Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.06) на тему:Биологические свойства гриба ASCOSPHAERA APIS и меры борьбы с аскосферозом пчел

РГо ОД

На правах рукописи

Жуков Аслан Ахиедович

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ГРИБА ASCOSPHAERA APIS И МЕРЫ БОРЬБЫ С АСКОСФЕРОЗОМ ПЧЕЛ

16.00.06 - ветеринарная санитария, ветеринарно-санитарная экспертиза и гигиена переработки продуктов животноводства

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1995

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии, гигиены и экологии

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

профессор, академик РАСХН А.М.Смирнов

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор М.А.Сидоров (МГАПБ)

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник А.Б.Кононенко (В1ШИВСГЭ)

Ведущее научное учреждение - Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарках препаратов

Защита диссертации состоится " САуК^с^иЯ^ 1995 г. в

часов на заседании диссертационного совета Д.020.50.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5. ВНИИВСГЭ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИВСГЭ Автореферат разослан " г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Л.П. Пименова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Пчеловодство - одно из важных -ченьев сельскохозяйственного производства, от успешного развития которого в известной степени зависит повышение уровня земледелия, животноводства и получения высококачественных продуктов в виде меда, воска и др. Его значение в увеличении урожайности перекрестноопыляе-мых растений трудно оценить. Важной является и природоохранная деятельность медоносных пчел.

Серьезным барьером ла пути развития современного пчеловодства являются инфекционные и инвазионные заболевание пчел. Особенно широкое распространение в последние годы получили микозы в частности аскосфероз пчел.

Аскосфероз - инфекционная болезнь (микоз) открытого и печатного расплода, вызываемая грибом Ascosphaera apis. Чаще поражаются трутневые или пчелиные личинки 3-4 дневного возраста, которые после гибели превращаются в мумифицированные струпья, напоминающие по внешнему виду кусочки мела или извести. Это послужило поводом назвать болезнь "известковый" расплод. В связи с этим ухудшилась экологическая и эпизоотическая обстановка на пасеках, возрастает ущерб от аскосфероза, ослаблен конт^ль за качеством пчелопродук-ции.

За последние 20-25 лет аскосфероз широко распространился на пасеках многих континентов. Такое быстрое распространение данного заболевания, приводящего к громадному ущербу по мненио отечественных и зарубежных ученых объясняется прежде всего, содержанием пчел во Елажиых местах с плохой кормовой базой; не'яалифицированным применением антибиотиков для бсрьбы о инфекционными заболеваниями; бесконтрольными перевозками пчелиных семей и продажей маток и др.

В работах M.Maassen (1913); P.Claussen (1921); A.Maurlzio (1934); C.F.Spiltor (1S55); H.А.Спесивдевой (1964); А.А.Евлаховой (1974); В.И.Полтева, Е.В.Нешатаевой (1977); А.Г.Григорчн (1903); О.Ф.Гробова, А.М.СмирноЕа, .Е.Т.Попова (1987); А. К.Керимбаева, В.М.Мершиева (1988); В.Д.Бобова (1989); A.M. Алексеенхо, В.А.Реве-нок, М.А.Чепурко (1991); M.Gilliam (1990); S.Taber (1992); Г.Ф.Та-ранова (1992); А.А.Комарова (1992); H.Shiman'iki (1993); Н.Л.Буренина, Г.Н.Котоеой (1994) изучены некоторые вопросы, касающиеся ас-косфероза пчел, главным образом клинических признаков болезни,, морфологии и, частично биологии возбудителя, зпизоотологических данных, ветеринарно-санитарных мероприятий, средств лечения и мер борьбы.

Однако, вопросы жизнедеятельности возбудителя, аскосфероза пчел, некоторые его биологические свойства, особенности аскосфе-розного процесса остаются недостаточно изученными. Кроме, того, гриб Ascosphaera apis очень устойчив во внешней среде и к различным дезинфектантам, поэтому существующие средства лечения и меры борьбы не достаточно эффективны.

Учитывая выиеизлохеннсе, мы определили цель данной работы и. задачи исследований. .

Цель и задачи исследований. Изучить биологические свойства гриба Ascosphaera apis и изыскать наиболее эффективные средства для борьбы с аскосферогом пчел. Для достижения данной цели, перед нами были поставлены .следующие задачи: ■

- выделить . голевую культуру гриба Ascosphaera apis и изучить его культурально-морфологические свойства;.

- изучить эпизоотологические и биологические особенности ас-косферозного процесса; -

- провести научно- исследователь :,r:ie работы по ирнскньию ле . чебиого препарата эффективно! о np.i а хосФеро:«-! гц1(-л и райр=юотке способа его применения;

- изыскать средство для дезинфекции ульев и пчел'.,полного ип вентаря.

Научная новизна. Выделены шгаммы грибл которое идвнтиф.тир ваны как Ascosphaura apis. Штамма поиияты но Всероссийскую коллек-íoao микроорганизмов и зарегистрировали пол, ноьг^ачи В KM F и ВКМ F-3422. Изучены особенности роста грноа на ра.^'uhi.ux питатель ных средах, зависимость роста гриб^ от pil среды, некоторые биологические особенности аскссферозиои инвагии. эффективность приме! е-ния фунгицидного препарата üAi'II при аокосферозе пчел, влияние душного препарата на пчел и теп покровных животных. РаараСотана методика обнаружения остаточных количеств препарата :'1АГП в меде об;ja батываешх семей пчел. Taras изучена эффективность применения пре парата перкарб для дезинфекции ульев и пчеловодного инвентаря при данном заболевание. \

Ррактичгс:сая ценность. Результаты исследований вгаючени во Време>:нсе наставление по применению препарата ШГП при аскосферозе пчел (в порядке широкого производственного опыта на 1993-1995 гг.), ути. ГУ8 МСХ Р5 26.07.93. (в соавторстве). Временное наставление по применений препарата перкарб для дезинфекции ульев и пчеловодного инвентаря при аскссферозе пчел (в порядке широкого производственною испытания в 1995-19°б гг.), утв. Департаментом ве терииарии Минсельхозпрода РФ 26.06.95. (в соавторстве).

Апробация работы. Оснорные положения диссертационной работу дслажзш на секции РАСХН " Патологии и профилакт ика болезней пнг-л и j.pyrvL\ оео.ояьиночььх животных (г.Москва, 199' I.), ни Всерос-

сийскок научно-производственной конференции " Гигиена, ветсанита-рия и экология жмБСтнозодства" (г.ЧеОоксары 22-24 сентября 1994 г.). па семинаре общества пчеловодов Капардино-Бнл;;арской Республики (г.Нальчик, 1534 г.), межлаЗораторном совещании сотрудников ВНИШСГЭ (г.Москва, 1995 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 печатных раб ?ы.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 1/Ь0 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследовании, собственных исследораний, обсуждения результатов, выводов, предложений для практики, списка литературы и приложения. Список литературы включает /^ источников, в том числе /¿^иностранных авторов. Работа иллюстрирована таблицами, 0 фотографиями и 3 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследований. Диссертационная работа выполнена в период с 199" по 1995 гг. в лаборатории ветеринарной санитарии в пчелоьолстие и на экспериментальной пасеке ВНИИ ветеринарной сгыпарии, гигиены и пкологии, на пасеке АОЗТ "Первое мая" Московской области, а также на пасеках Кабардино-Балкарского пче-лоразведенческого совхоза.

Для решения поставленных задач в работе руководствовались:

- Ссповньыи методическими требованиями к постановке эюзпери-монтов в пчеловодстве, утв. ВАСХНИП, 19?!

- Методикой по дезинфекции и сачитапии в пчеловодстве, утв. 1;А':ХН'ЛЛ, Ю",'!.

- Методическими рекомендациями по изучению и разработке способов профилактики и борьбы с аскооферозом пчел, утя. ВЛСХНИЛ, 1987.

- Методическими рекомендациями по изучению токсического действия пестицидов и биопрепаратов для пчел, утв. ВАСХНИЛ, 1989.

- Рекомендациями Госагролрома СССР по внедрению достижений науки и практики в производство, утр. ВАСХИИЛ, 1989.

Комплексною оценку исследуемых препаратов проводили в соответствии с требованиями Лар^-.акологпческого Совета Департамента во теринарии.

Диагноз на аскосфероз ставили на основании характерных клинических признаков поражения расплода и результатов лабораторных исследований. При подозрении на аскосфероз в пчелиных семьях бргли образцы сотов (размером не менее 1.0 х 15 см) с больным расплодом, а такие 20-30 погибших личинок. Лабораторные исследования включали посев и видэление чистой культуры гриба с последующим уикросконическим исследованием. Для микроскопического изучения готовили гл-вые препараты, используя смесь спирт-глицерин-вода (1:1:1), методом раздавленной капли.

Кульгазирование возбудителя аскосфероза пчел в лабораторных условиях проводили на картофельно-де ;трозном агаре с 0,4% дромке-вого экстракта, сусловом агаре и агаое Сабуро в термостате при температуре ЗС°С в течение 14 суток.

Одновременно дифференцировали чистую культуру гриба от возбудителей аспергиллеза и меланоза пчел, а также от гриба Ascosphaera alvo!, которой пэражае? neprv, но не поражает пчелиный расплод.

Изучение специфической актизносги препаратов в отношении гриба Ascosphaera apis проводили в лабораюрньк условиях на чашках

Петри с выше названными средами при использовании различных концентраций. Также определяли токсичность препаратов в садковых опытах.

Препараты наименее токсичные для пчел и с выраженным фунги-цидным действием, в дальнейшем испытывали на пораженных аскосферо-аом пчелиных семьях, подобранных по принципу аналогов. До и после обработки семей иссл<здуемш.:л препаратами обращали внимание на состояние расплода, взрослых пчел. Особое внимание уделяли клиническому осмотру пчелиного и трутневого расплода, учитывая возраст личинок, форму, консистенцию и цвет. Для облегчения подсчета пораженных личинок в соторамках и количества печатного расплода, использовали рамки-сетки с размерами квадратов 5x5 см, вмещающих по 100 пчелиных ячеек. Степень поражения расплода (слабая, средняя, оитьная) определяли с учетом погибших личинок в соторамках и выброшенных на поддоне. Количество меда определяли во время активного пчеловодного сезона путем взвешивания сотовых рамок на весах за вычетом массы пустого сота (0;5-0,6 кг).

'Здесь же отрабатывали режимы обработок: оптимальные дозы препаратов на курс лечения, на однократную обработку семьи, кратность обработок, длительность интервалов между ними, продолжительность курса лечения, определяли наиболее благоприятные условия обработок: сезон го^а, время суток и другие факторы.

Остаточные количества трихлорбензоксазолона в меде, полученном от ссмей пчел, обработанных ПАГП, определяли с помощью разра-бптанной нами методики жидкостной хроматографии.

Ста'И'.с'.ичесю/ю обработку результатов исследовании проводили общепринятыми методами (Н.В.Садовский, 1981).

РЕЗУЛЬТАТУ ИССЛЕДОВАНИЙ

Ецделекиэ культуры гриба Ascosphasra apis и изучение i о культурально-морфологических свойств Выделение возбудителя из пораженного расплода пчел Для получения чистой культуры гоиба из патологического материала делали посевы на питательные среды. Из указанных посевов выделены три типа культур. Первый из них представлял смесь мужского и женского мяцелиев и развивал во всех субкультурах спороношение. Два других типа культур представляли собой однополые мицелии и спороношение не образовывали. Среди последних подобраны условно мужской и ленский мицелий, при культивировании их в одной чалке Петри в области соприкосновения растущих краев колонии развивалось половое спороношение, при этом граница мезду двумя колониями выглядела как черная полоса, состоящая из скопления темно-окрашенных цист.

Выделенные в ходе работы штаммы гриба .идентифицированы как Ascosphaera apis (Maassen ex Claussen) Olive ex Spiltor и приняты во Есероссийскую коллекцию микроорганизмов. Зарегистрированы под номерами ВКМ F-3421 и ВКМ F-34P2. Штаммы гриба выделены нами совместно со с.н.с. , к.б.н. Л.С.Малиновской и с.н.с., к.в.н. Г.И.Иг-натьеЕоч.

Особенности роста г^чба на различных питательных средах Для опытов была использована чистая культура гриба, выделенная ранее из погибших личинок. Посевы культуры производили на сле-дуювде питательные среды: картофэ.шьно-декстрозкь!й агар с 0.4Z

дрожжевого экстракта (КДА), сусловый агар и агар Сабуро. Культивирование гриба проводили в термостате при температуре 30°С, рост наблюдали в течение 14 суток.

Для исследования особенностей роста гриба на вышеназванных средах, посевы делали на поверхность агара в центре чашки одной точкой при помощи микологической иглы. Исследовали трех-, пяти-, семи-, десяти- суточные колонии гриба, при этом измеряли линейный рост колоний (по величине диаметра) и проводили изучение культу-рально-морфолгических свойств гриба.

Получены следующие данные: на картофельно-декстрозном агаре с дрожжевым экстрактом на 3 сутки колонии были белые, ватообразные, диаметр их составлял 35,0 + 1,2 мм. На 5 сутки наблюдали начальную фазу формирования спороцист, диаметр колоний 70,5 + 2,6 мм. На 7 сутки отмечали образование спор, склеенных в споровые шары, заключенные в цисты, диаметр колоний 84,3 + 3,5 мм. На 10 сутки диаметр колоний был 90 мм, появлялась буроватая окраска из-за массового развития темноокрашенных цист, которая становилась черно-бурой на 14 сутки. На этой среде в поле зрения микроскопа наблюдали интенсивное развитие вегетативных гиф, покрывавших спороносный, слой слоем мицелия.

На сусловом агаре на 3 сутки - ватообразный белый мицелий, диаметр колоний составлял 22,0 + 1,5 мм. На 5 сутки обнаружили недозрелые цисты без спор и споровых шаров, диаметр колоний 62,5 + 2,2 мм. На 7 сутки колонии имели серый грязноватый цвет, их диаметр 74,6 + 1,7 мм, зрелые цисты со споровыми шарами. На 10 сутки в поле зрения микроскопа множество лопнувших цист и выходящих из них споровых шаров, диаметр колоний 90 мм, цвет их темно-серый. На 14 сутки - обильное развитие спороцист, придающее колониям черный

цвет.

На агаре Сабуро на 3 сутки наблюдали серовато-белые колонии диаметром 18,5 + 0,9 мм. На 5 сутки диаметр колоний 50,0 + 2,4 мм, цисты отсутствовали. На 7 сутки мицелий серовато-бурый, недозрелые цисты, диаметр колоний - 64,0 + 3,2 мм. Только на 10 сутки, когда диаметр колоний составил 88,5 + 2,0 мм, появились цисты со споровыми шарами. На 14 сутки наблюдали дальнейшее развитие цист, придающее колониям серовато-черный цвет.

Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод, что оптимальной средой для роста мицелия гриба,. накопления мицелиальной массы является карто^ельно-декстрозный агар с 0.4Х дрожкевого экстракта; для изучения спороношения (спороцист, споровых шаров) целесообразно использовать сусессий агар.

Поскольку для' изучения спороношения гриба ими рекомендуется сусловый агар, мы провели изучение величин морфологических элементов гриба на этой среде с тем, чтобы сравнить эти показатели с приведенными в отечественных и иностранных определителях, где рекомендованы другие питательные среды (среда Чапека с добавлением 5Х-ного дрожжевого экстракта; среда Скоу с пептоном, с цветочной пыльцой; 22-ный солодовый агар; среда Сабуро; картофельно-глюкоз-ный агар.

В результате выяснено, что полученные нами данные о величинах параметров морфологических элементов гриба вполне соответствуют приведенным в литературе - толщина гифы в пределах ^,0-11,5 мкм, диаметр цисты 32-99 мкм (в среднем 65,8 мкм), диаметр спор 1,0-2.0 * 2,0-3,5 мкм (А.А.Евлахова, 1974; Э.З.Коваль. 1974; О.Ф.Гробов, А.К.Лихотин, 1989; К.ТакаЬог!, КТапака, 1982).

Влияние рН среды на характер роста гриба В отечественной и зарубежной литературе мы встречали мало данных относительно вопроса о влиянии рН среды культивирования на проростание спор гриба A.apis. Поэтому мы решили исследовать рост гриба при различных рН среды (5,0; 5,5; 6,5; 7,5). По данному вопросу было поставлено 25 опытов в трехкратной повторности. Во всех опытах температура культивирования гриба была +30°С (наиболее оптимальная для роста A.apis).

Проведенными исследованиями установлено, что при рН-5,0 среды на 3, 5, 7 сутки роста гриба не наблюдалось, на 10 сутки появлялись мицелий гриба. При рН-5,5 среды на 3-5 сутки рост отсутствовал, на 7-10 сутки - мицелий гриба, цисты. При рН-6,5 среды на 3 сутки нет роста гриба, на 5 сутки - мицелий, на 7-10 сутки обнаруживались цисты и споры. При рН-7,5 среды на 3 сутки появлялись мицелий гриба, на 5 сутки - цисты, на 7-10 сутки в поле зрения микроскопа наблюдались цисты, споровые шары и споры.

Учитывая вышеизложенное, можно сделать вывод, что наиболее оптимальное рН среды для культивирование гриба A.apis на сусловом агаре лежит в диапазоне 7,0-7,5 при температуре 30°С.

Динамика развития аскосФерозной инвазии в пчелиных семьях С целью изучения некоторых особенностей аскосферозного процесса и динамики его развития в Кабардино-Балкарском пчелоразве-денческом совхозе проводились исследования в течение двух лет на пасеках неблагополучных по аскосферозу. За этот период в весе-нее-летнее время ежемесячно отбирали патологический материал (больные и погибшие личинки, пораженные соты) для микологических и биологических исследований, определяли степень поражения аскосфе-

розом расплода пчел, исследовали динамику аскосферозной инвазии.

Установлено, что степень развития аскосферозного процесса тесно связана со временем года. У карпатской породы пчел и помесных пчел в условиях Кабардино-Балкарского региона за 1993-1994 гг. данная инвазия прогрессировала наиболее остро (апрель, май, июнь) и значительно слабее (март, июль, август). В 1993 г. пораженность расплода пчел аскосферозом составила в марте -22; в апреле - 72; в мае - 121; в июне - 182; в июле - 32. Наибольшего пика заболевание достигло в этом году в июне месяце. За 1994 г. пораженность расплода значительно повысилось и достигла в марте - 4Х; в апреле - 132; в мае - 25X. максимальный пик заболеваемости в этом году в июне - 172; в июле - 72; в августе - не наблюдалось.

Исходя из вышесказанного, можно сделать вывод, что в данном регионе наблюдается сеэонная пораженность расплода пчел аскосферо-зом с наибольшим распространением в апреле, мае, июне.

Изыскание эффективного препарата при аскосферозе пчел и разработка способа его применения

Проведенные нами совместно с НИИ химических средств защиты растений и с.н.с., к.б.н. С.Н.Луганским скрининговые испытания ряда химических соединений по фунгицидной активности в отношении возбудителя аскосфероза пчел показали высокую биологическую активность фунгицида трихлорбензоксазолона (ТХБЗ).

Физико-химические и биологические свойства трихлорбензоксазолона позволили нам взять его за основу при разработке препаративной формы ПАГП для лечения аскосфероза пчел.

ПАГП представляет собой прозрачную жидкость от бесцветной до

светло-желтой, без запаха, содержащую 1,25 или 2,57. (ТХВЗ); легко смешивается с водой.

В ходе лабораторных испытании препарат ПАГП показал высокую фунгистатическую активность в отношении гриба A. apis. При концентрации препарата 0,017. диаметр колоний гриба на 10 сутки составлял 12 + 1.2 мм по сравнению с контролем (ВО +0,1 мм).

Были испытаны различные концентрации и способы применения препарата ПАГП для лечения пчел. Установлено, что наиболее эффективным яБляется применение препарата путем опрыскивания соторамок в концентрации 0,017. (в пересчете на д.в.). Применение препарата в белее низких концентрациях, а i-акже путем скармливания вместе с сахарным сиропом в кормушках является м<5не<? эффективным.

Результаты опытов по определению эффективности ПАГП в пасеч-ныч условиях представлены в таблице 1.

Таблица 1

Эффективность препарата ПАГП при аааэсфероэе пчел (п - 15 пчелиных семей)

Препарат Пораженность расплода аскосферозом, % .Эффективность обработки, X

ДО обработки после обработки

1. Вода (контроль) 18 + 2 28 + 4

2. Водный р-р ПАГП 24 + 3 4,5 + 2 81,3

3. Водный р-р дикобина 20 + 4 7 + 3 65.0

Анализ полученных данных указывает на высокую эффективность

применения лечебных растворов препаратов при аскосфероэе пчел. Эффективность обработок составила при применении ПАГП - 81,32; при применении дикобина - 65,02. Проведенные исследования показали достаточно высокую противоаскосферозную активность препарата ПАГП в весенне-летнее время.

До и после проведения испытаний было проверено состояние семей пчел, участвующих в опыте. Результаты опытов изложены в таблице 2.

Таблица 2

Состояние семей пчел до и после проведения пасечных испытаний (п =■ 15 пчелиных семей)

Препарат До опытов После опытов

Сила 'кол-во ' Кол-во п/с, печатного меда, (улочек) расплода, (кг.) (тыс.ячеек) Сила 'кол-во 'кол-во п/с, печатного меда, (улочек) расплода (кг.) (тыс.ячеек)

1.Вода (контроль) 3,5+0,5 9,2+0,4 4,6+0,2 2,0+0,5 6,9+0,8 2.9+0,3 2.Водный Е^П 3,0+1 8,1+0,6 4,7+0,5 3,5+1 10,0+0,5 5,4+0,4 3.Водный диковина 3,5+0,5 8,9+0,2 5,0+0,3 3,0+0,5 9,7+0,4 5,5+0,6

Полученные результаты показывают, что состояние больных семей пчел значительно улучшилось после применения лечебных препаратов по сравнению с контрольной группой. После лрименения препарата ПАГП сила пчелосемей увеличилась на 172, также возросло количество печатного расплода после применения ПАГП на 232 и дикобина - на

8Х. Количество кеда в пчелиных семьях тоже повысилось, после применения препарата ПАГП на 15% и дикобина - на 11%.

Учитывая результаты пасечных испытаний з весенне-летнее время . в период максимального развития аскосфероза пчел, препарат ПАГП показал высокую эффективность (81,3%) при лечении аскосфорда:. пчел. По своей эффективности препарат ПАГП превосходят широко известный препарат - дикобин.

Изучение токсичности препарата ПАГП для пчел Определена токсичность препарата ПАГП для пчел: ДЦ50 при то-пикальном ьанесении составила 107,4 + 2,2 мкг/пчелу, а при скармливании с сахарным сиропом была 7,4 + 1,6 мкг/пчелу. Таким образом, руководствуясь критериями Anderson, Atkins (1968), препарат ПАГП относится к слабо токсичным соединениям я пчел.

Изучение токсичности препарата ПАГП для теплокровных животных При исследовании токсичности препарата ПАГП для теплокровных животных было установлено, что препарат ПАГП, согласно классификации (ГОСТ 12.1.007-76) является умеренно токсичным соединением. При пероральном введении препарата крысам-садизм ЛД5о*1гХ мт/кг, мышам-самиам J!feo=240 мг/кг.

Полученные данные при исследовании токсичности препарата "MTI в опытах на лабораторных животных свидетельствуют об " умеренной токсичности исследуемого препарата. В испытанны;; концентрациях ПАГП не обладал кожно-резорбтивными и кумулятивными свойствами.

Разработка метода обнаружения препарата ПАГП в меде Была разработана методика гадкостной хрэматегрэфи по опреде-

лению остаточных количеств трихлорбензоксазолона (основное д.в. препарата ПАГП), полнота определения в меде 83-852, чувствительность метода 0,5 мкг/кг.

При исследовании динамики накопления остаточных количеств трихлорбензоксазолона в меде было установлено, что после двухкратной обраОотки в летний период трихлорбензоксазолон сохранялся в меде до 9 суток, но в очень малых количествах (0,0 мкг/кг на девятые сутки). На 10 сутки трихлорбзнзоксазолон в исследуемой пробе меда не обнаруживался.

Изыскание сродства для дезинфекции ульев и пчеловодного инвентаря при аскосферозе пчел

Перед нами была поставлена задача - изыскать препарат для дезинфекции, пчеловодного инвентаря, не имеющего резкого запаха, отличающегося чистотой и экологической безвредностью. Анализ зарубежной и отечественной литературы показал, что такими компонентами могут быть окислители и в частности - перекись водорода, а также персульфаты, перкарбснаты и другие препараты, способные в водных растворах выделять перекись водорода.

На основании лабораторных исследований, проведенных совместно с лабораторией дезинфекции, выбор был остановлен на перкарбонате нагрия - перкарбе.

Перкгрб - дезинфицирующий препарат, образующий в водных растворах перекись водорода. Содержание перекиси водорода в сухом препарате - 152. Препарат по внешнему виду представляет собой однородный сыпучий порошок или гранулы от белого до светли-коричневого цвета Сез запаха.

- -lt) -

Исследование дезинфицирующего препарата перкарб

Разработку режимов дезиьфекции объектов пчеловодства проводили в соответствии с методиками по дезинфекции и санитарии в пчеловодстве, разработанными А.М.Смирновым (1971).

В качестве тест-объектоь использовали ульи от больных аскос-

ферозом пчелиных сомей, о которых предварительно были выделены

споры гриба A. apis, а также пчеловодный инвентарь, использованный

з работе с этими больными семьями, с которого также предварительно

выделен возоудитель аскосфероза пчел, i

Об эффективности дезинфекции судили по отсутствию роста гриба A. apis на питательной среде на посевах из проб с опытных поверхностей и при наличии ооста гриба в контроле. Чтобы результаты были достсвеопыми опыты повторяли до получения не менее трех совпадающих результатов и параллельно ставы.! контроле. Полученные данные представлены в таблиц-? 3.

Таблица 3

Результагы испытаний препарата перкарб для дезинфекции ульев и пчеловодного инвентаря

Концентрация раствора (7.) Экспозиция (час) Расход U'Mz) Кол-во тест-объектов Обезза ражено I Не обез-j заражено обеззараживания тестов Биопроба на пчелиных семьях

2,0 3 0,25 18 8 10 44. i _

3,0 3 0,25 18 12 6 6ü,7 -

5,0 3 0,25 18 16 ? 88,3 -

Контроль 3 0,25 9 Ü 9 0 +

(зодс.)

Примечание: - не заболели;

+ заболели аскосферозо\'.

Данные таблицы показывают, что наиболее эффективным является режим дезинфекции с применением 52-ного препарата перка сю из расчета 0,25 л/и2 и экспозиции 3 часа. В более низких концентрациях и экспозициях препарат не дает желаемого результата.

Продезинфицированные ульи и рамки считали безвредными для пчел и расплода при отсутствии гибели пчел и расплода, наличию спокойного поведения пчелосемей, стабильности выхода расплода, количества товарного меда, при аналогичных показателях в контрольных пчелосемьях. Данные опытов приведены в таблице 4.

Таблица 4

Результаты опытов по дезинфекции объектов пчеловодства препаратом перкарб при аскосф?розе пчел

№№ опытов

Кол-во объектов к

Гибель

I

I ульи

рамки

пчел

расплода

Выход расплода 7.

Среднее кол-во меда в одном улье (М+ш)

опыт

контроль

№1 10 ео 0 0 100

1-0 80 0 с 100

№3 10 80 0 0 100

Контр. о&ьекты Свода) 6 48 0 0 100

11,2*0.4 12,0+0,2

И.ЗЮ.З 11,7+0,6

Как видно из таблицы 4, данное дезинфицирующее средство -перкарб не оказывает вредного действия на пчел и расплод, а также

на развитие расплода и на количество валового меда, не портит деревянных, металлических поверхностей объектов пчеловодства. За 30 • дн-вныи период наблюдений мы не обнаружили признаков отравления пчел и оесппкойства пчелиных семей.

Из ьышеиздоженного можно сделать зывод, что приведенные нами методы и режимы дезинфекции ульев и пчеловодного инвентаря препаратом перкарб являются эффективными и безвредными для пчел и расплода, и могут быть рекомендованы для широкого применения на практике.

выводи

1. Выделены штампы гриба A^cosphaera acis, которые приняты во Всероссийскую киплекцпю микроорганизмов и зарегистрированы под номерами Bi<M F-3421 и Br'M F-3422.

2. Установлено, что оптимальной средой для роста мицелия гри-Са, накопления мицелигльной массы является картофельно-декстрозный агар с 0.4Х дрожжевого экстракта; для изучения спороношения (спс-роцист, cnopoBiJx шаров) целесообразно использовать сусловый агар. Наиболее оптимачьное рН среды для культизирование гриба Ascospnae-га apis на сусловом агаре лежит в диапазоне 7,0-7,5.

3. В условиях Кабардино-Балкарской Неспублики наблюдается сезонная поракенность расплода пчел аскосферозом с наибольшим г ростралением болезни в апреле, мае, июне.

4. Для лечения, аскосфероза пчел предложен иффскг.:шшй препа- . рат ПАГП на основе трихлорбензоксазолона. Препарат глабо токсичен для пчел, и в рекомендуемы/ кош'.ентрагиях не ока;.ыг.ает отрицательного действия на общее состояние, развитие ь продуктивность сэмей пчгл. При топиклльном нанесении ЛЛ50 составляет J7,4 +2.2

мкг/пчелу, а при скармливании с сахарным сиропом соответственно 7,5 + 1,8 мкг/пчелу.

5. Установлено, что препарат ПАГП дл.: теплокровных животных согласно (ГОСТ 12.1.007-76) является умеренно токсичным соединением. При перэральном введении препарата белым крысам-самцам ЛД50 составила 1100 мг/кг. В рекомендуемых концентрациях ПАГП не обладает кожно-резорбтивными и кумулятивными свойствами.

6. Разработана методика определения остаточных количеств препарата ПАГП в меде с помощью жидкостной хроматографии. Полнота определения в меде 83-85%, чувствител: :ость метода 0,5 мкг/кг. Препарат ПАГП можно применять в пчелиных семьях в весенее-летнее время и прекращать в период главного взятка.

7. Для дезинфекции.ульез и пчеловодного инвентаря при аскос-ферсзе пчел предложен дезинфицирующий препарат леркарб на основе перкарбсиата натрия, отличающийся чистотой и экологической безвредностью.

8. Эффективным оказался 5£-ный раствор перкарба при норме расхода 0,25 л/м2 и экспозиции 3 часа. В рекомендуемых режимах препарат не оказывает вредного влияния на пчел и расплод, а также на количество валового меда, не портит деревянных и металлических поверхностей объектов пчеловодства.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

На оснований результатов проведенных исследований разработаны:

1. Временное наставление по применению препарата ПАГП при аскосферозе пчел (в порядке широкого производственного опыта на 1993-1995 гг). утв. ГУВ МСХ РФ 26.07.93. (в соавторстве).

2. Временное наставление по применению препарата перкарб для дезинфекции ульев и пчеловодного инвентаря при аскосферозе пчел (в пррядке широкого производственного испытания в 1995-1996 гг), утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 26.06.95. (в соавторстве) .

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Смирнов A.M., Жуков A.A. Распространение аскосфероза пчел и устойчивость его возбудителя. //Сборник научных трудов ВНЮШСГЭ, 1994, т.94.

2. Жуков A.A. Особенности роста гриба Аскосфера апис на различных питательных средах. //Тезисы докл. Всеросс. науч. произ. конф. по проблеме "Гигиена, ветсанитария и экология животноводства". 22-24 сентября 1994 г.- Чебоксары.- с.137-138:

3. Жуков A.A. Препарат перкарб для дезинфекции ульев н пчеловодного инвентаря при аскосферозе пчел. //Сборник научных трудов ВНИИВСГЭ, 1995, т.98.

ШИИВСГЭ, 1995 г., Иосква, Звенигородское шоссе, 5,сак. 2646/3 Тираж 80 виз.