Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Закономерности сорбции на эритроцитах глюкокортикоидных гормонов и тимических пептидови использование этого феномена в иммунокоррекции

На правах рукописи

Дмитриева Людмила Аркадьевна

Закономерности сорбции на эритроцитах глюкокортикоидных гормонов и тимических пептидов и использование этого феномена в иммунокоррекции

14.00.16 — патологическая физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Иркутск — 1996

Работа выполнена в Иркутском государственном медицинском университете

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Е.Г.Кирдей

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Е.П.Голубинский доктор биологических наук Р.Г.Скворцова

Ведущая организация: НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН

Защита состоится 1996 года в « 9 » часов 1

заседании диссертационного совета Д 001.41.01 при Восточно-Сибирско научном центре СО РАМН по адресу: 664003, Иркутск,ул.Тимирязева, 16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке президиума ВСН СО РАМН по адресу: 664003, Иркутск,ул.Тимирязева, 16.

Автореферат разослан 1996 года.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук

Л.Ф.Шолохов

Актуальность проблемы

Регуляция деятельности иммунной системы организма направлена на контроль и ограничение реакций этой системы в рамках физиологической адекватности их величине антигенного воздействия. Нарушение механизмов иммунорегуляции занимает одно из ведущих мест в патогенезе многих иммунозависимых заболеваний, таких как врожденные и приобретенные иммунодефицита, аутоиммунные и аллергические болезни, иммунолролиферативные заболевания. Коррекция нарушений регуляции специфических и неспецифических реакций иммунной системы играет важную роль в лечении указанных заболеваний. Поэтому дальнейшее изучение механизмов регуляции деятельности иммунной системы имеет важное теоретическое и практическое значение.

Одним из основных подходов в решении данной проблемы является исследование клеточных механизмов регуляции иммунологических процессов. Наряду с клетками-регуляторами лимфоидной природы в последние годы большое внимание уделяется изучению клеток нелимфоидного происхождения, принимающих участие в регуляции иммунологической реактивности организма. Накоплены принципиально новые представления и о физиологической роли эритроцитов, согласно которым эти клетки являются важным звеном механизма иммунорегуляции как в норме, так и при патологии (Колесникова Н.В. и др., 1988; Кирдей Е.Г., 1989; Cornacoff I.B. et. al., 1989; Yirella G., 1989; Gatendy P.A., 1990; Madi N. et. al., 1991).

В литературе имеются данные, позволяющие полагать о способности зрелых эритроцитов сорбировать, концентрировать и в такой форме транспортировать в ткани многие биологически активные соединения (Кирдей Е. Г. и др., 1992). Установлено, что эритроциты, несущие различные антигены инфекционной и неинфекционной природы, усиливают образование антител к этим антигенам (Кравцов Э. Г. и др.,

1987; Ма!зку А., 1991). Митогены, представленные на поверхности эритроцитов, оказывают более выраженное воздействие на процессы лимфопролиферации (Уопд В. е1. а1., 1980).

Поскольку одной их важных проблем современной медицины является разработка эффективных методов коррекции нарушений иммунологической реактивности, этот феномен дает основание для разработки принципиально нового способа с использованием аутологичных эритроцитов в качестве носителей биологически активных веществ в организме.

На основании вышеизложенного представлялось актуальным изучение характера и некоторых условий сорбции на эритроцитах иммуностимулирующих и иммуносупрессивных биологически активных веществ, а также разработка и реализация экстракорпорального метода коррекции измененной иммунологической реактивности организма с использованием аутологичных эритроцитов.

Цель работы

Выявление способности эритроцитов периферической крови человека сорбировать на своей поверхности глюкокортикоидные гормоны и гормоноподобные вещества вилочковой железы и разработка на этой основе способа коррекции нарушений иммунологической реактивности организма с помощью аутологичных эритроцитов, несущих указанные вещества.

Задачи исследования

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Изучить возможность и закономерности сорбции на эритроцитах гормонов коры надпочечников и вилочковой железы.

2. Исследовать способность эритроцитов, несущих на своей поверхности гормоны коры надпочечников, оказывать воздействие на защитные реакции иммунной системы.

3. Исследовать способность эритроцитов, несущих тимические гормоны, оказывать воздействие на иммунологическую реактивность организма.

4. Разработать и апробировать способ коррекции нарушений иммунологической реактивности организма с помощью аутологичных эритроцитов, несущих молекулы преднизолона и тималина.

Научная новизна исследования

В результате проведенных комплексных исследований впервые охарактеризована способность эритроцитов периферической крови человека сорбировать на своей поверхности глюкокортикоидные гормоны и гормоноподобные вещества тимуса. Установлены наличие и характер влияния эритроцитов, несущих молекулы этих веществ, на иммунный ответ. Выявлено положительное влияние экстракорпоральной иммунокоррекции с использованием аутологичных эритроцитов, нагруженных указанными биологически активными веществами , на иммунологические показатели при иммунодефицитных состояниях.

Практическая значимость работы

Разработан, апробирован и используется в практическом здравоохранении способ коррекции измененной иммунологической реактивности организма с использованием аутологичных эритроцитов, несущих преднизолон и тималин, в лечении иммунодефицитных состояний. Показана принципиальная возможность использования показателей сорбционной активности эритроцитов в комплексе методов оценки иммунного статуса организма.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Зрелые эритроциты обладают способностью сорбировать на своей поверхности глюкокортикоидные гормоны и тимические пептиды и уровень этой сорбции определяется величиной концентрации

сорбируемого вещества в среде инкубации.

2. Эритроциты, несущие на своей поверхности глюкокортикоиды, подавляют процессы лимфопролиферации in vitro, а эритроциты, несущие тимопептиды, усиливают эти процессы.

3. Преднизолон и тималин, экстракорпорально сорбированные на эритроцитах и инфузированные в организм больного, оказывают иммунокорригирующее воздействие более выраженное, в сравнении с действием этих препаратов, применяемых общепринятым способом.

Апробация работы

Материалы диссертации апробированы на IV объединенной сессии НИИ и ВУЗов медико-биологического профиля (г. Иркутск, 1994); на

111 Международном симпозиуме Японо-Российской организации медицинского обмена и Японо-Российской организации медицинского сотрудничества (Осака, 1995); на совместном заседании кафедр патофизиологии и иммунологии с аллергологией ИГМУ (1996).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ. Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований и заключения, включающего выводы, практические рекомендации и список литературы. Диссертация иллюстрирована 12 таблицами, 10 рисунками. Список литературы содержит 220 источников, из которых

112 работ отечественных и 108 работ иностранных авторов.

Материалы и методы исследования

Исследования проведены на клетках периферической крови человека. Оценку иммунного статуса по тестам первого и второго

уровня проводили в соответствии с действующими методическими рекомендациями (Петров Р. В., Лопухин Ю. М., Чередеев А. Н., Лебедев К. А., 1984).

Сорбционную способность эритроцитов в отношении тималина определяли по степени падения биологической активности препарата в надосадочной жидкости после инкубации его с эритроцитами в сравнении с исходным ее уровнем. Биологическую активность тималина оценивали по его способности увеличивать число Т-клеток, образующих розетки с эритроцитами барана (Е-РОК). Для постановки реакции использовали общепринятый нагрузочный тест (Понякина И. Д., 1984).

Для изучения способности эритроцитов человека сорбировать преднизолон, трижды отмытые в физиологическом растворе эритроциты инкубировали с равным объемом препарата в различных концентрациях. Количественные показатели сорбции определяли по степени падения биологической активности препарата в надосадочной жидкости после инкубации с эритроцитами в сравнении с исходным ее уровнем.

Биологическую активность преднизолона оценивали по его способности в различных концентрациях угнетать фагоцитарную активность нейтрофилов и подавлять восстановление нитросинего тетразолия. Постановку фагоцитарного и НСТ-теста осуществляли с помощью общепринятых методов (Шмелев Е.И. и др., 1975; Пазкж Е. А., Маянский А. Н., 1981).

Способность эритроцитов человека связывать кортизол изучали с помощью радиоиммунного метода. С этой целью использовали набор реактивов для радиоиммунологического определения кортизола в сыворотке крови с использованием кортизола, меченого йодом-125, и преципитирующего реагента (набор CTEPOH-K-,25l-M).

Воздействие эритроцитов, несущих на своей поверхности различные биологически активные вещества, на функциональную активность аутологичных лимфоцитов изучали с помощью реакции бласттрансформации лимфоцитов (Jensen Р. Т., Christengen К. et.al.,1981; Bloemena Е. et. al., 1989).

Для оценки влияния экстракорпоральной иммунокоррекции с

использованием аутологичных эритроцитов на защитные реакции иммунной системы, у ряда больных изучены иммунологические показатели в динамике: перед проведением иммунокоррекции, после фармакологической и после экстракорпоральной иммунокоррекции.

Все полученные результаты исследований подвергались статистической обработке. Степень достоверности различий между сравниваемыми средними арифметическими показателями оценивали с помощью критерия Фишера-Стъюдента.

Результаты исследований и их обсуждение

Изучение сорбционных свойств эритроцитов.

В настоящее время с целью стимуляции иммунологической реактивности организма широко применяют препараты тимических гормонов, в том числе тималин. Хорошо известна роль глюкокортикоидных гормонов в процессах иммуносупрессии, в частности в ограничении лимфопролиферации. Поэтому тималин, преднизолон, гидрокортизон были выбраны в качестве объектов изучения процессов сорбции на эритроцитах.

При изучении влияния лреднизолона на фагоцитарную активность нейтрофилов в зависимости от величины концентрации препарата выявлено, что этот препарат вызывал примерно одинаковое подавление активности нейтрофилов в концентрациях 10 мкг/мл (18,7%), 5 мкг/мл (19,4%), 1 мкг/мл (20,9%) и менее выраженное воздействие в концентрациях 0,1 мкг/мл и 0,01 мкг/мл (8,3% и 9,9%).

В процессе сорбции преднизолона на эритроцитах происходило достоверное падение его биологической активности в среде инкубации при исходной концентрации 10 мкг/мл - на 42,7%, 5 мкг/мл - на 52,7%, 1 мкг/мл - на 62,3%, 0,1 мкг/мл - на 69,4%.

В процессе дальнейшего изучения условий сорбции преднизолона на эритроцитах учитывали продолжительность инкубации, препарат при этом использовали в концентрации 1 мкг/мл. Результаты исследований показали, что наиболее эффективной была сорбция препарата на эритроцитах при инкубации в течении 30 минут (62,2%) и 1 часа (49,3%). Увеличение продолжительности инкубации

приводило к снижению уровня сорбции преднизолона на эритроцитах до 23,8%.

В следующей серии исследований биологическую активность преднизолона оценивали по его способности в различных концентрациях подавлять восстановление нитросинего тетразолия. При этом было установлено, что преднизолон вызывал примероно одинаковое подавление активности нейтрофилов в концентрациях 10 мкг/мл (27,0%), 5 мкг/мл (25,9%), 1 кг/мл (32,4%) и менее выраженное воздействие в концентрациях 0,1 и 0,01 мкг/мл (20,9% и 9,0%).

В процессе сорбции преднизолона на эритроцитах также происходило достоверное падение его биологической активности при использовании рабочих концентраций 10 мкг/мл - на 62,5%, 5 мкг/мл -на 61,2%, 1 мкг/мл - на 65,4%. Менее выраженное падение биологической активности преднизолона после сорбции его на эритроцитах наблюдалось при использовании концентраций 0,1 и 0,01 мкг/мл.

Дальнейшее изучение условий сорбции преднизолона на эритроцитах в НСТ-тесте проводили с использованием концентрации препарата 1 мкг/мл и различной продолжительности инкубации (30 минут, 1 час, 3 часа). Наиболее интенсивная сорбция препарата на эритроцитах наблюдалась при продолжительности инкубации 30 минут (67,9%) и 1 час (51,2%). Увеличение продолжительности инкубации приводило к снижению изучавшихся показателей.

Таким образом, реальность процесса сорбции преднизолона на эритроцитах доказывалась падением биологической активности препарата, определяемой в надосадочной жидкости после инкубации его с эритроцитами как в фагоцитарном, так и в НСТ-тестах. При этом минимально эффективной была определена концентрация 1 мкг/мл и продолжительность инкубации 0,5-1 час.

В последующих исследованиях изучение сорбционной активности эритроцитов в отношении кортизола (гидрокортизона-гемисукцината) проводили с помощью количественного метода определения этого вещества в радиоиммунном анализе.

Инкубацию эритроцитов с различными разведениями гидрокортизона-гемисукцината проводили при 37°С в течение 1 часа,

учитывая, что в предыдущих исследованиях эритросорбция в этих условиях осуществлялась вполне удовлетворительно.

Количество кортизола, сорбированного эритроцитами, было неодинаковым в различных пробах и возрастало прямо пропорционально концентрации этого вещества в среде инкубации. При вычислении же уровня сорбции кортизола эритроцитами в процентном исчислении оказалось, что этот уровень был примерно одинаковым во всех пробах независимо от концентрации препарата в инкубационной среде и колебался в пределах от 69,7% до 85,3% (табл. №1).

Таблица 1. Способность эритроцитов сорбировать кортизол (гидро-кортизон-гемисукцинат) в зависимости от концентрации препарата в инкубационной среде

Показатели эритросорбции Концентрация кортизола (мкг/мл)

0.1 10 100 | 1000 10000

Количество кортизола, сорбируемого эритромассой из равного объема инкубационной феды (мкг/мл) 0.0784±0.0018 (0.0739-0.0829) ( ! 8.48±0.09 ! 85.3±0.9 | 697.0*31.0 (8.25-8.71) 1 (83.1-87.5) (623.0-759.0) _ _______]__ .... 7450.0±380.0 (6620.0-8280.0)

р<0.001 р<0.001 р<0.001 р<0.001

% сорбции кортиэолоа на эритроцитах 76.4±1.8 84.8±0.9 85.3±0.9 69.7±3.1 74.5+3.8

В следующей серии исследований изучали влияние тималина в концентрациях от 0,01 до 1 мг/мл и продолжительности инкубации с лимфоцитами от 30 минут до 2 часов на процессы розеткообразования между Т-клетками и эритроцитами барана. Полученные данные свидетельствовали о невысоком уровне чувствительности лимфоцитов периферической крови человека к тималину. В зависимости от условий постановки показатели указанной чувствительности колебались от 0,6 % до 14,4 % (рис. 1). Кроме того в этих исследованиях выявилась высокая степень индивидуальной вариабельности в чувствительности лимфоцитов периферической крови человека к тималину, вплоть до полной неотвечаемости этих клеток на препарат.

Результаты исследований показали наличие высокой степени индивидуальных различий и в сорбционной активности эритроцитов по отношению к тималину. Вместе с тем, выявлены определенные закономерности в сорбции эритроцитами пептидов тимуса. В

Рис.1. Уровни увеличения числа Е-РОК {%) периферической крови человека под действием тималина в зависимости от концентрации препарата и времени инкубации с лимфоцитами.

частности, падение биологической активности тималина в процессе сорбции его эритроцитами имело примерно одинаковое процентное выражение при использовании препарата в концентрациях 0,01 мг/мл и 1 мг/мл. Исходя из этого можно заключить, что сорбционная активность эритроцитов по отношению к тимопептидам возрастает пропорционально увеличению концентрации этих веществ в инкубационной среде. Оптимальным временем инкубации для проведения экстракорпоральной сорбции эритроцитами тимических пептидов был определен интервал в 60 минут.

Анализируя результаты проведенных исследований можно полагать, что высокая степень индивидуальных различий в чувствительности Т-лимфоцитов к тималину и низкая ее выраженность могут быть связаны с различным и невысоким содержанием в периферической крови человека недостаточно зрелых Т-кпеток, наиболее восприимчивых к тимическим пептидам. Известно, что наиболее выраженной чувствительностью к тимопептидам обладают незрелые Т-лимфоциты, основная масса которых сосредоточена в вилочковой железе, имеющей наибольшие размеры у новорожденных.

Поэтому нами была предпринята попытка изучить способность тималина оказывать воздействие на розеткообразование между тимоцитами новорожденных поросят и эритроцитами барана. При

этом тималин использовали в концентрации 1 мг/мл, а инкубацию с тимоцитами осуществляли в течение 1 часа. Степень падения биологической активности тималина определяли после инкубации его с эритроцитами человека в течение 1 часа.

Под действием тималина в вышеописанных условиях происходило значимое увеличение числа Е-РОК в культуре тимоцитов в среднем на 28,8±1,5%. Сорбционная активность эритроцитов при этом составила 83,4+2,5%, а индивидуальные различия в сорбционной активности эритроцитов достигали пределов от 61,5% до 100%.

Учитывая широкую химическую разнородность биологически активных веществ, сорбируемых эритроцитами в наших исследованиях, а также на основании данных, представленных в литературе (Рябов С.Е., 1971; Вольский H.H., 1991; Gersten D. М. et. al., 1989), можно предположить, что эта сорбция носит неспецифический характер. Нерецепторный характер связывания различных биологически активных веществ эритроцитами в определенной мере подтверждается крайне широким диапазоном количеств этих веществ, сорбируемых на эритроцитах в зависимости от содержания их в инкубационной среде.

Взаимосвязь сорбционных свойств эритроцитов и показателей иммунного статуса человека.

Наличие выраженных индивидуальных различий в сорбционной активности эритроцитов по отношению к веществам, играющим важную роль в регуляции защитных реакций иммунной системы наводило на мысль об определенном значении этой активности в процессах иммунного реагирования. Поэтому представляло интерес изучение возможных взаимосвязей сорбционных свойств эритроцитов и показателей иммунного статуса организма. Выявление таких взаимосвязей представлялось наиболее эффективным в условиях нарушения деятельности иммунной системы.

Известно, что глюкокортикоиды выполняют важную роль в физиологической иммуносупрессии и ограничении лимфопролиферативных процессов. Поэтому первоначально были

проведены исследования, направленные на выявление особенностей иммунного статуса 275 жителей г. Железногорска, проживающих в условиях природной магнитной аномалии, поскольку воздействие на организм человека магнитных полей различного происхождения усиливает интенсивность миело- и лимфопролиферации (Давыдов Б.И. и др., 1984).

Результаты массовых иммунологических исследований показали, что у жителей г. Железногорска значительное место имели состояния иммунной системы со сверхнормативным увеличением числа лимфоцитов в периферической крови, преимущественно Т-лимфоцитов (43,4 %) и в меньшей степени В-лимфоцитов (2,6 %). Состояние гипосупрессии в иммунорегуляции было выявлено у 64,3 % обследованных, в то же время гиперсупрессорное состояние выявлено у 17,5 %. В целом, нарушение процессов регуляции иммунитета было выявлено у 81,8 % обследованных лиц, что характеризовало высокую степень их распространенности в популяции.

Далее, у 45 обследованных лиц определяли сорбционные свойства эритроцитов. Сорбционную активность эритроцитов оценивали по способности преднизолона в концентрации 1 мкг/мл после инкубации его с эритроцитами в течение 1 часа подавлять спонтанную НСТ-активность нейтрофилов. Средний показатель сорбционной активности эритроцитов составил 60,1±3,8 % (52,3-67,9 %). При изучении взаимосвязи сорбционной активности эритроцитов к преднизолону и показателей иммунного статуса в группах с низкой (< 52,3 %) и высокой (> 67,9 %) сорбционной активностью (табл.2) была выявлена обратно пропорциональная зависимость между показателями САЭ к преднизолону и индексом иммуносупрессии (Тэ/ТЬ) и такая же зависимость между способностью эритроцитов сорбировать преднизолон и содержанием Т-лимфоцитов в периферической крови. В связи с этим можно полагать, что сорбционная активность эритроцитов в отношении глюкокортикоидов в целостном организме играет определенную роль в создании физиологической иммуносупрессии и в ограничении лимфопролиферативных процессов.

Изучение взаимосвязей между показателями сорбционной активности эритроцитов в отношении тималина представлялось наиболее целесообразным в условиях распространения в популяции Т-

Таблица 2. Основные показатели ИС у лиц с низкой и высокой САЭ в отношении преднизолона.

Показатель ИС Группы обследованных лиц Степень

С низкой САЭ (М, пределы колебаний) С высокой САЭ (М. пределы колебаний) различий (р)

Число Е-РОК (млрд./л) 2.51 (1.61-3.41) 1.39 (1.27-1.51) р<0.01

Число ЕМ-РОК (млрд./л) 0.3 (0.2 - 0.4) 0.43 (0 35-0.51) р>0.05

Соотношение ТйДа 14.3 (10.0-18.6) 7.6 (6.2 - 9.6) р<0.05

Концентра^« г/л 9.45 (8 92-10.04) 8.78 (8.44 - 9.08) p>D.05

Концентрация 1дА г/л 3.17 (2.78 - 3.56) 2.76 (2.44 - 3.08) р<0.001

Концентрация 1дМ г/л. 1.10 (0.98- 1.22) 1.70 (1.62 -1.78) р>0.05

Концентрация ЦИК усл.ед 17.30 (15.1- 19.51 16.80 (15.0-18.6) pMJ.OS

Активность фагоцитоза % 86.0 (33.5-88.5) 83.5 (80.9-861) p>0 05

НСТ-а^-тивиость с понт. % 31.09 (26.6 - 33 6) 31.20 (31.6-36.6) p>0.05

зависимых иммунодефицитных состояний. Поскольку значительные нарушения деятельности Т-звена иммунной системы имеют место при тяжелых и длительных воспалительных процессах (Grob Р. et. al., 1988; Glinz W. et.al., 1989), нами была проведена оценка иммунного статуса больных с гнойными осложнениями травм длинных трубчатых костей. У обследованных больных наблюдалось как снижение, так и увеличение Т-лимфоцитов на фоне гипосупрессорного состояния, снижение иммуноглобулинов преимущественно классов А и М, нарушение функции фагоцитирующих лейкоцитов.

С целью изучения взаимосвязи сорбционных свойств эритроцитов в отношении тималина и показателей иммунного статуса было проведено иммунологическое обследование 38 больных с различными травмами опорно-двигательного аппарата, осложненными гнойным воспалением костной и и окружающей тканей.

Средний показатель сорбционной активности эритроцитов у обследованных составил 34,2±4,2 % (27,9-46,5 %). Установлены достоверные обратно пропорциональные взаимосвязи между уровнем сорбционной активности эритроцитов по отношению к тималину и такими показателями иммунного статуса, как содержание Е-РОК т.р., концентрация иммуноглобулина М, фагоцитарная активность нейтрофилов (рис. 2).

2 1.6 1.2 0.8 0.4

Е-РОК т.р. "III»

1И> 8» 6» 49 29 н—

2 1.6 1Л 0.8 0.4

АФ

г/л

ИС у лад е низкой САЭ

' О< Уролио» показателей ЙС у дня с высох ой САЭ

Рис.2. Графическое изображение взаимосвязи САЭ к тималину и достоверных показателей ИС у больных с осложненными травмами опорно-двигательного аппарата.

Таким образом, показано наличие достоверных обратно пропорциональных взаимосвязей между уровнем сорбционной активностью эритроцитов в отношении тималина и некоторыми показателями иммунного статуса в условиях нарушения деятельности иммунной системы. На основании этого можно полагать, что способность эритроцитов сорбировать тимопептиды и воздействовать в таком комплексе на иммунологическую реактивность организма играет определенную роль в контроле этих реакций и ограничении их в физиологических рамках, обеспечивающих адекватность иммунного ответа величине антигенной нагрузки на организм.

Способ коррекции защитных реакций иммунной системы с использованием аутологичных эритроцитов. нагруженных глюкокортикоидами и тимопептидами.

Вышепредставленные результаты собственных исследований показали, что эритроциты периферической крови человека способны сорбировать такие биологически активные вещества, как тималин, обладающий иммуностимулирующими свойствами, и преднизолон, применяемый в качестве иммунодепрессанта.

Поэтому нами были проведены исследования, направленные на изучение воздействия эритроцитов, обработанных указанными препаратами и рядом других, на бласттрансформацию аутологичных лимфоцитов.

Эритроциты больных (36 человек) инкубировали в течение 30 минут при 37°С с равным объемом растворов различных биологически активных веществ в следующих концентрациях: преднизолон - 0,1 мг/мл; тималин - 1 мг/мл; трентал - 20 мг/мл; гепарин - 5 ЕД/мл; инсулин - 0,4 ЕД/мл. В качестве контроля использовали интактные пробы (эритроциты, не обработанные БАВ).

Проведенные в этом направления исследования, показали, что аутологичные эритроциты, обработанные преднизолоном, оказывали преимущественно иммуносупрессивное воздействие в культуре лимфоцитов. Аутологичные эритроциты, несущие тималин, оказывали выраженное иммуностимулирующее воздействие в культуре

Предик- Тималин Гепарин Тренгал зол он

Рис.3. Изменение показателей РБТЛ при воздействии эритроцитов, обработанных различными БАВ.

лимфоцитов. Аутоэритроциты, обработанные гепарином и тренталом, оказывали иммуносупрессивное воздействие на процессы лимфопролиферации (рис. 3). Разнонаправленное воздействие на лимфопролиферацию in vitro оказывали аутологичные эритроциты, обработанные инсулином.

Таким образом, в реакции бласттрансформации лимфоцитов была установлена способность эритроцитов, несущих на своей поверхности различные по биологической активности вещества, оказывать выраженное воздействие на функциональную активность аутологичных лимфоцитов. Направленность этого воздействия определяется иммуностимулирующими или иммуносупрессивными свойствами сорбированного вещества.

Эти данные подтверждают способность эритроцитов периферической крови человека сорбировать биологически активные вещества и вероятную роль этого процесса в регуляции иммунологической реактивности организма.

Установленная с помощью проведенных исследований способность эритроцитов сорбировать тималин и преднизолон и воздействовать в таком виде на лимфопролиферативные процессы, послужили основанием для разработки способа иммунотерапии с использованием аутологичных эритроцитов, нагруженных вышеназванными преператами.

При осуществлении указанного способа у больных забирали в стерильных условиях 20 мл крови из локтевой вены. Эритроциты отделяли от плазмы центрифугированием и отмывали равным объемом стерильного физиологического раствора. Далее к эритроцитам добавляли тималин или преднизолон. Взвесь инкубировали при 37°С в течение 1 часа, однократно отмывали от избытка плазмы и вводили больному.

Экстракорпоральная иммунокоррекция с применением тималина была проведена у 9 больных с Т-зависимыми иммунодефицитными состояниями, характеризовавшимися Т-лимфопенией, не поддающейся лечению с помощью традиционных фармакологических средств. Аналогичная иммунокоррекция с применением преднизолона была осуществлена у 6 больных с аутоиммунными заболеваниями (сахарный диабет 1 типа, ревматоидный артрит),

характеризовавшимися лейкоцитозом, лимфоцитозом и другими признаками гиперактивации иммуноцитов.

Непосредственно перед проведением указанной коррекции и через 1-2 недели после ее окончания у всех больных проводили оценку иммунного статуса.

Удалось выявить направленность и интенсивность изменений иммунного статуса в процессе экстракорпоральной иммунокоррекции. Так, проведение указанной коррекции с применением тималина приводило к достоверному увеличению числа лимфоцитов, Т-лимфоцитов. Одновременно наблюдалось снижение концентрации циркулирующих иммунных комплексов и увеличение фагоцитарной активности нейтрофилов. Следовательно, использование аутологичных эритроцитов в качестве носителей тималина в лечении Т-зависимых иммунодефицитов позволяло добиться корригирующего результата в тех случаях, когда применение фармакологических средств, в том числе тималина, традиционным способом не давало эффекта.

У больных с аутоиммунными заболеваниями в результате экстракорпоральной иммунокоррекции с применением преднизолона достоверно снижалось число лейкоцитов, лимфоцитов и Т-лимфоцитов, умеренно снижалась фагоцитарная активность нейтрофилов. Таким образом, использование аутологичных эритроцитов, несущих преднизолон, уменьшало состояние гиперактивации иммунной системы, лежащей в основе аутоиммунных заболеваний.

Клинические испытания предлагаемого способа экстракорпоральной иммунокоррекции показали наличие положительных результатов в тех случаях, когда применение фармакологичеких препаратов обычным способом было малоэффективным. При этом достижение терапевтического эффекта добивались путем использования тималина и преднизолона в малых дозах и с уменьшенным числом инфузий.

Выводы

1. Зрелые эритроциты обладают способностью сорбировать на своей поверхности глюкокортикоидные гормоны и гормоноподобные вещества вилочковой железы, а уровень сорбции эритроцитами

глюкокортикоидов и тимопептидов находится в прямо пропорциональной зависимости от величины концентрации этих веществ в инкубационной среде.

2. Интенсивность сорбционной активности эритроцитов о отношении преднизолона и тималина достоверно взаимосвязана с показателями иммунного статуса организма, характеризующими процессы Т-лимфопролиферации и иммунорегуляции.

3. Различные биологически активные вещества, будучи сорбированные на эритроцитах in vitro и введенные в таком виде в культуру аутологичных лимфоцитов, оказывают выраженное воздействие на бласттрансформацию последних, направленность которого определяется характером иммунорегуляторных свойств этих веществ.

4. Введение больным аутологичных эритроцитов, нагруженных тималином in vitro, оказывает более выраженное иммунокорригирующее воздействие у больных с иммунодефицитными состояниями в сравнении с действием этого препарата, введенного обычным способом.

5.Введение больным аутологичных эритроцитов, нагруженных преднизолоном in vitro, оказывает выраженное иммунокорригирующее воздействие у больных с состояниями гиперактивации иммунной системы.

Практические рекомендации

1. Рекомендуется использование в клинической практике способа лечения иммунозависимых заболеваний с помощью экстракорпоральной иммунокоррекции, в основе которой лежит реинфузия эритроцитов, нагруженных преднизолоном или тималином.

2. Рекомендуется использование показателей сорбционной активности эритроцитов в отношении преднизолона и тималина в комплексе клинического иммунологического обследования с целью

дополнительного выявления нарушений механизмов иммунорегуляции в организме.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. О перспективах развития экстракорпоральной иммунокоррекции с использованием аутологичных клеток периферической крови //Актуальные проблемы эксперим. и клинич. медицины: Сб. тез. докл. -Иркутск, 1994.- С.100-104 (соавт. Кирдей Е.Г., Беломестнова Е.Ю.).

2. Особенности иммунного статуса людей, проживающих в условиях природной магнитной аномалии //Восточно-Сибирский журнал инфекционной патологии.-1995,№1.-С.14-17 (соавт. Кирдей Е.Г., Хлыстов В.В., Рубашкина Э.В., Кирдей Л.Е.).

3. Характер и условия сорбции эритроцитами биологически активных веществ //Сибирский медицинский журнал.-1995,№2.- С.23-25 (соавт. Кирдей Е.Г.).

4. Роль эритроцитов в регуляции и реализации иммунного ответа //Сибирский медицинский журнал.-1995, №3. - С.5-8 (соавт.Кирдей Е.Г.).

5. Экстракорпоральная иммунокоррекция в лечении иммунозависимых заболеваний детского возраста //Сб.научных трудов педиатрического факультета. -Иркутск,1995 (соавт. Кирдей Е.Г., Кирдей Л.Е.).

6. Erythrocytes adsorbility to biological active substance and use this pfenomen in pharmacotherapy //The Tried International Symposium of the Japan-Russia Medical Exchange Foundation and the Japan-Russia Medical Collaborative Organization on the Methods and Processes oi Japan-Russia Medical Exchange Program and Abstracts.-Osaka, 1995. -P.61 (соавт. Майборода A.A., Кирдей Е.Г., Беломестнова Е.Ю., Кирдей Л.Е.).