Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:ДИАГНОСТИКА ОТРАВЛЕНИЙ ПЧЕЛ ГЕКСАХЛОРАНОМ И СЕВИНОМ

Всесоюзный ордена Ленина институт экспериментальной ветеринарии

Всесоюзной ордена Ленина академии сельскохозяйственных __ наук имени В. И. Ленина_ .

сА-ШЗ &

, , . , На правах рукописи

СОЛОВЬЕВА Людмила Федоровна

ДИАГНОСТИКА ОТРАВЛЕНИИ ПЧЕЛ ГЕКСАХЛОРАНОМ И СКВИНОМ

(16.00.04 — ветеринарная фармакология с токсикологией)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва — 1973

--- !£ О t..f„

Всесоюзный сирдена Лениеа институт экспериментальной ветеринарии

Всесоюзной ордека Ленина академия ое льскохозяйствеиных _даук имени В. И. Ленина__

СОЛОВЬЕВА Людмила Федоровна

ДИАГНОСТИКА ОТРАВЛЕНИЙ ПЧЕЛ ГЕКСАХЛОРАНОМ И СЕВИНОМ

■ (16.00.04 — ветеринарная фармакология с токсикологией)

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветерин-ардыл наук

На правах рукописи

АВТОРЕФЕРАТ

Москва — 1975

Работа выполнена в отделе профи л актами и борьбы с болезнями тел. Научно-исследовательского института пчеловодства Министерства сздьского хозяйства РСФСР (директор института — кандидат биологических наук Г. Д. Билаш).

Ди*юе>рта,ция. изложена на -150 - страницах машинописи: введение — 2 стр., обаор литературы — 29 ст.р., материал и методы исследований — 15 стр., результаты исследований — 57 стр., заключение :— 5 стр., выводы и предложения —. 4 стр., литература — 20 стр., приложение — 5 стр. Работа иллюстрирована 22 таблицами, 3 рисунками, 20 фотографиями. В списке литературы содержится 240 .наименований.

Научней ;руководитель — доктор сельскохозяйственных наук, .профессор С. С. Назаров.

Официальные оппоненты:

;' 'У, '.¡V.- ,,.■ . 1 .'„Л >

1. Доктор ветеринарных ¡наук, ,профессор В. И. Полтев

2, Кандидат биологических науж Р. Д. Петухов

Ведущее иаучночисследовательакое учреждение — Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии.

Автореферат разослан « » 1975 года.

Защита состоится «» 1975 г. па

заседании Ученого Совета Всесоюзного Ордена Ленина института экспериментальной ветеринарии (Москва, 109472, Кузьминки, ВИЭВ).

С диссертацией люжно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ.

Ученый секретарь ВИЭВ 'кандидат биологических наук В. В. Калугин.

ВВЕДЕНИЕ

Химический метод защиты растений в плане борьбы с сор-«яками и .вредителями сельскохозяйственных культур занимает ведущее место. Однако неращиопальное ¿применение ядохимикатов на полях может и фактически причиняет большой вред: гибнут птицы, звери, полезные насекомые — опылители, в т. ч. медоносные пчелы {Н. И. Островский, 1953; В. К. Пельмене-в, 1958; В. И. Полтев, 1953, 1964; Ф. Р. Шоковой, 1963; С. С. Назаров, 1963, 1967; Ма-ркосян А. А.. Мар-косян Ж- К-, Марджаням Г. М., 1963; В. Г. Степанишвили, 1964; Р. Д. Петухов, 1966, 1967; И. Ф. Истратов, 1968; Г. И. Султанов, 1972).

На основании работ названных выше отечественных, а тахже зарубежных исследователей (Е. Atkins, L. Anderson, 1954; F. Beran, 1955; F. Beran, J. Neururer. 1955, 1956; F, Shaf, W. Rischang, 1962; A. Maurizio, 1962 и др.), (посвященных вопросу токсического десйтвия на пчел пестицидов, предложены меры, которые дают возможность бороться с потерями в пчеловодстве от химического токсикоза. Но эта борьба может быть более эффективной в случае выяснения ко проса возможности попадания в корма пчел ядохимикатов я влияния их на жизнедеятельность .пчелиной семьи. Точная диагностика алиментарных отравлений посредством анализа кормов на остатки пестицидов позволит профилактиро-вать токсикозы пчел, протекающие как в острой, так и ъ хронической форме и осложняющиеся, обычно, рядом инфекций на пасеках.

Кроме того, ветер инарно-са ни тарная оценка на остатки ядохимикатов фуражного меда, имеет тарямое отношение к санитарно-гигиенической экспертизе меда пищевого-

Исследования многих авторов показали, что большую опасность в смысле отравляющего действия «а пчелиную семью представляют системные инсектициды, которые, попадая на растения, .проникают в нектар и заносятся с ним в гнездо (J. Clynne, W. Thomas, 1953; Р. Johnsen, 1953, 1955; E. R. Ja усох, 1964; Д. Д. Полоз, В. А. Полецкий, В. П. Соколов, 1965). Опасны также ядохимикаты десистеяшото дей-

3

ствия. Пчелы-сборщицы способны переносить их в гнездо в концентрациях, превышающих CKso- Об. этом: свидетельствуют опыты М. Rousseau л С. Pangaud (1959) с мышьяком, .. J. Pourtallier, Y. Taliercio (1967) с ДДТ и другими инсектицидами. Г. Г. Серабреншиков (1952) отмечал гибель ульевых :■ пчел в течение 1,5—2 месяцев 'В семьях, посещавших бар, аб-ра-ботанный кремнеф тористьщ натрием. По его мнению, ядовитой была занесенная в гнездо пыльца, которая явилась причиной гибели шел—кормилиц.

Сведений по заносу в улей широко применяемых на по-лйх, опасных для лчел гексахлорана и севина очень мало, а те, которые имеются (В..К. Пельменев, 1958; R. Morse, 1961; В. Стойменов и Н. Кынчев, 1968) отражают результаты, по-, лученные авторами в разведователыюм плане, в основном, методом косвенных наблюдений (по признакам отравления и гибели пчел, ,расплода). .

В связи с изложенным выше, целью нашей работы являлось изучение путей поступления гексахлорана и севина в мед, ,пергу с нектаром и тыльной растений, характера действия их- на лчел иную семью и разработка методов диагностики отравления пчел названными пестицидами, Выяснение этих вопросов является важным для решения проблемы профилактики химических токсикозов на пасеках и санитарно-гигиенической оцелки продуктов пчеловодства на остатки ядохимикатов, в частности гексахлорана и севина. В задачу, исследований входило;

1. Определить токсичность на л чел испытуемых препаративных форм гексахлорана и севина. *

2. Изучить занос пчелами в гнездо гексахлорана и севина с нектаром и .пыльцой посредством обнаружения их остатков в меде, перге, пчелах химическими методами и клинической диагностики,

3. Установить характер влияния сублетальных доз испытуемых ядохимикатов на зимовку и весенне-летнее развитие пчелиных семей,

4. Разработать химические методы количественного определения остатков гексахлорана и .севина в меде, перге, пчелах.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ РАБОТЫ

В соответствии с рекомендациями Государственной Комиссии при МСХ СССР по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками, касающими- . ся всестороннего и планомерного испытания ядохимикатов для сельского хозяйства, в опыты мы взяли гексахлоран — 4

12-<процентный дуст, 16-процентную ми н ер а л ь н о- м ас л яную . эмульсию, 94,5-/процентный гамма-изомер и с евин—85^про-тценткый см а чива ющи й ся .порошок.

Объектом исследования служили медоносные .пчелы среднерусской и 'Итальянской -породы (расы), содержащиеся в -обычных условиях, характерных для центральных областей страны, и яосевы гречихи, фацелии, горчицы. Ра'бюта выполнялась в период 1967—1973 гг. Местом ¡проведения исследований были лаборатория и экспериментальная пасека отдела профилактики и борьбы с болезнями пчел Научно-исследовательского Института пчеловодства, теплица Рыбновской средней школы, поля опьштомфоизвадстветаюго хозяйства «Ходынипо» я колхоза им. Куйбышева Рыйнсдаокот района, производственная пасека совхоза «Мтахайловокетй» Михайловского района Рязанской области.

В работе использовали результаты собственных анализоз многочисленных образцов меда, пертти, пчел, поступающих в Институт пчеловодства из различных зон страны для лабораторной диагностики химического токсикоза -на пасеках.

Токсичность гексахлорана и севина для пчел устанавливали по широко известным методикам С.С.Назарова (1967), с учетом соответствующих рекомендаций К- А. Гара (1963). Кишечное и контактное действие ГХЦГ и.севина определя-. ли -в одном случае (методом индивидуального скармливания ■пчелам ядов в 10 мм* сахарного сиропа я прулпового корм. лепия при многократной даче пчелам сиропа с ядом, в другом — методом аппликации в депозит методом. Опыты ставили в 6-кратной повторности на каждую из 5—6 доз данного ядохимиката, при 18—22°С. Обработку экспериментального материала проводили по методу Кербера в публикации М Л. Беленького (1959).

Дозу препарата, вызывающую гибель 50% подопытных пчел, вычисляли по формуле:

ЛД5о=ЛДюо — —^ , где (1 — интервал между кажды-ш

ми двумя смежными дозами; г — среднее арифметическое из числа пчел, погибших под влиянием двух смежных доз; т — число пчел в каждой группе. Стандартную ошибку ЛДйо находили по формуле Гэддама (М. Л. Белелькнй. 1959), Суммарный индекс опасности для пчел рабочих образцов ядохимикатов, включающий индексы кишечной и контактной опасности, определяли по Е. НаП^ег (1950); Р. Ве-гап, 3. 1Меипзгег (1955, 1956).

Сроки сохраняемости гексахлорана и севина на растениях

устанавливали до методике, которая заключалась в том. чтсп квадраты (2X2 м) цветущих гречихи и фацелии обрабатывали соответственно 12троцентным дустом ГХЦГ (25 кг/га)' и 0,2-процентной суюпеизией 85-процентного с. п. севина из-расчета 1 тыс, литров на 1 га. С лервого ,по 20 день {с момента обработки) исследовали цветки, листья, стебли расте-лий «а остатки ГХЦГ колориметрическим методом по М. Sohechter, I. Hornstein (1952) и севяна — методом тонкослойной хроматографии по М. А. Кли^енкд (1965). Кроме того, периодически брали образцы обработанных растений с целью изучения контактного и ■кишечного действия ядов, сохранившихся на них.

Сохраняемость гексахлорана, севина в кормах пчел выясняли в зависимости от времени и температуры. С этой целью-от пчелнных семей, участвовавших в полевых опытах на фацелии и гречихи, отбирали образцы меда, перги д »ранили в плотно закрытой стеклянной лосуде при шлю« 17 — 21"С,. 5°С. Через 15 дней, 1, 3 и 6 месяце®. 1, 1,5 и 2 года проводили .исследование меда, перги .на остатки гексахлорана и севина. Для дополнительного выяснения динамики сохранения ГХЦГ и севина в меде, в зависимости от названных выше условий, параллельно ставили аналогичные опыты с искусственно загрязнении медом.

Занос пчелами в гнездо гексахлорана и севина изучали последовательно в лаборатории, в теплице, на экспериментальной пасеке, в -поле, используя индивидуальные и общие кормушки, делянки и массивы цветущих медоносов, пчелиные семьи в шестирамочных и обычных ульях, методы мсчения и дрессировки пчел.

Опыт .в теплице. На каждый изучаемый претпа-рат в теплицу (136 м2) с регулируемым микроклиматом ставили в активный для пчел период по 3 пчелиные семьи в шестирамоч-.ных ульях. Скармливали 50% сахарный сироп из кормушек, установленных в теплице на расстоянии 12 м от улъев вначале без ядохимикатов, а затем с ядохимикатами в различных концентрациях: от 0,2 до 0,00005% для ГХЦГ н от 0,3 до 0,00005% для севина.

Пасечный опыт. Подопытным пчелиным семьям, равноценным всем остальным на пасеке, скармливали сахарный сироп с определенными дозами ядохимикатов в кормушках, удаленных от ульев на различное расстояние. Опыт проводили в безвзяточные дни и при ■поддерживающем взятке.

Полевой опыт ставили на изолированных до 3—5 км от других медоносов и пасек участках гречихи площадью 2,6; 2 и 1,5 га, горчицы 0,1 га, фацелии 1 га. Пчелиные семьи по-6

-очередно подвозили к медоносам после обработки их в период цветения гексахлораном и севшиом. Контролем служили • семьи пчел, работающие на подопытных участках культур до .применения ядохимикатов. Во всех вариантах опытов по заносу пчелами ядов в гнездо участвовало в общей сложности 100 пчелиных семей.

Учет .результатов опытов проводили методом наблюдения за подопытными пчелиными семьями (клиника отравления пчел, расплода, работа матки, общее повешение семей) и .лабораторного исследования образцов свеж »принесенных в ульи сиропа, нектара, пьпльаы, а также пчел на остатки испытуемых ядохимикатов.

Для определения остатков гексахлорана в меде, перге, пчелах мы разработали колориметрический метод. За основу ■ взяли метод М. Schechter, I. Hornstein, 1952, предложенный имя для нахождения ГХЦГ в продуктах животного, растительного происхождения, а также в трупах пчел. Для анализа названных проб на севин разработали метод тонкослойной хроматографии, в основе .которого лежит метод М. А. Клисенко (1965), иапользуемый в соответствующих исследованиях воздуха и .прочего биологичесокго материала.

При отработке названных выше методов, с целью применения их для лабораторной диагностики химического токсикоза на пасеках, мед и пергу загрязняли ядохимикатами искусственно, путем внесения в них определенных количеств ядов, и естественно, когда пчелы посещали обработанные ГХЦГ и севином гречиху и фацелию. Всего поставлено опытов на гексахлоран 307, на севин 287.

Влияние ГХЦГ н севина в кормовом меде на зимовку пчел и их развитие после выставки изучали посредством постановки (по общепринятой методике) пасечного опыта, диагностика химического токсикоза в котором включала методы анализа меда, neiprn, пчел на остатки ядохимикатов. Для статистической обработки брали материал 3-кратной иовтор-ности (3 гада), полученный на 18 пчелиных семьях для каждого изучаемого препарата. В качестве зимнего корма пчел взяли сахарный мед, так как он, в сравнении с натуральными медами, часто содержащими неопределяемые примеси пади, более однородный и равноценный по переваримости, рекомендуется для зимовки повсеместно (Г, Ф.-Таранов, 1953; В. Г. Чудаков, 1962).

Пчелиные семьи первой группы на зиму получали сахарный сироп с добавлением гексахлорана в 0,00005-процен.т-ной концентрации, который скармливали из ульевых корму-чпек перед формированием гнезд на зиму. Имеющиеся в под-

опытных семьях кормовые запасы (они располагались по ► краям гнезда) сверх задаваемою количества не содержали. гексахлорана, севина, а также падевых веществ. Соты для:: складывания задаваемого сиропа с ядом ставили -в центр гнезда во второй половине лета, в безвзяточные дни. Б общей сложности каждая семья опытных групп имела на зиму кормовых запасов до 20 кг. Из .них 10 кг — с ядом. Пчелиные семьи второй группы на зиму получали сахарный сироп с добавлением севина в 0,00025-троне«тной концентрации. ■Взятая концентрация гексахлорана меньше СК50 в 4, севина — в • 2 раза. В контроле пчелиные семьи зимовали на корме без яда. Сироп этим семьям скармливали одновременно с опытными.

Сформированные подопытные пчелиные семьи зимовали в зимовнике центрального экспериментального точка Института пчеловодства в обычных условиях. Зимой периодически учитывали характер шума, подмор, оп она ш ива ем ость пчелиных семей опытных и контрольных грутп. Перед постановкой: в зимовник и после выставки определяли силу семей, количество кормовых запасов, наличие матки, проводили исследование пчел на нозематоз (методика В. И. Полтева, 1964). Оставшийся ¡после зимовки мед в семьях исследовали на наличие в нем севина и гексахлорана.

В активный .период изучали особенности летной деятельности пчел, регулярно через каждые. 12 дней с 9 апреля по 31 августа определяли количество печатного расплода, а к концу сезона учитывали ¡медопродуктивность пчелиных семей.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Токсичность для пчел ГХЦГ и севина.

При определении кишечного действия гамма-изомера-ГХЦГ (94.5%) и 85% с. п. севина по д. в. методом индивидуального и группового скармливания их пчелам в сахарном: сироие, получены следующие результаты: для ГХЦГ ЛД0 = 0,025, ЛД5о=0,09± 0,002, ЛДюо=0,125 мкг/лчела; СКо= 0,00005, С К5°=0,0002± 0,000028, СКюо=4),0004%; для севина— ЛД0=О,1, ЛД50=0,36 ± 0,028, ЛДк»=0,6 мкгЛпчела; СК°= 0,0003, С Км = 0,0005 ± 0,00003, СКю°=0,0008%.

При контакте пчел с обработанной ядохимикатами поверх- . ностыо в течение 72 час. (депозит метод) доза ГХЦГ, вызывающая 100-процентную .гибель насекомых равна 0,027,. 50-процентную — 0,021 ±0,0001, а не вызывающая гибели — 0,015 мкг/см2. Для севина эти дозы составляют: ЛД°=Ь0,-ЛД5о = 2,45±0,01, ЛД;ао = 3,5. При нанесении ядохимикатов.

на хитиновые.покровы тела пчел (метод аппликации): для ГХЦГ значение ЛД50 равно 0,246±0,0058 мкг/пчела, для севина — 0,282 ±0,006 м:кг/итчела.

«Индекс опасности» в суммарном исчислении равен для ГХЦГ — 273, для севина — 62. Следует отметить, что согласно международной классификации (Е. НаШдег, 1950; И. Ве-гап, Х Ыеигигег, 1955, 1956; С. С, Назаров, 1967) химические препараты, имеющие суммарный индекс опасности более 15, относятся к группе очень опасных для пчел. Отсюда очевидна токсичность ГХЦГ и севина для пчел. Результаты наших опытов согласуются с известными литературными данными по этому вопросу (Н. И. Островский, 1954; Л. С1уппе, X Соппе11, 1954; В. К. Пельменев, 1958; й. ОеогдЫои, 1?. Ме1са1Г, 1962; С. С. Назаров, 1967).

Сохраняемость ГХЦГ и севина на растениях, в меде и перге

Расширение химизации сельского хозяйства выдвинуло сложную проблему 'Получения пищевых продуктов, безопасных для здоровья человека, а также кормов, безвредных для животных, Установлено, что почти все применяемые в настоящее время пестициды могут накапливаться и сохраняться в растениях, продуктах урожая, воде, почве, на теле животных и человека (Д. Барнес, 1960; Н. Н. Мельников, 1965; Н. А. Красильников, 1966 и др.). Степень вредности остатков пестицидов и связанная с ней продолжительность их сохранения, ■в растительных и животных продуктах изучаются учеными и практика-ми — этот вопрос в настоящее время .приобрел государственное значение.

В пчеловодстве, несмотря на применяемые меры профилактики, потери от отравления пчел ядохимикатами продолжают оставаться значительными. Гибнут пчелиные семьи, уменьшается товарность пасек. Кроме того, мед, предназначающийся в продажу для питания людей, может быть загрязнен остатками пестицидов,

В связи с этим мы провели опыты по определению сроков сохраняемости ГХЦГ и Севана на растениях в естественных условиях. Прн этом исходили из того, что возможность заноса пчелами ядохимикатов в гнездо зависит от продолжительности сохранения их на растениях и, в частности, па цветках энтомофильиых культур. Опыты ставили на пречи-хе, дающей в средней полосе основную продукцию товарного меда, и на фацелии, высеваемой отдельно и в кормовых смесях специально'для пчел.

Установлено, что севин определяется в растениях до 17 дней, а гексахлоран до 12 с момента обработки. 100-процентная гибель опытных пчел от контакта с растениями, обработанными гексахлораном и с евином, наблюдается в 1-й и 2-й дни после обработки. Не вызывают гибели - пчел , растения, взятые на 7 сутки после обработки для ГХЦГ и на 6 для севнпа. При определении кишечного действия образцы расте-"" ний не вызывали гибели пчел на 5 сутки для ГХЦГ и на 6 — для севина.

Следовательно, ГХЦГ и сев-нн сохраняются на растениях длительное время {соответственно 12 и 17 суток) в концентрациях, не вызьпва'кмцих гибели пчел. Это дает основание для предположения, что данные яды могут попадать в гнездо и накапливаться в меде, перге после установленных сроков изоляции пчел (до 7 суток) или прекращения клинических признаков химического токсикоза на насеке.

Результаты опытов -по сохраняемости ГХЦГ и севина . в меде и перге (представлены в таблице 1.

Из таблицы 1 видно, что время и температура влияют на сроки сохранения .ГХЦГ .в-меде и перге. С 4-го месяца хранения количество его начинает уменьшаться, причем более интенсивно при комнатной температуре. Так, в 1 кг меда через 6 месяцев хранения обнаруживали гексахлоран: при 17—2ГС — следы, а при 5°С — 0,4 мг, или 23%. Через 12 месяцев хранения перги при 5°С разложилось 62% гексахлорана от первоначального количества, а при.17—21°С — 77%. Количество севина начало уменьшаться в меде и перге, спустя 2 месяца »ранения. Через 9 месяцев в меде при 5°С обнаруживали следы севина, а при 17—2ГС севина в меде не было. За это время севин в меде разлагался. Если в перге при 5°С через год севнн разлагался та 50%, то при 17—2 1°С обнаруживались только его следы.

В опытах с медом, в который гамма-изомер ГХЦГ и севин вносили искусственно в количествах соответственно 40 и 20'мг/кг, установили, что пестициды сохраняются более двух лет. Тепло в пределах 21 — 17°С способствует более быстрому процессу распада ГХЦГ и севина в меде, чем это наблюдается при 5°С. Испытание загрязненного ГХЦГ и севином меда на токсичность для пчел показало, что даже 5-месячный срок хранения не устраняет опасности отравления. ■

Прогревание меда и перги, содержащих исходные количества гексахлорана и севина, из .воде при равномерном кипении в течение 3 часов ¡не вызывало полного разрушения в них ядохимикатов. Этот факт следует принять во внимание в том отношении, что рекомендуемый, напри-мер, для предупреждения 'брожения, отстаивания, дозаривания к раопус-1б

кания меда режим прогревания при 60°С в течение 2,5 часов (В. Г. Чудаков, 1962) не может быть использован для освобождения меда от гексахлорана и севнпа.

Таблица 1

Сохраняемость ядов в кормах пчел в зависимости от времени и ^С, мг/кг (естественное загрязнение, М±щ)

Дата анализа 5°С 17-21 °с

мед перга мед перга

Гек сахлоран

1968 г., 1.08 4.11 9.12 196& г., ю!02 14,05 1.08 1,7±0.1 1.4±0,1 0,9±0,05 0.4±0,01 следы 0 36,0±1,5 34,6± 1,1 24,6±0,9 20,0± 1,0 14,0± 1,5 13,6±1,0 Севин 1.7±0.1 1,0±0,01 0,3±0,01 следы 0 0 36,0± 1.5 27,0±0,9 17,4± 1,2 10,9±1,0 9,4±0,5 8.4^0.5

1969 г., 29.06 1.09 30.12 1970 г., 10.04 30.06 0,95±0,01 0,02±0,<>1 0,34±0,005 следы 0 2,00±0, ю 2.00±0,05 1,80±О,10 1.05±0.01 1,С0±0.01 л0,95±0,01 0,54±0,01 следы 0 0 2,00±0,10 1.85±0,05 1,50±0,2 следы следы

Занос пчелами в гнездо гексахлорана и севина

Профилактика кормовых токсикозов ,на «пасеках, особенно хронически .протекающих, может быть достигнута организацией мероприятий (исключение ядовитых кормов, терапия, основанная на заместительном или нормализующем .принципе, улучшение условий медосбора, зимовки и др.), базирующихся <на данных исследований, удостоверяющих реальную возможность попадания пестицидов с нектаром и пыльцой в корма пчел, В связи с этим нами проведены опыты но изучению заноса пчелами в гнездо ГХЦГ и севина.

На .первом этане такие исследования проводили в теплице, где установили, что с расстояния 12 м самые высокие .-концентрации ГХЦГ и севина, которые пчелы могут переносить в гнездо с саха'рны.м сиропом, равны соответственно 1 и -5 .мг/кг. Для ГХЦГ эта концентрация в два раза меньше -СКбо, а для севина равна ее величине. В занесенном корме, ■взятом для химического анализа в стадии созревания близком к запечатыванию, обнаружен гексахлоран в количестве -0,1—0,6 М1г/нг, севин — 0,1 — 0,5 мг/кг.

В пасечных опытах, представляющих второй этап исследований (3-кратная повтори ость «а каждый ¡препарат, в течение трех сезонов) выясняла влияние на запое пчелами е. гнездо гексахлорана и севина их концентраций в .карме, удаленности -кормушки от улья и естественного взятка. Концентрации ГХЦГ и севина. -равные соответственно 0,5, 3 мг/кг и меньше, пчелы переносят также хорошо, как и чистый сахарный сироп с расстояний от 100 до 1500 м. Наличие в сиропе гексахлорана и севина в количествах, вызывающих отравление со омертельны.м исходом, отпугивает пчел тем сильнее,, чем выше их концентрация в корме.

Выяснение влияния различных 'расстояний на перенос пчелами в гнездо ГХЦГ и севина показало, что за 100 — 200 м пчелы переносят в гнездо -пестициды в концентрациях,, не вызывающих гибели пчел, до равных СКюо (0,0004 и 0,0008% или 4 и 8 мг/кг) и превышающими их в 1,2 раза. Начиная с 500 и до 1500 м, пчелы забирают сироп с значительно меньшими количествами ядохимикатов: от 0,5 до 2 мг/кг для гексахлорана и от 2,5 до 6 — для севина. Названные значения равны СК50. а также ниже их в 2—4 раза. Превышает СК50 в 1.2 раза концентрация севина, равная 6 мг/кг-Эти данные творят за ¡возможность переноса пчелами в гнездо с расстояний 500—1500 м ГХЦГ и севина в сублетальных концентрациях и равных СКэо-

Естественный взяток влиял на ход опыта таким образом,, что с расстояния, например, 100 м .пчелы брали в безвзяточ-ные дни сироп с 5 мг/кг ГХЦГ и 10 мг/кг севина, а с наличием поддерживающего взятка переносимые количества ядохимикатов с кормом уменьшались вдвое.

Результаты тюлевых опытов, представляющих третий, этап исследований по заносу пчелами в гнездо ГХЦГ и севина, показаны в таблице 2.

Из таблицы 2 "видно, что ГХЦГ с нектаром и пыльцой заносится пчелами в гнездо при ¡посещении обработанной гречихи в течение 5—6 дней, а севин с фацелии—3—4 дней. Гибель пчел с клиническими признаками отравления продолжалась в опыте с ГХЦГ в течение 10 дней, с севшюм 6 дней, после обработки.

В опыте на обычных, без специальной подготовки пчелиных семьях,,удаленных от обработанной севином фацелии на 1 км (15 семей) обнаруживали ядохимикат в напрыске от следов до 0,450 мг/кг, в пчелах от 2 до 8 мг/кг (длительность опыта —: 5 суток). Гибель пчел от отравления отмечалась в первые часы после обработки участка. В повторных наблюдениях, проведенных на гречихе, выявлено, что пчелы

Таблица 2

Занос пчелами ядов в корма при посещении медоносов с расстояния 50—100 м (мг/кг, Мч^гп)

День анализа после обработки посева

Пчелы

ГХЦГ (гречиха)

До обработки

2

3

4

5 в 7

О

1,о±о,1

0,7±0,05 0,4±0,03 следы слелы О 0

30,0±1,8 20,0±2,1 14.0±1,4 8,0±0,9 2,5±0,01 следы О

О

3,0±0,2 3,0±0.1 0,7±0,01 0,2±0,01 О

о о

Севик (фацелия)

До обработки 1 2

3

4

5 7

0.95 ±0,05 0,693±0,03 следы О 0

2.00±0.05 2,55±0,05 1.16±0,03 следы 0 0

О

12,20±0.4 9,80±0,5 5,10±0,1 ]196±0,2 ],25±0,2 0

заносят гексахлоран в гнездо в течение 5—7 дней, а севин— 3—4.

Таким образом, опытами по ста® ленными в теплице, на экспериментальной пасеке и в полевых условиях, установлено, что пчелы заносят в улей гексахлоран и севин, в частности, с нектаром и пыльцой гречихи и фацелии. Выяснение этого факта говорит за необходимость строгой изоляции пчелиных семей на время проведения химических обработок сельскохозяйственных культур и соблюдения инструкции по применению ядохимикатов.

Зимовка пчел на меде с ГХЦГ и севином

Предыдущими исследованиями доказано, что пчелы .при посещении цветущих медоносных -культур, на которые оседает гексахлоран и севин при химической обработке полей, заносят их в гнездо. Эти яды обнаруживаются в меде, перге в сублеталвных (СКо и меньше) для пчел концентрациях.

Таблица 3

Результаты зкмовкк пчел на меде с ГХЦГ н се в ином -(средние данные за 1968—1971 гг., М±т)

Вид учета ГХЦГ Севин Контроль

Сила семей, улочки пчел 8±0,1 4,6±0,2 7.8±0,2 5,2±о;2 7,8±0,2 7,1 ±0,2

С •/<, 0,30. 3,8 0,53' 11.5 0,40, 5.1 0,67' 12,3 0,40. 5,1 0,58' 8,1

■2. Кормовой мед, кг/семья 19,2±0,3 3,7±0,4 - 19,7±0.7 4,9±0,5 20.2±0,4 4,3±0.3

±з; СП 0,63. 3,2 1.00* ¡¿7,0 1,7. 8,6 1,4' 28,5 1,0 . 4.9 0,63' 14.6

-3. Яд в меде, мг/кг 0,28±0.01 0,125*0,1)05 1.75±0,10 0,27 ±0,01 0 0

±ч: С % 0.0«. 14,0 0,014' 11,2 0.24. 0,24 0.03' 0,03

4, Поражение нозематозом, %:

а) семей в группе 0 100 0 100 0 72

б) пчел в пробе' 0 0 0

52,8±1,7 49,3±2,0 4,9±1,0

0 . 0 7,5' 13,1 0 0 8,0' 16.? 0 . 0 4,2' 84

числитель — -исходные показатели (осень); знаменатель — конечные результаты (весна).

Учитывая также тот факт, что -после гибели от отравления ядохимикатами летных пчел, семей и пасек оставшиеся кормовые запасы с ядами могут использоваться для кормления других пчел зимой и летом, мы провели опытную .работу по зимовке лчели-ных семей на меде с га-м-ма-изомером ГХЦГ (94,5%) и севи-ном (85% с. ,п.) в су|блетальных количествах, Результаты опытов представлены в таблицах 3 и 4. 14

Из таблицы 3 следует, что зимовка пчел на меде, содержащем сублетальные для летнего периода года концентрации ГХЦГ и севина, приводит к ослаблению ®ч единых семей в среднем на 37%, к вспышке нозематоза со 100% поражением семей и 52,8% поражением в пробе пчел по группе с ГХЦГ и 49,3% — по группе с севппом. При лабораторном анализе кормового меда после выставки пчел выделены оба ядохимиката. Их количество составило 0,125 м:г/кг для ГХЦГ и 0,27 мг/кг для севина. Остатки ГХЦГ обнаружены также в лодморе и живых пчелах. Степень опоношенности зимующих пчелиных семей соответственно равнялась четырем и трем баллам. Характер шума — повышенный в обоих слумаях.

Вскрытая нами взаимосвязь между зимним кормлением пчел медом с пестицидами и заболеванием их нозематозом не находится в противоречии с существующим мнением по этому вопросу относительно летнего периода года. Так, G. Meyerhoff (1956), J. Schrenk (1967) наблюдали проявление нозематоза, риккетсиоза у пчел после отравления мышьяком и другими ядохимикатами. Кроме того, известны ссылки (А. Тош.ков и соавт., 1967; А. Л1 Смирнов. 1972) на факты широкого распространения европейского гнильца в результате интенсивной химизации полей.

Таблица 4

Показатели учета при зимовке пчелиных семей на меде с ядохимикатами (1S68—1971 гг., M^ttt)

Вид учета ГХЦГ Севин Контроль

1. Печатный расплод, сотни ячеек Нт га 2. Валовой мед, кг/семья Нт га 80G±10 785-5-827 20.1 12.2±0,5 10,9-*-13,5 6,3 938 ±9 908-t-958 12,6 13,1 ±0,R 11,6-5-14,6 5,1 !134±12 1Ш-И159 17,4±0,4 16,4-v 18,4.

Из таблицы 4 видно, что пчелиные семьи опытной группы, зимовавшие на меде с севнном, в сравнении с семьями, зимовавшими на меде с ГХЦГ, вырастили за сезон достоверно больше расплода (1с1 = 9,4); В сравнении с контролем обе опытные группы вырастили меньше расплода на 200 — 300 сотен ячеек на семью для ГХЦГ равняется 20,1, для севина — 12,6). Более значительные потери относительно выращивания расплода в опытах приходятся на лериодшесенне-

го наращивания пчел. Снижение медопродуктпвпости по данным осенней ревизии в опытных группах пчелиных семей, в сравнении с контрольной, составило в оредтем 4,6 кг на семью, или 36% ^с! для ГХЦГ — 6,3, для севина — 5Л).

Следовательно, зимовка пчел на меде с примесью ГХЦГ и севина в концентрациях, не вызывающих гибели :Пчел летом, сопровождается уменьшением количества расплода до 20— 30 тыс. особей (2—3 кг пчел) и недобором меда до 36% «а 1 пчелиную семью; осложняется нозематозом, протекающим в средней и сильной степени! поражения. Отсюда необходимость в «разработке и проведении мероприятий, предупреждающих хроническую интоксикацию пчел химическими Средствами защиты растений через кормление.

На основании результатов наших опытно-производственных исследований делается вывод, что с нектаром и пыльцой медоносных растений, на которые оседают ядохимикаты при обработке полей, пчелы заносят в улей гексахлоран и севин. Остатки этих ядов в меде ухудшают зимовку, способствуют заболеванию пчелиных семей нозематозом, замедляют рост и снижают их продукта во сть.

Сущность разработки методов количественного анализа меда, перги и трупов пчел на остатки ядохимикатов, использованных нами в лабораторных и производственных опытах при диагностике отравлений пчел гексахлораном и савшшм заключается в следующем. Для колориметрического метода определения ГХЦГ: учитывая, что при экстракции гексахлорана из проб меда, перги, пчел одним из органических растворителей неизбежны потерн ннстектицида, мы не применяли дополнительного экстрагирования. Исследуемые образцы помещали непосредственно в реакционную колбу прибора для дехлорирования и нитрования ГХЦГ, заливая их. уксусной кислотой с добавлением цинка в присутствии фосфорной кислоты. Опытпым путем установлено, чго реакция протекает эффективнее в присутствии фосфорной кислоты, {а не других кислот, как малоновой, яблочной и пр.). Лучшие результаты анализа при определении ГХЦГ получены, когда нитрующая омесь состоит из серной кислоты и аммиачной селитры, а в реакции определения ме-тадипптробензола вместо метилэтнлкетона используется эфир-аиетоновая смесь. Отработана максимальная длительность реакции — около двух часов.

В описанной .разработке колориметрический метод позволяет определить гексахлоран в кормах пчел количественно и обладает довольно высокой чувствительностью (0,2 — 0,3 мг препарата е 1 кг исследуемого материала). Относи-

тельная, ошибка метода составляет в среднем при определении ГХЦГ в меде 14,3±;1,5, в пе|рге — 15,3±1,4, в пчелах — 12,0 ±1,2.

Метод тонкослойной хроматографии для определения се-ви'на впервые был применен нами для обнаружения этого пестицида в таких продуктах, как мед, перса, пчелы. Сущность разработки метода состоит в следующем. Подобрана смесь .для приготовления тонкого слоя, состоящая из окиси алюминия для хроматографии второй степени активности 70 г, крахмала растворимого 20 г, гипса медицинского 10 г. При .решении задали экстракции севина из меда, перги, тел, мы провели исследования но подбору наилучших экстр агентов. Испытали ацетон, хлороформ, бензол, днэтиловъш н-пстро-.лейкый эфиры, н-гексан, ацетоннтрил. Наиболее эффективными оказались для меда — бензол, для перги — ацетоннтрил, для пчел — хлороформ. Установили оптимальное время экстрасировапия — 65 минут, при температурном режиме , равном 17—22°С. Разработана очистка экстрактов из меда и пчел охлажденным ацетоном, из перги гексаном.

Метод характеризуется величинами ВД в пределах 0,5 — -0,6. Относительная ошибка метода тонкослойной х рома то го а-■фин составляет в среднем .при определении севина в меде 16,4±2,2, перге — 17,5±2,1, пчелах — 15.8±1,8.

ВЫВОДЫ

1. Гамма-изомер ГХЦГ характеризуется следующими показателями токсичности для пчел. При кишечном действии ■СКбо равна 0.0002±0,000028%, ЛД-ю — 0,09±0,002 мжг/пчела.

При контактном действии ЛДво равна 0,246±0,058 миг/пчела и 0,021 ±0,0001 мкг/см2.

2. Сев-ии, в сравнении с ГХЦГ, менее токсичен: при кишечном действии его СКзо составляет 0,0005±0,00003%,

. ЛДзо — 0,35± 0,028 мкг/пчела. При контактном действии ЛД50 равна 0,282± 0,0006 мкг/пчела и 2.45±0,01 мкг/см2.

3. «Индекс опасности» гексахлорана и севина равен соответственно 273 к 62. Это указывает на высокую степень опасности этих пестицидов для медоносных пчел.

4. В условиях теплицы — пространства, ограниченного для лета пчел, с расстояния 12 м самые высокие концентрации ГХЦГ и севина, которые пчелы могут переносить в гнездо с сахарным сиропом, равны соответственно 1 и 5 мг/кг.

..Для гексахлорана эта концентрация в два раза меньше СКзо, , а для севина — равна ее вадичи-не.

5, В условиях пасеки, с расстояния 100—200 м пчелы .переносят с сиропом гексахлоран и севин от сублетальных концентраций до равных СКюо и превышающих ее. Для ГХЦГ эти количества в пересчете на мг/кг колеблятся от 0,5 до 5, а для севина — от 2,5 д-о 10. С расстояния 500, 1000, 1500 м пчелы переносят в гнездо ГХЦГ и севин в концентрациях ■равных СК50 и ниже их в 2—4 раза. Для ГХЦГ эти величины составляют 0,5—2, для севина — 3—5 мг/кг. В безвзяточные дни с .расстояния 100 м пчелы заносят в гнездо сахарный сироп, содержащий 5 мг/кг ГХЦГ, 10 мг/кг севина. С появлением взята переносимые концентрации ядохимикатов в сиропе уменьшаются вдвое.

6, При посещении посевов гречихи, обработанной 12-процентным дустом гексахлорана в производственной дозировке, пчелы заносят в гнездо ГХЦГс нектаром ипыльцой в течение 5—7 дней с момента обработки. Количество пестицида достигает в меде 0,2—1,7, (в перге — 2,5—36, в пчелах — 0,2 — 6,0 мг/кг.

7, При посещении посевов фацелии и гречихи, обработанных 85% с. п. севина в производственной концентрации, пчелы заносят ядохимикат в гнездо в течение 3—5 дней. Его количество в меде составляет 0,57—0,95, в перге — 1,4 — 3,0, в пчелах — 1,0—12,2 мг/кг.

8, Гексахлоран и севин, занесенные пчеламн в гнездо с нектаром и пыльцой, сохраняются при 5°С в меде шесть, в ¡перге двенадцать месяцев. При 17—21°С сроки сохранения в меде равняются для ГХЦГ пяти месяцам, для севина — двум, в перге — соответственно 12 и 6 месяцам. Следовательно, тепло в пределах 21 — 17°С, в сравнении с 5°С способствует более быстрому разложению ядохимикатов в фуражных кормах пчел,

9, Зимовка пчелиных семей на меде с примесью ГХЦГ и севина в количествах, которые не вызывают гибели пчел летом, равных соответственно 0,5 и 2,5 мг/кг, сопровождается потерей силы семей до 37%, обусловливает проявление нозематоза со 100-процентным поражением семей в группах,

10, В весенне-летний период пчелиные семьи, зимовавшие ,на меде с ГХЦГ и севин ом в названных выше концентрациях, выращивают в сравнении с контролем расплода меньше на 20—30 тысяч особей (2—3 кг) па семью, снижают медосбор в среднем до 36%,

11, Для определения остатков гексахлорана в меде, перге, пчелах разработан колориметрический метод, Чувствитель-18

иость метода относительно !Меда 0,2, перги,ипчел—0.3, М1г/кг. .ПроЦеНт определения ГХЦГ в меде составляет 85,7 ± 1,5, в перге — 84,7±1,4, в пчелах — 88,0±.1,2.

12..Для определения-остатков севина.в меде, перге, , пчелах 'ря-зработаи.. метод тонкослойной хроматографии, ..Чувствительность метода — 0,08 мг/кг, для./меда :и. 0.16—0,17 мг/кг для пёрги и пчел. Процент определения севина в меде равен •83,6 ±2,2, в перге — 82,5 ±¡2,1, в пчелах — 84,7± 1,7.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 ' - , . - • л * ■ . . ..,■■■.. 1 . ■ . . ■ .

. 1. ¡В, целях профилактики отравления пчел гексахлораном и с едином необходима изоляция пчелиных семей . от посещения медоносных, растений в опасной зоне соответственно на .5—7 ^ 3—5 дней. . ,

• 2. Для диагностики, отравления пчел иных, семей гексахлораном и се вином служит лабораторное исследование,_меда, перги, ..пчел на. остатки, названных (Пестицидов соответственно колориметричеоним методом н методом тонкослойной хроматографии.

. ЗJ, В [ существующую схему санитарно-гигиенической оценки зимне-весенних кормовых запасов пчел включить, анализ меда, перги на остатки гексахлорана и севина 'названными выше методами.

4. Исходя из шолучениых результатов исследований,, представить в Главное Управление Ветеринарии МСХ РСФСР в качестве рекомендации для внедрения, раараобтанные нами, колориметрический метод и метод тонкослойной хроматографии для анализа меда, перги и трупов пчел соответственно на гексахлоран и севин.

Список опубликованных работ по материалам диссертации:

1. Внимание: гексахлоран. Ж. «Пчеловодство», 1970, №8.

2. Метод обнаружения севнна в меде, перге и труиахичел. Ж. «Ветеринария», 1971, № 8.

3. Влияние остатков гексахлорана и севина в меде на зимовку пчел. Ж- ^Пчеловодство», 1971, № 11.

4. Колориметрический метод обнаружения гексахлорана в трупах пчел и продуктах пчеловодства. Информационный листок № 4—72 ЦНТИ, Рязань, 1972.

5. Применение метода тонкослойной хроматографии для диагностики отравления пчел с ев ином. Информационный листок № 5—72 ЦНТИ, Рязань, 1972.

6. Колориметрический метод определения гексахлорана в-меде, перге и трупах пчел. Т|руды Института пчеловодства,;, вып. 7, изд. «Московский рабочий», 1972. '

7. О заносе с евин а ш челами в гнездо и обнаружение его остатков в продуктах пчеловодства. Наудные труды Института пчеловодстсва, Россельхозиздат, М„ 1973.

8. С огл а с о в а«н ость действий — залог успеха. Ж- «Пчеловодство», 1974, Яг 5.

Материалы диссертации доложены:

1. На отчетных конференциях Научно-исследовательского' института пчеловодства, г. Рьибное, Рязанской области, декабрь, 1969—1971 гг.

2. На аспирантской конференции Научно-исследовательского института пчеловодства, г. Рыбное, март, 1970 г.

3. На 23 Международном Конгрессе по пчеловодству, г, Москва, август, 1971 г.

4. На совещании специалистов сельского хозяйства, посвященном проблеме защиты пчел от отравлений, ВДНХ, февраль, 1974 г.

5. На заседании Ученого Совета Научно-исследовательского института пчеловодства, август, 1974 г.

Ответственный за выпуск, доктор сельскохозяйственных наук

профессор С. С. Назаров

Зак. 557 Тнраж 200

Типография Московской ордена Трудового Красного'Знамени ветеринарной академии имени К. И. Скрябина