Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Диагностика болезни Гамборо в Конго

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ • ВЕТЕРИНАРНАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ К.И.СКРЯБИНА

На правах рукописи

ОНТСУКА ВАРТЕЛЕМИ

ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНИ ГАМБОРО В КОНГО

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1991 год

Работа выполнена в Кишиневском ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственное институте им. М.В.Фрунэе.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор.

Карывева А.Ф,

Официальные оппоненты:

- доктор биологических наук, ст. научный сотрудник Осидзе Н.Г. т кандидат ветеринарных наук, ст. научный сотрудник Смоленский В

Ведущая организация - Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства

Защита состоится "{j£* ЩЩрЯА^ 1992 ГОДа в " Юш часов на ааседании специализированного совета-K-I20.36.05. по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук в Московс кой ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии им. К.И.Скрябина (10947;!, г.Москва, ул. Академика Скрябина , 23; телефон:'377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии. Автореферат разослан " Р- Я,

Ученый секретарь специализированного совета

Федосеева 1

• кат

■ ./ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТН

.. Актуальность темы. Благополучие птицеводческих'хозяйств по инфекционным болезням во многом определяет эффективность этой отрасли. Однако в последнее время в различных странах большие экономические потери птицеводству наносит болезнь Гамборо, вызывая высокую заболеваемость и летальность птиц. Особенно опасна она в субклинической форме, а также осложненная секундарной ннфеадгзЗ ^.Т.ГагавЬвг, 1972» 1975» 0.0.01атЪгопв вЬ а1., 1973»

А.С.Алиев, 1982, А.С.Алиев с соавт., 1990 и др.).

Трудности выявления латентных форм инфекции и низкий уровень ветеринарного обслуживания птицеводческих ферм явились.основной причиной значительного распространения болезни Гамборо в Конго (Онтсуна Еартелеми.Т.Зекиба, 1989). В то же время из-за отсутствия местного производства диагностических антигенов и очень высокой стоимости импортируемых из-за рубежа биопрепаратов не представляется возможный прояснить истинную эпизоотическую ситуацию в стране и провести эффективную борьбу с этой болезнью.

Поэтому разработка способа изготовления активных диагностических антигенов из местных штаммов вируса болезни Гамборо и усовершенствование серологического метода диагностики болезни является актуальным для Республики Конго.

ЦеЛи и задачи исследований. Целью наших исследований явилось выделение от больной птицы в Конго эпизоотических штаммов вируса болезни Гамборо,изучение биологических свойств выделенных птаммов в сравнении с эталонным штаммом. 62/70,отбор наиболее активных в антигенном отношении штаммов вируса болезни Гамборо, разработка оптимальных режимов инактивации вируса посредством различных физи-че'ск.их факторов,приготовления на их основе активных и специфических антигенов для серологической диагностики болезни Гамборо. Для достижения поставленной цели требовалось выполнение следящих основных задач:

- изучение эпизоотической ситуации по болезни Гамборо в Конго;

- выделение эпизоотических штаммов вируса болезни Гамборо от больных цыплят;

- изучение в сравнительном аспекте инфекционных и антигенных свойств выделенных эпизоотических штаммов вируса с эталонным штаммом 52/70 и отбор наиболее активных в антигенном отношении штаммов для приготовления диагностических препаратов; "

- определение оптимальных режимов инактивации вируса болезни Гаыбо-

ро с помощью таких физических факторов, как ультразвук,лазерное излучение и гамма-лучи; ¡,

- разработка методики изготовления диагностических антигенов из инактивированного вируса болезни Гамборо,контроль их стерильности,активности и специфичности;

- изучение антигенных и иммуногенных свойств антигенов,приготовленных различными физическими методами;

- определение эффективности приготовленных антигенов дли- серологической диагностики болезни Гамборо в инфицированных хозяйствах в сравнении с диагностикумом "РЮ-СиаЬого" французского производства. .

Научная новизна. Выявлены эпиаоотологические особенности проявления болезни Гамборо в Конго: внезапность появления, короткое течение (5-10 дней), широкое' распространение,стационарность, л&тен-тность.пирокая серопозитивность.опповременное течение с другими инфекциями или осложнениями возбудителя секундарной инфекции и др. От больных и павших цыплят' выделено шесть эпизоотических штаммов вируса болезни Гамборо к изучены Их биологические свойства. Отобрано три эпизоотических штамма вируса,которые после 5-8 пассажей на 30-дневных цыплятах приобрели способность максимального накопления вируса в фабрициевых сумках инфицированных цыплят. Разработай принципиально новый способ инактивации вируса болезни Гамборо ультрозвуком или лазерным излучением, обеспечиващиЯ повышение в два раза антигенной активности вируса при существенном снижении инфекционных свойств. Предложена методика приготовления инактивированных антигенов,активных и специфичных в РИД с гомологичными антисыворотками. Установлена высокая антигенная и иммуногвн-ная активность вирусных препаратов,полученных ультразвуком или лазерным излучением и их сочетанием в о вы? ах на 120 цыплятах 30-дневного возраста. Приготовлены экспериментальные образцы инак-тивированных вирусных антигенов, позволявших эффективно осуществлять серологическую диагностику болезни Гамборо в неблагополучных хозяйствах Конго.

Практическая ценность работа. На основании экспериментальных данных разработаны параметры инактивации вируса болезни Гамборо и повышения его антигенной активности посредством испольяовяиия ультразвука и лазерного излучения. Предложена методика изготовления активных и специфичных в РИД антигенов из местных штаммов вируса болезни Гамборо, инактивированных ультразвуком и лазерном излучением

Установлено ипцЗокое распространение латентной к осложненной, форы болезни Гамборо при апробации серологической диагностика о использованием приготовленных со предложенной методике вирусных антигенов. В инфицированных хозяйствах Конго было выявлено от 70,77 до 79,635? серопозиивных проб. В параллельных исследованиях о использованием контрольного антигена "Ронмерье" положительная РИД установлена лишь в 77,156 проб.

Доказана целесообразность использования показателей индексов фабрнциездх сумок (отношение веса фабрициевых сумок к весу тулок) для определения инфидироценности цыплят слабовирулентными штаммами вируоа болёзни Гамборо.

Апробация работы. Материалы дисоертацп доложены на заседо-ни сотрудников Центра ветеринарных и зоотехнических исследований (Браззавиль, 1989 г.), на Учёном совете ветеринарного факультета Кишинёвского сельскохозяйственного института (1989, 1990 и 1991гт) на заседании' кафедры впжзоотолопа Кишинёвского сельскохозяйственного института (1991 г.), на межкафедральном совецании ветеринарного факультета КС1И (1991 г).

По материалам диссертации опубликованы две научные работы.

Объём и структура диссертация. Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста, включает 19 рисунков, 15 таблиц и ооотоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследования, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 229 источников, из которых 201 - иностранные.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДУ .ИСОЩДОВАН'ЛЯ

При изучении впизоотической ситуации по болезни ГаыОоро в Республике Конго учитывалось распространение инфекции на территорию страны в 1978-1989 гг., определялась динамика неблагополучных пунктов, заболеваемости и летальности по данним отчётов Центра ветеринарных и зоотехнических исследований (Браззавиль) и данным собственных исследований (о участием студента КСХИ Т.Зекиба) в 8 инфицированных хозяйствах, II населённых пунктах в областях Пул, Бузнза и окрестностях Браззавиля.

Выделение эпизоотических шташов вируса Селезни Гамборо и его пассажи проводились на цыплятах 30-дневного возраста со средним индексом фабрициевых cyvScK 2,6-3,4. Идентификация вируса осуществлялась в РИД согласно методике z.Uirai et ai. (1972) со специфической сывороткой производства Ронмерье (Франция).

Тнтрованге вируса проводилось на даплягах по оценке порахо-нул фабршаевых сумок. Величина титра вычислялась по методу Seed н íiusr.ch (1933) к вырананаоь в tíy реальных поравениях - Ш 50/мл (ex. 50/ai^.. Дан 8араяешя цыплят использовались 10^-ны'з суспензия фабрицаевих суыок, отобранных от пав тяг в вынудденно убитых цшшгг во время вспышек болезни Геиборо Б хозяйствах Конго в 1986 -IS83 rr,B а также зталошшй итака 52/70, получений из Всеооюз-.. еого научно-исследовательского ветеринарного института птнцеводо-тва (т.Ленякград)»

На 3-5-13-й день поале поражения отбиралась пробы крови для определения величины прироста специфических антител, о такае фаб-рзщпевые сушси для индикации вируса болезнн Гамборо в вычисления среднего индекса фабрнцаевых сумок. Для Евдикацав вирусного антигена в патологическом материале и доследования саворотоп кровв применялась РИД. Всего было исследовано 962 фабркцаевые суши и 2321. проба сывороток кровв в

■ Разработка рзжелоб инакгтацил вируса болезни Гамборо о но-uo¡Síb ультразвука, лагерного Езлучонкя и га»ма-аучей осуществлялась на оборудований Центра ветеринарных и зоотехнических есслэ-дознаний в Конго ► Французской школы Сент-Экгвперз л Центра университетского госпиталя (г.Браззавша.), Приготовленные с вокиазова-теа ультразвука р лазерного Емучекия н гаьал-лучзЁ эксперимент £>• яыше cepas ниахткаированннх варусшх 'антигенов иопитовагЕсь на актЕвность и спвшфтоюоть в РВД со специфической С1шоротко2 производства Роназръе (врандня)'. Всего приготовлено в вопатаво 139 оврай антигенов«• J^ ;оорм6гач«око2 ДЕагноотикв пвготоэлегашг: аиг-ТЕггш апробировали s B .kj^iibui's; целках хозяйствах Коаго а в II

ейселбпннх r

В епащшлько составленном 'ой2?б'еа120щшц7?ах проводилось взучошш антигенной в вздуеогзнеой актгакоств впнгоотсч&сгешх

варуов 60л93в2 Гсмборо, ШЗЛЭТЕВарОВаЕКЫХ фЕЗЗГЧаеШЗаЗ ш-тодшгНо з сразненяи о вакциной Sad-Geaboro.

Дja ватема&ческой обработка получвшак результатов еопольбо-вадш катод Н.ПЛдаарняа» Д.А.Еоробъеаа (1962)«,

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ЕСОВДОВАШ®

Зпиаоотояогяческая характеристика болезет Гшаборо в Конго.

По дашшм научных отчётов Центра вврерннарных и зоотехнических исследований болезнь Гамборо регистрируется в Конго о 1978 г»

♦

Анализ статистических данных, проведенный нами, свидетельствует о том, что с этого времени болезнь Гааборо инее? тенденция к постоянному распространению, особенно заметному в период о 1982 по 1984 годы, когда количество неблагополучных пунктов возросло на 10?. Наибольшее их количество за исследуемый период приходится ка 1988-1989 годы. Приведенные данныес однако,, не являются исчерпывающими, так как отсутствие отечественных диагностнчвскях препаратов и дороговизна импортных не позволяли в те годы проводить повсеместное серологической обследование птихда в хозяйствах и населенных пунктах республики. Подтверждением этому является тот факт, что при использовании приготовленного нами антигена яз местных штампов вируса болезни Гамборо для исследования в РИД скво-, роток крови птицц, отобранных в 1988-1989 годах из 8 разных хозяйств и II населенных пунктов республики, серопозитивнооть устанавливалась в 70,77-79,635? проб,

В зависимости от неблагополучия по болезни Гамборо представляется возможном разделить территорию Конго на южную и оеверпуз зоны. Южная - оамая неблагополучная, особенно в городе Браззавиль и области Пул, где количество неблагополучных пунктов достигает 43,36 и 33,365? соответственно. Северная зона считается благополучной по болезни Гамборо из-за отсутствия здеоь вспшек инфекции, хотя обнаружение в сыворотках крови птицы специфических прецпцитирующих антител свидетельствует о циркуляции и здесь вируса.болезни ГвмЗоро,

При эпазоотологическоы обследовании инфицированных зон нами установлено, что продолжительность болезни Гамборо у птицы составляет 5-10 дней. Заболеваемость достигает 100?? У 23-50-дневннх щшлят. Летальность колеблется в широких пределах - от 0,5 до 47,36?. Наибольший падёа приходится на 3-4 дни болезни (1,67 -11,35?).

Выделение эпизоотических штатов вируса болезни Гамборо на . оеронегатдвннх цыплята^. Для выделения вируса болезни Гамборо попользовали фабрициевые сумки, которые били отобраны от больных и павших цыплят во время вспышки инфекции в Конго в 1986-1989 годах. Из каждой пробы фабрициевых сумок готовили на физиологическом рао-творе 10^-нув суспензию, котррой заражали по 20 цыплят, вводя 0,2 мл суспензии интраназально и интраокулярно одновременно. На 3-5 и 13-й дни после заражения убивали по 5 щшлят, отбирали их фабрицн-евые. сумки для идентификации вируса и вычисления среднего индек-

г-т

са файршмевнх cjfüoK: масса фабряциевой сумки (г) х JOOO

' масса тушки цыплят (г) , В ¡m¡ же сроки определяла палачиа в крова спацЕфэтвскш 'антител. Точно гак же ксследовалн погнбаясшх в опыте цйсяя?» Прв ггол индексы фйбрш&йэих сунох гаршюЕных цнот сравнявалв о ивдекоааа фа-Оршиевых суыох кеаарахеяных серонегатквкых цыплят (контроль) на • той se партга шшшт, ва которой отбирает кг дуся capaseикяс Кздо-'кса фабрицнезнх суыок посладаис составляли 3,3^,5. Контролем опи?£ сяугшш циплкта, заракеззыа еталоннш ш?еьакй» 52/70 Бнруса tíasearai ГшЗоро, пояучешаи es Всесоззного ваучго-вссхедов&тол&о-кох'о ветеряиарнох© шзетатута птЕцеводотай (г.Ленинград), а такгз коеарааеннив шшдята es той se парит. В результате проведанной работа било выделено шесть отадоов внруоа Солазна Гааборо от боль-гшх павгах шишл1»

Бзологичесаво свойства впяэоотвческш; Етаашэз вируса болезиз" Гг. 'бэг/О, виделеняых о? циклят в Конго. Штаьаы вируса, ввдаязшйш. иа патологического иатараала, отобраккыз s 1986-89 гг., называли в аксазрашнта илшшческой прояаяеняз бояовпа у 50-70$ сарадехзак шшйй?. Иккубадгонвнй перзэд составлял 72-S6 чао., продояхитель-соок. Солавнн - 4-6 даей, летальЕооть - 28,5^. Икфяцароваяие эталонна: araiaxa вируса 52/70 (контроль) вибые&ео юшнэтескую кар-rasу tíaaeshs у ЗСЙ шшлетв габеяа ех ев кабдвдслось»

Пр:; вокраиа еош5еш s окспзрекенте шалят основные па гол о-го-шз£то;ич8скяв пклэяенид обнарухззалвсъ d фабрэгзевах cyisax: уасйнчонао объема органа в 3-4 рааае накопление в полостн органа бйша&гой, Егогда кровянистойе густой цаосы, ойчкооть складок, гоча^шз крокзнглиянак» Индекса фебрспгевнх сумоя, отобранных у хгашк ш 5—íi с 13-2 до посла гарезеш: эпгЕооягчесюаи стскггаиа бала в 1,07-3,5 раса hsso вздэкеов фабрадзевих сукод ее-тагиоа {адорогах) ааигят. Иддокса фабразгвэдх суьюк о? цыплят, к^фацарошшхшх отазюшыа ейаазоа 52/70 вируса болезнв Гаагборо,бала в X0I-297 pasa шзе» чем у кятшявих ваш?. Ео всех фобраяве-сл оуьзах о грзтаего' поело заразеная доз обгсрусгзг^ся спешфз-seossS в^ажп^дтЕщШ евтагея a vsrrpas 1:2-1:4. На 5-й день по-■яоззггехьщш РИД уогашшлЕвгишоь лгшь о 40-8СЙ Боояедушав пробег-ta. Ссзцз^еск&о аятвтеша г егшоротяах крова ваяагялЕсь ва 5-£ дакь из^аазроЕЕЕгя у 40-60Í ццааят, ва 13-2 деза - у IOOÍ пышшт, РИД бдш отргцдтедыюй ерг всследоганш фабрэдневых сумок в овво-pcyoi: крови ЕЕггантшх шшез (контроль).

Для получения высокой антигенной активности эпизоотических штаммов вируса болезни Гамборо в результате максимального его накопления в 4абрициевых сумках, было проведено пассирование их за оеронегативных 30-дневных цыялятах.При каждом пассажа строго фиксировали ороки появления клинических признаков^ заболеваемость, летальность, продолжительность болезни, антигенную актавнооть з РИД, количественные показатели индексов фабрициезых сумок, титры специфических антител. Результаты представлены з таблице I, из которой видно, что при пассажах на цыплятах происходит постоянное повышение инфекционных свойств и антигенной активности вндздекных пташов вируса болезни Гамборо: сокращение инкубационного периода, увеличение заболеваемости, летальности, продолжительности болезни. Увеличилась и прециплтирующая активноогь антигена вируса. Наибольшая активность антигена устанавливалась при отборе фабряциевнх сумок через 48-72 часа после заражения.

. Антигенная активность выделенных местных эпизоотических .-пта-мов вируса болезнг. Гамборо из патологического материала, отобранного в 1986-89 гг, была в 2-4 pasd выше, чем у эталонного итаича вируса 52/70, Инфекционные титры шести эпизоотических шташов яя-руоа, выделенного из этого же материала, колебалась в пределах 10 • -I04, BL 50/mi, тогда как инфекционный титр эталонного ма 52/70 составлял I02,8 вь fjo/nl. При пасоировании трех эпизоотических штамкюв 1986-87 гг на 20-дневных цыплятах индексы фабри» циевых сумок на 13-й день били в 2,12-3,8 раза ниже, чем у здоровых цыплят, у трех пгтамдэв 1988-89 гг - а 2,36-4,67 раза, а при использовании эталона - только в 1,9-2,7 раза. С введением эпизоотических шташов у цыплят наблюдалось- образование специфических антител в титра до 5iog2, при использовании эталонного штшлш -до 41or2. в результата проведенной работы отобрано три эпизоотических птамма вируса болезни Гамборо с высокой и постоянной антигенной активностью, которые были использованы для изготовления диагностических препаратов.

.Разработка оптимальных режимов инактивации вируса болезни Гамборо (Еизичеоккуи методами. Для инактивации вируса болезни Гамборо были использованы ультразвук, лазерное КЕлучение (и их последовательное действие), гауыа-луча. Контроль ооущеотнляли, заражая 30-дневных цыплят. Результаты представлены в таблице 2, аз которой видно, что ультразвуковое воздействие на вируо при чаото-те 50 кГц не приводит к инактивации его инфекционной и антигенной

Тайяяца I

Результата изучения бяасогячгскгх свойств эпизоотических стазов вируса багезнг Гамборо, Еэдоаеизшж в Конго о* больных ш погЕбшгх пишет в 1986-87 гг (груша Al, в 1938-89 гг (группа *В) й оравненгв о контролем - эталонный ииаагом 52/70 (К)

:Поряд~:Сроки по-: :ковне :явления :Заботе-:Леталь-

Груп-: номера: ютнвчес-: ваа- : хосте

па :пасса-:кжх прю-:иость :

■:жей на:каков : :

: цепня-: : : 4

:тех :(в часах): :

Продол-:Актив- : Ивдепск фабрюшевых сумок ¡Наличие спв-яителъ-:ноете : 1 1 1 ■ > .л i ■ :цифическнх .

ность :антв- :до зара-:после заражения,на:антител(i°e?i

ба1взн5:гена в : гения :—-——- ..................

РИД :(исход- : 5-Е : 13-Й : 5-й :13-й : день : день :деи> :день-

(дне)

А 1-й 48-96 50-85 .16,6-17,6 4-5 1:2-1:4 2,8^0,2- 2,1^0,5- 0,9±0,Х--3,3*0,5 -2,7*0,3 -1,1*0,3 I 2-з • :

п-п 24-48 70-95 21,4-33,3 8-9 1:4-1:8 2,6*0,4- 1,7*0,1- 0,7*0,2-3,0*0,2 -1,9*0,2 -1,2*0,3 I 4-5

уп-га 24-43 S5 21,0-26,3 7-10 1:8 2,8*0,3- 2,1*0,2- 1,1*0,2-3,4*0,3 -2,3*0,1 -1,6*0,4 2

В 1-3 35-72 70-90 26,0-28,5 6-9 1:2-1:4 2,8*0,2° 1,9*0,2- 0,9*0,1-3,3-0,5 -2,4¿0,2 -X,4*0,2 I 2-3

1У-» 24 95-100 36,0-36,8 8-10 1:4 3,(20,2- 2,5*0,3- 0,6*0,1-3,0*0,3 -2,8*0,4 -1,1*0,3 I, 2-4 -cr

К - 72-120 20-60 10,0-16,6 3-7 ■1:2 2,8^0,2- 2,0*0,1- 1,03*0,2-3,3*0,5 -3,0*0,5 -1,7* 0,4 Ц 3-4

Пвяыечяяие: □ - цельный вид

•щахтавдцдо вируса оолез¡ш ¿¡жгооро различными фазическши методами

воздействия

1ЬлЩОСГЬ а продолжительность воздействия на вируо фя-ааческах факторов

Контроль инактивадин инфекционных свойств вируса

Средние андексы фабрвдневых : Гистологические изме- :

сумок цыплят : нения в фабрициевых результата

тггГ-<йуйс*........... .:сумках на Ю день пос-: инактивации

ження * Поола заражения :ла заражения :вируса

Ультразвук

250 Бт/са2. 50 кГц, 5-10 и 15 шш

60-70 н 60 кГц 5-10 з 15 иза

2,7*0,3 0,8*0,2 - 0,8*0,3 2,7*0,3 0,9*0,3 - 1,6*0,2

Лазерное излучений

I ыВт/еа2. мша 2,7*0,3 0,8*0,2 волны 6323 2,1 чао

3 и 6 часов 2,7*0,3 1,2*0,3 - 1,3*0,2 Ультразвук + 250 Вт/аЛвО кГц

лазерное из- 5 шш; I мВт/саг,- 5 о+л <> т т±л ? ч п±л ?

лучение ЗД^ 2°*®* 6328 ' ' " ' 2,0-0,2 1-3 а 6 часов

2671 рад/ыин 2,7*0,3 0,8*0,2 - 1,2*0,2

10-о0 мин

40 шш 2,7*0,3 1,2*0,2

Гаш*а-дуча

Идактивягсия не наступила

Частичная инактивация

Инактивация не наступила

Частичная инактивация

Инакти^ятуя почти полная

Инактивадия не наступала

частичная инактивация

ПрЕиачапЕЭ. Гистологические изменения в фабрициевых сумках выражены:

четко -(+++), менее чзтко-(++), слабо - (♦).

активности. Вместе с тем при 60-80кГц происходит чаотичная инак тивация, наблюдается значительное снижение инфекционных свойотв вируса. В таблице наглядно видно изменение индексов фабрициевых оумок щшлят, зараженных озвученным и неозвученным вирусом.

Воздействие лазерного облучения ш вирус болезни Гамборо а I чао не приводит к инактивации его инфекционных свойств, 3-х и 6-часовое облучение приводило к значительному снижению их. Иаде сы фабрициевых сумок, полученных от цыплят, зараженных облучеш вирусом,отличались от зараженных необлученным вирусом.

Последовательное воздействие на вирус ультразвуком при час те 80 кГц в течение 5 um и лагерного излучения в течение I, 3 6' чао приводило к значительному снижению его инфекционных свой« в сравнении о действием этих физичеоких факторов в отдельности,

Облучение вируоа болезни Гамборо гаша-лучами в течение К 40 мин не приводило к существенным изменениям его ивфекционных свойств. Сравнение индексов фабрициевых сумок цыплят, ааражанн облученным.и необлученным вирусом,дано в таблице 2.

Приготовление и испытание в РЯД активности и спепдфичноот антигенов из вируса болезни Гамборо. инактивированного физичео ми методами. Для получения антигенов эпизоотические штадаы вир болезни Гамборо подвергали воздействию физичеоких факторов в р нее отработанных оптимальных режима* (табл.2). Активность ант* на из вируса до воздействия физических факторов составляла 1:2 (+++). Приготовленные антигены испытывали в РИД, сравнивали ю активность с коммерческим антигеиоы "рш-СилЬого", вдготовлж фирмой Ронмерье. Специфичность исоледуеыых антигенов определяо сывороткой, содоргащейся в диагностическом наборе "РШ-СиаЬогс также с гетерологнчкыми сыворотками - против болезни Ньюкасла фекционного бронхита, гриппа. Контролем служила также отрицат нал сыворотка от здоровых цыплят.

Установлено, что наиболее активными являются антигены, п готовленные из эпизоотических штааыов вируса болез1ш Гамборо, вергшихоя воздействию ультразвука. Они вступали в РЯД со опео ческой антисывороткой производства Ронмерье в разведении 1:4 давали чёткие линии преципитации (+-нч). Менее активными оказ лись антигены из этих же штаммов, но разрушенные лазерным изл нием, а также последовательным действием ультразвука и лазер* излучения. Они вотупали в РИД тоже в разведении 1:4, во линш преципитации были менее чёткими (ч-н-).

id

Препараты, приготовленные из вируса болезни Гамборо, подвер-пегося воздействию гаша-лучей, в РВД вступали только в цельном, «разведённом) виде и только на ++'+. Это показывает, что облучено внруоа болезни Гамборо гамма-лучами приводит к снижению его шггеиной активности. Контрольный антиген производства Ронмерье )тупая в РИД с гомологичной антисывороткой в неразведанном виде, > есть был менее активным, нехели антигены, приготовленные нами, использованием физических методов. При исследования специфично-•и установлено, что все приготовленные препараты, так же как а штрольный антиген, не вступала в РИД о гетерологичными сыворот-ш и сыворотками здоровых цыплят.

Таким.образом, в результате исследований 139 серий препара- • а, полученных из вируса болезпи Гамборо воздействием на него ззческими методами, разработан я рекомендован в практику новый особ изготовления высокоактивных безопасных внактивированных. ТЕгеяов, которые с успехом<;могут заменить в Конго импортные а параты для серологической диагностики болезни Гамборо»

Оценка эффективности антигенов, полученных физическими метода, в серологической диагностике болезни Гамборо в инфкпирован-х хозяйствах. Для определения практического значения антигенов, гученпых прз воздействии на вирус ультразвука, лазернс-го излагая в- raiasa-лучей, проводили исследования на- 8 фермах н в II -гелЗнпых пунктах Республики Конго. Всего было отобрано и иссле-зано з РИД 869 проб сывороток крови кур разных пород и возрасг-i групп. Полученные результаты показали,, что все испытуемые ан-гека способна ваявяять специфические антитела к вирусу болезпи гборо а сыворотках крова кур.

Прз Ecmaranss антнгакоз» полученных ультразвуковой или дазер-I обработкой вируса бачезяп Гезгборо, шш пх последовательным ео-йствеш, з хозяйствах города Браззавиль и его окрестностей (фе-i Церковного прахода, фар^а Расзяь и секция разведения Центра .. ■арлзцгшх п ссотзхничзсках всследовангЗ), где зпбслеваяне про-жло э основЕоа з остроЗ форгэ, пглвчзэ специфических антител ■анозгеш в 80-100$ проб. С пс-л:^.^ внтггепоз, получешшх из ва-оз, облучённых такУчЗучаа, свропозагпвкоота била выявлена у 34-89,42? проб. Стеддпртай аятагсн производства Ропмерье (Орал) гшшая параллельно 66,57-96,67? сародозитзшшх проб.- '

На фермах Нзого, йусосо, Буба и в хозяйствах а населённых aras областей Пул (г.Ктакаха, йяцдулв, Инссафу а Магумбу) и

П

Буавза (НкаЛ), где заболевание протекало преимущественно в бессш птошюй форые, серопозитивность при испытании антигенов, получен-них ьоадействнем ультразвука на вирус болезни Гамборо, была обнаружена у 40-34,03$ npoÖjB случае лазерного облучения - 50-92,05$ s случае гаша-облучешш - 30-67,4652, тогда как при использована стандартного антигена производства Ронмерье (контроль) серопоз* тявность выявлена у 40-68,74/2 проб. Наиболее активными была анти гены, полученные из обработанных ультразвуком вирусов - они выяв ляли наличие специфических антител у 79,63$ проб. В случае лазер ного облучения эффективность составляла 79,4052, а при воадейотв! 8тех факторов последо'вательно - 78,71$. Низкая степень выявляем ста (70,77:?) установлена при испытании антигенов ив вируса, обдз чёшюго гамца-луч&ми. Параллельный контроль со специфическим антигеном производства Ронмерье выявил серопозитивность в 77,1$ проб (табл.З),

' Изучение на ццщуятах 'антигенных и кымуногенных свойств вир сных препаратов,полученных воздействием различных физических фа торов. Изучение проводили на 120 цыплятах,которым вводили антиг вы из вируса болезни Гамборо, подвергшегося воздействию ультраэ ка, лазерного излучения и гаша-лучей. Контролем служила вакци TAJMluaboro, а такхе оуопензия фабрициевых оуыок от здоровых да лят. Антигенные свойства изучали посредством выявления приросз специфических антител в динамике формирования иммунитета. Ищу} гешше свойства опре;, ляли прямым заражекиеы подопытных и kohtj льных цыплят вирусом, не подвергшимся инактивируюцеыу действ] Результаты проведенных исследований показали, что препараты ва, оа, инактивированного вреыи изученными физическими методами, 31ГБаш образование у цыплят специфических ацтител, то еоть ото антигены. Наиболее высокие титры специфических антител устанав вались в группе цыплят, которым вводили антиген из варуоа, под ргшегося деЯотвию ультразвука, лазерного излучения, шш их coi отноыу действию. Наличие специфических антител в этих группах плят достигло макоимуыа к 20-30 дням и устанавливалось в среда геометрических титрах равным 4,2*0,4-7,4*0,6 iog2 о последуй спадом к 60-му дню (срок наблвдения) до 1,5*0,2-3,0*0,4 iog2. группе цыплят, которым вводили антиген, полученный из вируса,! лучённого х'аша-лучами, титр антител не превышал 2,4*0,1 Xog2 контрольной группе цыплят, привитых вакциной ТАП-Oumboro, ере, геометрический, титр антител на 20-30 дни составил 3,4*0,2-4,8

log». ■ И

—-__________________шши-оииэ аз вируса болезни Гаасборо, подвергшегося воздействию

флзнческах фехгоров, о цадьо выявления специфических антител в полевых пробах онвороток крови

Каппе-:Установлена положительная РИД при использовании :Ставдарт-стео :вирусных антигенов, полученных при воздействии: :ный специ-

ессло— : ............ ..................11 - ■ ■ .-фический

довел- : ■ - : .-Ультразвук +: : антиген

ешс сы»: Ультра- :лазерное .-лазерное -: Гаша - : производс-вороток: -'/звук ¡излучение ¡излучение : луча :тва Рон-

крова : : : (последова- ; • .-церье .

: : : : таль но) : : (контроль)

Ызсто отбора проб ш: снзэоротоа крова

'чает*-: : : ао: количество :■■■ _ :коли-: : * :чест-: : ° : во : * 1 коли-: чесг-: во : < ! количество : %

I. . Ферьа Церковного прихода 203 195 93,75 195 93,75 188 90,38 186 89,42 183 90,38

2. верка Рааздь 15 12 80,00 12 80,00 12 80,00 . 8 53,34 10 •66,67

3. Секция развадошш Центра ветеринарных и зоотехнических гсслодованиа 30 30 100,00 30 100,00 30 100,00 25 83,34 29 96,67

4. Ферыа Пзоко 415 290 69,87 290 •69,87 290 69,87 279 67,46 ?86 68,91

5. §ерыа Цуоссо 30 15 50,00 15 50,00 15 50,00 II- 36,67 15 50,00

6. Ферыа Буба 20 8 40,00 8 40,00 10 50,00 6 30,00 .8 40,00

7. Хозяйства а населенные пункты областей Пул (Кин-вала,Шошли,Ыиссафу,иа-тумбу) и ьуэнза (Икай) 151 142 94,03 140 92,71 139 92,05" 100 66,22 134 83,74

В'С Е Г 0: 869 692 79,63 690 79,40 684 78,71 .615 70,77 670 77,10

и

При изучении, юшун о генных свойств приготовленных препаратов всем цыплятам, было введено интраназаяьно и интраокулярно 100 Ы.50 /'•1 эг.алойного вируса 52/70 (инфекционный титр 10^'®вх<50/«1> на 30-й день после иммунизации. Полученные данные показывают, что у всех цыплят, иммунизированных препаратами, полученными из вирусов обработанных ультразвуком, лазерным излучением или последоватехь ним действием, в т«ч*кн« 10 сутвк (срок наблюдения) не было установлено клинических признаков заболевания, отсутствовали патоло-гоанатомические изменения при контрольном убое, тогда как у цыплят , иммунизированных антигеном, полученным из вируса, облучен) гамма-лучами, в 20$ случаев (Зцыпленка) были отмечены патологоан! томические изменения в фабрицкевых сумках. В группе цыплят, прив! вакциной ТАС-ОиаЬого (контроль), клинические признаки эаболевани били установлены у одного цыпленка (6,6% случаев). В то же время все 15 неиммунизироваиных цыплят (контрольная группа) заболели 6 цыплят (40%) пали.

ВЫВОДЫ

I. Отличительными особенностями проявления болезни Гамборо Республике Конго являются внезапная и бистро протекающая (5-10 ; вспышка при периичном появлении в стаде на.ферме, высЬкая. забол! емость (до 100%) и летальность (до 47,35%), последующая длитель латентная инфекция с высоким процентом серопозитивной (Ш'ЦЫ (о* до 100%), постоянная тенденция к распространению инфекции, част случаи одновременного течения с другими инфекциями Или осложнен различной секундарной инфекцией.

'¿. Впервые при изучении болезни Гамборо в Конго выделены эпизоотические штаммы вируса из патологического материала (фаб! циевие сумки) больных и погибших цыплят, установлены различия I биологических свойств. Инфекционный титр штаммов вируса, выдел< ных из патологического материала, отобранного в 1986-1987г.г. тавлял 10^ - ВХ. ^0/»Х , антигенная активность - 1:8; инфе!

циониый титр штаммов вируса, выделенных из патологического мат ала, отобранного в 1988-1989г. г., составлял 10^1®- 10^ аь 50/« антигенная активность - 1:4, ' ^

3. Повышение инфекционных свойств вируса болезни Гамборо представляется возможным посредством пассирования его на цыпля 30-дневного воараста, что объективно устанавливается по показа лям'индексов фабрициевнх сумок (отношение веса фабрициевой су»

оу тушек цыплят). Учет различий индексов фабрициевых сумок иной роваякыг и здоровых цыплят позволяет также констатировать' эпродукцию вируса даже при латентной инфекцин'.

4. Разработан принципиально новый способ инактивации инфек-«онны* свойств вируса болезни Гвмборо посредством ультразвука »щностью 250 Вт/см2, при частотах 60-70 кГц в течение 10 и 5 мин. (ответственно,лазерного излучения мощностью I Вт/ст^,длг,ной 1лны 6328 Я в течение 3 и 6 часов, а также последовательного здействия ультразвука мощностью 250 Вт/ см2 частотой 80 кГц в -чение 5 мин я лазерного излучения мощностьо I 1Йт/см^,длиной лны 6326 % э течение 3 и 6 часов. Индексы фабрициевых сумок цып-. т,инфицированных облученным вирусом,составляли соответственно 3 + 0,3 - 1,6 + 0,2 ; 1,3 + 0,2 ; 2,0 + 0,2 при исходном индексе Зрициевых сумок цыплят, инфицированных необлученнш вирусом, 3 + 0,3 - 0,9 + 0,2.

5. Снижение инфекционный свойств вируса болезни Гамборо под «действием ультразвука и лазерного излучения в указанных выше симах сопровождается увеличением в два раза антигенной активности ■о же время облучение гамма-лучам! ыогрюстъю 2671 рад/млн в юкие 40 мин приводит к потере антигенной активности вируса:

i если антигенная активность интактного вируса контрольного лонного и эпизоотического штаммов составляла 1:2,то после действия ультразвука или лазерного излучения она достигла 1:4.

6. Испытание приготовленных нами препаратов иэ вируса болони Sopo,подвергшегося воздействию ультразвука или лазерного кзлу-1Я, в качестве диагностических антигенов показало кг большую активность в полевых условиях,нежедк применяемый антиген про->дства Ронмерье. В инфицированных хозяйствах приготовленный на- -штиген выявлял в РИД от 40 до I00Í ееропозитявных кур, коммер-гий импортный препарат параллельно обеспечивал обнаружение толь-Ю-06,67% серопозитивных проб.

7. Введение даллятаи препаратов из местных апиаоотическюк мов вируса, болезни Гамборо,кнактивированных ультразвуком и рным излучением,обеспечивает образование более напряженного нитчта,нежели контрольная вакцина IAD-Ouaboro. В подопытной пе испытуемые препараты обеспечили образование специфических тел в среднегеометрических титрах 5,01 + 0,2 -• 7,41 + 0,6 1"Í2* эхранящих от прямого заражения 100 ВЬ 50/*1 вирулентного

вируса (титр Ю2'® вх, 50/ol ) всех иммунизированных цыплят."У цыл-лят, привитых вакциной TAlMJuaboro» где среднегеометрический титр специфических * антител достигал 4,8+ 0,3 1о®2 • выли установлены кли нические признаки у одного цыпленка (6,6Í). Гибели цыплят в этой группе не наблюдалось. В контрольной rpjírme неиммунизированных цъп лят все 15 инфицированные особи заболели, из них погибло 6 цыплят (40Í). . • • ■ * *

8. Новый способ приготовления антигенов из местных эпизоотических штаммов вируса болезни Гамборо, инактивация их посредством ультразвука или лазерного излучения позволяет получить высокоэффе тивные, безопасные вирусные антигены, которые в иммунологических реакциях значительно превосходят аналогичные коммерческие препараты, завозимые в Конго из Франции.

РЕКОМЕНДАЦИИ.ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ . • .

1. Предлагается принципиально новый высокоэффективный спос< инактивации вируса болезни Гамборо посредством воздействия ультр звука мощностью 250 Вт/см , при частотах 60-70 и 90 кГц в течени 10 и 5 мин соответственно, лазерного излучения мощностью 1мВт/сМ длиной волны 6328 А в течение 3 и б часов, а также их последоват ного действия в указанных выше режимах.

2. Предлагается метод изготовления специфических диагности ческих антигенов для РИД из вируса болезни Гамборо, подвергшсгос действию ультразвука или лазерного излучения,которые по своей а* тивности в два раза превосходят коммерческие препараты pjäj-Gusb импортируемые в Конго из Франции.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Онтсука Барталеми, Т.Зокиба. Эпизоотология, клкнивеская патологоанатомическая картина болезни Гамборо //.Диагностика и > цифическая.профилактика инфекционных болезней животных и птиц: Ыеквуз.сб.науч.тр./Кишинёвский с.-х.ин-т им.Ы.В.Фрунзе.-1989.-С,66-69. '

2. Карыаева А.Ф..Онтсука Бартелеми, Приготовление и испыте ние в РИД антигенов вируса болезни Гамборо // Диагностика и сг:е фическая профилактика инфекционных болезней животных и птиц/ Мб сб.науч.тр./Кишиневски^ с.-х. ин-т им.М.В.Фрупзе.-1909.-С.69-7<