Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Закономерности коррекции вторичных иммунодефицитов иммуномодуляторами (на примере анатоксина стафилококкового очищенного и ликопида)

На правах рукописи

СЕМЕНОВА Ирина Борисовна

Закономерности коррекции вторичных иммунодефицитов иммуномодуляторами (на примере анатоксина стафилококкового очищенного

и ликопида)

14.00.36 — аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва - 2004

Работа выполнена в ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН

Научный консультант:

Академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор А.А. Воробьев

Официальные оппоненты:

- Академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор К.П. Кашкин

- Доктор медицинских наук, профессор А.А. Ярилин

- Доктор медицинских наук А.П. Суслов

Ведущая организация: ГУ НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича МЗ РФ

Защита состоится " О " июня 2004 г. в 11 час. на заседании диссертационного совета Д 001.007.01 при ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН (123098, г. Москва, ул. Гамалеи, 18)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН

Автореферат разослан

(С

апреля 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, проф<

Е.В.Русакова

Общая характеристика работы

Актуальность работы. В последние годы стало очевидным, что способность иммунной системы защищать организм от генетически чужеродной информации может быть подавлена под влиянием экзогенных факторов (В.Г. Галактионов, 1998; P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, 1998; P.M. Хаитов и др., 2000; А.А. Ярилин, 1999; A.Roit, 2000). Проявления этой патологии описывают как вторичные иммунодефициты.

Вторичные иммунодефициты (ВИД) - это нарушения функции иммунной системы, возникающие как у детей в постнатальном периоде, так и у взрослых под влиянием разнообразных внешних и внутренних факторов. ВИД обычно обратимы, они исчезают после прекращения действия пускового агента или причины их вызывающей, а также при применении иммунотропных препаратов.

Формирование ВИД описано при всех инфекционных болезнях, возбудителями которых являются бактерии (H.Finger, C.H.W., von Konig, 1987); вирусы (W. Zschiesche et al., 1987; B.B. Покровский, 1996) и паразиты, включая гельминты (И.Д. Дрынов и др., 1998; M.J.Doenhoff, 1987; A.Kalinkovich et al., 1998); при контакте с продуктами хозяйственной деятельности человека (P.M. Хаитов и др., 1995); при чрезмерных физических нагрузках и стрессе (Б.Б. Першин и др., 2003; B.Leonard, K.Miller, 1995; E.V.Yang, R. Glasser 2002); старении (R.A. Miller, 1994); количественных и качественных нарушениях питания (ВА. Bowman, R.M.Russel, 2001), разнообразных медицинских вмешательствах, прежде всего при хирургических операциях (Б. В. Пинегин и др., 1998; M.Mendozasaguon et al., 1998), применении антибиотиков, цитостатиков, рентгенотерапии (Д.В. Стефани, Ю.Е.Вельтищев, 1996) и т.д.

ВИД рассматривают как важный элемент патогенеза хронических воспалительных заболеваний разной этиологии и разной локализации (Р.М.Хаитов, Б.В. Пинегин, 1999, 2000). С ВИД связывают повышенную чувствительность к инфекциям детей

(Д.В.Стефани, Ю.Е.Вельтищев, 1996); пациентов хирургических стационаров (Б.В.Пинегин и др., 1998); при нарушениях питания (C.J.Field et al., 2003); чрезмерных физических и эмоциональных нагрузках (Б.Б.Першин и др., 2003; M.L.Laudeslanger, 1987). Недавно появились сообщения, которые свидетельствуют о том, что в организме с ВИД активируется мутагенез вирусов и происходит селекция штаммов с повышенной вирулентностью (М.А.Веск, 2001).

Для устранения ВИД используют особый класс лекарств -иммунотропные лекарственные средства (ИТЛС), которые нормализуют (корригируют) измененные реакции иммунной системы (J.W.Hadden, 1996; А.А.Воробьев, 2002; Р.И.Сепиашвили, 2001; Р.М.Хаитов, Б.В.Пинегин, 2000, 2003). В 2002 году создание технологии иммунокоррекции было отнесено к приоритетным направлениям развития науки, технологий и техники Российской Федерации.

Число иммуномодуляторов, используемых в практике или находящихся на разных этапах апробации, непрерывно увеличивается и в 2002 году приблизилось к 1000 (А.А.Воробьев, 2002). Экспериментальному изучению этих препаратов посвящено большое число работ, в которых основное внимание сосредоточено на характеристике исследуемых веществ по способности модулировать иммунный ответ у интактных животных. Такой подход закреплен в официальных методических указаниях по испытанию новых иммуномодулирующих лекарственных средств (Р.М.Хаитов и др., 1999, 2002).

Очевидно, что использование иммунокомпетентных животных не дает полного представления о главном свойстве иммуномодулятора — его способности нормализовать сформировавшийся ВИД. Поэтому мы предложили включить в существующую схему оценки ИТЛС использование животных с индуцированным ВИД, применяя для формирования временной иммуной супрессии факторы, с которыми достаточно часто сталкивается современный человек: вирусы разных таксономических групп (в нашем

случае представители Picorna- и Bunyaviridae), различные варианты бактериальных вакцин (корпускулярная и бесклеточная коклюшные вакцины, АКДС вакцина) и распространенные виды стресса (гипокинезии, информационный).

В опытах на мышах с ВИД исследовали корригирующую активность двух иммуномодуляторов микробного происхождения 2 и 3 поколения -соответственно анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) и ЛИКОПИДА. АСО сочетает иммуномодулирующую активность со способностью индуцировать протективный антистафилококковый иммунитет (И.Б.Семенова, А.К.Акатов, 1989, 1991). ЛИКОПИД обладает только выраженным нммуномодулирующим действием (В.Т.Иванов и др., 1996; Б.В.Пинегин и др., 1997; Р.М.Хаитов, Б.В.Пинегин, 2003).

В начале 90-ых годов, когда мы приступили к работе, такие исследования еще не проводили.

Цель работы: изучить общие закономерности корригирующего действия двух иммуномодуляторов микробного происхождения —анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) и ЛИКОПИДА в экспериментах на животных с ВИД, индуцированными разными факторами. Сопоставить данные экспериментов с результатами применения этих препаратов в клинике.

Задачи исследования:

1. Исследовать способность АСО и ЛИКОПИДА нормализовать иммунный статус у животных с ВИД, вызванными действием разных по своей природе факторами: вирусами, бактериальными вакцинами, стрессом.

2. Характеризовать влияние иммуномодуляторов на временные дефекты гуморального, клеточного и антиинфекционного

иммунитета в экспериментальных условиях при разных схемах применения препаратов.

3. Оценить вероятность развития нежелательных иммунологических эффектов при применении АСО и ЛИКОПИДА.

4. Характеризовать влияние АСО на антигенпредставляющую функцию макрофагов, пролиферацию лимфоцитов и. синтез цитокинов у иммунокомпетентных мышей.

5. Изучить влияние иммуномодулятора АСО на формирование

протективного иммунитета против коклюша при введении корпускулярной коклюшной вакцины лабораторным животным.

6. Исследовать иммунологические реакции, развивающиеся при комплексной противовоспалительной терапии с включением АСО у женщин с острыми воспалительными заболеваниями придатков матки, ассоциированными со смешанными бактериальными или бактериально-вирусными инфекциями.

7. Разработать в эксперименте оптимальные схемы применения АСО и ЛИКОПИДА, снижающие риск развития нежелательных иммунологических эффектов.

Научная новизна Впервые в условиях эксперимента показано, что такие имуномодуляторы микробного происхождения как АСО и полусинтетический препарат ЛИКОПИД, различающиеся по ряду признаков (способу получения, химическому составу, молекулярной массе, наличию специфической протективной активности), демонстрируют общие закономерности действия при коррекции ВИД.

Продемонстрирована способность АСО и ЛИКОПИДА корригировать у лабораторных животных ВИД, формирование которых связано с действием на организм вирусов и стресса, а в случае АСО и нескольких вариантов коклюшной вакцины.

- Установлено, что изученные иммуномодуляторы восстанавливают подавленный гуморальный (АСО, ЛИКОПИД) и клеточный (АСО) иммунный ответ па неродственные антигены, а также исправляют супрессированную резистентность к гетерологичному вирусу (АСО, ЛИКОПИД).

- Доказано, что результат иммунокорригирующего действия АСО и ЛИКОПИДА зависит от дозы препаратов, кратности и схем их введения, а также от генотипа экспериментальных животных (мышей).

- Описана суммация in vivo иммуномодулирующих сигналов субпороговых доз иммунотропных препаратов и вируса, что приводит к развитию выраженной иммуносупресии.

Выявлены нежелательные иммунологические эффекты при применении исследованых иммуномодуляторов, которые проявляются как усугубление существующей вирусиндуцированной иммуносупресии (АСО) или как активация скрытой иммуносупресии (АСО, ЛИКОПИД).

- В экспериментах на мышах показано, что АСО модулирует (подавляет, усиливает) антигенпредставляющую функцию макрофагов, пролиферацию лимфоцитов и синтез некоторых цитокинов.

- АСО в рамках комплексной противовоспалительной терапии острых воспалительных заболеваний придатков матки, ассоциированных с разными комбинациями условнопатогенных и патогенных бактерий, исправляет различные иммунологические нарушения: нормализует число Т-лимфоцитов, их функциональную активность; усиливает фагоциторную активность нейтрофилов крови; повышает уровень IgG. При хламидийно-вирусной инфекции под влиянием анатоксина к показателям нормы возвращается количество лимфоцитов с маркерами CD3+; CD4+; CD8+; CD 19+.

- Выявлена прямая корреляция результатов испытания АСО и ЛИКОПИДА в опытах на животных с ВИД и данных, полученных при применении этих препаратов в клинике, что дает основание рекомендовать инбредных мышей с индуцированной иммуносупрессией в качестве модели

для изучения иммунокорригирующеи активности иммунотропных препаратов.

Практическая значимость

Разработан метод прямой оценки корригирующей активности иммунотропных препаратов в опытах на мышах, который базируется на использовании животных с индуцированным ВИД. Предложены три модели ВИД для оценки корригирующего действия иммуномодуляторов: ВИД при вирусной инфекции; ВИД при вакцинации; ВИД при стрессе. Использование перечисленных моделей позволяет исследовать влияние иммунотропных препаратов на временные дефекты гуморального и клеточного иммунитета, а также на сниженную резистентность к гетерологичной инфекции.

Изучена возможность развития нежелательных иммунологических эффектов при использовании иммуномодуляторов АСО и ЛИКОПИДА. Разработаны схемы применения этих препаратов, исключающие нежелательное действие.

Доказана способность АСО нормализовать временные нарушения гуморального и клеточного иммунитета у женщин с острыми воспалительными заболеваниями придатков матки, ассоциированными с разными комбинациями бактерий или бактерий и вирусов.

Материалы диссертации были использованы при составлении методических рекомендаций:

"Использование анатоксина стафилококкового очищенного в комплексе лечебных мероприятий при воспалительных заболеваниях придатков матки".

"Иммунокоррекция в профилактике послеоперационных инфекционных осложнений у гинекологических больных."

Утверждены МЗ РФ, Москва, 1994.

Подана заявка на изобретение «Способ оценки защитных свойств иммуномодулирующих препаратов» (приоритет 24.10.2003., №2003131*194).

Апробация материалов диссертации.

Основные результаты исследований представлены и обсуждены на рабочем совещании "Иммуномодуляторы природного происхождения" (Владивосток, 1990); 1 съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992); International conference on immunorehabilitation (Dagomys, 1992); International symposium "100-years of virology" (St.-Peterburg, 1992); Республиканской конференции "Иммунология репродукции" (Иваново, 1993), заседании ученого совета НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН (М., 1993); 11th interdisciplinary world congress on antimicrobial and anticancer drugs" (Geneva, 1994); International conference "Sosiety, stress and health" (M.,1995); 3-ем национальном конгрессе "Человек и лекарство" (М., 1996); International conference on modern vaccinology (Ufa, 1996); 1, 2, 4 и 5 национальных конгрессах Российской ассоциации аллегологов и клинических иммунологов (М., 1997, 1998, 2001, 2002); 7 и 8 съездах Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (М, 1997, 2002), на заседании Московского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (М., 1998); 2-й научно-практической конференции "Цитокины в клинической практике" (Владивосток, 1999); Апробация диссертации состоялась 2.03.04. г. на научной конференции отделов иммунологии и бактериальных токсинов ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН.

Публикации. Основные результаты по теме диссертации отражены в 49 работах, в том числе 25 статьях, а также в 2 методических рекомендациях и одной заявке на изобретение.

Объем и структура работы. Диссертация изложена страницах

машинописи и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, 4 глав результатов собственных исследований, заключения и выводов. Работа иллюстрирована 38 таблицами и 23 рисунками. Указатель литературы содержит 265 источников, из них 136 отечественных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Иммуномодуляторы. Исследовали иммунокорригирующую активность двух разрешенных для применения в практике препаратов - анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) и ЛИКОПИДА. В работе использовали ЛИКОПИД, изготовленный фирмой "Пептек" (Москва) и АСО, произведенный предприятием по производству бактерийных препаратов института эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи РАМН. Характеристика препаратов дана в табл. 1.

Экспериментальные модели вторичных иммунодефицитов (ВИД). Иммунокорригирующее действие АСО и ЛИКОПИДА оценивали по их способности предупреждать развитие и нормализовать ВИД, возникающие

Таблица 1

Иммуномодуляторы микробного происхождения, использованные для коррекции ВИД в эксперименте

Анатоксин стафилококковый очищенный (АСО)

Продукт

жизнедеятельности микроба

Анаформа альфа-токсина S.aureus Комплекс антигенов Создает протективный иммунитет (ПИ)

ЛИКОПИД

Полусинтетический препарат

И-ацетилглю козами н -Ы-ацетилмурамил - Ь-аланин-Е)-изоглютамин Повторяющийся фрагмент пептидогликана всех известных бактерий Не создает ПИ

при действии на мышей вирусов, бактериальных вакцин и стресса. Для формирования ВИД использовали имеющиеся в литературе рекомендации и отработанные нами модели (табл.2).

Лабораторные животные. Опыты проводили на мышах линий СВА, BALB/c, DBA/2, и гибридах первого поколения Р|(СВА/С57В1/6).

Использовали животных с массой тела 18-20 г (самцы). Мышей получали из питомника "Столбовая" и содержали в стандартных условиях.

Индукторы ВИД

Вирусы. Вирус Тахиня (семейство Bunyaviridae, висцеротропный штамм PV) получен из коллекции института вирусологии словацкой академии наук (Братислава, Словакия). Вводили внутрибрюшинно в дозах 102,103И 10 5 ЛД5о/0,Змл.. Вирус Коксаки ВЗ (семейство Picornaviridae). Получен из музея энтеровирусов института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН. Применяли в дозах 104и 105 ТЦД50, которые вводили внутривенно или внутрибрюшинно.

Таблица 2

Использованные модели индуцированного ВИД

Модель Индуктор вид Подавленная функция иммунитета Авторы

Гуморального Клеточного Резистентности к гетероло-гичному вирусу

Вирусная инфекция Вирус Тахиня + + В.В.Варгин и др., 1989

Вирус Коксаки ВЗ + + М.ВепсИпеШ е1 а1„ 1975

Вакцинация ККВ* + + Н.А.Прилепин и др., 1980

БКВ** + + И.Б.Семенова и др., 1997

АКДС + И.Б.Семенова и др., 1994

Стресс Гипокинезия + С.В.Ожерелков и др., 1986

Информация + + С.В.Ожерелков и др., 1994

* ККВ — корпускулярная коклюшная вакцина

** БКВ - бесклеточная коклюшная вакцина

Вакцины. Корпускулярная коклюшная вакцина и АКДС-вакцина были изготовлены на предприятии "Биомед" им.И.И.Мечникова (Московская

область). Экспериментальные образцы бес клеточной коклюшной вакцины предоставила Н.С.Захарова (Институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова РАМН)#

Стресс. Стресс гипокинезии. Стресс-фактор действовал на мышей по 12 часов в сутки в течение 10 дней. Информационный стресс. Стресс-фактором явился-поиск пищи в многоканальном лабиринтном пространстве. Сеанс длился 1 час, повторялся 7 раз с интервалом 24 часа.

Схемы экспериментов по оценке иммунокорригирующего действия АСО и ЛИКОПИДА. При. работе с животными, у которых ВИД формировался под влиянием вирусов или вакцин, иммунотропные вещества вводили однократно до ("минус дни"), вместе ("нулевой день") или после ("плюс дни") индуктора иммуносупрессии.

Для характеристики способности АСО или ЛИКОПИДА предупреждать развитие ВИД под влиянием стресса гипокинезии или информационного стресса препараты применяли соответственно два или три раза в период формирования стрессорного состояния.

АСО использовали в дозах 0,15; 1,5; 15 единиц связывания (ЕС) на мышь; ЛИКОПИД - в дозах 1 и 10 мкг на особь.

Характеристика иммунологического ответа животных при иммунокоррекции. У подопытных мышей, исследовали гуморальный и клеточный ответ на неродственные антигены и изучали резистентность к гетерологичному патогену - вирусу Лангат.

В качестве тест-антигенов при оценке гуморального иммунитета использовали эритроциты барана (ЭБ) и, в некоторых экспериментах, вирус полиомиелита типа 1, штамм Магоней.

Число IgM антителообразующих клеток (АОК) к ЭБ в суспензии мышиных спленоцитов определяли по N.K. Jeme и A.A.Nordin. Нейтрализующую активность сывороток исследовали в реакции

* Выражаем благодарность авторам бесклеточной вакцины за предоставленную возможность испытать этот препарат в наших экспериментах.

нейтрализации методом бляшек в зараженной культуре почек зеленой мартышки.

Клеточный иммунитет характеризовали с помощью реакции гиперчувствительности замедленного типа к ЭБ (ГЗТ).

Вирус Лангат вводили внутрибрюшинно в дозе 104 ЛДЫО.Змл. Результаты эксперимента выражали показателями летальности, представленными в %, или значениями средней продолжительности жизни (СПЖ), которые определяли по формуле (В.А.Пшеничнов и др. 1974):

- продолжительность жизни (в днях) каждого животного в группе из N животных, зараженных данной дозой. Оставшимся живыми мышам приписывали условное время жизни, равное Полученная из уравнения величина Т является средней гармонической величиной времени жизни для данной группы и включает в себя информацию о всех особях.

Пролиферативный ответ спленоцитов оценивали по включению тимидина. В качестве митогенов использовали КонА (Pharmacia) и ЛПС E.coli штамм 055:135 (Sigma). Включение изотопов измеряли с помощью сцинтилляционного бета счетчика (Intertecknique, Франция). Результаты опытов выражали числом импульсов в минуту.

Синтез цитокинов спленоцитами мышей. Определяли продукцию ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4 и ИЛ-6 клетками селезенки мышей после взаимодействия этих клеток с АСО in vivo или in vitro. Активность ИЛ-1 и ИЛ-6 исследовали в культуре тимоцитов мышей СЗН H/J. Для выявления ИЛ-2 и ИЛ-4 использовали КонА бластную культуру спленоцитов.

Оценка антигенпредставляющей функции перитонеальных макрофагов мышей. Антигенпредъявляющую функцию исследовали in vivo методом адоптивного переноса. Мышам-донорам внутрибрюшинно

инокулировали 2 мл тиогликолевой среды. Через 3 дня животным вводили 1,5 ЕС АСО, через 2 часа или через 24 часа - ЭБ в дозе 2x10^ спустя 3 часа после инокуляции тест-антигена извлекали перитонеальный экссудат, выделяли из него прилипающие к пластиковой поверхности клетки и вводили их сингенным реципиентам в дозе 60-65 тыс. клеток на особь. Через 4 дня у реципиентов определяли число АОК к ЭБ.

Бактериологическое и иммунологическое обследование больных с диагнозом острое воспалительное заболевание придатков матки (ОВЗПМ). Бактериологические и иммунологические исследования проводили в соответствии с рекомендациями, изложенными в "Клинической лабораторной аналитике", т. 2 и 4, под ред.В.В.Меньшикова (2003); в "Клинической иммунологии" под ред.А.В.Караулова (1999) и в "Руководстве по иммунологическим и аллергологическим методам в гигиенических исследованиях" (1993).

Под наблюдением находилось 175 пациенток от 17 до 45 лет. Для выяснения этиологии ОВЗПМ бактериологическими методами исследовали экссудат брюшной полости или определяли динамику титра антител к конкретному патогену при 2-кратном серологическом обследовании. У 130 больных и 20 здоровых женщин был определен иммунологический статус. У 50 пациенток иммунологический статус исследован в динамике в процессе комплексного противовоспалительного лечения с включением АСО.

У обследуемых женщин определяли количества В-лимфоцитов и Т-лимфоцитов, их пролиферативную активность; уровень IgA, IgM, IgG в крови и IgA в слизистой шейки матки; фагоцитарную активность нейтрофилов, уровень лизоцима. Маркеры субпопуляций лимфоцитов CD3+, CD4+, CD8+, CD 16+, CD 19+ выявляли с помощью моноклональных антител, используя проточный цитометр "Fascan" (Becton, Diskinson). Под наблюдением находилась группа больных из 19 человек. Анализу подвергались все иммунологические показатели больного до и после лечения.

Статистическая обработка. Использовали компьютерные программы Statgraf и Prism 2.01., а также критерий t Стьюдента-Фишера согласно рекомендациям И.П.Ашмарина и А.А.Воробьева (1962). Среднюю продолжительность жизни вычисляли, используя известную формулу (В.А.Пшеничнов и др., 1974).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

В основу работы был положен новый экспериментальный подход, который мы предложили для оценки иммунокорригирующих свойств иммуномодуляторов. Подход базируется на использовании лабораторных животных с ВИД, сформировавшихся под влиянием факторов, с которыми достаточно часто сталкивается современный человек (вирусы, вакцины, стресс).

Анализ данных, характеризующих действие АСО и ЛИКОПИДА в опытах на линейных мышах с ВИД, позволяет констатировать следующее.

Иммуномодуляторы микробного происхождения АСО и ЛИКОПИД обладают способностью восстанавливать (нормализовать) дефекты иммунного ответа при вторичных иммунодефицитах, развивающиеся у мышей при вирусной инфекции, на фоне применения бактериальных вакцин и действии стресса. Один и тот же иммуномодулятор способен нормализовать супрессию иммунного ответа, вызванными разными по своей природе индукторами ВИД. Испытанные иммунотропные лекарственные средства корригировали супрессию как гуморального (АСО, ЛИКОПИД), так и клеточного иммунного ответа (АСО) и восстанавливали сниженную резистентность животных к гетерологичному вирусу Лангат, возникающую при ВИД, индуцированном информационным стрессом или тахинявирусной инфекцией.

На рис. 1 приведены данные, демонстрирующие иммунокорригирующую активность АСО и ЛИКОПИДА в опытах на мышах

с ВИД. Оба препарата нормализовали подавленный гуморальный ответ на ЭБ у животных, зараженных вирусами из семейства Bunyaviridae (Тахиня) или Рис. 1.

Коррекция с помощью АСО или ЛИКОПИДА дефекта гуморального ответа при ВИД, индуцированных вирусной инфекцией, вакцинацией и экспериментальным стрессом.

Индуктор ВИД: 1 - вирус Тахиня; 2 - вирус Коксаки ВЗ; 3 - АКДС вакцина; 4 - корпускулярная коклюшная вакцина; 5 - стресс.

Picornaviridae (Коксаки ВЗ). Эти препараты предупреждали развитие ВИД при действии на организм информационного стресса и стресса гипокинезии. АСО корригировал иммуносупрессию, ассоциированную с применением корпускулярной коклюшной вакцины и АКДС-вакцины.

При экспериментах с мышами, у которых иммуносупрессия формировалась после заражения вирусом Коксаки ВЗ, установлено, что

анатоксин нормализует гуморальный ответ инфицированных животных, как на соматические антигены (ЭБ), так и на живой вирус полиомиелита типа 1. На фоне применения АСО уровень вируснейтрализующих антител достигал показателей, определяемых у контрольных животных.

Согласно нашим данным при стрессе отвечаемость животных на ЭБ снижалась на 58-76 %. Применение иммуномодуляторов в период действия стресс-факторов позволило уменьшить супрессирующий эффект. Так, на фоне введения АСО число АОК в селезенке стрессированных животных возрастало в 2-2,5 раза по сравнению с не лечеными особями. При использовании ЛИКОПИДА дефект гуморального ответа восстанавливался на 70%.

Показано, что способность ЛИКОПИДА и АСО исправлять супрессию гуморального ответа проявляется в широком диапазоне доз. Продемонстрировано иммунокорригирующее действие 1 и 10 мкг ЛИКОПИДА. Показано, что 0,15; 1,5 и 15 ЕС АСО исправляют ВИД у мышей СВА, зараженных вирусом Тахиня, если препарат вводят в индуктивной (-5; -3 дни) или продуктивной фазе иммунного ответа (0; +1; +3 дни). День введения вируса принимали за нулевой.

Влияние иммуномодулятора на временную супрессию клеточного иммунитета на примере АСО исследовали в опытах с ВИД, индуцированными коксакивирусной инфекцией и коклюшными вакцинами (корпускулярной - ККВ и бесклеточной - БКВ). Рис2 иллюстрирует коррекцию с помощью АСО дефектов клеточного иммунного ответа при ВИД, вызванных вирусной инфекцией и вакцинацией у мышей линии BALB/c. Кроме того, было показано, что испытуемый препарат нормализует дефекты клеточного иммунного ответа, формирующиеся при инфекции вирусом Коксаки ВЗ у мышей линии DBA/2 и СВА.

Рис. 2.

Коррекция с помощью АСО дефекта клеточного иммунного ответа при ВИД, вызванных вирусной инфекцией и вакцинацией.

В специальном разделе исследований было изучено модулирующее действие на иммунокомпетентных животных разных вариантов коклюшной вакцины. Опыты проводили с производственными сериями АКДС вакцины и с экспериментальными образцами бесклеточной коклюшной вакцины и АКДСб, содержащей бесклеточный коклюшный компонент.

Супрессирующее действие ККВ как на гуморальное, так и на клеточное звенья иммунного ответа показано ранее Н.А.Прилепиным (1980). Традиционная АКДС-вакцина вызывала супрессию гуморального иммунного ответа, но не влияла на ГЗТ к ЭБ. Иными словами было установлено "расщепление" иммуномодулирующего эффекта. Нами продемонстрировано также, что БКВ индуцирует кратковременное (24 часа) снижение гуморального ответа на ЭБ. Проявление иммуномодулирующего действия на развитие клеточного иммунного ответа на неродственный антиген зависело

от дозы БКВ: при применении 1 ИД препарата наблюдали усиление развития ГЗТ к ЭБ, а при введении 10 ИД БКВ отмечали подавление ГЗТ к ЭБ.

АКДСб вакцина не модулировала как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ на гетерологичный антиген.

Иммуномодулятор АСО исправляет дефект и гуморального, и клеточного ответа на ЭБ у мышей, иммунизированных разными вариантами коклюшной вакцины. При его применении нормализуются (полностью или частично) подавленное формирование АОК к ЭБ у животных, которым вводили ККВ, БКВ или АКДС-вакцину. Анатоксин корригирует супрессию клеточного иммунитета, вызванную ККВ. Этот же препарат отменяет модуляцию ГЗТ, возникающую при введении разных доз БКВ (усиление клеточного ответа при применении 1 и подавление при использовании 10 ИД).

При работе с коклюшными вакцинами выявлен факт, заслуживающий внимания при конструировании новых иммунопрофилактических препаратов. Дозы иммуномодулятора АСО, которые исправляют иммуносупрессию, индуцированную ККВ, не препятствуют формированию полноценного противококлюшного иммунитета. При сочетании малоиммуногенной дозы ККВ с иммунокорригирующей дозой АСО происходит усиление протективного иммунитета против В.рвгШжя.

Согласно данным М.В.Брициной и др., (2000) ЛИКОПИД способен потенцировать активность неэффективных доз БКВ. Имеются сообщения о том, что и другие иммуномодуляторы микробного происхождения усиливают подавленный иммунитет против вируса бешенства или вируса гепатита В Megid at а1., 2002; E.Sonmez, 2002).

Вторичные иммунодефициты у человека и животных рассматривают как факторы, способствующие развитию острых вторичных инфекций (В.И.Покровский, 1996; W.Zschiesche et а1., 1987). При определенных условиях вторичные патогены оказываются способными длительно персистировать в организме иммуносупрессированного хозяина.

Мы исследовали влияние иммунокорректоров АСО и ЛИКОПИДА на течение вторичной вирусной инфекции, вызванной вирусом Лангат, у мышей с иммуносупрессией, обусловленной вирусом Тахиня или информационным стрессом (Рис.3).

Кроме того, было изучено влияние АСО на развитие персистенции гетерологичного возбудителя в головном мозге иммуносупрессированных мышей. Вирус Лангат, использовавшийся в качестве гетерологичного патогена, вызывал у иммуносупрессированных животных смертельный исход в 2 раза больший по сравнению с иммунокомпетентными мышами (61 и 30 % соответственно). Введение иммунокорректоров АСО или ЛИКОПИДА снижало летальность у мышей с ВИД до показателей контроля (28-30%).

Рис. 3.

Восстановление с помощью АСО или ЛИКОПИДА подавленной при ВИД резистентности к гетерологичному патогену - вирусу Лангат (ВЛ)

Важно отметить, что ни первый, ни второй препарат не влияли на показатели летальности у мышей, получивших только вирус Лангат. Это дает основание полагать, что протективный эффект иммунокорректора при смешанной вирусной инфекции, когда первичный патоген индуцирует иммуносупрессию, обусловлен нормализацией ВИД, а не прямым действием на инфекционный агент.

Согласно нашим данным АСО в дозе 15 ЕС, которая нормализует вирусиндуцированную супрессию гуморального ответа, не препятствует развитию персистенции гетерологичного вируса Лангат в ЦНС мышей с ВИД, вызванным вирусом Тахиня. Частота выделения гетерологичного патогена из головного мозга иммунокомпетснтных животных равнялась 27%, а у особей с иммуносупрессией - 22%.

Результаты опытов с мышами, у которых иммуносупрессия была индуцирована вирусом Тахиня, полностью совпали с данными, полученными при работе со стрессированными животными. Активация лангатвирусной инфекции на фоне стресса описана С.В.Ожерелковым и др. (1986).

По нашим данным однократное введение анатоксина возвращает к уровню контроля показатели летальности и значения СПЖ у стрессированных мышей, зараженных вирусом Лангат.

Все описанные феномены проявления иммунокорригирующего действия иммуномодуляторов были зарегистрированы при определенных конкретных экспериментальных условиях. Иммунокорригирующая активность АСО и ЛИКОПИДА зависела от дозы и кратности введения препаратов, временных интервалов между их инокуляцией и воздействием или введением иммуносупрессирующего агента, а так же от генотипа экспериментальных животных (Рис.4).

Так, при ВИД, обусловленным тахинявирусной инфекцией, наиболее четко проявлялось превентивное иммунокорригирующее действие АСО при введении препарата за 5 и 3 дня до инокуляции животным вируса. В этих условиях все три дозы анатоксина - 0,15; 1,5 и 15 ЕС обеспечивали

коррекцию гуморального иммунного ответа на ЭБ. При введении АСО в -1 или нулевой дни была выявлена нелинейная зависимость иммунокорригирующего эффекта от дозы иммуномодулятора. При одновременной инокуляции индуктора ВИД (вируса Тахиня) и иммуномодулятора АСО дозы 0,15 и 15 ЕС исправляли дефект гуморального ответа. Доза 1,5 ЕС, введенная в этот срок оказалась неэффективной. А при введении АСО в -1 день опыта наблюдали корригирующий эффект только у Рис. 4.

Иммунокорригирующий эффект АСО при разных дозах и схемах применения мышам с ВИД, индуцированным вирусом Тахиня (ВТ)

О ЭБ

0 ЭБ + ВТ

#31 ЭБ + ВТ+15 ЕС АСО

•з -1 о

Дни введения АСО

. * Супрессия. Коррекция: ** - полная, *** - частичная

дозы АСО 1,5 ЕС, тогда как большая доза - 15 ЕС и меньшая доза - 0,15 ЕС на супрессию гуморального ответа к ЭБ не оказывала влияния. При введении анатоксина в более поздние сроки (+1; +3 дни) иммунокоррекцию обеспечивала только максимальная доза препарата АСО (15 ЕС).

Иммунокорригирующее действие ЛИКОПИДА на фоне ВИД, вызванном вирусом Тахиня, напротив проявлялось более полно при введении препарата в - 1 и 0 дни. В эти сроки эффективными были дозы ЛИКОПИДЛ 1 мкг и 10 мкг. При привентивном введении ЛИКОПИДА (в -3 день) иммунокорригирующая активность препарат проявлял в дозе 1 мкг, но не 10 мкг.

Эксперименты с использованием в качестве индуктора иммунодефицита вируса Коксаки ВЗ показали, что иммунокорригирующее действие иммуномодулятора АСО проявляется также по-разному в зависимости от срока введения препарата. При этом тоже была выявлена нелинейная зависимость иммунокоррекции от дозы препарата.

Корригирующее действие иммуномодулятора АСО у животных, получивших ККВ, четко проявлялось во все сроки введения препарата как в индуктивной (-1 день), так и продуктивной (0 и +1 дни) фазах иммунного ответа (доза 1,5 ЕС). Доза 15 ЕС была эффективной только в продуктивную фазу (+1 день). Эти данные получены на мышах линии СВА. Опыты на животных Fi(CBA/ C57BL/6) подтвердили способность дозы 1,5 ЕС анатоксина исправлять дефект гуморального иммунного ответа при введении АСО в -1 и 0 дни, тогда как применение этой же дозы препарата АСО в +1 день оказалось неэффективным.

Влияние АСО на дефект клеточного иммунного ответа, так же как и гуморального ответа зависело от дозы анатоксина, сроков его введения по отношению к индукторам ВИД, и от генотипа животных.

При формировании дефекта клеточного иммунного ответа, вызванного коксакивирусной инфекцией у мышей линии BALB/c, АСО в дозе 1,5 ЕС, введенный в -2 или 0 дни препятствовал развитию иммуносупрессии. Меньшая доза АСО (0,15 ЕС) в эти сроки инокуляции, а так же при введении в +1 день была неэффективной. Доза анатоксина 0,15, но не 1,5 ЕС в опытах на мышах линий DBA и СВА при введении в 0 день обладала корригирующим действием на клеточное звено иммунного ответа.

Коррекция дефекта клеточного иммунного ответа, вызванного ККВ, проявлялась только при одновременном введении индуктора ВИД и АСО мышам линии БЛЬБ/е. Эффективными были обе испытанные дозы препарата -0,15 и 1,5 ЕС.

Испытание иммуномодуляторов АСО и ЛИКОПИДА в широком диапазоне доз при различных схемах экспериментов по определению иммунокорригирующей активности позволило в ряде случаев выявить нежелательное действие этих препаратов. В определенных условиях иммуномодуляторы вместо иммунокорригирующего действия вызывали усугубление иммуносупрессии. Нежелательные эффекты при применении иммуномодуляторов в эксперименте выявлены на моделях вторичных иммунодефицитов, индуцированных вирусами.

Описаны два типа нежелательных эффектов при применении иммунотропных препаратов мышам, зараженным вирусами. (1) Усугубление вирусиндуцированной иммуносупрессии вместо ожидавшейся нормализации. (2) Переход скрытой (латентной) вирусиндуцированной иммуносупрессии в выраженную. Усугубление существующей супрессии под влиянием иммуномодулятора АСО выявлено в экспериментах с мышами, зараженными вирусом Коксаки ВЗ (Рис. 5).

Введение таким мышам этого иммунотропного препарата за 2 дня до заражения в дозах 0,15 или 1,5 ЕС приводило к тому, что число АОК к ЭБ в селезенке значительно уменьшалось не только по сравнению с контролем (введены только ЭБ), но и по сравнению с мышами, у которых сформировалась иммуносупрессия после заражения вирусом. Следует подчеркнуть, что ЛИКОПИД в испытанных дозах не вызывает иммуносупресии при коксакивирусной инфекции.

Явление скрытой (латентной) иммуносупрессии описано нами. Суть ее сводится к следующему. При заражении мышей субпороговой дозой вируса Тахиня, то есть дозой, которая в 10-100 раз меньше дозы, индуцирующей ВИД, отвечаемость таких мышей на ЭБ определялась как неизмененная,

Рис.5.

Нежелательный эффект при применении АСО (усугубление иммуносупрессии). Отсутствие этого эффекта при комбинации АСО и

ЛИКОПИДА (ЛП)

Иммуномодуляторы АСО, АСО + ЛП, ЛП введены за 48 ч до индуктора ВИД * - супрессия; ** - усугубление супрессии; *** - коррекция

если для определения гуморального ответа используют стандартную концентрацию тест-антигена ЭБ - 2х107 клеток/мышь.

Однако при применении уменьшенной концентрации ЭБ (2x10'') у мышей, получивших субпороговую дозу вируса, выявляли супрессию гуморального ответа.

Введение животным со скрытой иммуносупрессией иммуномодуляторов как АСО, так и ЛИКОПИДА приводит к развитию выраженного ВИД. То есть, происходит активация скрытой иммуносупрессии и переход ее в явную. Такое развитие событий наблюдали при использовании АСО или

ЛИКОПИДА в дозах, модулирующих и немодулирующих иммунный ответ к гетерологичному антигену у иммунокомпетентных животных.

Продемонстрировано разнонаправленное действие

иммуномодуляторов АСО и ЛИКОПИДА у особей с разной выраженностью иммуносупрессии. При сформировавшемся ВИД у мышей, зараженных вирусом Тахиня в дозе 104 ЛД50, оба препарата корригировали выраженную супрессию иммунного ответа. В случае применения иммуномодуляторов (АСО или ЛИКОПИДА) мышам со скрытой иммуносупрессией, возникающей после инокуляции субпороговой дозы патогена наблюдали переход скрытой иммуносупрессии в явную (Рис. 6).

В опытах с иммунотропными препаратами АСО и ЛИКОПИДОМ выявлен важный факт. При встрече организма мышей с малой дозой вируса (вызывающей развитие скрытой иммуносупрессии), а затем с субпороговой концентрацией иммуномодулятора (в дозе в 100 раз меньше модулирующей) развивается выраженный иммунодефицит. По-видимому, in vivo происходит суммация слабых иммуномодулирующих сигналов, источником которых с одной стороны является вирус - индуктор ВИД, а с другой - иммунотропный препарат.

Нежелательного действия иммунокорректоров АСО и ЛИКОПИДА можно избежать. При сочетании АСО и ЛИКОПИДА отменяется потенцирующее действие анатоксина на вирусиндуцированную иммуносупрессию: у животных, зараженных вирусом Коксаки ВЗ, нормализуется гуморальный ответ на ЭБ. В тех случаях, когда имеется скрытая иммуносупрессия, следует использовать многократное (3-4 раза) введение небольших доз иммунотропного препарата. При этом субпороговые дозы как АСО, так и ЛИКОПИДА нормализовали скрытый дефект иммунного ответа на ЭБ.

Интересные результаты получили при сопоставлении данных, характеризующих иммуномодулирующую (иммунокомпетентные животные) и иммунокорригирующую активность (животные с ВИД) исследуемых

Рис. 6.

Разнонаправленное действие АСО и ЛИКОПИДА (ЛП) у мышей, зараженных разными дозами вируса Тахиня (ВТ)

4000

Ю4ЛД5|)

ю2лд50

** **

3000 ■

о

< 2000

1000 -

о

Коррекция выраженной иммупосупрессии

Активация «скрытой» иммупосупрессии

* супрессия; ** - коррекция; *** - активация скрытой иммуносупрессии

препаратов. Оказалось, что иммунокорригирующее действие можно выявить и в тех случаях, когда иммунотропное средство не демонстрирует способности усиливать иммунный ответ иммунокомпетентного животного на неродственный антиген. Так, было показано, что АСО не модулирует ГЗТ к ЭБ у нормальных мышей. И в то же время после введения анатоксина животным с супрессией ГЗТ, сформировавшейся под влиянием ККВ или вируса Коксаки ВЗ, наблюдали выраженный эффект иммунокоррекции. Кроме того, АСО нормализовал и усиление, и угнетение ГЗТ у мышей, иммунизированных БКВ.

Несовпадающие оценки иммуномодулирующей и

иммунокорригирующей активности ЛИКОПИДА получили при его изучении в опытах на мышах с разной иммунологической отвечаемостыо.

Результаты этих опытов представлены на рис. 7. Как следует из данных рисунка, 10 мкг ЛИКОПИДА не изменяют ответ мышей на ЭБ, но исправляют дефект гуморального ответа, индуцированный вирусом Тахиня.

Механизм действия ЛИКОПИДА подробно исследован авторами препарата В.Т.Ивановым, Р.М.Хаитовым, Т.М.Андроновой, Б.В.Пинегиным (1996, 2000,2003), поэтому мы сосредоточили внимание на изучении Рис. 7.

Примеры нммунокорригирующего действия ЛИКОПИДА (ЛП) при отсутствии иммуномодулирующен активности (гуморальный иммунитет)

иммунологических событий, происходящих под влиянием ACО). К началу работы было известно лишь то, что стафилококковые токсины и анаформа а-токсина являются митогенами и способны индуцировать Т-клеточную дифференцировку (1983).

Нами впервые в эксперименте продемонстрирована способность анатоксина стафилококкового очищенного модулировать, то есть усиливать, или угнетать антигенпредставляющую функцию макрофагов, спонтанную и митогениндуцированную пролиферацию лимфоцитов и синтез некоторых цитокинов.

Согласно современным представлениям одним из проявлений активации клеток моноцитарно-макрофагальной системы является усиление способности этих клеток перерабатывать антиген и представлять его Т-лимфоцитам (А.А.Ярилии, 1999; Р.М.Хаитов и др., 2000). В наших опытах адоптивного переноса продемонстрировано, что АСО может не только усиливать, но и снижать способность перитонеальных макрофагов мышей предъявлять антиген. Направленность эффекта при прочих равных условиях зависела от схемы эксперимента (Рис. 8).

Если животные-доноры получали тест-антиген (ЭБ) и АСО в один день,

то у реципиентов перитонеальных макрофагов таких доноров выявляли

значительное увеличение числа АОК к ЭБ. В тех случаях, когда

иммунотропный препарат АСО инокулировали за 24 часа до ЭБ, наблюдали

уменьшение антигенпредъявляющей активности исследуемых клеток.

В опытах in vitro выявлено модулирующее действие АСО на спонтанную и КонА индуцированную пролиферацию спленоцитов. 1,5 ЕС анатоксина подавляют спонтанную пролиферацию и угнетают пролиферацию в присутствии оптимальной дозы митогена (2 мкг/мл). В то же время при внесении 1,5 ЕС препарата и субоптимальной концентрации КонА (1 мкг/мл) наблюдали выраженное усиление пролиферативного ответа. Опыты со спленоцитами мышей, иммунизированными анатоксином, также продемонстрировали модулирующее действие исследуемого

иммунотропного препарата. АСО в дозах 0,15 и 15 ЕС угнетал КонА-

индуцированную пролиферацию иммунных спленоцитов, тогда как в дозе 1,5 ЕС стимулировал ее.

Рис. 8.

Модуляция антигенпрсдставляющей функции (АПФ) перитонеальных макрофагов мышей под влиянием иммуномодулятора АСО (адоптивный перенос)

В рассматриваемых условиях опыта обнаружено только ингибирующее действие АСО на пролиферативный ответ спленоцитов в присутствии оптимальной (100 мкг/мл) или субоптимальной (50 мкг/ мл) концентрации ЛПС.

Модулирующий эффект АСО наблюдали при исследовании митогениндуцированной секреции цитокинов воспаления (ИЛ-1/ИЛ-6) и цитокинов, описываемых как факторы роста Т- и В-лимфоцитов (ИЛ-2/ИЛ-4). Направление этого эффекта зависело от условий эксперимента. Так, спленоциты мышей, иммунизированных АСО, снижают продукцию

цитокинов воспаления при внесении в культуру 1 или 2 мкг/мл КонА. Синтез усиливался, если в систему добавляли субоптимальную дозу митогена (1 мкг/мл) и 0,15 ЕС /мл анатоксина.

Образование ИЛ-2/ИЛ-4 менялось в присутствии 1 и 2 мкг/мл КонА. Наблюдали как усиление, так и угнетение изучавшегося процесса. В присутствии только митогена (1 или 2 мкг/мл) образование цитокинов уменьшалось. В тех случаях, когда применяли комбинацию малых доз КонА (1 мкг/мл) и АСО (0,15 ЕС/мл) наблюдали усиление синтеза при использовании спленоцитов мышей, получивших 0,15 ЕС, и его угнетение при работе с клетками селезенки доноров, которым вводили 1,5 или 15 ЕС.

Наши данные о влиянии АСО на синтез цитокинов подтверждаются работой М.А. Мокроносовой и др. (2002), которые показали, что анатоксин стафилококковый очищенный стимулирует образование альфа- и гамма-интерферона лейкоцитами больных с атопическим дерматитом.

При изучении клеточных событий, развивающихся при индукции иммуносупрессии и ее коррекции методом адоптивного переноса, получили следующие результаты.

Продемонстрировано, что под влиянием ККВ - индуктора иммуносупрессии у доноров в селезенке мышей-реципиентов уменьшается число АОК к ЭБ, а при комбинированном введении донорам АСО и ККВ, число таких клеток у реципиентов возвращается показателям нормы.

По-видимому, под влиянием АСО клетки селезенки приобретают способность нормализовать подавленную антителообразующую функцию спленоцитов мышей с индуцированной иммуносупрессией. В пользу такого предположения говорят следующие факты. (1). При одновременном введении спленоцитов мышей от двух групп доноров, которые получали одна ККВ, а другая АСО, у реципиентов не наблюдали развитие супрессии антителообразования. (2) Супрессирующее действие ККВ не развивалось, если мыши получали вместе с вакциной спленоциты доноров, иммунизированных анатоксином.

Совокупность представленных фактов позволяет высказать предположение о том, что иммунотропный препарат АСО действует на некоторые молекулярные механизмы доиммунного воспаления (активация макрофагов; ИЛ-1/6) и на ранние этапы активации лимфоцитов (ИЛ-2/4).

При сопоставлении рассмотренных выше данных с результатами исследования ЛИКОПИДА авторами препарата (В.Т.Иванов и др., 1996; Р.М.Хаитов, Б.В.Пинегин и др., 2000, 2003) выявляется ряд общих механизмов действия: оба иммунотропных вещества действуют на клетки моноцитарно-макрофагальной системы и модулируют синтез цитокинов. Этим, вероятно, и объясняется сходство эффектов, выявляемых при испытании названных препаратов в опытах на мышах и при использовании в клинике.

Наличие общих механизмов действия у АСО и ЛИКОПИДА становится понятным, если вспомнить, что они имеют общее (микробное) происхождение и являются продуктом бактериальной клетки. Действие АСО и ЛИКОПИДА можно отнести к центробежному эффекту иммунотропных лекарственных средств, согласно последним представлениям о механизмах действия иммуномодуляторов, изложенных в работе Р.М.Хаитова и Б.В.Пинегина (1999). Эта гипотеза предполагает, что первичной мишенью для иммуномодуляторов микробного происхождения являются макрофаги.

Результаты экспериментального изучения способности АСО предупреждать и исправлять иммуносупрессию, возникающую под влиянием различных по своей природе внешних факторов, послужили основанием для применения АСО как иммунокорректора в клинике.

Исследования были проведены на кафедре акушерства и гинекологии Российского медицинского университета (заведующая кафедрой академик РАМН Г.М.Савельева) на базе городской клинической больницы №31 г.Москвы. Работу выполняли группы профессоров Л.В.Антоновой и К.Н.Прозоровской при нашем участии.

Эффективность АСО в рамках комплексной противовоспалительной терапии (КПВТ) острых воспалительных заболеваний придатков матки (ОВЗПМ) или обострения хронической формы этой патологии продемонстрировали Л.В.Антонова и соавт.(1990) и Г.М.Савельева и соавт. (1994). Согласно их данным включение АСО в КПВТ повышает эффективность лечения в 6,2 раза. При этом число женщин, предъявляющих жалобы на боли в тазу, уменьшалось с 6,3 (группа сравнения) до 0,7 %; бесплодие выявляли только у 1,3 % наблюдавшихся против 6,3% в контроле. В качестве группы сравнения служили пациентки, которые получали только КПВТ с соответствующими антибиотиками. В течение 24-48 месяцев катамнестического наблюдения у леченых по схеме КПВТ+АСО не регистрировали обострений.

Ниже приводятся материалы, которые характеризуют функцию иммунной системы при ОВЗПМ, ассоциированных с разными комбинациями1 микроорганизмов, и демонстрируют динамику нормализации клинических симптомов и вторичной иммунологической недостаточности при КПВТ с разными схемами применения АСО.

Всего под наблюдением находилось 175 женщин. На основании бактериологического обследования 130 пациенток больные были условно разделены на три группы: в первую вошли больные, у которых ОВЗПМ ассоциированы с инфекцией условно-патогенной флорой - УПМ (S.aureus, S.pyogenes, P.vulgaris, K.pneumoniae, E.coli и другие члены семейства Enterobacteriaceae; а также представители Bacteroides и Clostridium); вторую группу представляли женщины с ОВЗПМ, сочетающимся с комбинацией УПМ и N.gonorrhoeae; в третьей группе обследованных возбудителем патологического процесса являлась ассоциация УПМ и C.trachomatis. Особую группу составляли 19 больных, у которых' ОВЗПМ было ассоциировано с выделением цитомегаловируса и/ или вируса простого герпеса с С. trachomatis.

(-.Петербург {

09 т 1ГТ г ----

Обследование больных ОВЗПМ до проведения комплексного противовоспалительного лечения с включением иммуномодулятора АСО выявило нарушение иммунологического статуса во всех группах пациенток. Об этом свидетельствовали результаты определения девяти показателей, характеризующих иммунный статус 130 больных (табл. 3).

При иммунологическом обследовании у каждой пациентки определяли: (1) количество Т-лимфоцитов, их функциональную активность; (2) количество В-лимфоцитов и их функциональную активность (уровни IgA, IgM, IgG в сыворотке и уровень IgA в слизи шейки матки); (3) фагоцитарную активность нейтрофилов; (4) уровень лизоцима.

Во всех исследованных группах выявлено угнетение функции Т-лимфоцитов, уменьшение числа этих иммунокомпетентных клеток, уменьшение их способность отвечать на митоген. На фоне выраженной Т-клеточной супрессии наблюдали усиление функции В-лимфоцитов. Возрастало их относительное число, в сыворотке крови увеличивалось содержание IgA и IgM. Содержание IgG у больных 1 и 3 групп возрастало, а при ассоциации ОВЗПМ с Ы^опоггкоеае - уменьшалось. Фагоцитарная активность нейтрофилов была снижена в группах 1 и 2 и оставалась без отклонения от показателя контроля в группе 3. Содержание лизоцима оказалось увеличенным в сыворотке крови всех обследованных больных.

У 19 пациенток, у которых ОВЗПМ ассоциировалось с хламидийно-вирусной инфекцией, проведено определение фенотипических маркеров лимфоцитов. Изучены маркеры CD3+; CD4+; CD8+; CD 19+; CD 16+ лимфоцитов. В острой фазе выявляли дефицит CD4+ клеток (у 13 из 19 обследованных); уменьшение количества CD8+ лимфоцитов (у 7 из 19); и CD 19+ (у 12 из 19). Таким образом, в 70% случаев при хламидийно-вирусной инфекции выявлено нарушение как клеточного, так и гуморального звена иммунного ответа.

Таблица 3

Сопоставление ряда иммунологических показателей у клинически здоровых женщин и женщин с ОВЗПМ, ассоциированных с разными комбинациями микроорганизмов

№ № В группу входили Ассоциация микроога- ■ низмов ИМУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ*

ПФ ФЧ ТЛ РБТЛ ВЛ 1йА 1йМ 1йО Л

1 Больные ОВЗПМ УПМ** п=85 56,5+/-2,6 2,6+/-0,2 31+/-2,3 7,1+/-1,9 22,2+/-2,6 2,1+/-0,2 2,06+/-0,1 18,5+/-0,6 3,3+/-0,2

2 «( Ы^опоггИоеае + УПМ п=25 52,1+/-2,3 3,2+/-0,2 н.о.*** 13,0+/ -2,3 21,1+/-1,5 2,2+/-0,2 2,06+/-0,15 8,5+/-0,6 8,7+/-0,3

3 (( СЛгас1готай5+ УПМ п=20 76,7+/-2,2 4,3+/-0,6 41,3+/-0,6 13,5+/ -2,7 22,5+/-1,5 2,1+/-0,2 1,8+/-0,14 16,4+/-1,2 3,4+/-0,25

4 Клинически здоровые И.О. N=20 70,9+/-1,2 4,6+/-0,5 60,4+/-2,3 59,0+/ -1,9 15,1+/-1,9 1,64+/-0,22 0,97+/-0,15 11,07+/-1,32 1,2+/-0,2

*ПФ — процент фагоцитоза; ФЧ — фагоцитарное число; ТЛ — Т-лимфоциты (%);

РБТЛ - реакция бласттрансформации Т-лимфоцитов (%); ВЛ - В-лимфоциты (%); IgA, IgM, IgG - (г/литр); Л - лизоцим (мкг/мл).

** УПМ - условнопатогенные микроорганизмы.

***Н.О. - не определяли.

В соответствии с общепринятой практикой больные ОВЗПМ получали комплексную противовоспалительную терапию (антибиотики, индукторы интерферона - при вирусно-хламидийной этиологии, антигистаминные препараты, гистоглобулин, переливание крови, плазмозаменители). Для исправления вторичных иммунодефицитов и восстановления иммунологического статуса больных использовали несколько схем инокуляции иммуномодулятора АСО: (1)2-3 инъекции; (2) 3 - 4; (3) 5 - 6; (4) 7 -8 инъекций.

Лечение начинали на 3 - 4 сутки после поступления пациентки в стационар на фоне продолжающейся комплексной противовоспалительной терапии. АСО вводили под кожу в возрастающих дозах (0,1; 0,3; 0,5; 0,7; 0,9; 1,1; 1,3; 1,5 мл).

После 2-3 инъекций иммунотерапии отмечали улучшение общего самочувствия. Однако объективные признаки воспалительного процесса сохранялись. После применения 4-5 инъекций АСО наблюдали признаки субъективного улучшения, а затем нормализацию температуры тела и исчезновение общих и очаговых реакций.

Клиническое выздоровление сопровождалось нормализацией показателей иммунного ответа (табл. 4).

Показатели иммунологического статуса у 50 женщин, получавших разные по продолжительности курсы лечения АСО: короткий (до 3 инъекций); средний (5-') и длинный (7-8) демонстрируют, что наиболее выраженный иммунокорригирующий эффект наблюдали после 5-' инъекций АСО. При этом возрастало содержание Т-лимфоцитов и их функциональная активность. Зафиксировано также существенное усиление фагоцитарной активности нейтрофилов крови. Выявлено повышение титров В ходе

лечения АСО на протяжении всего периода наблюдения количество В-лимфоцитов и содержание и ^М не менялось. Увеличение курса иммунотерапии до 7-8 инъекций анатоксина не приводило к значимым

Таблица 4

Состояние иммунитета у больных ОВЗПМ (п=50) в процессе иммунотерапии ACO

Сроки Обследования ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ П О К А 3 А Т Е Л И

ПФ ФЧ Компле- ТЛ РБТЛ ВЛ IgA IgM IgG Анти-

мент токсин

До лечения 42,7+/- 2,52+/- 0,033+/- 54,1+/- 38,3+/- 22,2+/- 1,53+/- 1,36+/- 1,36+/- 1,15+/-

3,1 0,29 0,001 4,2 2,8 2,1 0,14 0,12 0,51 0,21

После 2-3 69,3+/- 2,87+/- 0,026+/- 68,2+/- 44,0+/- 20,4+/- 2,09+/- 1,38+/- 11,91+/- 1,25+/-

Инъекций 1,9 0,13 0,003 2,6 1,7 1,8 0,46 0,11 0,40 0,41

После 3-4 74,5+/- 3,50+/- 0,047+/- 71,3+/- 56,4+/- 23,6+/- 2,21+/- 1,46+/- 13,45+/- 15,0+/-

инъекций 2,2** 0,17 0,006 3,2 4,2 2,8 0,31 0,22 0,32*** 2,1***

После 5-6 82,2+/- 5,40+/- 0,061+/- 74,6+/- 63,1+/- 24,0+/- 1,52+/- 1,26+/- 12,46+/- 26,0+/-

инъекций 2 9*** 0,21*** 0,006*** 2,8** 3 i*** 2,0 0,24 0,16 Q 94*** I 9***

После 7-8 77,6+/- 4,86+/- 0,068+/- 69,4+/- 60,4+/- 23,2+/- 1,71+/- 1,31+/- 12,87+/- 18,0+/-

инъекций 3,8** 0,22*** 0,005*** 3,1 2,8 1,7 0,34 0,12 0 72*** 2 з***

* ПФ - процент фагоцитоза ФЧ - фагоцитарное число ТЛ - Т-лимфоциты

РБТЛ - реакция бластгрансформации ТЛ ВЛ - В-лимфоциты ** - ВИД

*** - нормализация ВИД

изменениям иммунного ответа. После 5-6 инъекций АСО отмечали значительное повышение титров стафилококкового антитоксина у всех пациентов.

У больных с ОВЗПМ, обусловленными смешанной хламидийно-вирусной инфекцией, получивших комплексную противовоспалительную терапию с включением индукторов интерферона (амиксин, мегасин) и АСО отмечали нормализацию субпопуляций клеток с маркерами CD3+; CD4+; CD8+; CD 19+.

Полученные данные демонстрируют, что иммунотерапия в комплексе с противовоспалительной терапией эффективна при ОВЗПМ, обусловленных разными, комбинациями микроорганизмов (стафилококки, хламидии, гонококки, грамотрицательные энтеробактерии, бактероиды и др.) После завершения курса иммунотерапии из 5-6 или 7-8 инъекций АСО 82,9% пациенток были выписаны с выздоровлением; а у остальных регистрировали улучшение состояния здоровья.

Влияние АСО на показатели иммунитета у пациентов с хронической патологией продемонстрировано и другими авторами. Л.В.Антонова, Ф.И.Ершов, С.С.Григорян и др. (1996) описали нормализацию гамма-интерферонового статуса у женщин с гинекологическими заболеваниями, ассоциированными с вирусной, хламидийной и грибковой инфекцией, на фоне комплексной противовоспалительной терапии с включением стафилококкового анатоксина. М.А.Мокроносова и др. (2002) сообщили об усилении синтеза in vitro лейкоцитами крови больных

атопическим дерматитом под влиянием АСО.

На основании описанных экспериментальных и клинических данных подготовлены и утверждены Министерством Здравоохранения России Методические рекомендации: "Использование анатоксина стафилококкового очищенного в комплексе лечебных мероприятий при воспалительных

заболеваниях придатков матки" и "Иммунокоррекция в профилактике послеоперационных осложнений у гинекологических больных".

Широкие испытания ЛИКОПИДА в клинической практике провели его авторы (В.Т.Иванов и др., 1996; Б.В.Пинегин и др. 1996; Р.М.Хаитов и др., 1998; Р.М.Хаитов, Б.В.Пинегин, 2000, 2003). Они продемонстрировали высокий эффект препарата в рамках комплексной противовоспалительной терапии разнообразных патологических состояний: хронических неспецифических заболеваний легких как в стадии обострения, так и ремиссии; острых и хронических гнойно-воспалительных процессах, а также у пациентов с травмами, ранами, трофическими язвами; туберкулезе; острой и хронической герпетической инфекции;поражениях шейки матки, вызванных вирусом папилломы человека, урогенитальных инфекциях.

Наши данные и материалы других авторов свидетельствуют о явном совпадении результатов эксперимента и клинических исследований иммуномодуляторов АСО и ЛИКОПИДА. Эти иммуномодуляторы микробного происхождения действуют на клетки моноцитарно-макрофагального ряда, нормализуют приобретенную иммуносупрессию как у лабораторных животных, так и у больных с хронической патологией, осложненной воспалением. Коррекция ВИД с помощью АСО или ЛИКОПИДА сопровождается восстановлением резистентности к вторичной инфекции. Оба препарата оказались эффективными при лечении иммуносупрессии, индуцированной действием разных факторов: у животных - вирусами разных таксономических групп, бактериальных антигенов (АСО), психоэмоциональным стрессом; у людей - разными видами бактерий, вирусов, их ассоциациями и оперативными вмешательствами.

Использование в качестве экспериментальной модели животных со вторичной иммуносупрессией позволило выявить ранее неизвестные свойства изучавшихся иммунотропных препаратов. Показано, что способность исследованных препаратов изменять (усиливать, подавлять) клеточный иммунный ответ интактных животных и способность этих

препаратов нормализовать приобретенную иммуносупрессию не являются тесно связанными признаками. При определенных условиях дозы, которые не обладают иммуномодулирующей активностью, оказываются эффективными для нормализации ВИД. Продемонстрировано развитие выраженной иммуносупрессии при суммации in vivo слабых иммунологических сигналов вируса и субпороговых концентраций как АСО, так и ЛИКОПИДА. Определены оптимальные схемы применения препаратов, которые позволяют избежать развитие нежелательных эффектов.

В последние годы появились работы, подтверждающие целесообразность изучения свойств иммуномодуляторов у животных с иммуносупрессией. Для формирования ВИД использовали циклофосфан, радиацию, антибиотики (Е.В.Быкова и др., 1999; И.В.Нестерова и др., 1997; А.А.Михайлова, 1999). В опытах на иммуносупрессированных мышах продемонстрирована способность миелопида исправлять дефект антителообразования и нормализовать функцию нейтрофильных гранулоцитов. Используя животных с ВИД, выявили иммунокорригирующую активность у римолана, иммуномодулятора плацентарного происхождения.

Результаты наших исследований свидетельствуют, что АСО, который был создан и применялся для иммунопрофилактики и иммунотерапии стафилококковой инфекции, является активным иммуномодулятором с выраженной иммунокорригирующей активностью, позволяющей нормализовать ВИД, возникающие под действием разных по своей природе биологических факторов. Иммуномодулирующее и иммунокорригирующее действие АСО продемонстрировано на организменном, клеточном и молекулярном уровнях.

Закономерности иммунокорригирующего действия АСО в эксперименте и при использовании в клинике совпадают с закономерностями действия полусинтетического иммуномодулятора ЛИКОПИДА, выявленными нами и другими авторами.

В целом полученные нами данные позволяют констатировать следующее. ИТЛС микробного происхождения 2 и 3 поколения (соответственно АСО и ЛИКОПИД) в экспериментах на животных с вторичными иммунодефицитами демонстрируют общие закономерности действия.

К этим закономерностям относится способность (1) исправлять вторичные иммунодефициты, индуцированные разными по своей природе факторами внешней среды (вирусами и стрессом в опытах с ЛИКОПИДОМ; вирусами, стрессом и бактериальными вакцинами при работе с АСО); (2) нормализовать дефекты гуморального и клеточного иммунитета, а также восстанавливать естественную резистентность к гетерологичному вирусу; (3) иммуномодулирующие сигналы ИТЛС и индуктора ВИД могут суммироваться in vivo; (4) корригирующим действием могут обладать доза АСО и ЛИКОПИДА, которые не вызывают иммуномодуляцию у интактных животных; (5) оба препарата - АСО и ЛИКОПИД при определенных условиях могут вызывать нежелательные эффекты - усугубление существующей супрессии (АСО) или активацию латентной иммуносупрессии; (6) многократное введение малых доз дает более выраженный корригирующий эффект по сравнению с однократной инокуляцией препаратов.

ВЫВОДЫ

1. Предложен новый экспериментальный подход к изучению проблемы иммунокоррекции, основанный на исследовании иммунотропных препаратов в организме лабораторных животных со вторичными иммунодефицитами, индуцированными действием различных факторов. Этот подход использовали для изучения корригирующей активности иммуномодуляторов микробного

происхождения на примере анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) и ЛИКОПИДА.

2. Иммунотропное действие АСО и ЛИКОПИДА оценивали по их способности корригировать вторичные иммунодефициты (ВИД) у мышей. Использовали три экспериментальные модели вторичных иммунодефицитов: ВИД при вирусной инфекции; ВИД, индуцированный разными вариантами бактериальных вакцин, и ВИД, формирующийся под влиянием стресса.

3. АСО и полусинтетический препарат ЛИКОПИД нормализуют нарушения гуморального и клеточного иммунитета и восстанавливают подавленную естественную резистентность к вирусу у инбредных мышей с ВИД, формирование которых обусловлено действием различных по своей природе внешних факторов: вирусы разных таксономических групп (Picorno- и Bunyaviridae), стресс (информационный и в результате гипокинезии), а также нескольких вариантов коклюшной вакцины (корпускулярная, бесклеточная, АКДС) в опытах с АСО.

4. При испытании на моделях с ВИД иммуномодуляторы АСО и ЛИКОПИД могут проявлять корригирующую активность в дозах, которые не обладают иммуномодулирующим действием в опытах на интактных животных.

5. Проявления иммунокорригирующей активности АСО и ЛИКОПИДА зависят от дозы и кратности введения препаратов, временных интервалов между их инокуляцией и воздействием иммуносупрессирующего фактора и от генотипа животных Эффект иммунокоррекции выявляется в индуктивной (-5; -3; -1 дни) и/или в продуктивной фазе иммунного ответа (0; +1; +3 дни)

6. Слабые иммуномодулирующие сигналы субпороговых доз АСО и ЛИКОПИДА могут суммироваться in vivo с аналогичными

сигналами субпороговых доз вируса-индуктора ВИД, что приводит к развитию выраженной иммуносупрессии.

7. При введении АСО или ЛИКОПИДА у экспериментальных животных могут развиваться нежелательные эффекты: усугубление выраженной и активация скрытой иммуносупрессии. Предложены схемы применения иммунокорректоров, исключающие развития нежелательных эффектов.

8. Коррекция с помощью АСО ВИД, индуцированного корпускулярной коклюшной вакциной, не препятствует формированию протективного противококлюшного иммунитета. АСО потенцирует иммуногенность коклюшной вакцины.

9. Нормализация с помощью АСО вирусиндуцированной супрессии гуморального иммунного ответа не предотвращает развитие персистенции вируса в ЦНС мышей.

Ю.Изучение механизма иммуномодулирующего действия АСО в опытах на животных свидетельствует о том, что этот препарат изменяет (усиливает, подавляет) антигенпредставляющую функцию макрофагов, пролиферацию лимфоцитов, а также синтез ряда цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6).

¡¡.Экспериментально обосновано включение иммуномодулятора АСО в комплексную противовоспалительную терапию острых воспалительных заболеваний придатков матки, которые сопряжены со смешанными бактериальными и бактериально-вирусными инфекциями.

12.АСО в рамках общепринятого комплексного

противовоспалительного лечения нормализует ВИД у женщин с острыми воспалительными заболеваниями придатков матки, обусловленными комбинациями патогенных и условнопатогенных микроорганизмов. При этом до показателей нормы увеличивается число Т-лимфоцитов; возрастает их функциональная активность;

усиливается фагоцитоз нейтрофилов крови; повышается уровень IgG. Коррекция иммунологических показателей происходит на фоне клинического выздоровления.

При хламидийно-вирусной инфекции нрмализуется количество лимфоцитов с маркерами CD3+, CD4+, CD8+, CD19+.

13.Результаты экспериментов с АСО и ЛИКОПИДОМ свидетельствуют, что инбредные мыши с индуцированным вторичным иммунодефицитом являются информативной моделью для оценки иммунокорригирующей активности иммунотропных препаратов. Выявленная в эксперименте способность АСО и ЛИКОПИДА нормализовать приобретенный иммунодефицит была подтверждена нами (АСО) и другими авторами (ЛИКОПИД) при применении этих препаратов в рамках комплексной противовоспалительной терапии заболеваний с ВИД.

Использованные сокращения антителообразующие клетки анатоксин стафилококковый очищенный бесклеточная коклюшная вакцина вторичный иммунодефицит гиперчувствительность замедленного типа единицы связывания иммунизирующая доза интерлейкин

иммунотропные лекарственные средства интерферон

корпускулярная коклюшная вакцина конканавалин А

комплексная противовоспалительная терапия летальная доза 50% липополисахарид

острые воспалительные заболевания придатков матки средняя продолжительность жизни тканевая цитотоксическая доза 50% условно патогенные микроорганизмы эритроциты барана

АОК -

АСО -

БКВ -

ВИД -

ГЗТ -

ЕС -

ИД -

ИЛ -

ИТЛС -

ИФН -

ККВ -

КонА -

КПВТ -

ЛД50 -

ЛПС -

ОВЗПМ -

СПЖ -

ТЦД50 -

УПМ -

ЭБ -

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ

1. Семенова И.Б., Акатов А.К. Бактериальные экзотоксины и анатоксины как антигеннеспецифические иммуномодуляторы // Журн. микробиол. - 1991. - N 12. - С. 69-73.

2. Семенова И.Б., Варгин В.В., Акатов В.В. Способность анатоксина стафилококкового очищенного исправлять антигенспецифический и антигеннеспецифический дефекты //Журн. микробиол. - 1992. - N4. - С. 4244.

3.Семенова И.Б., Варгин В.В. Влияние иммуномодулятора анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) на формирование антителообразующих клеток в селезенке мышей с фенотипическими различиями в иммунологической реактивности // Тр. 1 съезда иммунологов России. - Новосибирск, 1992. - С.425

4. Варгин В.В., Семенова И.Б., Акатов А.К., Семенов Б.Ф. Влияние иммуномодулятора анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) на развитие патологических эффектов, ассоциированных с индуцированными вирусом Тахиня, вторичными иммунодефицитами у мышей // Тр. 1 съезда иммунологов России. - Новосибирск, 1992. - С. 69-70

5. Semenova I.B., Ozerelkov S.V., Vargin V.V., Nikolskaya K.A., Akatov А.К. Purified staphylococcal toxoid (PST) corrects secondary immunodeficiency (SID) developing after the injection of pertussis vaccine or as the result of information stress // International Conference on Immunorehabilitation. -Dagomys, 1992.-P. 119.

6.Semenova I.B., Vargin V.V., Akatov A.K., Semenov B.F. Influence of purified staphylococcal toxoid on virus-induced immunological defects //International symposium "100 years of Virology". - St.-Petersburg. - 1992. - P. 102-103.

7. Семенова И.Б., Прозоровская К.Н., Варгин В.В., Антонова Л.В. Экспериментальное обоснование иммунотерапии анатоксином стафилококковым очищенным // Журн.микробиол. - 1993. - N 2. - С. 99-101.

8. Календеров А.К., Семенов Б.Ф., Семенова И.Б. Биологические факторы, качественно и количественно изменяющие иммуномодулирующую активность химического вещества // Тр. международной конференции "Загрязнение окружающей среды. Проблемы токсикологии". - Москва -Пермь, 1993.-С.223-224.

9. Семенова И.Б., Антонова Л.В., Прозоровская К.Н., Акатов А.К. Антистафилококковое, иммуномодулирующее и противовоспалительное действие анатоксина стафилококкового очищенного в эксперименте //Тр. республиканской конференции "Иммунология репродукции". - Иваново, 1993.-С. 93.

10. Антонова Л.В., Прозоровская К.Н., Семенова И.Б. Репродуктивная функция женщин в связи с использованием анатоксина стафилококкового в комплексном лечении воспалительных заболеваний половых органов //Тр. республиканской конференции "Иммунология репродукции". - Иваново, 1993.-С. 69.

11. Семенова И. Б., Васильева И. Г., Акатов А. К. Коррекция вторичного иммунологического дефекта, вызванного вирусом Коксаки ВЗ, с помощью иммуномодулятора бактериального происхождения // Журн. микробиол. -1993.-N6.-a 83-84.

12. Календеров А.К.,Семенова И.Б. Особенности действия иммуномодулятора при латентной вирусной инфекции // Журн. микробиол. -1993.-N6.-a 87-88.

13. Petrov A.B., Kolenko V.M., Koshkina N.V., Zakirov M.M., Bugaev L.V., Semenova I.B., Wietz T.J.H.S., Poolman J.T. Nonspecific modulation of the immune response with liposomal lipopolisacharde. Role of different cells and cytokines//Vaccine.- 1994.-N 12. P. 1064-1070.

14. Semenova I.B., Vargin V.V., Ozerelkov S.V., Akatov A.K. Immunomodulator (staphylococcal toxoid) abolishes immunosuppression, induced by viruses, vaccines and stress // 11th Interdisciplinary world congress on antimicrobial and anticancer drugs. - Geneva, 1994. - P. 33

15. Семенова И.Б.,Акатов А.К. Закономерности корригирующего действия природного иммуномодулятора на вторичный иммунологический дефект, вызванный корпускулярной коклюшной вакциной // Журн. микробиол. - 1994.- N5. - С.57-59.

16. Семенова И.Б., Акатов А.К. АКДС-вакцина вызывает временную иммуносупрессию, исправляемую с помощью иммуномодулятора -анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) // Журн. микробиол. -1994.-N6.-C. 78-79.

17. Календеров А.К., Семенова И.Б., Акатов А.К. Изменение направленности иммуномодулирующей активности анатоксина стафилококкового очищенного (АСО)при введении зараженным вирусом мышам //Журн.микробиол. - 1994. - N 6. - С.77-78.

18. Недвецкая Л.М., Семенова И.Б. Опыт применения неспецифических методов профилактики внутрибольничной и раневой инфекции в хирургической клинике //Бюллетень для врачей и фармацевтов "Materia medica". - 1994. - N 3.- С.29-36.

19. Савельева Г.М., Антонова Л.В., Прозоровская К.Н.,Семенова И.Б. Использование анатоксина стафилококкового очищенного в комплексе лечебных мероприятий при воспалительных заболеваниях придатков матки // Методические рекомендации, Минздрав России, 1994, с.5.

20.Савельева И.Б., Антонова Л.В., Прозоровская К.Н., Семенова И.Б. Иммунокоррекция в профилактике послеоперационных инфекционных осложнений у гинекологических больных // Методические рекомендации, Минздрав России, 1994,с.7.

21. Семенова И.Б., Акатов А.К. Влияние на Коксаки В 3 вирусную инфекцию разных иммуномодификаторов: вакцины коклюшной корпускулярной, анатоксина стафилококкового и их комбинации //Журн. микробиол. - 1995. - N 6. - С.54-55.

22. Семенов Б.Ф., Варгин В.В., Ожерелков СВ. Семенова И.Б., Календеров А.К. Демонстрация способности глюкозааминилмурамилдипептида устранять иммуносупрессию, индуцированную вирусом или стрессом // Иммунология. - 1995. - N 6.- С.39-41.

23. Семенов Б.Ф., Семенова И.Б., Варгин В.В. Ожерелков СВ., Антонова Л.В. Прозоровская К.Н. Вторичные иммунодефициты и методы их коррекции // Тр. международного симпозиума, посвященного 150-летию со дня рождения И.И.Мечникова и 90-летию Уфимского НИИИС им.И.И.Мечникова НПО "Иммунопрепарат" .- Уфа, 1995. - С.3-6.

24. Антонова Л.В., Прозоровская К.Н., Шаткин А.А., Семенова И.Б., Акатов А.К. Изменение иммунологических показателей у больных острыми воспалительными заболеваниями придатков матки (ОВЗПМ), ассоциированными с разными комбинациями микроорганизмов //Тр. 12-ой Российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. -Челябинск, 1995. С. 5-6.

25. Semenov B.F., Ozerelkov S.V., Nikolskaya K.A., Vargin V.V., Semenova I.B. Savanenko F.V. Stress-induced immunosuppression and viral infection // International Conference "Society, stress and health - Moscow, 1995. P. 35.

26. Антонова Л.В., Прозоровская К.Н., Семенова И.Б., Шаткин А.А. Исследование иммунного статуса у больных острыми воспалительными заболеваниями придатков матки, ассоциированных с разными комбинациями микроорганизмов // Журн. микробиол. -1996. - N 1. - С. 49-53.

27. Ожерелков С.В.,Семенова И.Б., Варгин В.В. Никольская К.А., Саваненко А.И., Семенов Б.Ф. Иммуномодификатор - стафилококковый анатоксин предупреждает развитие иммуносупрессии, вызванной информационным стрессом у мышей // Журн.микробиол. - 1996. - N 4. - С. 71-74.

28. Ершов Ф.И., Антонова Л.В., Григорян С.С., Сухих Г.Т., Орлов В.Н., Семенова И.Б., Шмельков Ю.А. Нарушения в системе интерферона у пациентов с вирусиндуцированными и хламидийными инфекциями // Вопр. вирусол. - 1996. - Т. 41, N4. -С. 172-174.

29. Семенова И.Б., Семенов Б.Ф. Закономерности коррекции вторичных иммунодефицитов разными по своей природе иммуномодуляторами //Internet. J. immunorehabilit. - N 6. - P. 35-40.

30. Антонова Л.В., Ершов Ф.И., Григорян С.С., Орлов И.Н., Матвеева Н.К., Бесаева Т.П.,Семенова И.Б., Шмельков Ю.А., Оспельникова Т.П. Новое поколение иммунопрепаратов для лечения ассоциированных с вирусами заболеваний половых органов женщин // Тр. 3 национального конгресса "Человек и лекарство". - Москва, 1996. - С. 175.

31. Семенова И.Б., Семенов Б.Ф., Ожерелков СВ., Варгин В.В., Никольская К.А. Анатоксин стафилококковый очищенный предупреждает развитие иммуносупрессии, ассоциированной с информационным стрессом // Тр.З национального конгресса "Человек и лекарство". - Москва, 1996. - С. 192.

32. Semenenko T.A., Semenova I.B., Michailov M.I., Zacharova N.S., Hadden J.W. Effects of immunomodifiers in vaccination // International Conference on modern vaccinology. - Ufa, 1996.- P. 25.

33.Семенова И.Б., Ремова Т.Н., Бажанова И.Г., Ермолова Е.В., Захарова Н.С. Иммуномодулирующая активность бесклеточной коклюшной вакцины

(БКВ) и АКДС-вакцины, содержащей БКВ (АКДСб). Сочетанное применение с анатоксином стафилококковым очищенным // Тр. 7 съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - Москва. - 1997. С. 138-139.

34. Семенова И.Б., Деева А.В., Пронин А.В. Влияние иммуномодулирующих доз анатоксина стафилококкового очищенного на спонтанную и митогениндуцированную пролиферацию спленоцитов мышей // Журн. микробиол. - 1997. - N 2. -С.57-60.

35. Semenova I.B., Kalenderov A.K., Vargin V.V., Semenov B.F. Samming up, weak immunomodulating signals of Tahyna virus and immunomodulating drags induce immunosuppression in mice // Acta Virologica. - 1997. - V 4,N2.- P. 97-99.

36. Семенова И.Б. Принципы коррекции вторичных иммунодефицитов двумя различными по своей природе иммуномодуляторами - анатоксином стафилококковым очищенным и ликопидом // Журн.микробиол. - 1998. - N1. -С.100-104.

37. Семенов Б.Ф., Варгин В.В., Ожерелков СВ., Семенова И.Б. Стресс увеличивает у мышей субпопуляцию пермиссивных для вируса Лангат селезеночных макрофагов//Журн.микробиол. - 1998. - N 3. - С.57-60.

38. Семенова И.Б., Варгин В.В., Семенов Б.Ф. Вирусиндуцированные вторичные иммунодефициты. Их патогенетическое значение // Тр. 2 Национального конгресса Российской Ассоциации Клинических Иммунологов и Аллергологов. - М., - 1998. - С.208-211.

39. Семенова И.Б., Варгин В.В. Иммунокоррекция вирусиндуцированных вторичных иммунодефицитов // Тр. 2 Национального конгресса Российской Ассоциации Клинических Иммунологов и Аллергологов. - М, - 1998. - С. 304.

40. Семенова И.Б. Адоптивный перенос эффекта иммуносупрессии и иммунокоррекции //Тихоокеанский медицинский журнал. - 1999. - N 3. -С.85.

41. Семенов Б.Ф., Егорова Н.Б., Семенова И.Б., Курбатова Е.А. Терапевтические вакцины // Российские медицинские вести. -2000.- N3.-С.26-32.

42. Семенова И.Б., Варгин В.В., Ожерелков СВ., Семенов Б.Ф. Иммунокорригирующее действие двух иммуномодуляторов - анатоксина стафилококкового очищенного и ликопида в опытах на мышах со вторичными иммунодефицитами // Тр. 4 Национального конгресса Российской Ассоциации Клинических Иммунологов и Аллергологов. - М, 2001.-С. 389.

43. Семенова И.Б. Применение анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) как иммунокорректора и индуктора противостафилококкового иммунитета при лечении полиэтиологических заболеваний, сопровождающихся вторичными иммунодефицитами // Журн. Врач . 2001. - N 10. - С.ЗЗ - 34.

44. Семенова И.Б., Васильева И.Г., Акатов А.К. Коррекция иммунного ответа с помощью анатоксина стафилококкового очищенного и ликопида при вторичном иммунодефиците, индуцированном вирусом Коксаки ВЗ // Журн. микробиол. - 2001. - N 5. -С. 42 -45.

45. Семенова И.Б. Клеточные механизмы иммунокорригирующего действия иммуномодулятора анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) // Тр. 8 съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М, 2002. С. 230-231.

46. Семенова И.Б. Анатоксин стафилококковый очищенный (АСО) как иммуномодулятор (ИМ), восстанавливающий супрессию клеточного иммунного ответа, индуцированную экспериментальной вирусной инфекцией или вакцинацией // Тр. 5 Национального конгресса Российской Ассоциации Клинических Иммунологов и Аллергологов. - М., 2002. - С.378.

47. Семенова И.Б. Коррекция клеточного звена иммунитета с помощью анатоксина стафилококкового очищенного в реакции гиперчувстительности

замедленного типа к неродственному антигену // Журн. микробиол. - 2003. -N 6. - С. 48-52.

48. Елкина СИ., Михайлова Н.А., Семенова И.Б., Варгин В.В. Способ оценки защитных свойств иммуномодулирующих препаратов // Заявка на изобретение - приоритетная справка N 2003131194 - 24.10.2003.

49. Семенова И.Б., Ремова Т.Н., Бажанова И.Г., Брицина М.В., Захарова Н.С. Оценка иммуномодулирующей активности новых препаратов для профилактики коклюша - бесклеточной коклюшной вакцины и АКДС-вакцины с бесклеточным коклюшным компонентом // Журн. микробиол. -2004.-Ш.-С. 45-49.

Типография ордена «Знак почета» издательства МГУ 117234, Москва, Ленинские горы Заказ К» 1213 Тираж 100 экз.

И О 3 5 &

Актуальность работы. В последние годы стало очевидным, что способность иммунной системы защищать организм от генетически чужеродной информации может быть подавлена под влиянием экзогенных факторов [15, 87, 124, 125, 136]. Проявления этой патологии описывают как вторичные иммунодефициты.

Вторичные иммунодефициты (ВИД) - это нарушения функции иммунной системы, возникающие как у детей в постнатальном периоде, так и у взрослых, под влиянием разнообразных внешних и внутренних факторов. ВИД обычно обратимы, они исчезают после прекращения действия агента их вызывающего, а также при применении иммунотропных препаратов.

Формирование ВИД описано при всех инфекционных болезнях, возбудителями которых являются бактерии [178]; вирусы [79, 265], гельминты [23, 164] и простейшие [167]; при контакте с продуктами хозяйственной деятельности человека [122]; при чрезмерных физических нагрузках и стрессе [112, 246, 262]; старении [223]; количественных и качественных нарушениях питания [230], разнообразных медицинских вмешательствах, прежде всего при хирургических операциях [77, 190], применении антибиотиков, цитостатиков, рентгенотерапии [107] и т.д.

ВИД рассматривают как важный элемент патогенеза хронических воспалительных заболеваний разной этиологии [120, 126]. С ВИД связывают повышенную чувствительность к инфекциям у длительно и часто болеющих детей [107]; пациентов хирургических стационаров [77]; нарушениях питания [177]; чрезмерных физических и эмоциональных нагрузках [112, 212]. Недавно появились сообщения, которые свидетельствуют о том, что в организме с ВИД активируется мутагенез вирусов и происходит селекция штаммов с повышенной вирулентностью [149].

Для устранения ВИД используют особый класс лекарств -иммунотропные лекарственные средства (ИТЛС), которые нормализуют (корригируют) измененные реакции иммунной системы [12, 102, 103, 117, 120, 183, 184]. В 2002 году создание технологии иммунокоррекции было отнесено к приоритетным направлениям развития науки, технологий и техники Российской Федерации.

Число иммуномодуляторов, используемых в практике или находящихся на разных этапах апробации, непрерывно увеличивается и в 2002 году приблизилось к 1000 [12]. Экспериментальному изучению этих препаратов посвящено большое число работ, в которых основное внимание сосредоточено на характеристике исследуемых веществ по способности модулировать иммунный ответ у интактных животных. Такой подход закреплен в официальных методических указаниях по испытанию новых иммуномодулирующих лекарственных средств [123].

Очевидно, что использование иммунокомпетентных моделей не дает полного представления о главном свойстве иммуномодулятора — его способности нормализовать сформировавшийся ВИД или предупредить развитие иммуносупрессии. Мы предложили новый экспериментальный подход к изучению проблемы иммунокоррекции. Подход основан на оценке корригирующего действия иммуномодуляторов в опытах на мышах с ВИД, сформировавшимися под влиянием факторов, с которыми достаточно часто сталкивается современный человек: вирусы разных таксономических групп (в нашем случае представители Picorna- и Bunyaviridae), различные варианты бактериальных вакцин (корпускулярная и бесклеточная коклюшные вакцины, АКДС вакцина) и распространенные виды стресса (гипокинезии, информационный). В опытах на животных с ВИД исследовали корригирующую активность двух иммуномодуляторов микробного происхождения 2 и 3 поколения - соответственно анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) и ЛИКОПИДА. АСО сочетает иммуномодулирующую активность со способностью индуцировать протективный антистафилококковый иммунитет [93]. ЛИКОПИД обладает только выраженным иммуномодулирующим действием [55, 76,117].

Цель работы: изучить общие закономерности корригирующего действия двух иммуномодуляторов микробного происхождения — анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) и ЛИКОПИДА в экспериментах на животных с ВИД, индуцированными разными факторами. Сопоставить данные экспериментов с результатами применения этих препаратов в клинике.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Исследовать способность АСО и ЛИКОПИДА нормализовать иммунный статус у животных с ВИД, вызванными действием разных по своей природе факторами: вирусами, бактериальными вакцинами, стрессом.

2. Характеризовать влияние иммуномодуляторов на временные дефекты гуморального, клеточного и антиинфекционного иммунитета в экспериментальных условиях при разных схемах применения препаратов.

3. Оценить вероятность развития нежелательных иммунологических эффектов при применении АСО и ЛИКОПИДА.

4. Характеризовать влияние АСО на антигенпредставляющую функцию макрофагов, пролиферацию лимфоцитов и синтез цитокинов у иммунокомпетентных мышей.

5. Изучить влияние иммуномодулятора АСО на формирование протективного иммунитета против коклюша при введении корпускулярной коклюшной вакцины лабораторным животным.

6. Исследовать иммунологические реакции, развивающиеся при комплексной противовоспалительной терапии с включением АСО у женщин с острыми воспалительными заболеваниями придатков матки, ассоциированными со смешанными бактериальными или бактериально-вирусными инфекциями.

7- Разработать в эксперименте оптимальные схемы применения АСО и ЛИКОПИДА, снижающие риск развития нежелательных иммунологических эффектов.

Научная новизна

- Впервые в условиях эксперимента показано, что такие имуномодуляторы микробного происхождения как АСО и полусинтетический препарат ЛИКОПИД, различающиеся по ряду признаков (способу получения, химическому составу, молекулярной массе, наличию специфической протективной активности), демонстрируют общие закономерности действия при коррекции ВИД.

Продемонстрирована способность АСО и ЛИКОПИДА корригировать у лабораторных животных ВИД, формирование которых связано с действием на организм вирусов и стресса, а в случае АСО и нескольких вариантов коклюшной вакцины.

- Установлено, что изученные иммуномодуляторы восстанавливают подавленный гуморальный (АСО, ЛИКОПИД) и клеточный (АСО) иммунный ответ на неродственные антигены, а также исправляют супрессированную резистентность к гетерологичному вирусу (АСО, ЛИКОПИД).

- Доказано, что результат иммунокорригирующего действия АСО и ЛИКОПИДА зависит от дозы препаратов, кратности и схем их введения, а также от генотипа экспериментальных животнных (мышей).

- Описана суммация in vivo иммуномодулироующих сигналов субпороговых доз иммунотропных препаратов и вируса, что приводит к развитию выраженной иммуносупресии.

- Выявлены нежелательные иммунологические эффекты при применении исследованых иммуномодуляторов, которые проявляются как усугубление существующей вирусиндуцированной иммуносупресии (АСО) или как активация скрытой иммуносупресии (АСО, ЛИКОПИД).

- В экспериментах на мышах показано, что АСО модулирует (подавляет, усиливает) антигенпредставляющую функцию макрофагов, пролиферацию лимфоцитов и синтез некоторых цитокинов.

- АСО в рамках комплексной противовоспалительной терапии острых воспалительных заболеваний придатков матки, ассоциированных с разными комбинациями усовно-патогенных и патогенных бактерий, исправляет различные иммунологические нарушения: нормализует число Т-лимфоцитов, их функциональную активность; усиливает фагоциторную активность нейтрофилов крови; повышает уровень IgG. При хламидийно-вирусной инфекции под влиянием анатоксина к показателям нормы возвращается количество лимфоцитов с маркерами CD3+; CD4+; CD8+; CD 19+.

- Выявлена прямая корреляция результатов испытания АСО и ЛИКОПИДА в опытах на животных с ВИД и данных, полученных при применении этих препаратов в клинике, что дает основание рекомендовать инбредных мышей с индуцированной иммуносупрессией в качестве модели для изучения иммунокорригирующей активности иммунотропноых препаратов.

Практическая значимость

Разработан метод прямой оценки корригирующей активности иммунотропных препаратов в опытах на мышах, который базируется на использовании животных с индуцированным ВИД. Предложены три модели ВИД для оценки корригирующего действия иммуномодуляторов: ВИД при вирусной инфекции; ВИД при вакцинации; ВИД при стрессе. -Использование перечисленных моделей позволяет исследовать влияние иммунотропных препаратов на временные дефекты гуморального и клеточного иммунитета, а также на сниженную резистентность к гетерологичной инфекции.

Изучена возможность развития нежелательных иммунологических эффектов при использовании иммуномодуляторов АСО и ЛИКОПИДА. Разработаны схемы применения этих препаратов, исключающие нежелательное действие.

Доказана способность АСО нормализовать временные нарушения гуморального и клеточного иммунитета у женщин с острыми воспалительными заболеваниями придатков матки, ассоциированными с разными комбинациями бактерий или бактерий и вирусов.

Материалы диссертации были использованы при составлении методических рекомендаций:

- "Использование анатоксина стафилококкового очищенного в комплексе лечебных мероприятий при воспалительных заболеваниях придатков матки".

- "Иммунокоррекция в профилактике послеоперационных инфекционных осложнений у гинекологических больных."

Утверждены МЗ РФ, Москва, 1994.

Подана заявка на изобретение «Способ оценки защитных свойств иммуномодулирующих препаратов» (приоритет 24.10.2003., №2003131194).

Основные результаты диссертации отражены в 49 публикациях, в том числе в 25 статьях, а также двух методических рекомендациях и одной заявке на изобретение.

ЧАСТЫ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА 1. ВТОРИЧНЫЕ ИММУНОДЕФИЦИТЫ (ВИД)

Понятие иммунитет вошло в медицинскую и биологическую литературу во второй половине 19 века и использовалось первоначально для обозначения способности организма избавляться (защищаться) от инфекционных болезней. В настоящее время иммунитет рассматривается как способ защиты организма от чужеродной генетической информации, превносимой экзогенными и эндогенными факторами. Эта защита обеспечивает генетический гомеостаз особи в течение онтогенеза, что необходимо для передачи наследственного материала от одного поколения к другому и сохранения вида [15, 69, 87,103, 107, 124, 136].

На исходе 20 века в качестве характерных признаков иммунной системы называют следующие: она различает свое и чужое, формирует память после первичного контакта с чужеродным антигеном, клоны иммунокомпетентных клеток, входящих в систему, взаимодействуют только с одной из множества антигенных детерминант [15, 87,103, 136].

В последнее время стало очевидным, что и антигенные и неантигенные воздействия на организм могут вызывать нарушения функции иммунной системы, которые описываются как вторичные иммунодефициты (синоним — вторичная иммунологическая недостаточность иммунной системы) [91, 107, 109, 124 127, 189, 246]. Эти нарушения играют существенную роль в возникновении, развитии и исходе многих, если не всех, патологических процессов разной локализации и этиологии. Предупреждение и нормализация вторичных иммунодефицитов признается важным и необходимым компонентом лечения инфекционных и неинфекционных болезней. Создание технологии иммунокоррекции отнесено к приоритетным направлениям развития науки, технологии и техники Российской Федерации.

выводы

1. Предложен новый экспериментальный подход к изучению проблемы иммунокоррекции, основанный на исследовании иммунотропных препаратов в организме лабораторных животных со вторичными иммунодефицитами, индуцированными действием различных факторов. Этот подход использовали для изучения корригирующей активности иммуномодуляторов микробного происхождения на примере анатоксина стафилококкового очищенного (АСО) и ЛИКОПИДА.

2. Иммунотропное действие АСО и ЛИКОПИДА оценивали по их способности корригировать вторичные иммунодефициты (ВИД) у мышей. Использовали три экспериментальные модели вторичных иммунодефицитов: ВИД при вирусной инфекции; ВИД, индуцированный разными вариантами бактериальных вакцин, и ВИД, формирующийся под влиянием стресса.

3. АСО и полусинтетический препарат ЛИКОПИД нормализуют нарушения гуморального и клеточного иммунитета и восстанавливают подавленную естественную резистентность к вирусу у инбредных мышей с ВИД, формирование которых обусловлено действием различных по своей природе внешних факторов: вирусы разных таксономических групп (Picorno- и Bunyaviridae), стресс (информационный и в результате гипокинезии), а также нескольких вариантов коклюшной вакцины (корпускулярная, бесклеточная, АКДС) в опытах с АСО.

4. При испытании на моделях с ВИД иммуномодуляторы АСО и ЛИКОПИД могут проявлять корригирующую активность в дозах, которые не обладают иммуномодулирующим действием в опытах на интактных животных.

5. Проявления иммунокорригирующей активности АСО и ЛИКОПИДА зависят от дозы и кратности введения препаратов, временных интервалов между их инокуляцией и воздействием иммуносупрессирующего фактора и от генотипа животных Эффект иммунокоррекции выявляется в индуктивной (-5; -3; -1 дни) и/или в продуктивной фазе иммунного ответа (0; +1; +3 дни)

6. Слабые иммуномодулирующие сигналы субпороговых доз АСО и ЛИКОПИДА могут суммироваться in vivo с аналогичными сигналами субпороговых доз вируса-индуктора ВИД, что приводит к развитию выраженной иммуносупрессии.

7. При введении АСО или ЛИКОПИДА у экспериментальных животных могут развиваться нежелательные эффекты: усугубление выраженной и активация скрытой иммуносупрессии. Предложены схемы применения иммунокорректоров, исключающие развития нежелательных эффектов.

8. Коррекция с помощью АСО ВИД, индуцированного корпускулярной коклюшной вакциной, не препятствует формированию протективного противококлюшного иммунитета. АСО потенцирует иммуногенность коклюшной вакцины.

9. Нормализация с помощью АСО вирусиндуцированной супрессии гуморального иммунного ответа не предотвращает развитие персистенции вируса в ЦНС мышей.

10. Изучение механизма иммуномодулирующего действия АСО в опытах на животных свидетельствует о том, что этот препарат изменяет (усиливает, подавляет) антигенпредставляющую функцию макрофагов, пролиферацию лимфоцитов, а также синтез ряда цитокинов (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6).

11. Экспериментально обосновано включение иммуномодулятора АСО в комплексную противовоспалительную терапию острых воспалительных заболеваний придатков- матки, которые сопряжены со смешанными бактериальными и бактериально-вирусными инфекциями.

12. АСО в рамках общепринятого комплексного противовоспалительного лечения нормализует ВИД у женщин с острыми воспалительными заболеваниями придатков матки, обусловленными комбинациями патогенных и условнопатогенных микроорганизмов. При этом до показателей нормы увеличивается число Т-лимфоцитов; возрастает их функциональная активность; усиливается фагоцитоз нейтрофилов крови; повышается уровень IgG. Коррекция иммунологических показателей происходит на фоне клинического выздоровления.

При хламидийно-вирусной инфекции нрмализуется количество лимфоцитов с маркерами CD3+, CD4+,

CD8+, CD19+.

13. Результаты экспериментов с АСО и ЛИКОПИДОМ свидетельствуют, что инбредные мыши с индуцированным вторичным иммунодефицитом являются информативной моделью для оценки иммунокорригирующей активности иммунотропных препаратов. Выявленная в эксперименте способность АСО и ЛИКОПИДА нормализовать приобретенный иммунодефицит была подтверждена нами (АСО) и другими авторами (ЛИКОПИД) при применении этих препаратов в рамках комплексной противовоспалительной терапии заболеваний с ВИД.