Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Дифференциальная диагностика гемобластозов крупного рогатого скота по данным морфологической картины крови
На правах рукописи
ЗОРИНА НАТАЛЬЯ РОБЕРТОВНА
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕМОБЛАСТОЗОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПО ДАННЫМ МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ КАРТИНЫ КРОВИ
16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Омск 2005
Работа выполнена в институте ветеринарной медицины Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет»
Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор
Околелов Владимир Иванович
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор
Новицкий Алексей Алексеевич
Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор, Смирнов Павел Николаевич
Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Уральская государственная
сельскохозяйственная академия», г. Екатеринбург
Защита диссертации состоится «23» сентября 2005 г. в 1230 часов на заседании диссертационного совета Д 220.050.03 при ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет» (644122, г Омск-122, ул. Октябрьская, 92, тел./факс 24-15-35,25-05-49).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет»
Автореферат разослан «<2¿> августа 2005 г.
Ученый секретарь диссертационного совета, .
кандидат ветеринарных наук, доцент ' Н.П. Жабин
'S- МбЗШ,
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Изучение морфологических показателей периферической крови при разнообразных физиологических и патологических состояниях с учетом индивидуальных особенностей организма имеет огромное значение для исключения ошибок при диагностике заболеваний системы крови (К.А. Акопян, 1939; В.Н. Никитин, 1956; Г.С. Петровский, 1965; Э.М. Нымм, 1971; A.A. Кудрявцев, J1.A. Кудрявцева, 1974; Н.С. Петракова, 1986; Г.А. Симонян, 1995; Ю.П. Смирнов, 1998; L. Dimitriadis, S. Artavanis, 1987; С. Parrish, R. Oliver, К. Corrin, 1988 и др.).
В большинстве своем прижизненный диагноз на гемобластозы в начальной их стадии ставится количественным методом и не подтверждается патоморфологиче-ским исследованием (Х.С. Салимов, 1991; А.Г. Незавитин, 1995; М.И. Гулюкин, П.Н. Смирнов, 1999). Ряд авторов (О.Ч. Парчинский, 1974; Е. Wiesner, 1967 и др.) признавая гематологическую диагностику, подчеркивают, однако, ее недостаточность для выявления алейкемических и сублейкемических форм, которые составляют от 4,1 до 30% и даже выше, при диагностике гемобластозов по стаду.
Обнаруживаемые лейкоцитоз и лимфоцитоз в крови можно объяснить во многих случаях наличием всевозможных патологий. Согласно данным Г.В. Зверевой (1951), Б.Б. Ермолаева (1967), Н.М. Хилькевича (1970), Ю.А. Козырева (1972), П.В. Филатова с соавт. (1972), А.П. Горбунова (1972), Г.А. Симоняна (1975) и др., лимфатический тип лейкемоидных реакций отмечается при анаплазмозе, травматическом ретикулите, туберкулезе, бруцеллезе, маститах, нефритах, миокардитах, пневмониях, гепатохолангитах, гепатитах, циррозах, абсцессах. Сходная с гемобластозами картина крови по данным Н.Т. Васильева с соавт. (1966) возможна при некоторых хронических, относительно доброкачественно протекающих инфекциях, поражающих лимфатические узлы.
Во многих случаях изменения состава крови являются вторичными, обусловленными нарушениями физиологической деятельности различных систем или органов (В.М. Лемеш с соавт., 1986; М.А. Амироков с соавт., 1997 и др.).
И.А. Кассирский с соавт. (1970) также указывает, что кровь в определенной степени отражает как в зеркале многое из того, что происходит в организме.
Ряд исследователей (И.В. Давыдовский, 1958; H.A. Краевский с соавт., 1961; Э. Попеску, 1962; H.H. Доронин, 1976; Л.Г. Бурба с соавт., 1977; Г.А. Симонян, 1995) сообщают, что при лимфопролиферативных опухолевых процессах в кровяное русло может поступать большее или меньшее количество незрелых форм клеток - пролимфоцитов, лимфобластов, миелоцитов, промиелоцитов, миелобла-стов, промоноцитов, гемоцитобластов и ретикулярных клеток, а также клеток с делящимся ядром.
Однако, в доступной литературе мы не нашли единого мнения авторов о появляющихся в периферической крови стабильных цитоморфологических изменений лимфоцитов. Дифференциальная диагностика лимфопролиферативных процессов от распространенных болезней крупного рогатого скота, протекающих с подобными изменениями в крови, также освещена недостаточно, что и предопределило направление нйнш*-исследодш1ий.__
РОС. национальная! з I библиотека
Цель работы. Дифференциальная диагностика гемобластозов крупного рогатого скота по данным морфологической картины крови.
Задачи исследований:
• Установить динамику распространения гемобластозов в Сибирском регионе на модели отдельных хозяйств Омской области;
• Выявить устойчивые морфологические признаки и иммунофенотипиче-ский профиль лимфоцитов крови крупного рогатого скота больного ге-мобластозами;
• Определить удельный вес реактивных и опухолевых состояний среди животных с патологическими сдвигами в гемограмме;
• Изучить структуру хронических лимфопролиферативных заболеваний крупного рогатого скота;
• Дифференцировать лимфопролиферативный процесс у коров от других патологических состояний;
Научная новизна. Впервые в этой работе проанализирован иммунофено-типический профиль лимфоцитов при лимфопролиферативных процессах крупного рогатого скота. Выявлена неоднородность лимфопролиферативных заболеваний и определены основные типы лимфом и лейкозов, распространенных в хозяйствах Омской области.
Установлено, что 50-60% животных с увеличенным количеством лейкоцитов и лимфоцитов до уровня «подозрительных» по заболеванию лейкозом при повторном исследовании (через месяц) имеют картину крови в пределах нормы. Полученные данные свидетельствуют о влиянии ряда факторов (заболевания разной этиологии, стельность) на картину крови животных, которые необходимо учитывать, проводя диагностические исследования на лимфо-пролиферативные заболевания, чтобы исключить ошибки.
На модели ряда хозяйств с разной эпизоотической ситуацией по гемобластозам впервые изучены особенности их годовой динамики с учетом факторов внешней среды, условий содержания и индивидуальных особенностей организма.
Установлено, что появление в крови незрелых и патологических форм лимфоцитов свыше 15% от общего числа лимфоцитов, свидетельствует о развитии лимфопролиферативного процесса.
Изучены цитоморфологические особенности лейкоцитов крови у больного гемо-бластозами крупного рогатого скота и установлены специфические варианты лим-фоидных клеток при определенных типах лимфопролиферативных заболеваний. Выявленные количественные и качественные изменения в периферической крови позволяют дифференцировать реактивные процессы от лимфопролиферативных.
Теоретическая и практическая значимость работы. Показана возможность использования иммунофенотипирования лимфоцитов для дифференциальной диагностики лимфопролиферативных заболеваний крупного рогатого скота.
Описанные цитоморфологические особенности лимфоцитов позволяют дифференцировать лимфопролиферативные и реактивные процессы. Доказана взаимосвязь морфологических и иммунофенотипических характеристик лимфоидных элементов разных этапов дифференцировки. Дана классификация гемобластозов крупного рогатого скота распространенных на территории Омской области.
Разработаны методические рекомендации по дифференциальной диагностике гемобластозов крупного рогатого скота от других патологических состояний (Омск, 2004). Научно обоснованы планы и программа по созданию свободных от инфекции ВЛКРС стад крупного рогатого скота в племенных хозяйствах и фермах Омской области.
Материалы диссертации используются в учебном процессе кафедр эпизоотологии и инфекционных болезней животных ИВМ ОмГАУ, Новосибирского ГАУ, Уральской ГАВМ.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Динамика заболеваний лимфопролиферативной природы крупного рогатого скота на модели ряда хозяйств Омской области;
2. Цитоморфологические особенности лимфоцитов крови у больного гемо-бластозами крупного рогатого скота и иммунофенотипическая характеристика основных типов лимфом, распространенных в хозяйствах области;
3. Критерии и эффективность дифференциальной диагностики гемобластозов крупного рогатого скота по морфологической картине крови.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на межрегиональной научной конференции молодых ученых аграрных вузов Сибирского федерального округа (Омск, 2003); международной конференции, посвященной 175-летию аграрной науки Сибири (Омск, 2003); научно-практической конференции, посвященной 85-летию ИВМ ОмГАУ (Омск, 2003); международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук (Омск, 2004); международной научно-практической конференции, посвященной профилактике и мерам борьбы с лейкозом крупного рогатого скота в Российской Федерации (Екатеринбург, 2005); совместном заседании кафедр эпизоотологии и паразитологии животных ИВМ ОмГАУ (Омск, 2005).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций. Список использованной литературы включает 242 источника, из них 74 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 4 таблицами и 35 рисунками.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материал и методы исследований
Исследования проводились в течение 2002-2005 гг. в лаборатории диагностики лейкоза крупного рогатого скота ИВМ ОмГАУ и лаборатории ассоциированных с туберкулезом болезней крупного рогатого скота Всероссийского научно-исследовательского института бруцеллеза и туберкулеза животных. Тема диссертации является разделом плановой научно-исследовательской работы ИВМ ОмГАУ «Диагностика лейкоза и постинтоксикационных лейкемоидных реакций у животных», имеет номер государственной регистрации № 01.2.00305308.
Проведены серологические, гематологические и иммунофенотипические исследования 60 000 голов крупного рогатого скота из семи хозяйств шести районов Омской области, с разной эпизоотической ситуацией по ВЛКРС-инфекции и гемобластозам.
Для проведения цитоморфологического анализа мазков крови были подобраны 3 группы животных 3-5-ти летнего возраста, из которых в первую вошли 100 голов РИД-позитивных на ВЛКРС общественного сектора; во вторую - 100 голов РИД-негативных на ВЛКРС общественного сектора, и в третью - 100 голов РИД-негативных животных частного сектора. Третья группа была контрольная, чтобы исключить действие техногенных факторов животноводческих комплексов, а также влияние экологических факторов.
Наблюдение проводили в течение 9 мес. Ежемесячно по сезонам (весна, осень) проводили клинические обследования животных, гематологические и серологические исследования, анализ условий кормления и содержания, учет профилактических и лечебных мероприятий. Всего на этом этапе исследовано 300 голов крупного рогатого скота.
Для подтверждения наличия стабильных цитоморфологических изменений лимфоцитов было подобрано 4 группы животных по 15 голов. Первая группа -условно-здоровые животные, вторая группа - подозрительные по «лейкозному» ключу животные с реактивными процессами, третья группа - больные лейкозом по «лейкозному ключу» без реактивных процессов, четвертая группа - больные лейкозом по «лейкозному ключу» с реактивными процессами. Наблюдения за животными длились 7 месяцев (апрель-октябрь). Гематологические исследования проводились четыре раза (апрель, июнь, август, октябрь).
Кроме того, определяли иммунофенотипический профиль лимфоцитов у коров гематологически больных и подозрительных по «лейкозному ключу». Всего исследовано 60 проб сыворотки и крови от крупного рогатого скота.
Гематологические исследования включали подсчет форменных элементов крови с помощью микроскопирования (тринокулярный светооптический микроскоп «MICROS» серии МС 200 с TV-камерой, увеличение 10x100) в камере Горяева и выведение лейкоцитарной формулы (согласно действующим методическим указа-
ниям по диагностике лейкоза крупного рогатого скота от 2000 года). Мазки окрашивали по методу Паппенгейма.
Реакцию иммунодиффузии (РИД) проводили общепринятым методом.
Иммунофенотипирование крови проводили с использованием метода непрямой иммунофлюоресценции на суспензиях живых лимфоцитов, выделенных градиентным центрифугированием в растворе Ficoll-Paque (коммерческий раствор). Анализ результатов проводили на люминесцентном микроскопе «Люман Р8» (увеличение 15x90). Учет результатов исследований проводили путем подсчета количества светящихся лимфоидных клеток из крови животных: отсутствие позитивных клеток (-), умеренное количество позитивных клеток (±) и большое число позитивных клеток (+). Для исследования использовали стандартную панель моноклональных антител «anti-bovi» (аналог «anti-human», предоставленных Centre for Animal Biotechnology, Australia) к антигенам CD3, CD4, CD5, CD8, CD16, CD19, CD20, CD23, CD25, CD38, CD95 и HLA-DR (CD - cluster differentiation). Иммунофенотипические исследования проб крови от коров проводили в иммунологической лаборатории областной клинической больницы №1 г. Омска.
Статистическую обработку цифровых данных проводили по методу Стьюдента (С. Гланц, 1999) с использованием программы BIOSTATISTICS v. 4,03.
2.2. Динамика гемобластозов крупного рогатого скота на модели хозяйств Омской области
Результаты регулярно проводимых серологических и гематологических исследований в отдельных хозяйствах области по диагностике гемобластозов крупного рогатого скота, дали возможность проследить динамику данного заболевания.
ВЕСНА Я ОСЕНЬ
Рис. 1. Динамика выявления «подозрительных» в заболевании гемобластозами крупного рогатого скота за 6 лет в хозяйствах Омской области
Ретроспективный анализ результатов исследований за 6 лет показал, что 50-60% животных с повышенным уровнем абсолютного количества лимфоцитов до уровня подозрительных по заболеванию гемобластозами при повторном исследовании имеют картину крови в пределах нормы (рис. 1).
Установлено, что наибольшее количество больных и подозреваемых в лим-фопролиферативных заболеваниях животных приходится на весенний период.
Для выявления факторов влияющих на появление сезонного увеличения количества подозреваемых было подобрано 3 группы животных. Первые две группы из промышленного комплекса, третья из коров частного сектора.
Все группы экспериментальных животных содержались в обычных условиях. Содержание и кормление крупного рогатого скота общественного сектора первой и второй группы было аналогичным.
Таблица 1. Сезонная динамика реактивных состояний
Кол-во животных ВЬСНА
Март Апрель Май
Реактивные ИТ них с Реактивные из них с ЛТ Реактивные из них с Л1
РИД4- обществ сектор 100 27 п 15 6 14 5
РИД- обществ сектор 100 23 10 13 5 12 6
РИД- частный сектор 100 5 2 3 1 3 -
ОСЕНЬ
Сентябрь Октябрь Ноябрь
РИД-1- обществ сектор 100 11 5 10 3 6 1
РИД- обществ сектор 100 10 4 8 1 4 2
РИД- частный сектор 100 0 0 0 2 0
Примечание Л| - повышенное количество лимфоцитов
Анализируя полученные данные (табл. 1) можно заключить, что весенние пики заболеваемости гемобластозами у крупного рогатого скота и не подтверждение диагноза при повторном исследовании «подозрительных» животных связаны с увеличением в этот период заболеваний, сопровождающихся лейкемоидными реакциями (маститы, эндометриты, гиподерматоз, бурситы, некробактериоз и др.).
При этом отсутствуют другие признаки лейкемического процесса В основе лейкемоидных реакций лежат различные заболевания, нередко протекающие тяжело. Поэтому в отличие от заболеваний системы крови гематологические изменения развиваются вторично, которые бесследно исчезают при выздоровление больного.
Количество лимфоцитов при разных болезнях представлены на рисунке 2.
При маститах количество лейкоцитов повышается у 50% коров (9-16 тыс./мкл). Уровень лимфоцитов в среднем достигал 78%.
При эндометритах характер изменений крови у 70% животных сопровождался высоким лейкоцитозом (15-20 тыс./мкл) с нейтрофилией и сдвигом ядра влево. Количество лимфоцитов составляло 79%.
К-во лимфоцитов
Рис. 2. Количественные показатели клеток белой крови (лимфоцитов) при некоторых патологических состояниях у животных
При актиномикозе отмечались изменения белой крови в виде нейтропении и относительного лимфоцитоза.
При некробактериозе и воспалительных заболеваниях конечностей у 40% исследуемых животных наблюдался абсолютный лимфоцитоз до 12 тыс./мкл., количество эозинофилов составляло от 2 до 10%.
У 30% животных больных гиподерматозом наблюдалось увеличение количества лимфоцитов до 75-80%, из них у 10% отмечена юзинофилия (до 20%).
Во всех случаях наблюдалось появление в крови атипичных лимфоцитов. Однако процент таких клеток не превышал 15%. В 95% проб изменения в большей степени фиксировались со стороны цитоплазмы, из них 57% клеток были с вакуолинизированной цитоплазмой.
В частном секторе отмечен более низкий уровень возникновения реактивных состояний, что связано с отсутствием техногенных стресс-факторов (трехкратное доение, содержание животных на бетонных полах, неудовлетворительное кормление, массовые диагностические исследования, повышенный уровень шума на промышленном животноводческом комплексе и др.), присутствующих в общественном секторе.
2.3. Цитоморфологическая картина крови при гемобластозах
На основании проведенных исследований в течение трех лет, мы пришли к заключению, что при помощи традиционного «лейкозного ключа» 30% больных животных не выявляется.
Анализ полученных нами результатов позволяет утверждать о наличии стабильных морфологических изменений в крови при лимфопролиферативных заболеваниях (табл. 2).
Таблица 2. Гемограмма коров при гемобластозах и реактивных состояниях
Показатели крови Контроль I емобласюзы Неакжвные состояния
Весна Осень Весна Осень Весна Осень
М±т, п=15 М±т, п=15 М±ш, п=15 М±т, п=15 М±т, п=15 М±т, п=15
Базофилы,% 0,33±0,1 0,4±0,1 0,26±0,2* 0,59±0,3* 0,72±0,2* 0,6±0,2*
Эозинофилы,% 6,31±0,7 5,5±0,8 1,73±0,4 3,58±0,5 2,41 ±0,6 3,2±0,6
Палочкоядерные нейтрофилы,% 4,62±0,4 3,9±0,4 7,0±0,9 8,93±1,1 6,72±0,7 3,1±0,5*
Сегментоядерные нейтрофилы,% 25,22±1,8 23,9±1,3 1,42±0,4 0,99±0,2 3,71±0,6 24,4±2,7*
Лимфоциты,% 60,67±2,2 64 4±1,2 71,82±2,2 58,28±1,5 75,91 ±0,9 63,4±1,9*
Незрелые и атипичные пимфоциты,% 1,52±0,4 1,3±0,4 17,53±1,5 26,27±1,4 9,82±0,5 4,4±0,9
Моноциты,% 1,33±0,4 0,6±0,2 0,24±0,1 1,36±0,4* 0,71 ±0,2* 0,9±0,4*
Примечание * - р>0 05 данные не достоверны
При оценке лейкоцитарной формулы больных гемобластозами животных наблюдался регенеративный сдвиг ядра нейтрофилов влево. При этом отмечается увеличение палочкоядерных нейтрофилов и метамиелоцитов-юных форм
Количество эозинофилов - в пределах от 3 до 9%, в зависимости от возраста исследуемого животного. 50% исследованных нами животных имели признаки анемии. В лейкоцитарной формуле в 38% случаев отмечалось умеренное повышение процента лимфоцитов (67-80%), а в остальных число их составляет 80-95%
Важное диагностическое значение имеет качественный состав лимфоидных элементов крови.
Выявлено достоверное повышение количества атипичных лимфоцитов при лимфопролиферативных заболеваниях.
При микроскопическом исследовании в мазках периферической крови больных определялась популяция малых мономорфных клеток с высоким ядерно-цитоплазматическим соотношением с циюморфологическими признаками зрелых
лимфоцитов. Ядра клеток округлые, имеют плотную и глыбчатую структуру хроматина. Узкий ободок цитоплазмы слабо или умеренно базофильный.
Наряду с преобладающим большинством клеток типа малых лимфоцитов определялись более крупные лимфоидные клетки - пролимфоциты. Содержание последних не превышало 10%, но у 13% исследуемых животных количество этих клеток достигало 35% и более.
Количество лимфобластов в крови не превышало 1,5% и было отмечено у 7% всего обследованного поголовья.
У 52% обследованных животных в мазках периферической крови встречались двуядерные клетки «ки§1»-типа. Двуядерные клетки - это формы амито-тического деления клеток. Ядра иногда соединены между собой тонкой перемычкой в одной цитоплазме. Оба вида клеток имеют аналогичную со зрелыми клетками величину и структуру хроматина ядра. В среднем количество таких клеток составляет 10%.
Ридеровские формы также были отмечены у большинства обследованных животных. Эти лимфоциты имеют неправильной формы ядро с бухтообраз-ным вдавлением с одной стороны или более сложным полиморфизмом. Цитоплазма узкая или широкая, сильно- или слабо-базофильная.
Кроме этого обнаруживались клетки с ядрами в виде листа клевера, подковы, восьмерки (от 5 до 18%.). Эти формы клеток имеют величину среднего лимфоцита. Ядро неправильной формы с глубокими вдавлениями с одной, двух либо трех сторон. Хроматин плотной и глыбчатой структуры.
У 10% обследованных животных определялись клетки с рассеченными (центроциты) ядрами. Размер таких клеток несколько крупнее малого лимфоцита, с мелкогранулярным хроматином, мелкими плохо различимыми ядрышками и тонким ободком светлой цитоплазмы. Благодаря глубокой расщелине или выемке, ядра центроцитов в препаратах выглядят угловатыми, вытянутыми. Наряду с центроцитами было отмечено редкое появление цен-тробластов - крупных клеток с обликом бласта. Ядра округло-овальные, светлые, ядрышки в количестве 2-3 локализуются у ядерной мембраны. Ободок цитоплазмы умеренно выраженный или широкий базофильный.
В 95% исследованных мазках крови больных животных, обнаружевались так называемые клетки лейколиза (тени Боткина-Гумпрехта). Содержание таких клеток варьирует от 5 до 30%.
У 23% больных гемобластозами коров отмечались изменения со стороны цитоплазмы. Эти лимфоциты, среднего размера, крупнее, чем такие же в норме. Морфологической особенностью, является наличие тонких и коротких выростов цитоплазмы, расположенных на одном из полюсов клетки (так называемые ворсинчатые лимфоциты - «УП1оиь»-лимфоциты). Ядра ворсинчатых лимфоцитов имели овоидную форму с конденсированным хроматином. Небольшие нуклеолы видны в половине случаев В некоторых клетках отмечались плазмо-цитоидные признаки эксцентрично расположенное ядро и более выраженная базофилия цитоплазмы. Такие клетки имеют полярно вытянутую цитоплазму с
бахромчатыми краями, веретенообразную форму и более нежное строение ядерного хроматина, чем у зрелых лимфоцитов. Но чаще эти клетки характеризуются плотной, округлой, глыбчатой структурой ядра.
В 12% случаев обнаруживались цитоплазматические вакуоли различного размера. Цитоплазма таких клеток широкая, светло-голубая, содержит от одного до пяти крупных вакуолей или множество мелких. Ядро чаще неправильной формы, с плотной или нежной структурой.
Появление в крови лимфоцитов с признаками лизиса отмечались у 20% исследованных животных. Морфологически эти клетки имеют нарушение структуры и целостности цитоплазмы без нарушения ядерной структуры.
В крови животных отмечено появление широкоцитоплазменных лимфоцитов (5- i
25%). Цитоплазма широкая светло-голубая, иногда содержит азурофильные зерна с бледно окрашенными ядрами, которые расположены несколько эксцентрично.
При маститах и эндометритах, у лимфоцитов наблюдалась лизированная, вакуолинизированная и с двумя и более выростами (выпячиваниями) цитоплазма, при лимфопролиферативных заболеваниях эти выросты однополяр-ные (ворсинчатые лимфоциты) и в редких случаях обнаруживались клетки с единичными вакуолями в цитоплазме.
При актиномикозе, гиподерматозе, некробактериозе и воспалительных заболеваниях конечностей у 70% исследуемых обнаруживались морфологически зрелые лимфоциты, часть которых (от 5% до 10%) имели атипичную форму ядра. Атипизм клеток выражен со стороны ядер (инвагинированные и двуядерные формы клеток, реже другие) и очень редко в мазках крови обнаруживали клетки с измененной структурой цитоплазмы.
Характеризуя картину крови при гиподерматозах, необходимо отметить, что лимфоциты в ряде случаев (у 37%) имели морфологически атипичную структуру ядра.
По результатам проведенных исследований можно сделать вывод, что при лимфопролиферативных заболеваниях происходят не только количественные, но и качественные специфические изменения лимфоидных клеток, носящие устойчивый характер. При реактивных состояниях количество атипичных и молодых форм клеток значительно ниже, чем при гемобластозах.
Дальнейшие исследования были направлены на выявление иммунофеноти-пической природы цитоморфологических изменений при лимфопролиферативных процессах.
2.4. Структура гемобластозов и удельный вес реактивных состояний крупного рогатого скота
По результатам иммунофенотипического исследования больного гемобла-стозами крупного рогатого скота в хозяйствах Омской области была подтверждена неоднородность лимфопролиферативных заболеваний.
Установлено, что 43,2% животных имели фенотип В-клеточного хронического лимфолейкоза (В-ХЛЛ) с характерной экспрессией ассоциированных с В-клетками антигенов CD19, CD20, CD25, CD23 и антигена CD5. Экспрессия CD20 и CD25 слабая, что характерно для ХЛЛ. Экспрессия CD38 отсутствовала.
10,8% обследованного крупного рогатого скота имели фенотип характерный для В-пролимфоцитарного лейкоза. В отличие от В-ХЛЛ, при этом типе лейкоза выявлена выраженная экспрессия CD20 и слабая экспрессия антигена CD5. Экспрессия CD38 отсутствовала.
Выявлено 18,9% животных с иммунофенотипическими признаками селезеночной лимфомы. Иммунофенотип опухолевых клеток соответствует зрелым В-лимфоцитам: В-антигены CD19 и CD20 положительные; CD5, CD23, CD25 и CD38 слабая экспрессировали.
У 8,1% животных обнаружен фенотип фолликулярной лимфомы. Иммунофенотип опухолевых клеток при данном типе лимфом соответствует зрелым В-лимфоцитам: В-антигены (CD19, CD20) положительные; CD23 слабая экспрессия , CD5, CD25, CD38 - отсутствовали.
По данным иммунофенотипического исследования 2,7% животных имели признаки Т-пролимфоцитарного лейкоза. Клетки характеризовались выраженной мембранной экспрессией CD3, умеренной мембранной экспрессией CD5 и CD4. Опухолевые клетки не экспрессировали CD20, CD23. При иммуноцитохимическом исследовании препаратов периферической крови и костного мозга выявлено абсолютное преобладание Т-лимфоцитов клеток зрелого фенотипа CD3+, CD4+, CD8-и практически полностью отсутствовали В-лимфоцитов (CD20+ и CD25+).
16,3% животных с высоким уровнем лимфоцитоза характерные для лимфом маркеры не экспрессировали.
2.5. Иммуноморфологические типы гемобластозов
Проведенные иммунофенотипические исследования позволили подтвердить лимфпролиферативную природу цитоморфологических изменений, дать классификацию основным видам гемобластозов и описать их иммуноморфологические признаки (Рис. 3).
В-клеточный хронический чимфолейко В-ХЛЛ Уровень лейкоцитов варьирует в широких границах от 12х109/л. до 84x109/л., лимфоцитоз - 67-95%. Абсолютное количество лимфоцитов от 10x109/л. до 76x109/л. При микроскопическом исследовании в мазках периферической крови больных В-ХЛЛ определены малые клетки с цитоморфологическими признаками зрелых лимфоцитов.
Во всех исследуемых мазках обнаружены лимфоидные клетки «kugb-типа. Количество таких клеток варьировало от 8% до 25%. 15% и более лимфоидных клеток имели неправильную форму с вдавлением (форма Ридера) или с расщелиной. У 75% больных животных клетки с ядрами в виде листа клевера, подковы, восьмерки.
О 5 10 15 20 25 30
Рис. 3. Цитоморфологический тип лимфоидных клеток в периферической крови при разных видах лимфом и реактивных процессах
Наряду с преобладающим большинством клеток типа малых лимфоцитов у 40% животных присутствуют более крупные лимфоидные клетки и пролимфо-циты. Количество таких клеток не превышает 10%. В 90% мазках больных В-XJIJ1 обнаружены тени Боткина-Гумпрехта.
При В-ХЛЛ на поверхности лейкемических лимфоцитов обнаружена экспрессия В-клеточных антигенов CD 19, CD20 и активационных антигенов CD5 и CD23. Обнаружение антигена CD5 является обязательным для подтверждения диагноза хронического лимфолейкоза.
В-пролимфоцитарный лейкоз Уровень лейкоцитов варьирует от 21 х109/л. до 37x109/л., лимфоцитоз - 79-89%. Абсолютное количество лимфоцитов от 16x10%. до 33х109/л. Более 30% циркулирующих в крови лимфоидных клеток представлено пролимфоцитами. При анализе иммунофенотипа отмечена слабая или отсутствие экспрессии антигена CD5, и положительная экспрессия В-клеточных маркеров CD 19 и CD20.
Сечезеночная лимфома с ворсинчатыми лимфоцитами (ЛСВЛ). Уровень лейкоцитов варьирует от 7х109/л. до 39x109/л., лимфоцитоз превышает 78% у большинства животных. Абсолютное количество лимфоцитов от 4х109/л. до 20хЮ9/л., крайне редко достигает 39x10%. Лимфоциты в мазках крови среднего размера, более крупные, чем в норме и при В-ХЛЛ. Интересным морфологическим феноменом, выявляемым в циркулирующих лимфоцитах, является наличие тонких и коротких выростов цитоплазмы, (так называемые ворсинчатые лимфоциты - «УШоиь»-лимфоци1ы). На поверхностных мембранах клеток выраженна экспрессия антигена CD38. положительная реакция отмечена к В-клеточным антигенам CD 19, CD20. Характерные для В-ХЛЛ маркеры-антигены CD23 и CD5
14
тигенам CD19, CD20. Характерные для B-XJU1 маркеры-антигены CD23 и CD5 при JICBJI не экспрессируются на клетках. Антиген CD25 определяется в небольшом количестве случаев.
Фолликулярная лимфома Уровень лейкоцитов в среднем составлет 7,8х лимфоцитоз - 67%. Абсолютное количество лимфоцитов в среднем 5,5x109/л. В периферической крови большинство лимфоидных клеток полиморфны, размеры которых меньше чем при В-ХЛЛ, значительная часть клеток с расщепленным ядром (напоминают нормальные центроциты и центробласты). Иммунофеноти-пически опухолевые В-лимфоциты экспрессируют маркеры CD19, CD20 в отсутствие CD5. Отмечена слабая экспрессия CD23.
Т-пролгшфоцитарный лейкоз Уровень лейкоцитов варьирует от
20x109/л.
до 38x109/л., лимфоцитоз - 80%. Абсолютное количество лимфоцитов от 16x109/л. до 30х109/л. Преобладающий тип клеток, обнаруженных в мазках периферической крови, являются пролимфоциты Т-пролимфоциты - клетки среднего размера с плотной глыбчатой структурой хроматина, содержащие в большинстве случаев одно четко различимое ядрышко. Такие ядра не имеют столь правильных округлых очертаний, как В-пролимфоциты. У них ядерная мембрана с «зазубринами», небольшими вдавлениями, ядра отдельных клеток извитые или перекрученные. Ядра клеток округлые могут быть складчатые с вдавлением. Цитоплазма клеток умеренно или интенсивно базофильная, у части клеток имеются цитоплазматические отростки. Фенотип характеризуется хелперным профилем CD4+ и CD8-. В периферической крови выявлена популяция CD3+CD4+ CD5+CD8- клеток, что при сочетанном анализе морфологических и фенотипических данных позволило верифицировать имму-нофенотипически вариант Т-пролимфоцитарного лейкоза
2.6. Дифференциальная диагностика гемобластозов от других патологических состояний организма крупного рогатого скота
Проведенные гематологические исследования показали, что в большинстве своем морфологические изменения клеток белой крови при лимфопролиферативных заболеваниях имеет определенное постоянство. Появление в крови незрелых и патологических форм лимфоцитов свыше 15% от общего числа лимфоцитов, несмотря на отрицательный диагноз по результатам количественного гематологического анализа свидетельствует о развитии лимфопролиферативного процесса.
Преобладание тех или иных незрелых или патологических клеток в мазке периферической крови указывает на форму гемобластоза
Отмечаемые в ряде случаев изменения реактивного характера нестабильны и исчезают при последующих исследованиях.
На основании иммуноморфологического анализа были выявлены основные типы лимфом у крупного рогатого скота в хозяйствах Омской области и ха-
рактерные для них типы лимфоидных клеток, позволяющие дифференцировать реактивные состояния животных (табл. 3).
Таблица 3. Критерии дифференциальной диагностики гемобластозов
Тип лимфом Кол-во лейкоцитов в 1 мкл Абсолютное количество лимфоцитов в 1 мкл Атипичные и молодые формы
Подозрительные по заболеванию Больные животные
ХЛЛ от 12 000 от 10 000 ¡0-20% 1ени цитолиза (Боткина-Гумпрехта), «1^1»-тип, «клевер», Ридера, пролимфоцитов >20%
слвл от 7 000 от 4 000 10-15% Ворсинчатые лимфоциты >15%
ФЛ от 7 800 от 5 500 10-15% Центроциты и центробласты >15%
Пролимфоцитарн ый лейкоз от 20 000 от 16 000 10-20% Пролимфоциты >20%
Реактивные состояния* от 7500 от 2 000 5-10% -
Примечание * - гиподерматоз, мастит, эндометрит, некробактериоз, бурсит, актиномикоз
Тени цитолиза (Боткина-Гумпрехта), «к1щ1»-тип, «клевер», Ридера, про-лимфоциты (до 20%), суммарное появление этих типов клеток дает основание поставить диагноз на В-клеточный хронический лимфолейкоз.
Если количество циркулирующих в крови В- или Т-пролимфоцитов превышает 20% можно утверждать, что это В- или Т-пролимфоцитарный лейкоз.
«УП1ои5»-лимфоциты (ворсинчатые лимфоциты), появление в крови этого типа клеток указывает на лимфому маргинальной зоны селезенки.
Центроциты и центробласты свидетельствует об опухоли из В-клеток фолликулярного центра, т.е. о фолликулярной лимфоме.
ВЫВОДЫ
1. Гемобластозы крупного рогатого скота имеют широкое распространение в хозяйствах Омской области. По результатам эпизоотологического мониторинга отмечена сезонная динамика среди животных, подозреваемых на гемобластозы. Весной в среднем выявляется 6,6% подозрительных по заболеванию коров, среди которых в этот же период наблюдается закономерное увеличение числа животных с реактивными состояниями (маститы, эндометриты, гиподерматоз, бурситы, некробактериоз, стельность и др.). Осенью процент выявляемых животных подозрительных по лейкозу снижен в 2,5 раза, также уменьшается количество животных с реактивными состояниями.
2. Для каждого типа гемобластоза характерен устойчивый цитоморфологи-ческий состав опухолевых клеток: хронический лимфочейкоз - малые лимфоциты, тени цитолиза (Боткина-Гумпрехта), «к1^1»-тип, «клевер», Ридера, про-
лимфоциты; пртимфоцитарный чейкоз - В- или Т-пролимфоциты; чимфоиа маргинальной юны селезенки - «УШоия»-лимфоциты (ворсинчатые лимфоци-Чы); фолликулярная пимфоча - центроциты и центробласты.
3. Установлено, что у 50% из числа подозреваемых животных количественные и качественные изменения в периферической крови носят реактивный характер (нормальные лимфоциты - 75,91±0,9%; атипичные и молодые формы лимфоцитов -9,82±0,5%. Р<0,05) и при дальнейшем наблюдении эти показатели снижаются до физиологической нормы. Цитоморфологические изменения при лимфопролифера-тивных заболеваниях носят устойчивый характер, при первом исследовании процент незрелых и атипичных клеток у гематологически больных животных находится на уровне 17,53±1,5 (Р0,05), ко второму исследованию количество клеток этого типа, остается на прежнем уровне либо индолентно прогрессирует.
4. В хозяйствах Омской области лимфопролиферативные заболевания носят гетерогенный характер, среди них преобладает В-хронический лимфолейкоз - 43,2%, селезеночная лимфома - 18,9%; В-пролимфоцитарный лейкоз - 10,8%; фолликулярная лимфома - 8,1 %; Т-пролимфоцитарный лейкоз - 2,7%. На долю реактивных состояний приходится 16,3%.
5. Каждому типу лейкозов и лимфом крупного рогатого скота свойственен определенный набор кластеров дифференцировки [СО], то есть специфический иммунофенотипический профиль, что позволяет выделять характерные цитоморфологические типы клеток и классифицировать лимфопролиферативные заболевания.
6. Совокупность морфологических и иммунологических признаков опухолевых клеток позволяет достоверно проводить дифференциальную диагностику между реактивными и опухолевыми состояниями и точно определять вариант лимфопролиферативной опухоли у крупного рогатого скота.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Результаты исследований вошли в методические рекомендации «Дифференциальная диагностика гемобластозов крупного рогатого скота по морфологической картине крови», рассмотрены и одобрены секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Министерства сельского хозяйства и продовольствия Омской области (протокол № 6 от 11.11.2004 г.).
2. Использование дополнительных критериев диагностики гемобластозов крупного рогатого скота позволит выявлять лимфопролиферативные заболевания, протекающие с алейкемической картиной крови, и дифференцировать эти заболевании от других болезней. Благодаря этому прекратится выбраковка животных с другими болезнями, имеющими картину крови как при лейкозе.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Зорина, И Р Дифференциальная диагностика лейкемоидных реакций при разных патологических состояниях крупного рогатого скота / Н.Р. Зорина, В.И. Околелов // Био. - 2003. - № 9,- С. 25-27.
2. Зорина, H Р Значение качественных изменений лимфоцитов при диагностике лейкоза крупного рогатого скота / Н.Р. Зорина // Вестн. ОмГАУ. - 2003. - №2. - С. 57-59.
3. Зорина, HP Значение лейкемоидных реакций и морфофункциональных изменений лимфоцитов при диагностике лейкоза крупного рогатого скота / Н.Р. Зорина В.И., Околелов // Материалы международной конференции, посвященной 175-летию аграрной науки Сибири (24 - 26.06.2003). - Омск, 2003.-С. 381-385.
4. Применение цитохимических методов исследования при диагностике лейкоза крупного рогатого скота / В.И. Околелов, Н.Р. Зорина, Ю.Н. Павлов, В.Ф. Капоч-кин, C.B. Никольченко, Е.А. Резаева // Вестн. ОмГАУ. - 2003. - № 4. - С. 96-100.
5. Динамика лейкоза крупного рогатого скота в хозяйствах сибирского региона / Н.Р. Зорина, В.Ф. Капочкин, C.B. Никольченко, Е.А. Резаева // Эпизоотология, патология и ветеринарно-санитарные мероприятия при инфекционных болезнях животных: сб. науч. тр. - Омск, 2004. - С. 155-160.
6. Проблема чейкоза крупного рогатого скота в Российской Федерации / В.И. Околелов, Н.Р. Зорина, В.Ф. Капочкин, C.B. Никольченко, Е.А. Резаева // Проблемы ветеринарного образования и научных исследований в агропромышленном комплексе: сб. науч. тр. - Омск, 2004. - С. 187-193.
7. Зорина, HP. Факторы, влияющие на результаты гематологического исследования при диагностике лейкоза крупного рогатого скота / Н.Р. Зорина, В.Ф. Капочкин, В.И. Околелов // Био.- 2004. - №11. - С. 14-15.
8. Зорина, H Р. Картина крови при лейкозе и других болезнях животных / Н.Р. Зорина, В.И. Околелов, В.Ф. Капочкин // Ветеринарный консультант. -2005,-№6.-С. 18-21.
9. Зорина, II Р. Сезонная динамика лейкемоидных реакций / Н.Р. Зорина, В.И. Околелов, В.Ф. Капочкин // Научные основы профилактики и лечения болезней животных: сб. науч. тр. ведущих ученых России, СНГ и др. стран. -Екатеринбург Урал, изд-во. 2005.-С. 191-197.
10. Зорина, Н.Р. Цитоморфологические особенности картины крови при лейкозе и других болезнях животных / Н.Р. Зорина, В.И. Околелов // Научные основы профилактики и лечения болезней животных- сб науч. тр ведущих ученых России, СНГ и др. стран. - Екатеринбург Урал, изд-во. 2005.-С. 95-101.
На правах рукописи
ЗОРИНА НАТАЛЬЯ РОБЕРТОВНА
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕМОБЛАСТОЗОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПО ДАННЫМ МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ КАРТИНЫ КРОВИ
16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Омск 2005
С дано в набор 18 08 05 11о>шисано в печать 17 08 05
Формат 60x84/16 Гарнитура Times New Roman Уел печ т I 25 Печать оперативная Тираж 100 jk3 Лицензия JIT ,4s 020074
Отпечатано с оригина i макета В (ипографии ООО "Вариант Сибирь > 644122 г Омск ул Яковаева 5 Гет/факс 2S 03 54
»149 13
РНБ Русский фонд
2006-4 11492
Оглавление диссертации Зорина, Наталья Робертовна :: 2005 :: Омск
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Распространение гемобластозов крупного рогатого скота в Российской Федерации и зарубежом.
1.2. Современные методы прижизненной лабораторной диагностики гемобластозов крупного рогатого скота.
1.2.1. Серологические и ПЦР методы диагностики.
1.2.2. Гематология и цитология лимфолейкоза.
1.2.3. Иммунофенотипирование.
1.3. Лейкозогенез.
1.4. Лейкемоидные реакции.
Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Зорина, Наталья Робертовна, автореферат
Актуальность темы. Изучение морфологических показателей периферической крови при разнообразных физиологических и патологических состояниях с учетом индивидуальных особенностей организма имеет огромное значение для исключения ошибок при диагностике заболеваний системы крови (К.А. Акопян, 1939; В.Н. Никитин, 1956; Г.С. Петровский, 1965; Э.М. Нымм, 1971; А.А. Кудрявцев, JI.A. Кудрявцева, 1974; Н.С. Петракова, 1986; Г.А. Симонян, 1995; Ю.П. Смирнов, 1998; L. Marcson, 1980; М. Mammerickx et al., 1985; L. Dimitriadis et al., 1987; C. Parrish et al., 1988).
В большинстве своем прижизненный диагноз на гемобластозы в начальной их стадии ставится количественным методом и не подтверждается патоморфо-логическим исследованием (Е.А. Дун, 1991; Х.С. Салимов, 1991; А.Г. Незави-тин, 1995; М.И. Гулюкин, П.Н. Смирнов, 1999). Ряд авторов (Б.Б. Ермолаев, 1967; О.Ч. Парчинский, 1974; R. Gotze et al., 1954; Е. Wiesner, 1967 и др.) признавая гематологическую диагностику, подчеркивают, однако, ее недостаточность для выявления алейкемических и сублейкемических форм, которые составляют от 4,1 до 30% и даже выше, при диагностике гемобластозов по стаду.
Обнаруживаемые лейкоцитоз и лимфоцитоз в крови можно объяснить во многих случаях наличием всевозможных патологий. Согласно данным Г.В. Зверевой (1951), Б.Б. Ермолаева (1967, 1972), Н.М. Хилькевича (1970), Ю.А. Козырева (1972), П.В. Филатова с соавт. (1972), А.П. Горбунова (1972), Г.А. Симоняна (1975) и др., лимфатический тип лейкемоидных реакций отмечается при анаплазмозе, травматическом ретикулите, туберкулезе, бруцеллезе, маститах, нефритах, миокардитах, пневмониях, гепатохолангитах, гепатитах, циррозах, абсцессах. Сходная с гемобластозами картина крови по данным Н.Т. Васильева с соавт. (1966) возможна при некоторых хронических, относительно доброкачественно протекающих инфекциях, поражающих лимфатические узлы.
Во многих случаях изменения состава крови являются вторичными, обусловленными нарушениями физиологической деятельности различных систем или органов (В.М. Лемеш с соавт., 1986; М.А. Амироков с соавт., 1997 и др.).
И.А. Кассирский с соавт. (1970) также указывает, что кровь в определенной степени отражает как в зеркале многое из того, что происходит в организме.
Ряд исследователей (И.В. Давыдовский, 1958; Н.А. Краевский с соавт., 1961; Э. Попеску, 1965; Н.Н. Доронин с соавт., 1976; Л.Г. Бурба с соавт., 1977; Г.А. Симонян, 1995) сообщают, что при лимфопролиферативных опухолевых процессах в кровяное русло может поступать большее или меньшее количество незрелых форм клеток - пролимфоцитов, лимфобластов, миелоцитов, промие-лоцитов, миелобластов, промоноцитов, гемоцитобластов и ретикулярных клеток, а также клеток с делящимся ядром.
Однако, в доступной литературе мы не нашли единого мнения авторов о появляющихся в периферической крови стабильных цитоморфологических изменений лимфоцитов. Дифференциальная диагностика лимфопролиферативных процессов от распространенных болезней крупного рогатого скота, протекающих с подобными изменениями в крови, также освещена недостаточно, что и предопределило направление наших исследований.
Цель работы. Дифференциальная диагностика гемобластозов крупного рогатого скота по данным морфологической картины крови.
Задачи исследований:
• Установить динамику распространения гемобластозов в Сибирском регионе на модели отдельных хозяйств Омской области;
• Выявить устойчивые морфологические признаки и иммунофенотипический профиль лимфоцитов крови крупного рогатого скота больного гемобластозами;
• Определить удельный вес реактивных и опухолевых состояний среди животных с патологическими сдвигами в гемограмме;
• Изучить структуру хронических лимфопролиферативных заболеваний крупного рогатого скота;
• Дифференцировать лимфопролиферативный процесс у коров от других патологических состояний.
Научная новизна. Впервые в этой работе проанализирован иммунофено-типический профиль лимфоцитов при лимфопролиферативных процессах крупного рогатого скота. Выявлена неоднородность лимфопролиферативных заболеваний и определены основные типы лимфом и лейкозов, распространенных в хозяйствах Омской области.
Установлено, что 50-60% животных с увеличенным количеством лейкоцитов и лимфоцитов до уровня «подозрительных» по заболеванию лейкозом при повторном исследовании (через месяц) имеют картину крови в пределах нормы. Полученные данные свидетельствуют о влиянии ряда факторов (заболевания разной этиологии, стельность) на картину крови животных, которые необходимо учитывать, проводя диагностические исследования на лимфопро-лиферативные заболевания, чтобы исключить ошибки.
На модели ряда хозяйств с разной эпизоотической ситуацией по гемобла-стозам впервые изучены особенности их годовой динамики с учетом факторов внешней среды, условий содержания и индивидуальных особенностей организма.
Установлено, что появление в крови незрелых и патологических форм лимфоцитов свыше 15% от общего числа лимфоцитов, свидетельствует о развитии лимфопролиферативного процесса.
Изучены цитоморфологические особенности лейкоцитов крови у больного гемобластозами крупного рогатого скота и установлены специфические варианты лимфоидных клеток при определенных типах лимфопролиферативных заболеваний. Выявленные количественные и качественные изменения в периферической крови позволяют дифференцировать реактивные процессы от лимфопролиферативных.
Теоретическая и практическая значимость работы. Показана возможность использования иммунофенотипирования лимфоцитов для дифференциальной диагностики лимфопролиферативных заболеваний крупного рогатого скота.
Описанные цитоморфологические особенности лимфоцитов позволяют дифференцировать лимфопролиферативные и реактивные процессы. Доказана взаимосвязь морфологических и иммунофенотипических характеристик лимфоидных элементов разных этапов дифференцировки. Дана классификация гемобластозов крупного рогатого скота распространенных на территории Омской области.
Разработаны методические рекомендации по дифференциальной диагностике гемобластозов крупного рогатого скота от других патологических состояний (Омск, 2004). Научно обоснованы планы и программа по созданию свободных от инфекции BJIKPC стад крупного рогатого скота в племенных хозяйствах и фермах Омской области.
Материалы диссертации используются в учебном процессе кафедр эпизоотологии и инфекционных болезней животных ИВМ ОмГАУ, Новосибирского ГАУ, Уральской ГАВМ.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Динамика заболеваний лимфопролиферативной природы крупного рогатого скота на модели ряда хозяйств Омской области;
2. Цитоморфологические особенности лимфоцитов крови у больного ге-мобластозами крупного рогатого скота и иммунофенотипическая характеристика основных типов лимфом, распространенных в хозяйствах области;
3. Критерии и эффективность дифференциальной диагностики гемобластозов крупного рогатого скота по морфологической картине крови.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на межрегиональной научной конференции молодых ученых аграрных вузов Сибирского федерального округа (Омск, 2003); международной конференции, посвященной 175-летию аграрной науки Сибири (Омск, 2003); научно-практической конференции, посвященной 85-летию ИВМ ОмГАУ (Омск, 2003); международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук (Омск, 2004); международной научно-практической конференции, посвященной профилактике и мерам борьбы с лейкозом крупного рогатого скота в Российской Федерации (Екатеринбург, 2005); совместном заседании кафедр эпизоотологии и паразитологии с.-х. животных ИВМ ОмГАУ (Омск, 2005).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций. Список использованной литературы включает 242 источника, из них 74 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 4 таблицами и 35 рисунками.
Заключение диссертационного исследования на тему "Дифференциальная диагностика гемобластозов крупного рогатого скота по данным морфологической картины крови"
4. ВЫВОДЫ
1. Гемобластозы крупного рогатого скота имеют широкое распространение в хозяйствах Омской области. По результатам эпизоотологического мониторинга отмечена сезонная динамика среди животных, подозреваемых на гемобластозы. Весной в среднем выявляется 6,6% подозрительных по заболеванию коров, среди которых в этот же период наблюдается закономерное увеличение числа животных с реактивными состояниями (маститы, эндометриты, гиподерматоз, бурситы, нек-робактериоз, стельность и др.). Осенью процент выявляемых животных подозрительных по лейкозу снижен в 2,5 раза, также уменьшается количество животных с реактивными состояниями.
2. Для каждого типа гемобластоза характерен устойчивый цитоморфологи-ческий состав опухолевых клеток: хронический лимфолейкоз — малые лимфоциты, тени цитолиза (Боткина-Гумпрехта), «kugb-тип, «клевер», Ридера, пролимфоци-ты; пролимфоцитарный лейкоз — В- или Т-пролимфоциты; лимфома маргинальной зоны селезенки - «УП1ош»-лимфоциты (ворсинчатые лимфоциты); фолликулярная лимфома — центроциты и центробласты.
3. Установлено, что у 50% из числа подозреваемых животных количественные и качественные изменения в периферической крови носят реактивный характер (нормальные лимфоциты - 75,91±0,9%; атипичные и молодые формы лимфоцитов - 9,82±0,5%, Р<0,05) и при дальнейшем наблюдении эти показатели снижаются до физиологической нормы. Цитоморфологические изменения при лимфопролиферативных заболеваниях носят устойчивый характер, при первом исследовании процент незрелых и атипичных клеток у гематологически больных животных находится на уровне 17,53±1,5 (Р<0,05), ко второму исследованию количество клеток этого типа, остается на прежнем уровне либо индо-лентно прогрессирует.
4. В хозяйствах Омской области лимфопролиферативные заболевания носят гетерогенный характер, среди них преобладает В-хронический лимфолейкоз —
43,2%, селезеночная лимфома - 18,9%; В-пролимфоцитарный лейкоз — 10,8%; фолликулярная лимфома - 8,1%; Т-пролимфоцитарный лейкоз - 2,7%. На долю реактивных состояний приходится 16,3%.
5. Каждому типу лейкозов и лимфом крупного рогатого скота свойственен определенный набор кластеров дифференцировки [CD], то есть специфический иммунофенотипический профиль, что позволяет выделять характерные цитоморфологические типы клеток и классифицировать лимфопролифератив-ные заболевания.
6. Совокупность морфологических и иммунологических признаков опухолевых клеток позволяет достоверно проводить дифференциальную диагностику между реактивными и опухолевыми состояниями и точно определять вариант лимфопролиферативной опухоли у крупного рогатого скота.
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Результаты исследований вошли в методические рекомендации «Дифференциальная диагностика гемобластозов крупного рогатого скота по морфологической картине крови», рассмотрены и одобрены секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Министерства сельского хозяйства и продовольствия Омской области (протокол № 6 от 11.11.2004 г.).
2. Использование дополнительных критериев диагностики гемобластозов крупного рогатого скота позволит выявлять лимфопролиферативные заболевания, протекающие с алейкемической картиной крови, и дифференцировать эти заболевании от других болезней. Благодаря этому прекратится выбраковка животных с другими болезнями, имеющими картину крови как при лейкозе.
Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2005 года, Зорина, Наталья Робертовна
1.Абелев, Г.И. Иммунология злокачественных опухолей / Г.И. Абелев // Вестн. АМН СССР. 1974. - № 2. - С. 23-29.
2. Абелев, Г.И. Эмбриональный сывороточный а-глобулин при злокачественных опухолях / Г.И. Абелев // Вестн. АМН СССР. 1970. - № 7. - С. 49-57.
3. Абрамов, М.Г. Гематологический атлас / М.Г. Абрамов М.: Медицина, 1985.
4. Аверкина, Р.Ф. Сравнительное изучение антигенных свойств тканей животных различных видов на разных стадиях развития / Р.Ф. Аверкина // Бюл. эксперим. Биологии и медицины. — 1956. — № 2 С. 70-73.
5. Авилов, В.М. Проблемы оздоровления крупного рогатого скота от лейкоза / В.М. Авилов, В.М. Нахмансон // Ветеринария. 1995. - № 11. - С. 3-6.
6. Агеенко, А.И. Молекулярная биология и иммунология вирусного канцерогенеза. / А.И. Агеенко. М.: Медицина, 1974. - 327 с.
7. Акопян, К.А. Возрастная изменчивость картины крови у крупного рогатого скота. / К.А. Акопян //Докл. ВАСХНИЛ, 1939. Вып. V-VI.
8. Албре, Э. О распространении лимфаденоза крупного рогатого скота в Эстонской ССР в послевоенные годы. / Э. Албре // Сб. научных трудов Эстонской сельскохозяйственной академии. т. 8. - Тарту, 1958.
9. Амирова, С.Х. Гематологический профиль крупного рогатого скота неблагополучных по лейкозу стад. / С.Х. Амирова // Тр.ВИЭВ. М., 1991. - т. 70. - 30 с.
10. Апалькин, В.А. Ветеринарная служба Алтайского края на современном этапе / В.А. Апалькин // Ветеринария Сибири. 1998. - № 1. — С. 16-19.
11. Бене, М.К. Предложения для иммунологической классификации острых лейкозов (Европейская группа по иммунологической классификации лейкозов) / М.К. Бене, Г. Кастолди, В. Нанн и др. // Гематол трансфузи-ол.-1996.-С. 41-43.
12. М.Белик, В.М. Влияние некоторых факторов среды на проявление лейкоза крупного рогатого скота / В.М. Белик // Лейкоз крупного рогатого скота. Персиановка, 1983. - С. 68-71.
13. Бобров, Н.Н. Картина крови при туберкулезе. / Н.Н. Бобров — М.: Изд. АМН СССР. 1950.
14. Бурба, Л.Г. Роль вирусов в этиологии лейкозов крупного рогатого скота. /
15. Л.Г. Бурба, В.Ф. Валиханов, Г.А. Надточей, Б.И. Сурин М., 1977.
16. Бурба, Л.Г. Экспериментальное воспроизведение лейкоза у сельскохозяйственных животных / Л.Г. Бурба // Этиология и иммунодиагностика лейкоза крупного рогатого скота. — Рига, 1979. — С. 62-66.
17. Бурба, Л.Г. Диагностика лейкозов сельскохозяйственных животных. / Л.Г. Бурба, А.А. Кунаков М.: Колос, 1983. - 191 с.
18. Бурба, Л.Г. Комплексная оценка иммунологического состояния больноголейкозом крупного рогатого скота / Л.Г. Бурба, А.Н. Федорченко // Иммунология и иммунотерапия лейкозов человека и животных: Тез. докл. Всесоюзн. конф / Ташкент. 1984. - С. 39-40.
19. Бурба, Л.Г. Научные основы программы профилактики и борьбы с лейкозами животных. / Л.Г. Бурба, В.М. Нахмансон, А.Ф. Валихов // Тр. ВИЭВ. 1982. - т. 55. - С. 16-20.
20. Бурба, Л.Г. Лейкозы и злокачественные опухоли животных. / Л.Г. Бурба,
21. А.Ф. Валихов, В.А. Горбатов и др. М.: «Колос», 1988. - 400 с.
22. Бурба, Л.Г. Временные методические рекомендации по постановке реакции иммунодиффузии для выявления антител к антигену р24 он-корнавируса в сыворотках крови крупного рогатого скота при диагностике на лейкозы. / Л.Г. Бурба, А.Ф. Валихов М., 1976. - 7 с.
23. Бусол, В.А. Тест-система для выявления вируса лейкоза крупного рогатого скота полимеразной цепной реакцией / В.А. Бусол, О.Ю. Лиманская, А.П. Лиманский, В.И. Цымбал // Розвиток ветеринарной науки в Ук-рашкздо-буткитапроблеми. -Харыав, 1997.-С. 108-112.
24. Бусол, В.А. Эпизоотология гемобластозов крупного рогатого скота: авторев. дис. д-ра вет. наук./В.А. Бусол — М., 1983. 24 с.
25. Бусол, В. А. О генетической предрасположенности к лейкозу, внутриутробной и горизонтальной передаче его у крупного рогатого скота / В.А. Бусол // Лейкоз крупного рогатого скота. — Рига: Зинатне, 1973. — С. 38-40.
26. Бусол, В.Н. Некоторые вопросы эпизоотологии лейкоза крупного рогатого скота / В.Н. Бусол // Научн. зап. Б-Церковского с.-х. ин-та. 1987. - т. 20.-С. 38-41.
27. Валихов, А.Ф. Сывороточные преципитирующие антитела к онкорнави-русу типа С крупного рогатого скота. / А.Ф. Валихов Ветеринария, 1976.-№ 1.-С. 44-46.
28. Валихов, А.Ф. Распространение онкорнавируса крупного рогатого скота в неблагополучных по лейкозу хозяйствах / А.Ф. Валихов, Л.Г. Бурба, В.М. Нахмансон // Ветеринария. 1978. - № 3. - С. 40-43.
29. Валихов, А.Ф. Лейкоз крупного рогатого скота (Вирусологические аспекты) / А.Ф. Валихов, В.П. Шишков, Л.Г. Бурба // Обзорная информация ВИИТЭИСХ. М.: 1980. - 80 с.
30. Васильев, А.В. Гематология сельскохозяйственных животных. / А.В. Васильев—М.: Огиз-Сель-хозгиз, 1948.
31. Васильев, Н.Т. Лейкозы сельскохозяйственных животных. / Н.Т. Васильев, Н.В. Румянцев Изд. 2-е, перераб., доп. - М., «Колос», 1975. - 304 с.
32. Васильев, Н.Т. Лейкоз крупного рогатого скота. / Н.Т. Васильев — Волгоград, 1962.
33. Васильев, Н.Т. Лейкозы с.-х. животных. / Н.Т. Васильев, Н.В. Румянцев, В.З. Черняк -М., 1966.
34. Верховский, О.А. Иммуноферментный анализ в диагностике лейкоза крупного рогатого скота. / О.А. Верховский, В.В. Цибезов, М.Б. Баландина Ветеринария. — № 12. — 2002.
35. Визнер, Э. Лейкоз крупного рогатого скота. / Э. Визнер М.: Сельхозиз-дат, 1963.
36. Воробьев, А.И. Руководство по гематологии / А.И. Воробьев. — М.: Ньюдиамед, 2002. 148 с.
37. Воробьев, А.И. Патогенез и терапия лейкозов./ А.И. Воробьев, М.Д. Бриллиант М.: Медицина, 1976.
38. Воронин, Е.С. Иммунология./ Е.С. Воронин, A.M. Петров, М.М. Серых, Д.А. Девришов М.: Колос-Пресс, 2002. - 408с.
39. Гейл, Р.П. Баттурини. / Р.П. Гейл //Гематол. и трансфизиол. — 1994. т.39.-№6.-С. 3-6.45 .Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц-М.: Практика, 1999.
40. Глузман, Д.Ф. Лабораторная диагностика онкогематологических заболеваний / Д.Ф. Глузман, И.В. Абраменко, JI.M. Скляренко, В.А. Надгорная Киев. - Морион. - 1998. - 336 с.
41. Глузман, Д.Ф. Диагностика лейкозов. / Д.Ф. Глузман // Атлас и практическое руководство. К.: МОРИОН, 2000. - 224 с.
42. Глузман, Д.Ф. Диагностическая иммуноцитохимия опухолей. / Д.Ф. Глузман, Л.М. Скляренко, В.А. Надгорная, И.А. Крячок Киев: Морион, 2003.- 156 с.
43. Гольдберг, ЕД. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатнчееких миелосупрессиях. / Е.Д. Гольдберг, A.M. Дыгай, В.В. Жданов Томск: STT. - 1999. - 128 с.
44. Горбунов, А.П. Изменение крови и кроветворных органов у крупного рогатого скота при лейкемоидных реакциях / А.П. Горбунов // Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума по лейкозу. М., 1972.
45. Гулюкин, М.И. Разработка эффективных мероприятий против лейкоза крупного рогатого скота. / М.И. Гулюкин, JI.A. Иванова, Н.В. Замараева, Н.В. Баркова, К.П. Грек, В.А. Храмцов, А.С. Донченко. Ветеринария. -2002.-№ 12.-С. 3-8.
46. Гулюкин, М.И. Разработка эффективных мер против лейкоза крупного рогатого скота/ М.И. Гулюкин, В.В. Храмцов, А.С. Донченко и др. // Ветеринария. № 12. - 2002. - С. 3-7.
47. Давыдовский, И.В. Патологическая анатомия и патогенез болезней человека. / И.В. Давыдовский М.: Медгиз, 1958.
48. Дот, Р. Причины рака / Р. Долл, Р. Пито К.: Наукова думка, 1984. - 254 с.
49. Доронин, Н.Н. Лейкоз крупного рогатого скота. / Н.Н. Доронин Киев, «Урожай», 1969.61 .Доронин, Н.Н. Лейкоз крупного рогатого скота. / Н.Н. Доронин, В.А. Бу-сол, Г.Х. Субаев К.: «Урожай», 1976. - С. 200.
50. Дризе, Н.И. II Бюл, эксперим. биол. и медицины. / Н.И. Дризе, Т.В. Тод-рия, Н.Л. Чертков 1999. - т. 127. -№ 4. - С. 419-423.
51. Дульцин, М.С. Лейкозы. / М.С. Дульцин, И.А. Кассирский, М.О. Раушенбах-М., 1965.
52. Дун, Е.А. Цитогенетические и эпизоотологические аспекты лейкоза крупного рогатого скота: автореф. дис. .д-ра вет. наук / Е.А. Дун. М., 1991.-51 с.
53. Дыгай, A.M. Роль межклеточных взаимодействий в регуляции гемопоэза. / A.M. Дыгай, В.П. Шахов Томск, 1989. - 224 с.
54. Езовитов, Н.Б. Реакция иммунодиффузии с гликопротеидным антигеномонкорнавируса. / Н.Б. Езовитов Ветеринария, 1979. - № 5. - С. 69-70.
55. Ермолаев, Б.Б. Клинико-гематологическая диагностика лимфолейкозакрупного рогатого скота: автореф. докт. дис. / Б.Б. Ермолаев — Новочеркасск, 1967.
56. Иванова, JI.A. Опыт использования секретов молочной железы коров для выявления антител к вирусу лейкоза/ Л.А.Иванова, М.И. Гулюкин, А.В. Васин и др. // БкжВсерос. НИИ эксперим.ветеринарии. 1996. -Вып.77. - С. 67.
57. Карпутъ, И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных. / И.М. Карпуть Минск: Ураждай, 1986.
58. Карпутъ, И.М. Кроветворение у здорового и больного лейкозом крупногорогатого скота. / И.М. Карпуть, И.А. Анисим // Мат. респ. межвузовскойконф. молодых ученых по естественным паукам. Мн.: Изд-во БГУ, 1970.-С. 160-161.
59. Кассирский, И.А. Клиническая гематология / И.А. Кассирский, Г.А. Алексеев. М.: Медгиз, 1970. - 242 с.
60. Клиническая онкогематология: Руководство для врачей / Под ред. М. А.
61. Волковой. М., 2001. 1%.Козинец, Г.И. Атлас клеток крови и костного мозга. / Г.И. Козинец — М.:
62. Коромыслов, Г. Ф. Бюллетень Всесоюзного ин-та экспериментальной ветеринарии. / Г.Ф. Коромыслов М., 1974. - вып. 17. - С. 58.
63. Краевский, Н.А. О взаимоотношениях костной и кроветворной тканей принекторых заболеваниях. / Н.А. Краевский, Н.М. Неменова, М.П. Хохло-ва, Э.З. Новикова // Архив патологии, 6 1961.
64. Красноперое, В.А. Эффективность системы оздоровительных мероприятий при лейкозе крупного рогатого скота в условиях Свердловской области: ав-тореф. дисканд. вет. Наук / В.А. Красноперов М., 1999. - 23 с.
65. Крикун, В.А. Лейкоз крупного рогатого скота и иммунологическая толерантность. / В.А. Крикун // Ветеринария 2002. - № 6. - С.7-8.
66. Кудрявцев, А.А. Клиническая гематология животных. / А.А. Кудрявцев,
67. Л.А. Кудрявцева Издательство «Колос» Москва, 1974. — 399 с.
68. Кудрявцева, Т.П. Лейкоз животных. / Т.П. Кудрявцева М.: Россельхозиздат, 1974.
69. Кукайн, Р.А. Итоги многолетних наблюдений развития экспериментальногоиндуцированного хронического лимфолейкоза крупного рогатого скота / Р.А. Кукайн, Л.И. Нагаева, СБ. Чапенко. Рига: Зинатне, 1979. - С. 36.
70. Кузьмичев, В. С. Гематологические и серологические исследования прилейкозе. / B.C. Кузьмичев Ветеринария. — № 3. - 1981. - С.63-65.
71. Лемеш, В.М. Лейкоз крупного рогатого скота. / В.М. Лемеш, В.Н. Якубов, А.Г. Дрогун и др. // Мн.: Ураджай, 1978. 200 с.
72. Лемеш, В.М. Особенности распространения онковирусной инфыекции крупного рогатого скота. / В.М. Лемеш, Л.П. Островская, С.А. Шуринова и др. // Вет. наука- производству. 1987. - Вып. 25. - С. 71-73.
73. Мальцева, Н.А. Ветеринарная патология. / Н.А. Мальцева, Г.О. Шайхаев, А.Г.
74. Ирский, С.Г. Постовой, А.А. Животов, Е.Е. Шлычков, В.Ф. Ерёмин — 2003.
75. Марошкин, Б. Ф. Этиология и патогенез хронической гематурии крупногорогатого скота: автореф. докт. дис. / Б.Ф. Марошкин — Львов, 1959.
76. Методические указания по диагностике лейкоза крупного рогатого скота.- № 13. 7. - 2/2130. - 2000.
77. Москалик, P.C. Эпизоотологические и иммунологические основы борьбы с лейкозом крупного рогатого скота: автореф. дис. . д-ра вет. наук. / Р.С. Москалик Новосибирск, 1992. - 46 с.
78. Мурватуллоев, С. А. Взаимосвязь между выпадением серологического ответа и гематологическими показателями у больных лейкозом коров. / С.А. Мурватуллоев // Ветеринария. 2002. - № 10. - С. 17-18.
79. Незавитин, А.Г. Генеалогическая характеристика стад крупного рогатого скота Новосибирской области по устойчивости к лейкозу / А.Г. Незавитин // Тез. докл. Всесоюз. конф. Новосибирск, 1990. - С. 37-38.
80. Нахмансон, В.М. Значимость комплексной диагностики в системе противолейкозных мероприятий / В.М. Нахмансон // Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных. Новосибирск, 1997. - С.95-96.
81. Нахмансон, В.М. Лейкоз крупного рогатого скота. / В.М. Нахмансон — М.:
82. Россельхозиздат, 1986. 221 с.
83. ВЛКРС, лейкозу и влияние некоторых экологических факторов на ин-терьерные показатели крупного рогатого скота: автореф. дис. .д-ра биол. наук/А.Г. Незавитин. Новосибирск, 1995. -43 с.
84. Никитин, В.Н. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных.
85. В.Н. Никитин-М.: Сельхозгиз, 1956.
86. Нымм, Э.М. Материалы II симпозиума по лейкозу крупного рогатого скота/Э.М. Нымм-Таллин, 1971.-С. 45.
87. Облап, Р.В. Вирус бычьего лейкоза и диагностика инфицированных животных / Р.В. Облап, В.И. Глазко, А.А. Созинов // Аграр. наука. — 1998. -№ 4. С. 43-44.
88. Парнес, В.А. Иммунология лейкозов. / В.А. Парнес // М., 1960.
89. Парчинский, О.Ч. Взаимосвязь между распространенностью лейкоза крупного рогатого скота и видами коров / О.Ч. Парчинский // Лейкоз крупного рогатого скота. Рига: «Зинатне», 1974. - С. 75-77.
90. Петров, Н.И. Лейкозом можно управлять / Н.И. Петров // Новое сельское хозяйство. 2003. - № 3. - С.34-36.
91. Петров, Н.И. Эпизоотический процесс и система оздоровительных мероприятий при лейкозе крупного рогатого скота: автореф. дис. . д-ра вет. наук / Н.И. Петров. М., 1999. - 48 с.
92. Петровский, Г.С. Некоторые физиологические изменения картины крови и костного мозга у крупного рогатого скота: автореф. канд. дис. / Г.С. Петровский М., 1965.
93. Петровский, Г.С. Сравнительное изучение картины крови молодняка крупного рогатого скота благополучных и неблагополучных по лейкозу хозяйств / Г.С. Петровский // Бюлл. ВИЭВ. 1968. - Вып. V.
94. Петровский, Г.С. Миелограмма костного мозга здоровой коровы. / Г.С. Петровский // Тр. ВИЭВ. 1964. - т. 30. - С. 185-192.
95. Петракова, Н.С. Комплексная диагностика гемобластозов крупного рогатого скота и дифференциация их от заболеваний нелейкозной природы: автореф. канд. дис. / Н.С. Петракова М., 1986.
96. Попеску, Э. Лейкемия. / Э. Попеску Бухарест, 1965.
97. Приедниекс, O.K. О некоторых путях распространения лейкозов крупного рогатого скота / O.K. Приедниекс // Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума по проблеме лейкозов с.-х. животных. — М, 1972. С. 130-131.
98. Пухлое, А. Гематологический атлас. / А. Пухлов София, 1960 — 223 с.
99. Разумовская, В.В. Совершенствование мер борьбы с лейкозом крупногорогатого скота в Алтайском крае / В.В. Разумовская // Проблемы профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных: тр. / Свердл. НИВС. Екатеринбург, 1995. - С. 71-73.
100. Риган, В.Д. Атлас ветеринарной гематологии. / В.Д. Риган, Т.Г. Сандерс, Д.Б. Деникола. М.: ООО «Аквариум ЛТД», 2000 - 136 с.
101. Роит, А. Основы иммунологии. / А. Ройт М.: Мир, 1991.
102. Руководство по гематологии / Под ред. А. И. Воробьева. М., 2002. — т. 1.
103. Румянцев, Н.В. Значение незрелых и патологических клеток в диагностике лейкоза крупного рогатого скота / Н.В. Румянцев // Тез. докл. Всесоюз. симпозиума по проблеме лейкозов сельскохозяйственных животных. -М.: Колос, 1972.
104. Салимое, Х.С. Инфекционный процесс при лейкозе крупного рогатогоскота / Х.С. Салимов // Тез. докл. III Всесоюзн. конф. по эпизоотологии / Новосибирск, 1991.-С. 102-103.
105. Салимое, Х.С. Иммунологические аспекты изучения лейкозов крупногорогатого скота. / Х.С. Салимов, В.А. Крикун // Вести, с.-х. наук. — 1985. — №6. -С. 121-124.
106. Синев, А.В. Клинические данные по лейкозу крупного молочного скота. /
107. А.В. Синев, Н.Д. Кучумов // Сб. работ Ленинградского ветинститута. — вып. 23.-1961.
108. Симонян, Г.А. Ветеринарная гематология. / Г.А. Симонян, Ф.Ф. Хиса-мутдинов-М.: Колос, 1995.-С. 99-104.
109. Симонян, Г.А. Клинико-гематологическая и цитоморфологическая диагностика различных форм лейкоза крупного рогатого скота: автореф. дис. . д-ра биол. наук / Г.А. Симонян. М., 1975. — 158 с.
110. Симонян, Г.А. Гематологические изменения и спонтанные ремиссии у коров при лейкозе / Г.А. Симонян //Ветеринария. — 1969. № 6.
111. Симонян, Г.А. Морфологические изменения крови и пунктата костного мозгау коров при лейкозе / Г.А. Симонян // Ветеринария. 1963. - № 6. - С. 328.
112. Смирнов, П.Н. О путях передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота. / П.Н. Смирнов, А.В. Киселев, А.Т. Левашев, В.В. Смирнова, В.В. Храмцов // Ветеринария. 1988. - № 12. - С. 28-30.
113. Смирнов, Ю.П. Развитие лейкозного процесса в зависимости от средыобитания крупного рогатого скота / Ю.П. Смирнов // Аграр. наука. — 1998.-№1.-С. 18-19.
114. Смирнов, П.Н. Динамика Т и В - лимфоцитов периферической крови телят от больных лимфолейкозом и здоровых коров / П.Н. Смирнов // Сб. науч. тр., ВАСХНИЛ. Новосибирск, 1983. - С. 73-74.
115. Смирнова, В.В. Патоморфология, эпизоотология и вопросы иммунологиигемобластозов крупного рогатого скота в Западной Сибири: автореф. дис. канд. вет. наук / В.В. Смирнова. М., 1984. - 24 с.
116. Тамошюнас, В.Й. Иммунобиология вирусного лимфолейкоза. / В.Й. Тамошюнас Вильнюс: Мокслас, 1987. - 168 с.
117. Татарчук, А.Т. Эффективность оздоровительных противолейкозных мероприятий в сложных экологических условиях Урала / А.Т. Татарчук, И.М. Донник, В.А. Красноперов // Розвиток ветеринарной науки в Ук-pami: здобутки та проблеми. — Харыав, 1997. С. 118-119.
118. Таубеков, Г.К. Эпизоотология лейкоза крупного рогатого скота в Казахстане. / Г.К. Таубеков, А.И. Испуллаев // Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири. — Новосибирск, 1995. — С. 52-56.
119. Тест-система для выявления вируса лейкоза крупного рогатого скотаполимеразной цепной реакцией / В.А. Бусол, О.Ю. Лиманская, А.П. Лиманский, В.И. Цымбал // Розвиток вет.науки в Украшк здобутки та проблеми. Харьюв, 1997. - С. 108-112.
120. Тотолян, А.А. Лабораторная диагностика России 2003 / А.А. Тотолян,
121. Л.А. Алешина, Н.А. Марфичева, Е.Е. Зуева, С.В. Лапин // Справочник. -СПб, 2003.-С. 14-23.
122. Тотолян, А.А. Клин. лаб. диагн. / А.А. Тотолян, И.А. Балдуева, Л.Н. Бубнова и др. 2002. - № 1. - С. 44-50.
123. Федоров, B.C. Распространение и территориальная приуроченность лейкоза крупного рогатого скота в Курганской области. В кн. Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири. /B.C. Федоров, А.Г. Иванов Новосибирск, 1995. - С. 45-49.
124. Федоров, Ю.В. Результаты диагностических исследований крупного рогатого скота на лейкоз в хозяйствах Тюменской области / Ю.В. Федоров, О.В. Гордеев // В кн.: Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири. Новосибирск, 1995. - С. 64-68.
125. Фрегатова, JJ.M. Тер. арх. / Л.М. Фрегатова, А.А. Головачева, Л.А. Эстрина и др. 2002. - № 7. - С. 27-30.
126. Филатов, П.В. К вопросу дифференциальной диагностики лейкоза от некоторых заболеваний нелейкозной природы / П.В. Филатов, Е.А. Дун // Материалы Всесоюзного симпозиума по лейкозу с.-х. животных в Харькове.-М., 1972.
127. Фогель, JI.C. Эпизоотология лейкоза крупного рогатого скота (по материалам Ленинградской обл.): Дис. канд. ветеринар. Наук / Л.С. Фогель // Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины (СПбГАВМ). 2000.
128. Хилъкевич, Н.М. Морфология, диагностика, лечение и профилактика заболевания вымени у коров: автореф. докт. дис. / Н.М. Хилькевич — Орджоникидзе, 1970.
129. Храмцов, В.В. Распространение, патогенетическая характеристика лейкоза крупного рогатого скота и система противолейкозных мероприятий в Сибири: автореф. дис. д-ра вет. наук / В.В. Храмцов. М., 1995. - 35 с.
130. Чертков, И.Л. Современная схема кроветворения / И.Л. Чертков, А.И. Воробьев //Проблемы гематологии и переливания крови. — 1973. — № 10.
131. Чертков, И.Л. Пробл. гематологии. / И.Л. Чертков, Н.И. Дризе — 1996. — т. 2.-С. 19-29.
132. Чертков, И.Л. Гематол, и трансфузиол. / И.Л. Чертков, Н.И. Дризе1998.-т. 43.-№4.-С. 3-8.
133. Шишков, В.П. Лейкозы животных / В.П. Шишков // Итоги науки и техники. Онкология. ВИНИТИ, 1977. т. 9. - С. 6-46.
134. Шишков, В.П. Иммунологические аспекты ветеринарной лейкозологии / В.П.
135. Шишков // Иммунология и иммунотерапия лейкозов человека и животных: Тез. Всесоюзн. Конф. Самарканд. - 1984. - Ташкент. 1984. - С. 3-5.
136. Шишков, В.П. Лейкоз крупного рогатого скота и меры борьбы с ним /
137. В.П. Шишков, Л.Г. Бурба, В.М. Нахмансон // Ветеринария. 1988. - № 5.-С. 28-33.
138. Basso, С. Hematologica. / С. Basso, В. Buldini, L. De Zen, A.Orfao 2001.1. Vol. 86.-P. 675-692.
139. Bene, M.C. Hcmatologica. / M.C. Bene, M. Bernier, G. Castoldi 1999. - Vol.84.-P. 1024-1034.
140. Caligaris-Cappio, F. Blood. / F. Caligaris-Cappio 1996. - Vol. 87. - N 7.• P. 2615-2620.
141. Caligaris-Cappio, F. Towards a better understanding of the biology of B-chroniclymphocytic leukemia. / F. Caligaris-Cappio // Sixth Meeting of the European Hematology Association, Frankfurt. Germany. - 2001.-P. 102-106.
142. Capel, B. Blood. / B. Capel, R. Hawtey, G. Minlz 1990. - Vol. 75. - P. 22672270.
143. Caspersson, T. Nature. / T. Caspersson, J. Schultz. 1938. - Vol. 142. - P. 294.
144. Cheson, B.D. Ibid. / B.D. Cheson, J.M. Bennett, M. Grever et al. 1996.
145. Chun-Tsen, Wang. Serological survey on Bovine Leukemia virus Infection in щ Taiwan / Chun-Tsen Wang, Cheng-Hung Chang, Pan-Chin Lin, J. Chinese //
146. Soc.Vet.Sci. 1986. - V. 12. - P.7-14.
147. Chou, S. Effects of synthetic pyrethroids on mammalian chromosomes / I.
148. Sumicidin, S. Chou // J. Infect. Dis. 1990. - P. 162-238.
149. Cittone, E. Prevalence of BLV infection in relation Breed Management and
150. Animal Turnover / E. Cittone, G. Vacizca, G. Poli, G. Gentile, W. Ponti, G. Ruffo // J. Animal Tharm. 1980. - N 10. - P. 314-320.
151. Coons, A. H. J. Exp. Med. / A.H. Coons, M.H. Kaplan 1950. - Vol. 91. - P. 1.
152. Dighierc, G. Blood. / G. Dighierc, P. Travade, S. Chevret 1991. - Vol. 78.1. N8.-P. 1901-1914.
153. Dimitriadis, L. Sero-epidemiological study of Bovine Leukemia Virus infection in Greece / L. Dimitriadis, S. Artavanis // Delt. Ell. Ktiniatr Etairias. — 1987.-V. 30.-P. 177-183.
154. Dobberstein, I. Bovine Leukosis / I. Dobberstein // Irish Vet. J. 1978. - V.31.-N 10.-P.147-150.
155. Drize, N.J. Blood. / N.J. Drize, J.R. Keller, J.L. Chertkov 1996. - Vol. 88.1. P. 2927-2938.
156. Du Toit, P. Weitere Untersuchungen uber die Lymphozytomatose des Rindes. / P. Du Toit //111 Mitteilungen. Zeitsch. hifkr. Hyg. - 1920. - P. 20.
157. Gale, R.E. Haematol. / R.E. Gale, A.K. Fielding, C.N. Harrison, D.C. Lich1997.-Vol. 98.-P. 512-519.
158. Geisler, C.H. Blood. / C.H. Geisler, J.K. Lorsen, N.E. Hansen 1991. - Vol.78. -N 7. -P. 1795-1802.
159. Giardina, S. L. J. Immunol. / S.L. Giardina 1985. - Vol. 135. - N 1. - P.653.658.
160. Gotze, R. Die leukose des Rindes, ihre hamatologische und KHnigche Diagnose. / R. Gotze, G. Rosenberger, G. Ziegenhagen Mh. Vet. Med. — 1954. — Bd. 9.-S.517.
161. Grundbock, M. Serologilzne rospoznawanie bialaczki bydla w kraju i ocena metodyi pierwszychwynikow. / M. Grundbock // Med.Vet. 1982. - N 13. - P. 19-24.
162. Gross, L. Oncogenic viruses. / L. Gross. London, 1961.
163. Gunz, F. W. J. Natl. Cancer Inst. / F.W. Gunz, A.M. Veale 1969. - Vol. 42.1. P. 517.
164. Hamblin, T.J. Unmutated IgV(H) genes are associated with more aggressiveform of chronic lymphocytic leukemia. / T.J. Hamblin // Blood. 1999. -Vol. 94.-P. 1848-1854.
165. Harris, N.L. Blood. / N.L. Harris, E.S. Jaffe, H. Stein 1994. -Vol. 84. - N 5.-P. 1361-1392.
166. Hoefcer, D. Hematology. / D. Hoefcer, N. Gokbuget, O. Oitman 2002. - Vol.1.-P. 162-192.
167. Hoyer, J.D. Blood. / J.D. Hoyer, C.W. Ross Li C. 1995. - Vol. 86. - N 3.1. P. 1163-1169.
168. Ikematsu, H. Ibid. / H. Ikematsu, S. Okamura et al. 1994. - Vol. 83. - N 9.1. P. 2602-2610.20\. Jacobs, H. Tymanitis und chronische Lymphatische Leukamia beim Elefanten. / H. Jacobs // Wschr. Tierheilk. Wiener, 1995. - P. 3.
169. Johnson, G.R. Blood. / G.R. Johnson 1995. - Vol. 85. - P. 1472-1479.
170. Kipps, T.J. Blood. / T.J. Kipps, D.A. Carson 1993. - Vol. 81. - N 10. - P. 2475-2487.
171. Kyle, R. Mayo Clin. Proc. / R. Kyle 1975. - Vol. 50 - P. 29-40.
172. Lazda, V. Participation of different cell population in antigen- and mitogen-induced lymphocyte proliferation / V. Lazda, P. Baram // J. of Immunology. -1974.-V. 112.-P. 1705-1717.
173. Mammerickx, M. Rapid Detection of Bovine Leukemia Virus Infection in alarge Cattle Population with an ELISA performed on Pooled Sera Grouped by
174. Herd / M. Mammerickx, D. Portetelle, I. Nys, A. Burni // J. Vet. Med. 1985. -B. 32.-P. 601-608.
175. Mammerickx, M. La leucose bovine, unprobleme sanitaire d'actualite. / M. Mammerickx // Sem. etude int. actual, prod, bovines. Gembloux, 1978. - P. 257-276.
176. Mandy, F.F. Transfus. Sci. / F.F. Mandy, M. Bergeron, T. Mincus 1995-Vol. 16,-N4.-P. 303-314.
177. Marcson, L. Bovine Leukosis in Greate Britain / L. Marcson // Res.Vet.Sci.1980. V. 13.-P. 287-289.
178. Masic, N. Decision-tree approach to the immunophenotype-based prognosis of the B-cell chronic lymphocytic leukemia. / N. Masic, A. Gargo, S. Rabatic // Am J Hematol. 1998. - Vol. 59. - P. 143.
179. Matutes, E. Leukemia. / E. Matutes, K. Owusu-Ankomah, S. Okamuru 1994.-Vol. 8.-N10.-P. 1640-1645.
180. Matutes, E. Blood. / E. Matutes, D. Catovsky 1996. - Vol. 87. - N 8. - P.3520-3521.
181. Mikalauskiene, G. Vet. Immunol. Immunopathol. / G. Mikalauskiene, N. Dikiniene, M. Makricas, V. Tamosinas 1984. - Vol. 7. - P. 275-283.
182. Miller, L.D. Inoculation of calves with particles resemblung C-type viros fromcultures of bovine lyphosarcoma. / L.D. Miller, J.M. Miller, C. Olson J. Nat. Cancer Inst. - 1972. - Vol. 48. - N 2. - P. 423-428.
183. Morean, E.J. Am. J. Clin. Pathol. / E.J. Morean, E. Matutes, R. A'Hern 1997.-Vol. 108.-N4.-P. 378-382.
184. O'Brien, S. Blood. / S. O'Brien, A. delGiglio, M. Keating 1995. - Vol. 85.1. N2.-P. 307-318.
185. Oka, S. Enzootic bovine leucosis / S. Oka, U. Kyoko // Biochen. Biophys. Res.
186. Commun. 1990. - Vol. 167. - P. 1-8.
187. Olson, C. Role of C-type virus in bovine lymphosarcoma / C. Olson, L.D.
188. Miller, J.M. Miller // Bibl. Hemat. 1973. - V. 39. - P. 198-205.
189. Опита, М. An ethersensitive antigen associated with bovine leukemia virusinfection / M. Onuma, C. Olson, L. Baumgartener // J. Natl, ancer Inst. -1980.-V. 55.-P. 1155-1158.
190. Orfao, A. Haematologica. / A. Orfao, A. Ruiz-Arguelles, F. Lacombe — 1995.
191. Vol. 80.-N1.-P. 69-81. 221 .Parrish, C. Bovine Leukemia virus infection in New Zealand cattle / C. Par-rish, R. Oliver, K. Corrin // N.Z. Vet. Journal. 1988. - V. 30. - P. 56-58.
192. Paukovits, W.R. II I. Cell. Biochem. / W.R. Paukovits, M.H. Moser, J.B. Paukovits 1992. - Suppl. 16. - P. 67.
193. Qian, G.X. J. Immunol. / G.X. Qian 1984. - Vol. 133. - N 6. - P. 3396-3400.
194. Recktenwald, D.J. J. Hemalother. / D.J. Recktenwald 1993. - Vol. 2. - N 3.1. P. 387-394.
195. Robertson, J.S. An ether sensitive antigen associated /J.S. Robertson // Virol. Aspects Safety Biol. Prod. London, 1990. - Basel, 1991. - P. 205-209.
196. Saiki, R.K. Lack of mutageniity of synthetic pyrethroids / R.K. Saiki, D.H.
197. Gelfand, S. Stoffel // Science, 1988. P. 239-437.
198. Samagh, B. Eradication of Bovine Leukemia Virus Infection from a Herd Different Approaches / B. Samagh // Enzootic Bovine Leukemia Virus. — Boston, 1984.-P. 203.
199. Saresella, M. A rapid evaluation of phagocytosis and killing of Candida albicans by CD 13+ leukocytes / M. Saresella, K. Roda, L. Speciale, D. Tara-melli, E. Mendozzi, F. Guerini, P. Ferrante //J Immunol Methods — 1997. V. 210.-P. 227-234.
200. Sarcar, G. The Future of Veterinary / G. Sarcar, S.S. Sommer // Nature.1990.-P. 27-43.
201. Scoten, E. World Animal Health News / E. Scoten // J.Animal Pharm. 1985.-N82.-P. 10.
202. Shapiro, H. Practical Flow Cytometry. / H. Shapiro 3-rd Ed. - New York.1995.-P. 542.
203. Shibata, D. Veterinary problems of pesticide monitoring / D. Shibata, W.J.
204. Martin, N. Arnheim // Cancer Res. 1988. - P. 45-64.
205. Solomon, A. II Semin. / A. Solomon // Oncol. 1986. - Vol. 13. - P. 341-349.
206. Theilen, G. Lymphosarcoma (Lymphocytic leukemia) in a horse. / G. Theilen,
207. M. Fowler// J. Am. Vet. Res., 1962.
208. Undefors, N. Eur. J. Pharmacol. / N. Undefors, K. Brodin, U. Ungerstedt1989.-Vol. 161.-P. 95-98.
209. Watson, J. V. Cytometry. / J.V. Watson 1999. - Vol. 38. - N 1. - P. 2-14.
210. Wilson, J.G. Adhesive interactions in hemopoiesis / J.G. Wilson // Acta Haematoi. 1997. - Vol. 97. - N 1-2. - P. 6-12.
211. Wiesner, E. Die Leukosen des Rindes. / E. Wiesner Jena, 1967.
212. Wesselberg, S. Induction of activation-driven death (apoptosis) in activated but not resting peripheral blood T cells / S. Wesselberg, O. Janssen, D. Kabelitz //J. Immunol. 1993.-V. 150. - P. 4338-4345.
213. Wittmann, W. Enzoot., schekinderlekose. / W. Wittmann, A. Liebrmann // Arch. Geschwulstforsch. 1980. - Bd. 50. - N 7. - S. 686-695.
214. Wright, D.K. In PCR protocols: a guide to methods and applications (ed M.A.1.nis, D.M. Gethland, J.J. Sninsky, T.J. White) / D.K. Wright, M.M. Manos // Academic press San Diego, California. 1990. - P. 8-153.
215. Youinou, P. CD5 expression in human B-cell population. / P. Youinou // Immunol Today. 1999. -N 20. - P. 312-316.