Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Влияние неопиатного аналога лей-энкефалина и пептидного морфогена гидры на синтез ДНК и процессы перекисного окисления липидов в системе органов дыхания новорожденных крыс, подвергнутых пренатальной гипоксии

Министерство здравоохранения РФ ХАБАРОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

РГБ ОД На правах рукописи

УДК 577.175.82: 616.153.915.39: 576,3553- 053.31- 092.9 ЛЕБЕДЬКО ОЛЬГА АНТОНОВНА

ВЛИЯНИЕ НЕОПИАТНОГО АНАЛОГА ЛЕЙ-ЭНКЕФАЛИНА И ПЕПТИДНОГО МОРФОГЕНА ГИДРЫ НА СИНТЕЗ ДНК И ПРОЦЕССЫ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПВДОВ В СИСТЕМЕ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ НОВОРОЖДЕННЫХ КРЫС, ПОДВЕРГНУТЫХ ПРЕНАТАЛЬНОЙ ГИПОКСИИ

14.00.16 - патофизиология

Автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Хабаровск - 1994

/ /' / . ) / ( 1 ' ■" "

* Работа выполнена в лаборатории биохимии Института охраны материнства и детства СЮ РАМН, г.Хабаровск.

Научный руководитель: . доктор медицинских наук,

профессор С.С.Тимошин

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор В.Д.Линденбратен

доктор медицинских наук, профессор А.К. Константинов

Ведущая организация: Российский государственный медицинский

университет

Защита диссертации состоится " ^ " 0 1994 г.

в Ц/ часов на заседании специализированного Совета при Хабаровском Государственном медицинском институте (680000, г. Хабаровск, ул. Муравьева -Амурского, 35)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Хабаровского государственного медицинского института (680000, г. Хабаровск, ул. Муравьева-Амурского, 35)

Автореферат разослан "_"_1994 г.

Ученый секретарь специализированного Совета, доктор медицинских наук, профессор _

А.С.Руденко

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Наметившаяся в последние годы тенденция к выраженному ухудшению репродуктивного здоровья женщин, связанного с неблагополучием как экологического, так и социально-экономического порядка, значительно увеличивает группу беременных с высокой степенью риска для плода. Мультифакторное воздействие реализует свой повреждающий эффект в системе мать-плацента-плод через гипоксию > Таким образом, пренагальная гипоксия часто становится ведущим звеном в патогенезе различных нарушений плода и новорожденного /В.И.Бодяжина, 1963; Л.С.Персианинов 1967; С.М.Беккер, 1970; А.П.Николаев 1952, 1964, 1972 ;Z. Stembera, 1967/. *

При гипоксии одним из первых органов, наравне с центральной нервной системой, страдают органы дыхания /Т.Т.Мишина, 1980; Н.И.Пузырева и соавт., 1890; P.Е.Gold, R.Y.Burskirk, 1978/. Ведущую роль в патологии при гипоксии играет нарушение целостности мембранных структур клетки, при этом существенное значение имеют свободнорадикальяые процессы /Ю.А.Владимиров, А.И.Арчаков, 1972; Ю.А.Владимиров и соавт., 1975; Е.Б.Бурлакова, Н.Г.Храпова, 1985;/, активирование которых происходит при гипоксии . В конечном итоге, интенсификация перекисного окисления липидов (ПОЛ) и снижение активности системы антиоксидангной защиты (АОЗ) организма могут вызвать нарушения процессов клеточного деления. В доступной, нам литературе мы не встретили данных о состоянии процессов пролиферации, ПОЛ и АОЗ в системе органов дыхания новорожденных, перенесших пре-натальную гипоксию. Между тем, выяснение этих вопросов имеет не только теоретическое, но и прикладное значение , заключающееся в разработке методов целенаправленной профилактики и коррекции внутриутробных гипоксических повреждении.

В настоящее время регуляторные пептиды и их синтетические аналоги оцениваются как наиболее физиологические факторы коррекции различных патологических процессов /И.П.Ашмарин, Р.И.Кругликов,

1983; Е.И.Чазов, 1986/. Одним из таких регуляторных пептидов является опиатлый аналог лей-энкефадина - даларгин, синтезированный в лаборатории химии пептидов ВКНЦ РАМН / М.И.Титов, В.А.Виноградов, Н.Д.Беспалова, 1985/.Высокая биологическая активность и клиническая эффективность препарата создают условия для расширения показаний к его клиническому применению.

Однако, целый ряд клинических задач требует для своего решения использования неопиатных пептидов. В частности, беременность является абсолютным противопоказанием для применения опиатов. Опиаты оказывают выраженное влияние на гормональный статус организма матери / J.Knudtzon, 1986;. F.Sandler, 1986; F.Petraglia et al., 1987; H.Belhadj et' al,1989 /.вследствие чего возможно их опосредованное отрицательное воздействие на плод .В связи с этим, для коррекции посткипоксических нарушений было решено испольаовать "синтетический гексапептид . следующей аминокислотной последовательности Phe-D-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg . Данный пептид является аналогом лей-зн-кефалина (Tyr-Blu-Glu-Phe-Leu),. но, в отличие, от даларгина (Tyr-D-Ala-Glu-Phe-leu-Arg) не является лигандом опиатных рецепторов . В настоящее время физиологическая активность этого неопиатно-го аналога лей-энкефалина (НАЛЭ) интенсивно изучается. Другим представителем класса регуляторных пептидов, используемым в наших исследованиях,является пептидный морфоген головы гидры (ПМГ). Он представляет собой ундекапептид следующей аминокислотной последовательности pGlu-Pro-Pro-ßlu-Glu-Ser-Lys-Val-Ile-Leu-Phe. Первоначально ПМГ был выделен из представителей Caelenteratae / H.Boden-muller, H.С. Schaller, 1981/, а в последующем обнаружен у, млекопитающих и человека /H.Boderwiuller, M. Roberte, 1985; A.A. Вараксин и и соавт.,1987 /. Диапазон спектра биологической активности ПМГ широк , однако физиологическая роль этого вещества до сих пор не ясна и всесторонне изучается / C.BÏfr et al,, 1981; H.Schaller, S.Hoff-

- з -

meister., H;Bodenirmller, 1984; H.Schaller, H.Bodennmller,1985; К.Ю.Резников.Г.Д.Назаревская, 1988; А.Ю.Хомичук.С.С.Гимошин, 1991/. Также ,как и в случае с НАЛЗ, на базе ПМГ планируется создание новых фармакологических препаратов.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью нашего исследования являлось изучение действия пренагальной гипоксии на систему перекисного окисления липидов в легких и крови и дроцессы пролиферации эпителия трахеи новорожденных крысят, поиск путей профилактики и коррекции постгипоксических нарушений. Исходя из цели, предстояло решить следующие задачи:

1.Изучить влияние пренатальной гипоксии на процессы синтеза ДНК в эпителии трахеи и ПОЛ в легких и крови новорожденных крысят.

2. Выявить роль ферментативного и неферментативного звеньев АОЗ легких и крови новорожденных крысят, перенесших пренатальную гипоксию, в механизме активации ПОЛ. .

3. Исследовать влияние введения самкам неопиатного аналога лей-энкефалина и пептидного морфогена головы гидры на изучаемые показатели новорожденных крысят в зависимости от фона кислородного

• обеспечения беременности.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. В результате проведенных исследований установлено, что пренатадьная гипоксия вызывает угнетение синтеза ДНК в эпителии трахеи новорожденных крысят на фоне активации процессов ПОЛ в легких и крови. В механизме постгипоксической активации ПОЛ принимает участие снижение активности ферментативного и неферментативного звеньев АОЗ. Введение неопиатного аналога лей-энкефалина самкам на фоне нормального кислородного обеспечения беременности не вызывало иаменений исследуемых показателей у новорожденных крысят. Воздействие пептидного морфогена гидры при этих условиях привело к

угнетению синтеза ДНК в эпителии трахеи и снижению активности ферментативного звена АОЗ в легких новорожденных крысят. Введение нео-пиатного аналога лей-энкефалина и пептидного морфогена гидры беременным самкам на фоне гипоксии предотвращало постгипоксические нарушения у новорожденных крысят.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Работа носит теоретический характер с прикладными аспектами, является одним -из этапов программы лаборатории химии пептидов ВКНЦ РАМН по созданию на базе исследуемых веществ препаратов для коррекции и профилактики процессов, сопровождающихся угнетением- синтеза ДНК на фоне ослабления антиокси-дантной защиты организма.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ ДИССЕРТАЦИИ.

1. При воздействии пренатальной гипоксии в механизмах нарушения процессов клеточного деления в системе органов дыхания новорожденных существенное значение имеет активация ПОЛ в легких и крови.

2. В процессе усиления пероксидацми липидов значительную роль играет ослабление активности как неферментативного, так и ферментативного звеньев АОЗ в легких и крови новорожденных, перенесших прена-тальную гипоксию.

3. Постгипоксические изменения пролиферативной активности и состояния системы ПОЛ-АОЗ в системе орггшов дыхания и крови новорожденных успешно каррегируются антенатальным введением НАЛЭ и ПМГ.

4. В данной клинической ситуации НАЛЭ более эффективен, чем ПМГ.

АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИОННОГО МАТЕРИАЛА. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научной конференции ХГМИ И ИОМиД: "Экспериментальное и клиническое применение нейропептидов" (Хабаровск, 1991); на международных российско-японских симпозиумах "Про-

блемы педиатрии Тихоокеанского региона" (Хабаровск, 1992 -1993 гг.)

ПУБЛИКАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

По материалам диссертации опубликовано Б печатных работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста и состоит из введения, шести глав, выводов. Содержит 25 рисунков, 3 таблицы, 2 микрофотографии. Список литературы .имеет 321 источник, из них 215 - отечественных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Работа носит экспериментальный характер и обобщает 700 опытов, проведенных на новорожденном потомстве от 160 белых беспородных крыс-самок. Крысята были разделены

I

на 4 группы: 1- интактные, 2- перенесшие пренатальную гипоксию, 3 -крысята- потомство самок, получавших во время беременности один из исследуемых пептидов, 4 - крысята- потомство самок, получавших один из исследуемых пептидов на фоне гипоксии. Эвтаназию крысят осуществляли через 24 часа после рождения (спустя три дня от заключительного экспериментального воздействия). Состояние гипоксии моделировали ежедневным 4-х часовым пребыванием самок в барокамере СБК-48 (высота 9000 м, парциальное давление кислорода 42 мм рт.ст.) с 14-го по 19-ый день беременности. Для определения датированного срока беременности к самкам вечером подсаживали самцов, утром брали влагалищные мазки. День обнаружения в мазке спермы считался первым днем наступления беременности. Исследуемые пептиды: НАЛЭ РЬе-0-А1а-01и-РЬе-1.еи-Аге и ПМГ - ра1и-Рго-Рго-В1и-01а-Зег-Ьуз-Уа1-11е-1еи-РЬе, были синтезированы в лаборатории химии пептидов ВКНЦ классическими методами пептидной химии в растворе и вводились самкам внутрибрюшинно из расчета 10 мкг/кг массы в 0.15 мл изотонического раствора ИаС1 за 30 минут до помещения в барокамеру. Самки, потомство которых составляло 1 и 2 экспериментальные группы, полу-

чали эквиобъемное количество изотонического раствора NaCl.

Для оценки синтеза ДНК крысятам за 1 час до эвтаназии вводили Н^-тимидин из расчета 1мкКи/1 г массы (уд.активность 84 Ки/ммоль). Изготовление радиоавтографов проводили по общепринятой методике /О.И.Епифанова,1977/. Индекс меченых ядер (ИМЯ) определяли на основании просчета 2500 ядер в зоне пролиферации трахеи и выражали отношением меченых ядер ко всему количеству ядер в процентах. Мечеными считались ядра, над которыми было не менее 5 зерен серебра.

При проведении биохимических исследований после декапитации крысят извлеченные легкие быстро промывали охлажденным физиологическим раствором и замораживали в жидком азоте. Дальнейшая обработка тканей проводилась согласно методике определения того или иного биохимического показателя.

0 состоянии ПОЛ судили по уровням продуктов: первичных - гидроперекисей липидов (ГП), промежуточного - малонового диальдегида (МЦА) и субстрата пероксидации - обших липидов. Спектрофотометри-ческое определение содержания ГП проводили по методике В.Б.Гаврило-ва и Н.И. Мешкорудной /1983/, общих липидов с помощью тест-наборов фирмы "LACHEMA". Флюориметрическое определение содержания МДА - по методике Т.Н. Федоровой, Т.С.Коршуновой, З.Г.Ларского /1983/.

О состоянии неферментативного звена АОЗ судили с помощью флюо-риметрического определения уровня альфа-токоферола по методике L.D.Hansen, W.T.Wariorick /1966/.

При оценке ферментативного звена АОЗ спектрофотометрически' определяли уровни активности ферментов: каталазы по К.I.Beers /1987/, супероксиддисмутазы - СОД по L.W.0berley,D.R.Spits /1985/, глутати-онпероксидазы - ГП0 по С.Little, P.Brien /1968/, глутатионредуктазы - ГР по J.Carbery, B.Mannervik /1975/, глутатион-Б-трансферазы -rST по J. H.Keen.W.H.Habing, У.В.Jacoby /1976/. Кроме того, определяли активность ключевого фермента пентозофосфатного цикла, тесно

_ 7 - •

связанного с обменом глутатиона, - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ) - по методике Е.А.КоХтапп /1969/. Активность ферментов в легочной ткани приводили к концентрации белка в образцах, который определяли по Лоури, в крови - к концентрации гемоглобина, который определяли унифицированным циангидриновым методом.

Проводили гравиметрические измерения (абсолютной массы тела, абсолютной и относительной массы легких) новорожденных крысят. Статистическая обработка полученных данных осуществлялась с использованием критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ' ИССЛЕДОВАНИЙ. При изучении абсолютных величин массы тела, абсолютных и относительных величин массы легких не было выявлено достоверных изменений у подопытных животных по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе . При анализе процессов синтеза ДНК (табл.1) в доступной нам литературе мы не встретили сведений о величине ИМЙ в эпителии трахеи новорожденных крысят. У взрослых мышей через 1 час после введения Н3- ти-мидина (импульсная метка) эпителий трахеи содержит 1-4% меченых клеток /И.М.Оаэ еЬ а1., 1980/. По даным О.М.ЮопеПу еЬ а1. /1982/., в эпителии трахеи 25-дневных крыс чэреа 1 час после инъекции Н3-ти-мидина метка может наблюдаться в базальных и переходных клетках, в меньшей степени - в бокаловидных. Реснитчатые клетки Н3 - тимидин при импульсной метке не включали. При этом индекс метки в базальных и переходных клетках составил около 77., а бокаловидных - 1%. Полученные нами величины ИМЯ в определенной степени соответствуют литературным данным. При анализе процессов синтеза ДНК установлено выраженное уменьшение ИМЯ в трахее крысят, подвергнутых внутриутробной гипоксии: показатель снизился более, чем в 3 раза по сравнению с аналогичным у интактных крысят. Сопоставляя наши данные с данными литературы, следует отметить, что в опытах С.ШесЗепги е1 а1. /1981/

Табл.1

Влияние непиатного аналога лей-зкефалина и пептидного морфогена гидры на гравиметрические показатели и синтез ДНК в эпителии трахеи новорожденных крысят.

ГРУППА Масса тела, г Абс.масса легких, мг Отн.масса легких, -мг/г ИМЯ, %

КОНТРОЛЬ 4,80±0.08 123.611.3 26.1+0.6 1.6010.10

' гипоксия 4,91±0.09 122.3+1.4 25.3+0.6 0.5010.05*

НАЛЭ ■ 4,99+0.09 126.0+1.4 25.510.4 1.6210.06

НАЛЭ- гшюксия 4,95+0.10 125.8+1.7 25.7+0.5 2.0010.08а

пмг 5,01+0.09 125.8Ц. 4 25.410.4 1.2010.04*

пмг- гипоксия 5,0010.10 124.5±1.4 25.610.6 1.6810.08

Примечание: а - р< 0.001 по сравнению с контрольной группой.

действие хронической гипоксии вызвало у взрослых крыс стимуляцию синтеза ДНК в легких, печени и почках, проявившуюся в увеличении ИМЯ. Возможно, эти отличия обусловлены тем, что в этих экспериментах крыс "поднимали" на высоту 4250 м. Такое воздействие характеризуется как гипоксия средней тяжести. В экспериментах С.В.Вдовенко

/1983, 1985/ гипоксия осуществлялась в том же режиме, что и в наших исследованиях. Однако, реакция процессов клеточного деления в эпителии роговицы и языка взрослых крыс носила двухфазный характер: кратковременное угнетение сменялось продолжительной стимуляцией синтеза ДНК. Эта стимуляция расценивалась как компенсаторная, направленная на сохранение тканевого гомеостаза в условиях повторного стресса.

Наиболее вероятной причиной отличий, наблюдаемых в наших исследованиях по сравнению с данными С.В.Вдовенко, на наш взгляд, представляется особенность возрастных реакций пролиферативных процессов новорожденных крысят на гипоксию. В пользу этого свидетельствуют данные Л.И.Уткиной и С.С.Тимошина /1990/: повторная пренатальная гипоксия вызывала у новорожденных крысят стойкое угнетение пролиферации гепатоцитов, проявившееся уменьшением ИМЯ и митотического индекса. Только через 40 дней после гипоксии это угнетение сменилось компенсаторной стимуляцией. Результаты наших исследований также являются косвенными свидетельствами более высокой чувствительности пролиферативных процессов на ранних этапах онтогенеза.

Изучение процессов в системе ПОЛ-АОЗ (табл. 2,3) помогает .понять механизм нарушений пролиферации, наблюдавшихся в наших исследованиях. В легких животных, перенесших пренатальную гипоксию, выявлено достоверное (по сравнению с аналогичными показателями у ин-тактных крыс) увеличение в 1.3 раза уровня ГП липидов, снижение в 1.4 раза уровня общих липидов. В отношении уровня МДА наблюдалась выраженная тенденция (р<0.07) к его увеличению в постгипоксических легких по сравнению с контрольными показателями. При изучении в этих условиях жирорастворимого звена АОЗ выявлено достоверное уменьшение в 1.2 раза содержания альфа-токоферола в сравнении, с контрольным показателем.

При исследовании ферментов АОЗ у подопытных животных обнаружено

Табл. 2

Влияние неопиатного аналога лей-энкефалина и пептидного морфогена гидры на содержание обида липидов, ГЛ липидов, МДА и альфа-токоферола в легких новорожденных крысят.

Показатели системы ПОЛ-АОЗ Общие липиды, мг/г ткани ГП липидов, мМ/г лип. МДА , ед.фл. /г лип. Альфа-токоферол, мкг/г лип.

Контроль 1.71+0.07 0.188+0.015 504.4+46.1 12.68±0.68

Гипоксия 1.26+0.09 * 0.234+0.012* 618.9±45.1 10.64+0.51*

НАЛЭ 1.55*0.08 0.179+0.016 344.3+53.6* 17.45+1.37*

НАЛЭ - 1.66±0.08 0.184±0.014 358.3±48.1* 19.52tl.39*

гипоксия IB.iT 1.5610.07 0.176±0.013 488.3±42.3 13.08±0.68

ПМГ - 1.69+0.09 0.191+0.011 498.9+42.9 16.62±0.86*

гипоксия

Примечание : * - р< 0.001 по сравнению с контрольной группой.

достоверное снижение активности СОД и каталазы - в 1.2 раза, ГПО -в 2 раза по сравнению с контролем. Необходимо отметить, что уровни активности ГР и ГБТ во всех экспериментальных группах (в т.ч. с антенатальным введением исследуемых пептидов на разном фоне кислородной обеспеченности) не имели достоверных отличий в сравнении с показателями интактных новорожденных крысят.

Табл. 3

Влияние неопиатного аналога лей-знкефалина и пептидного морфогена гидры на активность ферментов антиоксидантной защиты в легких новорожденных крысят.

Активность ферментов АОЗ Кагалаза, нМ Н20г/мин/ мг белка СОД, НМ ДИ-формазана/мин мг белка \ ГПО, НМ НАДФН мин/мг белка Г6ФДГ, нМ НАДФ/мин/мг белка

Контроль 13.2+1.00 1.17+0.10 10,34±0.10 9.52+0.89

Гипоксия 9.8±0.57* 0.9110.06* 5.23+0.40* 10.53t0.74

НАЛЭ 10.6+0.63 1.21+0.07 11.0910.53 9.41+0.62

НАЛЭ - 12.5+0.64 1.15+0.07 13.47+0.97* 13.0310.67*

гипоксия ПМГ 10.510.54 1.19+0.08 6.6010.46* 13.9010.97*

ПМГ - 13.1+0.89 1.12+0.07 10.08+0.63 15.5411.26*

гипоксия

Примечание : * - р< 0.05 по сравнению с контрольной группой.

Снижение уровня общих дипидов (субстрата ПОЛ) на фоне увеличения содержания ГП липидов (одного из продуктов ПОЛ) указывает на интенсификацию процессов пероксидации липидов. Известно, что в условиях физиологически протекающей беременности альфа-токоферол активно аккумулируется в печени плода. Одной из сторон адаптационной реакции антиокислительной системы в ответ на действие окислительных

факторов является мобилизация жирорастворимых антиоксидантов и повышение их уровня в легких /А.А.БеУагпап еЬ. а1., 1980/. Согласно нашим далным, при пренатальной гипоксии в легких новорожденных не происходит увеличения содержания альфа-токоферола, что должно быть расценено как недостаточность компенсаторных возможностей антиокси-дантной системы. Следует отметить, что липиды - не только субстрат активного окисления, но и источник антиоксидантной активности тканей. Поэтому снижение уровня обвщ липидов в постгипоксических легких также свидетельствует об угнетении антиоксидантной активности. Срыв биооксидантной защиты при пренатальной гипоксии подтверждает и снижение функциональной активности ферментативного компонента АОЗ легких новорожденных (системы СОД-кагалаза-ГПО). В связи с тем, что соотношение П0Л/А03 является физиологической константой, сдвиг равновесия в этой.системе в сторону интенсификации процессов перокси-дации вызывает дестабилизацию и нарушение гомеостаза. Показателем нарушения тканевого гомеостаза в наших опытах явилось угнетение синтеза ДНК.

Вторая часть нашей работы была посвящена профилактике и коррекции выявленных постгипоксических изменений с помощью НАЛЭ и ПМГ (табл.1-3). Исследуемые гравиметрические показатели новорожденных крысят оказались устойчивыми к введению пептидов независимо от кислородного режима эмбриогенеза.

Введение НАЛЭ беременным крысам на фоне нормального кислородного обеспечения беременности не вызывало значимых изменений ИМЯ в эпителии трахеи новорожденных крысят. Это совпадает с результатами предыдущих исследовании, проведенных в нашей лаборатории, в которых НАЛЭ не оказывал влияния на процессы пролиферации гепатоцитов новорожденных крысят /Л.И.Уткина, С.С.Тимошин, 1991/

У крысят, матери которых перед гипоксией получали НАЛЭ, выявлена не только нормализация величины ИМЯ, но и достоверное увеличение

этого показателя по сравнению с интактным контролем. Данные о том, что инъекции НАЛЭ интакгным беременным самкам, не подвергавшимся зеансам гипоксии, не вызывали изменения ИМЯ в эпителии трахеи новорожденных крысят, свидетельствуют о коррегирующем влиянии исследуемого регуляторного пептида на процессы клеточного деления при внутриутробной гипоксии. В основе этого положительного влияния могут лежать различные механизмы, в частности, ингибирование ПОЛ и активация АОЗ организма. Это предположение получило подтверждение при анализе процессов П0Л-А03 в легких новорожденных крысят.

Введение НАЛЭ на фоне нормального кислородного обеспечения беременности не вызвало изменений содержания общих липидов и ГП липи-дов в легких новорожденных крысят. Отмечалось статистически значимое уменьшение содержания МДА, возможно обусловленное достоверным повышением в 1.4 раза уровня альфа- токоферола (по сравнению с аналогичными показателями контроля). Не наблюдали достоверной ответной реакции на введение НАЛЭ со стороны ферментативного звена АОЗ.

Таким образом, результатом действия НАЛЭ на фоне нормально протекающей беременности явилась активизация неферментативного звена антиоксидантной системы, которая привела к снижению содержания вторичных продуктов ПОЛ в легких. Однако на пролиферативную активность эпителия трахеи данное смещение равновесия системы ГОЛ-АОЗ влияния не оказало.

Атенатальное введение НАЛЭ на фоне гипоксии нивелировало отрицательные постгипоксические последствия в системе ПОЛ-АОЗ. Об этом свидетельствует восстановление до контрольного уровня функциональной активности кагалазы и СОД в легких новорожденных.. В этих условиях активность ГПО и Г6ФДГ соответственно увеличилась в 1.2 и 1.3 раза по сравнению с аналогичными показателями в контроле. Параллельное увеличение активности ГПО и Г6ФДГ представляется закономерным с учетом связей этих ферментов через НАДФН и восстановлений

глютатион. В легких новорожденных этой группы наблюдали увеличение почти в 1.5 раза содержания альфа-токоферола. Следовательно, введение НАЛЭ на фоне пренатальной гипоксии привело к усилению неферментативного и ферментативного звеньев АОЗ в легких новорожденных. По-видимому, это обусловило достоверное снижению содержания МДА ниже контрольных цифр, воспрепятствовало снижению уровня общих липи-дов и повышению - ГП липидов в легких новорожденных крысят, перенесших внутриутробную гипоксию. Нормализация содержания липидов в этих условиях возможно связана с тем, что при введении НАЛЭ стимуляция активности АОЗ в легких новорожденнных крысят шла параллельно со стимуляцией сурфактантной системы, которая, по данным Н.И.Пузы-ревой и соавт. /1989/, крайне подвержена отрицательному воздействию пренатальной гипоксии. Аналогичным свойством, в частности, обладает даларгин, способный улучшать в поврежденных, легких структуру пнев-моцитов 2-го типа, ответственных за производство сурфактанта, а также восстанавливать в них осмиофильный материал /И.И.Петров и соавт. , 1989/

I

Таким образом, исследуемыи гексапептид оказывал антигипоксичес-кое действие. Изучение ПОЛ в легких свидетельствует, что определенная часть . защитного эффекта осуществляется за счет ослабления пе-роксидации и усиления АОЗ.

При оценке значения стимуляции процессов синтеза ДНК в-трахее у новорожденных группы " НАЛЭ +• гипоксия" следует учитывать представление о компенсаторном характере постстрессорной активации про-лиферативных процессов . В контексте наших исследований уместно предположить, что обусловленная воздействием НАЛЭ нормализация процессов ПОЛ способствовала ускорению наступления компенсаторной фазы активации пролиферативных процессов.

При изучении влияния ЕМГ мы обнаружили, что введение морфогена беременным крысам вызвало уменьшение ИМЯ в 1.3 раза в эпителии тра-

хеи новорожденных крысят. Следует отметить, что в предыдущих исследованиях, проведенных в нашей лаборатории, ПМГ стимулировал процессы пролиферации в широком диапазоне доз и в различных тканях (роговице, тимусе, языке ) / А.Ю.Хомичук, С.С.Тимошин 1991/. Вопрос о том, связано ли угнетение синтеза ДНК о особенностями регуляции пролиферации в эпителии трахеи, или, в данном случае, мы имеем дело с особенностями возрастной реакции, требует дальнейшего исследования.

Введение перед гипоксией беременным самкам ПМГ предотвратило нарушение процессов синтеза ДНК в эпителии трахеи новорожденных крысят. ИМЯ в этой группе новорожденных не отличался от показателя у интактных крысят. Способность регуляторных пептидов оказывать разнонаправленные эффекты, в зависимости от условий их применения , хорошо известна . Тот факт, что ПМГ проявил себя при нормальном кислородном обеспечении эмбриогенеза как ингибитор клеточного деления, не должен рассматриваться как противоречащий'его способности нормализовать клеточное деление в условиях кислородного голодания.

При исследовании системы ПОЛ-АОЗ не отмечалось достоверной ответной реакции на введение ПМГ на фоне нормальной кислородной обеспеченности беременности со стороны большинства исследуемых показателей в легких новорожденных крысят. Однако у этой группы животных отмечены разнонаправленные достоверные изменения уровней функциональной активности ГПО и Г6ФДГ: активность ГШ снизилась, активность Г6ФДГ увеличилась. Следовательно, антенатальное введение ПМГ на фоне нормального кислородного обеспечения беременности вызвало ослабление ферментативного звена АОЗ за счет снижения активности ГПО. Можно предположить, что снижение в этих условиях пролифератив-ной активности эпителия трахеи новорожденных•крыс связано с процессами ПОЛ и обусловлено влиянием ПМГ на тиоловые механизмы регуляции клеточного деления.

При введении ПМГ на фоне недостаточного кислородного обеспечения беременности в легких новорожденных крысят произошло достоверное увеличение содержания альфа-токоферола и нормализация функциональной активности каталазы, СОД и ГПО, активность Г6ФДГ при этом возросла почти в 1.3 раза. Это способствовало восстановлению уровней обшдх липидов, ГП липидов до контрольных цифр.

Таким образом, под влиянием антенатального введения ПМГ произошла нивелировка постгипоксических изменений в системе ПОЛ-АОЗ легких новорожденных крысят за счет повышения или нормализации относительно контрольного уровня активности неферментативного и ферментативного звеньев АОЗ. Это, в свою очередь, способствовало•сохранению тканевого гомеостаза.

Неоходимо отметить, что в крови крысят, перенесших пренатальную гипоксию, выявлены изменения ПОЛ-АОЗ той же направленности, что и в легких: активация пероксидации липидов, проявившаяся достоверным увеличением содержания продуктов ПОЛ на фоне угнетения как ферментативного, так и неферментативного звеньев АОЗ. Введение НАЛЭ И ПМГ также способствовало коррекции постгипоксических нарушений в крови, что указывает на однонаправленность дейстивия этих пептидов в отношении системы ПОЛ-АОЗ на разных^уровнях: легких и организма в целом. ' ,

Следовательно, представленные данные свидетельствуют, что в процессах нарушения клеточного деления при внутриутробной гипоксии большое значение имеют активация ПОЛ и угнетение АОЗ. Эти процессы

успешно корригируются с помощью регуляторных пептидов. Учитывая

*

отсутствие отрицательных аффектов НАЛЭ на процессы ПОЛ и пролифера-. ции в исследуемой экспериментальной" ситуации, представляется целесообразным дальнейшее всестороннее изучение свойств этого пептида для создания на его базе фармакологического препарата.

ВЫВОДЫ

1. Воздействие пренатальной гипоксии вызывает в эпителии трахеи неонатальных крысят угнетение синтеза ДНК.

2. Постгипоксическое угнетение синтеза ДНК эпителия трахеи происходит на фоне активации процессов ПОЛ в легких и крови новорожденных крысят.

3. В механизме постгипоксической активации перекисного окисления принимает участие снижение активности ферментативного и•неферментативного звеньев АОЗ системы органов дыхания и крови новорожденных крысят.

4. Ведение НАЛЭ самкам на фоне нормального кислородного обеспечения беременности не вызывало изменений процессов синтеза ДНК в эпителии трахеи и отклонений в системе ПОЛ-АОЗ легких у новорожденных крысят.

5. Введение НАЛЭ беременным самкам на фоне гипоксии предотвращало постгипоксические нарушения процессов синтеза ДНК эпителия трахеи и системы ПОЛ-АОЗ новорожденных крысят.

6. Эффект антенатального введения ПМГ на фоне гипоксии сходен с результатом при введении НАЛЭ; однако, воздействие ПМГ при нормальном кислородном обеспечении беременности привело к угнетению синтеза ДНК в эпителии трахеи и снижению активности ферментативного звена АОЗ в легких новорожденных крысят.

7. Применение неопиатного аналога в качестве антенатального корректора постгипоксических повреждений у новорожденных высокоэффективно и лишено отрицательных последствий, сопутствующих опиатным аналогам.

- 18 -

■ СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние гипоксии и односторонней овариоэктомии крыс на их потомство //Балл. СО АМН СССР.-1989.- N 3.- С. 12-14. Совместно с Б.Я.Рыжавским, Р.В.Учакиной,- Т.Ю.Липатовой, H.H. Широких

2. Влияние хронической внутриутробной гипоксии на процессы перокси-дации липидов в легких новорожденных крыс//Актуальные проблемы охраны материнства и детства на востоке страны.- Хабаровск, 1991.- С. 35-37.(Сб.науч.тр./НИИ Охраны материнства и детства СО РАМН. Совместно с Р.В.Учакиной, С.В.Бондаренко, Н.А.Беломыциной

3. Использование тиосульфата натрия и иэогиорбамина для антенатальной коррекции постгипоксических нарушений системы П0Л-А03 в легких новорожденных крыс //Бюлл. СО АМН СССР.- 1992.- N 5.- С. 13-16.- Совместно с Р.В.Учакиной

4. Влияние пренатальной гипоксии на синтез ДНК в эпителии трахеи и систему П0Л-А03 в легких новорожденных крысят//Бюлл. зксперим. биологии и медицины.- 1994.- N 5.- С. 531-533. Совместно с С.С.Тимошиным

5. Применение неопиатного аналога лей-энкефалина и пептидного мор-фогена гидры для коррекции нарушений пролиферации в эпителии трахеи и процессов ПОЛ в легких новорожденных крыс, подвергнутых пренатальной гипоксии //Бюлл. зксперим. биологии и медицины.-1994.- N 5.- С. 535-538. Совместно с С.С.Тимошиным