Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Антимикробная активность и лечебно-профилактическая эффективность фуразонала при респираторных болезнях свиней

ЗОРОНЕЕСШ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИШ имени К.Д.ГЛИНКИ 4

На правах рукописи

САШИНА Лариса Юрьевна

АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ И ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ФУРАЗОНАЛА ПРИ РЕСПИРАТОРНЫХ БОЛЕЗНЯХ СЗИНЕЙ

16.00.03 - ветеринарная микробиология,вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Вороне*с-1995

Работа выполнена в лаборатории микробиологии и вирусологи Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного институт патологии, фармакологии и терапии

Научный руководитель: Доктор ветеринарных наук,профессор-

шахов а.г:

Официальные оппоненты: I.Доктор ветеринарных наук,профессор С.Г.Субботина

2.Кандидат ветеринарных наук,старший научный сотрудник А.И.Пьявкин -

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко.

Защита состоится " J4 " илс-т.t-f 1995 г. в -f3 час

»

на заседании специализированного совета К 120.54.03 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук при Воронежском Государственном агроуниверситете им. К.Д.Глинки (394012. г.Воронеж, ул.Ломоносова,114-а, Ветклиника ВГАУ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета по адресу: 394012. г.Воронеж, ул.Мичурина, I.

Автореферат разослан "" 1995 г.

Ученый секретарь специализированного совета

Н.А.Чаплыгина

. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1.1.АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕШ. 3 специализированных свиноводческих хозяйствах с интенсивным производством,, высокой концентрацией животных на ограниченных производственных площадях, воздействием на организм многочисленных стресс-факторов отмечено увеличение заболеваемости поросят респираторными болезнями (А.И.Собк",1979,1963;

A.Я.Миланко с соавт.,ГЭ«3,19о5,19с6; Н.Н.Андросик,198с,19Ь9 и др.).

Широкое распространение получили смешанные, полифакторные заболевания, в этиологии которых на фоне пониженной естественной резистентности организма участвуют вирусы, бактерии, микоплазмы, хламидии и их различные ассоциации (А.Я.Пустовар,1973; П.И.Приту-лин,1969,1971,1976; Е.Г.Павлов,1979,1983; Р.В.Душук.1962; В.В.Ро-маненко с соавт.,1965; А.Г.Шахов,19йб; А.Я.Миланко,1990 и др.).

В такой ситуации применение с профилактической и лечебной целью антибиотиков и сульфаниламидных препаратов не всегда дает желаемый результат, так' как существует вероятность сравнительно быстрого развития к ним бактериальной резистентности.

В связи с этим особое значение приобретает разработка и внедрение в ветеринарную практику новых лекарственных средств, в том числе препаратов нитрофуранового ряда (Б.Ф.Ковалев с соавт.,1968;

B.С.Хоменко,1991). Нитрофурановые препараты, обладающие высокой эффективностью при различных заболеваниях сельскохозяйственных животных, птиц, плотоядных (А.Б.Синёв с соавт.,1973; В.С.Хоменко, 1991), подавляют жизнедеятельность штаммов микроорганизмов, резистентных к антибиотикам и сульфаниламидным препаратам. Устойчи -вость к ним у бактерий развивается значительно медленнее, чем к антибиотикам (Н.Н.Вентер с соавт.,1979).

Перспективным в этом направлении является препарат фуразонал.

1.2.ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Цель настоящих исследований -разработать и внедрить в практику нитрофурановкй препарат фуразо-

£

нал для профилактики и терапии респираторных болезней поросят.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1.Изучить in vitro антимикробную активность фураэонал ь отношении потенциальных бактериальных возбудителей респираторных болезней поросят.

2.Изучить влияние препарата на ультраструктуру'бактерий.

3.Изучить специфическую активность фуразонала на модели пастереллезной, сальмонеллезноя, бордетеллезной и стафилококковой инфекций белых мышей.

4.Изучить влияние препарата на общую неспецифическую резистентность поросят.

0.Изучить лечебную и профилактическую эффективность фуразонала при пневмониях поросят бактериальной этиологии.

1.3. НАУЧНАЯ НОЕИЗНА. Впервые изучены m vitroH на моделях инфекиий белых мышей антимикробная активность фуразонала в отношении потенциальных бактериальных возбудителей респираторных болезней поросят, его влияние на ультраструктуру золотистого стафилококка и пастерелл, "профилактическая и лечебная эффективность при пневмониях поросят бактериальной этиологии.

1.4. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. В ветеринарную практику для профилактики и терапии респираторных .болезней поросят предложен препарат фураэонал.

1.5. BH££FZHHE РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. Материалы исел.едог ьаний ьошли б Нормативно-техническую документацию на препарат фураэонал (НТД рассмотрена и одобрена решением Ученого совета BHi'iEiLlinT, 1993 г., протокол-М J

1.e. АПРОБАЦИИ. РАБОТЫ. Материалы диссертации доложены на

отчётных научнь-х конференциях и Ученом совете Всероссийского НИЕИ * „

патологии, фармакологии и терапии в 1992 - 1994 гг.

О -

1.7.ПУБЛИКАЦИИ. Материалы диссертации опубликованы в Z науч-ч ных статьях.

. 1.8.СБ1ЕМ И С ТРУК1УРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и вклачает: введении,обзор литературы, материал и методы исследований, обсуждение результатов исследований, выводы,практические предложения и список литературы.

Работа иллюстрирована 17 таблицами и 22 рисунками. Список литературы включает 257 источников, в том числе 218 отечественных и 39 иностранных авторов.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Об антимикробной активности фуразснала в отношении потенциальных бактериальных возбудителей респираторнюс болезней поросят

2. О стимулирующем влиянии фуразоНала на общую неспеиифическу резистентность клинически здоровых и больных пневмонией поросят.

3. О профилактической и лечебной эффективности фуразонала при пневмониях поросят бактериальной 'этиологии.

2. МАТЕРИАЛ П'ПБТСД!:; И

Настоящая работа выполнена г лаборатории микробиологии Бсерос ч,ийского научно-исследовательского Еетеринарного института патологии, фармакологии и терапии в IS9IH994 гг. е соответствии - планом ЛИР института по теме¡"Разработать и .внедрить в производство препа рат фуразонал для профилактики и терапии респираторных болезней свиней" (.'? гос.регистрации 01.S.40CG7588).

Антимикробную активность фуразонала изучали методом серийных разведений в жидкой питательной среде. Б качестве тест культур использовали референтные' и полевые штамкть- потенциальных возбудителей респираторных болезней. Минимальную баьтермостатическую конме* рации определяли методов серийньх разведений в мясо-пептонном буль-

оне, минимально бактерицидную концентрацию - путем высева из пробирок с МЛБ на плотные питательные среды. Результаты учитывали ь течение 7 дней.

Для электронно-микроскопического изучения действия фуразона-ла в опытах in vitro использовали культуры золотистого стафило -кокка (штамм 209-Р) и пастереллы мультоцида (штамм В C5I) в фазе логарифмического роста, выращенные на ЫПБ, из расчета 200 тыс. микробных тел на I мл среды, в условиях усиленной аэраиии на качалке. Фуразонал добавляли к 5 -.асоЕои культуре в минимальной бактерицидной концентрации и в концентрации, в 4 раза превышающей ¡¿ЕцК. Контролем служили культуры без препарата. Опытные и конт -рольные образцы отбирали через 3 и 6 часов, центрифугировали 5 минут при 3000 об/мин на центрифуге 0Пн-3 УХЛ 4,2. Осадок дважды отмывали в физиологическом растворе. Затем бактериальные клетки помещали на I час в 2,5 % глутаральдегид на s -коллидиновом буфере, центрифугировали в течение 10 минут при 3000 об/мин, отбывали осадок J.D-%^ раствором сахарозы 5 раз по 20 минут.

Постфиксацию проводили четырехокисыо осмия. Фиксированный---------

материал обезвоживали в восходящих концентрациях этиолового''спирта, после чего осадок заключали в смесь эпоновых смол. Срезы готовили на ультратоме IKB-380 А ^-контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Просмотр производили в электронном микроскопе TESLA - 500 при ускоряющем напряжении 90кВт.

Изучение адаптации золотистого стафилококка и пастереллы мультоцида к фуразоналу проводили путем культивирования бактерий на мясо-пептонном бульоне, содержащем все возрастающее суббакте-риостатические концентрации препарата. Всего- было проведено 60 пассажей.

Степень увеличения устойчивости микроорганизмов оценивали

по коэффициенту резистентности - отношению-максимальной< не препятствующей росту бактерий концентрации препарата, к исходной.

Специфическая активность препарата была изучена на модели сальмонеллезной, пастереллезной, бордетеллезной и стафилококковой инфекций белых мышей, массой 1У-20 г, после проверки их ка носи-тельство сальмонелл. В опытах было использовало 540 белых мылей.

Индекс защиты (эффективности) фураэонала определяли по формуле В.Д.Белякова (1961). '

Опыты по изучению профилактической и лечебной эффективности препарата проведены на поросятах 2-4 месяцев в зимне-весенний периоды в хозяйственных условиях содержания и кормления е спец-хозах по доращиванию и откорму сборного поголовья "Московское" и "Победа" Еоронежской области. Животных содержали трупами ( 15-£0 гол.) в станках, безвыгульно, в типчвкх помещениях. Микроклиматические условия содержания не всегда отвечали зоогигиеничес -киы нормам. Кормление - механизированное сухим кормом, водопой веолю. Рационы сбалансированы, по основным питательным веществам, витаминам, макро-и микроэлементам согласно существующим нормам.

Опыты проводили в соответствии с требованиями к врачебно -биологическому эксперименту (И.Т.Фролов,1965) по постановке контроля, подбору аналогов, соблюдения одинаковых условий кормления и содержания животных в период исследования. Для исключения случайных результатов опыты проведены в нескольких повторностях.

Для характеристики клинического состояния у животных измеряли температуру тела (ректально), определяли частоту пульса, дыхания, характер носовых выделений.

. Изучение действия фуразонала на морфологические и имнунобио-химические показатели крови и общую неспецифическую резистент -ность организма было проведено на клинически здоровых и.больных

пневмонией поросятах 2-4 месяцев.

Б крови определяли содержание эритроцитов и лейкоцитов на счетчике частиц Культер Каунтер (Франция), количество гемоглобина - гемоглобинцианидным методов. Определение лер.кограммы проводили путем подсчета 200 лейкоцитов, окрашенных по Романовскому-Гимза, с вычислением процентного содержания каждого вида.

Для оценки уровня неспецифической резистентности определяли: бактерицидную активность сыьсротки крови - по методу 0.Б.Смирновой и Т.П.Кузьминой (1X6), комплементарную активность - по Вагнеру (1963), лизоцкмную активность - по О.Б.Бухарину (1974), фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число - по В.С,Гостеву (С.И.Плященко с соавт.,1979).Общий белок - рефрактометрически,' белковые фракции - методом Олла и ¡¿аккорда"в~модификации С.П.Карпюка (1562), качественное определение иммуноглобулинов по Манчини (1974). Содержание суммарных суммарных иммуноглобулинов по А.Д. Ыак Юан с соавт.(1970).

Диагноз на пнеЕмонию и её этиологию устанавливали комплексно на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомичес-ких данных с 'учетом бактериологических, вирусологических и серологических исследований.

Для проведения бактериологических исследований использовали пораженные легкие, кровь из сердца, печень, селезенку, почки от 10 убитых с диагностической целью животных и 20 проб носовых вццелений от больных пневмонией поросят.

Пробы из носовой полости брали стерильными ватными тампонами и помещали в пробирки с питательной средой ВИЭВ для ыикоплазм.

Патологический материал исследовали не позднее 4-6 часов после его взятия. Пйоевы патологического материала проводили на 1ШБ с глюкозой, Ш1А с сывороткой крови лошади, ЫПА с крови

барана, казеино-утольный агар (КУА), среду-Эндо. После 16-24 инкубации при 37°С учитывали характер роста микроорганизмов.По 3-5 типичных колоний каждого вида бактерий отсевали на скошенный агар в пробирки МПА, МПА с 10^ сыворотки крови и 1% глюкозы для дальнейшего изучения.

У вьщеленных чистых культур бактерий изучали морфологические, тинкториальные, кулътурально-биохимические свойства обще -принятыми в бактериологии методами. Патогенноеть ввдеденных культур определяли на белых мышах.

Видовую принадлежность бактерий устанавливали с помощью определителя Д. Вег§еу'з (1974). Типизацию кокковой микрофлоры проводили согласно "Рекомендациями по индикации и идентификации стафилококков и стрептококков" (1976), пастередл и борде-телл согласно "Методическим рекомендациям по лабораторной диагностике инфекционных пневмоний свиней, вызванных микоплазмаш, пастереллами и бордетеллами" (19ЪЗ).

Идентификацию энтеробактерий проводили с учетом "Наставления по бактериологической диагностике колибактериоза сельскохозяйственных, промысловых животных и птиц" (1974).

Серологическую типизацию сальмонелл и эшерихий проводили' в реакции агглютинации с 0- и Н-агглютинкрутсщими сальмонеллезны-ми сыворотками и 0-коли^ыворотками согласно "Наставлению по применению агглютинирующих С-коли сывороток" (,1£8С) и "методический указаниям по применению сальмонеллезных монорецепторных С - и Н - агглютинирующих адсорбироБачньх сь'Бсроток для идентификации сальмонелл" (1978).

ЧуЕ^твительно'.ть выделенных культур к антибиотикам (печипил-лин, стрептомицин, неомииин, пелишк.ин, гентамиг'/н, «оно^игин, тетрациклин, левоиггегин, эритромицин) определял!! методом индл-

катерных бумажных дисков. Результаты сиенивали по величине зоны задержки роста.'

Исследование сывороток крови от клинически здоровых и больных пневмонией животных проводили трехкратно с интервалом в 2 недели в реакции агглютинации с сальмонеллезным, пастереллезным, бордетеллезным и эшерихиозным антигенами.

Пастереллезннй и бордетеллезный антигены готовили из референтных штаммов, полученных из Украинского НИШ. Посевы указанных культур проводили на МПА с 10^ сывороткой лошади, инкубировали в термостате "16-24 часа при 37°С. После проведения микроско пии культуры смывали стерильным 0,65 % физиологическим раство -ром и по оптическому стандарту мутности концентрацию взвеси доводили до 10 млрд.м.к.

Сальыонеллезный и эшерихиозный антигены готовили из культур эпцэротических штаммов. Посев сальмонелл и эшерихий проводили на МПА. Взвесь культур на физиологическом растворе доводили до 2 млрд.м.к. Концентрации в I мл по оптическому стандарту мутнрс-ти.

Статистическая обработка полученных данных проведена общепринятыми методами (Е.К.Меркурьева,1964).

3. РЕЗУЛЬТАТи СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Антимикробная активность фуразонала. фуразонал обладает широким спектром антимикробного действия. Наиболее высокую чувствительность к препарату проявляла кокковая микрофлора. Минимальная бактериостатическая концентрация фуразонала в отношении стрептококков и стафилококков составила 0,39-1,56 мкг/мл. Б концентрации 6,25 мкг/мл препарат задерживал рост пастерелл.

В отношении бордетелл и сальмонелл минимальная бактерио -статическая концентрация фуразонала составила 6,25-12,5 мкг/мл.

Для культур кишечной палочки активность препарата состав -ляла 3,12-12,5 мкг/мл. Наиболее устойчивой к фуразоналу была синегнойная палочка, для задержки её роста необходима была концентрация препарата 12,5-50,0 мкг/мл.

Бактерицидное действие фуразонала проявилось в концентрациях, в два - дв'а с половиной раза превышающих бактериостати-чвские: в отношении стрептококков и стафилококков она состави- ~ ла 3,1—6,25 мкг/мл, пастерелл - 6,25-12,5 мкг/мл. Препарат в дозе 12,5-25,0 мкг/мл'оказывал бактерицидное действие на культуры бордетелл, сальмонелл и кишечной палочки. Для синегнойной палочки минимальная бактерицидная концентрация составила 25,0-50.,0 мкг/мл. •

Сравнительное изучение чувствительности референтных и полевых штаммов микроорганизмов к фуразоналу не выявило снижении активности препарата к последним.

Химиотерапевтическая активность препарата определяется не только его концентрацией и видом микроорганизмов, но и наличием

I

органических веществ в биологической среде, и играющих защитную роль для возбудителей.

Влияние белка на антимикробную активность фуразонала изу- '' чено в отношении тест-культур золотистого стафилококка и пасте-реллы мультоцида.

На основании полученных результатов установлено, что до-' бавление в питательную среду сыворотки крови лошади в количестве 5 %, IUfo и 20 % не снижало антибактериальной активности препарата.

3.2. Изучение адаптации микроорганизмов к фуразоналу.

Для определения возможности повышения устойчивости пасте*-реллы мультоцида .и золотистого стафилококка к фуразоналу было проведено их культивирование на питательном бульоне, содержащем возрастающие количества суббактериостатических концентраций препарата.

Установлено, что минимальная бактериостатическая концентрация фуразонала. ь отношении золотистого стафилококка в процессе серийных пассажей на ¡¿ПБ с фуразоналоы повысилась в 3,9раз (с'3,12 до 12,5 мкг/мл). При культивировании культур пастерел-лы мультоцида на градах, содержащих возрастающие концентрации препарата, их чувствительность к препарату снизилась б 8 раз.

Минимальная бактериостатическая концентрация в данном случае увеличилась с 6,2и до_оО мкг/мл. Б процессе возникновения резистентности происходили изменения типичной морфологии клеток, на питательных средах удлинялись сроки образования колоний, отмечалось снижение биохимической активности.

Для решения вопроса о стабильности приобретенных культурами свойств пед действием фуразонала были проведены последовательные пассажи полученных вариантов на питательном бульоне,не содержащем препарат. При этом установлено, что к 25 дню пересева приобретенная устойчивость снижалась до исходной и полученные культуры по своим морфологическим и биохимическим свойствам не отмечались от контрольных.

3.3 Изучение ультраструктуры бактерий под влиянием фуразонала.

Были изучены субмикроскопические изменения бактерий -золотистого стафилококка и пастереллы мультоцида под влиянием различных концентраций и-длительности воздействия фуразонала.

Стафилококк до воздействия препарата имел клеточную стенку с четко выраженным электронно-плотным слоем.

Цитоплазматичеекая мембрана выявлялась как одноконтурная. Цитоплазма была заполнена гранулярным компонентом. Ядерный материал был четко дифференцирован и занимал центральную часть клетки.

В норме поверхность клеточной стенки у пастередл цредстав-лена 3-х слойной мембраной. Под наружной мембраной располагался слой, также относящийся к клеточной стенке, соединяющий трехслойную иитоплазматическую мембрану в 'единую структуру.Цитоплазма заполнена гранулярным компонентом, представленным рибосомами. Цуклеоид был Отчетливо ограничен от остальной части цитоплазмы и заполнен фибриллами ДНК.

Под влиянием фуразонала в концентрации 6,2о мкг/мл б течение 3 часов изменялась морфологическая структура стафилококка. Поверхностный электронно-плотный слой местами терял четкие очертания. Цитоплазма имела несколько повышенную осмиофиль -ность. Содержимое ее представлено дисперсным веществом.

На срезах бактерий пастерелл, находившихся в контакте с препаратом в концентрации 1£,о мкг/мл в течение того же Бремени, клеточная стенка выделена в виде осмиофильного слоя неравномерной толщины. На полюсах клетки между внутренней осмио-фильной мембраной и цитоплазмой образовались электронно-прозрачные полости. Цитоплазма имела неоднородную оптическую плотность. Нуклеоид располагался диффузно в виде отдельных конгла-мера-тов. ■

При увеличении экспозиции действия препарата-до б часов в той же концентрации у стафилококка наружный~слой клеточной стенки разрыхлялся.- В перегородках деления был истончен сред-

ний электронно-плотный слой, обеспечивающий расхождении клеток. Б цитоплазме появились участки мелкой зернистости. Нукле-аед представлял собой электронно-прозрачную зону, заполненную агрегатами нитей ДНК.

У пастерелл, обработанных фуразоналом при этой экспози-ци, наблюдался лизис цитоплазмы на-полюсах клеток. Чуклеоид был представлен сетью тонких электронно-плотных нитей дез -оксирибонуклеопротекда.

При увеличении концентрации до 25 мкг/мл при экспозиции 3 часа у стафилококка структура клеточной стенки утрачивалась. Цитоплазма имела вид крупнозернистой структуры. Нуклеоид не дифференцировался. У значительного числа клеток цитоплазма приобретала глыбчатую структуру. В ней диффузно располагались обширные светльГе участки средней электронной плотности.

. У-пастерелл, обработанных фуразоналом в течение 3 чалов, цитоплазма была локализована по периферии клеток. Она теряла 'гранулярное строение. При этом наряду со светлыми участками наблюдалось скопление плотных масс, располагающихся на полюсах клеток. На месте нуклеоида выявлялись нити или электронно-прозрачные слои, не имеющие структуры.

При увеличении экспозиции действия препарата до б часов стафилококк имел утолщенную клеточную стенку, целостность ее была сохранена. Цитоплазматическаа мембрана отслаивалась от клеточной стенки. Е цитоплазме отдельных клеток появлялись кольцевые мембранные структуры.

Воздействие фуразонала на пастередлы в течение 6 часов вызывало появление обшкрных электронно-прозрачных зон. Оставшаяся часть цитоплазмы приобретала гомогенный вид. У клеток

подьершихся лизису, остатки цитоплазматического содержимого бьши локализовали по периферии клетки.

Таким образом, фуразонал при взаимодействии с бактериальными клетками необратимо связывается с белками и нуклеиновыми кислотами, дезинтегрирует цитоплазму, препятствует их росту и размножению.

3.4,Специфическая активность фуразонала при экспериментальных инфекциях белых мышей.

Проведенные исследования показали, что наиболее высокую специфическую активность фуразонал проявил при стафилококковой инфекции. Однократное введение препарата за 3 часа до заражения, а также применение его в течение 7 дней через с часов после инфицирования обеспечивало 50 %-нкй индекс защиты. Несколько ниже (8055) этот показатель был при введении фуразона-ла одновременно с заражением и через 3 часа после него (705?).

В отношении бордетеллезной инфекции наибольший защитный эффект (60%) был получен при назначении фуразонала за 3 часа до заражения и при однократном применении в течение 7 суток через .6 часов после инфицирования. Несколько ниже индекс защиты был при введении препарата .одновременное заражением (60%) и через 3 часа после него (40%).

Выраженный превентивный эффект (70%) получен при примеч

нении фуразонала за 3 часа до заражения сальмонеллами. Значительно ниже этот показатель был при введении препарата одновременно с заражением (40%) и через 3 часа после него (30%). При однократном.применении фуразонала через 6 часов после заражения в течение 7 дней-индекс защиты составил СС%.

Аналогичная картина отмечена и при пастереллезной инфекции. Наиболее высокий индекс защиты бьш получен при Еведении

фуразонала до заражения и при ежедневном однократном применении его в течение 7 суток (7С/5). Значительно ниже он был ведении препарата одновременно с заражением и через 3 часа после него С3<2£).— '

Исследования показали, что наиболее выраженный защитный__

эффект при всех изученных инфекциях фуразонал проявил при назначении его -за 3 часа до заражения и при ежедневном однократном применении в течение 7 ¿уток (первое введение через б часов пос ле инфицирования). Величина индекса защиты зависела и от'дозы препарата. Более выраженный эффект (на 1С-£С$) был получен при назначений фуразонала в дозе 60 ыг/кг в сравнении с таковым при арименении препарата в дозе 30 мг/кг. ^.¿.Профилактическая эффективность фуразонала.

Профилактическая эффективность фуразонала изучена в трех сериях опытов на клинически здоровых поросятах 2-4 месячного возраста после комплектования их в группы доралдования.

фуразонал применяли в дезе ЗС мг/кг массы тела ежедневно с кормом в течение 10 дней. Животные контрольной группы препарат не получали.

За подопытными животными вели клиническое наблюдение в течение 30 дней, учитывали скорость роста, заболеваемость и сохранн<зсть.

Б первом опыте фуразонал обеспечивал профилактическое действие в 93,7$ случаев. Падеж одного животного (5,7%) зарегистрирован только в контрольной группе. Применение препарата обеспечивало более высокую скорость роста - 273,0 г, в контрольной группе среднесуточный прирост массы тела животных составил-2СЗ.З г.

Морфологические и биохимические исследования крови свидетельствовали о благоприятном действии фуразонала на организм поросят. В конце опыта у них отмечена тенденция к увеличению содержания общего белка (7,46+0,12 ; в контроле 6,28^0,27 г%), гамма-глобулинов (32,01+1,5 ; 28,18+1,47. %) в сыворотке крови, повышение ее комплементарной (24,62+1,75 ; 18,23+2,04 г$0,ли-зоцимной (12,04+0,65 ; 8,63+1,32 мкг/мл) и бактерицидной (80,05+ 1,9 ; в контроле 74,8+2,33 %) активности.

У поросят опытной группы отмечено также повышение фагоцитарной активности лейкоцитов (92,9+0,77 ; в контроле 83,1+0,82$) и фагоцитарного числа (11,02+0,06 ; 9,21+0,52) на 30 день.Эти данные указы-вают на более высокий уровень резистентности у получавших фураэонал поросят в период адаптации их к новым условиям.

Во втором опыте клинически здоровые кивотные после транспортировки были разделены на 2 группы. Поросятам I группы (л=12) применяли фураэонал однократно в течение 10 дней. 2и-вотные II группы (п=13) служили контролем.

Заболеваемость животных в опытной группе (8,3%) была в 4 раза меньше, чем б контроле (38,5^).

фураэонал обеспечивал получение более еысокого прироста массы тела - 403,0 г, в контрольной груше он составил 258,0 г.

Препарат оказал благоприятное действие на показатели общей неспецифической резистентности, которое проявлялось повышением клеточного иммунитета за счет увеличения фагоцитарной . активности лейкоцитов 8с,2+0,77% (на 15 день), 54+1,38 % (на ,30 день),в контроле 80,8+2,0? %, фагоцитарного числа соответственно 9,5+0,91 и 9,62+0,75 (15 и ЗС-й дни), в контроле - 7,93+ 0,58 и фагоцитарного индекса 11,4+0,12 (30 день), ь контроле-

9,66+0,36. У поросят, получавших фуразонал, отмечена тенденция к повышение комплементарной (£3,08+1,72); в'контроле 15,22; 2,45 % геы.), лязоцимной (5,12+С,П ; 3,94+0,45 мкг/мл) и-бактерицидной (обОС; 43,9+_1,39 %) активности сыворотки крови на 30 день.

Б третьем опыте профилактическая эффективность фуразона-ла была изучена в сравнении с технологическим контролем.Заболеваемость поросят пневмонией в опытной группе была в 3,2, раза ниже, чем в контроле. При этом среднесуточный прирост массы тела у них за период опыта составил 274,2 г, в то время как в контрольной группе 183,5 г.

Применение 'фуразонала оказало положительное влияние на показатели обшей неспецифической резистентности организма ; отмечено повышение комплементарной с 12,32+2,25 до 18,08+1,18% гем., лизоцимнов активности сыворотки крови с 3,94+1,45 до 7,7 7,76+0,57 мкг/ю на 30 день, фагоцитарного числа с 8,86+0,36 до 10,07+0,76, фагоцитарного индексас 8,86+0,36 до 10,89+0,8 . на 30 день.

Под влиянием препарата происходило увеличение содержания общего белка с 6,44+0,27 до 7,01+0,19 на 30 день и нормализация протеинограмму.

Таким образом применение фуразонала с профилактической целью е критические периоды выращивания (комплектование групп доращивания, адаптация к новым условиям после транспортировки и т.д.) сопровождается повышением общей неспецифичеокой устойчивости организма, увеличением прироста массы и в значительной степени предупреждает возникновение пневмоний.

3.6. Ле^бная эффективность фуразонала.

Терапевтическая эффективность фуразонала была изучена б

б трех сериях опытов на больных встрой и псдострой пнев;»:снксГ: поросятах £,5-4 ыесяпеЕ.

Диагноз и этиологию пневмонии устанавливали на основании эпизоотологических, клинических, патолсго&ната/ическпх данных, результатов бактериологических, серологических, вирусологических и гельминтологических исследований. -

У больных жиеотных отмечали повышение температуры тела до 40,3-41,5°С, учащение дыхательных движений до 35-40, угнетение общего состояния, снижение аппетита, кашель, одышку, серозное истечение из носовых отверстий.

Патологоанатомические изменения обнаруживали в легких, бронхах и средоетенных лимфатических узлах.

При бактериологическом исследовании патологического материала от животных, убитых с.диагностической целью, были Еыде-лены ассоциации бактерий, представленные сальмонеллами (42%), пастереллам (21%), стрептококками (26%) и стафилококками (11%)

Патогенными свойств'аш обладали все вцделенные культуры в 100% случаях.

При изучении чувствительности выделенных патогенных бактерий к антибиотикам установлено, что сальмонеллы устойчивы или слабочувствительны к эритромицину, левомицетину, тетрациклину, пенициллину; пастереллы - к тетрапиклину, левомицетину, .эритромицину, пенициллину, полимиксину, стрептомицину; стрептококки - к левомицетину, стрептэмицину.,пешщиллину, полимиксину,. неомицину; стафилококки были устойчивы ко всем иссле -дуемым антибиотикам.

При вирусологическом и гельминтологическом исследовании патологического материала от убитых с диагностической целью поросят не ььщелены соответственно цитопатогьнный агент и гель

минты.

При серологическом, исследовании 100 сывороток крови больных животных выявлены антитела к сальмонеллам в титрах 1:1301:150, к пастереллам - 1:60 - 1:80,к бордетеллам - 1:50 - 1:32 к эшерихиям - 1;100 - 1:130 и к стафилококкам - 1:128 - 1:140.

Для первого опыта было подобрано две группы поросят. Животным 1-й группы (п=14) ежедневно с кормом в течение 10 дней подряд применяли фуразонал в дозе 60 мг/кг, 2-й (п=13) - тет-раолеан (базовый вариант) парентерально из расчета 10 тыс.Е.Д. на I кг массы тела в течение 7 дней.

За подопытными животными в течение 30 дней вели клини -ческие наблюдения, учитывали выздоровление, падеж и скорость роста.

Лечебная эффективность'фураэонала (100%) превосходила тетраолеан (84,6%).

Б опытной группе был и более высокий среднесуточный прирост массы тела 257,0 г в базовом варианте он составил 246,4 г.

Применение-фуразонала способствовало повышению бактерицидной с 75,95+3,29 до У4.21+2.83 %, лизоцимной с 6,61+0,35 до 9,76+0,77 ыкг/мл и комплементарной активности сыворотки крови с 19,75+1,67 до 29,83+1,76% на 30 день, а так же увеличению фагоцитарного числа с 6,74+0,34 до 9,82+0,31 (30 день), фагоцитарного индекса с 7,5ь+0,2С до 9,21+0,13 (15 день) и до 10,12+0,23 (30 день).

Ео втором опыте препараты применяли также, как и в первом эксперименте.

Проведенные клинические исследования' в течение месяца подтвердили высокую терапевтическую эффективность фуразонала. По этому показателю (83,3%) он превосходил тетраолеан (72,7%).

фуразонал обеспечивал более ьь'сокий прирост кассы '¡ела-3^7,0 г. При применении тетраолеана он составил 253,0 . •

Назначение фуразонада сопровождалось увеличением содержания гемоглобина с 102,48x1,12 до 106,81^1,35 к/л, эритроцитов с 4,92+0,26 до 5,02+0,11, снижением количества лейкоцитов с 19,44+1,43 до 13,42+1,92 (30 день).

Препарат оказал стимулирующее влияние на гукоральные и клеточные факторы неспецифического иммунитета, о чем свиде -тельствовало повышение комплементарной с 11,25^0,74 до 15,75х 0,89 и'23,74+0,о2 /£тем (15 и 30 дни) и бактерицидной активности сыворотки крови с 68,4^1,15 до 92,81^1,29 % (30 день), фагоцитарной активности лейкоцитов с 88,4+1,15 до 92.81+1,29, фагоцитарного числа с в,о6+0,29 до Ю,9ь+0,96, фагоцитарного индекса с 9,03+0,32 До 12,25+0,Ь8 (30 день).

Под влиянием препарата уменьшилось содержание гамма-глобулинов с 47,86+2,52 до'31,79+2,17 % и повысился уровень альбуминов с 29,16+1,53 до 33,56-2,07 (на 30 день).

Е конце срока исследования в опытной группе отмечено снижение титров антител к сайьмонеллезному антигену с 1:50 до 1:10, эшерихиозному - с 1:68 до 1:38,6, пастереллезному - с 1:98 до 1:43,8, бордетеллезному - с 1:60 до 1:39 и стафило -кокковому антигену с 1:100 до 1:50.

Б третьем опыте лечебную эффективность фуразонала испытывали в сравнении с таковой у окситетрашклина. Животные I группы (п=14) получали фуразонал е дозе 60 мг/кг массы тела в течение 10 дней, 2 группы (п=18) окситетрациклин в дезе 30 мг/кг два раза в сутки в течение 10 дней.

Проведенными исследованиями установлено, что терапевтическая эффективность фуразонала составила 85,7 %, при этом

пал един поросенок (7,1%), в базовом варианте она составила 77,8 % и отмечен падеж двух животных (11,1%). Кроме того фу-разонал обеспечивал более высокий прирост массы тела (290.,Ог по сравнению с окситетрациклином (203,0 г).

Результаты морфологических и иммунобиохимических исследований также подтвердили благоприятное влияние фураэонала на показатели общей неспецифической резистентности.

Таким образом, фураэонал в дозе 60 мг/кг при применении в течение 1С дней обладает выраженной терапевтической эффективностью при пневмониях поросят бактериальной этиологии.

Б II В 0 Д К

1. Нитрофурановый препарат фуразонал in vitro в кон -центрации 0,78 - 50 мкг/ мл обладает выраженной антимикробной активностью f отношении потенциальных бактериальных возбудителей респираторных болезней свиней. Присутствие в МПБ до 20% сыворотки креви не снижает-активность препарата.

2. При культивировании грамположительных и грамотрииа -тельных бактерий на средах, содержащих суббактериостатические концентрации фуразонала, увеличение их устойчивости к препара ту не достигает высокого уровня. Коэффициент резистентности

в процессе 60 серийных пассажей в отношении культуры пастерел лы мультоцида доставил 8, а у золотистого стафилоккока - 3,9. Чувствительность к фуразоналу у микроорганизмов восстанавливается в течение 25 дней при ежедневных пересевах на среды, не содержащие препарат.-

3. При ультрамикроскопическом исследовании золотистого стафилококка л пастирелл, подвергнутых воздействию фуразонала устэноьлену морфологические изменения характеризующиеся нарушение*/ структуры клеточной стенки, деструкцией цитоплаз-

мы и нуклеоида.

4. Однократное применение фуразснала за 3 часа до заражения и введение его в течение 7 дней посль инфицирования обеспечивало высокий индекс защиты белых-ккшей при стафилококковой (90$), бордетеллезной (80%), сальмонеллезной (70%)

и пастереллезной (70%) инфекциях. При применении препарата одновременно с заражением и через 3 часа после него индекс защиты был несколько ниже и составил при стафилококковой инфекции соответственно 80 и 70 %, бордетеллезной - 40 и 60%, сальмонеллезной - 40 и 30 % и пастереллезной инфекции - 50 и 30%.

5. Назначение фуразонала в дозе 30 мг/кг в течение 10 дней с кормом групповым способом клинически здоровым поросятам в период адаптации к новым условиям содержания повышает общую неспецифическую резистентность организма и обеспечивает увеличение массы тела на 16-48 % и предупреждает возникновение бронхопневмоний в 90-93,7% случаев.

6. Применение фуразонала в дозе 60 мг/кг в течение 10 дней при бронхопневмониях поросят бактериальной этиологии повышает комплементарную, бактерицидную и лизоцимнув активность сыворотки крови, фагоцитарную активность лейкоцитов

и обеспечивает выздоровление животных в 83,3-100% случаев.

7. Производственная апробация фуразонала свидетельствует о практической возможности и целесообразности его применения в промышленных свиноводческих хозяйствах в целях про$и-

балеэкей.

лактики респираторных/и терапии больных пнеЕмснией животных. ГТАКЖЕСКИЕ ПВДСЕЕНде. I. Результаты проведенных исследований" вошли б Нормативно-техническую документацию на фуразонал (рассмотрена и одо-

брена решением Ученого совета БНИБИШиТ, протокол № 4, 1993).

2. Для профилактики респираторных болезней свиней рекомендуется применять фуразонал в дозе 30- мг/кг массы тела один раз в день с кормом групповым способов в течение 10 суток в период адаптации к новым условиям содержания (комплектования их в группы доращивания, после транспортировки и др.).

3. Для терапии больных бронхопневмонией поросят бактериальной этиологии фуразонал применять в дозе 60 мг/кг массы тела один раз в день в течение 10 суток.

' СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шахов А.Г., Бригадиров Ю.Н., Болгова Б.И., Сашнина Л.Ю., Фуразонал - эффективное лечебно-профилактическое средство при бронхопневмониях иоросят // Сб.науч.трудов "Еажн.итоги исследований по изучению заболеваний сельскохозяйственных животных незаразной этиологии, их профилактика и лечение" Воронеж, 1992.; С.131-133. -

2. Шахов А.Г., Бригадиров Ю.Н., Сергеев Г.И., Сашнина Л.Ю. Профилактическая эффективность фуразонала при пневмониях свиней/ Сб.науч.трудов " Использование новых методов диагностики и фармакологических средств в лечении и профилактике незаразных болезней животных? Еоронеж, 1993.- С.98-100.