Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Этиологическая роль микоплазм в нарушении воспроизводительной функции у свиноматок

АКАДЕВД АГРАРНЫХ НАУК РЕСПУБЛИКИ ЖЛАРУСЬ

БЕЛОРУССКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ Р Г 5 ИМЕНИ С. Н. ШПЕЛЕССКОГО

5 СЕН 1,994 На правах рукописи • •

КУРЛОВИЧ Дмитрий Владимирович

УДК 619:618.1-084:636.4

ЭТИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ 'П^ОПЛАЗМ В НАРУПЕНИИ ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНОЙ ФУНКЦИИ У СВИНОМАТОК

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и инжуяэлогия

АВТОРЕФЕРАТ

циссертацки на соискание ученой степей* кенцицата ветеринарных наук

МИНСК - 1994

Работа выполнела в лаборатории бактериальных инфекций Белорусского научно-исследовательского института якспериментальной ветеринарии'имени С.Н.Бышелгсского

Научный руководитель - доктор ветерииартых наук,

член-корреспонаект Академии Аграрных наук Республики Беларусь Н.Н.Анцросик

Официальные оппоненты: цэггор ветеринарных наук, профессор А.Г.Щахов

доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник Г.А;Объедков

Ведушее предприятие: Витебская Государственная

академия ветеринаркой медицины

Завита состоятся " ^ щ 1994 г. в "/ЙГ"

часов на засекании специализированного Совета Д.020.47.01 в Белорусском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринария им. С.Н.Выоелесского /223020, Минская обл.. Минский р-н, и/о Кзгкцевоииа, ВелНИИЭВ им. С.Н.Выиелесского/

С диссертацией мокко ознакомиться в библиотеке института

Автореферат разослан •¿Г

УчеяыА секретарь специализированного Совета,

профессор ' В.й.Лишик

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. На крутых специализированных предприятиях особое внимание уделяет воспроизводству стана. При рациональном ведении свиноводства предусматривает получение от свиноматок максимального количества пряляода, что обеспечивает снижение себестоимости молодняка при рождении и повыоение резерва производства свинины.

Однако, изменение традиционных условий содержания и кормления свиней, лишение их прогулок, солнечной инсоляции, высокая концентрация однородных групп животных на ограниченной плоаади привел^ к появлению различных болезней, из которых сувественньгй уэерб свиноводству наносят заболевания, обуславливавшие надуйения воспроизводительной функции у ходагов и свиноматок. Удельный вес такого рода заболеваний значительно возрос за последние годы. Наиболее часто это отмечается при бруцеллезе (Е.С.Орлов, 1970; И.А.Баяулов, В.А.Ве-дерииков, 1979; М.А.Бажин с осавт., 1981; A.A.Конопатит, А.А.Баку-лов, 1984; А.К.Бронников, 1990),. лептоспирозе СРЛ.Сосов, 1970; А.П.Шатров, А.Ф.Кирпичев, 1977; А.А.Глуоков, 1984; И.Т.Джолков, 1985), парвовирусной инфекции ( о.я. Donaldeon-Wood et al., 1977; l.L.Van Leengord et al. ,1983; «.b.Vtengelln« «t al., 1975; С.А.Гайтамонова, 1989), хламидиозе (В.А.Бортнкчук, Г.Г.Попович, 1981; П.М. Митрофанов, 1931; p. Horach , 1980; Н.О.Щербань, Г Д. Фивсова, 1977), болезни Ауески ( С.А.Bolin , S.R.Bolin , J.Р. Klug , 1980). Вместе с тем, в литературе последних лет все чаше появляется сообщения о нарушении воспроизводительной функции у свиноматок невыясненной этиологии, которые сопровождается абортами* прохолостами, рождением мертвого или нежизнеспособного потомства. Некоторые авторы С J. Je lev et al.J972; L.Stlpkovits, 1983) сообщают о взаимосвязи абортов у свиноматок с микоплазмами и уреат плазмами. В настояшее время уже доказана этиологическая роль этих

микроорганизмов в патологии генитальной сферы человека (Г.А.Буду, 1982; 11.А.Безпюкова, 1973), крупного рогатого скота ( c.J.v.Tri-ohard , 1965), овец ( J-с.Chima , 1981), собак ( P.A.Ooig et al, 1981) и птиц ( L.Stlpkovits , 1986). В литературе имеются отдельна сообвения о выделении миюляазм к наличии к ним антител а сыворотке крови аборттхвашшх плодов и абортировавших свиноматок. ( V, Je-lev «t áU, 1972; L.Stipkovits, £983; S.Hoy , 1987; Н.Н.Андросик и И.И.Пшко, 19ЭЭ). Однако, роль микоплазм в нарушении востэоиз воют сльной функции свиноматок окончательно не установлена. Не определена широта и интенсивность распространения этой болезни, степень поражения свиноматок разного периода супоросности, зависимость проявления абортов от продолжительности эксплуатации свиноматок, сезонность и цикличность болезни, источники и пути передачи возбу-дгевля инфекции. Отсутствуют доступные методы диагностики гениального мякоплеэиозв в аффективные средства профилактики этой болезни, «tiro приводят к бирокдму распространяй» данной инфекции.

q додача исследований. Целыо настояших исследований являлось изучение роли микоплазм в нарушении воспроизводительной

функции у свиноматок и изыскание средств профилактики этой патоло-

«

МП).

. Для реализации этой цели были поставлены следукоие задачи:

1. Изучить опнзоотичзскуо ситуации по абортам и другим наоуше-nu* воспооизводительной функции у свиноматок, их клинико-эпизооти-часкхэ в патологоанатомические признаки проявления.

2. Пояснять этиологическую структуру нарушений воспроизводительной функции у свиноматок.-

. 3. Выделить ми го плазмы и уреаплазмы от аборт иро ваших свиноматок я плодов, изучить их *удьтурвльио-140р5ояогические, биохимические в серологические свойства.

4. Опваделить способность микоплазм шэывать нарушения вое-

производительной функции у морских свинок и свиноматок в эксперименте.

5. Изыскать средства профилактики нарушений воспроизводительной функции у свиноматок, обусловленных микоплазмами.

Научнад_новизна. В результате провезенных исследований впервые в природно-климатических условиях Республики Беларусь получены такие объективные характеристики нарупений воспроизводительной функции у свиноматок, как широта и интенсивность распространения, степень поражения свиноматок разного периода супоросности, зависимость проявления абортов от продолжительности эксплуатации свиноматок, сезонность и цикличность болеэнп, источники и пути передачи возбудителя инфекций.

Вперше экспериментально воспроизведен гениальный кякоплазнсз у морских свинок и свиноматок, что доказывает этиологическую роль -микоплазм в данной патологии.

Практическая значимость. Доказана ингибирушая .активность антибакса по отношению к микоплаэмам и показана его профилактическая и экономическая эффективность в производственных условиях. Установлена чувствительность морских свинок к микоплаэмам, выделектм о« свиней и разработана лабораторная модель для определения патогенкос-ти микоплазм. Разработаны и утверждены ГУВ Икисельхоэа РБ "Кетоднчэо-кие .указания по лабораторной диагностике гешггаяьного микопяазмова".

Апробация работы. Материалы диссертационной работ доложены на Республиканской научно-производственной конференция "Профилактика я меры борьбы с болезнями молодняка сельскохозяйственных животных" /Витебск, 1990/, на Республиканской научно-производственной конференции "Технология получения и выраяивания здорового молодняка сельскохозяйственных животных и рыбопосацочного материала" /Витебск, 1993/, заседаниях Ученого Совета Белорусского научно-исследовательского института им. С.Н.Вышелесского Л990, 1991, 1992 гг./.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.

Объеу и структура диссертации. Диссертация изложена на /2О страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы! материала и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и практических предложений. Список литературы включает 15& источника. Работа иллюстрирована & таблицами и рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнялась в 1989-1993 годах в лаборатории бактериальных инфекций Белорусского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вшелесского и в четырех хозяйствах Брестской, Гомельской и Минской областей.

Для установления сезонности, уровня заболеваемости, энзоотич-яости» перяоцичности нарушений воспроизводительной функции у свиноматок собран, статистически обработан при помочи компьютерной техники (ТШ РС ХТ-228) и подвергнут анализу материал первичного зоотехнического учета данных хозяйств за 1980-1993 годы. В основу методики положены методические указания по эпизоотологическому исследованию (И.А.Бахулов с соавт., 1982)^

. Для выяснения источников возбудителя инфекции и путей передачи проасследовано 62 абортированных плода, 27 проб околоплодной жидкости, 34 пробы влагалишной слизи, патметериал от 1в абортировавших свиноматок и 281 проба спермы.

Восприимчивость к генитальному иикоплазмозу свиноматок разных возрастав определяли на основании анализа первичного зоотехнического учета. Клиническое • исследование животных проводили по общепринятой в ветеринарной практике методике.

. Для изучения патологоанатомических особенностей генитального

микоплазмоза вскрыто 162 абортиоо ванных плода, ;гроиз веден после-убойный осмотр 18 абортировавших свиноматок, вскрыто 13 павших и 23 контрольно убитых морских свинок, экспериментально зараженных культурами микоплазм. Гистологическому исследованию подвергнуты паренхиматозные органы 7 морских свинок, 2 абортироваваих свиноматок и 4 абортированных плодов.

Для выделения и культивирования микоплазм использовали жидкие питательные среды на основе ФГМС, тшптического гидрэлизата мязцл сердца крупного рогатого скота и PPl О-бульона. Изоляцию уреаплази провояили на питательной с репе, приготовленной на основе РРьО-бульона ( Difeo ).

Особенности строения колоний микоплазм на плотной питательной среде изучали непосредственной микроскопией агара и в препаратах-отпечатках.

Морфологи» микроструктурных элементов изучали путем микроскопии мазков (микроскоп Ienaval, Carl Zeiss ), приготовленных КЗ отмытой бульонной культуры микоплазм и окрашенных по Граму и Рома-новскому-Гимэа.

Ферментативную активность I'' выделенных штаммов микоплазм по отношению к глюкозе, мальтозе, арабинозе, сахарозе, лактозе и глицерину определяли по изменению окраски и рН питательной среды, В которую добавляли трехсуточную культуру микоплазм, 0,5% соответствующих .углеводов и 0,002? фенолрота. Концентрацию водородных ионов измеряли лабораторным рН-метром (иономер универсальный ЭВ-74). Контролями служили инфицированная v™ ко плазмами среда без углеводов И среда, используемая для культивирования микоплазм, с исштуемымя сахарамя, которые выдергивали в термостате вместе с опытными пробирками.

С целью изучения гемолитических свойств, трехсуточные бульонные культуры микоплазм шоевали на плотнуо питательную среду,содержащую

5% суспензии эритроцитов барана, свиньи и курицы.

Типизацию выделенных штаммов микоплазм осуществляли в пробе задержки роЬта. Для этого 3-4-х суточную культуру тщательно распределят по всей поверхности агара и после подсушивания в термостате помешали диски фильтровальной бумаги диаметром 3-5 мм, пропитанные примерно 0,02 мл гипериммунных противомикоплазменных антисывороток. После инкубации в течение 3-4 дней во влажной камере при температуре 37% но сирине зоны задержки роста определяли принадлежность кико плазм к тому или иному виду.

Патогенное?ь выделенных штаммов микоплазм изучали на холостых морских свянкех случного периода, полученных из питомника БелНИИЭВ я предварительно проверенных на носительство микоплаэменной инфекция. Для заражения использовали трехсуточные бульонные культуры 3-4 пассажа М. ЬуогК1п1з и А. егапиХагит в титре 1.70.10® -2.52.10® НПЗ/мл, выделенные из спермы хряков. Контролем в каждом оште служили по 3 морские свинки, которым в качестве плацебо вводили питательнув среду для культивирования микоплазм.

В первом оште было использовано б морских свинок второй половины беременности, которых, разделили на 2 опытные и одну контрольную группы.. Еивотных первой опытной группы заражали бульонной культурой А. 8гваи1вг1ш . Животных второй группы - центрифугатом сус-пгизии из паренхиматозных органов абортированного плода, из которого юделена исходная культура. Указанный материал вводили внутриброшин-по, двукратно с интервалом 2 дня, в дозе 2,5 мл на одно введение. Во втором опыте использовали 19 морских свинок (4 самца и 15 в емок), которых разделили на 2 опытные и одну контрольную группы. Каждая из опытных групп была разделена на 3 подгруппы. Первая под-групаа была сформирована из предварительно инфицированного самца, к которому спустя 10 дней после заражения были подсажены две холостые ивиифацироваянне с емки -случного возраста.

Вторая подгруппа состояла из 2-х холостых инфицированных самок случного возраста, которых через 10 дней поел? заражения случали с неинфицированнш самцом.

В третьей подгруппе заражении подвергались две самки первоЯ половины беременности.

Для заражения животных I группы использовали бульонную культуру A. granuiaru'n , И - М. hyorhinie , выделенных из спермы хряков. Инфицирование производили трехкратно с интервале« 2 дня в дозах; 1,С - внутрибргдинно, 0,5 - интраназально и 0,5 - гоепуциально или вагинально в зависимости от пола животного. Отъем самцов от самок k во всех группах производили спустя 30 шей совместного содержания.

В тоетьем опыте было использовано 8 морских свинок. 3 ездкп и I сачец опытной гоупгы подвергались овдовгсыенноиу ккфицяговани» культурой A. granularum , выделенной из спермы хряков в сналогичных дозах. Остальные ж^вотние служили контролем.

Окончательный вывод о патогенности imito плазы делали на основании клинических, патоморфологических извекений, результатов ре изоляции и обнаружении микоплаэм пои электронной микроскопии.

Для гистологических исследований, проведенных совместно с кандидатом ветерянаотых наук А.Г.Дрогуном, отбивали кусочки пяренхя-матозных органов от иорских свинок и плодов, помешали в отдельные марлевые мешочки и фиксировали их в IO^-ном растворе формалина. После этого готовили парафиновые срезы и окрапивалн гемотоксияинаозином.

Для электронной микроскопии, проведенной, вовместио о кандидатом ветеринарных наук Л.В.Белянко, использовали пробы сердца, легкого, печени, почек обшим весом 0,5 г, к котором после измельчения добавляли 2 капли трипсина и 9 мл раствора Хенкса, центрифугировали пси 300 об/мин. в течение 30 мин. К надоеадочноЯ жидкости добавят равный объем фгеона-ПЗ и встряхивали а течение 0,5 часа, затаи повторно центрифугировали при 7000 об/мин. 45 минут. Для осаждения

микоплазм no 2 мл надосадочной жидкости дополнительно подвергали центрифугированию при 15000 об/мин. в течение 30 минут. Осадок ре-суспендировали в нескольких каплях дистиллированной воды, наносили на электронномикроскопическуи сеточку, которую после высушивания просматривали в электсонном микросколе ЭМВ ¿00 Б при ускорявшем напряжении 75 кВ и инструментальном увеличении от 20000 до 75000 раз. В качестве контроля использовали бульонную культуру микоплазм.

Для определения роли микоплазм в этиологии абортов было использовано 12 свиноматок 30- и 75-дневной еупоросности, завезенных « иэ благополучного хозяйства. Двум свиноматкам каждого периода су-поросности вводили центрифугат 10% взвеси паренхиматозных органов абортированных плодов, предварительно обработан;«и пенициллином и ацетатом талия. Четырем свиноматкам второй группы вводили бульонную культуру A. ¿ranularuo , выделенную от абортированных плодов. Ука-занкыЯ материал вводили внутривенно в дозе 8 мл трижды с интервалом 24 часа. Контрольным свиноматкам вводили равное количество стериль-■ ного физраствора.

Чувствительность микоплазм к спермосану и антибаксу определяли методом последовательных серийных разведений на питательной среде для культивирования исследуемых микроорганизмов согласно "Методических .указаний по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей янфежцяоиннх болезней сельскохозяйственных животных" /1972 год/

Изучений эффективности применения санации спермы антибаксом на опмцотворяеиость свиноматок и выход жизнеспособных поросят проводили на 352 холостой свиноматке, которых разделили на 2 группы. Свиноматок фпытяой груши (155 голов) осеменили спермой, санированной антибахсом, а животных контрольной группы (196 голов) - спермосеном.

Экономическую аффективное» применения антибакса определяли по "Негодик* оценки аффективное» использования свиноматок на ре про д.ук-

торных фермах промышленных свиноводческих комплексов" /1981 год/,а также "Методике изучения экономической эффективности ветеринарных мероприятий", утвержденной Главным управлением ¡ветеринарии /1984 год/.

Полученный цифровой материал обработан методом математической •статистики.

2.2. Результаты исследований

Анализ ветеринарной отчетности обследуемых хозяйств показал, что в последние годн регистрируется нарушения воспроизводительной функции у свиноматок, сопровождающиеся абортами, прохолостами и рождением мертвых и нежизнеспособных поросят. Проявление этих нарушений в' большей степени отмечается на комплексах,находящихся в эксплуатации Ю и более лет. Так, в совхозе-комбинате им. 60-летия БССР,эксплуатируемого с 1977 года,массовые нарушения воспроизводи--тельной функции у свиноматок начали регистрироваться с 1983 года, где за год абортировало 170 свиноматок.В 1985 году это* показатель возрос до 445 голов.Выявленная тенденция к росту количества абортировавших слиноматок наб.тацалась и в последующие гопы.За 1986-1987 годы абортировало 1185 голов,а за 1988-1989 годы их число возросло no 1575. Сяелав прогноз на ближайшие годы мы пришли х выводу, что количество абортировавших свиноматок будет продолжаться расти в прямой геометрической прогрессии и в 1995 году может достигнуть до I9S1 головы, что га год составят в% от обиего числа осемененных.

Аборт* у свиноматок в течение года проявляются неравномерно. Первая велика абортов наблюдается в январе-феврале и достигает 120 голов в месяц или 6,7$ от числа осемененных. В марте-апреле происходит енг'кенте количества абортов до минимума, а начиная с мая юс количество постепенно увеличивается и достигает максимальной величины • п сентябре-ноябре. Число абортировавших при этом достигает 225 голой в месяц, что составляет 12,5% от числа осемененных свиноматок. Еы- '

явленная закономерность наблюдается с 1903 года.

Анализ.распределения абортов у свиноматок в зависимости от числа предшествующих опоросов показал, что наибольший удельный вен из всех абортов приходится на ремонтных сзинэк !35,5й) и свиноматок 1-го опороса (33%), Количество абортов у свиноматок 2-го и 3-го опоросов составляет соответственна 12,6 и 9,б£, а у свиноматок 4-7-го опоросов колеблется в пределах 4,5-3,3$ от числа абортировавших«

Для уточнения причины столь выраженной сезонности абортов у свиноматок бил произведен анализ проявления сезонности с учетом количества предшествуй»их опоросов. Полученные данные свидетельствуют, что наиболее выраженная сезонность, характеризуюшаяся двумя всшвками в род, наблюдается у ремонтных свинок и свиноматок 1-4-го опоросов. У свиноматок 5-го опороса в зимний период мы не наблюдали роста чясла абортов. Иаксимального проявлении у свиноматок этой группы они достигают в сентябре-декабре. У свиноматок 6-го и более опоросов количество абортов в течение года находилось на одном уровне.

Рассматривая распределение абортов у свиноматок в зависимости

I

оу периода супоросности было установлено, что наибольшее количество абортов у свиноматок приходится на 50-й день после осеменения.Затем наблюдается уменьшение их числа с последующим подъемом после 90-го дня супоросности.

Рзучение взаимосвязи отдельно взятых периодов супоросности с сезонности) Показало« что наиболее выраженное их проявление в осеннее время и незначительным подъемом в зимне-весенний период приходится на свиноматок первой половины супоросности. Количество аборти-роВаших свиноматок до 40-ка дней супоросности в »то время составляет 5,5*,у евкноматок 41-60-дневной супоросности - 51-гневно* - ЗЛ и 61-70-дневной - 17,от числа абортируемых./ свиноматок

второй половины супоросности повышенное число абортов отмечается в зимне-весенний период. Таге, в феврале-аптзеле абортирует 2£ свиноматок с периодом супоросности 71-80 и 31-53 дней. У свиноматок с су-порэсностью 91-ЮО дней наибольшее число абортов (4^) приходится на февраль-март. В этот срок у свиноматок с супоросностьв №1 день и более аборты регистрируются в 7,2 случаев.

Таким образом, вспышки массовых абортов в зимне-восеннее время связаны со свиноматками второй половины супоросности, а в осеннее время со свиноматками первой половины супоросности. Но посколько, наибольшее количество абортов происходит в первой половине супоросности. то и их возникновение в осеннее время наиболее ярко выражено.

В период массового проявления абортов возрастает неоплодотво-ряемость свиноматок и число мертворожденных поросят. Так, возврат свиноматок на повторное осеменение в октябре-декабре был в среднем на В% вше, чем в летний период. Количество мертворожденных поросят на одну свиноматку в эти месяч* возрастало на 5-Ф&.

При клиническом обследовании маточного поголовья выраженных признаков болезни не отмечали. Абоэт, как правило, эаветаался за 1-5 часов. В редких случаях наблацалось незначительное угнетение за 1-2 суток цо аборта или после негй. Температура тела обычно была в пределах нормы. У отдельных свиноматок рождались нертше или нежизнеспособные поросята массой ниже 600 г.

При патологоацатомическом исследована* 1& абортированоих свиноматок основные изменения отмечались в ватке в саде обаирных некротических участков. При вскрытии абортированных плодов выявляли отек подкожной клетчатки, иногда с отдельными кровоизлияниями, скопление прозрачной красноватой жидкости в грудной и бровкой полостях. Печень была увеличена (венозная гиперемия), хрупкой консистенции,' почки -Фиолетового цвета, гиперемированы, под капсулой иногда отмечали кровоизлияния. Сердце и легкие чале без изменений, Пуповина. стета*

[

с кровоизлияниями. Плацента сильно отечна, студневидной консистенции, иногда с кровоизлияниями. При гистологическом исследовании 2-х абортировавших свиноматок и 5-т* плодов отмечали гиперемию, кровоизлияния и отек внутренних органов, дифузную и очаговую, чаше периваекуляриую пролиферацию лимфоидных клеток, а также лимфоцитар-кур инфильтрацию во всех внутренних органах.

При микроскопии срезов к мазков-отпечатков, окрашенных по Романоаскому-Гииза, на поверхности клеток эпителия, в межальвеолярных перегородках и внутри альвеол легких обнаруживали единичные или в виде округлых скоплений мелкие кокковинные формы. Встречались кольцевидные, шаровидные и палочковидные структуры величиной от 150 мкм до 1-2 мк, окрашенные от розового до малиново-фиолетового цвета. Аналогичные образования, обнаруживались в точках и в меньшей степени в#других паренхиматозных органах.

2.2.1. Этиологическая структура абортов у свиноматок 1|ри анализе результатов исследования комбикормов, проведенного, с 1990 года по декабрь 1992 года мы установили, что на свиноводческих комплексах периодически скармливались слаботоксичные корма. При микотоксикологичеаком исследовании 54 проб комбикорма в 8 случаях выделены грибы рода Aeperhillue , ifucor , Pentcili um . Афло-токсияов и зеаралекона не выявлено. Содержание нитратов,нитритов, хлоридов было в пределах нормы. Ртути, ТМГД и повышения активности уреазы в исследуемых комбикормах не установлено.

Содержание нитратов и хлоридов в патматеркале абортированных плодов и вынужденно убитых абортировавших свиноматок было в предела* кормы, а нитриты, ртуть и фосфороорганкческие соединения не обнаружены. При биохимическом исследования крови супоросных свиноматок выявлено пониженное содержание витаминов А, £ и глюкозы. При определении белка в сыворотке крови 114 абортировавших свиноматок выявлено его снижение по сравнению с нотой у 35£ и увеличение у В%

животных. Резервная шелочность была ниже нормы у 43 из 92, кальция-у 18 и фосфора у 15 из 50 исследованных животных.

При вирусологическом исследовании 36 абортированных плодов и 20 проб спермы хряков парвовирусов, кароновирусов, энтеровирусов, хлзмидий и вируса болезни Ауески не выделено. Из 60 свиноматок, исследованных на лептоспироз, 19 дали положительную реакции в титрах 1:100. Однако, при повторном исследовании через 7 дней прироста титра антител не выявили, а у 3 животных из 19 обнаружено их снижение. Специфических антител к возбудителям бруцеллеза, хла-мидиоэа, сальмонеллеза, ротавирусной инфекции и вирусному трансми-сивному гастроэнтериту не обнаружено. Тогда как серологическим исследованием крови в РИГА обнаружены антитела к микоплазмаы в титре 1:32 и выше у абортировавших свиноматок в 84 , 655, у хряков - в II ,856 и у абортированных плодов - в 68,556 случаев. Наиболее часто специфические антитела у абортировавших свиноматок обнаруживали к A. granularum (80,656) и М. hyosinoviae (64,556), резв - к Ы. hyorhlnia (32,3^) и A. laidiawii (16,Ш. Антитела к М. euipneunonlae выявлены в 22,6%, а к М. arginlnl - в 25,85? случаев. При исследовании полостной жидкости абортирс.1'плодов специфические антитела обнаружены к A. granul arum в 80,5% случаев, II. hyoalnoviao 72,2/6, М. suipneumonlae - 66,7% и М. hy or hi fila - 58,32 случаев. Реже полостная жидкость вызывала агглютинацию микоплазыенных циаг-ностикумов К. arglnini (44,456) и A. i ai di awl i (38,9í6). При исследовании сыворотки 14 хряков, положительную реакцию дали только 2 (14,3) пробы одновременно с М. hy os i no vi ее и A. granularия.

Результаты этих исследований послужили основанием для проведения последующих огатов по изоляции мякоплаэм и изучению роли их в этиологии нарушений воспроизводительной функции у свиноматок.

- 14 -

2.2.2. Выявление микоплазм и уреаплапм и изучение их биологических пвойсте

Бактериологическими исследованиями 34 абортировавших свиноматок, 62 абортированных плодов и 281 пробы спермы хряков, принадле-кдаих четырем хозяйствам республики, нами изолировано 49 культур микоплазм. Процент их выделения от абортировавших свиноматок соста-вил'5,9%, от абортированцых плодов - 54,64$,из спермы хряков - 4,6^.

Исследования указанного патчатериала на уреаплазмы положительных результатов не дали, хотя штамм ВС-14 (Ureaplasma uroaliticum ), полученного из Московского научно-исследовательского института эпидемиологии им. Гамалеи, давал на этой питательной среде характерный рост через 12-20 часов культивирования при 37°С, что указывает на ее пригодность дяд культивирования этих микроорганизмов.

Выделенные штаммы микоплазм в жинкой питательной среде росли без видимых изменений и лишь на 2-5 сутки они вызывали незначительную ее опалесценцию. 12 выделенных штаммов цвет питательной срецьг изменяли с красного в малиновый (шелэчеобрапушие) и 37 в желтой (кислотообразующие).

На плотной питательной среде рост колоний отдельных штаммов • обнаруживали на 1-2-Я день после посева. ГС 3-му дню культивирования они приобретали типичную округлую форму размером от 0,5 цо 1-2 мм с . темным враставшим в агар центром и более светлой переферической поной. Они были бесцветными или имели желтоватый,'желто-коричневый оттенок. Часть втаимов в первых пассажах формировали очень мелкие колонии размером до 40 мкм. По мере культивирования рост улучиалея и после 3-4-х пассажей через 3-4 суток диаметр их колоний достигал по '50-100 мкы.

При микроскопии мазков, приготовленных из выделенных культур 'микоплазм, обнаруживали мельчайшие кокки величиной 0,3-0,4 мк.реже палочки 1-5 мп, окрашенные в светло-фиолетовкй цвет.

При изучении ферментативных свойств 32 отаммов микоплазм мы установили, что рост 26 итамнов (Б-1ж., Б-4ж., ШК вл.сл., Б-2,2ж., Б-1поч., Б-1л., БР-17с., БР-2с., БР-14с., БР-9/15с., В-9С., В-1ж., Б-2с., Г>-4с., Б-9с., Б-2в.с., Б-1,2*., Б-2поч., К-ЛЗ, БР-2л. ,БР-гж.,

-Зпоч.) сопровождался образованием кислоты, т.е. кислотообразующие. Они интенсивно сбраживали глюкозу, галактозу, сахарозу и мальтозу, снижая рН в среде до 5,95-6,15.

Штаммы Б-2ж., Б-2л., БР-2/27с., БР-13У27с., Б-14с. и Б-1,4ж. не расиепляли углевоцов и глицерина, но разлогали аргинин и вызывали алколизацию среды цо рН 8,3-8,4 (оелочеобразуюпие).

При изучении гемолитических свойств выделенных птокмов мико-плазм установили, что все изучаемые птадаы микоплазм не шзыгали гемолиз эритроцитов барана и куриир, опнако 14 из 17 исследованных гемолиэировали эритрощты свиньи.

Кцентификация 15 эпизоотических культур микоплазм, проведенная пробой задержки роста (ПЗР) с антисыворотиами к рэфереятним втскмса микоплазм, показала, что 7 штаммов (Б-1ж., Б-4«с., Б-1поч., В-1а., В-1л., Б-1л., Б-1п.) проявляли янтигелнсе родство о А.£гапи1огиэ , 4 (БР-2/27с., Б-14, БЖ-1,4, Б-2д.; - к У. >чгов1поу1вэ. Антясыворотка к М. ЬуогМгца вызывали задержку роста втсммов Б-2поч., Б-Зл., а М. аг«1п1п1 - Б-2л. и БР-13/27. 1

2.2.3. Патогенность микоплазм для лабораторных животных и супоросных свиноматок

При определении патогенности микоплазм для ыорскнх сеяно? было проведено 3 опыта. При этом установили, что морские свинки во второй половине беременности не чувствительны к инфицировенво шита плазмами.

Результаты второго опыта показали, что наруоения воспроизводительной функции в виде абортов, рождения мертвого или нежизнеспособного потомства, эндометритов, хератоконгюнктивитоа и падеж». 5-зоослых

животных и их потомства в большей степени проявлялись у самок, зараженных бульонной культурой А. егапи1агит перец случкой и у здоровых самок, слученных с инфицированным самцом. От самок, инфицированных в ранней стадии беременности было получено нормально развитое потомство. Однако с первых дней жизни у них отмечали конъюнктивиты и наступала их гибель.

Микробиологическими исследованиями от вынужденно .убитого самца, самки и 2 новорожденных была реизолирована исходная культура идентифицированная как А. егапиГагшп . При электронной микроскопии патматериала от указанных животных обнаруживали микоплазмы, которые просматривались, в виде полиморфных образований размером от 250 до 400 км.

Результаты опыта с использованием куль туш М. ьуогЫп1з показали, что ее патогенность проявлялась в виде эндометритов и конъюнктивитов лишь в подгруппе, где -здоровых самок случали с инфицированным самцом. У животных остальных подгрупп отклонений от физиологической нормы ие отмечалось. Роды проходили своевременно, полученное потомство нормально росло и набирало в живой массе.

В третьем опыте установлено, что максимальная патогеннэсть микоплазм для морских свинок достигается при случке предварительно инфицированных самок с инфицированным самцом. При этом инфекция проявлялась в вид© преждевременных родов, эндометритов, рождения мертвого и нежизнеспособного потомства, конъюнктивитов и пацежа как взрослых так и новорожденных особей.

При патологоаяатомическом исследовании самок обнаруживали накопление серозного красноватого экссудата в грудной полости, точечные кровоизлияния на эпикарде и почках, катаральный эндометрит. У самца выявляли кератоконконктивит, точечные кровоизлияния на эпикарде и почках, катаральное воспаление легких, дистрофию печени и почек. У паотего и вынужденно убитого потомства обнаруживал? ' возно-ката-

ральное воспаление легких, накопление серозного экссудата в грудной полости и точечные кровоизлияния на почках.

Определение патогенности выделенной культуры мякоплаэм для свиней проводили на 12 серонегативных свиноматках 30- и 75-дневного периодов супоросности. На 15-20-й день абортировало 3 свиноматки, инфицированные на 30-й день супоросности, в т.ч. две свиноматки зараженные центрифугатом суспензии и одна - бульонной культурой A. granul arum . При этом как до, так и после аборта явно трахейных клинических признаков болезни не отмечалось. Аборт завершался в течение 1-2 часов. Микробиологическими исследованиями от абортированных плодов била реизолирована исходная культура мякоплаэм. У свиноматок контрольной группы и зараженных в 75-дневном периоде супоросности, беременность протекала нормально и от них получено полноценное потомство.

Таким образом, полученные результаты наших исследований давт основание заключить, что микоплазмы могут быть одной из причин нарушения воспроизводительной функции у свиноматок, проявлявшейся в вице абортов и рождения нежизнеспособного потомства.

2.2.4. Эффективность применения антибакса для санации спермы в профилактике гениального микоплазмоза

г виней

При определении in vitro антимикробной активюсти спермосана и антибакса по отношений к М. hyorhlnia , A. granulosus , Д. laidlawii и эпизоотическим штаммам было установлено, что спериосан в концентрации 0,5 мг и ниже на I мл питательной среды не вызывает гибели микоплазм и ахолеплазм. Тогда как антибако предупреждает рост и размножение М. hyorninie и A. granulагша в концентрации 0,15 мг/мл, a A. laidlewii 0,07 мг на I мл среды. 1

Результаты опыта по изучении эффективности применения санации спермы антибаксом на оплодотворяемооть свиноматок я выход яизнесло-

coShux поросят в неблагополучных по генитальному микоплаймозу хозяйствах показали, что за время сулоровности свиноматок повторный приход в охоту среди животных опытной группы составил 21,3%, а в контрольной - 3I.6Í. На одну опытную свиноматку получено в среднем 8,1 поросенка, из них 1X14 (88,8Х) нормально развитых, 120 (9,бЙ) слабожизнеспособных и 20 (1,6%) мертвых поросят.

От свиноматок контрольной группы было получено 1155 поросят или в среднем 5,9 поросенка на одну свиноматку, в т.ч. 970 (845S) нормально развитых, 148 (12,8Й) слабскизнеспособных и 37 (3,2?,) «юртвых поросят.

При широком производственном испытании эффективности применения антибакса для санации спермы хряков, проверенном в 3 хозяйствах республики (совхоз-комбинат им. 60-летия ЕССР Борисовского района, *олхоз "Барецьба" Пуховичского района Минской области и МГО "Воро-

Вица" Ивановского района Брестской области), наблюдалось снижение

i

про*<уоста свиноматок на 8,Ж, количества абортов на 1,9%, мертво-рожцаемости на 2,7% и повышение выхода деловых поросят на одну сви-нокатку в среонем на 0,33 головы. Экономическая эффективность от применения внтибакса составила 343,47 руб. чистой прибыли на оану среднегодовую свиноматку (цены 1992 года).

3. ЕЫВОДЫ

1. Аборты у свиноматок широко распространены в хозяйствах республики и на .их долю в отдельных комплексах приходится в среонем от 2,1 до 4,6% маточного поголовья. Они регистрируются в течение всего года с подъемом в сентябре-ноябре и январе-феврале месяцах. Наиболее часто прохолосты и аборты наблюдаются у ремонтных свинок и свиноматок 1-4 опоросов. Причем, в осенний период аборты преимущественно регистрируются у свиноматок первой, а в зимний - второй половины супоросности.

2. Аборты у свиноматок проходят бes видимых симптомов болезни.

- i9 -

Патомор*ологически у абортированзих свиноматок отмечается зернистая дистрофия печени, хронический нефроз и зернистая дистрофия почек и эндометрит с наличием обширных некротических участков, а у абортированных плодов - гиперпластический нефроденит и зернистая дистрофия печени, почек и миокарда.

3. В сыворотке крови абортировавших свиноматок антитела к микоплвзмам обнаружены в 84,6i случаев, абортированных плодов -68,5? и у хряков - II случаев. Микробиологическими исследованиями паренхиматозных органов и транссудата грудной полости плодов в 757. с л.уча en выделены микроорганизмы, которые на основании культу-рально-морфологических, биохимических свойств отнесены к микоплвзмам. Серологически большинство выделенных штаммов мико плаза оказались родотвеншми между собой и проявляли антигенное родство с

A. granularurn и М. hyoslnoviae.

4. Микоплазмы, выделенные из спермы хряков тазываяя у экспериментально инфицированных морских свинок и супоросных йвкаоматок аборты и рождение нежизнеспособного потомства. Это дает основание считать их одним из этиологических факторов нарушения воспроизводительной функции у свиноматок.

5. Спермосан в концентрами 0,5 мг/мл и икав не ингнбирувт рост микоплазм и ахолеплазм in vitro . В тоже время внтибакс проявляет высокую активность и предупреждает их рост и размножение в концентрации 0,07-0,15 мг/мл.

6. Применение антибакса для санации спермы хряков в неблагополучных по микаплазмозу хозяйствах уменьшает прохолост свиноматок на 10,3%, рождение мертвых и нежизнеспособных поросят на 4,8{. Эконоуи-ческая эффективность от его применения составила на I среднегодовую свиноматку 343,47 рублей чистой прибыли.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

I. Лабораторная модель для определения падвгениости «икоплазн»

- г-) -

выделенных от свиноматок больных генитальным микоплазмозом.

2. Антибакс для санации спермы хряков с цель» профилактики генйтального микоплазмоза у свиноматок.

3..Методические указания по лабораторной диагностике гениталь-ного микоплазмоза свиней (утверждены Главным управлением ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь 1 июля 1994 г.).

1. Курлович Д.В.' Влияние антибакса и спермосана на жизнеспособность выделенных от свиней микоплаам П Профилактика и меры борьбы с болезнями сельскохозяйственных животных. - Тез. докл.респ. научно-произв. конференции. - Минск, 199". - С. 97-96.

2. Андросик H.H., Курлович Д.В. Оплодотворяемость свиноматок и жизнеспособность поросят при применении антибакса в неблагополучных rib микоплазмозу хозяйствах // Профилактика и меры борьбк с болезнями сельскохозяйственных животных. - Тез.докл.респ.научно-произв. конференции. - Минск, 199Г1. - С. 103-1^4.

3. Курлович Д.В. Эпизоотические особенности проявления гени-тального микоплазмоза у свиноматок // Ветеринарная наука - производству. - Труцы БелНИЮВ. - Минск, 1992. - Вып. 3". - С. 94-9'".

4. Андросик H.H., Курлович Д. ¡3. Экспериментальная модель для воспроизведения генитального микоплазмоза свиней // Технология получения и выраиивания здорового молодняка сельскохозяйственных животных и рыбопосадочного материала. - Тез.докл.респ.научно-произв. конференции. - Минск, 19S3. - С. 125-126.

5. Андрос1к М.М., КурловХч Д.У. Патагеннасць мХкаилазм, пыдзе-ленных ад свХией для марскХх св1нак // Веец1 АкадзмИ Аграрных навук Веларус!. - MIhck, 1994. -KI. - С. Г'3-Г6.

СПИСОК РАБОТ, 0ПУБйШ)ВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ