Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Влияние полимеров, снижающих гидродинамическое сопротивление крови, на ангио-гемические механизмы развития церебральной ишемии

Ч, *

На правах рукописи

КОНОРОВА Ирина Львовна

ВЛИЯНИЕ ПОЛИМЕРОВ, СНИЖАЮЩИХ ГИДРОДИНАМИЧЕСКОЕ СОПРОТИВЛЕНИЕ КРОВИ, НААНГИО - ГЕМИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ РАЗВИТИЯ ЦЕРЕБРАЛЬНОЙ ИШЕМИИ

14.00.16. - Патологическая физиология

Автореферат диссертации па соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1996

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте неврологии Российской Академии медицинских наук и на базе Ереванского государственного медицинского университета

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ:

доктор медицинских наук, профессор

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор медицинских наук, профессор засл. деятель науки РФ

доктор медицинских наук, профессор

И.В.ГАННУШКИНА С.Э.АКОПОВ

A.М.ГУРВИЧ

B.Н.ШТОК

Ведущее учреждение - Российский государственный медицинский

университет

Защита диссертации состоится Л 1996 г. в часов па

заседании Диссертационного совета Д.001.03.01 при Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии Российской АМН (125315, Москва, Балтийская ул., 8)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института Автореферат разослан «№« 1996 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат медицинских наук

Л.Н.СКУРАТОВСКАЯ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. Одной из основных проблем современной ангионев-рологии продолжает оставаться ишемический инсульт - локальное или диффузное снижение мозгового кровоснабжения, приводящее к обратимым функциональным изменениям, или некрозу ткани мозга (Н.В.Верещагин, 1988, 1990, 1996). Наряду с чисто механическим ограничением притока крови к головному мозгу в результате стеноза, спазма или окклюзии магистральных артерий головы, в происхождении инфарктов мозга гемореологические изменения могут иметь самостоятельное значение. Сочетание само- и взаимоактивации клеток крови под действием развивающихся при этом гемодинамических условий создает предпосылки для развития в крови каскада реакций, приводящих к резким изменениям ее физико-химических свойств, к снижению ее текучести и, в конечном итоге, к нарушению мозгового кровообращения.

Показано, что агрегация и развитие реакции высвобождения клеток кропи наиболее часто происходят в условиях нестационарного потока крови, имеющих место около бифуркаций, в постстенотических застойных зонах, позади тромбоци-тарных сгустков, адгезированных на сосудистой стенке (H.Poliwoda et al., 1973; T.Carino, L.Goldsmith, 1979; 1984; H.Schmid-Schonbein, 1981; 1986). Квазитурбулентные и турбулентные условия потока крови в этих участках сосудистого русла приводят к интенсивному взаимодействию клеток крови между собой и с сосудистой стенкой, что опосредуется высвобождением из них разнообразных физиологически активных агентов. Авторами разработан ряд установок, моделирующих такие условия с помощью аппаратов искусственного кровообращения и позволяющих изучать активацию и агрегацию клеток крови непосредственно в потоке. Однако до настоящего времени в разработке лечебно-профилактических мероприятий при цереброваскулярных заболеваниях поиск соединений, обладающих антиагрегант-ными свойствами, как правило ведется в условиях in vitro, не отражающих процесса агрегации, характерного для реального кровообращения.

С конца 60-х годов за рубежом (H.L.Green et al., 1969-1975; H.I.Polimeni et al., 1973-1989), а с начата 70-х годов и в нашей стране (С.С.Григорян с соавт., 1970-1987; И.В.Ганнушкина с соавт., 1981-1995) появился новый цикл оригинальных работ, в которых изучается возможность усиления текучести крови путем воздействия специальными высокомолекулярными линейными полимерами на структуру потока крови в соответствии с эффектом Томса. Принцип действия такого рода полимеров в физиологических системах основан на снижении гидродинамического сопротивления крови, обусловленного возникающими в нестационарном кровотоке завихрениями. Наряду с изучением воздействия такого рода полимеров на системные параметры гемодинамики, в лаборатории И.В.Ганнушкиной возникло совершенно новое направление исследований - влияние полимеров на мозговое кровообращение.

Показано, что внутривенное введение животным полимеров, снижающих гидродинамическое сопротивление (ГС) крови в соответствии с эффектом Томса (1948) и улучшающих текучесть крови, приводит к снижению артериаиного

давления, увеличению минутного объема крови и аортального кровотока (С.С.Григорян с соавт., 1970, 1976; А.Л.Антелава, 1987; И.В.Ганнушкина с соавт., 1988; НЛ.РоИтеш е! а1., 1979-1989) при неизменном мозговом кровотоке (И.В.Ганнушкина с соавт., 1984). Установлено, что мозговой кровоток не изменяется из-за возникающей вазоконстрикторной реакции пиальных артерий (И.В.Ганнушкина с соавт., 1984; 1985; 1988), являющейся выражением нового механизма ауторегуляции мозгового кровотока. При этом в условиях перфузии изолированных артерий мозга растворами одного из снижающих ГС полимеров (СГСП) - полиэтиленоксида \VSR-301 (ША) установлена чисто гидродинамическая природа воздействия на сосудистую стенку и выявлена опосредованность эндотелием указанной выше сосудистой реакции (И.В.Ганнушкина с соавт., 1990). Также показано, что роль механорецепторов эндотелия могут играть его микроворсинки, погруженные в кровоток (И.В.Ганнушкина с соавт., 1987). Однако остается актуальным вопрос, можно ли считать выявленный на примере конкретного полимера механизм характерным для всей группы полимеров, снижающих гидродинамическое сопротивление крови.

На животных, при окклюзии 4-х магистральных артерий головы, была обнаружена возможность путем внутривенного введения СГСП восстанавливать кровоток в сосудах поверхности мозга за счет усиления коллатерального притока крови (И.В.Ганнушкина с соавт., 1981). Однако совершенно не освящен вопрос достаточности развивающегося при этом коллатерального кровообращения и степени тяжести ишемического повреждения ткани мозга. Показано только, что при окклюзии средней мозговой артерии у спонтанно-гипертензивных крыс на фоне полимера значительно снижается отек ткани мозга в центре бассейна выключенной артерии, однако в перифокальной зоне эффект полимера существенно менее выражен (И.В.Ганнушкина с соавт., 1991). Таким образом, остается открытым вопрос о значении структуры потока крови, изменяемой под действием СГС полимеров, в формировании коллатерального кровообращения при ишемии головного мозга.

Показано, что при введении в кровь полиэтиленоксида \У511-301 в концентрациях до 2-104г/мл полимер не влияет на форму эритроцитов и их агрегатное состояние (Р.О^ет е1 а1., 1972). Однако до сих пор остается неизученным вопрос, влияют ли СГСП на форму и агрегатное состояние тромбоцитов и лейкоцитов в условиях нестационарного кровотока. Неясны особенности фармакологической регуляции тромбоцитарных функций при их сдвиговой активации в участках турбулентного потока и возможности предотвращения микроэмболического синдрома, развивающегося под действием этих потоковых сил. Важно также исследовать возможность применения такого рода полимеров для предотвращения развития перечисленных выше процессов и, в конечном итоге, для снижения тяжести ишемического повреждения головного мозга при цереброваскулярных заболеваниях.

Цель и залачи исследования: Целью настоящей работы явилось изучение характера и механизмов влияния СГСП на развитие церебральной ишемии. В связи с этим сформулированы следующие задачи исследования:

1) Определить специфику профилактического и терапевтического действия

СГСП на коллатеральное кровообращение в мозге крыс при окклюзии общих сонных артерий.

2) Выяснить влияние полиэтиленоксида Бадимол на сосудистую стенку изолированной сонной артерии кошки.

3) Исследовать межклеточные взаимодействия в потоке крови с изучением:

- влияния СГСП на формирование коллаген-индуцированного микроэмболического синдрома в условиях потока крови in vitro;

- влияния СГСП на межклеточные взаимодействия в условиях потока суспензии отмытых клеток крови;

- возможности модификации фармакологических эффектов антиагрегантов с помощью СГСП.

Теоретическая значимость и научная новизна. Впервые выявлена и обоснована низкая эффективность профилактического и высокая эффективность терапевтического использования СГСП на модели ишемии мозга у крыс.

Впервые в условиях потока крови, моделирующих индуцированное формирование микроэмболического синдрома, обнаружена возможность подавлять агрегацию клеток крови путем изменения гидродинамических характеристик кровотока растворами СГСП.

Впервые выявлена возможность препятствовать каскаду межклеточных взаимодействий, развивающихся в условиях нестационарного потока крови (например, в зоне стеноза) и приводящих к само- и взаимоактивации клеток крови, путем ламинаризации кровотока добавлением раствора СГСП.

Впервые установлено, что изменение гидродинамики кровотока растворами СГСП не влияет на затруднение терминальной перфузии вследствие повышения гематокрита.

Впервые обнаружена возможность использования СГСП в качестве модификатора фармакологических эффектов антиагреганта - аспирина.

Практическая значимость работы. Результаты настоящего исследован™ могут быть использованы для изучения развития церебральной ишемии, вызванной как различными цереброваскулярными заболеваниями, так и внутрисосудистой агрегацией клеток крови, а также при разработке новых лекарственных препаратов, действие которых основано на изменении свойств текучести крови.

Раскрыты принципиально новые возможности коррекции церебральной ишемии, связанные с усилением коллатерального притока крови путем воздействия СГСП добавками на гидродинамику потока крови и ангио-гемические взаимодействия.

Изыскана возможность повышения эффективности фармакологических лекарственных средств, влияющих на систему кровь-сосудистая стенка, путем их совместного применения с СГСП. При этом показано значение высокомолекулярных СГСП добавок как фактора, способного изменить характер межклеточных взаимодействий.

Разработана методика, для изучения зависимости регионарного сосудистого

сопротивления от изменений гематокрита (ГКТ), основанная на принципе регулируемого повышения ГКТ без прерывания перфузии за счет выхода жидкой фазы циркулирующей крови через полупроницаемую мембрану капиллярного диализатора. Также предложена методология исследования влияния различных фармакологических препаратов на затруднение терминальной перфузии, вызванное повышением ГКТ.

Положения, выносимые на защиту:

1. Возможность коррекции развития церебральной ишемии путем усиления коллатерального кровообращения под действием растворов СГСП, как дополнение к общеизвестной тактике лечебно-профилактических мероприятий при окклюзии магистральных артерий головного мозга.

2. Возможность препятствовать каскаду межклеточных взаимодействий, развивающихся в условиях нестационарного кровотока (например, в зоне стеноза) и приводящих к само-, взаимоактивации клеток крови и к развитию микроэмболического синдрома, путем снижения турбулентности потока крови добавлением растворов СГСП.

3. Возможность повышения эффективности антиагрегантной терапии путем сочетания действия широко применяемых в лечебной практике антиагрегантов (в частности аспирина) с действием СГСП.

Апробация работы проведена на совместном заседании научных сотрудников лабораторий экспериментальной патологии нервной системы, клинической нейрофизиологии и биохимии, а также клинических и научно-консультативного отделений НИИ неврологии РАМН "21" марта 199£>. г.

Материалы диссертации доложены на:

1) Всесоюзной молодежной конференции "Многоуровневая организация церебральных функций" (Москва, 1991);

2) Н-ой Всесоюзной конференции "Фармакологическая коррекция гипокси-ческих состояний" (Гродно, 1991);

3) Pan European Society of Neurology Second Congress (Viena, 1991);

4) Учредительном конгрессе Международного общества патофизиологов (Москва, 1991);

5) Научной конференции НИИ неврологии РАМН (Москва, 1992);

6) Международном симпозиуме "Microcirculatory Stasis in the Brain" (Tokyo.-1993).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ и 2 сданы в печать.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 137 машинописных страницах, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, описания результатов собственного исследования, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка цитированной литературы и списка опубликованных по теме диссертации работ. Иллю-

стрирована 16-ю таблицами и 41-м рисунком. Список цитированной литературы включает 237 источников, в том числе 84 работы отечественных и 153 работы зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

В первой серии опытов на 96 крысах-самцах Вистар, весом 200-300 г., изучали особенности профилактического и терапевтического влияния полиэтиле-ноксида WSR-301 на интенсивность коллатерального кровообращения при двусторонней перевязке общих сонных артерий на шее. Наркоз - в/б 1,25% раствор нембутала в дозе 40 мг/кг веса. Все животные были разделены на три группы по 32 крысы в каждой. В 1-й группе всем крысам за 15 мин. до окклюзии вводили в бедренную вену раствор (10"3г/мл в физиологическом растворе) полимера. Доза рассчитывалась в соответствии с весом тела до получения конечной концентрации 2-10" г/мл циркулирующей крови. Во И-й группе животных раствор полимера вводился аналогичным образом, однако спустя 5-10 мин. после окклюзии. В III (контрольной) группе вместо раствора полимера животным в/в вводили физиологический раствор. Исследовали:

I. Количество животных, погибших через сутки после окклюзии и в конце эксперимента (через 10 суток);

II. Тяжесть ишемического повреждения мозга - по степени неврологического дефицита, оцениваемого по Stroke-index шкалы McGrow для монгольских песчанок (McGrow, 1977), модифицированной в лаборатории И.В.Ганнушкиной для оценки неврологического дефицита у крыс, и по динамике развития неврологического дефицита в каждой группе. Результаты выражали в % от общего количества животных в группе;

III. Локализацию и размеры очагов ишемического повреждения ткани мозга -методами световой и электронной микроскопии ткани мозга, вьгделенного после забоя животных.

Во второй серии опытов в качестве СГСП, модифицирующего характер потока крови, использовали два синтетических полимера, полиэтиленоксид Бадимол (Болгария) и для сравнения WSR-301 (Union Carbide, USA), в растворах с исходной концентрацией 10" г/мл. Рабочая концентрация составляла 2-10" г/мл и, согласно данным литературы, была гемодинамически достаточно эффективной. Исследовали:

I. Воздействие полиэтиленоксида Бадимол на сосудистую стенку на модели изолированной сонной артерии кошки (ASchabert et al., 1980).

II. Влияние полиэтиленоксидов WSR-301 и Бадимол на гематогенные факторы патогенеза церебральной ишемии в условиях потока крови in vitro. Материатом служила кровь 50-ти здоровых доноров, не получавших какой-либо терапии.

- Изучали влияние полиэтиленоксидов WSR-301 и Бадимола на функцио-

нальное состояние клеток крови и на ход развития микроэмболического синдрома. Для этого использовали перфузионную установку, собранную на основе системы BL 759В (BELKO, Italy) и обеспечивающую течение крови в системе соединительных трубок (средний диаметр 5 мм) с участками, моделирующими зону стеноза. Система осуществляла движение крови и контроль объемной скорости кровотока (расход). В цепь был включен капиллярный диализатор BL-612 (BELKO, Italy), общей площадью 1,2 м2, и одна воздушная ловушка. Перфузия проводилась с расходом 200мл/мин, число Рейнольдса в участке стеноза Re=4700, в области насоса Re=3200-3400. Дополнительный контур осуществлял инфузию омывающей жидкости через диализатор. Одновременно контролировалось давление до диализатора и после него (в воздушной ловушке), а также давление внешнего контура. Контроль давления осуществлялся с использованием датчика давления этой системы и двух датчиков давления (Eleraa, FRG), данные регистрировались на самописце SE 120 (ВВС Goerz Metrawatt, USA). Исследования проводились при температуре 32°С, Обеспечиваемой термостатом MLW 8 (ЧССР). Для стимуляции микроэмболии использовали коллаген (Dade, Switzerland) в концентрации (2 мкг/мл).

Регистрировали следующие параметры: 1) перепад давления на диализаторе по датчикам Elema; 2) количество заблокированных капилляров диализатора (в %) в условиях инфузии раствора по перепаду давления на диализаторе до и после эксперимента; 3) число одиночных тромбоцитов в системе циркуляции после фиксации агрегатов формалином по K.Wu и J.Hook (1975); подсчет одиночных клеток велся по McGabe и Clark (1982) с использованием счетчика частиц крови (Picoscale; Hungary); 4) уровень гемолиза - стандартным спектрофотометрическим методом по уровню гемоглобина; 5) уровень стабильного метаболита тромбоксана А2 - тромбоксана В2 (ТхВ2) (пг/мл) в диализной жидкости наружного контура -методом радиоиммунного анализа с использованием наборов Института изотопов ВНР на сцинтилляционном счетчике MARK III (USA) с использованием сцинтил-лятора Брэя.

- Изучали влияние полиэтиленоксидов WSR-301 и Бадимол на гидравлическое сопротивление в кровеносном русле при повышении гематокрита (ГКТ). Для этого из системы исключали воздушную ловушку, но добавляли мерную систему для точного контроля объема циркулирующей крови. Создавая градиент давления 50 мм рт.ст. между внутренним и внешним контурами, обеспечивали выход жидкой фазы из внутреннего контура с повышением ГКТ циркулирующей жидкости. Т.к. объем перфузируемой жидкости фиксировался насосом, показателем изменения пассажа крови через микроциркуляторную сеть считали перфузионное давление.

- Изучали межклеточные взаимодействия в потоке. В качестве СГСП использовали только полиэтиленоксид WSR-301. В качестве антиагреганта использовали растворимую форму аспирина - лизин-аспирин (Synthelabo, France) в концентрации ЮЛМ (ECjo). Материалом служила богатая тромбоцитами плазма (БТП); суспензия отмытых тромбоцитов (100000 клеток/мкл) (T.Rink, et al., 1982); суспензия отмытых полиморфноядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) (2-10 клеток/мл) (B.Babior, et al., 1976). Отмытые клетки насыщали флюоресцирующим кальциевым

хелатором - квином (quin - 2AM, Amercham) (R.Tsien, 1981; T.Rink, et al., 1982). Селективную активацию тромбоцитов осуществляли коллагеном (1мкг/мл), а селективную активацию ПМЯЛ - формил-метионил-лейцил-фенилаланином (ФМЛФ) (10'7М). Из системы исключали диализатор, а перфузия осуществлялась роликовым насосом (модель 2115 LKB, Sweden). Функцию стенозированного участка выполняла проточная микроюовета от спектрофлюориметра RF-540 (Shimutzu, Japan), позволяющая вести ряд измерений непосредственно в потоке, за которой следовало резкое расширение циркуляторного русла. Число Рейнольдса для потока через кювету при расходе перфузата 180 мл/мин составляло 3600; напряжение сдвига в области микрокюветы, где имеется резкий перепад диаметра, составлял 160 Н/м2, что по данным H.Schmid-Schonbein (1981) является достаточным условием для сдвиговой активации. Согласно рекомендациям Т.Каппо и L.Goldsmith (1979; 1984) имеющая место в этой области турбулентность по параметрам соответствует условиям активации тромбоцитов в постстенотической зоне.

Определяли:

1) наличие прямого влияния СГСП на агрегацию тромбоцитов в БТП методом Вот на агрегометре Chrono-Log (USA); 2) активацию тромбоцитов (коллаген, 2мкг/мл) в потоке по уровню АТФ (в условных единицах), определяемую билюми-несцентным методом (Е.Я.Позин с соавт., 1976) с использованием люциферин-лю-циферазного реактива (Colbiochem, USA), а также воздействие на нее раствора СГСП.; 3) возможность обычной дозы аспирина (2,1-10"6М), соответствующей ЕС50 для способности этого препарата предотвращать агрегацию и секрецию тромбоцитов в кювете агрегометра, подавлять сдвиговую активацию тромбоцитов в потоке крови. Дозу аспирина увеличивали до получения желаемого эффекта; 4) влияние СГСП на высвобождение из тромбоцитов в БТП активных агентов, способных вызвать цепную реакцию тромбоцитов - по изменению уровня внутриклеточного Са2+ (в нМ), характеризуемого перепадом уровня флюоресценции квина в проточной кювете спектрофлюориметра. Волна возбуждения - 340 нм (ширина щели возбуждения - 5нм); волна флюоресценции - 490 нм (ширина щели флюоресценции -10 нм) (R.Tsien et al, 1981; T.Rink et al., 1982). Тестируемые образцы плазмы добавляли к суспензии тромбоцитов в 20-кратном разведении. Исследования проводили в двух режимах: в ламинарном потоке (Re=700) и в турбулентном режиме (Re=3600); 5) способность секрета активированных тромбоцитов стимулировать активацию ПМЯЛ и наоборот - по уровню Са"+ в цитозоле ПМЯЛ в первом случае, или в цитозоле тромбоцитов во втором случае (R.Tsien, et al, 1981, 1982), а также влияние СГСП на перекрестную тромбоцитарно-лейкоцитарную способность стимулировать взаимную активацию.

III. Влияние полиэтиленоксида WSR-301 на фармакологические эффекты антиагрегантов в условиях нестационарного потока крови.

Контроль всех параметров и ввод необходимых поправок осуществляли с использованием компьютера спектрофотометра. Полученные в независимых экспериментах данные обрабатывали с применением критерия Стьюдента-Фишера и парного критерия Вилкоксона.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

В первой серии опытов во всех трех группах через сутки после окклюзии пало приблизительно 30% животных (32%, 36% и 27% соответственно в контроль-

Количество животных (%)

р<0,001

Погабло к течете 1 ДВ1

Погмбло ■ течение 10 дней

Рис. 1 Количество животных (в %), погибших вследствие двусторонней окклюзии общих сонных артерий, осуществленной до и после введения СГСП.

ной, 1-й и И-й группах). Однако количество павших животных в последующие 9 суток резко отличалось в разных группах. В контрольной группе оно было максимальным и к концу эксперимента общее количество павших животных составило 68% (Рис. I). Профилактическое введение полимера в 1-й фуппе несколько снизило количество животных, погибших в последующие 9 суток, в то время как при терапевтическом использовании полимера смертность животных за этот период почти не увеличивалась.

Оценка степени неврологического дефицита показала,

Количество животных (%)

что наибольшее количество животных (45%) с сильными нарушениями неврологического статуса (от 3 до 10 единиц МсОгсж) имеет место в контрольной группе, а

наименьшее (5%) - во П-й группе животных, получавших полимер после окклюзии сонных артерий (Рис. 2). Симпто-мотрицательные животные, напротив, в контрольной группе отсутствовали, в 1-й группе с профилактическим использованием СГСП составили всего 5%, а во П-й группе соответственно 18%. При этом во второй группе 50% животных имели среднюю степенью тяжести неврологического дефицита (от 0,5 до 2,5 единиц МсОго\у), в то время как в контрольной и в 1-й группах такие животные составили все-

Симптом (-)

<*| <>¿-2,5 13. МсСго» (♦) 3-111 ел. МсСго»

Рис. 2 Степень неврологического дефицита по шкале Мсвго«/ (в%) в разных группах.

го одну треть (соответственно 27% и 32%).

Динамика развития неврологического дефицита (Рис. 3) в контрольной и П-й группах имела противоположную направленность. В контрольной группе у 50% животных обнаруживалось нарастание неврологического дефицита в течение 10 дней после окклюзии, а уменьшение дефицита - всего у 14% животных. Во Н-й Количество животных (%)

□ К онтроль ^Профилактическое введение СГСП до окклюзии [□Терапевтическое

введение СГСП после| окклюзии

Рис. 3

Нарастание дефицита Уменьшение дефицита

Динамика развития неврологического дефицита по шкале Мсвгож (в %) в разных группах.

группе, напротив, нарастание неврологического дефицита за указанный период выявлено лишь у 9% животных, в то время как у 41% животных обнаружено уменьшение неврологического дефицита. В 1-й группе количество животных с нарастанием и уменьшением неврологического дефицита составили соответственно 23% и 27%.

Проведенное морфологическое исследование позволило установить, что при двусторонней окклюзии общих сонных артерий в результате резкого уменьшения объемного кровотока и падения внутрисосудистого даатения в мозге крыс развивалось неполноценное редуцированное коллатеральное кровообращение. При этом через 8-12 дней после окклюзии в бассейнах передних мозговых артерий (ПМА) и в передних и средних отделах бассейнов средних мозговых артерий (СМА) развивалось четко выраженное диффузное ишемическое повреждение и отек ткани мозга (Рис. 4). В бассейнах задних мозговых артерий (ЗМА) ишемическое повреждение и отек ткани мозга были выражены в меньшей степени. Происходящие при этом характерные гистологические и цитологические изменения как в нервной ткани, так и в сосудистом русле носили строго локальный характер и были различны в разных частях как артериальной, так и прежде всего венозной сосудистой сети. В отдельных областях нарушения яштялись временными и обратимыми, в других -приводили к аноксии, повреждению эндотелия, выходу жидкой части крови в ткань

Рис. 4. Схематическое изображение фронтальных срезов мозга крысы:

1) через полюсы лобных долей; 2) на уровне максимального развития ядер прозрачной перегородки и подкорковых узлов; 3) через передний отдел зрительного бугра и перекрест нервов; 4) через каудальный полюс поводковых ядер и переднюю часть сосковидных тел; 5) через центральную часть задней ^^^ спайки и на уровне максимального развития сосковидных тел. ■Н ~ локализация очагов клеточного выпадения; >; * -I - зона наиболее сильного отека и венозной гиперемии.

мозга и гемоконцентрации, сопровождающихся развитием прогрессирующего локального или диффузного отека. Все это приводдо к изменению физико-химических свойств крови, ухудшению кровоснабжения, сдавлению отдельных участков ткани мозга и, в конечном итоге, к необратимым изменениям и гибели нервной ткани в них.

Внутривенное введение экспериментальным животным раствора полиэтилен-оксида \VSR-301 позволило снизить процент их смертности, степень тяжести и объем ишемического повреждения ткани мозга. При этом произошло некоторое изменение вида повреждения разных отделов мозга. В передних отделах количество и размеры очагов клеточного выпадения, периваскулярный и особенно перицеллю-лярный отек, а также (что наиболее бросается в глаза) венозная гиперемия, сохраняющаяся лишь в определенных участках мозга, значительно уменьшились. В меньшей степени было выражено, особенно у животных с терапевтическим введением полимера, явление гемоконцентрации в сосудах. Артерии хотя и были сужены, но в большинстве своем были наполнены кровью и имели более или менее округлую форму. Подавляющее большинство клеток выглядело нормохромным или имело умеренно гиперхромную цитоплазму и крупное просветленное ядро, что свидетельствует о сохранности жизнедеятельности клеток. При этом клетки, измененные по ишемическому типу, встречались редко. В каудальных отделах мозга периваскулярный отек был более ощутим, особенно вокруг сосудов среднего и мелкого калибра. В центральной и задней частях бассейна СМА, а также в зонах смежного кровоснабжения и в прилежащих к ним областях бассейна ЗМА имело место образование последовательно расположенных дыроподобоных пустот округлой формы, напоминающих гигантские периваскулярные пространства вокруг спавшихся мелких сосудов. Изменения в ультраструктуре элементов сосудистой стенки

и периваскулярных ножек астроцитов позволяют предположить, что в развитии этого процесса лежит как вазогенный, так и и цитотоксический отек. Наряду с нормохромными, здесь имело место достаточно большое количество переживающих нейронов с разной степенью гиперхромности. Однако нейроны, измененные по ишемическому типу почти не встречались. Обнаруженное у нескольких животных в прилежащей к зоне смежного с бассейном СМА кровоснабжения области бассейна ЗМА нарушение цитоархитектоники в результате массового выпадения клеток, по-видимому, объясняется индивидуальными особенностями строения задних соединительных артерий у этих животных.

Можно резюмировать, что полиэтиленоксид WSR-301 снижает смертность животных и степень тяжести ишемического повреждения их головного мозга при окклюзии общих сонных артерий, однако эффективность терапевтического использования полимера вдвое превышает его незначительный профилактический эффект. При этом выявляется неоднозначность последствий использования полиэтиленокси-да WSR-301. Сопоставив собственные результаты с литературными данными о возможности восстанавливать мозговой кровоток при циркуляторной ишемии мозга введением в кровь СГСП (И.В.Ганнушкина с соавт., 1981), а также об уменьшении на фоне СГСП формирования отека ткани мозга только в центре бассейна перевязанной СМА и сохранении его в областях, непосредственно прилегающих к пограничной зоне очага повреждения (I.V.Gannushkina, B.BJohansson, 1991), можно предположить следующее. Возрастающий в настоящей работе под действием СГСП коллатеральный приток крови из вертебро-базилярной системы обеспечивает более или менее адекватное кровоснабжение ткани мозга в бассейне ПМА и в передней и средней частях бассейна СМА. Однако наличие небольших очагов клеточных выпадений и присутствие практически во всех сосудах плазмы или форменных элементов крови, выявленное на электроннограммах после 15-минутной внутрисердеч-ной фиксации глютаровым альдегидом, косвенным образом свидетельствуют о неполноценном коллатеральном кровообращении с изменением физико-химических свойств протекающей крови. В более каудальных отделах мозга кровоснабжение, по-видимому, может спровоцировать увеличение формирования свободных радикалов вследствие явления реперфузии в предварительно ишемизированной области, а также возникновение фильтрационного отека в результате срыва реакции ауторегу-ляции у нижней границы.

Во второй серии опытов установлено, что исследуемый полиэтиленоксид Ба-димол в концентрациях 10°-2-10"6 г/мл не оказывает прямого действия на сосудистую стенку.

При перфузии в стандартном режиме изолированного сегмента сонной артерии кошки изотоническим физиологическим раствором добавление в перфузат исследуемого полиэтиленоксида Бадимол (2-10' г/мл) приводило к сужению сосудистого сегмента (Рис. 5): диаметр сосуда изменялся на 0,2 мм, что составило 14% от исходного значения. При промывке системы физиологическим раствором наблюдалось плавное расширение сосудов с восстановлением исходного диаметра. После удаления эндотелия вазоконстрикторная реакция на этот полимер практически

Диаметр (мм) 1.5 -г

* Введение

полиэтиленоксида \VSR-301 ——Введение Бадимола!

Расход О (мл/мин)

130 120 110 +

^ Время (мин.)

лу-

Давление (мм.рт.ст.)

20 15 10

-»-----

^ мин^

Рис.5 Изменение диаметра сосуда (мм), перфузируемого в условиях

стабилизированной скорости потока, под действием СГСП добавки

исчезала (сосудистые сегменты сужались всего на 1%).

Добавление для сравнения в контрольном опыте полиэтиленоксида \VSR-301 (2-10"6г/мл) в перфузат вызывало более значительное уменьшение диаметра сегмента в среднем на 0,3 мм, что составило приблизительно 19% от исходного значения и соответствует литературным данным (И.В.Ганнушкина с соавт., 1990). Констрик-торная реакция сосудистых сегментов также опосредовалась эндотелием и после денудации исчезала (изменение диаметра составляло всего 2% от исходного значения), что также соответствует литературным данным.

Таким образом, полиэтиленоксид Бадимол не оказывает прямого действия на сосудистую стенку. Однако, едияя на гидродинамику потока крови, вызывает эндотелий-зависимую вазоконстрикторную реакцию. Это доказывает установленную ранее на примере полиэтиленоксида \У5Я-301 (И.В.Ганнушкина с соавт., 1990) чисто

гидродинамическую природу воздействия СГСП на сосудистый фактор развития церебральной ишемии посредством сдвиговой деформации эндотелиоцитов.

При исследовании влияния полиэтиленоксида \У511-301 и Бадимола на функциональное состояние элементов крови в условиях системы циркуляции крови установлено, что пассивная 90-минутная прокачка разведенной крови без введения коллагена приводит к незначительному уменьшению числа циркулирующих клеток (Рис. 7) и гемолизу эритроцитов (Рис. 8). Перфузионное давление в ходе циркуляции менялось несущественно (Рис. 9). В независимой серии экспериментов инфу-зия коллагена приводила к развитию тромбоцитарного тромбообразования и к увеличению гемолиза эритроцитов. Одновременно наблюдалось увеличение разности давлений до и после диализатора, свидетельствующее о повышении сопротивления вследствие частичной блокады капилляров, которая к 90-й минуте циркуляции сос-таатяла более трети всего количества капилляров (Рис. 10). Это сопровождалось процессом агрегации клеток, сопряженным с резким убыванием числа одиночных тромбоцитов в крови, и секвестрацией по крайней мере части агрегатов в капиллярах диализатора. К 90-й минуте появилась тенденция к некоторому повышению числа тромбоцитов, что, по-видимому, связано с дезагрегацией части агрегатов. Этим же можно объяснить и тенденцию к понижению разности давлений на диализаторе. Уровень высвобождения тромбоксана А2, определяемый по накоплению стабильного его метаболита ТхВ2, повышался и при фоновой циркуляции крови (Рис. 6), однако после введения коллагена его концентрация скачкообразно увеличивалась и продолжала нарастать до конца циркуляции. Это свидетельствует об интенсивной секреции тромбоцитами этого агента. Причем, как видно, развитие реакции высвобождения тромбоцитов может происходить независимо от их агрегации. Можно сделать вывод, что в условиях инфузии коллагена в системе циркуляции происходит формирование развернутого микроэмболического синдрома, сопровождающегося накоплением в среде вазоконстрикторов.

Введение раствора полиэтиленоксида \У8Я-301 в канал перфузии в начале циркуляции не приводило к выраженному понижению перфузионного давления по

Рис. 6 Изменение количества свободного метаболита тромбоксана Аг - ТхВ2 (пг/мл) в ходе циркуляции

О 15 3» 41 АО 75 М

сравнению с контролем. Оно понижалось всего на 3-4 мм рт.ст. (перепад давления составлял 22,9±1,2 мм рт.ст., разность равнялась 3,8±1,3 мм рт.ст.) Одновременно при индуцировании на его фоне коллагеном микроэмболического синдрома наблюдался значительно меньший подъем давления, которое очень быстро возвращалось к исходному уровню (Рис. 9). Вдвое уменьшалось количество заблокиро-

Бе] ннфуши коллагена Инфузия коллагена на 20 |

25 мин. На фоне

полнэтиленоксида \VSR-301

На фоне Баднмола

40

0

Рис.7

I I 1 I I I I I-1 I Время (мин.)

10 20 30 40 50 60 70

Изменение количества одиночных тромбоцитов (в % от исходного), в ходе циркуляции крови

(отн. ел.)

Рис. 8 Уровень свободного гемоглобина (в отн. ед.) в ходе циркуляции

р

- 17

Рис.9

Без ннфузнн коллагена Инфузия коллагена На фоне №511.301 На фоне Бадимола

Динамика изменения в ходе циркуляции крови

Время (мин.) давления

на диализаторе

□ Циркуляция без инфузии коллагена

ЕЭ Циркуляция с

введением коллагена на 20 - 25 минуте

□ Введение коллагена на фопе

полиэтиленоксида \VSR-301 ■ Введение коллагена на фоне Бадимола

Рис. 10 Уровень блокады капилляров диализатора после 90 минутной циркуляции крови

ванных к 90-й минуте капилляров. При этом гемолиз эритроцитов был существенно ниже, чем в контроле (Рис. 8); в значительной степени предотвращался процесс уменьшения числа одиночных тромбоцитов в крови: наблюдался более значительный рост одиночных клеток к 90-й минуте циркуляции (Рис. 7), что свидетельствует о меньшей прочности образовавшихся агрегатов и их распаде; имело место значительное снижение продукции ТхА2, уровень которого падал даже ниже, чем при фоновой прокачке крови без полимера (Рис. 6). Это, по-видимому, указывает на особое значение гемодинамических условий для активации каскада арахидоно-вой кислоты в клетках и развития их реакции высвобождения. Можно сделать вывод, что введение раствора полиэтиленоксида \VSR-301 в систему циркуляции крови весьма эффективно предотвращает развитие коллаген-индуцированного микроэмболического синдрома.

При введении в канал перфузии раствора Бадимола происходило незначительное снижение перфузионного давления (Рис. 9). Разность составила всего 1,3±0,7 мм рт.ст., а перепад давления - 29,3±1,5 мм рт. ст. При индуцировании на его фоне коллагеном микроэмболического синдрома также наблюдался меньший подъем давления, которое быстро начинало снижаться, однако к 90-й минуте к исходному уровню не приходило. Все остальные данные (Рис. 6, 7, 8, 10) показали, что введение матричного раствора Бадимола в систему циркуляции крови хотя и предотвращает развитие коллаген-индуцированного микроэмболического синдрома, однако действие его слабее, чем действие полиэтиленоксида \VSR-301.

В контрольных исследованиях показано (табл. 1, 2), что по мере уменьшения объема циркулирующей разведенной крови за счет выхода жидкой фазы из внут-

Тдблица 1.

Влияние полиэтиленоксида \Л/5Н-301 на гидравлическое сопротивление при повышении гематокрита

V жидкости (мл) ГКТ (%) Прирост давления (мм рт.ст.)

145 8 0

I. Контроль 85 13 4.07 ± 0.01

20 18 18.87 ±0.02

145 9 0

II. На фоне 85 13 4.44 ± 0.01

полиэтиленоксида 20 15 18.50 ±0.01

Таблица 2.

Влияние Бадимола на гидравлическое сопротивление при повышении гематокрита

V жидкости (мл) ГКТ (%) Прирост давления (мм рт.ст.)

I. Контроль 145 14 0

85 16 3.70 ± 0.01

20 26 14.80 ± 0.02

II. На фойе Бадимола 145 11 0

85 16 3,20 ± 0.01

20 24 14.80 ±0.02

реннего контура и повышения ГКТ остаточной суспензии клеток крови, гидравлическое сопротивление диализатора плавно возрастает. После восстановления объема циркулирующей суспензии перфузионное давление в системе циркуляции возвращалось к исходному уровню. Добавление в систему полиэтиленолксида \У511-301 (табл. 1) или Бадимола (табл. 2) не вносило изменений в картину нарастания перфузионного давления по мере увеличения ГКТ. Проведение всего цикла исследования на дистиллированной воде показало, что сам по себе процесс ультрафильтрации не влияет на перфузионное давление, которое остается неизменным. Можно заключить, что использованные СГСП не оказывают влияния на вызванное повышением ГКТ затруднение терминальной перфузии.

В условиях микрокюветы агрегометра показано, что полиэтиленоксид \VSR-301 в использованных концентрациях не оказывает прямого действия на агрегацию тромбоцитов и на антиагрегантный эффект аспирина. В условиях используемой модели с выключенными из потока проточной кюветой, моделирующей стено-(усл. ед.)

50

> Контроль ■ На фоне

полиэтиленоксида А На фоке аспирина

> Полиэтиленоксид* аспирин

Р<0,01

время (мин)

зированныи участок сосуда с областью турбулентного потока, и диализатором, моделирующим микроциркуляторное русло, в течение 90-минутной циркуляции БТП накопления АТФ не происходило. В присутствии коллагена в используемых подпороговых концентрациях увеличение уровня АТФ было незначительным (менее 5 усл. ед. люминесценции). При включении в цепь проточной кюветы происходило увеличение уровня АТФ, однако было недостаточным для количественных измерений. После введения в канал перфузии коллагена, уровень АТФ резко возрастал (Рис.11),

Рис. 11 Динамика накопления АТФ (усл.ед.

люминесценции) в ходе ЗО-минутной циркуляции БТП при стимуляции тромбоцитов коллагеном (1 мкг/мл)

что соответствует литературным данным (Е.Я.Позин и соавт., 1976). Введение в циркуляторное русло аспирина в дозе 2,1*10"6М не изменяло количества высвобождаемой АТФ в потоке. Эффект удалось зарегистрировать только при создании концентрации препарата в потоке не ниже 8-10~6М (на рис. 11 - 5-10"5М). Введение в циркуляторное русло полимера снизило скорость накопления АТФ почти вдвое, причем одновременное введение аспирина (2,НО'6 М) с полимером почти полностью устраняло реакцию высвобождения кровяных пластинок.

Контрольное исследование показало, что при 20-кратном разведении добавленные в БТП во время циркуляции аспирин и коллаген не влияют на уровень

(нМ)

1000 1 --1

* Введена ниш

900 - (котрапь)

- ■ На фоне аЗ

800 полкэтпеноксида

\VSR-3fll Ах

—На фоне аспирина

700 -

—-— На фоне

папюткленоксида

600 \У5К001+аспирин

500

400

300

200 _.....- 2

100 / Ш--¡>4

Р<0,05 Р<0,05

до воздействия плазмы

после воздействия плазмы

внутриклеточного Са в суспензии отмытых кровяных пластинок. Богатая тромбоцитами плазма, взятая до ее прокачки в системе циркуляции, также не влияла на уровень этого катиона в тромбоцитах. При исследовании уровня ин-трацеллюлярной концентрации Са2+ при длине волны возбуждения 340нм и длине волны флюоресценции 495нм поли-этиленоксид \VSR-301 не создавал помех ввиду отсутствия собственной флюоресценции и низкого уровня светорассеива-ния. Следовательно, в дальнейших опытах эффектом внутреннего фильтра можно пренебречь.

Добавление разведенной в 20 раз после циркуляции БТП к суспензии отмытых тромбоцитов приводило к немедленному и резкому повышению уровня Са2+ в цитозоле клеток (Рис. 12). Аспирин в использованных концентрациях не приводил к достоверному понижению степени прироста Са2+ в цитозоле кровяных пластинок. Полимер в значительной степени нивелировал это явление, а сочетанное добавление полимера и аспирина почти полностью устраняло эффект активации тромбоцитов разведенной БТП, превосходя в этом смысле изолированное действие полимера.

При добавлении к тромбоцитарно-лейкоцитарной суспензии коллагена, который сам по себе не влияет на уровень Са + в ПМЯЛ, имело место увеличение содержания этого катиона (Рис. 13). Аналогичная ситуация наблюдалась и в случае селективной активации ПМЯЛ ФМЛФ. Аспирин, прямо не влияющий на ПМЯЛ, достоверно не ограничивал стимулирующее воздействие со стороны активированных тромбоцитов. Поскольку селективным ингибитором активации ПМЯЛ мы не располагали, попытка ограничить активирующий эффект ПМЯЛ на тромбоциты не проводилась. При осущестатении циркуляции тромбоцитарно-лейкоцитарной суспензии на фоне полимера взаимоактивация клеток крови уменьшалась, что проявлялось в снижении уровня прироста Са"+ в цитозоле клеток при перекрестной активации. Добавка аспирина на фоне полимера еще более снижала активирующий ПМЯЛ эффект тромбоцитов, и уровень Са2+ в их цитозоле практически не повы-

Рис. 12 Влияние БТП после циркуляции на уровень Са2* в цитазоле тромбоцитов (в нМ)

Содержание кальция в лейкоцитах при активации Содержание кальция в тромбоцитах при активации тромбоцитов лейкоцитов

Рис. 13 Тромбоцитарно-лейкоцитарные взаимодействия в потоке

шалея.

Т.о., полученные результаты позволили сделать вывод, что обычные дозы аспирина, влияя на внутриклеточные механизмы активации тромбоцитов, не предотвращают само- и взаимоактивацию клеток крови, обусловленную гидродинамическими условиями кровотока, особенно в зонах стеноза. Простое увеличение дозы препарата или назначение нескольких антиагрегантов не всегда приемлемо, ввиду повышения опасности токсических и побочных эффектов. Полиэтиленоксид \VSR-301 весьма эффективно препятствует активации тромбоцитов, высвобождению из них физиологически активных агентов и процессам тромбоцитарно-лейкоцитарной взаимоактивации. Поскольку полимер прямо не влияет на клетки крови и сосудистую стенку, его эффект можно считать чисто гидромеханическим. Это принципиально иная возможность влияния на процесс внутрисосудистой агрегации и взаимоактивации клеток крови. Снижая ГС крови раствором СГСП, можно усилить антиагрегационный эффект аспирина в условиях нестационарного потока крови. •Повышение эффективности фармакологической регуляции описанных выше процессов нейтральными СГСП добавками может явиться интересным дополнением к общеизвестной тактике лечебно-профилактических мероприятий при стенозиро-вании крупных артерий у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями и, в частности, с ишемическим повреждением головного мозга. Более того, на фоне СГСП аспирин уменьшает суммарную продукцию тромбоцито- и лейкоцитоактив-ных агентов, что без полимерных добавок почти не имеет места.

ВЫВОДЫ.

1. Внутривенное введение раствора полиэтиленоксида WSR-301 животным с двусторонней окклюзией общих сонных артерий улучшает коллатеральное кровоснабжение подвергнутых ишемии областей мозга за счет притока крови из вертебро-базилярной системы и, как следствие, уменьшает степень тяжести ишемического повреждения мозга и процент смертности животных.

2. Эффективность терапевтического использования полиэтиленоксида WSR-301 вдвое превышает его профилактический эффект.

3. Бадимол не оказывает прямого воздействия на сосудистую стенку in vitro. Однако при перфузии изолированной сонной артерии кошки в стандартных условиях, воздействуя на характер потока перфузата, вызывает медленную эндотелий-зависимую вазоконстрикторную реакцию, что доказывает чисто гидродинамическую природу воздействия такого рода полимеров на сосудистый фактор патогенеза церебральной ишемии.

4. Полиэтиленоксид WSR-301 и Бадимол эффективно предотвращают развитие коллаген-индуцированного микроэмболического синдрома в условиях нестационарного потока крови на модели кровеносного русла.

5. Оба полимера, изменяя гидродинамику кровотока, не оказывают влияния на затруднение терминальной перфузии, вызванное повышением гематокрита в условиях моделируемой системы кровообращения.

6. Уменьшение турбулентности потока крови раствором полиэтиленоксида WSR-301 препятствует развитию межклеточных взаимодействий в кровотоке, в частности, процессам самоактивации тромбоцитов и тромбоцитарно-лейкоцитарной взаимоактивации.

7. Полиэтиленоксид WSR-301 не оказывает прямого действия на агрегацию тромбоцитов и на антиагрегантный эффект аспирина в условиях микрокюветы агрегометра. Однако в условиях потока крови снижение гидродинамического сопротивления крови раствором полиэтиленоксида WSR-301 эффективно препятствует активации тромбоцитов и высвобождению из них физиологически активных агентов.

8. Обычные дозы аспирина не предотвращают само- и взаимоактивацию клеток крови, обусловленную гидродинамическими условиями потока крови в зонах стеноза. Полиэтиленоксид WSR-301 вдвое усиливает антиагрегантный эффект аспирина в условиях потока крови. Одновременное введение аспирина и полиэтиленоксида WSR-301 в кровоток почти полностью устраняет эффект активации тромбоцитов, развитие реакции высвобождения кровяных пластинок, а также активирующий полиморфноядерные лейкоциты эффект тромбоцитов в условиях нестационарного кровотока в системе, моделирующей реальное кровообращение.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

I. В соответствии с оформленным в ходе работы патентом N 2007170, зарегистрированным в государственном реестре патентов Российской федерации 15 февраля 1994г., высокомолекулярные линейные СГСП, в частности полиэтиленоксид WSR-301 (Union Carbide, USA), предложены в качестве "Средства для усиления, антиагрегационного эффекта аспирина". Это может дополнить общеизвестную тактику лечебно-профилактических мероприятий при стенозировании крупных артерий у больных сердечно-сосудистыми заболеваниями.

И. Высокомолекулярные линейные полимеры, снижающие ГС крови, в частности полиэтиленоксид WSR-301 (Union Carbide, USA), могут быть предложены в качестве основы для разработки новых лекарственных препаратов, предназначенных для профилактики и терапии нарушений мозгового кровообращения при-наличии стенозирующих и окклюзирующих поражений магистральных артерий головного мозга.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ.

1. Нетрадиционный подход к разработке новых средств профилактики и терапии цереброваскулярных заболеваний.//Тезисы докладов Всесоюзной молодежной конференции "Многоуровневая организация церебральных функций".-М„ 1991.-С.32.

2. Различие в эффективности профилактического и терапевтического влияния полимеров, снижающих ГС крови, на ход развития циркуляторной гипоксии мозга в эксперименте.//Фармакологическая коррекция гипоксических состояний.-Гродно., 1991.-Ч.1.-С.101-102. (Соавт. Ганнушкина И.В.)

3. Предотвращение развития коллаген-индуцированного микроэмбодического синдрома посредством снижения гидродинамического сопротивления крови специальными полимерами в условиях потока.//Ж.патол.физиол.эксперим.терапия,-1991.-N.4.- С.7-9. (Соавт. Акопов С.Э., Габриелян Э.С., Ганнушкина И.В.)

4. Biomechanical blood flow properties in regulation of CBF and nontraditional correction of brain ischemia by drag-reducing polymers.//Abstracts of Pan European Society of Neurology Second Congress.- Viena, 1991.- P.30. (Gannushkina I.V., Antelava A.L., Gabrielian E.S., Akopov S.E.)

5. Significance of biomechanic blood flow properties in regulation of systemic and cerebral hemodynamics and blood-vessel interactions; a nontraditional method of correction of their disturbances by high molecular polymers.//Abstracts of Constituent Congress of International Society for Pathophysiology.-Moscow,-1991.-P.104. (Gannushkina I.V., Antelava A.L., Gabrielian E.S., Akopov S.E.)

6. A new method of correction with high molecular polymer additions of blood aggregant properties in microembolic syndrome (experimental research).// Abstracts of Constituent Congress of International Society for Pathophysiology.-Moscow, 1991.-P.105. (Akopov S.E., Gabrielian E.S., Gannushkina I.V.)

7. Повышение эффективности фармакологической регуляции процессов активации и взаимодействий клеток крови в потоке полимерными добавками, снижающими гидродинамическое сопротивление крови.//Эксперим. и клинич. фармакология,-1992.-N4.-C.25-28. (Соавт. Акопов С.Э., Григорян М.Р., Габриелян Э.С., Ганнушкина И.В.)

8. Decrease of blood cells interactions and aggregation using drag-reducing polymers in blood flow model.//Microcirculatory Stasis in the Brain (Abstracts).-Tokyo, 1993.-P.114. (Gannushkina I.V., Gabrielian E.S., Akopov S.E.)

9. Средства для усиления антиагрегационного эффекта аспирина. - патент N2007170.-M., 15.02.1994. (Соавт. Ганнушкина И.В., Акопов С.Э., Габриелян Э.С.)

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

АДФ- аденозиндифосфорная кислота АТФ- аденозинтрифосфорная кислота БТП- богатая тромбоцитами плазма ГКТ- гематокрит

ГС- гидродинамическое сопротивление ЗМА- задняя мозговая артерия ПМА- передняя мозговая артерия ПМЯЛ- полиморфноядерные лейкоциты Яе- число Рейнольдса САЧ- сывороточный альбумин человека СГСП- снижающий(е) ГС полимер(ы) СМА- средняя мозговая артерия ТхА2 - тромбоксан А2 ТхВ2 - тромбоксан В2

ФМЛФ- формилметиониллейцилфенилаланин