Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Биологические свойства возбудителя и диагностика стафилококкоза собак и пушных зверей

о 4 Л Г! О и !

На правах рукописи

БАКШЕЕВА Светлана Сергеевна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВОЗБУДИТЕЛЯ И ДИАГНОСТИКА СТАФИЛОКОККОЗА СОБАК И ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1998

Работа выполнена в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им.ТС.И. Скрябина.

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор Бурлаков В.А.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Макаров В.В.

кандидат ветеринарных наук, доцент Есепенок В.А.

Ведущая организация:

Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стан дартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Защита состоится" 1998 г. в ^ часов

на заседании диссертационного совета К.020.90.02 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук в научно-исследовательском институте пушного звероводства и кролиководства им. В.А. Афанасьева (140143, Московская область, Раменский р-н, пос. Родники, ул. Трудовая, д. 6 тел. 501-53-55).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан "/ " ¿^¿|>(У1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Костюнина Н.А.

1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблема стафилококковой инфекции изучается уже на протяжении почти ста лет. По мере расширения исследований и клинических наблюдений возникли дискуссионные вопросы, противоречия, изменились понятия, термины, классификация. Разрабатывались методы специфической профилактики и терапии, интерес к которым заметно сшгзился в первые же годы успешной антибиокотерапии. Однако, увлечение антибиотиками, неоправданное иногда применение их, явилось причиной некоторого разочарования и привело к возникновению грозной кливдкр-эгтазортической и эпидемической ситуации.

Если учесть, что стафилококки принимают участие в возникновении более чем 40 нозологических форм, то можно легко представить, какое широкое распространение они получили и какой наносят ущерб народному хозяйству, в частности собаководству и звероводству.

В связи с большой устойчивостью "современные" штаммы стафилококков способны обитать в различных условиях, что расширяет количество источников инфекции и путей ее распространения.

Стафилококкозы у собак, особенно содержащихся в домашних условиях, в городе, приобрели массовый характер и имеют тенденцию к росту. У собак эта инфекция мало изучена и нет достоверных данных по видовому составу возбудителей и ее распространению.

Ряд исследователей пытались дифференцировать стафилококки различного происхождения путем использования характеристик их белковых спектров (Г.К. Дегтярева с соавт., Г.К. Дегтярева и И.Н.Блохина, 1972, В.Я. Прохоров, А.К. Акатов и др. 1972), с помощью иммуноэлектрофореза (И.В. Молчанова, 1969), реакции "антигенной идентичности" (Н.В. Карницкая, М.К. Левина, 1972) и серологического типирования (А.К. Акатов, .Г.Ь. Магапскш, 1971, И.И. Бирзнек, 1972). Однако, вопрос о диагностическом значении перечисленных методов остается пока дискуссионным.

Цель работы и задачи исследований. Целью исследований являлось уточнения особенностей биологии стафилококков, выделенных от собак и пушных зверей, выяснение видового состава возбудителей. Определение перспектив со-вершенствоания диагностики заболевания. В связи с этим перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Описать клинические признаки и патологоанатомические изменения при стафилококкозе собак и пушных зверей.

2. Выделить чистые культуры и изучить основные биологические свойства и определить их видовую принадлежность.

3. Изучить бактерицидное действие различных химиопрепаратов на стафилококки, в том числе действие некоторых катионных и анионных ПАВ.

4. Изучить перспективы разработки серологических реакций (РДП, РСК, ВИЭФ) при стафилококкозе собак и пушных зверей.

Научная новизна. Изучены культурэльно-биохимические свойства стафилококков, выделенных от собак и пушных зверей и проведена их видовая дифференциация.

Показано, что у собак превалирует Б. ийегтесИш и Б. ер1с1ептМ8. В то время как у пушных зверей и в медицинской практике - Б. аигеив и Б. ер1с!егтес11з.

Получены новые данные о клиническом проявлении стафилококкозов у собак, о факторах патогенности стафилококков, выявлен феномен слизеобразо-вания и предложена методика определения слизеобразующих свойств стафилококков. Получены активные антигены и сыворотки для серологических реакций и показана недостаточная чувствительность и специфичность РДП,РСК, ВИЭФ для дифференциации возбудителя и диагностики стафилококкозов.

Практическая значимость работы. Материалы диссертации значительно расширяют знания о клиническом проявлении стафилококкоза собак; позволяют проводить видовую дифференциацию стафилококков*. Для практики предложена методика выявления слизеобразования у стафилококков.

Апробация полученных результатов. Материалы диссертационной работы доложены на совещаниях кафедры микробиологии и иммунологии МГАВМиБ им, К.И. Скрябина в 1994-1997 гг., на научных конференциях академии.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 162 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, сведений о практическом использовании результатов исследований и рекомендаций по использованию научных выводов, списка литературы, включающего 235 источников, б том числе 115 иностранных авторов и приложений. Работа содержит 21 таблиц) и 12 рисунков, и 9 фотографий.

2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы.

Работа выполнялась на кафедре микробиологии и иммунологии МГАВ-МиБ. Клиническое обследование и патологоанатомическое исследование боль ных пушных зверей и кроликов проводили в зверосовхозах Костромской, Твер ской и Московской областей. Также были обследованы 320 собак из частного сектора города Москвы и питомника служебного собаководства МВД г. Балашихи.

Материалом для исследования служили паренхиматозные органы от пав ших зверей и щенков, кровь, гнойное отделяемое, мокрота, слизь из носа, смывы с гениталий, воспалительный экссудат, гнойничковые поражения на коже о больных собак и пушных зверей.

Бактериологическое исследование проводили но общепринятой методик! Для культивирования, выделения чистых культур стафилококка и изуения их свойств использовали: 5%-ный кровяной агар, МПА, МПБ, молочно-солевой агар и агар Чистовича.

Для проведения биохимического анализа крови собак использовали биохимический анализатор "Диаком-1" с автоматизированным определением ас-ппртатамщготрансферазы, аланинаминотрансферазы, глкозы, билирубина, альбумина, общего белка, креатинина,мочевины, холестерина, неорганического фосфора.

Биохимические исследования культур проводили по стандартным методикам с использованием биохимических диагностикумов фирмы "Лахема".

Для определения чувствительности выделенных стафилококков к антибиотикам применяли метод дисков, основанный на диффузии антибиотиков в агаре. Нами были испытаны 20 различных антибиотиков, относящихся в основ ном к группам пенициллина, цефалоспорина, тетрациклина.

При изучении действия катионных и анионных поверхностно-активных веществ (ПАВ) концентрации растворов были приготовлены выше и ниже ККМ-1 (критичекая концентрация мицелообразования).

Из лабораторных животных в экспериментах использовали 12 кроликов массой не менее 3 кг и белых мышей массой 16-18 гр.

Постановку РСК осуществляли в модификации Ю.Х. Дададжонова и г Зурлакова (1987). ВИЭФ ставили в 1%-ном растворе агарозы, приготовлр

l веронал-мединаловом буфере, рН 8,6 ц 0,5 в приборе для электрофореза 13Ф-3".

Полученные результата обрабатывали статистичеки по методу Стшдента учетом методических рекомендаций Ю.К. Банща (1989).

2.2, Результаты собственных исследований.

Клиническое проявление болезни н патологоанатомические изменения при стафилококкозах собак и пушных зверей.

При стафилококкозе собак преобладали поражения на коже, истечения из инталий, отиты; у щенков отмечали течение болезни (сепсис). Данные свиде-¡льствуют о том, что при стафилококкозах клиническая картина и патолого-гагомические изменения были довольно разнообразными.

Острая стафилококковая инфекция (сепсис). Наблюдалась нами у ново-зжденных щенков собак и молодняка пушных зверей. Заболевание начинается ¡езапно и сопровождается почти 100% летальностью.

При вскрытии трупов не всегда удавалось обнаружить характерные для :псиса патоморфологические изменения; чаще регистрировали различные стали пневмонии, а у пушных зверей дополнительно перикардит и абсцессы.

Хронически протекающие стафилококкозы у взрослых собак сопровождаясь преимущественно поражением гениталий. Единственным признаком ин-екшш могло быть незначительное, а иногда и сильное выделение серозного ли гнойного экссудата из половых органов. У сук часто развиваются маститы, ндотермиты и т.д.

Отит также может являтся симптомом хронического течения стафилокок-оза. Заболевание чаще встречается у собак с висячими ушами. Наиболее часто аблюдали воспаление наружного уха. При остром воспалении внутреняя по-ерхность ушной раковины гиперемирована, отечна, болезненна, влажная, осно-ание ушной раковины утолщено. Из уха выделяется сначала серозный серого (вета экссудат, а затем гнойный темно-бурого цвета, маркий, неприятного запа-:а; образуются язвы, как на ушной раковине, так и на коже слухового прохода.

Дерматиты (пиодермия). Встречается как у щенков, так и у взрослых осо-!ей собак, кроликов, норок. Дерматиты стафилококковой этиологии носили се-юзный характер и преобладали в весенне-осенний период.

Пиодермии могли быть поверхностными или с повреждением волосяных лликулов и даже образованием язв ("глубокая пиодермия"). Стафилококковая одсрмия встречалась не только как первичное заболевание, но и могла разви-гся на фоне других заболеваний кожи (демодекоз, блошивость, инфицирован-ie раны, ожоги и т.д.). В этих случаях клиническая картина была неоднород-й, элементы сыпи находились в разных фазах своего развития и течение забо^ вания затягивалось на неопределенное время.

Стафилококковые пиодермии следовало дифференцировать от дермати-в, аллергической природы, при нарушениях обмена веществ, патологиях пени и желудочно-кишечного тракта. Для этого необходимо проводить допол-ггельные исследования, в том числе биохимическое исследование крови.

Биохимические показатели крови собак, больных разлпчпыми формами стафилококком.

Стафилококкоз независимо от клинических проявлений сопровождался иерфермеюгемией (показатели ACT и АЛТ повышались в среднем на 50%), перпротеинемией и гипоальбуминемией.

Концентрация общего белка сыворотки крови при поражении гениталий ставила 87,238 г/л, при пиодермии - 85,847 г/л, а при отитах - 81,349 г/л про-[в 65,02 г/л в контроле. Характерно увеличение уровня мочевины в сыворотке юви исследуемых собак.

Уровень креатшшна в сыворотке крови собак с клиническими признаками юдермии увеличивался на 40%, при отитах на 33%, а при поражении генига-га на 37%, Одновременно, при пиодермии уровень сахара в крови снижался на \% по отношению к контролю, а при поражении гениталий и отитах на 24 и 1% соответственно. Поражение гениталий характеризовалось увеличением со-:ржшшя фосфора в крови на 36%. Это видимо связано с уменьшением секрета паратгормона, когда наступает торможение реасорбции фосфора в почках, ри пиодермии и отитах содержание фосфора в крови оставалось на уровне мгтроля (1,42 и 1,57 против 1,5 ммоль/л). Изменения других показателей были енее значительны.

Выделение и изучение основных свойств культур стафилококка.

Результаты выделения стафилококковых культур представлены в таблице 1.

Таблица1.

Вьздгление стафилококковых культур.

№№ п/п Животные Материал для исследования Кол-во исследованных проб Выделено культур стафилококка

1. собаки смывы со слизистой оболочки гениталий 128 70

соскоб ИЗ 70 54

ушной

раковины

соскоб с кожи 170 140

2. щенки собак внутренние органы 6 6

3. пушные звери, кролики внутренние органы 99 50

Итого 468 320

Из таблицы 1 видно, что всего нами было выделено 468 проб, полученных от собак и пушных зверей. Выделить стафилококки удалось из 320 проб. В том числе 70 культур стафилококка выделено со слизистых оболочек препуция кобелей и влагалища сук. 54 культуры получены при бактериологическом исследовании 70 проб соскобов, с клиническими признаками отита.

От собак с диагнозом дерматит выделено 140 культур стафилококка из 170 исследованных проб. Из внутренних органов (сердце, печень, селезенка и др.) павших щенков собак выделено 6 изолятов. При бактериологическом исследовании внутренних органов пушных зверей (нутрии, норки, кролики) было выделено 50 культур, из 99 исследованных проб. В том числе шесть культур были выделены из абсцессов на коже кроликов, 23 из внутренних органов норок и 21 культура выделена от нутрий.

Нами были изучены следующие свойства выделенных стафилококков: пигмешгообразование, гемолитическая активность, наличие ферментов плазма-коагулазы и лецитоветиллазы, способность роста при 15°С при содержании в питательной среде 15% ЫаС1, ферментация лактозы, мелицитозы, маннитола и аргинина Также мы изучали слизсобразованис и адгезию.

Большинство гоучетшх нами культур стафилококка образовывали серы или серовато-белые колони. Единичные культуры формировали желтые колонии.

В МПБ стафилококки давали помутнение среды, которая позже могла просветляться с выпадением осадка Слизеобразующие штаммы формировали большие скопления клеток, многие из них прикреплялись к стенке пробирок. I некоторых культурах наблюдали формирование хлопьевидного осадка.

Результаты изучения гемолитических свойств стафилококков представлю ны в таблице 2.

Таблиц

Гемолитическая активность культур стафилококков, выделенных от соб

и пушных зверей,

п=3

Кол-во Характер гемолиза

культур р -гемолиз а- гемолиз отсутствие гемолиза

270 50 78 142

Из таблицы 2 видно, что больше половины изученных нами культур ста филококка (56,3%) не обладали гемолитической активностью. В болышнстве своей культуры стафилококка, не дающие гемолиза на кровяном агаре при га; лежали к видам S.intermedius, S.epidermidis, S.hominis и S.aureus, а также нети пированные культуры давали позитивную или слабо позитивную реакцию на наличие гемотоксина. 100% культур стафилококка имели в своем составе фер мент лецитоветиллазу. Больше половины (53,1% культур, выделенных от соб; и пушных зверей относящиеся к видам S.intermedius, S.aureus обладали ферме том плазмакоагулазой. Стафилококки, относящиеся к видам S.hominis и S.epidermidis и нетипированные культуры в реакции плазмакоагуляции давал] отрицательный результат.

Также все изученные нами культуры стафилоккоков, принадлежащие к видам S.aureus, S.intermedius при температуре культивирования 15°С давали четко видимый рост на МПА, а культуры, принадлежащие к видам S.hominis, S.epidermidis и нетипированные видимого роста не давали.

На питательной среде с содержанием 15% NaCl наблюдали рост более i ловины (55,2%) выделенных культур различных видов.

Изучение адгезивных и слизеобразующнх свойств.

Keans К.А., Taulor D.S. (1992) сообщили о выделении слизеобразующнх стафилококков, относящихся в большинстве своем к видам S.inlermedius, S.epidermidis и S.homis. Ввсказывалось предположение, что продукция слизи характерна для адгезивных штаммов,

Для определения адгезивных свойств готовили суточную бульонную культуру стафилококков в концентрации 109 кл. в мл и центрифугировали 15 минут при 3000 об/мин; формалинизированные эритроциты крупного рогатого скота готовили в концентрации 100 млн.кл. в мл. Смесь аа инкубировали при 37°С на встряхиватели в течение 30 минут. Затем на тщательно обезжиренном стекле готовили мазки, окрашивали иетиленовым синим и проводили подсчет сорбированных на эритроцитах стафилококков.

Большинство выделенных нами культур всех видов обладали выраженными адгезивными свойствами. Адгезия не установлена лишь у одной из 10 культур S.epidermidis и двух из трех нетипированных культур.

При разработке методики слгоеобразования предварительно провели отбор красок, пригодных для окраски слизи.

Результаты действия различных красок при визуальной оценке способно сти стафилококков к слизеобразованию оценивали следующим образом: при просмотре пробирок под микроскопом с исследуемыми культурами стафилококков в положительных случаях стенки пробирок были окрашены, на стекле наблюдали скопление клеток стафилококков, которые располагались по всей внутренней поверхности пробирки.

Слабо позитивная реакция характеризовалась тем, что к стеклу прикреплялись лишь единичные клетки стафилококка. Культура, не обладающая слиз« образующими свойствами не могла плотно прикрепится к стенке пробирки и после того как краску сливали, стекло оставалось почти прозрачным - отрицательный результат.

Наилучшие результаты были получены с родомином С и фуксином основным. Результаты изучения продукции слизи у культур стафилококков, при надлежащих к видам S.intermedis и S.epidermidis выделенных от собак, представлены в таблице 3.

ТаблицаЗ.

Продукция слизи у культур стафилококков.

Виды стафилококка (кол-во культур) Реакция слизеобразования (кол-во культур)

позитивная слабо поз'йтив. отрицательная

Staphylococcus intermedius (40 культур) 23 -

Staphylococcus epidermidis (30 культур) 26 - 4

Из данных таблицы 3 видно, что 70% выделенных нами от собак культур стафилококков обладали способностью к продукции слизи. В том числе 23 культуры, принадлежащих к виду Б.ийегтеШш и 26 к виду 8.ер1с1егтесЙщ.

Биохимические свойства.

Анализируя результаты изучения биохимической активности стафилококков, выделенных от собак следует отметить, что большинство культур ферментировали лактозу (84,9%), маннигол (77,7%), глицерол (80%), №С1-эскулин (56,3%), желчЬ'ЭСкулин (более 70%), эскулин (83%), сорбитол (66%), мелицито-зу (более 70%), аргинин (100%); рафинозу менее 10%, а инулин всего 8 культур из 270; реакция Л^ез-Рпвкаиег в 100% случаях была отрицательной.

При дифференциации видов в соответствии с определителем Берджи (1986) во внимание принимали из биохимических тестов ферментацию лактозы, маннитола, мелицитозы и аргинина.

Большинство культур стафилококков, выделенных от собак при различных патологиях были отнесены к видам З.ЫеттеШш и 8.ер111епшсН5 (36,2% и 27,5% соответственно). 24,5% выделенных культур отнесены к виду З.Ьоггпгш и только 10,7% к Б.аигеиз, По данным тестам не удалось типирозать 2,1% стафилококковых культур, выделенных нами от собак.

Что касается биохимической активности культур стафилококков, выделенных от пушных зверей и кроликов, то глицерол, желчьоскулин, сорбитол ферментировали 90% культур; ЫаС1-эскулин-84%, лакгозу - 92%, эскулин -98%, маннитол - 86% культур стафилококка; мелицитозу - 58%, рафинозу -10%; глицерол - 4%, аргинин -100%,

Больше половины (58%) культур стафилококков, выделенных от пушных зверей и кроликов относились к виду З^ёептшШ и 26% к виду Б.аигеиэ;

S.hominis; S.intermedius не были выделены. Не удалось провести видовую идентификацию 16% культур.

Вирулентность культур стафилококков, выделенных от собак и пушных зверей для белых мышей. Заражение мышей проводили интерперитонеально (0,5 мл), внутримышечно (0,2мл) культурами с концентрацией 500 млн.-5 млрд,/мл. При з; ".жении белых мышей S.inteimedius, выделенном из внутренних органов павших щенков собак наблюдали 100% гибель. Стафилококки этого же вида выделенные со слизистой оболочки половых путей собак проявляли вирулентность в 8,3% случаев, а выделенные из ушной раковины собак, больных отитом вообще не обладали вирулентными свойствами. 9,85% S.epidermidis при пиодермии были вирулентными. 91,9% S.aureus, выделенных из внутренних органов зверей были вирулентными, тогда как S.epidermidis лишь в 4,0% случаях обладали этими свойствами,

Полученные нами данные убедительно показывают, что при пассировани на питательной среде (5-10 пассажей) выделенные культуры стафилококка утрачивали вирулентность.

В процессе исследований по выделению и изучению свойств культур стафилококков от собак и пушных зверей была отработана схема бактериологического исследования с выделением чистой культуры и идентификацией до вида стафилококка.

Схема

Схема исследования патматериала при стафилококкозе собак и пушньо

зверей.

1-й этап Посев в МПБ, МПА. Микроскопия мазков /ГР+/.

/Выделение чистой культуры/. Продолжительность 2-3 дня.

2-й этап Посев чистой культуры на кровяной агар,

желточно-солевой агар Чистовича /определение типа гемолиза, наличие пигмента и фермента лицитиназы/. Продолжительность 2-3 дня.

3-й этап Постановка РПК /определение фермента гошмакоагулазы/.

Определение биохимической активности /лактоза, мелицитоза, маннитол, аргинин/. Определе1ше чувствительности к антибиотикам. Продолж1ггелыгость 2 дня,

4-й этап (для уточнения факторов патогенности)

Определение слизеобразующих, адгезивных свойств выделенной культуры стафилококка. При клинических признаках пиодермии определяют вирулентность для белых мышей. Продолжительность 5-6 дней.

5-й этап Заключение /с указанием вида и, возможно,

этиологической роли/. Продолжительность бактериологического исследования 12-13 дней.

Изучение бактерицидного и бактерностатпческого действия разлпч-пых химпопрепаратов.

Испытывали 20 различных антибиотиков и различные концентрации ани-энных (калиевые соли полуэфиров итаконовой кислоты с радикалами СвНп, ^1оНц, С12Н25) и катионных ПАВ (производные аминоэтилметакрилата с проти-юионом СГ и радикалами С5Н21 и С12Н25). Также нами была испытана 6-АПК аминопеницилановая кислота), включенная в мицеллы итаконовой кислоты с )адикалом С12Н25.

Оценку чувствительности (резистентности) проводили по принятой мето-даке (Л.Б. Борисова и др., 1993).

Стафилококки, являющиеся возбудителями различных форм стафилокок-:овой инфекции резистентны к бегоилпенициллину и к ванкомицину в 100% лучаях; хлорамфениколу, неомицину, канамицину, эритромицину, тетрашжли-[у (5%, 8%, 11%, 13% и 15% соответственно). Бициллин-3, кефзол, верцеф, ам-мокс (комбинация ампициллина и оксациллина), клафоран, гентамицин, ами-:ин явились наиболее хорошо "работающими" антибиотиками. Так, к ампиоксу увствтггельными были 98% изученных нами стафилококковых культур, к ами-ину 97%, а к клафорану, бшщллину-З, гентамицину и кефзолу соответственно 7%, 68%, 77% и 68% культур. Такие антибиотики как цефобид, хлорамфени-

:ол, оксациллин могут использоваться как дополнительные при отсутствии боке активных средств лечения.

Как и ожидалось, в соответствии с литературными данными (Е.Л. Рубан, 1971), результаты воздействия ПАВ на грамотрицательную кишечную палочку 5ыли близки к негативным. Бактериостатическое действие анионных ПАВ на стафилококк было незначительным в концентрациях близких или выше ККМ 1.

Следующим этапом нашей работы было исследование чувствительности гест-культуры к 6-АПК (б^аминопеницилановая кислота), включенный в растворы ПАВ разных типов. При проверке чувствительности тест-культуры к исходной 6-АПК были получены результаты, подтверждающие резистентность как стафилококка, так и кишечной палочки к данному соединению (отсутствие зон задержки роста).

Было показано, что положительный эффект оказывался мицелием, содержание 6-АПК в которых было 20 моль%. Возможно именно такое количество кислоты оптимально соответствует солюбшшзирующей способности прямой мицеллы, образованной ПАВ длинноцепояеяных ИК и МА в концентрации ПО"2 моль/л.

Испытание активности полученных сывороток и антигенов в РДП.

ВИЭФ и РСК. ,

Для получения стафилококковых антигенов для иммунизации лабораторных животных и отработки серологических реакций (РДП,РСК и ВИЭФ) использовали концентрированные ПЭГо-м цельвошифобвые (корпускулярные) антигены; ультразвуковой экстрахт-цитоплазматических фракций; и дефростиро-ванный стафилококковый антиген, полученный методом центрифугирования.

Сравнительные результаты проверки активности полученных нами антигенов и сывороток в РДП, РСК и ВИЭФ представлены в таблице 4.

Таблица 4

Результаты сравнительного выявления антител в гипериммунных кроличьих сыворотках методами РДП, ВИЭФ и РСК _ _ _п>3

№№ п/п Испытуемые гипериммунные сыворотки Антигены РДП ВИЭФ РСК

1-2 на cowan -1 (S. aureus) cowan -I * N4* .■N 8 * 0-1:2 0 0 1:4-1:16 1:4-1:8 0 0-1:40 0-1:10 0

3-4 HaN 4 (S. intermedins) cowan-I * N4* N8* 0 0-1:2 0 Ц-1:16 1:16-1:32 Ц-1:2 1:5-1:10 1:20-1:160 1:5-1:20

5-6 HaN 8 (S. epidermidis) cowan -1 * N4 ♦! N8* 0 0 ,Ц 0 Д 1:2-1:4 0-Ц 0-Ц Ц

7-8 на cowan -1 (S. aureus) cowan -1 * * N 4 * * N8 * * Ц- 1:2 Ц- 1:4 0 Ц -1:20 1:10 0

9-10 на N 4 ( S. intermedins) cowan.-1 * * N4 ** NS** • 0 Ц 1:2 Ц^ 1:10 1:10-1:20 1:10-1:20

11.-12 HaN 8 (S. intermedius) cowan1 * * N4 * * N8 * * 0 0 0-Ц 0 Ц 1:5-1:10

Примечание; * - антигены соматические

* * - антигены корпускулярные Ц - цельный антиген

Из данных таблицы 4 видно, что полученные нами сыворотки были неактивными или низкоактивными при проверке различными серологическими тестами. В реакции диффузионной преципитации лишь одна из двух сывороток в каждой группе без разведения или в разведении 1:2 обуславливали формирование преципитата с некоторыми аналогично готовившимися гомологичными антигенами. В ВИЭФ и РСК результаты также были нестабильными, но титры сывороток были выше, чем в РДП. Причем лишь отдельные серии аналогично готовившихся антигенов давали положительные результаты.

выводы

1. Стафилококкоз собак характеризуется разнообразным клиническим проявлением: в форме пиодермии, отитов, поражения гениталий, острой стафилококковой инфекции (сепсиса).

2. При стафилококкозе собак отмечается повышение активности ACT (ас-партаминотрансферазы) и АЛТ (аланинаминотрансферацы). Увеличение содержания общего белка (от 81,349 ± 2,84 г/л до 87,238±2,96 г/л против 65,02±2,45 г/л в контроле) на фоне снижения количества альбуминов (от 27,1±1,65 г'~ псо 24,8±1,79 г/л против 29,66 + 1,629 г/л в контроле). Регистрируется также снижение кальция и увеличение содержания фосфора с резким увеличением уровня мочевины (в среднем на 52%); показатели билирубина практически не изменялись.

3. Выделены 320 культур стафилококка, в том числе 270 от собак и 50 от пушных зверей (норки, кролики, нутрии). Изучены их основные биологические свойства (гемолитическая активность, наличие ферментов плазмакоагулазы и лецитоветиллазы, биохимическая активность по 12 тестам; рост на среде с содержанием 15%-NaCl; вирулентность для белых мышей). Определена видовая принадлежность : 36,2% культур, выделенных от собак отнесены к виду S. intermedius; 27,5% - S. epidermidis; 24,4% - к S. hominis; 10,7% - к S. aureus. 58% культур, выделенных от пушных зверей, отнесены к виду S. epidermidis, 26% - к S. aureus, 16% - не тигшрованы.

4. Впервые разработана методика определения слизеобразующих стафилококков, которая позваляет быстро и эффективно выявить продукцию слизи, как одного из факторов патогенности. Рекомендуется использовать для окраски готовых препаратов 0,5 %-ный раствор Родамина "С".

.5. 70% выделенных от собак культур стафилококка обладали способностью к продукции слизи и у 78% культур были выявлены адгезивные свойства. Предполагается, что адгезия и слизеобразование - факторы патогенности стафилококков.

6. В 100% случаях стафилококки были устойчивы к бензилпенициллину и ванкомицину. Установлена высокая чувствительность выделенных от собак и пушных зверей культур стафилококка к ампиоксу (98%), амикину- (97%), кла-форану (87%), бициллину-З (68%), генгамицину (77%) и кефзалу (68%). 6-АПК (пенициллановая кислота) не активная в отношении S. albus, включенная в мицеллы ПАВ, вызывает бактерицидный эффект, превышающий эффект чистого ПАВ в 1,5-6 раз.

7. Ампиокс, амикин, клафоран рекомендуются использовать практическим ветеринарным врачам при лечении стафилококковой инфекции у собак.

8. Получены антисыворотки на S.intermedius, S. epidermidis и S. aureus, РДП, ВИЭФ и РСК были недостаточно чувствительны и специфичны для рекомендации их в практику.

НАУЧНАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

1. Разработанная методика определения слизеобразующих стафилококков используется на практике для выявления патогенных стафилококков (удостоверение на рационализаторское предложение № 2 от 25.02.98).

2. Предложена схема бактериологической диагностики сгафилокоюсоза собак и пушных зверей, с определением вида стафлококка.

3. Материалы диссертации рекомендовано использовать в лекциях и да-бораторно-практических занятиях для студентов 3-го курса факультета ветеринарной медицины и биофака.

1. Бакшеева С.С. Стафилококкозы собак // Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных: Сб. науч. тр./ МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 1995. С.68-70.

2. Бакшеева С.С., Бурлаков В.А. Стафилококкозы собак // Инфекционные болезни молодняка с/х животных / Тезисы докладов Всероссийской научной конференции, Москва, 1995. Ç.48-50,

3. Бакшеева С.С., Бурлаков В.А., Васенко C.B., Авдиешсо В.А. Бактерицидная активность сыворотки крови собак при сгафилококкозах // Новое в диагностике, лечении и профилактике болезней животных: Сб. научн. тр. / МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 1996. С. 171-174.

4. Бакшеева С.С., Васенко C.B., Авдиенко В.А. Изучение факторов патогенно-сти при стафилококкозе собак //Новое в диагностике, лечении и профилактике болезней животных: Сб. научн. тр. /МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 1996. С. 168171.

5. Бакшеева С.С.. Бурлаков В.А., Васенко C.B., Авдиенко В.А. Применение ли-юсомально-катионного теста при диагностике стафилококковых инфекций у собак //Новое в диагностике, лечении и профилактике болезней животных: Сб. яаучн. тр. /МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 1996. С. 174-177.

5. Сафарова Э,Р., Бакшеева С.С„ Егоров В.В,, Бурлаков В,А, Влияние синтетических ПАВ на Staphylococcus albus// Вопросы физико-химической биологии в зетеринарии:Сб. научн. тр./МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 1996.С.54-58. 7. Бакшеева С.С., Бурлаков В.А. Свойства и видовая принадлежность стафило-îokkob, выделенных у собак. // Сельскохозяйственная биология, №4, I997.C.116-119.

I. Сафарова Э.Р., Бакшеева С.С., В.А. Бурлаков, В.В. Егоров. Чувствительность микроорганизмов к препаратам на основе антибиотиков и ПАВ.// Проблемы ветеринарной биологии: Сб. научн. тр./МГАВМиБ им.К.И.Скрябина,1997.С.76-80. ). Бакшеева С.С., Васенко C.B., Авдиенко В.А. Действие различных симиопрепаратов на стафилококк!

Список опубликоваппых работ по теме диссертации.

Типография "РОТЭКС'