Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Динамика иммуноглобулинов и бактериоценоза в организме ягнят в раннем постнатальном онтогенезе

'I о им

- ДПР 1994

российская академия сельскохозяйственных наук

(расхн)

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ им. Я. Р. КОВАЛЕНКО

(ВИЭВ)

На правах рукописи

УСАЧЕВ Иван Иванович

ДИНАМИКА ИММУНОГЛОБУЛИНОВ И БАКТЕРИОЦЕНОЗА В ОРГАНИЗМЕ ЯГНЯТ В РАННЕМ ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва — 1994 г.

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии имени Я- Р. Коваленко.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор В. Ф. Поляков

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Р. В. Боровик

(НИЦ ТБ),

доктор биологических наук М. М. Интизаров (МВА)

Ведущее учреждение — Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии (г. Воронеж)

Защита диссертации состоится « it » QjuufXof- 1994 г в часов на заседании специализированного совета

К 020.28.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии имени Я- Р. Коваленко. Адрес: 109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ.

Автореферат разослан « fa » t^L^cf^K 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат ветеринарных наук

Ф. Г. Терешков

Актуальность темы. Профилактика и лечение болезней новорожденных сельскохозяйственных животных, в том числе и оьец, является одной из наиболее важных задач научной и практической ветеринарки,

В последнее десятилетие в естественной среде обитания животных и человека произошли значительные изменения. Возрастающие воздействия на животных ряда факторов, таких, как токсические вещества, ионизирующая радиация, загрязнение атмосферы экологически вредными компонентами, вызывают неизбежную перестройку отдельных систем и всего организма в целом.

В настоящее врем у различных видов животных наблюдается угнетение деятельности иммунной системы и, как следствие этого, раное применяемые методы лечения и профилактики болезней, как правило, не дают желательных результатов.

Стало распространенным использование лечебных и профилактических средств в сочетании с иммуностимуляторами, что в определенной мере указывает на супрессии защитных механизмов животных (М.Т.Алиманов и А.В.Маджидов, 1991; В.А.Колесников, 1992).

Многие исследователи отмечают нарушения в микробно-эколо-гической срзде желудочно-кишечного тракта ясивотных, для нормализации которой все чаще приходится использовать различные виды пробиотиков (О.В.Чахава, Е.М.Горская, 1984 и др.).

Новые условия жизни, в которых оказались животные в последнее время, требуют более глубокого знания биологических особенностей организма на различных этапах его развития с целью изыскания новых принципов лечебных и профилактических мероприятий.

В связи с этим актуальным является изучение физаологичес-

ких, гематологических, иммунологических и микробиалогических особенностей животных на различных этапах их развития.

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований являлось изучение закономерностей становления гомаостаза ягнят в постнатальном онтогенезе. Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:

- изучена динамика физиологических а гематологических показателей у ягнят в онтогенезе;

- изучена динамика содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови и слизистой оболочке тонкого отдела кипечника;

- проведена сравнительная характеристика изменения содержания иммуноглобулинов сыворотки крова ж секреторных, тонкого отдела кишечника;

- изучена динамика содержания бифадобактерий, лактобакте-рий, эшерихий и энтерококков в организме ягнят по фекалиям.

Научная новизна. Впервые изучена динамика содержания иммуноглобулинов классов А, с, Ы в проксимальных, медиальных и дистальных частях двенадцатиперстной, тещей и подвздошной кишок у ягнят в процессе онтогенеза, а также у взрослых овец.

Определено становление микробной ассоциации, составлявшей основу бактериоценоза желудочно-кишечного тракта у ягнят в раннем постнатальном онтогенезе.

Практическая данность работы. Б результате проведенных исследований показана динамика основных физиологических и гематологических параметров у ягнят раннего периода развития.

На основе изучения иммуноглобулинов и бактериоценоза показано становление основных факторов защиты пищеварительной системы ягнят в динамике онтогенеза.

Полученные данные могут быть использованы в качестве фи-

зиологичёских норм при определении гематологических, иммунологических и микробиологических гюказат елей в различим возрастные периода кизни ягнят, при оценке состояния животных, а также в учебном процессе, при чтении лекций по нормальной и патологической физиологии, иммунологии и другим дисциплинам студентам -сельскохозяйственных учебных учреждений.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены ■л обсуждены на:

- заседании Ученого Совета ВИЭВ (1994);

- Межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ (1994).

Дублпквгши. Материалы диссертации отражены в двух научных

статьях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 1С. 5 страницах машинописного текста, вклвчает 22 таблицы, 20 рисунков и 4 фотографии и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, виэодов, практических предложений ж списка используемой литературы, включающего 96 отечественных и III иностранных источников.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и метопы. Работа выполнена в 1991-1993 гг. в экспериментальных условиях сектора гнотобиологии, а также на опытной базе Вышневолоцкого отделения ВИЭВ. При проведении опытов было использовано II взрослых овец 4-5-летнего возраста и 25 ягнят породы прекос.

Физиологические, гематологические исследования, а таете определение иммуноглобулинов в сыворотке крови проводила один раз в трое суток до 15-дневного возраста ягнят, затем один раз в 5 дней до 60-суточного их возраста.

Исследования иммуноглобулинов в слизистой тонкого отдела

кишечника проводили у ягнят в возрасте I, 7, 15, 30 и 60 суток.

Изучение количественного содержания бифидобактерий, лакто-бакторий, эшерихий и энтерококков в организме животных проводили в 2, 5, 10, 15, 30 и 60-суточном возрасте.

При выполнении работы использовали следумцие методы:

- определение температуры тола, частота пульса и дыхания, подсчет лейкоцитов и выведение лейкограммы - общепринятыми методами ;

- определение гемоглобина на аппарате ФЭК-м по А.Г.Турчлн-скому (1962);

- определение количества эритроцитов в крови на ФЭКе по методу В.Ф.Полякова, В.Т.Заблоцкого (1969);

- фагоцитарную активность лейкоцитоз крови методом Кост и Стенко (1969); при этом определяли процент фагоцитоза, индекс фагоцитоза и переваривающую активность клеток, в качестве тест-микроба использовали стафилококкус ауреус - I млд/мл;

- содержание иммуноглобулинов в слизистой оболочке тонкого кишечника животных определяли по Ю.Н.Масьянову и С.М.Сулеймано-ву (1991);

- содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови животных определяли по методу Мадчини в модификации Ю.Н.Федорова (1981);

- содержание микроорганизмов определяли в фекалиях методом последовательных десятичных разведений. С этой целью использовали стерильную дистиллированную воду и следующие питательные среда: модифицированную среду Блаурокка для выявления бифидобактерий; элективные среды для лактобактерий и энтерококков фирмы "Серва" (Германия); среду Эндо для выделения кишечной палочки.

Учет результатов проводили после 24 часов инкубации в тер-

мостате при 37°С, при этом обращали внимание на размеры, форму, цвет, наличие специфического запаха (лактобактерии - кисломолочный запах). Для визуального подтверкдения изучаемых микроорганизмов проводили микроскопию мазков, окрашенных по Грамму.

Все полученные данные обработаны методом вариационной статистики по Г.Ф.Лакину (1980).

РЕЗУЛЬТАТУ ИССЛЕДОВАНИЙ

Динамика физиологических и гематологических показателей у ягнят в ранний постнаталыгый период

Результаты проведенных нами исследований показали, что различные показатели гемеостаэа в процессе роста и развития ягнят подвергаются изменениям.

Так, температура тела колебалась от 39,6 до 40,0°С, т.е. находилась на верхней гршпщэ физиологической нормы. Полученные данные показывают, что у ягнят в период раннего яоетнаталь-ного развития (60 суток) температура тела не подвергается значительным колебаниям, что согласуется с работами других авторов (Д.М.Борисов, 1993; Ю.А.Любимов, 1971).

Частота пульса и дыхания у ягнят в процессе онтогенеза понижалась. У ¡тавотных односуточного Еозраста эти показатели составляли соответственно 167,0*1,0 и 67,0*1,0. В последующем, к 60 дню, частота пульса и дыхания ягнят находилась в пределах 123,0*1,0 и 40,6*0,7. Частый пульс а гдаание у ягнят первой недоли гагни и последующее их урежете мы объясняем постепенным функциональны!« становлением соответствующих систем, а также развертнвапием легких и норлалавацией их вентиляции.

Концентрация орзтрсцатов в крова ягаят 60-суточного возраста составляла 7,2*0,2 шгн/мкл, что достигало уровня взрослых овец.

Исследование реакции оседания эритроцитов (РОЭ) за I, 12 и 24 часа показало, что этот показателе зависит, с одной стороны, от времена учета реакции, с другой, согласно литературным данным (В.С.Кондратьев, 1981), от содержания в крови белка и других компонентов, увеличение количества которых приводит к ускорению СОЭ.

Так, у япгят с I по 4 сутки она бкла соответственно равна 1,0*0, 3,27*0,1 и 7,0*0,1 ш, что соответствовало взрослым овцам. Относительно высокая СОЭ объясняется высокой концентрацией белка (коллостралышх иммуноглобулинов) в крови ягнят первых дней жизни. В последующие дни результаты этой реакции у ягнят были ниже, чем у взрослых животных и к 60-суточному возрасту находились в пределах 1,0*0,1; 3,4*0,1 и 6,2*0,3 мм.

Следовательно, изменение количественного содержания компонентов крови находит свое отражение на скорости оседания эритроцитов.

Содержание гемоглобина в крови ягнят двухмесячного возраста находилось в пределах 9,6*0,4 т/%, что достигало уровня его содержания в крови взрослых овец.

Количество лейкоцитов у ягнят 60-суточного возраста составляло 7,8^0,1 тыс., что по сравнению с количественным содержанием этих меток у взрослых животных было ниже на 24$.

Дифференцированный подсчет лейкоцитов показал, что каждый вид этих клеток амеег свою динамику. Содержание юных, палочко-ядерных и сегментоядерных нейтрофилов в крова новорожденных животных соответствовало 3,% 0,3; 7,7+0,7 и 35,0*0,7$, которое уменьшалось с их возрастом. Существенное уменьшение их числа наблюдали в основном до 25-дневного возраста, после чего колебания юных нейтрофилов происходили в пределах от 0,3*0,3 до

1,0^0,7,'палстаоядерных от 3,0^0,7 до 1,0*0,7, сегментоядерных от 2.5,3±0,3 до 25,7-3,32. Число аозпнсфилов в крови ягнят до 2-мосячного возраста находилось на уровне 0,7-2,7%. Содержание базофплов колебалось от 0,3*0,3 до I,0^0,3$ а точение всего срока исследования. Моноциты в крови ягнят выявляли в пределах 3,0-6,3$. Содержание лимфоцитов к 60-сутачн°му возрасту животных увеличивалось и составляло 63,6^0,3$.

Исследования фагоцитарной активности лейкоцитов показали, что различные ее параметры имеют свои особенности. Так, процент фагоцитоза у ягнят одкосуточного возраста равнялся 74,0-2,7. Б последующем наблюдали уменьшение чиача клеток, участвухпдах в фагоцитозе. Фагоцитарный индекс также возрастал с первого по тридцатый день от 5,4-1,0 до 13,8^0,7, затем этот показатель у ягнят снижался и к концу исследований составлял П,1±0,4. Переваривающая активность лейкоцитов била максимальной в 25-30-дневнои возрасте - 10,1-1,0, потом уменьшалась и к концу исследований равнялась 5,6*0,2, что мэньиэ, чем у овец, на 38$. Полученные дивные согласуются с данными литературы (А.А.Кудрявцев, 1976; Э.П.Скрипхин, 1988; Г.А.Печникова, 1993), которые также откачаю? снижение фагоцитарной активности лейкоцитов у животных, в том числе и у ягнят, к 2-месячному их возрасту.

Динамика иммуноглобулинов в крови ягнят Проведенными исследованиями установлено, что в сыворотке крова овец количественное содержание иммуноглобулина класса о нахогдлссь в пределах 19,5+0,68, класса М - 4,1+0,27 иг/мл.

Наибольшее содержание иммуноглобулинов в сыворотка ягнят установлено в молозавкнй нэраод их хштаная. В частности, содержание 1еО в сыворотке крови в этот период было максимальным в

односуточном ах возрасте - 27,17^0,75 мг/мл, что составило 139,3$ к аналогичному классу иммуноглобулинов взрослых овец. К концу молозивного периода содержание иммуноглобулина а в сыворотке крова ягнят снижалось на 16% (с 27,17*0,75 до 21,3^3,3 мг/мл). Однако этот уровень превосходил значения взрослых овец на 9,2$. В последующем, в молочный период питания, уровень Хцв в сыворотке крова постепенно снижался и к 15-ти суточному возрасту достигал 17,5^3,1 мг/мл, что составляло 87,2? по сравнению с содержанием его в сыворотке крови взрослых овец. Выявлено, что количество Хвя в сыворотке крови ягнят снижается до 50-ти суточного возраста и находится в пределах 9,4-2,2 -9,0*2,0 мг/мл, то есть на 51,8-53,9$ меньше, чем у взрослых овец. Его уровень в сыворотка крови ягаят 60-суточного возраста не достигал величин взрослых овец на 44-36$.

Выявлено, что содержание в сыворотке крови новорожденных ягнят достигало максимума (5,7^0,1 мг/мл) также в однодневном возрасте, что на 40,7?? превосходило значение взрослых овец. В целом за молозивный период питания ягнят уровень 1бМ был ваше на 25-40$, чем у взрослых овец. В последующем, начиная с конца молозивного и в молочный период питания, в сыворотке крови ягнят содержание его было на 56-67? меньше, чем у взрослых овец.

С пятнадцатисуточного возраста содержание иммуноглобулина М в сыворотке крови ягнят возрастало и к концу исследований составляло 1,94*0,2 мг/мл, что на 52,7$ нихе, чем уровень аналогичного класса иммуноглобулинов у взрослых овец.

Установленные нами закономерности указывают на то, что в процессе онтогенеза в организме новорожденных ягнят имеются особенности в фсрьировании иммунологической защиты и адаптации организма к условиям внешней среды.

Динамика иммуноглобулинов в слизистой оболочке различных етхок тонкого отдала кипэчника

В этом разделе приводятся обобщэшша данные по содержанию различных классов иммуноглобулинов в проксимальной, медиальной и дистальяой частях двенадцатиперстной, тощей я подвздоиной кишок.

Из табл. I видно, что в слизистой оболочке различных отделов тонкого гашечпика овец содержание иммуноглобулина масса А имеет различие. В частности, максимальное значение иммуноглобулина А установлено в слизистой тоцей кишки, средние значения приходятся на двенадцатиперстную киэку и минимальные воличлны обнаружены в слизистой подвздошной кишки. Обобщенные результаты полученных данных показывают, что у односуточного возраста ягнят иммуноглобулин класса А выявляется во всех ккиках тонкого отдела кишечника. Его содержание у ягнят увеличивается в процессе онтогенеза. Однако в пятнадцатидневном их возрасте происходят уменьшение содержания этого класса, которое в двенадцатиперстной и тощей кишках достигает 5С$. Иммуноглобулин А у ягнят двухмесячного возраста не достигает значений взрослых животных в двенадцатиперстной и тощей кишках соответственно на 40,2$ и 48,4$.

ИЗ представленного материала видно, что в слизистой оболочке подвздошной кишки у ягнят в процессе онтогенеза более активно происходило накопление секреторного иммуноглобулина А, концентрация которого к одномесячному возрасту приближалась к уровню взрослых овец.

Тажим образом, у новорожденных ягнят в постнатальный период в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника накопление иммуноглобулина А происходит в различной степени, что следует

Таблица I

Содержание иммуноглобулина класса А в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника новорожденных ягаят (М - и мкг/см2; а =

Возраст !_Кишки_

(сутки?21 12-перстаая | тощая | подвздошная

1 1 М ^ в 1 * } И ^ и | ! „ ! 1 /« 1 1 И + | М — а 1 ч 1

I 8,6*1,5 3,3 8,0*0,6 2,0 22,6*5,0 0,6

7 30,1*3,0 И,7 37,3*5,1 9,3 38,1*1,3 16,2

15 15,7*2,1 6,1 18,0*1,1 4.5 22,3*4,3 9,3

30 70,3*10,3 27,3 58,7*2,9 14,6 230,8*3,16 97,8

60 153,7*3,43 59,8 206,6*6,0 51,6 316,4*11,4 134,1

Овцы 4-5 лет) 257,0*9,1 100 400,5*18,2 100 235,9*42,1 100

Таблица 2

Содержание иммуноглобулина класса с; в слизистой оболочке тонкого отдела^кишэчника новорожденных

» 3)

ягнят (Ы ~ и мкг/см^;

Возраст

животных

(сутки)

12-перстная Т~

Кишки

т—

тощая

М

I

М ^т

ПОДВЗДОШНаЯ

т—-

М

I 22,9*3.8 12,7 17,6*0,7 8,3 18,5*2,1 12.7

7 49.2*4,8 27,4 86.9*17,9 40,9 135,1*8,7 92,9

15 28,4*1,5 15,8 32,7—1,4 15,4 43,9*1,9 30.2

30 62,1*4,6 34,5 62,2*3,1 29,2 141,4*1,9 97,3

60 88,0*2,1 49,0 99,3+1,38 46,8 157,3+2,1 108,2

Овцы (4-5 лег) 179,7*6,0 100 212,3*1,52 100 145.3*11,9 100

увязать с особенностям становления структурной и функциональной деятельности каидоЯ кипки, входящей в тонкий отдел кишечника животных.

Из табл. 2 видно, что в слизистой оболочке тонкого отдела кииечнлка овец содеряание иммуноглобулина а неодинаково. В частности, максимальные величины выявлены в слизистой тощой кишки, минимальные - в подвздошной и промежуточное значение приходится на содврглние белка в двенадцатиперстной киске.

У новорожденных ягнят иммуноглобулин & выявлон нами в слизистой всех кишок тонкого отдела кишечника. А в пятнадцати-дяевком возрасте боле о вцрзясннсе снижение его концентрации происходило в тои>,ей и подзздопной кишках. В целом же в процессе роста ягнят содержание иммуноглобулина ч в слизистой тонкого отдела кишочника возрастало. При стом установлено, что в слизистой оболочке подвздошной кишки происходило более интенсивно накопление иммуноглобулина (5, чем в двенадцатиперстной и тощей кишках.

В частности, у ягнят двухмесячного возраста его уровень в слизистой оболочке двенадцатиперстной и тощей кишках был соответственно на 51,0 и 53,2$ меньше, чем у взрослых овец. Что касается подвздошной кипки ягнят, то здесь накопление иммуноглобулина а до уровня взрослых овец происходит % одномэсячно-му их возрасту.

Представленные материалы показывают, что в слизистой оболочке различных кишок, составляющих тонкий отдел кишечника, у новорожденных ягаят в онтогенезе происходит накопление иммуноглобулина о не в одинаковой степени, что, по нашему шеняю, следует увязать со структурными и функциональными особенностями становления системы пищеварения животных ® процессе их роста и развития.

Таблица 3

Содержание иммуноглобулина класса М в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника ягнят в процессе онтогенеза (М *а мкг/см2; а = з)

Кишки

животных! (сутки) ! ! 12-перстная ] | тощая 1 | подвздошная

М * п ' Ч ■ 1 1 ! » + ! \ М — о } % | | И*. ! ?

I 12,8*2,7 12,2 18,7*3,9 5,3 25,5*5,0 17,6

7 39,5^7,2 37,8 49,8*6,3 14,2 62,7*3,8 43,3

15 33,9*1,0 32,4 29,2*2,0 8,3 40,4*1,0 27,9

30 146,6*14,0 140,5 126,5*24,1 36,0 259,7*3,54 179,3

60 126,5*15,3 121,0 154,7*2,74 34,0 266,0*3,23 183,7

Овцы (4-5 лет) 104,5*15,6 100 351,2*7,8 100 144,8*2,3 100

Из таблицы видно, что в слизистой оболочке тощей кишки взрослых овец выявлена наибольшая концентрация иммуноглобулина М, а наименьшее его содержание - в двенадцатиперстной кишке. Промежуточные значения этого класса приходятся на слизистую оболочку подвздошной кишки. В частности, в слизистой двенадцатиперстной и подвздошной кишках уровень иммуноглобулина М был на 71 и 59/5 соответственно меньшим, по сравнению с их величинами в тощей кишке.

Полученные данные показывают, что в слизистой оболочке тонкого отдала кишечника взрослых овец иммуноглобулины класса А содержатся в больших количествах, среднее значение приходится на иммуноглобулины М и наименьшее - на иммуноглобулины класса о.

В процессе онтогенеза ягнят содержание всех исследуемых иммуноглобулинов в слизистой оболочке тонкого кишечника возрастало. Однако распределение и соотношение различных классов от-

Таблица 4

Содержание иммуноглобулинов в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника ягнят в процессе онтогенеза (М - а ют/см2; п

Возраст животных

Тонкий отдел кишечника

(сутки) { к

%

А

%

I 7 15 30 60

19,7*2,2 90,2*10,3 47,0*1,6 88,2*32,5

114,8^26,2

(4-°§^ет)Г^3.6

11,0 13,1*2,4 4,4

50,3 35,2*3,1 11,8

26,2 28,7*2,5 6,3

49,2 119,9*68,0 37,6

63,6 225,6*58,6 75,9

100 297,8*63,3 100

19,0*4,0 50,7*5,8 34,5*1,3 177.6*50,7 182,4-49,7

199,1*94.0

4,5 25,4 17,3 89,2 91,6

100

носительно друт друга изменялось с из возрастом. Так, у ягнят в возрасте одлк, семь и пятнадцать суток иммуноглобулин о количественно превосходит остальные массы. Средние величины приходились ка иммуноглобулины М, о минимальные - на класс А.

Выяснено, что в месячном возрасте животных больше волг чаны приходятся на содержание иммуноглобулина класса М, иммуноглобулин А занимал промежуточное положение, а класс с был наименьшем по своему содержанию.

У ягнят двухмесячного возраста в энтеральном тракте распределение различных классов иммуноглобулинов относительно друг друга соответствует взрослым овцам. Однако у молодых животных количественные их параметры несколько ниже. При этом у шестидесятидневных ягнят концентрация иммуноглобулина М максимально приближается к аналогичному классу у овец. А содержание иммуноглобулинов в и А у ягнят этого возраста на 36,0 и 24,0$ соответственно ниже, чем у взрослых животных.

Сравнивая содержанке и динамику сывороточных и секреторных шялуноглобулинов тонкого отдела кишечника, видно, что аналогичные классы в первом к во втором случае неодинаковы по своему количественному содержании и расположению.. Б частности, содержание иммуноглобулинов с а И з сыворотко крови ягнят было максимальным в однодневном их возрасте, в то время как в слизистой оболочке энтеральпого тракта концентрация этих же классов была наименьшей. В молозивный период питания ягнят содержание иммуноглобулина о в сыворотке крови превосходило уровень взрослых овец, а в слизистой оболочке его содержание было нижо, чем у овец на 50$. К концу молозивного периода содержание иммуноглобулина М в сыворотке их кроЕИ снижалось до 42,055 от уровня взрослых овоц, а в тонком отделе кшаачника возрастало, но, несмотря на это, составляло всего лишь 25,4% от его уровня у овец.

К концу молочного периода питания ягнят содержание иммуноглобулинов о и М сниналось и составляло в сыворотке крови соответственно 87,2 и 32,9$, а в слизистой - 26,2 и 17,3% от уровня взрослых животных.

Такке необходимо отметить, что в сыворотке крови ягнят в ' течете всего периода исследований иммуноглобулин й- превосходил иммуноглобулин М по своей концентрация. Б слизистой оболочке тонкого кишечника к месячному их возрасту, наоборот, класс М превалировал над классом • б. В наших исследованиях у ягнят кес-тидесятидневного возраста содержание иммуноглобулина в в сыворотке крова и в слизистой оболочке по отношении к соответствующим параметрам взрослых животных было приблизительно одинаковым и составляло 63,8? в сыворотке и 63,6$ в слизистой. Что касает-,. ся класса М, то его количественные значения как в первом, так и во втором случав увеличивались, однако в слизистой оболочке

его концентрация в наибольшей степени приближалась к таксвой у взрослых животных и составляла 91,61?, в то время как в сыворотке крови на его содержание приходилось 47,3$ от аналогичного класса у овец.

Такпм образом, в сыворотке кроЕи и слизистой оболочке топкого отдела хииечника содержите ж динамика иммуноглобулинов различны.

Динамита основных представителей нормальной микрофлоры в организме животных

Установлено, что в результате трехкратичх исследований фекалий у овец полученные значения бпфидобшстерий,' лактобакте-рай, эаерихий и энтерококков не имеют больших расхождений и колебаний по каждому виду микроорганизмов. Это свидетельствует об устойчивости данного бактериоценоза в энтеральном тракте овэц. Однако лактобахтераи, бифкдобактерии и эшерютш высевались в более высокой концентрации, чем энтерококки.

Следует отметить, что наибольшая концентрация приходилась на долю бифидобактерий, которые обнаруживались в Ю^'*--0,2 на I г/фекалий.-Лактобактерии, также шлея высокую степень концентрации, равную Ю^0'2 на I г/фекалий, занимали вторую позицию.

На третьем месте находились эшерихии, которые по своим пара-

7 ^м-П °

мэтрам приближались к лакт о бактериям и составляли ю'1 на I г/фек. Наименьшая концентрация в фекалиях овец цриходилась на энтерококки; они составляли ю6>0±°.2 на ^ г/фекалий и являлись в количественном отношении менее стабильным видом бактерий. Несколько иными были результаты исследования этих микроорганизмов у ягнят.

Из табл. 5 видно, что бифидобактерии в течение всего периода формирования бактериоценоза и после его завершения имели

Таблица 5

Динамика основных микроорганизмов в фекалиях ягнят в постнатальном онтогенезе

Дни исследования после рождения

1 2 ; 5 ! ю | 15 | 30 60

Бифидобактериз 105,0+0 10Мн£.2 109,4+0,2 109,4+0,2 109,4+0,2 109,4±0,2

Лактобактерин 104,б4<3,2 105,4+0,2 107,4±0.2 108+0.2 108±0,2

Эшериазш 104,2±Р,2 105,2+0,2 ю'М+0,2 107,6+0,2 107,6±0,2

Энтерококка 104,6г+0,2 .105,2+0,2 105,6+Р,2 106,0+0,2 ^6,0^0,2 106,010,2

м

от

наибольшую концентрацию в фэкалиях ягнят. В начальный период она составляла Ю5'^, а я концу исследования пх содергаяла возрастало до Ю9,4-0,2 на I г/фэк. Наибольшая концентрация бактерий этого вида, достигавшая уровня Ю9,4-^'2 на I г/фок., выявлена к десятому даю жизни ягнят. К этому ко возрасту у ягнят происходила стабилизация количественных параметров бифядо-бахтерий.

Дактобактерна в фекалиях молодых животных, как и у своц, по своей концентрации занимала второе место к составляли Ю4,6*0,2 в начале исследований и •2 на I г/фек. к концу исследований. В период формирования бактераоценоэа в онтераль-аом тракте животных, со второго по десятый день, по своим количественным параметрам они были близки с эшерахллма л энтерококком, а после его завершения, которое согласно наших исследований наблюдалось к пятнадцатидневному возрасту, уровень лакто-бактерий по своей концентрации незначительно превосходил эше-рихии и энтерококки л составлял соответственно: лактобактэртш _ хо8'^0'2, эшерихин - 107'4*0'2, знтерокоют - 105,0±0'2 на I г/фек.

Эшерихил по своим значениям занимали,третье место, несмотря на то, что в начале исследования пх концентрация была самой низкой и составляла ю4,2*0,2 на I г/фек.

Концентрация энтерококка у ягнят была самой низкой -Ю6'0*0'2 на I г/фек, хотя в процессе становления бактериоце-поза этот вид микроорганизмов был одинаков по своим параметрам

с лактобактериями.

Из полученных данных видно, что стабилизация количественного содержания различных видов бактерий в желудочно-кишечном тракте ягнят происходит в различные сроки.

Формирование бактераоценоза авдеваритольной системы ягнят происходит б течение первых пятнадцати дней жизни, однако основное накопление бактериальной массы происходит в течение первых десяти дней постнатольного развития ягнят.'

• Заключение

Представлкшне данные показывают, что у ягнят в исслэдуо-ше ними сроки (1-60 суток) происходит активное становление различных показателей гоыеостаза. При этом у ягнят к двухмесячному возрасту происходит ослабление неспецифических факторов защити, на что указывает снижение процента фагоцитоза, индекса фагоцитоза и переваривающей способности лейкоцитов кнвотных к втому возрасту.

Уровень, иммуноглобулинов в сыворотке 2фохш ягнят уменьшался: 1е0 - до 50 дня, до 15-даевного возраста, с последующим увеличением их концентрации которая у двухмесячных ягнят была ниже, чем у взрослых кевоишх, соответственно на 36 и 53$.

Содержание ккмукоглобуликоь классов А., в а Ы в слизистой оболочке различных частей тонкого отдела капючшша ягаят увеличивалось с возрастом животных. При зтсм наибольшие величины установлеш в подвздошной кише, меньше в двенадцатиперстной и промежуточные значения приходятся на ссдэраание белка в тощей кишке, что, на наа взгляд, связано с функциональной деятельностью каждой кишки и различиям содержанием в еих ишлуноксмне-тентных клеток.

У взрослых овец наиболее богатой шялукоглобулиньш является тощая кашка, менее насиненной - подвздошная и средние вна-' чония обнаружены в двенадцатиперстной каско.

НаЕи исследования показали, что формирование бактериоценоза желудочно-кишечного траста ягнят происходит в течение первых 15 да ой жизнь. Ваяю отмотать, что чояду количествошпал содержанием йкфидсбактерий, лактоб&ктерий, эиерихий, энтерококков и уровнем иммуноглобулинов классов А, & и 1.1 э слизистой оболочке тонкого отдела кишочиигш выявлена прямая корреляционная взаимосвязь.

Таким образом, в результате проведенных исследований показан уровень развития различных факторов защити организма ягнят, ах динамика и взаимосвязь с возрастом животных.

ВЫВОДЫ

1. Основные физиологические, 'гематологические, иимунологи-ческие и микробиологические показатели новорожденных яткят находятся в тесной взаимосвязи с адалтацаонннм периодом постна-тальнзго онтогенеза.

2. У ягнят к бО-суточяо-гу возрасту температура тела, частота пульса и дыхания соответственно равны 40,0*0,2°С, 121,0*1,0 и 40,6*0,7. Количественные значения эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, их переваривающей способности,-СОЭ составляют соответственно 7,1*0,1 млн/мкл, 9,6*0,4 т/%, 8,1*0,03 "гис./мкл, 5,6*0,2 кл., 1,0*0,1 мм.

3. Наибольшая концентрация иммуноглобулинов классов в

и М в сыворотке крови установлена у ягнят суточного возраста. В этот период уровень 1вв на 39,3$ и уровень на 40,7$ был выше, чем у взрослых овец, что обусловлено поступлением этих иммуноглобулинов в организм ягнят с молозивом матерей.

4. В слизистой оболочке тонкого отдела кишечника овец уровень иммуноглобулинов находится в пределах: иммуноглобулин кяас-

са А - 237,8*63,3 мет/см2, иммуноглобулин хсласса g -179,2—23,6 мкг/см2 и иммуноглобулин класса М- 199,1*94,0 мкг/см2, что составляет соответственно 44,1; 26,5 и 29,4$.

5. Содержание иммуноглобулинов в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника новорожденных ягнят находится в тесной взаимозависимости с их возрастом:

- у ягнят суточного возраста общее количество иммуноглобулинов составляет 7,7$ по отношению ко взрослым овцам, абсолютные величины иммуноглобулинов класса g равняются 19,7-2,2 мкг/см2, класса М - I9,0i4,0 мкг/см2, класса А -

13,1-2,4 not/cm2;

- у ягнят сомисуточного Еозраста относительное количество иммуноглобулинов равняется 26,0$ от уровня взрослых овец, содержание иммуноглобулинов класса G составляет 90,2-10,3 мкг/см2, класса М - 50,7*5,6 ют/см2; класса к - 35,2-3,1 мкг/см2;

- у ягнят пятнаддатисуточного возраста общее количество иммуноглобулинов уменьшается и равняется 14,8$ от уровня ьзрос-лых овец, а абсолютные величины igu равны 47,0*1,6 мкг/см2, 1сЫ - 34,6*1,3 мкг/см2 и Iga- 18,7—2,5 ккг/см2;

- у ягнят трвдцатисуточного возраста относительная концентрация иммуноглобулинов составляет 57,0$ по отношению ко взрослым овцам и абсолютные величины имеют следуидае пределы: класо О - 88,2*32,5, класс М - 177,6*58,7 а класс к -119,9*68,8 мкг/см2;

- у ягнят двухмесячного возраста относительное количество иммуноглобулинов составляет 77,3$ от уровня взрослых овец, а их абсолютные величины равны: IgG - 114,8*26,2 мкг/см2, Igii -182,4^49,7 мкг/см2 и IgA- 225,6*58,6 мкг/см2.

6. У новорожденных ягнят количественное и качественное

становление бактериоценоэа происходит в точение первых пятнадцати суток после рождения и к этому возрасту концентрация бифи-добактерий составляет Ю9,7-0,2, лактобактерий - Ю0'®*0,2, эперихий - ю7,6*0-2 и энтерококков - 106,0±0,2 на I г/фек., однако основное накопление бактериальной массы в энторальлсм тракте ягнят 1госисходит в течонпе первых 10 дней после рождения, кроме того, бкфидобактеряи, лактобактерий и эиорихии в организме взрослых овец и ягнят имеют высокую степень концентрации, а, следовательно, обладают большой колонизационной резистентностью.

7. Между количестаеннъм содержанием блфидобактерий, лактобактерий, эшерихий и энтерококков и уровнем иммуноглобулинов А, а и М в слизистой оболочке тонкого отдела киоечника кивотных выявлена прямая коррелятивная связь, что указывает на иммуностимулирующую роль нормальной микрофлоры.

практические преклонения

Полученные результаты могут быть использованы в качестве нормативных у ягнят при определении иммунологических и микробиологических параметров в различные сроки постнатального онтогенеза, а также при оценке состояния животных.

Результат иммунологического исследования слизистой оболочки тонкого отдела кишечника позволяет оценить степень иммунной защищенности этого отдела пищеварительной системы у ягнят в различные возрастные периоды.

Данные, полученные по бактериоценозу энтерального тракта, могут использоваться при качественной и количественной характеристике микроорганизмов, а также при определении микробной ассоциации с целью профилактики и лечения дисбактериозов у ново-

рожденных ягнят.

Материалы экспериментальных исследований рекомендуется использовать при чтении лекций по фкзиолоши, иммунологии и другим дасцшианам.

список одшшоршшых работ по материалам диссертации

1. Усачев И.И., Поляков В.Ф. Бактериоценоз энтерального тракта ягнят в раннем, онтогенезе. - Депонирована во ЪНИШИ, 1993 г. ' .

2. Усачев И.И., Поляков В.Ф. Динамика секреторных иммуноглобулинов в тонком отделе 13.вачнкка ягнят в раннем онтогенезе // Бюллетень ВЙЭВ. - 1994 (в печати).