Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Дифференциация вакцинированных и больных бруцеллезом животных с помощью О-полисахаридного специфического антигена

российская академия СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТ венных наук ___________----------сибирское отделение

: ; тюхтут экспериментальной ветеринарш

СИБИРИ й дальнего востока

М г '

На правах рукописи удк 619: 616. 981. 42-07: 636. 22/. 28

КИСЕЛЕВ Евгений Александрович

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ВАКЦИНИРОВАННЫХ И БОЛЬНЫХ БРУЦЕЛЛЕЗОМ ЖИВОТНЫХ С ПОМОЩЬЮ О-ПОЛИСАХАРИДНОГО СПЕЦИФИЧЕСКОГО АНТИГЕНА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени ¡кандидата ветеринарных наук

Новосибирск - 1993

Работа выполнена в отделе биотехнологии Института экспериментальной ветеринарии СиОири и Дальнего Востока СО РАСХН.

Научные руководители - доктор ветеринарных наук,

профессор В. М. Чекишев

кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник А. Г. Хлыстунов

Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук,

профессор И Н. Смирнов

кандидат ветеринарных наук А. Г. Падалица

Ведущя организация - Омский институт ветеринарной

медицины

Защита состоится "_" декабря 1993 г. в_ часов на заседании Специализированного совета. Д. 020. 23.01 при Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН.

Адрес института: 0331ГЗ. Новосибирская обл. , п. Краснгюбск, ИЭВЛиДВ.

С диссертацией можно оанакимитьея в ЦНСХВ СО РАСХН.

Автореферат |>a&oi\iHH "___"___ ¡993 Г.

Ученый секретарь Специализированного совета.

доктор ьот^ч'инаркых наук ¿J.rt<*••« ' '" А. А. Самоловов

?

_______ - 3 - "

_____—------- ОВДАЯ ХАРЖГЕРШШСА РАБОТЫ

В большинстве регионов России с целью профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота проводят иммунизацию и реиммуни-аацию вакциной из штамма 82. В некоторых хозяйствах, особенно для создания грунтиммунитета, применяют вакцину из штамма N19.

Часть животных, привитых вакциной из штамма 82, и, практически всех, иммунизированных вакциной из штамма N19, в течение длительного времени нельзя отличить от животных, инфицированных в естественных условиях. Это, наряду с невозможностью выявления инфицированных и своевременного удаления их из стада, является причиной необоснованного убоя скота, реагирующего на вакцину.

Используемые в настоящее время S- и R-диагностикумы проблему не решают. Кольцевую пробу с молоком можно проводить вскоре после вакцинации для выделения инфицированных животных, однако и она имеет определенные недостатки при отборе пригодных для исследования проб и интерпретации результатов.

Учитывая это, перед нами стояла цель - разработать тест-систему для дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллезом животных.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- разработать метод получения антигена для дифференциации вакцинированных и больных бруцеллезом животных;

- апробировать приемлемый для практики, серологический метод использования антигена (РИД, ИФА);

- дать оценку чувствительности, специфичности и лротивоэ-пизоотической эффективности разработанной тест-системы.

Научная швмзна и практическая ценность работы При изучении иммунохимической структуры О-полисахаридного (О-ПС) антигена установлено, что он имеется у бруцелл различных видов в S- форме (В. abortus, В. mel itensis) и отсутствует у бруцелл в R-форме (В.ovis). У слабовирулентных вакцинных штаммов бруцелл (штамм N19, 104М) молекулярная масса О-ПС антигена значительно ниже (10 кД), чем у вирулентных (В. abortus 54, В. mel itensis 16М). Очевидно, этот антиген с низкой молекулярной массой у слабовирулентных штаммов ведет себя как гаптен и не стимулирует заметного синтеза преципитирующих антител. В то время как, при заражении вирулентными иггаммами бруцелл, осо-

бенно полевыми, в организме хозяина происходит синтез преципи-тинов, которые легко можно установить в РИД по отработанной нами методике.

Учитывая, что антигенно сходные с бруцеллами детерминанты других микроорганизмов локализуются в липополисахаридах, О-ПС антиген не дает перекрестных реакций с антителами к ним.

Нами разработан метод выделения О-ГО антигена, который является модификацией метода J. W. Cherwonogrodzky и К. Nielsen (1988) с использованием доступных нам химреактивов и оборудования. Подтверждена возможность его использования для дифференциальной диагностики. На способ получения антигена для дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллезом животных выдан патент Российской Федерации.

На основе О-ПС антигена нами разработана тест-система для дифференциации вакцинированных и больных бруцеллезом животных (РИД). В производственных условиях показана высокая противоэ-пизоотическая эффективность этого метода для контроля благополучия стад по бруцеллезу и оценки эпизоотической ситуации ферм.

Кроме того, показана возможность применения, разработанной нами тест-системы, для оздоровления хозяйств от бруцеллеза.

Наставление по применению "Тест-системы для дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллевом живот-, ных" утверждено Главным управлением ветеринарии Российской Федерации 10 сентября 1992 года

Апробация работа Материалы диссертации доложены и обсуждены на заседании Ученого совета ИЭВСиДВ (1991); Секции ветеринарии Научно-технического совета Агропромышленного комитета Новосибирской области (1991); Научно-практической конференции, посвященной памяти профессора НГАУ Н. С. Щэпилова (Новосибирск,. 1993).

Пубпкацим

Ш теме диссертации, опубликованы 4 научных работы и патент на изобретение.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста, иллюстрирована 2 рисунками, включает 28 таблиц и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения,

литература и приложение. Список цитируемой литературы содержит библиографические сведения о 47 отечественных и 64 иностранных публикациях.

СОЕСТШШШ ИОСЛЕДОЕАИКЯ

feop-surj и иэтода. о-ПС антиген получади, по методу J.W.Chervfonogrodzky и K.Nielsen (1988) в нашей модификации из штамма В. abortus N'13 (патент 18S601 Российской Федерации).

Для постановки РИД использовали 0,8% агаровый гель, содержащий 10% хлорида натрия, которым заливали стеклянные пластинки. Лунки пробивали стандартным штампом. В центральную лунку вносили 20 мкл антигена, а в периферические по 35 мкл испытуемых сывороток. Реакцию учитывали через 24 часа. Животных, сыворотки от которых преципитировали, считали больными.

ИФА ставили в непрямом варианте по методике К. Nielsen et al. (1984). .При этом использовали как стандартный "Единый бруцеллезный антиген для РА, РСК, РДСК для всех видов животных", так и ОПС антиген. В ИФА исследовали сыворотку крови и молоко. Ионоклональные антитела к IgGl или к L-цепям крупного рогатого, сшитые с пероксидазой хрена, применяли в качестве конъюгата. Учет реакции проводили визуально или с помощью ри-дера.

Стандартные серологические реакции и бактериологические исследования проводили по общеприняты).) методикам.

С целью проверки диагностической эффективности РИД было проведено три эксперимента на телках и коровах разных возрастов, привитых по различным схемам.

Опыт N1 проводили совместно с лабораторией спецпрофилактики бруцеллеза ВНИИБТЖ. 28 телок в 5-6 месячном возрасте подкожно иммунизировали вакциной из штамма N19 в дозе 80 млрд. м. к. За два месяца до осеменения телок реиммунизировали вакцинами из штаммов N19 и 82 по разным схемам. Для контроля взяли 4 неиммунизированные телки аналогичного возраста. Через 11 месяцев после ревакцинации животные были заражены подкожно 2-х суточной культурой референтного штамма В.abortus 54 в дозе 200 млн. м. к. Кровь для исследования в РА, РОК, PCK-R, РБП и РИД брали до ревакцинации и через 7, 14, 21, 28, 60 и 90 дней после, а также до заражения и через 3, 7, 14, 21 и 28 дней после него. В эти же сроки после заражения у лактируювдх жи-

- б -

вотных брали молоко для исследования в КР. Через 30 дней после заражения животные были убиты, а материал от них подвергнут бактериологическому исследованию.

Опыт N2 проводили совместно с отделом по разработке мер борьбы с бруцеллезом животных ИЭВСиДВ. 23 коровы были ревакци-нированы по различным схемам. Фрез 6 месяцев после реиммуни-аации их заразили тем же способом, что и в опыте N1. Для контроля взяли 10 невакцинированных животных. До заражения и через 7, 14, 21 и 28 дней после него брали кровь для исследования в РА, РСК, РСК-Н, РИГА и РИД. Через 30 дней 29 животных убили. От 4 оставшихся коров кровь для исследования брали еще через 30, 35 , 40, 45 и 50 дней. Животных убили через 55 дней. Материал от всех животных исследовали бактериологически.

Опыт N3 был проведен совместно с отделом по изучению хронических инфекций сельскохозяйственных животных Алтайской НИВС на 26 телках, из которых 21 была привита против бруцеллеза па различным схемам. Остальные 5 телок были невакцинированными контрольными животными. Через 11 месяцев после вакцинации всех животных заразили тем же способом, что и в опыте N1. Кровь для исследования в РА, РСК, РБП и РИД брали в те же сроки, что и в опыте N1. Животных убили через 30 дней после заражения, а материал подвергли бактериологическому исследованию.

Всего в опытах было задействовано 91 животное, включая 19 контрольных.

Комиссионная проверка разработанной тест-системы проведена в ВГНКИ, Северо-Кавказском зональном научно-исследовательском ветеринарном институте, Саратовской НИВС и Республиканской научно-производственной ветеринарной лаборатории.

Производственная проверка проведена при исследовании более чем 20 тысяч проб сыворотки крови крупного рогатого скота из хозяйств Новосибирской и Томской (совхоз "Сибирь") областей с различной эпизоотической ситуацией по бруцеллезу. Исследовали, главным образом, первотелок и коров в различные сроки после ревакцинации, начиная с первого месяца.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 1. Результаты, подученные в опытах по юмуккзащш и зара-гвии бруцеллезом

Предварительные исследования специфичности РИД провели с 5 пробами сыворотки крови от телок, взятой через 30 дней после иммунизации вакциной из штамма N19. Сыворотки любезно предоставил профессор В. Г. Ощзпков. При этом было установлено, что даже при очень высоких титрах противобруцеллеаных антител в сыворотке привитых животных, зарегистрированных в РА и ИФА, РИД со всеми образцами была отрицательной.

Исследование сыворотки крови ревакцинированных по различным схемам телок (опыт N1) показало, что у всех животных, привитых подкожно полной дозой штамма 82 и сокращенной дозой штамма N19 через 14 дней после реиммунизации, наряду с РА, РСК и РБП, отмечались положительные реакции и в РИД. Тогда как у телок, ревакцинированных сокращенной дозой штамма 82 внутри-кожно и конъюнктивально, РИД была отрицательной во все сроки исследования при относительно высоких титрах антител в РА и РСК. Два из четырех животных, привитых химической вакциной, реагировали в РИД через неделю после реиммунизации. Одна телка из четырех, привитых внутрикожно сокращенной дозой штамма N19, регировала в РИД через 7 и 14 дней после ревакцинации. Спустя 2 и 3 месяца после реиммунизации ни одно животное в РИД не реагировало. Следует отметить, что в РИД, как правило, реагировали животные с титром РА не ниже 100 МЕ, а РСК не ниже 10. Все эти животные были положительными в РБП

После заражения этих животных положительные реакции в РИД отмечались у некоторых из них уже через неделю. Тогда как наибольшее количество реагирующих в РИД было в конце срока наблюдения (28 дней). Всего же, из 29 зараженных животных в конце срока наблюдения, 16 было положительно в РИЛ, 20 - в РА, 24 -в РСК, 21 - в РБП (от двух животных в этот период материал не исследовался). Причем два из четырех контрольных животных реагировали в РИД, по три - в РА и РБП, но все они были положительными в РСК. В РИД реагировали первотелки с титром в РА не ниже 100 МЕ, а в РСК не ниже 10. Кроме того, все они были положительными в РБП. Положительные реакции в РИД у ранее вакцинированных животных появлялись на одну, две недели раньше чем у контрольных. Это вполне объяснимо, если учесть, что при вто-

ричном иммунном ответе синтезируются преимущественно 7S антитела IgG класса, которые и являются преципитинами. Следует отметить, что у двух первотелок с инв. NN1519 и 1610 на протяжении всего срока наблюдения не регистрировали положительных реакций ни в одном тесте. У 13 зараженных в атом опыте животных бруцеллеа был подтвержден бактериологически. 8(61,5%) ив них в конце срока наблюдения реагировали в РИД, 8(61,5%) - в РА, 10(77%) - в РСК, 10(77%) - в РВП и 3(33%) из 9 лактирующих животных этой группы реагировали в КР. Следует отметить, что при бактериологическом исследовании бруцеллез был подтвержден у двух вышеупомянутых серонегативных первотелок (инв. NN1519 и 1510). Возможно, что при развитии инфекционного процесса в последующий период серологические реакции могли бы у них проявиться, однако выяснение этих вопросов требует дополнительных исследований. Аналогичные результаты были получены в опьгге N2. Пэложительные реакции в РИД появились черев 2 недели после заражения. Из 33 зараженных животных в конце срока наблюдения (28 дней) в РИД реагировало 9, в РА - 20, в РСК - 30, в PCK-R - 4, в РИГА - 12 животных. В РИД, как и в опыте N1, реагировали животные с титром в РА не ниже 100 МЕ, а в РСК не ниже 10. Из 10 контрольных животных в РИД реагировало 3 коровы. Так же как и в предыдущем эксперименте, преципитины появились у них на одну, две недели позже, чем у ранее вакцинированных животных. Следует отметить, что животное с инв. N9006 среагировало только через две недели после заражения в минимальном титре РА, тогда как при последующих исследованиях оно не реагировало ни в одном тесте. За четырьмя контрольными животными, одно из которых реагировало в РИД, наблюдение вели до 55-го дня. При этом, РИД стабильно регистрировали до убоя. Следует отметить, что одно контрольное животное (К-2) не реагировало ни в одном тесте в течение всего срока наблюдения. 6(28,6%) коров из 21 с бактериологически подтвержденным бруцеллезом реагировали в конце срока наблюдения в РИД, 14(66%) - в РА, 21(100%) - в РСК, 7(33,3%) - в РИГА И 3(14,3%^ - В PCK-R.

Из 26 зараженных телок в опыте N3 бруцеллез был бактериологически подтвержден у 19 животных. Из них в конце срока наблюдения в РИД реагировало 7(36,8%), в РА - 17(100%), в РСК -11(57,9%), в РБП - 16(57,9%).

Результаты экспериментальных исследований показали, что

через 1,5-2 месяца после реиммунизации животных вакцинами из Рй- и Б-форм бруцелл положительно реагирующих в РИД с О-ПС антигеном нет. В общепринятых серологических реакциях некоторые ревакциннрованные животные реагировали до конца срока наблюдения (3 месяца). У экспериментально зараженных животных чувствительность РИД колебалась от 28,6% до 61,5%.

2. Твйул&хтял впаакаэтииой проверки РИД

По- результатам комиссионных опытов, проведенных в различных научно-исследовательских учреждениях страны, установлена абсолютная специфичность (100%) РИД с О-ПС антигеном. Так, при исследовании гипериммунной противоиерсиниоэной сыворотки крови крупного рогатого скота и кроликов, реагирующей в РА и в РСК со стандартным бруцеллезным антигеном в высоких титрах (1:400 и 1:40++++), в РИД о 0-ГО антигеном получены отрицательные результаты. Нэ реагировали в РИД с О-ГО антигеном гипериммуняь» сыворотки к сальмонеллам, лептоспнрам, овисному антигену и вирусу лейкоза. По чувствительности РИД с О-ГО антигеном уступала РСК, а в экспериментальных исследованиях РА.

3, Результата щхгзЕдуртсслаа кигагаикЭ РИД с О !5С а:зга-

гетва

Яри проведении производственных испытаний РИД о О-ГО антигеном выявляла ряд дивотных, нереагирущих в РА и КР с молоком. Из 30 первотелок, принадлежащих совхозу "Сибирь",Томской области, в которой наЯлидалясь клинические признаки бруцеллеза, в РИД реагировало 16 животных. Все эти дивотние реагировали в РСК и РИГА. В РА реагировало только 11(68,8%) из них, в РСК-Я - 4(25%), в КР с молоком - 10(63,8%). Аналогичные результаты были получены при повторном исследовании 48 коров иэ этого лее хозяйства При этом, из 24-х реагирующих в РИД гивот-ных, в РА реагировало 18(75%), в КР - 13(54,2%). Все эти яс-вотные реагировали в РСК и в РИГА.

При первичном исследовании животных из хоеяйств Новосибирской области была уточнена их эпизоотическая характеристика. Так, иа 35 ранее считавшихся благополучными по бруцеллезу хозяйствами - 10 оказались неблагополучными (колхозы "Ленина" и "Искра", Колыванского района, "Заря Коммунизма", "Тар-тасский", "Сибирь", Венгеровского района, "Береговой", иШая",

Купинского района и другие). Одновременно был определен уровень инфицированноети поголовья бруцеллезом, что позволило определить тактику борьбы с инфекцией.

С разрешения ветеринарного отдела областного управления сельского хозяйства в ряде неблагополучных пунктов была предпринята попытка оздоровления путем удаления животных, реагирующих в РИД, и профилактической вакцинации. В некоторых неблагополучных пунктах с низким уровнем инфицированности поголовья (не более 2%) результаты оказались вполне удовлетворительными. Так, при двухкратном исследовании фермы Метелево (колхоз "Заря", Купинского района) все животные, реагирующие в РИД, были выбраны. В дальнейшем, положительно реагирующих в РИД животных в этом хозяйстве не регистрировали. В колхозе "Ленина", Колы-ванского района были получены аналогичные результаты. В обоих хозяйствах сняты ограничения по бруцеллезу в 1993 году.

При выполнении комплекса ветеринарно-санитарных мер борьбы с бруцеллезом, РИД может быть использована не только для оценки эпизоотической ситуации в хозяйстве, но и для выделения инфицированных животных, особенно через 1,6-2 месяца после вакцинации, когда другие методы исследования сыворотки крови использовать нельзя.

Так, в совхозе "Алабугинский",- Каргатского района, в котором в конце 1991 года произошла вспышка бруцеллеза, сопровождавшаяся абортами (более 20% животных были инфицированы), удалось добиться значительного улучшения эпизоотической ситуации после удаления из стада больных животных, положительно реагирующих в РИД. Ери этом, реагирующих в РИД сдавали на убой, а положительных только в РА и/или РОК оставляли в стаде.

При трехкратном исследовании поголовья в РИД, большинство инфицированных животных дойного гурта были выделены в течение 1992 года При исследовании в 1993 году более 90% животных, реагирующих в РИД, были нетели, которые родились от инфицированных коров в 1991 году. Общий уровень инфицированности при последнем исследовании в 1993 г.. составил 1,4%.

Аналогичные результаты были получены при многократных исследованиях животных неблагополучных ферм колхозов "Калинина" и "Заря коммунизма", Венгеровского района и всех хозяйств Купинского района. Ни в одном из хозяйств, где выборка инфици-

- и -

рованных лсивотных проводилась только по результатам РИД, эпизоотическая ситуация не ухудшилась.

4. Результата хзспыгалст 1Ш с О-ПС алткгшгом

Учитывая недостаточную чувствительность РИД, мы испытали О-полисахаридный антиген в более чувствительной тест-системе (ИФА). В совхозе "Дорогинский" при первичном исследовании молока от первотелок, привитых штаммом В. abortus 104М, было установлено, что в ИФА реагировало одно животное. КР с молоком у всех животных была отрицательной. При повторном исследовании молока от этих животных (через месяц) в КР стала реагировать первотелка, реагировавшая при первичном исследовании только в ИФА. При сравнительном испытании стандартного и О-полисахарид-ного антигена с конъюгатом моноклональных антител к IgGl крупного рогатого скота на привитом поголовье каких-либо различий не установлено. Таким образом, мы показали перспективность использования ИФА с молоком для диагностики бруцеллеза Однако при дальнейших исследованиях на благополучном по бруцеллезу поголовье через месяц после ревакцинации штаммом 82 некоторые животные реагировали в ИФА. Результаты бактериологического исследования молока от этих коров оказались отрицательными. Вопрос возможности использования ИФА для диагностики бруцеллеза, особенно дифференциальной, требует дальнейшего иаучения. Очевидно уровень очистки реагентов, которые могут быть использованы в ИФА с целью диагностики, должен быть значительно выше, чем апробированных в настоящей работе.

ВЫВСЩЫ

1. О-полисахаридный антиген из штамма В. abortus N19, выделенный наш по оригинальной методике, позволяет дифференцировать животных, иммунизированных вакцинами из RS и S-форм бруцелл через 1,5 месяца после вакцинации или ревакцинации.

2. Липополисахариды, белки и нуклеотиды бруцелл различных форм и штаммов представлены общими антигенами и ответственны за перекрестные реакции не только в пределах вида и типа бруцелл, но и ряда неотносящихся к бруцеллам микроорганизмов (иерсинии, сальмонеллы, кишечная палочка и другие).

3. У некоторых животных, иммунизированных вакцинами из RS-и S-форм бруцелл, наблюдается кратковременный (не более 1

месяца) синтез специфических антител к О-полисахаридному антигену. Сыворотка крови большинства иммунизированных животных, при высоких титрах РА, РСК и РИГА в течение первых двух месяцев, в РИД с О-полисахаридным антигеном не реагирует.

4. У экспериментально зараженных животных положительная РИД с О-полисахаридным антигеном регистрируется у большинства животных с высокими титрами РА и РСК. Появившись через 1-3 недели у зараженных животных, РИД остается стабильно положительной до конца наблюдений (55 дней) у всех однажды среагировавших.

5. РИД с О-полисахаридным антигеном, уступая по чувствительности РЕП, РСК и ИФА, обладает абсолютной специфичностью (1002). Гипериммунные противоиерсиниозные бычьи и кроличьи сыворотки, дающие положительные РА и РСК со стандартным бруцеллезным антигеном в высоких титрах (400++++ и 40++++), в РИД с О-полисахаридиым антигеном не реагировали.

6. В неблагополучных по бруцеллезу стадах РИД с О-полиса-харвдным антигеном по чувствительности превосходит РА и КР с молоком и позволяет на фоне применения вакцин выделить значительно большее число естественно инфицированных животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЮШШЯ

Наставление по применению "Тест-системы для дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллеаом животных" утверждено Главным управлением ветеринарии Российской Федерации 10 сентября 1992 года

Тест-система рекомендуется:

- для оценки эпизоотической ситуации в благополучных по бруцеллезу хозяйствах, где на фоне применения вакцин имеют место случаи реагирования животных на бруцеллез в РА, РСК и других тестах;

- для дифференциации неспецифических реакций, обусловленных микрофлорой, имеюшэй обшце.с бруцеллами антигены;

- для определения уровня инфицированное™ поголовья в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах;

- для выделения инфицированных животных через 1,5-2 месяца после иммунизации вакцинами из К-, и Б-форм бруцелл.

- 13 -СЖШ РАБОТ,

опубешзшиашх та та дщжртацйи

1. Чекишев В. М. , Филипенко М. Л. , Киселев Е. А., Файарахма-нов Ш. Р. Способ получения антигена для дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллезом животных - Патент Российской Федерации N 132501. - 1993.

2. Чекишев а М., Файэрахманов Ш. Р., Киселев Е. А. , Филипенко Е Л., Колганова О. А., Хлыстунов А. Г., Димов С. К., Якимов В. В., Новицкий А. А. , Попова Т. Г., Циммерман а А. Дифференциация вакцинированных и больных бруцеллезом животных // .Ветеринария. - 199а-N8.- С. 25-29.

3. Чекишев В. М., Файэрахманов Ш. Р., Колганова О. А., Киселев Е. А., Хлыстунов А.Г. Файзулин Р.а , Самарина Н.Е ,' Кабан-цев А. И. Чувствительность и специфичность некоторых серологических реакций при диагностике бруцеллеза животных // .Диагностик инфекц болезней животных: Сб. науч. тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние. Ин-т эксперим. ветеринарии Сибири и Дал. Востока. -Новосибирск, 1993. - С. 68-73.

4. Файэрахманов Е Р. , Киселев Е. А., Хлыстунов А. Г. , йомов В. В. , Корж Г. С. , Циммерман В. А., Попова Т. Г., Никифоров Е П. , Чекишев В. М. РИД с 0-П0 антигеном у экспериментально вакцинированных и зараженных бруцеллезом животных // Диагностика инфекц. болезней животных: Сб. науч. тр. / РАСХЕ Сиб. отд-ние. Ин-т эксперим. ветеринарии Сибири и Дал. Востока. - Новосибирск, 1993.- С. 119-124.