Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Влияние температуры внешней среды на иммунологическую реактивность и формирование алкогольной мотивации у крыс

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

'РСКИМ ГОСУ ДАРСТ ВЕНШЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах р'кописи СУНЯЙКИН КОНСТАНТИН ИВАНОВИЧ

ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЬ. ВНЕШНЕЙ СРЕДЬ) Ш1 ИММУНОЛОГИЧЕСКУЮ РЕАКТИВНОСТЬ И ФОРМИРОВАНИЕ АЛКОГОЛЬНОЙ МОТИВАЦИИ У КРЫС

14.00.36 - Аллергология и иммунология 14.00.17 - Нормальная физиология

Автореферат диссертацм на соисканк.' ученой степени кандидата биологических наук

КУРСУ. 1952

Работа выполнена б Курском государственном ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте

Научные руководители: - доктор медицинских наук, профессор Л Г. Прокопенко,

доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки Российской Федерации А. Е Завьялов

Официальные опсиенты: доктор медицинских наук,

профессор Ю. А. Блинков;

кандидат медицинских наук КХ Е Степанов.

Ведущее учреадение: Московский медицинский университет.

Защита диссертации состоится 199£ г. в ". А* "час.

на заседании специализированного совета К 084. Ь7.01 в Курском государственном медицинском институте (305033, Курск, ул. К. Маркса 3).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Курского государ-свенного медицинского института (305033, Курск, ул. К. Марксе 3)

Автореферат разослан __

Учений секретарь-специализированного совета, кандидат медицинских наук ^ , В. В. Новиков

Актуальность теш. Хронический алкоголизм является одной- из наиболее актуальных, медико-биологических ц. социальных проблем совоеменности. Успешная борьба с алкоголизмом возможна на базе глубокого экспериментального изучения механизмов разлития этого патологического процесса и создания на этой основе рациональных средств его профилактики и лечения.

Первичным результатом действия этанола на организм является 'изменение физ;жо-химических свойств лшюлротеидяого каркаса биологических мембран и в1 пгрвую очередь их текучести (В. И. Музыка и др. ,5 591; F. Beduga,1990; № N. 8ranhay,1990). повышение текучести мембран приводит к изменению характера .белко-во-дипйд2ыс ьзсшйсогноазн;;й и свя8анкс^т с этим нарузоипга функций ...¿ябраи. Этанол действует на мокбршш всех к.геток, но ¡'?~-более чувйтйительны к нему ¡слетки нерыюЯ системы. IIa функции мембран меток других органов и систем этанеi влияет как непосредственно, так и опосредованно черев нейро«едиа?оры (Ей. Алией,1988; A. В. Завьялов, 19П).

' Еатаую роль в формировании иронического апкоголивма играют такяе эндокринная, и иммунная система (7. а Давыдова, 1989; Л И. Дорофеева, 1Q6Ö; R. L. Spenser, 1990). Особенности реагирования иммунной системы на этанол заключаются п невозможности .воспроизведения in vitro на интактной. клетке игунной системы ипгнби-руюц&го эффекта этанола, наличии обратной связи Mew предрасположенность» к этанолу и чувствительностью к нему иммунной системы, иммунологической абстиненции, возможности сенсибилизирующего действия алкоголя, усилении образования антител к ией-ромедиаторам, аутоиммунна лодавлеь,«? или усилении потребления зтачола (В. А. Евсеев, 1990).

Поступление в организм этанола часто сочетается с действием других стрэссорних агентов, которые могу? существенно изие-

нить реакцию иммунной системы на действие алкоголя, К таким

агентам в первую очередь относятся «вменение температуры окру-хаздей среды, физические нагрузки,травмы и инфицирование. Развитие различных форы иммунного ответа при сочетанном действии на организм этанола и других агентов остается мало изученным. Нй ясен тагая вопрос о влиянии различных стрессориих агентов на развитие алкогольной мотивации и о роли иммунологических механизмов в реализации влияния етрессорных агентов на формирование алкогольной, мотивации.

Цель работы - выяснить влияние умеренно высотой и нивкой температуры окружающей среди на развитие иммунного ответа у ад-коголиьированных животных н на формирование алкогольной мотивации .

Задачи работ и:

1) изучить влияние различных доз и режимов поступления этанола на развитие гуморальной и клеточной форм иммунного ответа;

исследовать иммуиомодударующую активность субстанций сыворотки крови животных, потребляющих этанол;

. 3) исследовать ишуномодулирующую активность эритроцитов •животных, потребляющих этанол;

4) исследовать иммуномодулирующую активность факторов су-ператалтов клеток селезенки животных, потребляющих этанол;

5) изучит-. влияние высокой и низкой температуры окружающей среды на иммунологическую активность алкоголизированных животных;

3) изучить влилние прогревания и охлаждения на иммуномодулирующую. активность субстанций сыворотки крови, эритроцитов и

факторов клеток селезёнки алкоголизированных животных;

7} изучить некоторые механизмы влияния иммунной системы на формирование алкогольной мотивации.

Научная новизна. Установлены следующие новые положения, выносимые на защиту: ,

1) действие умеренно высокой или низкой температуры внешней среды усиливает развитие иммунного ответа на Т-зависимый антиген у крыс потребляющих этанол;

2) иммуносупрессия, развивающаяся у крыс, отвергающих этанол после алкоголизации, обусловлена накоплением в крови субстанций, под влиянием которых эритроциты приобретают г лойство индуцировать внделет.э иммуносупрессируюошх факторов клетками селезенки;

3) прогревание алкоголизированных крыс индуцирует выделение неприлипающими к стеклу клетками селезенки факторов, обладающих иммуностимулирующей активностью, охлаждение блокирует выделение иммуносупрессирущих факторов неприлт.ающими клетками селезенки;

4) факторы клеток селезенга, выделяющиеся под влиянием эритроцитов крыс отвергающих этанол, снижают уровень алкогольной мотивация у крыс;

5) прогревание не влияет, охлаждение повышает уровень алкогольной мотивации У крыс;

6) прогревание и охлалценке неодинаково влияют на иммунологические свойства эритроцитов крыс, предпочитающих и отвергающих и отвергающих этанол после алкоголизации.

Практическая значимость. Экспериментально обоснована перспективность изучения эффективности иммуномодуляторов с раз-'

личным механизмом действия ь качестве средств, влияющих на раз Бмтие' алкогольной мотивации, Показана целесообразность разработки способа выявления уровня развития алкогольной мотивации, основанного на определении имыуномодулирущих свойств эритроцитов после прогревания и охлаждения. Установлена необходимость учета влияния изменений температуры внешней среды на иммунологическую реактивность и развитие привыкания к этанолу.

Апробация работы. Основные положения диссертации были обсуждены на заседаниях Курского отделение Российского общества иммунологов (1990 и 1991), на Ь Ьоесоюзном симпозиуме "Взаимодействие нервной и иммунной систем" (Оренбург,1990), на 1 Российском съезде иммунологов (Новосибирск, 1992), на совместном заседании ¡.афедр биологической химии нормальной физиологии Курского государственного медицинского института (1992).

Обьем и структура работы. Диссертация включает разделы: "Введение", "Обзор литературы" (главы 1 и 2), "Материалы и методы" (глава 3), "Результаты собственных иссл юваний " (главы 4-7), "Заключение", "Выводы", "Список литературы".

Работа изложена на //¿? страницах машинописи. Текст включает Ж таблиц. Л рисунков. Библиография Ж источников.

СОДЕРЖАНИЕРАВОТЫ

объект и метода исследования Исследования проведены на 1235 крысах самцах линии "ЕМета,.". Объектами исследования служили: сыворотка крови,

эритроциты, ткань селезенки^—---—---

Алкогольг-'ю интоксикацию вызывали принудительна (внутриже-

лудочное введение 151 этанола через зонд или помещение в условия, при которых единственным источником жидкости бы." 15% этанол) и свободным выбором (животные могли пить как 15% этанол, так и воду).

Для формирования хронической алкогольной интоксикации животные в течении определенного времени (1;3 и 11мес.) имели доступ только к 15Z этанолу. Затем животных переводили в условия свободного выбора. Ежедневно проводили измерение количества выпитых жидкостей. В зависимости от количества и соотношения потребляемого этанола и воды крыс делили на 3 группы. Первую группу составили крысы, предпочитающие этанол (КТО), они потребляли этанола более 50% от обшито объема выпитой жидкости. Во вторую группу вошли крысы, отвергающие этанох (КОЗ), которые пе пили раствор этанола. Остальных относили к промежуточной i руп-пе. Животных прогревали при температуре +40 С по 40 минут или охлаждали при +4 С в т чении 30 минут. В качестве антигенов использовали Т-зависимый антиг н - эритроциты барана (ЭВ) в дозе 2*10 клеток на 1 кг массы тела животного и Т-независимый антиген -липополисахарид S. thyphi 0-901 (ЛПС) в дозе 50 мг на 1кг массы. Развитие гуморального иммунного ответа (ГИО) индуцировали однократным внутрибрюшинным введение" ЭВ или ЛПС. Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) вызывали двукратны?,< введением ЭБ - сенсибилизация внутрибрюшинно(10 клеток ЗВ), введение разрешающей дозы (10 клеток ЭБ)спустя 4 суток в поду-течку задней лапки. Выр&тенность ГИО оценивали на 5 день после иммунизации по количеству клеток селезёнки, образующих антитела (АОК) (К. Мальберг,. Э. Зигль,1987) и числу клеток, образущих иммунные розетки (РОК) (XЗауэр, 1983). Об интенсивности ГЗТ су-.'

. . -6-дшш по разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов и количеству кариоцитоь спустя 24 часа после введения разрешающей доэц (Сго*1е,1975). Интактных и ажоголиэиро-ванных животных умерщвляли обескровлеванием под эфирным нарко-еом. Сыворотку фракционировали на сефадексах.б -200 и б -75. Селезёнку извлекали и готовили взвесь спленоцитов в среде 199 с соблюдением всех правил асептики. Спленоциты фракционировали по их способности прилипать к стеклу (Э. ф, Полушкин и др. 1983) и инкубировали в бессывороточной среде в течении б часов при +37 С. После инкубации клетки осаждали центрифугированием и готовили пул НЖКС, объединяя для этого равные объемы надосадочных жидкостей 5-6 животных. Пул белков клеток селезёнки концентрировали в 10-12 ра? и разделяли на сефадексах 6-150.и (3-75 (ДА.Остер-ман,1983). Иммуномодулируюшую активность хр^атографических фракций сыворотки крови и НЖКС определяли путём однократного внутрибршинного введения их интактным аллогенным реципиентам в дозе 5 иг белка на 1кг массы животного, с одновременной иммунизацией их антигеном (ЭБ). Иммуномодулируювй?» активность эритроцитов определяли введением их интактным аллогенным реципиентам однократно внутри брюшинно вместе с антигеном в дозе 2*10 клеток на 1 кг массы тела В части опытов сывороткой адкоголнзиро-ванных крыс обрабатывали эритроциты интактных животных . (Л Г. Прокопенко и КХО. Яхонтов, 19761.

Стату^тическую обработку материал- проводили путём вычисления средней арифметический (М) и квадротичного отклонения погТаблицам Р. Е Стрелкова (1966).. Существенность различий средних величин оценивали с помощью критериев Стыодента и Вилкоксо-•на-Наина-Уитйи.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Алкоголь поступает в организм, как правило, при одновре-лё: ном действии на него различных физических, химических и биологических агентов внешней среды, которые сами по себе оказыва- 1 ют выраженное влияние на иммунологическую активность организма Вопрос о соЧетанном действии алкоголя и других стрессорных факторов остаётся практически неизученным. Было исследовано имму-номодулирующее влияние этанола, поступающего в течении 28 дней в организм животных, на иммунологическую реактивность крыс, подвергнутых действию высокой и низкой температуры окружающей среды.

Эксперименты поставлены на следующих группах животных: 1) крысах, не подвергавшихся никаким воздействиям, они служили контролем; 2) крысах, потреблявших этанол; 3) крысах, подвергнутых прогреванию; 4) крысах, подвергнутых охлаждению; 5) крысах, потреблявших этанол и подвергнутых грогреванию; 6) крысах, потреблявших этанол и подвергнутых охлаждению.

Животных подвергали трехкратному прогреванию или охлаждению. Иммунизацию или сенсибилизацию ЭВ проводили в последний день воздействия физических факторов.

У КЭ отмечено нерезко выраженное угнетение' развития ГИО и значительное нарушение ГЗТ. Прогревание стимулировало развитие ГИО и ГЗТ у неалкогозированных животных,охлаждение не оказывало существенного влияния на иммунологическую реактивность.

Прогревание и охлаждение нормализо зли развитие ГКО и ГЗТ у крыс, потребляющих эта эл. Таким )бразо^, прогревание у алко-гозирсванных крыс оказало такое же по направленности влияние на

-

развитие . ГИО и ГЗТ как у животных, не иолучашга /этанол, а ож-лаждеш.э, не вызывавшее изменения иммунологической реактивности у неалкоголизированных крыс, стимулировало развитие ГИО и ГЗТ у животных, получавших этанол.

Одним из иммунологических парадоксов алкоголизма является нарушение иммунологической реактивности у животных, отвергающих этанол при нормальном или даже, несколько усиленной имыунйоы ответе на различные антигены у животных, привыкающих к приёму этанола после кратковременного принудительного поступления его в организм (ЕА. Евсеев, ^90 ). Было изучено влияние изменений температуры.внешней среды на развитие иммунного ответа, индуцированного Т-аависишм и Т-невависимш антигенами у КПЗ и К09. Установлено, что интенсивность иммунного ответа на ЭБ и ЛПС у КПЗ была такой же как у животных не получавших этанола, а у КОЭ наблюдалось резкое угнетение иммунного ответа на ЭБ и менее выраженное угнетение реакции, индуцируемой ЛПС . Прогревание КОЗ приводило ослаблению иммуносупрессируюшего влияния этанола на развитие иммунного ответа в отношении Т-аависимого антигена и не оказывало влияния на выраженность реакции, индуцированной Т-независимым антигеном, у клэ,прогревание стимулировало раэпи тие иммунного ответа на ЭБ, но не влияло . на иммунологическую реактивность в отношении ЛПС. Охлаждение усиливало развитие иммунного ответа на ЭБ и ЛПС у КОЭ и КШ( таблица 1)

Исследование влияния длительного (1;3 или 11 мес) потребления КТО этанола показало, что выраженность иммуносупрессорно-ге действия возрастала с увеличением продолжительности потребления с л рта. Так-количество АОК и ЮК ь селезенке крыс, получавших этанол в течении 1 мес. было соответственно в 1,6 и 1,4

Таблица 1. Развитие инминаого ответа на ЗБ и Ж у КПЗ и КОЗ при изменении внешней темлератдры.

NN. пл Группы животных АОК к ЗБ,тис/орган АОК к ЛПС, тыс/орган

5-й день 8-й день 5-Й день 1 8-й день

1 Интактные 24,7±3,1 10,5+1,3 18,б±2,2 7 7+0,9

Интактные, прогретые 36,115.7 Р1< 0,05 11,4±1,9 Р<> 0,05 13,6+2,5 Р1> 0.05 8,0+0,9 Р1> 0,05

3 4 Интактные, охлажденные КОЗ 19,8+2,7 Р1< 0,05 6,6+0.7 Р1< 0,01 9,1 + 1,8 Р1> 0.05 2,8+0,3 Р1< 0,01 13,711,7 Р1> 0,05 10,7+1,6 Р1< 0,05 7,3±о",8 Р1> 0,05 3,1+0,5 Р'< 0,05

5 КОЗ,прогретые 13,0+1,9 Р4< 0.05 ч,9+0г5 Р4< 0,05 11,3+1,7 Р4< 0,05 2,9+0,8 Р4< 0,05

6 КОЗ,охлаждённые 10,8+0,9 Р4< 0.05 4,3+0.6 Р4< 0,05 15,4+1,5 Р4< 0,05 ■ 5,4+0,7 Р4< 0.05

7 НПЗ 23,0±2,8 Р1> 0,05 12,0±1,7 Р1> 0,05 17,4+1,9 Р1> 0,05 8.3+1,1 Р1> 0.05

8 КПЗ.прог-ротые_ 39,4+4,1 Р7< 0,05 12,4+1,7 Р7< 0,05 23,1+2.0 Р7< 0,05 9,6+1.2 Р7< 0,05

9 КПЗ,охла-ндённые 41,8±4,Б Р7< 0,01 | 10,8+1,5 Р7< 0,05 32.1+3,8 Р7с 0,01 10,1+1.4 Р7< ' 05

раза ниже, чем у контрольных животных. У крыс, потреблявших этанол в течение 3 wee. количество АОК и РОК было соотвественно ниже' в 2,3 к 2,0, ау животных, в организм которых этанол поступал в течение Имес. -в 6,0 и 3,9 раза ниже, чем в контроле. Прогревание алкоголиэированных в течении 11 мес. крыс усиливало развитие к:...-/ункого ответа на ЭБ, а охлаждение не влияло на этот ■ процесс.

• Таким образом, после 11 месячного поступления в органам этанола прогревание вызывает усиливающий эффект, а охлаждение (s отличие от 1 месячного лоступления этанола) не оказывает им-мукомедулирующего действия.

Результаты зтих исследований показывают, что при длительном поступлении этанола в организм происходит нарушение процессов регуляции иммунологической реактивности, которые не кор-регируюгея мягко действующем изменением температуры окружающей среды.

Этанол обладает выраженным гепатотропным действием. Алкогольное поражение печени развивается вследствие прямого действия этанола на мембраны геяатоцктов и токсического эффекта вызываемого продуктами метаболизма этанола. Существенную роль в развитии алкогольных поражений печени играют иммунологические механизмы (X. JL Эдмондсок, А. В. Галкин. 1S86, G. Heyirans and ai.1989). При различных формах гепатопатии (инфекционных, токсических, аутоиммунных) проиг 'одит повышение проницаемости мембран гепатоцитов, приводящий к проникновению в сосудистое _ русло субстанций, обладающих иммуномодулирующей активностью. Б

• связи с этим, интересно Сило выяснить, появляются ли аналогич-

• ные субстанции в крови КПЗ,и КиЭ.

: И -

Для решения этого вопроса,. сыворотку крови, полученную после 28-дневной принудительной алкоголизации и последующего 10-дневного прибывания в условиях свободного выбора, вводили Интактным крысам одновременно с иммунизацией их ЗБ. Оказалось,

что сыворотка крови КПЗ стимулировала, а сыворотка КОЭ резко

•

угнетала развитие ГИ0 на ЭВ у реципиентив . Исследована также петукокодуятруюшзя активность фракций сыворотки крови, получениях S результате разделения ее на сефадексе G -200 и последующего разделения низкомолекуллрноп сыворотки на сефадексе G -75. Установлено, что в сыворотке крови КПЗ есть иммуностимулирующий фактор, выделявшийся в составе фракции основную массу которой составляли белки с молекулярной массоП 10-15 кД, а в сыворотке крови КОЭ содержится иммуьосупрессирующий фактор обнаруживаемый в составе фракции, содержащей белки с молекулярной массой, превышающей 200 КД . . .

Большой интерес Представляет Также вопрос о влиянии тепла, холода на накопление им., /номодулируюших факторов в крови ал'ко-голиэированных крыс. Оказалось, что прогревание КТО индуцировало появление в крови КОЭ иммуностимулирующего фактора, выделяемого при хроматографии на сефадексах &-20Г и G-75 в составе фракции, основная лесса белков которой имеет молекулярную массу 10-i5 кД . Фракции сыворотки охлаждённых животных при аллоген-ном переносе не вызывали иммуномодулирущего эффекта

Иммуносупрессирующее действие ■ этанола, ло-видимо-му, обусловлено его прямым или опосредованным влиянием на имму-норегуляторные субпопуляции макрофагов И Т-лимфоцитов. Эффект этих клеток реализуется за счёт выделения ими медиаторов иммунного ответа, среди которых есть химические соединения (в основ- '

ном полипептиды), являющиеся стимуляторами или сулрессораии иммунного ответа на Т-зависимые антигены (Р,Е Петров 1981). В связи' с этим, была исследован \ иымуномодулируюиш активность супернатантов прилипающих и непршшпающих к стеклу клеток селезенки КТО и КОЭ.

Супернатанты кршшааадах и иеярилмавдц к стеклу клеток селезёнки неалкоголизированных крыс в условиях наших опытов не вызывали изменения реактивности организма иа ЭБ. Прилипающие клетки КТО выделают кммуиостимулирущие факторы. Высокой стимулирующей актившстыо об.-здает фракция 1, содержаще белки с молекулярной массой, .превышающей 75 кД, При её введении неалкого-лизировашым «¡вотным, иммунизированным ЭБ, количество АОК и РОК Ош» соответственно в Б,9 и 3,2 раза выше, чем у крыс, которым фракцию не вводили , Менее активнои била фракция 2, основную массу которой составляли белки с молекулярной массой 50-60 кД. Иеприлипающие метки КПЗ выделяют активно действующей иммуносупрессориый фактор. В селезёнке не чкоголизированных крыс, получавших инъекции фракции, содержащей этот фактор.количество АОК и РОК было соответственно в 6.4 и 3,8 раза ниже, чем у контрольных животных.

Прилипающие клетки КОЭ в условиях наших опытов не выделяли имм"номодулирующ1Х субстанций, а иеприлипающие клетки, выделяли фактор, обладающий иммуиосулрессг.ующими свойствами. Им,.1уносуп-ресссркая активность обнаружена при исследовании фракций I и 2, однако более выраженный аффект при алдогешюы переносе вызывала фракам 1. в селеьенке неалкоголизированных, крыо, которым вводили —эту ^фракцию, • количество АОК и РОК было (^ответственно в

• 3,7 и 2,2 ра'! а ниже, 'чем у животных, не получи' их инъекций <

' »

супернатантов епдемсцитов.

Сопоставляя эти данные с результатами исследования иммунологической реактивности КОЗ можно предположить, что иммуносуп-рессирующие факторы выделяемые неприлипающйми к стеклу клетками селезёнки играют определённую роль в подавлении иммунного ответа на ЭБ у этих животных,. Что же касается КПЗ, то их иммуноло ■ гическая рефрактерность в отношении этанола является кажущейся. Клетки селезёнки этих животных реагируют на поступление этанола образованием и выделением (или. только усилением выделения) разнонаправленно действующи субстанций. Вероятно, выявленные субстанции являются функциональными антагонистами. Вместе с тем нельзя исключить, что в организме животных, потреблявших этанол, действие этих субстанций блокируется независимо одно о1} другой.

Прогревание неалкоголизированных крыс индуцировало выделение прилипающими и неприлипающими к стеклу клетками селезёнки иммуностимулирующего фактора. Охлаждение такого эффекта не вызвало. Прогоевание и.охлаждение не влияло на выделение иммуностимулирующего фактора прилипающими клетками КПЗ. Шесте с

I

тем эти агенты отменяли супрессирующий эффект супернатантов непридилающих кле"">к КПЗ. Прогревание индуцировало выделение иммуносупрессирующего фактора прилипающими клетками и отменяло иммупосупрессируюший эффект неприлипаюших клеток КОЗ. Охлаждение но индуцировало выделения ишуномодулипущгч факторов прилипающими »тетками КОЭ, но отменяло имыуносупрессируюший эффект неприлипакадих спленоцитов этих животных (таблица 2).

Таким образом, прогревание и охлаждение отменяют, модулирующую активность супернатантов неприлипаюших клеток селезёнки

Таблица 2. Влияние прогревания и охлавдения на выделение иикуномодулирувцих факторов клетками селезенки КПЗ и КОЗ.

нк

пп

3.

4.

5.

6.

Условия опыта

Контроль IОез «ведения СЦППрПаТЛНТОП )

введение супернатанта прилипающих клеток селезенки прогретых к шмлк. голизиронашшх крыс

Ввсдени'* супернатанта нернилипаищих клеток прогретых неалкоголи зиропанных крыс

Введение супернатанта прилипающих клеток селезенки охласдсшшх неалкоголизироваичых крыс

Введение супернатанта "н'сприлипавщих клеток охлакденных.неалкого-ЛЯЗированных крыс

Введение супернатанта прилипающих клеток про гретых КПЗ

Г ведение супернатанта нспр.»липа11*их_кле1лк— прогретых КПЗ

К во крыс

К-во ЙОК, тыс/орган

18.7 ± 1.9

30.4 * 2.8 Р1< 0,05

31.2 • 2.9 Р1< 0.05

19.1 ± 1,8 Р1> 0.05

17,2 ♦ 1.6 Р1> 0.05

35,8 ± 2.6 Р1< 0,05

20.5-^,-3-Р1> 0.03

К-во РОК. мнл/орган

5

82.5 1 0.7

126.0 13,1 Р1< 0,05

131.4 ♦ 15,7 Р1< 0.05

84.2 1 9,8 Р1> 0.05

85,4 ± 8.9 Р1> 0.05

146.0 ± 17,5 Р1< 0,05

_8?,Й1 9,3

Р1> 0.05

ГТодолжение таблицы 2.

1 2 • 3 4 5 !

8, Введение супернатанта прилипащих клеток охлажденных КПЗ 9 21.1 ± 2.3 Р1> 0.05 ♦ 85.4 1 8.9 Р1> 0.05

9. Ведение супернатанта нрприлипавщих охлажден них клеток КПЗ 9 20.5 ± 2.3 Р1> 0.05 83,3 1 9,2 Р1> 0,05

10. Введение супеонатанта прилипающих клеток селезенки прогретых КОЗ 9 42.6 ± 3.8 Р1< 0.01 164,0 ± 19,9 Р1< 0,01

11. Введение супернатанта неприлипакщих клеток селезенки прогретых КОЗ 22,0 1 2.6 Р1> 0.05 84,8 ± 8.? Р1> 0,05

12. Введение супернатанта прлилаащих клеток селезенки охлажденных КОЗ 9 23,0 1 1.8 Р1> 0.05 87.4. ± 9,5 Р1> 0.05

13. 1 Введение супернатанта неприлйпающих" клеток селезенки охлааденных КОЗ 8 22,3 ± 1,9 Р1> 0,05 83,7 ± 0.9 Р1> 0.05

КПЗ я КОЗ, однако механизм действия этих агентов по-видимому различен. Учитывая тот факт, что прогревание индуцирует выделение спленоцитами кеалкоголизированнш; животных иммуностимулирующего фактора, а охлаждение такого эффекта ке вызывает,, можно предположить , что прогревание приводит к выделению неприлипаю-щими клетками соединений, яэдяюаихся ингибиторами или функциональными антагонистами иммуносулрессирующего фактора клеток ал-коголизированных крыс, охлаждение блокирует выделение иммуносулрессирующего фактора этими клетками.

Действие на организм некоторых Фиаических и химических агентов (высокой внешней температуры, вибрации , тетрахлормета-на, протеолитических ферментов) приводит к появлению в их сосудистом русле эритроцитов, обладающих кммукомодулируюшлми свойствами (Л. Г. Прокопенко, ¡а О.Яхонтов, 1975; Л Г. Прокопенко и др. 1983; Л Г. Прокопенко, Г. А. Чалый, 1985; Е. А. Яковлева, Л. Г. Прокопенко, 1990). Естественно было предположить •■ наличие таких эритроцитов в крови алкоголизировакных крыс. Эксперименты, проведенные с целью проверки этого предположения, показали, что эритроциты КПЗ яри аллогекном переносе не Влияли на развитие ГКО, индуцированного Э£, а эритроциты КОЭ суарессировали этот- процесс. Результаты, проведенных экспериментов свидетельствуют о существенном различии свойств эритроцитов КПЗ л КС-.

Появление иммуномсдулирующих свойств при тепловом и вибрационной поражениях, токсической гепатопатии и введении протео--г.т-.ческнх ферментов обусловлено действием на мембрану 'клеток

с; проточных факторов (Р, 0. .Яхонтов,-Л Г. Прокопенко, 1986;

Г. А. А. И. Кокгпля, 1989). Можно думать, что аналогич-

на явление иесто при алкогольной интоксикации. Опыты,

поставленные для выяснения этого вопроса .показали, что обработка эритроцитов интактных крыс сывороткой крови ЧТО не индуцировала появления у них иммуномодулирующих свойств, а нчкуба-ция эритроцитов интактных крыс с сывороткой КОЗ приводила к появлению у них иммуносупрессирующей активности.

Результаты этих экспериментов позволяют пр^д! сложить, что в сыворотке крови КТО отсутствуют гуморальные субстанции, инду цирующие появление иммуномодулирующих свойств у эритроцитов, а в сыв ротке крови КОЭ есть субстанции, под влиянием которых эритроциты приобретают иммуносупрессмруидие свойства.

Иммунологическая ареактивность эритроцитов интактных крыс, обработанных сывороткой крови КТО. не может рассматриваться как доказательство отсутствия в сыворотке КГБ субстанций, оказывающих влияние на свойства мембраны эритроцитов. Можно было, в частности, предположить, что в сыворотке крови КПЗ есть соединения, не выявляемые с помощью избранной нами экспериментальной модели.

Ранее было установлено, что эритроциты животных, подвергнутых действию высокой внешней температуры или вибрации, отравленных тетрахлорметаном или получавших инъекции протеолити-ческих ферментов, индуцируют выделение иммуномодулирующих факторов клетками селезенки (Ю. 0. Яхонтов, 1980; Г. А. Чалый, 1987; А. И. Конопля, 1989; Е. А. Яковлева, 1990). Нами было изучено влияние эритроцитов КПЗ и КОЭ на выделения иммуномодулирующих факторов прилипающими и неприлипаювдми клетками селезёнки иеалкоголиаи-рованных крыс. Оказалось, что клетки селезенки крыс, получавших инъекции эритроцитов ШЭ не выделяют иммуномодулирующих факторов. Нршш! дацие • клетки селезёнки крыс, получавших инъекции

эритроцитов КОЭ не выделяли иммуномодулирующих факторов,а неп-рилипающие клетки селезенки этих животных выделяют фактор (или факторы ), вызывающий при аллогенном переносе иммуносупрессиру-ющий эффект.

Иследован влияние прогревания и охлаждения на иммуномоду-лирующие свойства эритроцитов алкоголизированных животных. Ока-эалось, что прогревание индуцировало появление иммуностимулирующих свойств у эритроцитов КПЗ, но не оказывало существенного влияния на иммуносупрессорную активность эритроцитов КОЭ. Охлаждение индуцировало появление иммуномодулируюших свойств у эритроцитов гШЭ и отменяло появление иммуносупрессирующих свойств у эритроцитов К09.

Результаты этих опытов показывают, что появление иммуномо-дулнруюишх свойств у эритроцитов после прогревался или охлаждения может Сшь одним из признаков возникновения привыкания при потреблении этанола.

Литературные материалы и данные проведенных нами экспериментов свидетельствуют о значительном различии иммуннорегуля торных механизмов, реализующихся в организме животных, предпо-читаших и отвергающих этанол, после 28 дневного периода принудительной алкоголизации. В связи с этим возникает предположение о существовании зависимости между изменениями иммунологической реактивности, ровникающими под влиянием этанола и действия других стрессорных агентов, оказывающих влияние на функцию иммунной системы влечения организма к этанолу. Учитывая результаты проведанных на«1 экспериментов, интересно-было выяснить, как . дкяот ¡!?мен?н;!я темлературы внешней среды на огнопен"е животных к этанолу.

- 19 -

После принудительной алкоголизации в течении 28 дней из 80 крыс 1Ь (18,75%) привыкли к потреблению этанола, а 48 живот ных (602; предпочитали пить воду. Прогревание в последние дни принудительной алкоголизации не изменяло (1б, 207.) число животных привыкших к этанолу, а охлаждение увеличивало число таких животных (31 и 38,75%). Охлаждение увеличивало потребление этанола КПЭ, находящимися в условиях свободного выбора.

Таким образом, одинаковый по направленности иммуномодули-рующий эффект прогревания и охлаждения при алкоголизации сочетается с различным влиянием изменеиий температуры внешней среды на влечение к этанолу.

В *эыше было показано, что иммуностимулирующей эффект прогревания в определенной степени обусловлен выделением спленоци-тами факторов, обладающих иммуностимулирующими свойствами, а аналогичный эффект охлаждения - отменой иммуносупреесорной активности факторов клеток селезёнки. Сопоставляя эти данные с влиянием прогревания и охлаждения на влечение к этанолу, можно предположит ¿>, что определённую роль в его формировании играют иммуносупреесирующие факторы, выделяющиеся челрилипающими клетками селезёнки КС©. Для проверки этого предположения крысам, принудительно потреблявшим этанол, внутрибрюшинно вводили фракции 1 супернатанта неприлипавдих клеток селеаёнки (полученные § при фраг'дионировании сулернатантов клеток на сефадексе 0-75) КПЗ и КОЭ. Установлено, что число предлс штанлцих этанол крыс, получавших инъекции фракции КПЭ и КОЭ равнялось соответственно 14 (17,5%) и 7 (8,8%). Крысы, получавши^ инъекции фракции 1 КОЭ, потребляли этанола меньше, чем животные которым вводили О Фракцию 1 КПЭ (соответственно - 74,1 * 5,3 и 103,8 + 12,4).

Результаты этих исследований, по нашему мнению,представляют принципиальный интерес. Они показывают, что факторы выделяе-/мые клетками селезенки алкогодиэированных животных, играют важную роль в развитии алкогольной мотивации.

ВЫВОДЫ

1. Интенсивность иммунного ответа н? ЗБ и ДЯС у КТО не отличается от кормы, а у КОЭ существенно снижена Прогревание КТО стимулирует у них развитие иммунного ответа на ЭБ, но не влияет на иммунологическую реактивность в отношении ЛПС. Прогревание КС0 приводит к ослаблению иммуносулрессирующего влияния этанола на развитие иммунного ответа в отношении ЭБ и не оказывает влияния нп выраженность реакции, индуцированной ЛПС. Охлаждение усиливает развитие иммунного ответа на ЭБ и ЛПС у обеих групп животных.

2, Сыворотка крови КЛЭ при аллогенном переносе стимулирует, а сьшоротка крови КОЭ супрессирует развитие иммунного ответа на ЭБ. В сыворотке КПЭ обнаружен иммуностимулирующий фактор, а в сыворотке крови КОЭ содержится иммуносупрессируюший фактор. Прогревание индуцирует появление в крови КОЭ иммуностимулирующего Диктора Сракцим сыворотки охлажденных КПЭ и КОЭ .не обладают иммуномодулирушими свойствами.

3. Прилипаете к стеклу клетки селезенки КПЭ выделят фактор (или ({акторы), стимулирующие развитие иммунного ответа-на ЭБ, нгпридипащие клетки КПЭ выделяют фактор (или факторы), вызыва-теие сильно выраженный ,<мму>;осупррссорный эффект. Беприлипахшше к стеклу клетки КОЭ вылеллю? ¿актер (или факторы), С'^дгиядагЛ ергигтва«;. Прилипающие клетки

зелезенки КОЗ иммуномодулируюших факторов не виде ля от или выделяют их ь количествах, не выявляемых при аллогенном переносе,

4. Прогревание индуцирует выделение неприлипающими клетками селезенки КПЗ и КОЗ иммуностимулирующего фактора. Охлаждение тормозит выделение иммуносупрессирующего фактора неприлипающими »тетками КОЗ.

5. Эритроциты КПЗ не выделяют, а эритроциты КОЗ супреееируот развитие иммунного ответа при аллогенном переносе. Эритроциты КОЗ индуцируют выделение неприлипающими к стеклу клетками селезенки иммуносупрессируюцего фактора.

6. Прогревание индуцирует появление в крови КПЗ эритроцитов, обладающих иммуностимулирующими свойствами, но не влияет на им-муносупрессирующую активность КОЭ. Охлаждение не индуцирует появление иммуномодулирующих свойств у эритроцитов, но отменяет Появление иммуносупреесирующих свойств у эритроцитов КОЭ.

7. Прогревание не влияет, а охлаждение повышает уровень алкогольной мотивации. Снижение уровня алкогольной мотивации, происходит при введении животным иммуносупрессирующего фактора клеток се/ зенки, выделение которых прслсходит под влиянием эритроцитов КОЭ.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Иммунг ш система и привыкание к алкоголю. - Тезисы докладов Б Всесоюзного симпозиума "Взаимодействие нервной и иммунной систем". Ленинград, Ростов - на - Дону, 1990,* С-184. (соавт. Л. Г. Прокопенко) 2, Развитие иммунного ответа у алкоголи-йированных крыс,выполнявших физическую нагрузку.-Материалы итоговой научной конференции института. Курск, 1991, С-115. 3. При-

выкание к алкоголю и иммунологическая реактивность. -Актуальные вопросы хирургической гастроэнтерологии. Курск, 1991, С-140. 4. Реакция иммунной системы на изменения внешней температуры при алкогольной интоксикации. -Тезисы докладов 1 съезд иммунологов России. Новосибирск, 1992, С-465.