Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологическая оценка и эффективность цидисепт-геля при лечении случайных ран у мелких домашних животных

На правах рукописи

□03053327

МАКЕЕВ Николай Григорьевич

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЦИДИСЕПТ-ГЕЛЯ ПРИ ЛЕЧЕНИИ СЛУЧАЙНЫХ РАН У МЕЛКИХ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией 16.00.05 - ветеринарная хирургия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж-2007

003053327

Работа выполнена в отделах биотехнологии и физико-химических исследований ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии и на кафедре хирургии ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К.Д. Глинки»

Научные руководители: доктор ветеринарных наук, профессор Шабунин Сергей Викторович

Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Черванев Василий Александрович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Аргунов Муаед Нурдинович кандидат ветеринарных наук Емельянова Татьяна Михайловна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО Московская академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина

Защита состоится « 1 » марта 2007 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 006.004.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-6)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ

Автореферат разослан <$$( » 200г.

Ученый секретарь (/ ,

диссертационного совета X] ----" Ермакова Т.Н.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Среди большого количества различных способов лечения ран до сих пор продолжается поиск оптимальных методов стимуляции заживления обширных ран, ожогов, трофических язв (Г.В. Афиногенов, 1987; П.Г. Брюсов, 1996; B.C. В.И. Булынин, с соавт., 1998; М.Е. Lait, 1998).

В настоящее время в гуманитарной медицине 35-40% больных хирургического профиля составляют пациенты с гнойно-воспалительными заболеваниями, а в ветеринарии частота нагноения ран составляет более 70% (М.В. Плахо-тин, 1992; В.К. Гостищев, 1996; A.B. Лебедев, 2000; Э.И. Веремей, 2001; А.П. Плотников, 2002; C.G. Mayhall, 1993). Отмечается тенденция к повышению частоты гнойно-воспалительных процессов, осложняющих лечение послеоперационного периода у хирургических больных (Г.Н. Берченко, 1995; В.Д. Бадиков с соавт., 1997; И.В. Домосканова, 2000; A.C. Кашин с соавт., 2001). Хирургические болезни мелких домашних животных составляют большие неудобства и материальные затраты их владельцам. В период болезни животным требуется индивидуальный уход и содержание.

Снижение эффективности химиотерапии, наблюдаемое в различных областях инфекционной патологии человека и животных, объясняется, прежде всего, селекцией лекарственно-устойчивых, полирезистентных форм возбудителей, обусловленное более чем полувековым применением антибиотиков (Г.И. Истомина с соавт., 1990; A.A. Адарченко с соавт., 1991; А.П. Красильников с соавт., 1992; М.Т. Е.П. Безуглая с соавт., 1995).

Поиск новых, эффективных средств борьбы с раневой инфекцией, ускоряющих заживление ран, является одним из решений проблемы хирургической инфекции. Актуальным является поиск новых фармакологических субстанций, обладающих антимикробными свойствами широкого спектра действия против микроорганизмов с минимальными побочными эффектами.

Относительно новым и перспективным направлением в разработке современных препаратов для профилактики и лечения хирургической инфекции являются препараты неантибиотической природы, как, например: соли четвертичных аммониевых соединений, гуанидиновой кислоты и др. (В.И. Стручков с соавт., 1991; М.И. Кузин, 1990; М.М Астраханова, 1997; С.Ф. Антонов, 1999; К.В. Алексеев с соавт., 2000; D.R. Harris, 1994).

Несмотря на достигнутые успехи в разработке и изучении новых препаратов для лечения случайных ран у мелких домашних животных (левомеколь, ле-восин и др.), повышенный спрос и небольшой выбор мазей на водорастворимой основе требуют решения проблемы дальнейшего расширения их ассортимента.

Одним из перспективных препаратов в этом направлении является препараты на основе п-нитро-сс-хлоркоричного альдегида (циминаля). Он активен в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, способствует эпителизации и заживлению ран. В медицине его применяют наружно для лечения пиодермии, трофических язв, осложненных инфекций ожогов, ран и т п.

Все вышеизложенное и определило общую направленность работы, выбор методических подходов и экспериментальных моделей.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось разработка и изучение фармако-токсикологических свойств нового накожного антисептика цидисепт-гель, а также исследование особенностей течения раневого процесса при лечении им случайных ран у мелких домашних животных.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать состав и лекарственную форму нового накожного антисептика цидисепт-гель.

2. Изучить антибактериальные свойства цидисепт-геля в отношении основных возбудителей раневых инфекций.

3. Изучить фармако-токсикологические свойства цидисепт-геля.

4. Изучить клинико-морфологические показатели течения раневого процесса при лечении случайных ран у мелких домашних животных цидисепт-гелем.

5. Изучить терапевтическую эффективность цидисепт-геля при лечении случайных ран у мелких домашних животных;

6. Разработать технические условия и инструкцию по применению цидисепт-геля при лечении случайных ран у мелких домашних животных.

Научная новизна. Впервые разработан, теоретически и экспериментально обоснован состав нового накожного антисептика цидисепт-гель. Изучены его фармако-токсикологические свойства, дана клинико-.морфологи-ческая характеристика экспериментальных ран у собак при лечении цидисепт-

гелем, определена его эффективность при терапии случайных ран у мелких домашних животных.

Практическая значимость и внедрение. Полученные результаты послужили основанием для разработки нового накожного антисептика, технологии его производства, контроля качества и инструкции по применению для лечения случайных ран у мелких домашних животных, которые вошли в разработанную и утвержденную нормативно-техническая документация на препарат цидисепт-гель (ТУУ 24.4-3129351-030:2005 согласованными с Государственным Департаментом ветеринарной медицины аграрной политики Украины от 07.05.2005 г.; СТО 10590965-0004-2006 и инструкции, утверждённой заместителем руководителя Россельхознадзора РФ за №ПВР-2-1.6/01688 от 11.12. 2006 г.

Апробация работы. Основные результаты исследований были представлены на заседании методической комиссии ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» протокол № 1 от 25.01.2006 года; международной научно-практической конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных» (Воронеж, 2004); международном координационном совещании «Новые биотропные препараты и косметологические средства для лечения и ухода непродуктивных домашних животных» (Харьков, 2004); заседаниях научно-технического совета научно-производственного предприятия «Агрофарм» 2003-2005 г.г.; международной научно-производственной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Авророва A.A. «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных» (Воронеж, 2006).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи в материалах конференций, 1 информлисток, 1 статья в журнале «Ветеринария».

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты разработки стандартизации и контроля нового накожного антисептика цидисепт-гель;

- фармакологическая активность и низкая токсичность нового накожного антисептика цидисепт-гель;

- клинико-морфологические особенности течения раневого процесса при лечении цидисепт-гелем;

- терапевтическая эффективность цидисепт-геля при лечении случайных ран у мелких домашних животных.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и приложения. Список использованной литературы содержит 309 источника, из них 231 отечественных и 78 иностранных. Иллюстративный материал включает 18 рисунков и 39 таблиц.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал и методы исследований

Работа выполнена в 2003-2006 годах в отделах биотехнологии и физико-химических исследований ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии и на кафедре хирургии ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К.Д. Глинки» и в Правобережной участковой ветлечебнице города Воронежа.

При проведении опытов на лабораторных и домашних животных соблюдались требования к врачебно-биологическому эксперименту (И.Т. Фролов, 1965) по постановке контроля, подбору аналогов, одинаковому кормлению и содержанию животных в период исследований.

Объем проведенных исследований представлен в таблице 1.

Антимикробную активность цидисепт-геля изучали in vitro методом серийных разведений (В.И. Антонов, 1986) в отношении референтных и полевых штаммов микроорганизмов — основных потенциальных возбудителей раневых гнойных процессов. Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) определяли в мясопептонном бульоне, минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) путем высева из пробирок с МПБ на плотные питательные среды. Содержание микробных клеток в 1 мл среды составляло 200 тыс. Определение оптимального содержания циминаля в цидисепт-геле было проведено в клиническом опыте на трех группах собак со случайными ранами. Результат учитывали по терапевтической эффективности.

Изучение острой токсичности цидисепт-геля проводили общепринятыми методами (М.П. Беленький, 1963; О.Н. Елизарова, 1971; И.В. Саноцкий, 1970). Хроническую токсичность цидисепт-геля изучали на беспородных белых крысах обоего пола массой 100-1 Юг. при длительном накожном применении. Препарат наносили ежедневно один раз в день в течение 21 суток. Наблюдение за клиническим состоянием животных вели на протяжении 31 суток от начала опыта.

Таблица 1

Схема и краткая характеристика опытов

Количество

Цель, задачи и объем исследования Животных, штаммов, Исследований

опытов

Изучение антимикробной активности 10 -

Изучение оптимального содержания ДВ в цидисепт-геле 15 15

Изучение резорбции циминаля из изучаемой лекартс-венной формы 2

Изучение стабильности цидисепт-геля 3 -

Определение острой токсичности цидисепт-геля белые мыши 60 60

белые крысы 60 60

Определение хронической токсичности цидисепт-геля: крысы 40 40

Гематологические исследования 66 620

Биохимические исследования 52 616

Изучение общего действия цидисепт-геля на организм

мелких домашних животных' собаки 8 64

кошки 8 64

Раздражающее действие цидисепт-геля: кролики 14 14

Местно-раздражающее действие цидисепт-геля. кролики 12 12

Изучение аллергенных свойств препарата: крысы 16 16

Изучение ранозаживляющего действия препарата. Модель кожной раны: крысы Модель ожоговой раны: крысы 60 16 60 16

Клинико-морфологическая характеристика эксперимен-

тальных ран у собак при лечении цидисепт-гелем 30 30

Цитологические исследования 30 270

Морфологические исследования 30 30

Клинические исследования 386 526

Терапевтическая эффективность применения цидисепт-

геля при случайных ранах у мелких домашних животных 80 80

Определение массы тела животных проводили до начала нанесения препарата на 7, 14 и 21 сутки. На 21 сутки от начала применения цидисепт-геля у 10 крыс из каждой группы определяли относительную массу (коэффициенты) внутренних органов - печени, почек, легких, сердца, селезенки, надпочечников, тимуса и семенников (В.М. Гацура, 1974).

Общее действие цидисепт-геля на организм мелких домашних животных (собаки и кошки) при его длительном накожном применении, оценивали по клиническому состоянию. Цидисепт-гель равномерно наносили на участки кожи животных с плотностью нанесения препарата 0,1 г/см2, в течение 14 дней. Наблюдение вели в течение 21 дня от начала опыта.

Раздражающее действие цидисепт-геля на кожу изучали в опытах на кродиках, которым наносили препарат в чистом виде. Площадь нанесения составляла 5% от общей поверхности тела животных. Реакцию кожи на воздействие препарата оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения. Учитывали функциональные нарушения кожи, характеризующиеся появлением различной степени выраженности эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменением температуры.

В экспериментах степень эритемы учитывалась визуально и оценивалась в баллах. Величина отека определялась путем измерения толщины кожной складки и также оценивалась в баллах.

Для изучения влияния цидисепт-геля на конъюнктиву глаз кролика были проведены опыты на животных породы белый великан. Клиническое состояние животных (температуру тела, частоту пульса, количество дыхательных движений), а также изменение кровенаполнения конъюнктивы, наличие выделений, состояние роговицы и век, оценивали через 0,5; 1; 2; 3; 4; 5 и 6 часов после инсталляции препарата.

Аллергенность цидисепт-геля определяли с помощью кожно-провока-ционной пробы (O.J1. Алексеева, JI.A. Дуева, 1978) при накожной аппликации, реакцию кожи учитывали по шкале оценки проб (C.B. Суворов, 1974)

Репаративные свойства цидисепт-геля изучены на моделях кожных ран и ожогов (П.Н.Толстых, 1976). В качестве препарата сравнения использовали мазь эритромициновую.

За течением репаративного процесса в ранах и дачи объективной оценки эффективности проводимого лечения использовали цитологический анализ мазков-отпечатков (М.П. Покровская, М.С. Макаров, 1942). Исследования проводили на 3, 5,7,9 и 11 сутки после начала лечения.

При цитологическом изучении мазков-отпечатков использовали 5-бальную полуколичественную шкалу и подсчет клеточных элементов с последующим построением цитограмм. Для морфологического изучения использовали общепринятые методы (Г.А. Меркулов, 1969; А.И. Кононский, 1976).

- 8 -

Нанесение ожоговой травмы, взятие биологического материала от экспериментальных животных проводили в соответствии с существующими требованиями проведения экспериментов на животных.

Общее действие препарата при его наружном применении на белых крыс и мелких домашних животных (собаки и кошки) оценивали по клиническому состоянию, морфологическим, биохимическим и иммунологическим показателям крови. С целью характеристики общего состояния животных при проведении модельных опытов общепринятыми методами, описанными в соответствующих руководствах (В.Г. Предгеченский, 1964; И.П. Кондрахин с соавт., 1983; И.М. Карпуть, 1986) определяли в крови количество эритроцитов, гемоглобина, СОЭ, лейкоцитов, тромбоцитов, общий белок - рефрактометрически, фракции белка - по Оллу и Маккорду (С.А. Карпюк, 1962) или электрофорезом в агарозном геле. В сыворотке крови определяли концентрацию общих липи-дов, холестерина, мочевины, глюкозы, креатинина, активность аспартат и ала-нинаминотрасферазы (АсАТ и АлАТ), щелочной фосфатазы - наборами фирмы «Лахема», билирубин - набором фирмы «КОНЕ» (Финляндия). Содержание (мкМ/л) малонового диальдегида (МДА) - по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили, 1977; B.C. Бузлама с соавт., 1997).

Статистическая обработка полученных данных проведена методами математической статистики, принятыми в биологии и медицине (Г.ФЛакин, 1973; Е.В. Гублер, 1978), а также с использованием прикладных программ «Statistica 5.0» и «Microsoft Excel» на PC «Pentium III».

2.2. Разработка лекарственной формы препарата на основе циминаля

2.2.1. Сравнительная оценка антимикробной активности циминаля

Изучение сравнительной антимикробной активности циминаля проведено в параллельных опытах с левомицетином, эритромицином, стрептоцидом и тетрациклином в отношении протея, золотистого стафилококка и кишечной палочки.

Установлено, что наименьшая чувствительность данного штамма Proteus vulgaris (п) к стрептоциду (МБсК 250 мкг/мл). При этом стрептоцид был менее активен циминаля в 16 раз, эритромицин и тетрациклин - в 8 раз, а левомице-тин - в 2 раза (табл. 2).

Таблица 2

Бактериостатическое действие препаратов на тест-культурах

Препарат МБсК мкг/мл

Proteus vulgaris St. aureus 209 P E. coli 1257

Циминаль 15,6 7,8 7,80

Стрептоцид 250,0 62,5 125,0

Левомицетин 31,2 3,9 15,6

Эритромицин 125,0 62,5 125,0

Тетрациклин 125,0 31,2 31,2

Исследования показали, что циминаль превосходил по бактериостатиче-ской активности в отношении культуры золотистого стафилококка тетрациклин в 4 раза, эритромицин и стрептоцид - в 8 раз. Однако левомицетин в данном случае проявил в 2 раза большее бактериостатическое действие по сравнению с циминалем. Наименьшая чувствительность данного штамма Е. coli была к стрептоциду и эритромицину (МБсК = 125 мкг/мл). При этом циминаль был в 16 раз активнее стрептоцида и эритромицина, в 4 раза - тетрациклина и в 2 раза - левомицетина.

2.2.2. Изучение резорбции циминаля из цидисепт-геля

При изучении резорбции циминаля из цидисепт-геля установлено, что высвобождение циминаля из карбополовой основы, состоящей из этилового спирта, глицерина, полиэтиленоксида 400, 1,2-пропиленгликоля и воды происходит за 3 часа на 100%. При

этом из основы на вазелине за то-Рис.1. Высвобождение циминаля из основы, %

(по оси абсцисс время диализа в минутах) Же время ТОЛЬКО на 61,1 % (рис.1).

2.2.3. Изучение оптимального содержания ДВ в цидисепт-геле

На основании изучения сроков и характера течения раневого процесса в группах животных, которых лечили 0,3% цидисепт-гелем установлено, что наиболее оптимальным содержанием циминаля в цидисепт-геле является его концентрация 0,3% (табл.3). При этом отёчность и гиперемия исчезали на 4-й,

100 80 «о

40 20

15 30 45 60 90 120 150 180 210 240 270 —А-Карбоиол —о—Виелик

образование грануляций - на 7-й дни, а на 14-й день рана полностью эпители-зировалась.

Таблица 3

Эффективность применения цидисепт-геля с различным содержанием циминаля при лечении гнойных ран у собак

Показатели Содержание циминаля, %

0,1 0,3 0,5

Исчезновение признаков воспаления, дн. Образование грануляций, дней Эпителизация раны, дней 7,3±1,11 8,6±1,08 14,9±5,5 4,4±0,42 6,9±0,63 13,1±2,7 4,7±0,26 7,2±0,18 13,9±3,8

Степень заживления Вторичное натяжение Вторичное натяжение Вторичное натяжение

Переносимость препарата хорошая хорошая Незначительное раздражение по краям раны

2.2.4. Изучение стабильности цидисепт-геля

Стабильность цидисепт-геля изучалась на трёх опытных партиях препарата при его хранении при температуре от +5 до +20°С через 3,6,9 и 12 месяцев после изготовления. Установлено, что все количественные и качественные показатели отвечали требованиям ТУ. При этом консистенция всех образцов была однородная, сметанообразная со специфическим запахом. Массовая доля циминаля в хранившихся образцах осталась без изменения и составила 0,28 - 0,32%.

2.3. Фармако-токсикология цидисепт-геля 2.3.1. Острая токсичность Установлено, что впервые 2 часа после введения в желудок цидисепт-геля в дозах 25,0, 30,0 г/кг массы тела у белых мышей и крыс наблюдались вялость, учащенное дыхание, заторможенность, которые в последующем исчезали. При применении препарата в более низких дозах не отмечено изменений в поведении и клиническом состоянии мышей и крыс. Гибели мышей и крыс не наблюдалось в течение всего периода наблюдения.

Патоморфологическое изучение по окончании эксперимента не выявило нарушений в структурной организации внутренних- органов. ЬО50 препарата определить не удалось, так как при введении внутрь цидисепт-геля в максимально возможных объемах (0,6 мл - белым мышам и 6,0 мл - белым крысам) в дозе 30,0 мл/кг массы тела не отмечалось гибели животных или развития

клинических признаков интоксикации. Цидисепт-гель по степени воздействия на организм согласно ГОСТ 12.1.007 отнесен к малоопасным веществам (IV класс опасности).

2.3.2. Хроническая токсичность Многократное (в течение 21 дня) накожное применение цидисепт-гель на поверхность выстриженного участка по 0,5 г на площадь 5 см2, не вызывало существенных изменений в клиническом состоянии животных. При изучении хронической токсичности в опытной и контрольной группах на протяжении всего опыта гибели белых крыс не регистрировали. Не выявлено существенных различий в потреблении воды и пищи. Препарат не вызывал изменений в поведенческих реакциях, реакции на внешние раздражители, а также нарушений в двигательной активности животных. Относительная масса внутренних органов крыс, которым применяли препарат, существенно не отличались от контроля. Цидисепт-гель не оказывает влияние на гематологические и основные биохимические показатели крови при длительном применении.

2.3.3. Общее действие цидисепт-геля на организм мелких домашних

животных

Накожное нанесение Цидисепт-геля на поверхность выстриженного участка кожи собак и кошек один раз в сутки по 0,9 г на площадь 9 см2 в течение 14 и 21 дня не вызывало изменений в общем состоянии и поведении собак и кошек, животные были не агрессивны и имели хороший аппетит. Кожные покровы опытных животных не отличались от исходного уровня. Частота дыхания и температура тела при применении цидисепт-геля практически не отличалась как от фоновых показателей, так и от показателей животных контрольной группы.

Цидисепт-гель при длительном применении на кожу собак хорошо переносится животными, не вызывает раздражения кожи на месте нанесения препарата, изменений общего состояния, не влияет на биохимические показатели крови животных (табл. 4).

2.3.4. Раздражающее действие цидисепт-геля Установлено, что при однократной аппликации (плотность нанесения препарата от 0,02 г/см2 до 0,1 г/см2) на кожные покровы цидисепт-гель не вызывает повреждения кожи в виде эритемы или её отёков. Препарат вызывает

слабое раздражение конъюнктивы спустя 2-3 часа после закапывания, которое проходит уже к 4 часу.

Таблица 4

Влияние многократного применения цидисепт-геля на некоторые биохимические показатели крови собак

Гелевая основа, Цидисепт-гель,

Показатели Фон че рез че эез

14 дней 21 день 14 дней 21 день

Общий белок, г/л 68,5±3,9 68,1±2,17 69,8± 1,39 67,5±2,19 68,3±2,27

Альбумины, % 32,5±2,17 32,2±1,69 31,8±1,03 32,1±1,57 33,1±2,63

Мочевина, мМ/л 5,2±1,09 4,7±0,17. 4,6±2,08 4,4±1,42 4,5±0,88

Глюкоза, мМ/л 4,6±0,57 4,5±0,22 4,4±0,76 4,4±0,57 4,4±0,18

Холестерин, мМ/л 4,2±0,29 3,8±0,11 3,6±0,32 3,6±0,42 3,4±0,13

АсАТ, Ед/л 34,7± 1,29 32,6±6,13 31,8±2,21 33,6±4,27 29,8±2,37

АлАТ, Ед/л 49,6±4,32 44,2±3,03 43,9±2,12 44,4± 1,93 41,3±4,18

ЩФ, мккат/л 99,5±6,74 95,0±3,54 98,2±2,74 91,6±9,13 91,3±Ю,1

Креатинин, мкМ/л 101,2±10,9 98,0±8,77 90,6±5,17 87,0±3,54 89,9±7,12

Билирубин, мкМ/л 10,9±0,82 11,2±0,61 8,3±0,62 9,3±0,14 8,8±0,61

2.3.5. Местно-раздражающее действие цидисепт-геля при многократном применении Установлено, что длительное накожное нанесение цидисепт-геля и геле-вой основы не приводит к изменению поведения, аппетита, температуры тела животных. Происходит лишь незначительное увеличении толщины кожной складки в пределах 1,5-2,5% по отношению к контролю и к исходному состоянию к 30-му дню наблюдения (рис.2). Выстриженные и выбритые участки в период наблюдений у животных опытной группы зарастали шерстью, которая не отличалась по густоте от шерсти животных контрольной группы.

2.3.6. Аллергенные свойства цидисепт-геля Изучение аллергенных свойств цидисепт-геля проводили при накожном применении. Животным опытной группы на выстриженные участки кожи боковой поверхности, ближе к середине туловища, наносили по 0,5 мл цидисепт-геля на площадь 5 см (плотность нанесения препарата составляла 0,1 мл /см2).

Геле пая ocho sa Цнднсепт-гел»

95

10

15 20 25 30

Цидисепт-гель наносили на протяжении трех недель по 6 раз в неделю. Первое тестирование путем нанесения цидисепт-геля в дозе в 5 раз превышающую сенсибилизирующую проводили после 10 аппликаций, затем - через 14 и 20 су-_ „ „ . ток от начала аппликации. Реакцию

Рис.2. Толщина кожной складки у кроликов при действии цидисепт-геля (в % к контролю) кожи учитывали по шкале оценки

проб, предложенной С.В. Суворовым (1974). Животным контрольной группы применяли только разрешающие дозы. Установлено, что 20- кратная аппликация препарата не вызывает явлений сенсибилизации.

2.3.7. Антимикробная активность цидисепт-геля Опыты по изучению антимикробной активности цидисепт-геля проведены на 7 тест-культурах основных возбудителей раневых инфекций. Проведённые исследования показали, что цидисепт-гель наиболее активен в отношении Escherichia coli (1257), Bacillus subtilis и Salmonella cholerae suis. МБцК в отношении данных микроорганизмов составила 15,6 - 31,25 мкг/мл (табл. 5).

Таблица 5

Антимикробная активность цидисепт-геля

Культура микроорганизмов МБцК мкг/мл

500 250 125 62,5 31,25 15,6 7,8 3,9

Staphilococcus aureus 209 Р - - - - + + + +

Staphilococcus aureus (п) - - - - ± + + -t-

Proteus vulgaris (n) - - - - + + + +

Escherichia coli 1257 - - - - - — + +

Bacillus subtilis - - — - + + +

Pseudomonas aeruginosae - - - ■ + + + +

Salmonella cholerae suis - - - - - + + +

Минимальная бактерицидная концентрация цидисепт-геля в отношении Staphilococcus aureus и Proteus vulgaris составила 62,5 мкг/мл.Наиболее устойчивой к действию цидисепт-геля оказалась Pseudomonas aeruginosa. МБцК в отношении данного микроорганизма составила 125,0 мкг/мл.

2.3.8. Изучение ранозаживляющего действия цидисепт-геля 2.3.8.1. Модель кожной раны На модели кожной раны у контрольных крыс только на 12-е сутки после начала эксперимента начинается образование грануляционной ткани, которая постепенно заполняла раневой дефект. На 20-е сутки наблюдалось плоскостная эпителизация, окончательное заживление происходило в результате рубцевания раны на 26-30е сутки (табл. 6).

Таблица 6

Заживление ран у крыс при применении цидисепт-геля

Условия Время наблюдения, сут. Срок заживления, сут. (эпителизация) Индекс ускорения по сравнению с контролем, %

лечения 7 12 17 20 25

Нелеченная рана 26,2+6,1 47,3±5,3 59,3±4,7 68,3±6,2 92,4±5,3 25,Ш,2 -

Цидисепт-гель 79,3+4,7 97,4±6,2 100,0 - - 14,3±0,7 49,7+1,4

Гелевая основа 34,3±6,7 68,3±5,7 78,5±4,8 97,1+5,3 100,0 19,3±1,4 26,1+0,7

Заживление раны у крыс под действием цидисепт-геля наступало к 17 дню (100% заживление), а под действием гелевой основы - только к 20-му дню (100 эффект). У нелеченых крыс процесс заживления раны наблюдался к 30-му дню.

2.3.8.2. Модель ожоговой раны По данным планиметрического исследования, заживление раны у крыс, не получавших препарат, протекает в три периода: 1-й, относительно медленный, заканчивающийся к 10 дню, характеризуется уменьшением площади раны примерно на 73,7 мм2; 2-й, более быстрый, длится до 14-25 дней, когда по сравнению с 10 днем площадь раны уменьшается в 3,9 раза; 3-й продолжается до 30-го дня и является более медленным, чем второй: площадь раны уменьшается в 2,7 раза по сравнению с 25 днем. Особенностью струпа в контрольной группе является его неравномерная толщина. При травмировании струп легко «сползает» с раны, из трещин часто выделяется сукровичная жидкость.

При термическом ожоге у крыс, леченных цидисепт-гелем, на 5-й день края раны покрывались эпителием, становились неподвижными, плотно спаянными с дном. При лечении препаратом различия в скорости заживления ран

» К0Ш1»ТТЬ - Чк* - ЦВДШеПТ-геЯЬ

начинали проявляться на 5-с сутки. 11 »тог период средняя скорость заживления ран в опытной группе была выше, чем в контроле в 1,1 раза.

При применении цидиеепт-геля различия между контрольными и опытными животными становятся статистически достоверными через 9 дней мосле нанесения ожога и начала применения (рис.3).

Наиболее явно противоожоговое действие препарата проявляется на 5 -6-е сутки поет ожогового периода. К этому времени площадь

ожоговой раны у крыс, которым

1'ис.З. Динамика заживления ожоговых ран у

, /л вводили ц и ли септ-гель, была мень-

крыс при лечении цидисеп/п-гелем

те, чем у контрольных крыс, на 10,0% {Р<0,05). К 20-му дню отмечалась самая высокая скорость заживления ожогов.

При сравнении средней площади ран в этот период установлено, что в опытной группе, по сравнению с 10-м днем от начала опыта, площадь рапы уменьшилась на 69,0%, в то время как в контрольной - на 30,4%. Течение раневого процесса в контрольной группе характеризовалось удлинением сроков заживления и усилением воспалительной реакции, выраженных в большей степени, чем при применении цилисспт-геля. У отдельных животных из опытной группы наблюдали полное заживление ожогов и образование нежного рубца уже на 20-25-е сугки.

С целью, оценки терапевтического эффекта цидисепт-геля, было изучено влияние препарата на интенсивность процессов перекисного окислсиия линидов у крыс в опыте, после нанесения ожоговой травмы (рис,4) . Так, если на 3-й сутки после нанесения ожога уровень МДА и

Рнс.4. Влияние цидисепт-геля па уровень контрольной группе возрос на 67% МДА у ф!с(3-и сутки после нанесенияожега по сравнению с интактными живот-

мкМ/л

5 -|

4

3 -2 -

□ китакткые

□ контроль

£3 цндксеш''Гель

("5- 1 V:/

т

ными, то у крыс, которым применяли цидисепт-гель - уровень МДА повысился только на 39,4%.

Таким образом, в условиях ожогового поражения применение цидисепт-геля препятствует избыточному накоплению в организме продуктов перокси-дации липидов, нормализует реакцию со стороны системы антиоксидантной защиты в организме в ответ на ожоговую травму.

2.4. Клинико-морфологическая характеристика экспериментальных ран у собак при лечении цидисепт-гелем 2.4.1. Клинические признаки течения раневого процесса и результаты планиметрических исследований экспериментальных ран у собак при лечении цидисепт-гелем.

Установлено, что при лечении экспериментальных ран у собак цидисепт-гелем определялась положительная динамика раневого процесса. Купирование гиперемии кожи при лечении цидисепт-гелем происходило в 1,3 раза быстрее, чем в базовой группе и в 2 раза быстрее, чем в контрольной группе. В тоже время купирование отека происходило при лечении цидисепт-гелем в среднем на 3,15±0,28, эритромициновой мазью - на 4,74±0,68, а в контроле -на 6,43±1,17 сутки (табл. 7).

Таблица 7

Клинические признаки раневого процесса у беспородных собак при лечении

гнойных ран цидисепт-гелем

Показатели Контроль Цидисепт-гель Эритромициновая мазь

Купирование отека, дн. 6,43±1,17 3,15±0,28* 4,74±0,68

Купирование гиперемии кожи, дн. 5,29±0,76 2,65±0,16* 3,19±0,52*

Некролиз, дн. 6,21±0,58 2,05±0,22 4,27±0,71

Фибринолиз, дн. 8,36±2,11 4,30±0,93 6,85±0,35

Уменьшение отделяемого до скудного, дн. 13,2±3,65 7,02±1,14 10,5±3,24

Появление грануляций, дн. 5,48±0,32 2,24±0,38* 3,69±0,32*

Заполнение грануляциями всей раны, дн. 15,2±2,77 9,20±0,89 13,7±4,13

Начало краевой эпитализации, дн. 8,76±1,03 4,62±0,30* 6,44±0,78

Полная эпитализация ран, дн 23,7±4,51 11,0±1,37* 17,3±3,59*

* - Р<0,05-0,001 по сравнению с контролем

Некролиз у опытных собак наступил на 2,05±0,22 сутки, что более чем в два раза быстрее, чем у собак, леченных эритромициновой мазью и в три раза -

по сравнению с контролем. Полный фибринолиз наступал на 4,3±0,93 сутки, что в 1,6 раза быстрее, чем в базовой группе и почти в два раза, чем в контроле.

Переход раневого процесса с первой фазы во вторую фазу заживления наблюдался в опытной группе на третий день, а в базовой и контрольных группах на пятый- седьмой день. Во вторую фазу течения раневого процесса во всех ранах происходило дальнейшее уменьшение воспалительной реакции и развитие регенеративных процессов. Так, при лечении цидисепт-гелем отмечалось уменьшение отделяемого экссудата до скудного количества на 7,02±1,14 сутки, тогда как в контрольной группе этот показатель был выше в 1,9 раза, а при лечении эритромициновой мазью - в 1,5 раза. Заполнение грануляциями всей раны при лечении цидисепт-гелем наблюдалось к 9-м суткам. К этому времени площадь ран уменьшилась на 80,8%. У животных, которым применяли эритромициновую мазь, площадь ран уменьшилась на 28,6%, у собак контрольной группы - на 23,1%. Полное заживление с качественной эпите-лизацией в опытной группе отмечено к 11 суткам, в базовой группе - на 18, а в контроле - на 24 сутки.

2.4.2. Результаты гематологических и цитологических исследований

Установлено, что в течение первых трёх суток после хирургического вмешательства в крови животных наблюдалось снижение уровня эритроцитов на 19,19% и гемоглобина на 20,73 % соответственно.

К 9-му дню после травмы отмечалась нормализация показателей красной крови. На 11-й день у животных, которых лечили цидисепт-гелем, количество эритроцитов было больше, чем у животных контрольной и базовой групп. Количество лейкоцитов в течение первых трёх суток увеличилось на 23,97%. Лейкоцитоз наблюдался до 9-го дня. После хирургического вмешательства имел место нейтрофилёз, сопровождающийся увеличением на 21,7% количества гра-нулоцитов вплоть до юных форм на третьи сутки после развития раневой инфекции. Одновременно уменьшился на 4,06% уровень сегментоядерных ней-трофилов и лимфоцитов с одновременным увеличением на 23,5% числа моноцитов. Все показатели белой крови к 9-му дню нормализовались. При цитологическом изучении течения раневого процесса при лечении цидисепт-гелем через 3 суток установлено снижение числа нейтрофильных лейкоцитов, главным образом за счёт снижения их дегенеративных форм, а также уменьшение бактериальной флоры и увеличение макрофагов и фибробластов (табл. 8).

Таблица 8

Содержание клеточных элементов (%) в мазках с раневой поверхности собак

Через 3 суток Через 5 суток Через 7 суток

Показатели Контроль Цидисепт-гель Мазь эритроми- Контроль Цидисепт-гель Мазь эритроми- Контроль Цидисепт-гель Мазь эритроми-

циновая циновая циновая

Нейтрофилы 87,6±11,7 73,2±12,6 82,3±9,5 70,1±4,2 53,4±2,7* 74,2±4,1 69,3±3,2 36,1±2,7* 61,4±1,3

Макрофаги 2,1±0,61 7,4±0,39 2,6±0,24 6,4±1,14 10,6±1,32* 7,2±3,19 6,9±1,11 7,2±1,3 6,3±1,39

Лимфоциты 1,1±0,39 4,3±0,67 1,7±0,31 4,2±0,76 6,21±1,13 5,07±0,91 3,6±0,62 5,23±1,12 3,5±0,76

Фибробласты (±) ++ (±) 1,1±0,82 12,3±3,17* 2,8±1,03 7,3±3,0 29,7±3,63* 10,2±2,15

Эозинофилы (±) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-)

Тучные клетки (-) (-) (-) (-) н (-) (-) (-) (-)

Эпителий (-) (+) (±) (+) (++) (+) (+) (+++) (++)

Эритроциты (+++) (-) (++) (+++) (++) (+++) (++) (±) (+)

Бактериальная флора (кокки) (+++) (++) (++) (++) (±) (++) (+) « (±>

* - Р< 0,05-0,001 по сравнению с животными, которых лечили эритромициновой мазью

На 5-е сутки количество фибробластов при лечении цидисепт-гелем увеличилось до 12,3%, а животных, которых лечили эритромициновой мазью, и контрольной группе соответственно до 2,8% и 1,1%.

На 7-е сутки от начала лечения животных цидисепт-гелем, количество нейтрофильных лейкоцитов в мазках-отпечатках уменьшилось до 36,1%, а количество фибробластов увеличилось в 2,5 раза, что составило 29,7%, наблюдалась выраженная пролиферация плоского эпителия.

При лечении эритромициновой мазью общее количество нейтрофильных лейкоцитов снизилось на 20,9%, количество фибробластов возросло до 10,2%, а также отмечено усиление пролиферации клеток плоского эпителия. В контроле общее количество нейтрофильных лейкоцитов составило - 69,3%, фибробластов до 7,3%. регенераторные процессы очень слабые. Тенденция заживления ран сохранилась и при исследовании мазков отпечатков на 9-11 сутки. Цидисепт-гель стимулирует неспецифический иммунный ответ при раневом процессе, увеличивая миграцию макрофагов и фибробластов в очаг воспаления.

2.4.3. Результаты гистологических исследований При гистологическом исследовании в образцах кожи собак, которым для лечения ран применяли цидисепт - гель, в результате пролиферации и развития моноцитарных, макрофагальных, эпителиоидных, гигантских, лимфоцитарных и плазмоцитарных клеток происходило формирование грануляционной ткани.

В то же время в образцах кожи собак, которым для лечения ран применяли эритромициновую мазь, встречались отдельные очаги пролиферации, а образцах ткани контрольных животных наблюдались лишь отдельные группы пролиферирующих клеток. На 7-е сутки в образцах опытной группы выявилась сформированная грануляционная ткань, а также частичное восстановление эпидермального слоя. В образцах кожи базовой группы животных отмечена активация формирования грануляционной ткани, в контрольных образцах выявились лишь отдельные очаги грануляционной ткани. На 11-е сутки в образцах кожи собак опытной группы произошло восстановление эпидермиса, замещение грануляционной ткани вновь формирующейся рыхлой подкожной клетчаткой (рис.5). В образцах кожи собак базовой группы отмечено восстановление структур кожи, а также сохранялись отдельных очагов пролиферации (рис.6). В контрольных образцах выявлялись не полностью сформирован-

ие-

мыс грануляции, некоторая отёчность ткани и частичное восстановление структур эпидермиса (рис.7).

Рис. 5. Восстановление эпидермиса у ео~ оак при лечении рай цидисепт-гелем па 11-й день опыта.

Рис. 6. Восстановление структуры и отдельные очаги пролиферации я колее собак при применении маш эритромициновой на 11-й день опыта.

Рис. 2. Частичное восстановление эпидермиса кожи у контрольного животного на 11-й день опыта. Окраска гематоксилин-эозином, ок. * 7, об. х 40

2,5. Терапевтическая эффективность применения ц иди септ-геля при случайны* ранах у мелких домашних животных

Изучение терапевтической эффективности цидисепт-геля при лечении случайных ран у собак и кошек проведено в условиях Правобережной ветеринарной лечебницы г. Воронежа. Цндисепт-гель применяли, нанося его тонким равномерным слоем на пораженную поверхность или на марлевую салфетку, которой покрывали пораженный участок тела 1-2 раза в сутки до полного заживления, но не более 10 дней. В качестве препарата сравнения использовали эритромициновую мазь, которую применяли аналогично.

2.5.1. Применение цидисепт-геля при случайных ранах у собак

Установлено, что при лечении цидисепг-гелем воспалительные явления в ранах купируются быстрее, чем при лечении эритромициновой мазью. Купирование отёка при лечении цидисепт-гелем у собак эффективнее на 28,6%, гиперемии кожи - на 26,3%, чем при лечении эритромициновой мазыо (табл. 9).

Поверхность ран собак при лечении цидисепт-гелем была чистая, фиб-ринозно-лейкоцитарных масс не обнаруживалось, дно ран было образовало молодой грануляционной тканью бледно-розового цвета. Заполнение грануля-

циями всей раны при лечении цидисепт-гелем у собак эффективнее на 36,7%, чем при лечении эритромициновой мазью. Во вторую фазу раневого процесса во всех ранах наблюдалось дальнейшее уменьшение воспалительной реакции и развитие регенераторных процессов.

Таблица 9

Эффективность лечения гнойных ран у собак

Показатели Цидисепт-гель Мазь

эритромициновая

Количество животных, гол. 20 20

Купирование отека, дн. 3,5±0,32* 4,9±0,20

Купирование гиперемии кожи, дн. 3,0±0,19 4,1±0,54

Появление грануляций, дн. 2,2±0,15* 4,4±0,27

Заполнение грануляциями всей раны, дн. 9,3±0,89* 14,7±0,92

Полная эпителизация раны, дн. 12,1 ±2,41 17,5±5,60

Переносимость препарата, дн. хорошая хорошая

* - Р<0,05-0,001 по сравнению с животными, которых лечили эритромициновой мазью

При лечении цидисепт-гелем грануляции были зернистые, плотные, полнокровные, не кровоточили. Отделяемое из раны было с небольшим количеством секрета. Полная эпителизация случайных ран у собак при лечении ци-дисепт-гелем происходила на 13-й день, что было эффективнее на 30,9%, чем при лечении эритромициновой мазью.

2.5.2. Применение цидисепт-геля при случайных ранах у кошек При лечении цидисепт-гелем воспалительные явления в ранах купируются быстрее, чем при лечении эритромициновой мазью. Купирование отёка при лечении цидисепт-гелем на 28,9 %, а купирования гиперемии кожи на 29,7% быстрее, чем при лечении эритромициновой мазью (табл.10).

Во вторую фазу раневого процесса во всех ранах наблюдалось уменьшение воспалительной реакции и развитие регенераторных процессов. Восстанавливался аппетит, исчезал воспалительный отёк и активная гиперемия в области раны, количество отделяемого экссудата уменьшалось, раны заполнялись грануляционной тканью, у краев начиналась эпителизация.

Полная эпителизация случайных ран у кошек при лечении цидисепт-гелем происходила на 12 день, что быстрее, чем при лечении эритромициновой мазью на 5 дней или на 29,6%.

Таблица 10

Эффективность лечения гнойных ран у кошек

Показатели Цидисепт- Мазь

гель эритромициновая

Количество животных, гол. 20 20

Купирование отека, дн. 3,2±0,21* 4,5±0,11

Купирование гиперемии кожи, дн. 2,6±0,09* 3,7±0,42

Появление грануляций, дн. 2,3±1,54 4,2±0,34

Заполнение грануляциями всей раны, дн. 9,1±0,78** 14,2±1,03

Полная эпителизация раны, дн. 11,9±1,28* 16,9*1,16

Переносимость препарата, дн. хорошая хорошая

* - Р<0,05-0,001 по сравнению с животными, которых лечили эритромициновой мазью

3. ВЫВОДЫ

1. Наиболее оптимальной основой для нового накожного антисептика на основе циминаля - цидисепт-геля является карбопол, т.к. освобождение цими-наля из препарата на карбополовой основе происходит на 100% за 3 часа, а из препарат на вазелиновой основы - на 61,1% за тоже время.

2. Цидисепт-гель обладает широким спектром антимикробной активности в отношении, основных возбудителей раневой инфекции. Минимальная бактерицидная концентрация в отношении Е. coli, В. subtilis, S. sholerea suis составляет 15,6-31,25 мкг/мл, в отношении St. aureus, Pr. vulgaris- 62,5 мкг/мл и в отношении Ps. aeruginosa - 125,0 мкг/мл.

3. Цидисепт-гель по степени токсичности относится по ГОСТ 12.1.007 к малоопасным веществам (IV класс опасности). Препарат не вызывает изменений в поведенческих реакциях, реакции на внешние раздражители, а также нарушений в двигательной активности животных. Он не обладает кожно-раздражающим и кожно-резорбтивным действием, не оказывает отрицательного влияния на гематологические и биохимические показатели крови животных при длительном применении.

4. Цидисепт-гель стабилен при хранении в течение одного года при температуре от +5 до +20°С и выше. Препарат отвечает всем качественным и количественным показателям ТУ в течение срока годности (12 месяцев).

5. Цидисепт-гель обладает выраженным ранозаживляющим действием как при кожных ранах (100 % заживление к 17-му дню против 30 дней в контроле), так и ожоговых ранах III степени (80% заживления ран к 20-му дню против 20% в контроле).

6. Цидисепт-гель стимулирует неспецифический иммунный ответ при раневом процессе, увеличивая к 7-му дню соответственно в 1,2 и 2,9 раза миграцию макрофагов и фибробластов в очаг воспаления (относительно мази эритромициновой).

7. Цидисепт-гель обладает выраженной терапевтической активностью при лечении экспериментальных и случайных ран у мелких домашних животных. В сравнении с лечением эритромициновой мазью купирование отёка при применении цидисепт-геля проходило эффективнее на 28,6-28,9%, развитие грануляций - на 35,9-36,7%, купирование гиперемии кожи на 26,8-29,7%, полная эпителизация случайных ран на 29,6 - 30,9%.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для лечения случайных ран у мелких домашних животных рекомендуется применять новый антисептик цидисепт-гель наружно, нанося его тонким равномерным слоем на пораженную поверхность или на марлевую салфетку, которой покрывают пораженный участок тела 1-2 раза в сутки до полного заживления, но не более 10 дней в соответствии с листком вкладышем регистрационного удостоверения № 1743-02-640-06 от 04.05.06, выданного Государственным Департаментом ветеринарной медицины министерства аграрной политики Украины, а также инструкцией, утверждённой заместителем руководителя Россельхознадзора РФ за № ПВР-2-1.6/01688 от 11.12. 2006 г.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шабунин C.B. Влияние цидисепт-геля на интенсивность процессов сво-боднорадикального окисления у крупного рогатого скота в комплексной терапии раневых инфекций / C.B. Шабунин, Н.Г. Макеев, Ю.М. Косенко // Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных: материалы Международной научно-практической конференции.- Воронеж: изд-во ВГУ, 2004,- С.339-342.

2. Макеев Н.Г. Цидисепт-гель: влияние на репаративные процессы в тканях / Н.Г. Макеев, Г.А. Востроилова, А.П. Золототрубов, Ю.М. Косенко // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных: материалы Международной научно-производственной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Авророва A.A.- Воронеж, 2006.-С.1064- 1067.

3. Макеев Н.Г. Терапевтическая эффективность применения цидисепт-геля при случайных ранах у мелких домашних животных / Н.Г. Макеев // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных: материалы Международной научно-производственной конференции, посвящённой

100-летию со дня рождения профессора Авророва A.A.- Воронеж, 2006,-С. 1067-1070.

4. Шабунин C.B. Применение цидисепт-геля при лечении случайных ран у собак / C.B. Шабунин, Г.А. Востроилова, А.П. Золототрубов, Н.Г. Макеев // Информационный листок № 79-039-06. - Воронеж, 2006. - 4 с.

5. Макеев Н.Г. Применение цидисепт-геля при лечении ран у мелких домашних животных / М.Г. Макеев, C.B. Шабунин // Ветеринария.- 2006.- Ns 12,- С. 52-53.

Подписано в печать 22 01 2007 г Формат 60x84 Гарнитура "Times New Roman" Печать офсетная Бумага офсетная Объем 1,0 п л Тираж 100 экз Заказ К» 137

Отпечатано в полном соответствии с качеством предоставленного оригинал-макета в типографии ВГАУ 394087, г Воронеж, ул Мичурина, 1

Актуальность темы. Проблема лечения ран и раневой инфекции остается актуальной на протяжении всей истории хирургии (В.И. Стручков с соавт., 1975; В.К. Гостищев, 1996). Среди большого количества различных способов лечения ран до сих пор не найдено оптимальных методов стимуляции заживления обширных ран, ожогов, трофических язв кожи (Г.В. Афиногенов, 1987; П.Г. Брюсов, 1996; В.И. Булынин с соавт., 1998; М.Е. Lait et. al., 1998 ).

Инфекция в хирургии занимает одно из ведущих мест и определяет сущность многих заболеваний. В настоящее время в гуманитарной медицине 3540% больных хирургического профиля составляют пациенты с гнойно-воспалительными заболеваниями, а в ветеринарии частота нагноения ран составляет 73,2% (М.В. Плахотин, 1992; В.К. Гостищев, 1996; А.В. Лебедев, 2000; Э.И. Ве-ремей, 2001; А.П. Плотников, 2002; G.A. Кипе, 1978; C.G. Mayhall, 1993). Отмечается тенденция к повышению частоты гнойно-воспалительных процессов, осложняющих лечение послеоперационного периода у хирургических больных (Г.Н. Берченко, 1995; В.Д. Бадиков с соавт., 1997; И.В. Домосканова, 2000; А.С. Кашин с соавт., 2001; М. Finegold, 1989). Хирургические болезни мелких домашних животных составляют большие неудобства и материальные затраты их владельцам. В период болезни животным требуется индивидуальный уход п содержание.

Снижение эффективности химиотерапии, наблюдаемое в различных областях инфекционной патологии человека и животных, объясняется, прежде всего, селекцией лекарственно-устойчивых, полирезистентных форм возбудителей, обусловленное более чем полувековым применением антибиотиков (В.И. Русаков, 1971; В.И. Струков с соавт., 1975; Б.И. Костюченок с соавт., С.М. Навашин с соавт., 1982; С.М. Курбангалеев, 1985; Н.Ф. Фурманенко, 1986; Г.И. Истомина с соавт., 1990; А.А. Адарченко с соавт., 1991; М.И. Кузин с соавт., 1992; А.П. Кра-сильников с соавт., 1992; Е.П. Безуглая с соавт., 1995; В. Gerber, 1989).

Поиск новых, эффективных средств борьбы с раневой инфекцией, ускоряющих заживление ран, является одним из решений проблемы хирургической инфекции. Актуальным является поиск новых фармакологических субстанций, обладающих антимикробными свойствами широкого спектра действия против микроорганизмов с минимальными побочными эффектами.

Относительно новым и перспективным направлением в разработке современных препаратов для профилактики и лечения хирургической инфекции являются препараты неантибиотической природы, как, например: соли четвертичных аммониевых соединений, гуанидиновой кислоты и др. (В.И. Стручков с со-авт., 1991; М.И. Кузин, 1990; М.М. Астраханова, 1997; С.Ф. Антонов, 1999; К.В. Алексеев с соавт., 2000; D.R. Harris, 1994).

Несмотря на достигнутые успехи в разработке и изучении новых препаратов для лечения случайных ран у мелких домашних животных (левомеколь, ле-восин и др.), повышенный спрос и небольшой выбор мазей на водорастворимой основе требуют решения проблемы дальнейшего расширения их ассортимента.

Одним из перспективных препаратов в этом направлении является циди-септ-гель, который содержит в своем составе циминаль на гелевой основе. Циди-септ-гель оказывает выраженное антимикробное действие на различные гноеродные бактерии, обезболивающий эффект, действует на штаммы бактерий устойчивых к другим антимикробным средствам.

Все вышеизложенное и определило общую направленность работы, выбор методических подходов и экспериментальных моделей.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось разработка и изучение фармакотоксикологических свойств нового накожного антисептика цидисепт-гель, а также исследование особенностей течения раневого процесса при лечении им случайных ран у мелких домашних животных.

Для этого были поставлены следующие задачи:

1. Разработать состав и лекарственную форму нового накожного антисептика цидисепт-гель.

2. Изучить антибактериальные свойства цидисепт-геля в отношении основных возбудителей раневых инфекций.

3. Изучить фармако-токсикологические свойства цидисепт-геля.

4. Изучить клинико-морфологические показатели течения раневого процесса при лечении случайных ран у мелких домашних животных цидисепт-гелем.

5. Изучить терапевтическую эффективность цидисепт-геля при лечении случайных ран у мелких домашних животных;

6. Разработать технические условия и инструкцию по применению цидисепт-геля при лечении случайных ран у мелких домашних животных.

Научная новизна. Впервые разработан, теоретически и экспериментально обоснован состав нового накожного антисептика цидисепт-гель. Изучены его фармако-токсикологические свойства, дана клинико-морфологическая характеристика экспериментальных ран у собак при лечении цидисепт-гелем, определена его эффективность при терапии случайных ран у мелких домашних животных.

Практическая значимость и внедрение. Полученные результаты послужили основанием для разработки нового накожного антисептика, технологии его производства, контроля качества и инструкции по применению для лечения случайных ран у мелких домашних животных, которые вошли в разработанную и утвержденную нормативно-техническую документацию на препарат цидисепт-гель ТУУ 24.4-3129351-030:2005 согласованными с Государственным Департаментом ветеринарной медицины аграрной политики Украины от 07.05.2005 г.; СТО 10590965-0004-2006 и инструкции, утверждённой заместителем руководителя РоссельхознадзораРФ за №ПВР-2-1.6/01688 от 11.12. 2006 г.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на:

- заседании методической комиссии ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» протокол №1 от 25.01.2006 года.

- международной научно-практической конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных» (г. Воронеж, 2004 г);

- международном координационном совещании «Новые биотропные препараты и косметологические средства для лечения и ухода непродуктивных домашних животных» (г. Харьков, 2004);

-заседаниях научно-технического совета научно-производственного предприятия «Агрофарм» 2003-2006 г.г.;

- международной научно-производственной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Авророва А.А. «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных» (г. Воронеж, 2006).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи в материалах конференций, 1 информлисток, 1 статья в журнале «Ветеринария».

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты разработки стандартизации и контроля нового накожного антисептика цидисепт-гель;

- фармакологическая активность и низкая токсичность нового накожного антисептика цидисепт-гель;

- клинико-морфологические особенности течения раневого процесса при лечении цидисепт-гелем;

- терапевтическая эффективность цидисепт-геля при лечении случайных ран у мелких домашних животных.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и приложения. Список использованной литературы содержит 309 источника, из них 231 отечественных и 78 иностранных. Иллюстративный материал включает 18 рисунков и 39 таблиц.

4. ВЫВОДЫ

1. Наиболее оптимальной основой для нового накожного антисептика на основе циминаля - цидисепт-геля является карбопол, т.к. освобождение цими-наля из препарата на карбополовой основе происходит на 100% за 3 часа, а из препарата на вазелиновой основы - на 61,1% за тоже время.

2. Цидисепт-гель обладает широким спектром антимикробной активности в отношении основных возбудителей раневой инфекции. Минимальная бактерицидная концентрация в отношении Е. coli, В. subtilis, S. sholerea suis составляет 15,6-31,25 мкг/мл, в отношении St. aureus, Pr. vulgaris- 62,5 мкг/мл и в отношении Ps. aeruginosa -125,0 мкг/мл.

3. Цидисепт-гель по степени токсичности относится по ГОСТ 12.1.007 к малоопасным веществам (IV класс опасности). Препарат не вызывает изменений в поведенческих реакциях, реакции на внешние раздражители, а также нарушений в двигательной активности животных. Он не обладает кожно-раздражающим и кожно-резорбтивным действием, не оказывает отрицательного влияния на гематологические и биохимические показатели крови животных при длительном применении не обладает кумуляцией.

4. Цидисепт-гель стабилен при хранении в течение одного года при температуре от +5 до +20°С и выше. Препарат отвечает всем качественным и количественным показателям ТУ в течение срока годности (12 месяцев).

5. Цидисепт-гель обладает выраженным ранозаживляющим действием как при кожных ранах (100 % заживление к 17-му дню против 30 дней в контроле), так и ожоговых ранах III степени (80% заживления ран к 20-му дню против 20% в контроле).

6. Цидисепт-гель стимулирует неспецифический иммунный ответ при раневом процессе, увеличивая к 7-му дню соответственно в 1,2 и 2,9 раза миграцию макрофагов и фибробластов в очаг воспаления (относительно мази эритромициновой).

7. Цидисепт-гель обладает выраженной терапевтической активностью при лечении экспериментальных и случайных ран у мелких домашних животных. В сравнении с лечением эритромициновой мазью купирование отёка при применении цидисепт-геля проходило эффективнее на 28,6-28,9%, развитие грануляций - на 35,9-36,7%, купирование гиперемии кожи на 26,8-29,7%, полная эпителизация случайных ран на 29,6 - 30,9%.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для лечения случайных ран у мелких домашних животных рекомендуется применять новый антисептик цидисепт-гель наружно, нанося его тонким равномерным слоем на пораженную поверхность или на марлевую салфетку, которой покрывают пораженный участок тела 1-2 раза в сутки до полного заживления, но не более 10 дней в соответствии с листком вкладышем регистрационного удостоверения № 1743-02-640-06 от 04.05.06, выданного Государственным Департаментом ветеринарной медицины министерства аграрной политики Украины, а также инструкцией, утверждённой заместителем руководителя Россельхознадзора РФ за № ПВР-2-1.6/01688 от 11.12. 2006 г.

2.5.3. Заключение

Результаты наших исследований показали, что при лечении случайных ран у собак и кошек цидисепт-гелем и эритромициновой мазью, определяется положительная динамика раневого процесса. Но эта динамика различна. Разница обусловлена не одинаковым воздействием на раневой процесс применяемых мазей. При лечении цидисет-гелем воспалительные явления в ранах купируются быстрее, чем при лечении эритромициновой мазью. В наших исследованиях купирование отёка при лечении цидисепт-гелем у собак эффективнее на 28,6%, чем при лечении эритромициновой мазью, и у кошек на 28,9% соответственно.

Необходимо отметить, что при лечении цидисепт-гелем и эритромициновой мазью ликвидация отёка проходит, не нарушая восстановительных процессов в ранах. Так, на третьи сутки в ранах визуально определяется начало развития грануляционной ткани. Однако сроки появления и начала развития грануляций в опытной и базовой группах различны. При лечении случайных ран цидисепт-гелем у собак развитие грануляций на 36,7% эффективнее, чем при лечении эритромициновой мазью, у кошек соответственно на 35,9%. Более выраженный противовоспалительный эффект при лечении цидисепт-гелем подтверждается и разными сроками купирования гиперемии кожи. Так, при лечении цедисепт-гелем у собак купирование гиперемии кожи происходит эффективнее на 26,8%, чем при лечении эритромициновой мазью, у кошек соответственно на 29,7%. Таким образом, результаты наших исследований подтверждают, что цидисепт-гель проявляет более выраженный противовоспалительный эффект, чем эритромициновая мазь.

Во вторую фазу раневого процесса во всех ранах наблюдается дальнейшее уменьшение воспалительной реакции и развитие регенераторных процессов. Полная эпителизация случайных ран у собак при лечении цидисепт-гелем была эффективнее на 30,9%,чем при лечении эритромициновой мазыо, у кошек на 29,6% соответственно.

Таким образом, нами изучена терапевтическая эффективность нового препарата цидисепт-геля, который оказывает на гнойную рану мелких домашних животных более выраженное действие по сравнению с эритромициноаои мазью в 1,3 раза.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Проблема лечения раневой инфекции относится к числу наиболее актуальных проблем в современной хирургии. Успех борьбы с раневой инфекцией зависит прежде всего от эффективности лечебных мероприятий, направленных как на подавление патогенной микрофлоры, так и на стимуляцию регенеративных процессов поврежденной ткани.

Многолетний опыт применения антибиотиков не смог задержать нарастание местных инфекционных процессов, не снизил летальность от сепсиса, не сократил сроки лечения гнойных ран. Более того, огромные масштабы применения антибиотиков привели к возникновению многих негативных проблем, прежде всего к широкому распространению множества устойчивых к антибиотикам вариантов бактерий (А.А. Адарченко с соавт., 1991; А.П. Красильников с соавт., 1992; П.В. Горностай с соавт., 1996; И.В. Домосканова, 2002; А.Н. Мин-ченко, 2003; В. Gerber, 1986, Н. Werner, 1989). Еще в 1958 г. Р. Нокс утверждал, что главным препятствием на пути эффективной химиотерапии является возникновение устойчивых к антибиотикам вариантов бактерий. За прошедшие с тех пор десятилетия это препятствие приобрело такие масштабы, которые вызывают сомнения в правильности монопольного положения антибиотиков и указывают на необходимость пересмотра стратегии и тактики лечения и профилактики бактериальных инфекций.

Анализ литературных данных позволил определить новое перспективное направление в разработке современных препаратов для профилактики и лечения хирургической инфекции. Это касается как действующих начал, так и основы препаратов.

По мнению Г.Е. Афиногенова и Н.П. Блинова (1987) для лечения и профилактики раневой инфекции лекарственные препараты должны обладать рядом дополнительных свойств. Во-первых, локализовать инфект в ране и тормозить его проникновение в кровь и лимфу. Во-вторых, блокировать адгезию микробов к тканям раневого ложа. И, в-третьих, подавлять факторы патогенности, способствующие внедрению, закреплению и размножению бактерий в тканях.

Для решения данных задач нами разработан новый препарат цидисепт-гель, содержащий в своем составе циминаль, имобилизированный в гелиевой основе полимера карбопола.

Циминаль хорошо растворяется в липидах и плохо в воде. За счет этих свойств субстанции, с одной стороны, происходит обеспечение кумуляции циминаля в месте аппликации препарата, создание относительно длительного периода достаточной концентрации для подавления жизнедеятельности микроорганизмов. А с другой - уменьшается риск общетоксического действия препарата и селекции, устойчивых к препарату микроорганизмов.

Карбопол, в свою очередь, обладает высокой механической прочностью, устойчивостью к химической и микробной биодеградации, минимальной неспецифической адсорбцией, способностью к соединению с действующим веществом и в то же время не ингибирует его активность. Применение карбопола позволило создать препарат с длительным и равномерным высвобождением активного вещества в среду.

Изучение антибактериальной активности цидисепт-геля к основным возбудителям раневой инфекции выявило широкий спектр его антимикробного действия. В отношении Е. coli ДВ цидисепт-геля было в 2 раза активнее лево-мицетина, в 1,4 раза-тетрациклина и в 16 раз стрептоцида и эритромицина. Такая же тенденция наблюдалась и в отношении Proteus vulgaris, и в основном, в отношении St. aureus. Антимикробная активность препарата in vitro практически во всех случаях подтверждалась исследованиями in vivo. В клинических опытах при лечении случайных ран у мелких домашних животных была установлена оптимальная концентрация циминаля в цидисепт-геле 0,3%, изучена скорость и полнота его высвобождения из препаративной формы, а также стабильность самого цидисепт-геля.

Проведённые токсикометрические исследования цидисепт-геля показали, что препарат является малотоксичным и относится к IV классу опасности - малоопасные вещества (ГОСТ 12.1.007-76). Следует подчеркнуть, что у лабораторных животных не удалось вызвать признаков токсикоза даже при введении в желудок максимально возможного объёма цидисепт-геля, т.е. практически не удалось определить его LD50.

В экспериментах было выявлено, что цидисепт-гель при длительном применении не оказывает токсическоко действия на организм, не кумулируется, не обладает раздражающим аллергизирующим действием. Препарат не вызывал изменений в поведенческих реакциях, реакции на внешние раздражители, а также нарушений в двигательной активности животных.

Цидисепт-гель не оказывал влияние на гематологические и биохимические показатели животных. Не отмечено статистически достоверных различий в коэффициентах масс внутренних органов крыс опытной и контрольной групп

Модельные опыты кожных и ожоговых ран показали, что цидисепт-гель при нанесении его на поверхность как кожной, так и ожоговой раны оказывает достаточно выраженное ранозаживляющее действие. Заживление кожных ран у крыс под действием цидисепт-геля наступало к 17 дню (100% заживление), в то время как у контрольных животных только на 12 сутки после начала эксперимента начинается образование грануляционной ткани, которая постепенно заполняет раневой дефект. На 20 сутки наблюдалась плоскостная эпителизация, окончательное заживление происходило в результате рубцевания раны на 26-30 сутки.

Наиболее выраженное проявление защитно-приспособительных и компенсаторных реакций организма в ответ на повреждение при использованной нами модели ожоговой травмы, наблюдается в течение первой недели постожогового периода и максимально проявляется впервые 3-е суток после нанесения ожога. При применении цидисепт-геля различия между контрольными и опытными животными становятся статистически достоверными через 9 дней после воспроизведения ожога и начала применения препарата. К этому времени площадь ожоговой раны у крыс, которым применяли цидисепт-гель, была на 10% достоверно меньше, чем у контрольных крыс. К 20 дню отмечалась самая высокая скорость заживления ожогов. При сравнении средней площади ран в этот период отмечено, что в опытной группе по сравнению с 10 днем от начала опыта площадь раны уменьшилась на 69,0%, в то время как в контрольной - на 30,4%.

У некоторых животных из опытной группы мы наблюдали полное заживление ожогов и образование нежного рубца уже на 20-25-е сутки.

Неспецифическим звеном в развитии патологии, в том числе раневой, является активация процессов свободнорадикального окисления и нарушение функционального состояния системы антиоксидантной защиты организма (М.И. Рецкий, 1997). В связи с этим, интенсивность процессов перекисного окисления липидов может служить важным диагностическим критерием оценки тяжести патологического состояния организма животных при раневых инфекциях.

Для выяснения возможного механизма противоожогового действия цидисепт-геля нами было проведено изучение его влияния на состояние перекисного окисления липидов после нанесения ожоговой травмы.

Установлено, что применение цидисепт-геля оказывает тормозящее действие на интенсивность накопления в крови вторичных продуктов ПОЛ. Вероятно, это связано с избыточной активацией процессов свободноради кального окисления липидов, которые при раневых инфекциях, обусловлены токсикогенностью патогенной микрофлоры в ране, цитолизом, активацией мак-рофагальной активности. Так, на 3 сутки после нанесения ожога, установлено, что уровень МДА в контрольной группе возрос на 67% по сравнению с интакт-ными животными. В то же время у крыс, которым применяли цидисепт-гель, уровень МДА повысился на 39,4%.

Анализ наших исследований показал, что при лечении экспериментальных ран у собак цидисепт-гелем определялась положительная динамика раневого процесса. При наличии одинаковых условий эксперимента, разница была обусловлена неодинаковым воздействием на раневой процесс со стороны применяемых для лечения мазей. Так, купирование гиперемии кожи при лечении цидисепт-гелем происходило в 2 раза быстрее, чем в контрольной группе. Интенсивность реактивно-воспалительного процесса, по мнению М.И. Кузина с соавт. (1990), является основным клиническим показателем наличия гнойной инфекции в ране. Снижение интенсивности воспалительной реакции и развитие регенеративных процессов указывают на подавление инфекции или полную ее ликвидацию. К числу важных признаков, указывающих на наличие или отсутствие воспалительного процесса в ранах, относится отек. В наших исследованиях купирование отека произошло при лечении цидисепт-гелем на 3,15±0,28 сутки, эритромициновой мазью - на 4,74±0,68 сутки, в то время как в контроле - на 6,43±1,17 сутки. В начале 3-их суток у собак опытной группы наблюдали активное очищение ран от гнойно-некротических масс. Важно отметить, что при лечении изучаемой мазью активная ликвидация отека происходила, не нарушая восстановительных процессов в ранах.

К девятым суткам у животных опытной группы вся поверхность ран была полностью заполнена грануляционной тканью. Полное заживление ран наступало к 12 суткам, а в остальных группах в более поздние сроки.

Заживление ран является сложным многостадийным процессом, который происходит в результате совместной деятельности различных типов клеток. При повреждении кожи эпителиальные, эндотелиальные клетки и фибробласты взаимодействуют друг с другом через цитокины и молекулы внеклеточного матрикса, формирующегося постепенно из исходного сгустка крови, содержащего в основном фибрин и фибронектин плазмы. Формирование грануляционной ткани - продукция компонентов внеклеточного матрикса (фибронектина фибробластами и макрофагами, коллагена, эластина и протеогликанов фиброб-ластами), пролиферация и миграция клеток (мезенхимальных - фибробласты и миоциты, эпидермальных - кератиноциты) - контролируется большим количеством клеточных факторов (Б.М. Даценко, 1995; А.Н. Грабовой, 1999; D.R. Harris, 1994). Воспалительно-регенеративная реакция тесно связана с функционированием клеток иммунной системы (нейтрофилов, макрофагов, лимфоцитов и др.), роль которых в местном воспалительном процессе хорошо известна (лимфоциты, в частности, вырабатывают факторы, действующие на пролиферацию, рост и продукцию фибробластов).

Цитологическое исследование раневой поверхности показало, что цидисепт-гель стимулирует неспецифический иммунный ответ, увеличивая ми фацию нейтрофилов в очаг воспаления. На третьи сутки в опытной группе в ранах происходит смена деструктивно - воспалительного типа на воспалительный тип цитограмм. Цитограммы в основном состоят из нейтрофильных лейкоцитов, количество их уменьшилось по отношению к исходному - на 22,5%. В этот период, в ранах отмечаются начальные признаки регенерации, появляются макрофаги и фибробласты, а также усиливается пролиферация клеток плоского эпителия. В контрольной группе (без лечения) и в группе животных, которых лечили эритромициновой мазью, сохранялся деструктивно-воспалительный тип цитограмм. Общее количество нейтрофильных лейкоцитов соответственно составило 87,6 и 82,3 %.

На 5-е сутки лечения в опытной группе в мазках-отпечатках отмечали прогрессирование в ранах признаков регенерации, т.е. смену воспалительного на воспалительно-регенераторный тип цитограмм. Количество фибробластов при лечении цидисепт-гелем увеличивается до 12,3%, в то время как в группе животных, которых лечили эритромициновой мазью и контрольной группе соответственно до 2,8% и 1,1%. Увеличение числа макрофагов в 1,4 раза по отношению к 3 суткам после начала аппликаций препарата характеризует прогрессирование процессов очищения в ранах. В группе с эритромициновой мазью и контрольной определялись начальные признаки регенерации, хотя результаты исследования мазков свидетельствуют о более высокой инфильтрации лейкоцитами (70,1 и 74,2% соответственно). Тип цитограмм в этих группах меняется с деструктивно-воспалительного типа на воспалительный тип.

Цидисепт-гель эффективно влияет на клеточную реакцию периода воспаления. В этих условиях увеличивается не только количество выселившихся нейтрофильных гранулоцитов, но и скорость их выселения. Известно, что ней-трофилы являются не только фагоцитирующими клетками, но и источником хемотоксинов, стимулирующих миграцию моноцитов и последующую их диф-ференцировку в макрофаги (А.Р. Меликян, 1994; П.М. Потапнев, 1995; M.S.

Klempner, 1983; T.G. Burnakis, 1989). Результаты наших исследований показали, что быстрое выселение нейтрофилов определяет и более выраженное течение макрофагальной реакции.

Макрофаги являются полипотентными клетками, поскольку не только выполняют фагоцитарную функцию, но и вырабатывают особый фактор, стимулирующий рост фибробластов, интерлейкин-1, интерфероны, продуцируют коллагеназу, резорбируют избыточную новообразованную соединительную ткань (А.Н. Маянский с соавт., 1993; А.П. Чадаев, 1994; В.А. Ляшенко, А.Г. Бабаева, 1995; В.Ф. Лебедев с соавт., 2001; С.Г. Столяров, 2002; R.A. Ditter, 1983; I.M. Roitt, 1991). По мнению Е.Г. Колокольчикова с соавт. (1994), именно макрофаги с первых суток нанесения травмы «программируют» весь ход заживления ран. Цидисепт-гель обеспечивает быстрое и активное очищение раны. Под действием цидисепт-геля изменяются не только сроки формирования грануляционной ткани, но и ее трансформация в соединительную ткань, сопровождающаяся дифференцировкой клеточных элементов. Преобладающими элементами новообразовательной ткани являются фибробласты. Их активность в значительной степени определяет структуру дифференцирующейся позже соединительной ткани и особенности регенерации эпителия.

Полученные нами данные исследований подтверждают важную роль фибробластов в процессе синтеза коллагена, что совпадает с мнением других исследователей (Р.К. Данилов с соавт., 1996; Ю.Г. Найдёнова, 1997; А.В. Ковалёв, 1997; G.K. Reddi, 1998).

Именно раннее формирование грануляционной ткани определяет и раннюю дифференцировку зрелой соединительной ткани, рост и дифференцировку эпителиального пласта. Регенерация пласта происходит за счет размножения клеток базального слоя краев раны и их наползания на сформировавшуюся соединительную ткань. Плазматические клетки базального слоя становятся плоскими, что увеличивает поверхность эпителия. В исходе репаративного процесса образуется рубец, который покрыт эпителием, имеющим значительную толщину, большую протяженность и достаточно слабую дифференцировку клеточных элементов. На завершающем этапе регенерации происходит ремодели-рование и резорбция избыточной ткани.

По нашим данным, у собак опытной группы сохраняется эволюционно сформированная стадийность процесса посттравматического восстановления кожи, однако наблюдается существенная морфо-функциональная перестройка регенерирующих структур, что в конечном итоге ускоряет сроки заживления ран.

Благоприятное влияние цидисепт-геля на течение репаративного процесса, прежде всего, подтверждает факт сокращения сроков заживления ран. Рубцевание у собак опытной группы происходило к 11 суткам, тогда как у контрольных животных только к 24 суткам.

Методом визуального наблюдения в опытной группе нами установлено сокращение продолжительности фазы воспалении, раннее появление грануляционной ткани и более быстрое сокращение площади раневой поверхности.

Макроскопическое изучение ран у животных в группе, где для лечения использовали мазь эритромициновую, имели все признаки гнойного воспаления с большим количеством серозно-гнойного экссудата и активной гиперемией краев ран. Подтверждением вялотекущего характера воспаления, является мощное развитие лейкоцитарно-некротического вала. Медленно текущий воспалительный процесс тормозит образование грануляционной ткани, что подтверждается нашими микроскопическими исследованиями. Грануляционная ткань развивается в краевой зоне раневого дефекта в виде очагов и характеризуется малым количеством фибробластов.

В опыте отмечается меньшая по сравнению с контролем высота лейкоцитарного вала и резкое снижение числа микроорганизмов, что позволяет нам сделать вывод о быстром завершении воспалительной реакции, за счет увеличения фагоцитарной активности нейтрофилов, что согласуется с наблюдением других авторов (A.M. Дыгай, Н.А. Клименко, 1992; А.Г. Бабаева, 1995).

Анализ результатов собственных экспериментально-клинических исследований позволяет утверждать, что в условиях заживления инфицированных ран у собак, на всех этапах посттравматической регенерации, максимально проявляется биостимулирующий эффект цидисепт-геля по сравнению с мазыо эритромицина на 36,4% и тем более с контрольными животными на 53,6%.

Клинические испытания цидисепт-геля показали его высокую эффективность, позволяющую добиться заживления инфицированных ран у животных в кратчайшие сроки с хорошими функциональными и косметическими результатами.

114