соответствии с "Требованиями к документации, представляемой в Ветеринарный Фармакологический Совет для получения разрешения на проведение производственных испытаний новых фармакологических средств, кормовых , добавок и других химических" (1976) на белых крысах и суточных цыплятах. Испытали дозы 250, 500 и 750 мг/м3.

Производственные испытания провели на птицефабрике "Русс-ко-Высоцкая". Препарат применяли в выводных шкафах инкубатора в дозе 50 мг/м3. Цыплят обрабатывали аэрозолями однократно за 1 час до выборки.

Статистическую обработку полученного материала проводили по М.Л.Беленькому (1963), достоверность средних различий оценивали по критерию Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Фармакологические свойства педифена

1.1. Ростостимулируюшие свойства педифена

Внутримышечное введение педифена в дозах 5-50 мг/кг способствовало увеличению массы цыплят на 11-30 но наивысший стимулирующий эффект наблюдался при применении препарата в диапазоне доз 20-30 мг/кг.

Аэрозольное применение препарата способствовало увеличению

массы мышей на 18-22 Z в дозах 25, 50, 75 мг/м3. Педифен в дозах 50, 100, 150, 200 мг/м3 не оказывал существенного влияния на массу животных, которая превышала показатели контрольной группы только на 1-5 %.

Ростостимулирующий эффект аэрозолей педифена для птиц наблюдался при применении препарата во всех исследованных дозах: 25, 50 и 75 мг/м3 (0,25% раствор), но максимальный прирост отмечался при обработке цыплят аэрозолями в дозе 50 мг/м3. Прирост живой массы птицы был на 37% выше, чем у контрольных животных. Педифен в дозах 25 и 75 мг/м3 увеличивал данный показатель на 9 и 13% соответственно.

Применение этимизола оказывало ростостимулирующий эффект, который начинал проявляться с 20-го дня (12%).

1.2. Влияние аэрозолей педифена и этимизола на гематологические показатели

Этимизол не влиял на количество эритроцитов. Аэрозоли педифена повышали содержание эритроцитов в течение первых 15 суток, но данное увеличение не было статистически достоверным.

Количество лейкоцитов не изменялось под влиянием изученных препаратов.

Концентрация гемоглобина под воздействием аэрозолей педифена в дозе 50 мг/м3 была повышенной в течение двух недель. Этимизол не оказывал существенного влияния на концентрацию гемоглобина.

СОЭ оставалась без изменений у цыплят всех групп на протяжении всего опыта.

1.3. Влияние на показатели белкового обмена

Уровень общего белка был повышенным первые 15 дней у животных во всех подопытных группах, за исключением цыплят, обработанных этимизолом. У них увеличение содержания общего белка наблюдали лишь на 15 день. Данное изменение регистрировалось, как результат перераспределения белковых фракций. При этом наблюдалось относительное повышение содержания альбуминов и г-глобулинов и понижение ß- и «-глобулинов, что сопровождалось отклонением аль-бумино-глобулиноЕого отношения в сторону увеличения.

Применение аэрозолей педифена и этимизола не вызывало изме-

- 8 -

нений в лейкоцитарной формуле крови цыплят.

1.4. Влияние аэрозолей педифена и этимизола на факторы естественной резистентности. Иммуностимулирующие свойства препаратов

Педифен в дозе 50 мг/м3 и этимизол оказывали влияние на ли-зацимную активность сыворотки крови: она была достоверно выше в течение 15 дней при обработке цыплят педифеном и с 10 по 15 сутки при ингаляционном введении этимизола.

Активность ß-лизина была достоверно Еыше под влиянием этимизола на 15-й день эксперимента.

Бактерицидная активность сыворотки крови изменялась аналогично активности лизоцима.

Учитывая, что наибольшую активность в отношении показателей естественной резистентности и биохимических изменений вызывала доза 50 мг/м3, в дальнейших исследованиях мы использовали только данную дозировку препарата.

Под влиянием педифена установили значительное повышение содержания ЛКБ всего периода наблюдения, в то время, как этимизол вызывал увеличение данного показателя только на 10 сутки.

Результаты наших исследований указывают на усиление фагоцитарной активности лейкоцитов под влиянием педифена на 15-20 день и под воздействием этимизола на 10-15 сутки исследования. При этом фагоцитарный индекс и интенсивность фагоцитоза не изменялись по сравнению с контролем.

Данные препараты вызывали повышение индекса лейкоцитов на 15-20 сутки исследования.

Выполнили иммуноморфологические тесты на 20 день после применения педифена и этимизола (таблицы 1 и 2).

Полученные данные указывают на активацию центральных органов иммуногенеза: с преимущественным влиянием педифена на тимус и этимизола - на сумку Фабрициуса у птиц.

Таблица 1

Количество лимфоцитов на условную единицу площади тимуса и бурсы птиц под влиянием педифена и этимизола на 20 день после применения (М ± т)

Группа

Корковое вещество

Мозговое вещество

Тимус

I - педифен 50 мг/м3 1,733 ± 0,098*

П - зтимизол 30 мг/м3 1,045 ± 0,080*

Ш - контрольная 1,136 ± 0,018

Фабрициевая сумка

I - педифен 50 мг/м3 2,29 ± 0,007*

П - зтимизол 30 мг/м3 3,47 ± 0,027*

Ш - контрольная

2,92 ± 0,009

1,221 ± 0,047* 0,933 ± 0,013* 0,773 ± 0,004

3,02 ± 0,015* 3,01 ± 0,019* 2,90 ± 0,013

* - Р < 0,05 рассчитана по сравнению с контролем

Таблица 2

Митомический индекс в тимусе и бурсе на 20 день после применения аэрозолей педифена и этимизола (М ± т)

Группа Корковое вещество Мозговое вещество

Тимус

I - педифен 50 мг/м3 4,93 ± 0,13* 3,0Ь ± 0,07*

П - зтимизол 30 мг/м3 3,32 ± 0,16* £,£>¿4 0,06

Ш - контрольная 2,82 ± 0,04 2,07 ± 0,04

Фабрициевая сумка

I - педифен 50 мг/м3 2,07 ± 0,09* 2,00 ± 0,03*

П - зтимизол 30 мг/м3 2,43 ± 0,06* 2,39 ± 0,09*

Ш - контрольная 1,94 ± 0,03 2,14 ± 0,06

* - Р < 0,05 рассчитана по сравнению с контролем

1.5. Антистрессовые свойства педифена и этимизола

1.5.1. Антиоксидантные свойства педифена и этимизола

В первой группе крыс, стрессированных в течение 2-х часов без предварительной обработки антистрессовым препаратом, наблюдалась активация ПОЛ по увеличению МДА. Далее интенсивность накопления возрастала и своего максимума достигла к 24 часам. После этого наступил период стабилизации концентрации МДА (с 24 до 48 часов), но к 72 часам после стресса наблюдалось резкое увеличение конечного продукта ПОЛ.

Изменения концентрации данного показателя в группах, аэрозоль но обработанных педифеном и этимизолом за 1 час до действия стресс-фактора, носило также фазный характер. Оно имело аналогичную тенденцию к увеличению в первые сутки. Однако, через 48 часов накопление МДА было уже незначительным, а к концу 3-х суток наблюдалась нормализация процессов ПОЛ по МДА. Более выраженной она была при применении педифена, чем этимизола.

Стресс угнетал активность каталазы на протяжении всего периода исследований, причем на 2 сутки наметилось некоторое повышение каталазного индекса, что можно рассматривать, как стадию ре-зидентности стресс-реакции.

Применение этимизола нивелировало данные сдвиги, но тем не менее через 1 час после воздействия транспортного стресса наблюдалось статистическое достоверное понижение активности каталазы.

Аэрозольное введение педифена полностью сглаживало негативное влияние стресса на каталазный индекс, что определило высокий уровень антиоксидантной защиты.

Концентрация витамина Е в сыворотке крови была сильно пониженной через 1-12 часов после воздействия транспортного стресс-фактора.

Педифен и этимизол уменьшали уровень токоферола до показателей контрольных животных.

Кроме выше указанного, оба примененных препарата способствовали снижению отрицательного воздействия стресса на прирост массы птиц.

1.5.2. Антистрессовая активность педифена и этимизола в опытах на цыплятах

Под влиянием чрезвычайного раздражителя у цыплят первой группы, не получавших антистрессовые препараты, отмечались незначительные колебания концентрации МДА. Установлено, что через 1 час после стрессирования уровень данного вещества увеличился в 1,7 раза, к концу 1-х суток - 2,3 раза. На второй день произошла относительная стабилизация МДА, но уже на 3 и 7 сутки данный показатель снова был на высоком уровне, что указывает на активные процессы ПОЛ и усиление накопления вторичных продуктов, таких как МДА.

Под влиянием транспортного стресса у цыплят 2-й группы (получивших педифен) также регистрировалось увеличение содержания малонового диальдегида с максимальным его повышением в первые сутки в 1,2 раза и с последующим постепенным восстановлением к концу 2-х суток.

В 3-й группе цыплят, обработанных этимизолом, наблюдалась сходная динамика МДА, но стадийность процесса была более выраженной, а восстановление концентрации МДА происходило на 3-й сутки.

Полученные данные свидетельствуют об угнетении активности каталазы в 1-й группе. Применение педифена и этимизола практически предупреждало уменьшение активности данного антиокислительного фермента. Характер изменений в динамике аскорбиновой кислоты свидетельствовал о деструктивном влиянии стресс-фактора и нормализующем воздействии педифена и этимизола.

Влияние стресса на содержание витамина Е в сыворотке крови выражалось в уменьшении его концентрации на 1-3 сутки и даже по окончании опыта на 7 день мы не регистрировали нормализации его содержания. Педифен вызывал позъмэние витамина Е в сыворотке крови цыплят на 1-е сутки. Этимизол, напротив, уменьшал содержание токоферона в 1-й день, но данное изменение не было статистически достоверным. В дальнейшем уровень его соответствовал таковому в контрольной группе. Расхождение во влиянии этих двух препаратов на уровень витамина Е в сыворотке можно объяснить тем, что ответ на стресс-реакцию - многофакторный, а данные препараты воздействуют на различные элементы антиокислительной системы.

Метаболические сдвиги, отмечаемые при транспортном стрессе отвечают общебиологическим представлениям, по которым эффект повышения уровня глюкозы направлен на компенсацию быстро расходуе-

л rt

~ Ii. ~

мой энергии.

При обработке цыплят педифеном и этимизолом уменьшалась ги-пергликемическая реакция. Незначительное увеличение содержания глюкозы наблюдалось только на 1 день, а восстановление до контрольных показателей имело место на 3 сутки.

Характер динамики изменения содержания холестерина в сыворотке свидетельствует о нормализующем.влиянии педифена и этимизо-ла при транспортном стрессе.

Так как содержание общего белка является одним из основных косвенных показателей стрессового состояния (Никитенко И.М. и со-авт., 1988), то в своих опытах мы решили проследить динамику его изменений.

Транспортный стресс понижал уровень общего белка на 1 и 2 день исследования. Введение этимизола сглаживало негативное влияние стресс-фактора.

Под воздействием педифена значение данного показателя увеличилось на 21,7% и сохранялось на достаточно высоком уровне до конца опыта. Эти данные позволяют считать, что педифен также обладает и анаболическими свойствами. Стресс и примененные препараты не вызывали статистически достоверные изменения количества эритроцитов. Содержание лейкоцитов повышалось на 25% при стрессе, но к окончанию 7 дня наблюдалась нормализация данного показателя.

Педифен и этимизол сходно влияли на количество лейкоцитов в крови при стрессе, сглаживая его негативное воздействие и вызывая стабилизацию их содержания на 2-й день опыта.

Исследование лейкоцитарной формулы при транспортном стрессе показало типичные изменения количества форменных элементов крови, которые нивелировались введением педифена и этимизола.

Таким образом, применение педифена значительно сглаживает течение стресс-реакции и способствует более эффективной и быстрой адаптации организма к экстремальным воздействиям, чем этимизол. Одним из тестов, характеризующих стрессовое состояние организма, является концентрация ионов калия и натрия.

У животных 1-й группы, подвергнутых стрессу, наблюдалось резкое увеличение ионов натрия на 2-е сутки, которое оставалось повышенным к концу эксперимента (таблица 3).

Применение педифена и этимизола нивелировало данное отклонение, но тем не менее на 2 день исследования концентрация ионов натрия была повышенной.

Таблица 3

Бремя Группа

пииле

обработки •1 п £ 3 4

т р а н с п о р т н ы й +■ педифен 50 мг/м3 стресс + этимизол 30 мг/м3 контроль

Концентрация ионов натрия, ммоль/л

1 час 164,00+2,04 163,57±1,08 164,00+2,24 163,67+2,08

1 сутки 163,29+2,47 162,71+2,91 162,14+1,64 163,50±1,69

л (с. сутки 184,71+1,37* 175,57±1,94* 180,86±1,76* 162,93+1,90

3 сутки 180,57+1,48* 169,71±1,53 175,86±'1,б9* 162,33+1,91

7 сутки 177,10±2,00 160,71+1,49 161,43+1,73 161,83+1,87

Концентрация ионов калия, ммоль/л

1 час 6,20+0,43 6,91±0,49 6,31±0,37 6,29+0,40

1 сутки 3,63+0,52* 6,29±0,61 6,21+0,35 5,71+0,40

с. сутки 4,63+0,63* 6,10+0,45 6,13±0,50 5,77+0,48

3 сутки 3,83+0,43* 5,77±0,37 5,73+0,29 5,79+0,62

п ! сутки 4,83+0,30 6,19+0,54 6,41+0,67 6,24+0,64

* - Р < 0,05 рассчитана по сравнению с контролем

Содержание ионов калия при стрессе имело тенденцию к понижению, достигнув своего минимума на 3 сутки. Концентрация их так и не возросла до контрольных показателей к 7-му дню.

Применение педифена повышало содержание ионов калия, что свидетельствует о коррекции стрессового состояния.

Использование этимизола не оказывает столь сильного влияния на изучаемый показатель, хотя и сглаживало отрицательные проявления в изменении концентрации ионов калия.

Педифен оказывает более активное действие, что возможно объясняется его мембраностабилизирующими свойствами: данный препарат способствует не только перераспределению электролитов, а также создает дополнительные преграды для прохождения последних через мембраны, что и предупреждает "вымывание" ионов калия из клеток в межклеточное пространство. Можно предположить, что цыплята расходовали меньше калия на механизмы компенсации клеточного гомеосос-

тава. Данное указывает на лучшую стрессоустойчивость птицы (Ли-зоркин A.B., 1991).

Кроме вышеуказанного, и педифен, и этимизол способствовали снижению отрицательного влияния транспортного стресса на прирост массы птиц.

Таким образом, применение педифена значительно нивелирует течение стресс-реакции и способствует более эффективной и быстрой адаптации организма к экстремальным воздействиям, чем этимизол.

2. Изучение токсичности этимизола

В первой серии опытов по определению токсичности педифена определили острую токсичность препарата на лабораторных животных и птице. Ее параметры приведены в таблице 4.

Таблица 4

Параметры токсичности педифена

Вид животного Путь введения ЛД50

Белые мыши в нутрибрюшинный 120 мг/кг

Белые мыши пероральный 1548 мг/кг

Белые мыши внутримышечный 980 мг/кг

Белые мыши подкожный 870 мг/кг

Белые крысы внутрибрюшинный 156 мг/кг

Белые крысы пероральный 1710 мг/кг

Белые крысы подкожный 896 мг/кг

Цыплята внутрибрюшинный 195 мг/кг

Цыплята пероральный 1800 мг/кг

Цыплята внутримышечный 1430 мг/кг

Цыплята подкожный 970 мг/кг

На основании вышеприведенных данных таблицы можно сделать вывод о том, что прапарат относится к малотоксичным соединениям. Наиболее чувствительны к введению - белые крысы, наименее - цыплята.

Острую токсичность аэрозолей педифена изучали на белых крысах. На основании комплекса проведенных исследований дозу 2000 мг/м3 педифена можно рассматривать, как пороговую (1лтас - 2000

мг/м3), Еызьтаюшую устойчивое уменьшение содержания эритроцитов, общего белка и факторной естественной резистентности, а также повышение СОЭ и содержания лейкоцитов. Под влиянием этой дозы снижалась живая масса, а также регистрировались патологоанатомичес-кие и патогистологические изменения.

Дозу 1500 мг/м3 можно считать подпороговой, так как она вызывает непостоянные изменения показателей крови и не приводит к нарушению структуры органов и тканей животного.

Хроническую токсичность аэрозолей педифена изучали на белых крысах после 10-кратного ингаляционного введения препарата в дозах 250, 500 и 750 мг/м3. При 10-кратном воздействии препарата в дозе 500 мг/м3 наблюдали у крыс изменения гематологических, биохимических показателей и уровня естественной резистентности, но у животных не регистрировали деструкции органов и тканей.

Ингаляционное введение педифена в дозе 750 мг/м3 приводило не только к достоверным функциональным, но и структурным отклонениям в органах крыс, таким, как повышение двуядерности клеток печени и ее жировой жировой дистрофии, эмфиземотозным участкам в легких.

Данное позволяет классифицировать исследованную дозу 750 мг/м3, как порог хронического действия (1Лтсь - 750 мг/м3).

Острую токсичность аэрозоля педифена изучали на цыплятах.

Рассмотрев комплекс патологоанатомических, гистологических, гематологических и биохимических изменений и показателей естественной резистентности, установили, что доза 2000 мг/м3 является пороговой для однократного воздействия аэрозолей педифена (¡Лтас-2000 мг/м3), а доза 1500 мг/м3 является подпороговой.

Хроническую ингаляционную токсичность педифена изучали на цыплятах после 10-кратной обработки аэрозолями в дозах 250, 500 и 750 мг/м3. При 10-кратном воздействии доза педифена 750 мг/м3 вызывала у цыплят изменения гематологических, биохимических, гистологических показателей и уровня естественной резистентности, позволяющие данную дозу определить, как порог хронического действия (Ышсь - 750 мг/м3).

В результате проведенных опытов установили, что токсические дозы аэрозоля педифена превосходят терапевтические в 15-40 раз, то есть терапевтическая широта препарата достаточная, и его можно рекомендовать для применения в птицеводстве.

- 16 -

3. Производственные испытания педифена

В условиях производства на "Русско-Высоцкой" птицефабрике провели опытно-промышленную проверку влияния аэрозоля педифена на цыплят.

Препарат ингалировали цыплятам в выводном инкубаторе однократно в дозе 50 мг/м3 за 1 час до выборки. Экспозиция составляла 20 минут, концентрация препарата 0,25%.

Педифен применяли с целью стимулирования общего обмена веществ в организме цыплят, повышения их естественной резистентности и темпов роста.

Ингалирование препарата в инкубатории способствовало снижению гибели цыплят в возрасте 2-15 дней, особенно от респираторных заболеваний. Сохранность поголовья бройлеров увеличилась на 5,9 -8,6%, среднесуточный привес - на 2,7-3,7 г, средняя масса 1 головы при убое - на 97-163 г, выход тушек 1 категории - на 5,5-6,5% выше по сравнению с показателями контрольной группы.

ВЫВОДЫ

1. Педифен обладает гаммой позитивных фармакологических свойств при внутримышечном и ингаляционном применении лабораторным животным и цыплятам, которое проявляется ростостимулирующим, иммуностимулирующим и антистрессорным действием.

2. Отработана оптимальная ингаляционная доза педифена для цыплят (50 мг/м3, экспозиция 20 мин.), при которой на 37% повышается прирост живой массы и активизируются органы иммуногенеза и факторы естественной резистентности организма.

3. После стрессирования белых крыс и цыплят в шуттель-аппа-рате у животных происходит резкое нарушение гомеостаза. При этом наряду с увеличением в крови глюкозы, ионов калия, лейкопении и других показателей, характеризующих последствия стресса, усиливаются процессы ПОЛ, и понижается уровень антиоксидантной защиты.

4. Педифен и этимизол (первый более выраженно) достоверно нивелируют процессы, возникающие в организме животных и птиц после стрессирования, нормализуя их в течение 24-48 часов.

5. Педифен относится к малотоксичным препаратам. ЬОбо для белых крыс и цыплят при внутримышечном введении составляет соответственно 980 и 1430 мг/кг. При ингаляционном применении 1ЛтаС

для белых крыс находится в пределах 2б$С)мг/м3 и для цыплят - 2000 мг/м3.

6. Применение педифена в дозе 50 мг/м3 во время вывода значительно повышает защитные силы организма цыплят, что проявляется снижением отхода на 5-8% и увеличением среднесуточного прироста живой массы на 2,7-3,7 г.

7. Полученные результаты указывают на перспективность использования педифена й ветеринарии в качестве иимунокорректора, антистрессового и стимулирующего средства.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для более полного выявления степени влияния чрезвычайных факторов на организм животных рекомендуется дополнительно проводить определение уровня перекисного окисления липидов и антиокси-дантной защиты, а также содержания ионов натрия и калия в сыворотке крови.

2. С целью повышения сохранности и привесов бройлеров предлагается применение аэрозолей педифена в выводном инкубаторе за 1 час до выборки цыплят в дозе 50 мг/м3 при экспозиции 20 минут.

3. Разработано Временное наставление по применению аэрозолей педифена в инкубатории для повышения защитных сил организма цыплят (утверждено Ленветогделом и представлено в Департамент ветеринарии Российской Федерации).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

1. Онуфриенко М.Э. К вопросу о коррекции иммунодефицитов и стрессов // Тез. докл. к 5-й межгосударственной межвузовской научно-практической конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии". - СПб., - 1993 - С.60.

2. Зацепин Э.П., Онуфриенко М.Э. Острая токсичность препарата П // Тез. докл. к 6-й межгосударственной межвузовской научно-практической конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии". - СПб., - 1994 - С.52.

3. Онуфриенко М.Э. Динамика накопления МДА при стрессе и ее коррекция // Там же. С.121-122.

4. Онуфриенко М.Э. Хроническая токсичность аэрозолей препарата П для крыс // Там же. - С.56-56.

- 1о -

5. Онуфриенко М.Э. Влияние препарата П и этимизола на иок состав крови птиц // Материалы научной конференции профессс ко-преподавательского состава, научных сотрудников и аспиран СПВИ "Актуальные проблемы ветеринарии". - СПб., - 1994. С.32-3

6. Онуфриенко М.Э. Стимулирующее влияние препарата П на ганизм цыплят // Там же. С.33-34.

7. Онуфриенко М.Э. Антистрессовое действие препарата П Сб. науч. трудов СПГАВМ. - 1995. - С.62-64.