Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эпизоотологическая характеристика бешенства животных в Республике Башкортостан, профилактика и меры борьбы с ним

%

На правах рукописи

ГАЙСАРОВ МИННУЛЛА САЙФУЛЛОВИЧ

ЭПИЗООТОЛОГ ИЧЕСКАЯ.ХАРАКТЕРИСТИКА БЕ ШЕНСТВА ЖИВОТНЫХ В РЕСПУБЛИКЕ БАШКОРТОСТАН, ПРОФИЛАКТИКА И МЕРЫ БОРЬБЫ С НИМ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕ «Ж PAT

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

- t----' ■ ■

Уфа-2009

003460224

Работа выполнена на кафедре «Паразитология, микробиология и вирусология» ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет».

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Галеев Рафаэль Фаррахович.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Карташова Ольга Львовна;

доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки Российской Федерации и Республики Татарстан Юсупов Расых Халиуллович.

Ведуцщя органгоация: ФГОУ ВПО «Казанская государственная

академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана».

Защита состоится 13 февраля 2009 года в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.003.03 при ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» (450001, г. Уфа, ул. 50 лет Октября, 34, ауд. 325/2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет».

Автореферат разослан 13 января 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор сельскохозяйственных наук,

профессор (^Г—-£=>. М. Г. Гиниятуллин

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Аетуальность темы. Бешенство - особо опасный зооангропоноз, довольно широко распространенный в большинстве стран мира, в том числе в странах СНГ и Российской Федерации. Восприимчивость к вирусу бешенства всех видов домашних и диких животных, огромная опасность для человека определяют его социальное и экономическое значение.

В последние годы наблюдается ухудшение эпизоотической ситуации по бешенству в различных регионах Российской Федерации. Отмечается увеличение суммарного количества случаев бешенства среди многих видов сельскохозяйственных животных и эта тенденция роста сохраняется в настоящее время. При этом основными источниками распространения болезни являются дикие плотоядные, главным образом, лисицы, енотовидные собаки и корсаки. Проявление эпизоотии обусловливается биологией указанных хищников и зависит от влияния биотических и абиотических факторов конкретной территории, прежде всего от многообразия типов движения диких носителей вируса бешенства (С. И. Джулина, 1994; В. С. Иванов, 2001, 2006; А. В. Саввин, 2004; С. М. Попан-дуполо и др., 2007; А. Е Метлин, 2008; С. Р. Янбарисова и др., 2008; К. Gamoh, 2007; М. Smreszak et al., 2008; Н. В. С. R. Batista, 2008).

Несмотря на проводимые мероприятия в стране, ограничить распространение бешенства, полностью ликвидировать бешенство животных на территории конкретных субъектов Российской Федерации до сих пор не удалось, а многие аспекты функционирования паразитарных систем бешенства до сих пор остаются недостаточно изученными (В.А. Седов, 1972; В.Ю. Литвинов, 1999; Н.А. Хисматуллина, 1999,2001; Н.В. Филиппов, 2001; ВБ. Недосеков, К.Н. Груздев, 2000; ВВ. Макаров, В.А. Ведерников, С.И. Джупина, 2002; В.М. Авилов, В.В. Сочнев и др., 2004; Р. В. Галлиулина и др., 2005; В.В. Макаров, 2005).

По данным В. П. Бычкова и др. (1996), В. Л. Крупальника (2006), М. В. Фоменко (2006), Г. Г. Скворцова и др. (2007), В. И. Жестерева и др. (2007), Н. А. Ковалева (2007), В. И. Клюкина и др. (2008), И. П. Барышникова и др. (2008), В. В. Макарова и др. (2008), научно-обоснованные противоэпизоотические и противо-эпидемиологические мероприятия должны основываться на изучении особенностей расселения вирусоносигелей в регионе, их экологии, пространственной структуры нозоареала с учетом территориальных и временных особенностей возможного распространения болезни, а также на своевременном выявлении возбудителя бешенства и изучении его биологических свойств.

Цель и задачи исследований. Цель работы - изучить и представить комплексную характеристику эпизоотической ситуации по бешенству в Республике Башкортостан и разработать на её основе предложения по усовершенствованию системы противоэпизоотических мероприятий. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по бешенству в Республике Башкортостан за период с 2000 по 2007 гг. с оценкой интенсивности эпизоотического процесса по годам и сезонам, особенностей территориальной приуроченности вспышек болезни.

2. Выяснить роль разных видов животных в сохранении и распространении рабического вируса в природе.

3. Исследовать биологические свойства эпизоотических штаммов вируса бешенства, циркулирующих на территории Республики Башкортостан.

4. Модифицировать метод иммуноферменгного анализа для выявления специфических антител при бешенстве.

5. Проанализировать эффективность профилактических мероприятий клинико-эпизоотологическими и лабораторными методами.

6. Усовершенствовать систему организационных и специальных мероприятий по борьбе с бешенством в Республике Башкортостан.

Научная новизна работы заключается в том, что впервые проведен ве-теринарно - географический анализ распространения бешенства на территории Республики Башкортостан за 2000-2007 гг. На основе изучения территориальной дифференциации динамики количественных показателей бешенства, а также сопряженного картографическо-эпизоотологического исследования ветери-нарно-экологической ситуации по бешенству, разработана карта эп из оотологи-ческого районирования территории республики. Изучена биология, выделенных на территории Республики Башкортостан изолятов вируса бешенства, и установлено их антигенное сходство с вакцинным штаммом. Модифицирован непрямой метод иммуноферменгного анализа для выявления ангирабических антител в крови иммунизированных животных.

Теоретическая и практическая значимость работы. В результате проведенных исследований модифицированы методические указания по лабораторной диагностике бешенства, наставление по применению набора для выявления ангирабических антител; планы организации мероприятий по борьбе с бешенством в Республике Башкортостан, которые применяются в ветеринарной практике согласно утвержденным нормативно-техническим докуменгациям Управления ветеринарии при МСХ Республики Башкортостан.

О сновные по лож ения д и ссер та цни, в ыно сн мы е на за щиту.

1. Характеристика эпизоотической ситуации по бешенству в Республике Башыэртостан за2000-2007 гг. и районирование территории республики по степени распро стран ения заболевания.

2. Анализ заболеваемости бешенством среди разных видов животных и их рол ь в р азвитии эпизоотияесю го процесса.

3.Н^чно-теоретическоеобоснование путей усовершенствования антира-бических мероприятий сучетом эпизоотической ситуации и результатов мониторинга болезни в Республике Башкортостан.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и одобрены на научной конференции, посвященной 105-летию образования БашНПВЛ в Башкортостане (У фа,2002 г.); 110-ой н^чно-прагаической конференции преподавателей, сотрудниюв и аспирантов университета «Достижения аграрной науки - производству» (Уфа, 2004 г.); Международной н^чно-пракгаческой конференции, посвященной 90-лешю со дня рождения заслуженного деятеля науки РФ и РБ, доктора ветер инарных наук, профессорах. В. Аю-поваи 55-летию кафедры паразитологии, микробиологии и вирусологии БГАУ «Софеменные проблемы иммуногенеза, теории и практики борьбы с паразитарными и инфекционными болезнями с.-х. животных» (Москва- Уфа,2004 г.); Всероссийсюй научно-практической конференции с международнымучастием: «Интеграция агарной науки и производства: со стояние, проблемы и пути решения», (Уфа, 2008 г.); расширенном заседании кафедры «Паразитологая, микробиология и вирусология» ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» (протокол №12 от27 июня2007 г.).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано семь статей, в т. ч. две в центральных изданиях, рекомендованных ВАК Российской Федерации для публикации материалов кандидатских диссертаций (Известия Оренбургсюго государственного аграрного университета, Ветеринарный врач).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 109 страницах машинописного текстаи состоитиз введения,обзоралитсратуры, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсу жде-н и я результата в полученных исследований, выводови практических предложений. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 3 рисунками. Библиографический список включает 242 работы, в томчисле64 - иностранных авторов.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнялась с 2000 по 2007 гг. в лаборатории вирусологии ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет», в отделе вирусологии Башкирской научно-производственной ветеринарной лаборатории (г. Уфа), Стерлигамакской зональной ветеринарной лаборатории, в хозяйствах Стерлигамакского района и г. Стерлигамак Республики Башкортостан.

Для реализации поставленных задач проанализировали эпизоотическую ситуации по бешенству в Республике Башкортостан. При этом использовали материалы ветеринарной отчетности Управления ветеринарии при МСХ Республики Башкортостан, данные Управления Роспотребнадзора по Республике Башкортостан, Республиканской Гидрометеорологической службы, Министерства по чрезвычайным ситуациям и экологической безопасности Республики Башкортостан.

При решении отдельных вопросов краевой эпизоотологии бешенства (распространение, эпизоотичность, сезонность, источники и факторы передачи возбудителя, математическая обработка материала) применяли различные приемы и способы, описанные в «Рекомендации по методике эпизоотического исследования» под редакцией И. А. Бакулова (1976) и «Руководство по общей эпизоотологии» под редакцией И. А. Бакулова, А. И. Третьякова (1979); эпизоотологическое районирование территории РБ и количественную оценку напряженности эпизоотической ситуации проводили по методике, описанной С. И. Джупиной (1991).

В опытах исследовано 160 проб патологического материала (кусочки головного мозга, из них 64-от сельскохозяйственных, 34-от диких, 62-от домашних животных, поступивших из неблагополучных по бешенству районов Башкортостана), а также 250 проб мозга лабораторных животных (кроликов, морских свинок, белых мышей) экспериментально зараженных эпизоотическими изолятами вируса бешенства. Отрицательным контролем во всех опытах служили суспензии головного мозга ингактных мышей, зараженных референс -штаммом «Овечий» ГНКИ вируса бешенства.

Антиген вируса бешенства в патологическом материале выявляли с помощью метода флуоресцирующих антител (МФА) иммуноферментного анализа (ИФА) с применением соответствующих диагностических наборов и наставлений, разработанных во ВНИВИ (Юсупов Р. X., Хисматуллина Н. А., 1991).

Выделение эпизоотического штаммов вирусов бешенства и изучение их биологических свойств в культуре клеток НГУК-1 проводили по методике, описанной Н. А. Хисматуллиной (1999). Биологическую пробу ставили на белых мышах согласно ГОСТ26075-84.

Патогенность эпизоотических юолятов вируса бешенства оценивали на лабораторных жнвотных (кроликах, морских свинках и белых мышах) путем интрацеребрального заражения их по общепринятой методике. Степень пато-генности определяли как разность тигра вируса при инграцеребральном и подкожном введении его белым мышам (индекс инвазивности).

Непрямой вариант ИФА для определения антител к вирусу бешенства проводили по методике, описанной Н. А. Хисматуллиной и Р.Х. Юсуповым (1988) в нашей модификации, с использованием инактивированного вируса бешенства штаммом «Овечий» ГНКИ, выращенного в культуре клеток ВНК-21. В этих опытах исследовано 445 проб сывороток крови вакцинированных в хозяйствах РБ против бешенства животных, в том числе 413 проб сыворотки крупного рогатого скота, 14 - лошадей и 18 - овец.

Реакции вирус нейтрализации (РВН) и длительного связывания комплемента (РДСК) ставили по общепринятой методике.

Экспериментальные данные подвергали статистической обработке с применением критерия Стьюденга-Фишера (Стрелков Р.Б., 1980).

2.2 Результаты собственных исследований

2.2.1 Результаты изучения эпизоотической сигуации по бешенству в Республике Башкортостан

С целью изучения эпизоотологической географии бешенства в Республике Башкортостан проводили анализ эпизоотической ситуации в отдельных хозяйствах, районах республики, расположенных в различных климатогеогра-фических зонах за 2000-2007 гг.

Прежде чем приступить к анализу эпизоотической ситуации в Республике Башкортостан, изучали почвенно-географическое районирование республики с целью последующего установления связи ареала распространения бешенства с почвенно-биоклиматическими факторами, дикой фауной, так как многие исследователи указывают, что между этими процессами существует определенная зависимость.

s

Установлено, что географическое положение Республики Башкортостан определяется координатами 51°ЗГ и 56°25' северной широты и 53°10' и 60°00' восточной долготы. Западная наибольшая часть её территории относится к Европе, а восточная, находящаяся за хребтом Урал-Tay к Азии. На севере Республика Башкортостан граничит с Пермской и Свердловской, на востоке с Челябинской, на юге с Оренбургской областями, на западе и северо-западе - с республикам и Татарстан и Удмуртия.

В почвенном отношении территория республики подразделяется на черноземную и нечерноземную зоны, а по природным условиям - на три зоны: лесостепную, степную и горно-лесную с соответствующими флорой, фауной и климатическим условиями.

Лесостепная зона расположена в северной и северо-восточной части, площадью 67,5 тыс. кв. км и занимает 47,7 % территории республики. В эту зону входят 30 административных районов.

Степная зона охватывает центральные и южные районы Предуралья и Зауралья. Площадь этой зоны составляет 40 тыс. кв. км или 27,7 % территории республики, куда входят 19 административных районов.

Горно-лесная зона, куда входят 5 административных районов, занимает около 35,4 тыс.кв. км или 25 % территории Республики Башкортостан.

По данным Министерства по природным ресурсам и охраны окружающей среды на территории Республики Башкортостан обитает 77 ввдов млекопитающих, 287 - птиц, 43 - рыб, 10 - пресмыкающихся, 10 - земноводных, 15 тыс. насекомых, 121 видов моллюсков.

Первые сведения о заболеваемости бешенством животных получены га архивных документов, зарегистрированных в 1900 г., когда эта инфекция была отмечена в 49 пунктах у 126 животных. Из этих же документов следует, что в 1928 г. бешенство установлено в 275 пунктах у 468 животных. Эпизоотическая ситуация по бешенству была весьма напряженной в 1953 г., когда эта инфекция охватила 40 районов республики из 56, с общим количеством заболевших животных - 814 голов.

В период с 1975 по 2000 гг. бешенство регистрировалось в Республике Башкортостан ежегодно, охватывая от 11 до 44 районов, а неблагополучных пунктов колебалось от 20 до 192.

Из представленных в табл. 1 материалов видно, что за изучаемый период (2000 - 2007 гг.) бешенство регистрировалось в республике ежегодно, охватывая от 22 до 41 районов, а количество неблагополучных пунктов колебалось от 56 до 195. Следует отметить, что за последние десять лет появились случаи за-

болевания животных бешенством в городах. Установлено 13 случаев гидрофобии у людей.

Таблица 1 Эпизоотическая ситуация по бешенству в Республике Башкортостан за период с 2000 по 2007 гг.

Год Количество неблагополучных Количество заболевших животных

районов пунктов сельскохозяйственных домашних диких

2000 22 56 34 18 9

2001 25 87 45 10 20

2002 23 94 53 12 10

2003 34 176 170 43 71

2004 32 108 85 29 32

2005 40 143 97 46 37

2006 41 127 174 87 75

2007 41 195 ИЗ 56 50

Итого 986 771 301 304

Анализ распространения бешенства среди различных видов животных за период с 2000 по 2007 гг. показал, что оно регистрируется как среди диких, так и среди домашних и сельскохозяйственных животных. При этом из общего количества заболевших животных на долю крупного рогатого скота проходится 42,3 %, лисиц - 21,12 %, собак - 14 %, овец- 11,7 %, лошадей - 6 %, кошек - 2,9 %, другие виды животных -1,98 %. В указанный период бешенство регистрировалось у 301 головы домашних животных, в том числе у 249 собак (82,9 %) и 52 кошек (17,1 %), а также у 304 диких животных, в том числе у лисиц -282 (92,8 %), волков - 5 (1,6 %), рыси - 4 (1,4 %), лосей - 5 (1,6 %), барсуков -3 (1,0 %), енотовидных собак- 5 (1,6 %).

Анализ заболеваемости животных по сезонам года за период с 2000 по 2007 гг. показал, что в республике имеет место сезонные колебания проявления болезни. Установлено, что максимальное количество больных животных регистрируется в зимние (45,9 %), весенние (32,5 %) и осенние (14,6 %) месяцы года. Минимальное количество больных животных отмечалось летом (7 %). Аналогичная тенденция заболеваемости прослеживается и среди диких животных. В проявлении эпизоотии бешенства наблюдается периодичность, характе-

ризуюшаяся подъемом и спадом через каждые 2-3 года. При этом выявлено, что максимумы заболеваемости среди сельскохозяйственных, домашних и диких животных, а также периодичность их проявления совпадают.

Год

□ Собаки В Кошки

Рисунок 1 Заболеваемость бешенством собак и кошек в Республике Башкортостан (абсолютные показатели)

Результаты изучения эпизоотической ситуации по бешенству в разрезе районов и природных зон республики показали неравномерность его распространения. При этом на основе расчета индекса эпизоотичности и напряженности эпизоотической ситуации выявлены районы с высокими, средними и низкими значениями названных показателей. На основании проведенного эпюо-отологического анализа распространения бешенства нами составлена карта-схема районирования территории республики, которая включает 4 зоны:

- первая, наиболее опасная, в которую входят административные районы республики, где в период с 2000 по 2007 гг. бешенство регистрировалось в 30 и более пунктах. К ним отнесены следующие районы: Куюргазинский, где бешенство установлено в 78 пунктах, Бижбулякский - 75, Бирский - 63, Бака-линскнй - 38 и др. Показатель распространенности болезни для этой зоны варьировал от 57,2 до 85,3 %;

- вторая, средней степени опасности, в которую входят районы, где в указанный период заболевание регистрировалось от 10 до 30 пунктов. Это такие районы, как Илишевский - 25 неблагополучиях пунктов, Альшевский - 23,

Стерлибашевский - 23 и др. Показатель распространенности болезни был в пределах от 29,3 до 57,1 %;

- третья, со слабой степенью опасности, в которую отнесены районы, в которых бешенство регистрировалось за исследуемый период от 1 до 10 пунктов. К этим районам относятся Иглинский (9 пунктов), Нуримановский (8 пунктов) и др. Для этой зоны показатель распространенности бешенства колебался от 1,4 до 29,2%;

- к четвертой зоне отнесены районы (Белорецкий, Мечетлинский, Дуван-ский, Кигинский), где за исследуемый период случаи бешенства среди животных не регистрировались.

2.2.2 Лабораторная диагностика бешенства и изучение некоторых биологических свойств выделенных в Республике Башкортостан шолятов вируса

Обнаружение" антигена вируса в патологическом материале проводили с помощью МФА, ИФА, а выделение вируса осуществляли биопробой на белых мышах и культуре клеток НГУК-1.

При исследовании 160 проб, полученного от павших с подозрением на бешенство животных, вирусу бешенства выделен в 117 случаях (73,1 %) биопробой на белых мышах. Заражением культуры клеток НГУК-1, с последующим исследованием методом флуоресцирущих антител, получены совпадающие с биопробой результаты. Эпизоотические изоляты не оказывали цигопати-ческого действия на культуру клеток и обнаруживались по МФА через 24-72 ч после заражения в виде ярких желтовато-зеленых гранул различной формы и величины - от едва заметных до имеющих 15-29 мкм в диаметре.

При исследовании по МФА мазков-отпечатков из тех лее проб патологического материала антиген вируса был выявлен в 113 случаях при этом совпадение с результатами биопробы на мышах составило 96,6 %. Аналогичные высокие результаты были получены и методом ИФА. В ИФА положительные результаты наблюдались в 114 случаях. При этом вирусспецифический антиген выявлялся в суспензиях из тканей мозга в тиграх от 1:10 до 1:320 при коэффициенте специфичности равным 2,1 и более. Следует отметить, что использование в ИФА заранее сенсибилизированных специфическим иммуноглобулином планшет, позволяет получать результаты в течение 3-4 часов. Кроме того, с помощью ИФА удавалось выявлять рабический антиген в разложившемся пат-материале, т.е. в тех случаях, когда при исследовании таких материалов по МФА наблюдается фоновое свечение.

Таким образом, использование диагностических методов (выделение возбудителя болезни в культуре клеток НГУК-1, МФА, ИФА) с применением разработанных во ВНИВИ диагностических наборов, расширяют возможности лабораторной диагностики бешенства, способствуют целенаправленному проведению противоэпгооотических мероприятий.

Реакция вируснейгрализации, поставленная с выделенными юолятами вируса и гипериммунной сывороткой овец, иммунизированных вакцинным штаммом «Овечий» ГНКИ вируса бешенства во всех случаях была положительной. Это подтвердили данные, полученные нами в диагностических исследованиях, свидетельствующие о том, что циркулирующие в Республике Башкортостан изоляты рабического вируса в антигенном отношении родственны с вакцинным штаммом «Овечий» вируса бешенства. В дальнейших опытах установлена патогенность выделенных изолятов вируса бешенства для мышей, морских свинок и кроликов. При этом у изолятов изучалась вирулентность на белых мышах по индексу инвазивности, который определяли как разницу тигров в пересчете на 1 мл вирусной суспензии при инграцеребральном и подкожном заражении. Индекс инвазивности варьировал от 1,8 до 3,2. В четырех случаях наблюдалось выздоровление мышей после их клинического переболева-ния бешенством, т.е. эти изоляты были слабо патогенными.

Таким образом, на основании изучения иммунобиологических свойств штаммов вируса бешенства, циркулирующих на территории Башкортостана, установлена патогенность их для сельскохозяйственных животных, домашних и лабораторных животных. Показано антигенное родство эпизоотических штаммов рабического вируса с вакцинным. Исследованные штаммы не оказывали цигопатического действия и выделялись в культуре клеток НГУК-1 с последующим анализом МФА.

2.2.3 Модификация и применение непрямого варианта ИФА для определения специфических антител в сыворотке крови животных, вакцинированных против бешенства

Для обнаружения специфических антител к вирусу бешенства применяли непрямой метод ИФА, разработанный Н.А.Хисматуллиной и Р.Х.Юсуповым (1988) в нашей модификации. Модификация заключалась в использовании в качестве антигена для сенсибилизации планшет вируса бешенства, штамм «Овечий» ГНКИ, выращенного в культуре перевиваемых клеток, вместо рекомендованного ранее рабического антигена, шготовленного из мозговой ткани зараженной овцы. Установлено, что при сенсибилизации оптимальной является адсорбция антигена в концентрации 10 мкг/мл, время инкубации 3 ч при рН буферного раствора 9,6.

Результаты исследования в ИФА сывороток крови сельскохозяйственных животных, вакцинированных против бешенства, представлены в табл. 2.

Таблица 2 Результаты определения специфических антител с помощью ИФА в сыворотках крови вакцинированных против бешенства животных

Вид животного, количество проб Титры антител

и сроки исследования 1:50 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600

Крупный рогатый скот -

всего 413 проб, в том числе:

45 через 1 мес. после вакцинации 45 45 45 45 36 6

87 через 2 мес. после вакцинации 87 87 87 80 7 -

16 через 3 мес. после вакцинации 16 16 16 10 6 -

112 через 4 мес. после вакцинации 112 112 112 100 12 -

10 через 5 мес. после вакцинации 10 10 10 - - -

36 через 6 мес. после вакцинации 36 36 36 - - -

5 через 7 мес. после вакцинации 3 2 - - - - -

90 через 8 мес. после вакцинации 87 - - - - -

10 через 9 мес. после вакцинации 3 - - - - -

Лошади -

всего 14 проб, в том числе:

4 через 7 мес. после вакцинации 4 4 - - - -

10 через 6 мес. после вакцинации 10 - - - - -

Овцы -

всего 18 проб, втом числе:

7 через 2 мес. после вакцинации 7 7 7 4 3 -

6 через 5 мес. после вакцинации 6 6 6 - - -

5 через 7 мес. после вакцинации 3 .5 - - - -

Примечание: «-» - реакция отрицательная

Показано, что модифицированный нами антигенный вариант ИФА позволяет выявлять специфические антитела к вирусу бешенства. В этих опытах исследовано 49 проб сывороток крови овец и кроликов, гипериммуншированных вирусом бешенства, штамм «Овечий», в условиях лабораторий ВНИВИ. При этом все сыворотки, содержащие комплеменгсвязывающие антитела, были положительны во всех случаях и в ИФА. Однако показатели ИФА были выше (100-200 раз) в РДСК.

При исследовании в параллельных опытах 25 проб сывороток крови в ИФА и РВН на белых мышах установлена прямая корреляция между показате-

лями тигров антител в этих реакциях. Так, тигру антител в ИФА равному 1:100 соответствовал тигр антител в РВН 22,67±2,3 (обратное, усредненное значение), 1:200- 26,8±2,08.

Как видно из табл. 2 высокое содержание специфических антител в сыворотках крови всех видов животных установлено в первые 6 месяцев после вакцинации (тигры 1:200 - 1:600). В последующие сроки - на 7, 8, 9 месяцы после вакцинации наблюдается снижение уровня антител.

2.2.4 Усовершенствование системы противоэпшоотических мероприятий по борьбе с бешенством в Республике Башкортостан

Результаты проведенных исследований и литературные данные показывают, что пути совершенствования ангирабических эпизоотических мероприятий должны основываться на особенностях краевой эпизоотологии бешенства, результатах изучения биологии возбудителя, его носителей, диагностики заболевания, а также на данных климатогеографических, метеорологических и экологических факторов.

Анализ мероприятий по борьбе с бешенством в Республике Башкортостан свидетельствуют, что Государственная ветеринарная служба, согласно действующим инструкциям и другим документам, проводит значительные диагностические исследования, уничтожение больных бешенством животных, возбудителя в очагах заболевания, сгглов и отстрел бездомных собак и кошек. Силами других ведомств проводится отстрел лисиц и волков. Несмотря на принятые меры в республике улучшения эпизоотической ситуации пока не достигнуто. Как уже отмечалось, бешенство в отдельных районах, особенно лесостепной и степной зонах имеет значительное распространение. Так, только за последние два года, наибольшее количество случаев бешенства зарегистрировано в Бирском, Зианчуринском, Куюргазин-ском, Бижбулякском и других районах. Только лишь в январе 2006 года бешенство установлено в 127 пунктах 41 района республики. Отмечен случай гидрофобии с летальным исходом в деревне Старо-Базаново Бирского района.

Учитывая стационарное неблагополучие многих районов Башкортостана, нами, совместно с Управлением ветеринарии при МСХ РБ, разработаны дополнительные меры, которые вошли в план комплексных мероприятий по борьбе с бешенством сельскохозяйственных, домашних и диких животных и профилактике бешенства среди людей в Республике Башкортостан на 2006 - 2010гг., утвержденный заместителем Премьер-министра Правительства Республики Башкортостан Ф.А. Ямалтдиновым, 3 октября 2005 г.

Указанным постановлением, в частности, предусмотрены:

- усиление контроля Управлением ветеринарии при МСХ Республики Башкортостан за выполнением в республике всего комплекса мероприятий, предусмотренных ветеринарным законодательством, улучшение работы ветеринарной службы в части проведения регистрации и ежегодной перерегистрации собак в городах и населенных пунктах, усиление специальных мероприятий по предупреждению бешенства;

- усиление контроля Министерством жилищно-коммунального хозяйства Республики Башкортостан за соблюдением установленных правил содержания собак и кошек в городах и других населенных пунктах, улучшение работы подведомственных организаций по отлову безнадзорных животных;

- организация Министерством по чрезвычайным ситуациям и экологической безопасности Республики Башкортостан отстрела диких плотоядных (лис, волков, енотовидных собак), имеющих клинические признаки заболевания бешенством, а также принятие неотложных мер по снижению их численности путем отлова и отстрела в течение года; -

- постоянное содействие городскими и районными отделами внутренних дел местным организациям, службам жилищного коммунального хозяйства, ветеринарным учреждениям в выполнении мероприятий, направленных на борьбу с бешенством;

- систематическое проведение Управлением Роспотребнадзора по Республике Башкортостан широкой медико-санитарной пропаганды среди населения о мерах профилактики заболевания гидрофобией людей.

Исходя из эпизоотической ситуации в районах, входящих в первую и вторую зоны опасности, рекомендуем проводить вакцинацию всего поголовья сельскохозяйственных и домашних животных в течение 2-3-х лет. В хозяйствах третьей зоны вакцинацию животных следует проводить лишь в неблагополучных пунктах.

Известно, что успех борьбы с бешенством зависит не только от защитных, но и от наступательных действий, направленных на снижение эпизоотической ситуации в природных очагах. В этой связи представляется перспективной оральная иммунизация диких плотоядных ангирабической сухой вирусвакци-ной в комплексе с активными мероприятиями по регуляции их численности. Нами рекомендовано организовать оральную иммунизацию лисиц в первую очередь на территории районов (Бирский, Бакалинский и др.), входящих в первую и вторую зоны опасности. При этом в зонах иммунизации необходимо организовать регистрацию очагов природного бешенства, лабораторное исследование на бешенство обнаруженных трупов диких животных, изучить иммуно-

биологические свойства выделенных в этих зонах вируса бешенства, определить плотность популяций лисиц и место расположения их нор.

Раскладывание вакцины в виде приманок, контроль за их поеданием должна проводить егерская служба совместно с ветеринарными специалистами. Всех павших с подозрением набешенстю диких и домашних животных в зоне вакцинации необходимо исследовать в практических ветеринарных лабораториях. Однофеменно важным является определение содержания специфических антител в сыворотке 1фови орально иммунизированных лисиц. Для этого сл еду етпроводитьо тстр ел л и сиц в зо н е и мму низации ч ер ез 25-30 дн ей по сл е раскладки приманки с вакциной.

Согласно рекомендациям ВОЗ (1982) для объективной оценки оральной иммунизации эпизоотолошческий надзор, включающий обследование лис и других диких животных на присутствие антигенных маркеров бешенства и уровней антител, необходимо продолжать в течение нескольких лет после её проведения.

Необходимо отметить, что с осени 2000 года Управлением ветеринарии при МСХ Республики Башкортостан совместно с ветслужбой районов начата оральная иммунизация лисиц с применением вирусвакцины антарабичесшй сухой и «Оралрабивак» для иммунизации диких плотоядных животных, организовано эпизоотологииесюе наблюдшие в этих районах.

ВЫВОДЫ

1. Впервые представлена комплексная характеристика эпизоотической ситуации по бешенству в Республике Башкортостан запериод с2000 по 2007 гт.

2. За исследуемый период (2000 - 2007 гг.) бешенство зарегистрировано в 986 пунктах (41 районе и 10 городах), в которых заболело 1376 животных, в том числе 771 сельскохозяйственное, 301 домашнее и 304 диких. Максимальная заболеваемость бешенством среди заболевших животных установлена у крупного рогатого скота (423 %), домашних -- у собак (14 %), и диких - у лисиц (21,12 %). Установлено, что основными носителями и распространителями вируса бешенства в Республике Башкортостан являются лисицы и безнадзорные собаки.

3.По показателям уровня распространенности болезни и степени эпизоотической напряженности районы Башкортостана разделены на 4 зоны. Для первой зоны показатель распространенности бешенства составляет от 572 до

85,3 %, второй от 29,3 до 57,1 %, третьей - от 1,4 до 29,2 %. К четвертой зоне отнесены районы, где бешенство за исследуемый период не регистрировалось.

4. Проведено картографирование неблагополучных районов Республики Башкортостан. Установлено, что бешенство в большей степени распространено в степной и лесостепной зонах юго-западной, северо-западной, а также юго-восточной частях республики. Выявлено, что неблагополучные районы Республики Башкортостан граничат с неблагополучными районами по бешенству Республики Татарстан, Оренбургской и Челябинской области.

5. Выявлена двух - трехлетняя периодичность заболеваемости животных с максимальным его проявлением в осенние, зимние, весенние периоды года, что связано с биологией лисиц.

6. При исследовании 160 проб патологического материала от животных, подозреваемых в заражении бешенством, методами ИФА, МФА, РВН и биопробой на мышах выделено 117 шолятов с положительным диагнозом. Установлено их антигенное родство с вакцинным штаммом «Овечий» ГНКИ вируса бешенства и патогенность для лабораторных животных. Выявлено 4 случая абортивного течения болезни. Выделенные изоляты вируса бешенства размножались в культуре клеток НГУК - 1 без проявления цигопатического действия и обнаруживались по МФА на вторые - третьи сутки после заражения.

7. Модифицирована иммуноферменгная тест-система, с применением инактивированного культурального антигена ив штамма «Овечий» ГНКИ вируса бешенства, обеспечивающая выявление специфических антител в сыворотках крови животных, иммунизированных против бешенства и проведение контроля эффективности вакцинопрофилактики. При титровании 72 проб сывороток крови от животных в ИФА, РДСК и РВН на белых мышах установлена специфичность и высокая чувствительность ИФА. Чувствительность ИФА превосходит таковую в РДСК в 100-200 раз.

8. Исследованием 413 проб сывороток крови шести различных видов животных, вакцинированных культуральной инактивированной ангирабической вакциной из штамма «Щелково-51», методом ИФА установлено наличие специфических антител к вирусу бешенства, с максимальным их уровнем в первые шесть месяцев после иммунизации с последующим снижением к девятому месяцу (срок наблюдения).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для создания устойчивой иммунологической защиты к вирусу бешенства у сельскохозяйственных и домашних животных в стационарно неблагополучных районах Республики Башкортостан рекомендуем проводить вакцинацию всего поголовья в течение двух-трех лет.

2. В целях снижения эпизоотии бешенства в Республике Башкортостан рекомендуем проводить оральную иммунизацию лисиц в сочетании с регулированием их численности.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Янбарисова, С. Р. Применение методов диагностики бешенства в отделе вирусологии БашНПВЛ за период 1996-2000 гг. /С. Р. Янбарисова, Л. Г. Доронина, P.P. Хаерзаманова, М. С. Гайсаров // Научные труды БашНПВЛ.- Уфа -ИПК при АП РБ, 2002. - С. 130-133.

2. Галеев, Р. Ф. Экспресс - методы лабораторной диагностики и эпизоотические аспекты бешенства животных в Республике Башкортостан / Р. Ф. Галеев, С. Р. Янбарисова, М.С. Гайсаров // Практик. - 2003. - № 3-4. - С. 42-44.

3. Галеев, Р.Ф. Сравнительная характеристика экспресс-методов диагностики бешенства домашних и диких животных в Республике Башкортостан / Р.Ф. Галеев, С.Р. Янбарисова, М.С. Гайсаров // Достижения аграрной науки -производству: материалы 110-ой научно-практической конференции преподавателей, сотрудников и аспирантов университета. - Уфа, 2004. - С. 3-5.

4. Янбарисова, С. Р. Эпизоотологическая характеристика и динамика заболеваемости животных бешенством в Республике Башкортостан / С.Р. Янбарисова, М.С. Гайсаров, Р. Ф. Галеев // Современные проблемы иммуногенеза, теории и практики борьбы с паразитарными и инфекционными болезнями с.-х. животных: материалы междунар. науч.- пракгич. конференции, посвященной 90-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РФ и РБ, доктора ветеринарных наук, профессора X. В. Аюпова и 55-летию кафедры паразитологии, микробиологии и вирусологии БГАУ. - Москва-Уфа, 2004. - С. 334-335.

5. Гайсаров, М. С. Эпизоотологическая характеристика бешенства животных в Республике Башкортостан и совершенствование мер борьбы с ним. / М. С. Гайсаров, Р.Ф. Галеев // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. - 2007. - №1(13). - С.17-18.

6. Янбарисова, С. Р. Оценка эффективности методов лабораторной диагностики бешенства в условиях Республики Башкортостан / С. Р. Янбарисова, Н. А. Хнсматуллина, М. С. Гайсаров // Ветеринарный врач. - 2008. - №1. - С. 46-49.

7. Гайсаров, М. С. Эпизоотическая ситуация по бешенству в городе Стер-лигамаке Республики Башкортостан в 2007 году и меры борьбы с заболеванием // М. С. Гайсаров // «Интеграция аграрной науки и производства: состояние, проблемы и пути решения»: материалы всероссийской научно-практической конференции с международным участием в рамках XVIII международной специализированной выставки «АгроКомплекс - 2008»: Часть III, Уфа, ФГОУ ВПО «Башкирский ГАУ», 2008- С. 24-25.

Лицензия РБ на издательскую деятельность №0261 от 10 апреля 1998г. Лицензия на полиграфическую деятельность № Б 848366 от 21.06.2000 г. Отпечатано с готовых диапозитивов

Подписано в печать « % » Р( 2009 г. Формат 60x84 /¡6. Усл. печ. л. 1,40. Уч.-изд.л.1,22. Бумага офсетная Гарнитура Тайме. Печать трафаретная. Заказ Я- Тираж 100 экз. Издательство ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет». Типография ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет». Адрес издательства и типографии: 450001, г. Уфа, ул. 50-лет Октября, 34.

Актуальность темы. Реструктуризация сельскохозяйственного производства России неоднозначно отразилась на эпизоотическом состоянии животноводства и на эффективности противоэпизоотических мероприятий. Разработанные для социалистического строя и традиционно используемые сис-» темы противоэпизоотического обеспечения животноводства в современных условиях оказались недостаточно действенными и надежными. В ряде субъектов Федерации возросли эпизоотическая и эпидемическая значимость зоо-нозных болезней, участились рецидивы хронических болезней животных.

К числу опасных зоонозов в РФ продолжают относиться бешенство более того - за последние годы в ряде регионов усложнилась эпизоотическая ситуация по этому зоонозу, выявлены регионы с его территориальной приуроченностью (Г. Н. Сидоров, 1995; А. В. Борисов, 2003; А. В. Савин, 2004; А. В. Иванов, 2006; С. В. Филатов, 2006).

Последние 50 лет ознаменовались в мире интенсивным развитием методологии в эпидемиологии и эпизоотологии, в систему противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий включены эпидемиологический и эпизоотический надзор. Уделяется должное внимание совершенствованию эпцзоотологической диагностики и эпизоотологического надзора при зоонозах (И.А. Бакулов, 1986; С.И. Джупина, 1983, 1991; В.П. Урбан, 1998; В.В. Макаров, 1999; В.В. Сочнев, 1998; A.M. Смирнов, 2004).

Сложилось мнение "о необходимости рассматривать заразные болезни животных не как случайное явление, а как отражение фило- и онтогенетиj чески обусловленных взаимоотношений между популяциями макро- и микроорганизмов (В.В. Макаров, 1999).

Весьма актуальными для ветеринарной науки являются разработка и внедрение карт эпизоотологического надзора при зоонозах, особенностями которых являются специфичность и системный подход к конкретной нозоединице, как к сформировавшейся и функционирующей паразитарной системе. Однако комплексный подход не всегда реализуется в практической ветеринарии.

По данным международных ветеринарных организаций, бешенство включено в группу трансмиссибельных болезней, имеющих существенное значение в области общественной экономики и здравоохранения в пределах конкретных стран мира, а также в организации международной торговли животными и животноводческими продуктами. В настоящее время эти зоонозы определяют эпизоотическое и эпидемическое состояние во многих странах мира, в том числе и в России, а в последние годы эпизоотическая ситуация по рабической инфекции приобрела тенденцию к усложнению. Активизируются аутохтонные и формируются антропургические очаги этой инфекции.

Несмотря на проводимые мероприятия в стране ограничить распространение рабической болезни, полностью ликвидировать бешенство животных на территории конкретных субъектов РФ до сих пор не удалось, а многие аспекты функционирования паразитарных систем бешенства до сих пор остаются недостаточно изученными (В.А. Седов, 1972; В.Ю. Литвинов, 1999; Н.А. Хисматуллина, 1999, 2001; Н.В. Филиппов, 2001; В.В. Не-досеков, К.Н. Груздев, 2000; В.В. Макаров, В.А. Ведерников, С.И. Джупи-на, 2002; В.М. Авилов и Др., 2004).

Широкое распространение бешенства в регионах Среднего и Нижнего Поволжья, а также потребность совершенствования системы антирабических мероприятий определили выбор темы и направления наших исследований.

Бешенство занимает исключительно важное место в инфекционной патологии. Восприимчивость к заболеванию им всех видов домашних и диких животных, огромная опасность для человека определяют его социальное и экономическое значение и привлекают к нему пристальное внимание ветеринарной, медицинской науки и практики (С. И. Джупина, 1994; В. С. Иванов, 2001, 2006; А. В. Саввин, 2004; С. М. Попандуполо и др., 2007; АГЕ. Метлин, 2008; С. Р. Янбарисова и др., 2008; К. Gamoh, 2007; М. Smreszak et al., 2008; Н. В. С. R. Batista, 2008). Несмотря на значительные успехи в его изучении борьба с ним затруднена из-за широкой циркуляции вируса в природе. В некоторых зонах нашей страны это привело к росту заболеваемости сельскохозяйственных животных (В.А. Седов, 1972; В.Ю. Литвинов, 1999; Н.А. Хисматуллина, 1999,2001; Н.В. Филиппов, 2001; В.В. Недосеков, К.Н. Груздев, 2000; В.В.'Макаров, В.А. Ведерников, С.И. Джупина, 2002; В.М. Авилов, В.В. Сочнев и др., 2004; Р. В. Галлиулина и др., 2005; В. В. Макаров, 2005).

Видное место в борьбе с бешенством принадлежит ранней диагностике, которая служит основанием о необходимости проведения лечебно-профилактических и противоэпизоотических мероприятий (М. А. Селимов, 1975; М. М. Kaplan,1975).

Для диагностики и выявления возбудителя бешенства разработаны и предлагаются различные методы: морфологическое исследование (Babes, 1892; A. Negri, 1903; P. Lepine,1975), реакция диффузионной преципитации в агаровом геле,(Г. А. Коломакин и др., 1970; К. Н. Бучнев,1971; СмирМ. М. Смирнова, 1973; Villemot et Provost, 1958); метод иммунофлуоресценции (К. Ф. Бусыгин,1983; М. А. Селимови др.,1978; А. С. Шашенъко, 1971,1990; Р. X. Юсупов и др., 1986;Coons et Kaplan,1950, Goldvasser et Kissling, 1958 et al.); биологическая проба на лабораторных животных (С. А. Барановская и др.,1936; L. Т. Webster; G. R. Dawson, 1935). В целом, указанные лабораторные методы обеспечивают постановку диагноза бешенства. Однако, все они в той или иной степени обладают различными недостатками. Так, тельца Бабеша-Негри, их' величина и количество непосредственно зависят от продолжительности клинического периода болезни. При проведении реакции диффузионной преципитации положительный результат регистрируется только в тех случаях, когда имеется достаточная концентрация вирусного антигена. Метод иммунофлуоресценции уступает по чувствительности биопробе. Биологическая проба требует продолжительного времени наблюдения за подопытными животными до 30 суток (ГОСТ 26075-84).

В последнее время для ускоренной лабораторной диагностики вирусных болезней животных интенсивно развивается метод иммуноферментного анализа, основанный на соединении антигена с антителом с последующим выявлением иммунного комплекса с помощью меченных ферментом антител (И. Ф. Вишняков и др., 1983; Н. А. Хисматуллина и др.,1985,1995; P. X. Юсупов и др., 1989,1995; Engvall Е. and Perlman P., 4971). Явными преимуществами этого теста являются простота и быстрота выполнения, высокая чувствительность, доступность и стабильность реагентов, возможность автоматизации процесса и объективность инструментального учета результатов (В. А. Мищенко и др., 1990,1993).

В плане усовершенствования способов обнаружения возбудителя бешенства в последние годы предлагается использовать метод выделения уличного рабического вируса в культуре клеток неврального происхождения (A. L. Smith et all., 1978; R. G. Rudd et al. 1983; W. A. Webster, 1987). Обнадеживающими в этом отношении оказалась линия клеток невриномы Гассерова узла крысы (НГУК-1). Показано, что в данной культуре клеток уличный рабический вирус может быть выделен в значительно более ранние сроки (3 суток), чем при интрацеребральной инокуляции мышей (до 30 суток) (П. А. Авцын и др., 1984; А. Г. Татаров и др., 1987,1988; Н. А. Хисматуллина, 1989; P. X. Юсупов и др.).

Перспективным направлением в диагностике бешенства является использование моноклональных антител, обладающих моноспецифичностью по сравнению с обычными антисыворотками и позволяющими выявлять антигенные различия между штаммами вируса бешенства и лиссаподобны-ми вирусами (М. А. Селимов, 1987; А. Д. Ботвинкин и др., 1989; Wiktor Т. et all, 1978, 1980).

По данным ряда авторов (В. П. Бычкова и др., 1996; В. JL Крупальник, 2006; М. В. Фоменко, 2006; Г. Г. Скворцов и др., 2007; В. И. Жестерев и др., 2007; Н. А. Ковалев, 2007; В. И. Клюкина и др., 2008; И. П. Барышников и др., 2008; В. В. Макаров в соавт., 2008), научно-обоснованные противоэпизооти-ческие и противоэпидемиологические мероприятия должны основываться на изучении особенностей расселения вирусоносителей в регионе, их экологии, пространственной структуры нозоареала с учетом территориальных и временных особенностей возможного распространения болезни, а также на своевременном выявлении возбудителя бешенства и изучении его биологических свойств.

Цель и задачи исследований. Цель работы - изучить и представить комплексную характеристику эпизоотической ситуации по бешенству в Республике Башкортостан и разработать на её основе предложения по усовершенствованию системы противоэпизоотических мероприятий.' В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по бешенству в Республике Башкортостан за период с 2000 по 2007 гг. с оценкой интенсивности эпизоотического процесса по годам и сезонам, особенностей территориальной приуроченности BcnbiinteK болезни.

2. Выяснить роль разных видов животных в сохранении и распространении рабического вируса в природе.

3. Исследовать биологические свойства эпизоотических штаммов вируса бешенства, циркулирующих на территории Республики Башкортостан.

4. Модифицировать метод иммуноферментного анализа для выявления специфических антител при бешенстве.

5. Проанализировать эффективность профилактических мероприятий л, клинико-эпизоотологическими и лабораторными методами.

6. Усовершенствовать систему организационных и специальных мероприятий по борьбе с бешенством в Республике Башкортостан.

Научная новизна работы заключается в том, что впервые проведен ветеринарно - географический анализ распространения бешенства на территории Республики Башкортостан за 2000-2007 гг. На основе изучения территориальной дифференциации динамики количественных показателей бешенства, а также сопряженного картографическо-эпизоотологического исследования ветеринарно-экологической ситуации по бешенству, разработана карта эпизоотологического районирования территории республики. Изучена биология, выделенных на территории Республики Башкортостан изолятов вируса бешенства, и установлено их антигенное сходство с вакцинным штаммом. Модифицирован непрямой метод иммуноферментного анализа для выявления антирабических антител в крови иммунизированных животных.

Теоретическая и практическая значимость^ работы. В результате проведенных исследований модифицированы методические указания по лабораторной диагностике бешенства, наставление по применению набора для выявления антирабических антител; планы организации мероприятий по борьбе с бешенством в Республике Башкортостан, которые применяются в ветеринарной практике согласно утвержденным нормативно-техническим документациям Управления ветеринарии при МСХ Республики Башкортостан.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Характеристика эпизоотической ситуации по бешенству в Республике Башкортостан за 2000:2007 гг. и районирование территории республики по степени распространения заболевания.

2. Анализ заболеваемости бешенством среди разных видов животных и их роль в развитии эпизоотического процесса.

3. Научно-теоретическое обоснование путей усовершенствования антирабических мероприятий с учетом эпизоотической ситуации и результатов т мониторинга болезни в Республике Башкортостан.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и одобрены на научной конференции, посвященной 105-летию образования БашНПВЛ в Башкортостане (Уфа, 2002 г.); 110-ой научно-практической конференции преподавателей, сотрудников и аспирантов университета «Достижения аграрной науки - производству» (Уфа, 2004 г.); Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РФ и РБ, доктора ветеринарных наук, профессора X. В. Аюпова и 55-летию кафедры паразитологии, микробиологии и вирут сологии БГАУ «Современные проблемы иммуногенеза, теории и практики борьбы с паразитарными и инфекционными болезнями с.-х. животных» (Москва - Уфа, 2004 г.); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием: «Интеграция агарной науки и производства: состояние, проблемы и пути решения», (Уфа, 2008 г.); расширенном заседании кафедры «Паразитология, микробиология и вирусология» ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» (протокол №12 от 27 июня 2007 г.).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано семь статей, в т. ч. две в центральных изданиях, рекомендованных ВАК Российской.Федерации для публикации материалов кандидатских диссертаций («Известия Оренбургского государственного аграрного университета», «Ветеринарный врач»).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 109 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов полученных исследований, выводов и практических предложений. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 3 рисунками. Библиографический список включает 242 работы, в том числе 64 иностранных авторов.

ВЫВОДЫ

1. Впервые представлена комплексная характеристика эпизоотической ситуации по бешенству в Республике Башкортостан за период с 2000 по 2007 гг.

2. За исследуемый период (2000 - 2007 гг.) бешенство зарегистрировано в 986 пунктах (41 районе и 10 городах), в которых заболело 1376 животных, в том числе 771 сельскохозяйственное, 301 домашнее и 304 диких. Максимальная заболеваемость бешенством среди заболевших животных установлена у крупного рогатого скота (42,3 %), домашних - у собак (14 %), и диких - у лисиц (21,12 %). Установлено, что основными носителями и распространителями вируса бешенства в Республике Башкортостан являются лисицы и безнадзорные собаки.

3. По цоказателям уровня распространенности болезни и степени эпизоотической напряженности районы Башкортостана разделены на 4 зоны. Для первой зоны показатель распространенности бешенства составляет от 57,2 до 85,3 %, второй от 29,3 до 57,1 %, третьей - от 1,4 до 29,2 %. К четвертой зоне отнесены районы, где бешенство за исследуемый период не регистрировалось.

4. Проведено картографирование неблагополучных районов Республики Башкортостан. Установлено, что бешенство в большей степени распространено в степной и лесостепной зонах юго-западной, северо-западной, а также юго-восточной частях республики. Выявлено, что неблагополучные районы Республики Башкортостан граничат с неблагополучными районами по бешенству Республики Татарстан, Оренбургской и Челябинской области.

5. Выявлена двух трехлетняя периодичность заболеваемости животных с максимальным его проявлением в осенние, зимние, весенние периоды года, что связано с биологией лисиц.

6. При исследовании 160 проб патологического материала от животных, подозреваемых в заражении бешенством, методами ИФА, МФА, РВН и t биопробой на мышах выделено 117 изолятов с положительным диагнозом. Установлено их антигенное родство с вакцинным штаммом «Овечий» ГНКИ вируса бешенства и патогенность для лабораторных животных. Выявлено 4 случая абортивного течения болезни. Выделенные изоляты вируса бешенства размножались в культуре клеток НГУК-— 1 без проявления цитопатического действия и обнаруживались по МФА на вторые — третьи сутки после заражения.

7. Модифицирована иммуноферментная тест-система, с применением инактивированного культурального антигена из штамма «Овечий» ГНКИ ви-t руса бешенства, обеспечивающая выявление специфических антител в сыворотках крови животных, иммунизированных против бешенства и проведение контроля эффективности, вакцинопрофилактики. При титровании 72 проб сывороток крови от животных в ИФА, РДСК и РВН на белых мышах установлена специфичность и высокая чувствительность ИФА. Чувствительность ИФА превосходит таковую в РДСК в 100-200 раз.

8. Исследованием 413 проб сывороток крови шести различных видов животных, вакцинированных культуральной инактивированной антирабической вакциной из штамма «Щелково-51», методом ИФА установлено нали-* чие специфических антител к вирусу бешенства, с максимальным их уровнем в первые шесть месяцев после иммунизации с последующим снижением к девятому месяцу (срок наблюдения).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для создания устойчивой иммунологической защиты к вирусу бешенства у сельскохозяйственных и домашних животных в стационарно неблагополучных районах Республики Башкортостан рекомендуем проводить вакцинацию всего поголовья в течение двух-трех лет.

2. В целях снижения эпизоотии бешенства в Республике Башкортостан рекомендуем проводить оральную иммунизацию лисиц в сочетании с регулированием их численности.