Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Влияние температуры внешней среды на иммунологическую реактивность и формирование алкогольной мотивации у крыс

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

12 9/2

РСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах г^кописи СУНЯЙКЖ КОНСТАНТИН ИВАНОВА!

ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЬ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ Н/ ИММУНОЛОГИЧЕСКУЮ РЕАКТИВНОСТЬ И ФОРМИРОВАНИЕ АЛКОГОЛЬНОЙ МОТИВАЦИИ У КРЫС

14.00.35 - Аллергология и иммунология 14.00.17 - Нормальная физиология

Автореферат диссертации на соискат.-' ученой степени кандидата биологических наук

КУРСК 1952

' >

Работа выполнена в Курском государственном Красного Знамени медицинском институте

ордена Трудового

Научные руководители: - доктор медицинских наук, профессор Л Г. Прокопенко,

доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки Российской Федерации А. В. Завьялов

Официальные опонекты: доктор медицинских наук,

профессор Ю. А. Блинков;

кандидат медицинских наук ¡0. Е Степанов.

Ведущее учреждение: Московский медицинский университет.

Залита диссертации состоится 199^ г. в ". "час.

ш заседании специализированного совета К 084. 57.01 в Курском государственном медицинском институте (305033, Курск, ул. К. Маркса 3).

С .диссертацией можно ознакомится в библиотеке Курского государ-свенного медицинсюго института (305033, Курск, ул. К. Марксе 3)

Автореферат разослан " " ^/¿/¿¿"С/-ъ* 1992г.

Учелил секретарь' специализированного совета, кандидат медицинских наук -1 . В. В. Новиков

Актуальность теми, фонический алкоголизм является одной из наиболее актуальных медико-биологических и социальных проблем современности. Успешная борьба с алкоголизмом возможна на базе глубокого экспериментального изучения механизмов развития этого патологического процесса и создания на этой основе рациональных средств его профилактики и лечения.

Первичным результатом действия этанола на организм является изменение физико-химических свойств липопротеидного каркаса биологических измбрак >< в' первую очередь яд текучести (3. И. Музыка и др., 1991; F. Beduge, 1590; М. N. Бгап)юу, 1080). Повышение текучести мембран приводит к изменении характера .белко-¿о-липидниХ взаи;,;ос?по:нн;-:3 и связанному с откм парушепиг. функций ...е;.-Яран. Этанол действует на мембран« всех клеток, но н?"-солее чуьсга/Л'ельны к нему клетки нервной с истеки. ¡Ь функции мембран клеток других органов и систем этане л влияет как непосредственно, так и опосредованно через нейромедиаторы (Н. а. Алиев, 1988; ^ В Завьялов, 19Г0).

Важную роль в формировании иронического алкоголизма играют тага® эндокринная, и иммунная системы (Т. В. Давыдова, 1089; Л. И. Дорофеева, 1989; R. L. Spenser, 1990). Особенности реагирования иммунной системы на этанол замючаются в невозможности воспроизведения in vitro на кнтактной.клетке ю/-унной системы ингиби-рущзго эффекта этанола, наличии обратной связи мевду предрасположенностью к этанолу и чувствительностью к нему иммушюЛ системы, иммунологической абстиненции, возмодпети сенсибилизирующего действия алкоголя, усилении образования антител к ией-ромэдиаторам, аутоиммунном подавле>..:е или усиления потребления этанола (В. А. Евсеев, 1990).

Поступление в организм этанола часто сочетается с действием других стрессорных агентов, которые могут существенно изке-

нить реакцию иммунной системы на действие алкоголя. К тшшм агентам в первую очередь относятся .»вменение температуры окружающей среди, физические нагрузки, транш и инфицирование. Развитие различных форы иммунного ответа при сочетанном действии на организм этанола и других агентов остаётся мало изученным. Не ясен также вопрос о влиянии различных стрессориих агентов на развитие алкогольной мотивации и о роли иммунологических механизмов в реализации влияния стрессорных агентов на формирование алкогольной мотивации.

Цель работы - выяснить влияние умеренно высокой и низкой температура окружающей среди на развитие иммунного ответа у ал-когодизированних животных и на сформирование алкогольной мотивации .

Задачи работы:

1) изучить влияние различных доз и режимов поступления ътаьила на развитие гуморальной и клеточной форм иммунного ответа;

исследовать иимуномодулирующую активность субстанций сыворотки крови животных, потребляющих этанол;

. 3) исследовать иммуномодуллрующую активность эритроцитов кивогннх, потребляющих этанол;

4) исследовать иммуномодулирующую активность факторов су-ператацтов меток селезенки животных, потребляющих этанол;

Ь) изучит', влияние высотой и низкой температуры окружающей среды на иммунологическую штгивность алкоголизированных животных;

о) изучить влияние прогревания и охлаждения на ишуномоду-шфуюаую. активность субстанций сыворотки крови, эритроцитов и

факторов клеток селезёнки алкоголизированных животных;

7) изучить некоторые механизмы влияния иммунной системы на формирование алкогольной мотивации.

Научная новизна. Установлены следующие новые положения, выносимые на защиту:

1) действие умеренно высокой или низкой температуры внешней среды усиливает развитие иммунного ответа на Т-зависимый антиген у крыс потребляющих этанол;

2) иммунбсупрессия, развивающаяся у крыс, отвергающих этанол после алкоголизации, обусловлена накоплением в крови субстанций, под влиянием которых эритроциты приобретают <• лойство индуцировать выделена иммуносупрессируюших факторов клетками селезенки;

3) прогревание алкоголизированных крыс индуцирует выделение неприлипакадими к стеклу клетками селезенки факторов, обладающих иммуностимулируюагй активностью, охлаждение блокирует выделение иммуносупрессируюших факторов неприлипающими клетками селезенки;

4) факторы клеток селеэешси, выделяющиеся под влиянием эритроцитов крыс отвергающих этанол, снижают уровень алкогольной мотивации у крыс;

5) прогревание не влияет, охлаждение повышает уровень алкогольной мотивации у крыс;

6) прогревание и охлаждение неодинаково влияют на иммунологические свойства эритроцитов крыс, предпочитающих и отвергающих и отвергающих этанол после алкоголизации.

Практическая значимость. Экспериментально . обоснована перспективность изучения эффективности иммуномодуляторов с раз-

личным механизмам, действия в качестве средств, влияющих на раз вмтие алкогольной мотивации. Показана целесообразность ргшра-ботки способа выявления, уровня развития алкогольной мотивации, основанного на определении иммуномодулируювдх свойств эритроцитов после прогревания и охлаждения. Установлена, необходимость учета влияния изменений температуры внешней среды на' иммунологическую реактивность и развитие привыкания к этанолу.

Апробация работы. Основные положения диссертации были обсуждены на заседаниях Курского отделение Российского общества иммунологов (1990 и 1991), на Ь Всесоюзном симпозиуме "Взаимодействие нервной и иммунной систем" (Оренбург,1990), на 1 Российском съезде иммунологов (¡Новосибирск, 1992), на совместном заседании ¡-.¿4«ДР биологической химии нормальной физиологии Курского государственного медицинского института (1992).

Обьем и структура работы. Диссертация включает разделы: "Введение", "Обзор литературы" (главы 1 и 2), "Материалы и методы" ( глава 3), "Результаты собственных иссл ;ований " ( главы 4-7), "Заключение", "Выводы", "Список литературы".

Работа изложена на //£• страницах машинописи. Текст включает таблиц, _21 рисунков. Библиография 12L источников.

СОДЕРЖАНИЕРАБОТЫ

cjLEKT и метода исследования

Исследования проведены ни 1235 крысах самцах линии "Виета,.". Объектами исследования служили: сыворотка крови, эритроциты, ткань селезенки.

Алкогольгчо интоксикацию вызывали принудительна ( внутриже-

лудочное введение 15% этанола через зонд или помещение в условия, гри которых единственным источником жидкости бы." 15% этанол) и свободным выбором (животные могли пить как 15% этанол, так и воду).

Для формирования хронической алкогольной интоксикации животные в течении определенного времени (1;3 и Имес.) имели доступ только к 15% этанолу. Затем животных переводили в условия свободного выбора. Ежедневно проводили измерение количества выпитых жидкостей. В зависимости от количества и соотношения потребляемого этанола и воды крыс делили на 3 группы. Первую группу составили крысы, предпочитающие этанол (КПЗ), они пот-робляли этанола более 502 от общего объема выпитой жидкости. Во вторую группу вошли крысы, отвергающие этанол (КОЗ), которые не пили раствор этанола Остальных относили к промежуточной 1 руп-пе. Животных прогревали при температуре +40 С по 40 минут или охлаждали при +4 С в т чении 30 минут. В качестве антигенов использовали Т-зависимый антиг н - эритроциты барана (ЭБ) в"дозе 2*10 клеток на 1 кг массы тела животного и Т-неэависимый антиген -липополисахарид Э. ИчурЫ 0-901 (ЛПС) в дозе 50 мг на 1кг ■ массы. Развитие гуморального иммунного ответа (ГИО) индуцировали однократным внутрибрюшинным введение- • ЭБ или ЛПС. Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) вызывали двукратным введением ЭБ - сенсибилизация внутрибрюшинно(10 клеток ЭБ), введение разрешающей дозы (10 клеток ЭБ)спустя 4 суток в подушечку задней лапки. Выраженность ГИО оценивали на 5 день после иммунизации по количеству клеток селезёнки, образующих антитела (АОК) (К. Мальберг, Э.3игль,1987) и числу клеток, образующих иммунные розетки (РОК) (X Зауэр,1983). Об интенсивности ГЗТ су- '

дшш по разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов и количеству кариоцитоь спустя 24 часа после введения разрешающей дозы (Сгои1е,1975). Интактных и алкоголиэиро-ванных животных умерщвляли обескровлеванием под эфирным парковом. Сыворотку фракционировали на сефадексах 6 -200 и в -75. Селезенку извлекали и готовили взвесь спленоцитов в среде 199 с соблюдением всех правил асептики. Спленоциты фракционировали по их способности прилипать к стеклу (Э. Ф, Полушкин и др. 1983) и инкубировали в бессывороточной среде в течении 6 часов при +37 С. После инкубации клетки осаздали центрифугированием и готовили пул НЖКС, объединяя для этого равные обгемы надоеадочных «ид-костей 5-6 животных. Пул белков клеток селезенки концентрировали в 10-12 ра? и разделяли на сефадексах (5-150 и 6-75 (Л. А. Сстер-ман,1983). Иммуномодулирующую активность хр...атографических фракций сыворотки крови и НЖКС определяли путем однократного внутрибршинного введения их интактным аллогенным реципиентам в дозе 5 мг белка на 1кг массы животного, с одновременной иммунизацией их антигеном (ЭБ). Иммуномодулирующую активность эритроцитов определяли введением их интактным аллогенным реципиентам однократно внутри брюшинно вместе с антигеном в дозе 2*10 клеток на 1 кг массы тела В части опытов сывороткой алкоголизиро-ванных крыс обрабатывали эритроциты интактных животных . (А Г. Прокопенко и Ю.О. Яхонтов, 19761.

Статистическую обработку материал проводили путем вычисления средней арифметическ-й (Ы) и квадротичного отклонения погтаблицам Р. Б. Стрелкова (1966).. Существенность различий средних величин оценивали с помощью критериев Стьюдента и Вилкоксо-•на-Манна-Уитйи.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Алкоголь поступает в организм, как правило, при одновре-мё: ном действии на него различных физических, химических и биологических агентов внешней среды, которые сами по себе оказывают выратенное влияние на иммунологическую активность организма. Вопрос о сочетанном действии алкоголя и других стрессорных факторов остаётся практически неизученным. Было исследовано имму-номодулирующее влияние этанола, поступающего в течении 28 дней в организм животных, на иммунологическую реактивность крыс, подвергнутых действию высокой и низкой температуры окружающей среды.

Эксперименты поставлены на следующих группах животных: 1) крысах, не подвергавшихся никаким воздействием, они служили контролем; 2) крысах, потреблявших этанол; 3) крысах, подвергнутых прогреванию; 4) крысах, подвергнутых охлаждению; 5) крысах, потреблявших этаном и подвергнутых прогреванию; 6) крысах, потреблявших этанол и подвергнутых охлаждению.

Животных подвергали трёхкратному прогреванию или охлаждению. Иммунизацию или сенсибилизацию ЭБ проводили в последний день воздействия физических факторов.

У КЗ отмечено нерезко выраженное угнетение развития ГИО и значительное нарушение ГЗГ. Прогревание стимулировало развитие ГИО и Г37 у неалкогозированных животных,охлаждение не оказывало существенного влияния на иммунологическую реактивность.

Прогревание и охлаждение нормализс зли развитие ГКО и ГЗТ у крыс, потребляющих эта эл. Таким образов, прогревание у.алко-гозирсваккых крыс оказало тзкое же по направленности влияние на

' - -

развитие ГИО и ГЗТ как у животяых, не цолучниш этанол, а ох-

лавдеш.э, не вызывавшее изменения иммунологической реактивности у неалкоголизированных крыс, стимулировало развитие ГИО и ГЗТ у животных, получавших этанол.

Одним из иммунологических парадоксов алкоголизма является нарушение иммунологической реактивности у животных, отвергающих этанол при нормальном или даже несколько усиленном иммунном ответе на различные антигены у животных, привыкающих к приему этанола после кратковременного принудительного поступления его в организм (К А. Евсеев, ^90 ). Было изучено влияние изменений температуры.внешней среды на развитие иммунного ответа, индуцированного Т-зависимым и Т-независимым антигенами у КТО и КОЭ. Установлено, что интенсивность иммунного ответа на ЭБ и Ж) у ¡ИВ была такой же как у животных не получавших этанола, а у КОЭ наблюдалось резкое угнетение иммунного ответа на ЭБ и менее выраженное угнетение реакции, индуцируемой ЛПС . Прогревание КОЭ приводило ослаблению иммуносупрессирующего влияния этанола на развитие иммунного ответа в отношении Т-зависимого антигена И Не оказывало влияния на выраженность реакции, индуцироьаьной Т-нсоаписимым антигеном. У КГБ.прогревание стимулировало росши тие иммунного ответа на ЭБ, но не влияло на иммунологическую реактивность ь отношении ЛПС. Охлаждение усиливало развитие им-• ыунного ответа на ЭБ и ЛПС у КОЭ и КЮ( таблица 1)

Исследование влияния длительного (1;3 или 11 мес) потребления КТО этанола показало-, что выраженность иммуносупрессорно-го действия возрастала с увеличением продолжителъност,; потребления с ирта. Так -количество АОК и РОК в селезенке крыо, полу-• чавших этанол в течении 1 мес. было соответственно в 1,6 и 1,4

. Таблчца 1. Развитие иммунного ответа на ЭБ и ЛПС у КПЗ ' и КОЗ при изменении внсинсй температуры.

ЯК пл Группы животных ЙОК к ЗБ,тис/орган А0К к ЛПС, тыс/орган

5-Й день 8-й день 5-й день 1 8-й день

1 Интакпше 24,7+3,1 10,5 + 1.9 18,6±2,2 7 7+0,9

1. Интактные, прогретые 36,1+5,7 Р1< 0,05 11,4+1,9 Р<> 0,05 19,6+2,5 Р1> 0,05 8,6+0,9 Р1> 0.05

■з 4 Интактные, охлажден- ныс КОЗ 19,8+2.7 Р1< 0,05 6.6+0.7 Р1< 0.01 9,1+1,8 Р1> 0.05 2.8+0,3 Р1< 0,01 13,7Л,7 РЬ О.ОЬ 10,7+1,6 Р1< 0,05 7,3+0,0 Р1> 0,05 3,1+0,5 ■ Р'< 0,05

5 КОЗ,прогретые 13,0+1,3 Р4< 0,05 •1,9+0.5 Р4< 0,05 И,3л1.7 Р4< 0.05 2,9+0,8 Р4< 0,05

6 КОЗ,охлажденные 10,8+0,9 Р4< 0.05 4,3+0,6 Р4< 0,05 15.4+1,5 Р4< 0,05 ■ 5,4+0,7 Р4< 0.05

7 КПЗ 23,0±2,8 Р1> 0,05 12,0±1,7 Р1> 0,05 17,4+1,3 Р1> 0,05 3.3+1.1 Р1> 0,05

8 КПЗ,прогретые 39,4+4.1 Р7< 0,05 12,4+1,7 Р7< 0,05 23,1+2.0 Р7< 0.05 9,011,2 Р7< 0,05 *

9 КПЗ,охлаждённые 41,8±4,6 Р7< 0,01 10.8+1,5 Р7< 0,05 32.1±3.8 Р7< 0,01 10.1+1.4 Р7< ' 05

раза ниже, чем у контрольных животных. У крью, потреблявших этанол в течение 3 мес. количество АОК и РОК было соотвественно ниже; в 2,3 и 2,0, ау животных, в организм которых этанол поступал в течение 11мес. -в 6,0 и 3,9 раза ниже, чем в контроле. Прогревание алкоголизировакных в течении 11 мес. крыс усиливало развитие иммунного ответа на ЭБ, а охлаждение не влияло на этот•процесс.

Таким образом,после 11 месячного поступления в организм ■ этанола прогревание вызывает усиливающий эффект, а охлаждение (в отличие от 1 месячного лоступления этанола) не оказывает иы-мукомсдулирукщ,его действия.

Результаты этих исследований показывают, что при длительном поступлении этанола в организм происходит нарушение процессов регуляции иммунологической реактивности, которые не кор- * регирухягся мягко действующим изменением температуры окружающей среды.

Этанол обладает выраженным гелатотропннм действием. Алкогольное поражение печени развивается вследствие прямого % действия этанола на мембраны гепатоцитов и токсического эффекта вызываемого продуктами метаболизма этанола Существенную роль а развитии алкогольных поражений печени играют иммунологические механизмы (X. Л. Здмондсон, А. а Галкин 1986, 6. Heyirans and \ •■[ ai. 1983). При различных формах гепатопатии (инфекционных, ';.' токсических, аутоиммунных) яроигчадит повышение проницаемости -iv' мембран гепатоцитов, приводящий к проникновению в сосудистое «V-_ русло субстанций, обладающих иммуномодудирующей активностью. В • связи с этим, интересно было выяснить, появляются ли аналогии* ные субстанции в крови КПЗ, и КоЭ.

- и -

Для решения этого вопроса,. сыворотку крови, полученную после 28-дневной принудительной алкоголизации и последующего 10-дНевного прибывания в условиях свободного выбора, вводили интактным крысам одновременно с иммунизацией их ЭБ. Оказалось, что сыворотка крови КПЗ стимулировала, а сыворотка KQ0 резко угнетала развитие ГИО на ЭБ у реципиентов . Исследована также ттмуяомолулфуюшая активность фракций сыворотки крови, получении* В результате разделения ее на сефадексе G -200 и последующего разделения низкомолекулярной сыворотки на сефадексе G -75. Остановлено, что в сыворотке крови КТО есть иммуностимулирующий фактор, выделяющийся в составе фракции основную массу которой составляли белки с молекулярной массой 10-15 кД, а в сыворотке кровь КОЭ содержится ишуьосупрессирующий фактор. обнаруживаемый в составе фракции, содержащей белки с молекулярной массой, превышающей 200 кД .

Большой интерес представляет также вопрос о влиянии тепла, f Ьлэда на накопление им. уномодулмрующих фшггоров в крови ал'ко-голизированных крыс. Оказалось, что прогревание КПЗ индуцировало появление в крови КОЭ иммуностимулирующего фактора, выделяемого при хроматографии на сефадексах G-20P и G-75 в составе фракции, основная масса белков которой имеет молекулярную массу 10-15 кД . Фракции сыворотки охлаждённых живот ..ых при аллоген-ном переносе не вызывали иммуномодулиругацего эффекта.

Иммуносупрессирующее действие • этанола, ,ю-видимому, обусловлено его прямым или опосредованным влиянием на имму-норегуляторные субпопуляции макрофагов и Т-лимфоцитов. Эффект этих клеток реализуется за счёт выделения ими медиаторов иммунного ответа, среди которых есть химические соединения (в основ- '

ном полипептиды). являющиеся стимуляторами или супрессоршш иммунного ответа на Т-эависише антигены (Р. Е Петров 1981). В связи' с этим, была исследован \ имыуномодулирующая активность супернатантов прилипающих и непршшпающих к стеклу теток селезенки КПЗ и КОЭ.

Супернатанты прилипаэди и непршшпаюащ к стеклу клеток еелеэонкн нешидакшиирсванищ крыс в условиях наших опытов не вызывали изиенеиия реактивности организма на ЭВ. Прилипающие клетки КТО ииделядт иыыуностииулирукшде факторы. Высокой стиму-дируювдй активностью об; здает фракция 1, содержащая белки с молекулярной кассой, преьыааюоэй 75 кД. При её введении неалкого-дианрованним животным, иммунизированным ЭБ,' количество АОК и РОК било соответственно в 5,9 и 3,2 раза вше, чем у крыс, который фракцию не вводили . Менее активной была фракция 2, основную массу которой составляли белки с молекулярной массой 60-60 кД. Неприлилакицие клетки КПЗ выделяют активнодействующнй у имыуносупрессориый фактор. В селезёнке не чкоголизированных крыс, получавших инъекции фракции, содержащей этот фактор.количество АОК и РОК было соответственно в 6,4 и 3,8 раза ниже, чем у контрольных животных.

Прилипающее клетки КОЭ в условиях наших опытов не выделяли ш.аг'номодулируювдх субстанций, а иепршшпшонре клетки, выделяли фактор, обладающий иммуносупресоуукдими свойствами. Ишуиосуп-ресссрная активность обнаружена при исследовании фракций I и 2, однако более выраженный эффект при аллогенном переносе вызывала фракция 1. В селезенка неалкоголизированних крыс, которым вводили эту фракцию,- количество АОК и РОК было соответственно в ' 3,7 и 2,2 ра'-а ниже, 'чем у животных, не получи-тх инъекций '

супернатантов спдечсцитов.

Сопоставляя эти данные с результатами исследования иммунологической реактивности КОЗ можно предположить, что нммуносуп-рессирующие факторы выделяемые неприлипавщими к стеклу клетками селезёнки играют определённую роль в подавлении иммунного ответа на ЭБ у этих животных. Что же касается КПЗ, то их иммуноло■ гическая рефрактериость в отношении этанола является чтущейся. Клетки селезёнки этих животных реагируют на поступление этанола образованием и выделением (или только усилением выделения) разнонаправленно действующих субстанций. Вероятно, выявленные субстанции являются функциональными антагонистами. Вместе с тем нельзя исключить, что в организме животных, потреблявших этанол, действие этих субстанций блокируется независимо одно от другой.

Прогревание неалкогодизированных крыс индуцировало выделение прилипающими и неприлипаюшими к стеклу клетками селезенку иммуностимулирующего фактора. Охлаждение такого эффекта не вызвало. Прогревание, и охлаждение не влияло на выделение иммуностимулирующего фактора прилипающими клетками КТО. Вместе с тем эти агенты отменяли супрессирующий эффект супернатантов неприлипающих клегж КПЗ. Прогревание индуцировало выделение иммуносупрессирующего фактора прилипающими метками и отменяло иммуносупрессирующий эффект неприлипающих клеток КОЭ. Охладде-ние ш;' индуцировало выделения иммуномодулипукщгч факторов прилипающими клетками КОЭ, но отменяло иммуносупрессируюший эффект неприлипающих спленоцитов этих эшвотных (таблица 2).

Таким образом, прогревание и охлаздение отменяют, модулирующую активность супернатантов неприлипающих клеток селезенки

Таблица 2. Влияние прогревания и охлаедения на выделение иыиуномодулирупцих фактории клетками селезенки КПЗ и КОЗ.

Н!< П11 Условия омыта К но крыс К-во ПОК. тыс/орган К-во РОК. ннл/орган

1 2 3 4 5

1. Контроль (без введения супприатлнтоп) 9 18.7 ♦ 1.9 82.5 ± 8.7

2. Пподение супернатанта прилипающих клеток селезенки прогретых и 1ИМЛК.голизиронанных крыс 9 30.4 » 2.8 Р1< 0.05 126,0 » 13,1 Р1< 0.05

3. Ипедеми'1 супернатанта нерпилипавцих клеток прогретых неалкоголи эиропанмых крыс 9 31.2 1 2.9 Р1< 0.05 131.4 ♦ 15,7 Р1< 0,05

4. Виедеиие супернатанта прилипаюцих клеток селезенки охллхдешшх неалкоголизиропанчых крыс 9 19,1 ± 1.8 Р1> 0.05 84,2 1 9,8 Р1> 0.05

5. Введение супернатанта 'неирилипавчих клеток охлажденных.неалкого-Мэированных крыс 9 17.2 ♦ 1.6 Р1> 0.05 85.4 1 8.9 Р1> 0.05

6. Введение супернатанта прилипавших клеток про гретых КПЗ 8 35,8 ± 2.6 Р1< 0.05 146,0 ± 17.5 Р1< 0,05

7. Гнеденнс супернатанта неприлипащих клеток прогретых КПЗ 8 20.5 ± 1.9 Р1>' 0.03 87.8 ± 9,3 Р1> 0,05

Подолхение таблицы 2.

1 2 3 4 5

8. Введение супернатанта прилипавших клеток охлажденных КПЗ 9 21.1 ± 2.3 Р1> 0.05 86,4 ± 8.9 Р1> 0,05

9. Вь-деиие супернатанта неприлипавиих охлажден них клеток КПЗ 9 20.В ± 2.3 Р1> 0,05 83.3 1 9.2 Р1> 0.05

10. Введение супеонатанта прилипавших клеток селезенки прогретых КОЗ 9 42.6 ±3.8 Р1< 0.01 164.0 + 19,9 Р1< 0,01

И. Введение супернатанта неприлипавших клеток селезенки прогретых коз 22.0 ± 2.6 Р1> 0.05 84.8 ± 8.? Р1> 0,05

12. Введение супернатанта прлипаючих клеток селезенки охлажденных КОЗ 9 23.0 ± 1.8 РЬ 0,05 87.4. ± 9.5 Р1> 0,05

13. Введение супернатанта неприлипавчих клеток селезенки охлажденных КОЗ 8 22.5 ± 1.9 Р1> 0.05 83.? ± 8.9 Р1> 0,05

КПЗ и КОЗ, однако механизм действия эт::х агентов по-видимому различен. Учитывая тот факт, что прогревание индуцирует выделение спденоцитачи неалкоголизирозанных животных иммуностимулирующего фактора, а сжлаждение такого эффекта ко вызывает, можно предположить , что прогревание приводит к выделению непридипаю-щими клетками соединений, являющихся ингибиторами или функциональными антагонистами иммуносупрессирующего фактора клеток ал-коголизированнах крыс, охлаждение блокирует выделение иммуносуп-рессирующего фактора этими клетками.

Действие на организм некоторых Физических и химических агентов (высокой внешней температуры, вибрации , тетрахлормета-на, протеолитических ферментов) приводит к появлению в их сосудистом русле эритроцитов, обладающих кммуномодулирующими свойствами (Л. Г. Прокопенко, Ю. О. Яхонтов, 1975; Л. Г. Прокопенко и др. 1983; Л. Г. Прокопенко, Г. А. Чалый, 1885; Е. А. Яковлева, Л. Г. Прокопенко, 1990). Естественно было предположить наличие таких эритроцитов в крови алкоголизировакных крыс. Эксперименты, проведенные с целью проверки этого предположения, показали, что эритроциты КТО при аллогенном переносе не влияли на развитие ГКО, индуцированного ЭБ, а эритроциты КОЗ супрессировали этот- процесс. Результаты проведенных экспериментов свидетельствует, о существенном различии свойств эритроцитов КПЗ и КС .л

Появление иммуномодулирующих свойств при тепловом и вибрационном поражениях, токсической гепатопатии и введении протео-л.ггических 'ферментов обусловлено действием на мембрану 'клеток сь суточных Акторов (Ю, 0. Яхонтов, Л. Г. Прокопенко, 1986; Г. А. Чалый, 1037; А. 5'. Конггмя, 1989). Можно думать, что аналогична явление км^ет место при алкогольной интоксикации. Опыты,

поставленные для выяснения этого вопроса .показали, что обработка эритроцитов интактных крыс сывороткой крови ЧТО не индуцировала появления у них иммуномодулируюших свойств, а инкубация эритроцитов интактных крыс с сывороткой КОТ приводила к появлению у них иммуносупресеирующей активности.

Результаты этих экспериментов позволяют прсД1 сложить, что в сыворотке крови КПЗ отсутствуют гуморальные субстанции, индуцирующие появление иммуномодулирующнх свойств у эритроцитов, а в сыв ротке крови КОЭ есть субстанции, под влиянием которых эритроциты приобретают иммуносупрессирующие свойства.

Иммунологическая ареактивность эритроцитов интактных крыс, обработанных сывороткой крови КПЭ, не может рассматриваться как доказательство отсутствия в сыворотке КПЗ субстанций, оказывающих влияние на свойства мембраны эритроцитов. Ыожно было, в частности, предположить, что в сыворотке крови КПЭ есть соединения, не выявляемые с помощью избранной наш экспериментальной модели.

Ранее было установлено, что эритроциты животных, подверг-нугых действию высокой внешней температуры или вибрации, отравленных тетрахлорметаном или получавших инъекции протеолити-ческих ферментов, индуцируют выделение иммуномодулирующих факторов клетками селезёнки (!й 0. Яхонтов, 1980; Г. А. Чалый, 1987; Д. Ц. Конопля, 1989; Е. А. Яковлева, 1990). Нами было изучено влияние эритроцитов КПЗ и КОЭ на выделения иммуномодулирующих факторов прилипающими и неприлипающими клетками селезёнки неалкоголизи-рованных крыс. Оказалось, что клетки селезёнки крыс, получавших инъекции эритроцитов КТО не выделяют иммуномодулирующих факторов. Прили! дацие • клетки селезёнки крыс, получавших инъекции

эритроцитов КОЗ не выделяли иммуномодулирующих факторов,а неп-рилипающие клетки селезенки этих тавотных выделяют фактор С или факторы ), вызывающий при аллогенном переносе и'ммуносупрессиру-Ю1ций эффект.

Иследован влияние прогревания и охлаждения на иммуномоду-лируюшле свойства эритроцитов алкоголизированных животных. Оказалось , что прогревание индуцировало появление иммуностимулирующих свойств у эритроцитов КПЗ, но не оказывало существенного влияния на иммуносупресеорную активность эритроцитов КОЭ. Охлаждение индуцировало появление иммуномодулирующих свойств у эритроцитов 1'ЛЗ и отменяло появление иммуносупрессирующих свойств у эритроцитов КОЭ.

Результаты этих опытов показывают, что появление иммуномодулирующих свойств у эритроцитов после прогревания или охлаждения может быть одним из признаков возникновения привыкания при потреблении этанола

Литературные материалы и данные проведенных нами экспериментов свидетельствуют о значительном различии иммуннорегуля торных механизмов, реализующихся в организме животных, предпочитающих и отвергающих этанол, после 28 дневного периода прину-днтелъной сцжоголизации. В связи с этим возникает предположение о существовании зависимости между изменениями иммунологической реактивности, г"?никакдимн под влиянием этанола и действия других стрессорных агентов, оказывающих влияние .ча функцию иммунной системы влечения организма к этанолу. Учитывая результаты г.роведеннкх на*1« экспериментов, интересно было выяснить, как . ¿мяит игиенен'.ш температуры внегней среды ка отнэиек"е животных к этанолу.

■ - 19 -

После принудительной алкоголизации в течении 28 дней иа 80 крыс 15 (18,75%) привыкли к потреблению этанола, а 48 животных (60%) предпочитали пить воду. Прогревание в последние дни принудительной алкоголизации не изменяло (16, 20%) число животных привыкших к этанолу, а охлаждение увеличивало число таких животных (31 и 38,75%). Охлаждение увеличивало потребление этанола КПЭ, находящимися в условиях свободного выбора.

Таким образом, одинаковый по направленности иммуномодули-рующий эффект прогревания и охлаждения при алкоголизации сочетается с различным влиянием изменений температуры внешней среды на влечение к этанолу.

В ¿ыше было показано, что иммуностимулирующий эффект прогревания в определенной степени обусловлен выделением спленоци-тами факторов, обладающих иммуностимулирующими свойствами, а аналогичный эффект охлаждения - отменой иммуносупрессорной активности факторов клеток селезёнки. Сопоставляя эти.данные с влиянием прогревания и охлаждения на влечение к этанолу, можно предположит^, что определённую роль в его формировании играют иммуносупрессирующие факторы, выделяющиеся чеприлипаюшими клетками селезёнки КОЭ. Для проверки этого предположения крысам, принудительно потреблявшим этанол, внутрибрюшинно вводили фракции 1 супернатанта неприлипающих клеток селезёнки (полученные при фракционировании супернатантов клеток на сефадексе 0 - 75) КПЭ и КОЭ. Установлено, что число предпс штаыдих этанол крыс, получавших инъекции фракции КПЭ и КОЭ равнялось соответственно 14 (17,5Х) и 7 (8.8Х), Крысы, получавшие инъекции фракции 1 КОЭ, потребляли этанола меньше, чем животные которым вводили О фракцию 1 КПЭ (соответственно - 74,1 + 5,3 и 103,8 + 12,4).

Результаты этих исследований, по нашему мнению,представляют принципиальный интерес. Они показывают, что факторы выделяе-/мые клетками селезёнки алкоголизированных животных, играют важную роль в развитии алкогольной мотивации.

ВЫВОДЫ

1. Интенсивность иммунного ответа н? ЭБ и ЛПС у КПЭ не отличается от нормы, а у КОЭ существенно снижена. Прогревание КПЭ стимулирует у них развитие иммунного ответа на ЭБ, но не влияет на иммунологическую реактивность в отношении ЛПС. Прогревание КОЭ приводит к ослаблению иммуносупрессирующего влияния этанола на развитие иммунного ответа в отношении ЭБ и не оказывает влияния на выраженность реакции, индуцированной ЛПС. Охлаждение усиливает развитие иммунного ответа на ЭБ и ЛПС у обеих групп животных.

2,Сыворотка крови КПЭ при аллогенном переносе стимулирует, а сыворотка крови КОЭ супрессирует развитие иммунного ответа на ЭБ. В сыворотке КПЭ обнаружен иммуностимулирующий фактор, а в сыворотке крови КОЗ содержится иммуносупрессируюший фагаор. Прогревание индуцирует появление в крсви КОЭ иммуностимулирующего фактора Фракции сыворотки охлажденных КПЭ и КОЭ ке обладает иммуномодулирукшми свойствами.

3. Прилипающие к стеклу клетки селезёнки КЛЭ выделяют фактор (.или факторы), стимулируюкие развитие иммунного ответа на ЭБ, непридипалкэ-.е щетки КПЭ выделяют фактор (или факторы), вызывание сильно выр^л.-'нный ..ммукосупрессорный эффект. Кепрнлипаоаие к отекду кл^ткл селезенки КОЗ выдел.-.*?? Фнктср (или Факторы), ■ сол.'иагснй евсйстБами. Прилипающие клетки

селезенки КОЧ нммуномодулирующих факторов не выделяют' или выделяют их ь количествах. не выявляемых при аллогенном переносе.

4. Прогревание-индуцирует выделение неприлигтющйми клетками селезенки КПЗ и КОЗ иммуностимулирующего фактора Охлаждение тормозит выделение иммуносупрессирующего фактора неприлипающими клетками КОЗ.

5. Эритроциты КПЭ не выделяют, а эритроциты КОЭ супресеируют развитие иммунного ответа при аллогенном переносе. Эритроциты КОЭ индуцируют выделение неприлипающими к стеклу клетками селезенки иммуносупрессирующего фактора.

6. Прогревание индуцирует появление в крови КПЭ эритроцитов, обладающих иммуностимулирующими свойствами, но не влияет на им-муносулрессирующую активность КОЭ. Охлаждение не индуцирует появление иммуномодулирующих свойств у эритроцитов, но отменяет появление иммуносупрессирующих свойств у эритроцитов КОЭ.

7. Прогревание не влияет, а охлаждение повышает уровень алкогольной мотивации. Снижение уровня алкогольной мотивации, происходит ири введении животным иммуносупрессирующего фактора клеток се/ зёнки, выделение которых происходит под влиянием эритроцитов КОЭ.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ" .. Иммунг ш система и привыкание к алкоголю. - Тезисы докладов Б йеесоюзногс симпозиума "Взаимодействие нервной и иммунной ристем". Ленинград, Ростов - на - Дону, 1990, С-184. (соавт. Л. Г. Прокопенко) 2. Развитие иммунного ответа у алкоголи-Зйрованных крыс,выполнявших физическую нагрузку.-Материалы итоговой научной конфёренции института Курск. 1991, С-115. 3. При-

выкание к алкоголю и иммунологическая реактивность. -Актуальные вопросы хирургической гастроэнтерологии. Курск, 1991, С-140. 4. Реакция иммунной системы на изменения внешней температуры при алкогольной интоксикации. -Тезисы докладов 1 съезд иммунологов России. Новосибирск, 1992, С-465.