Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние комплексного соединения бис(2-этилгексаноато)ди(этилентетрамин) кобальта на эритропоэз

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАШШ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Бгор^ф^кий гортоарственный медицинский институт

\! ' ..; На правах рукописи

УЖ 516.156.194:615.015

ПОПОВА Ирина Юрьевна ВЛИЯНИЕ КОМПЛЕКСНОГО СОЕДИНЕНИЯ БИС (2-ЭТ!!ЛГЕлСЛ1ЮАТ0) Д11 (ЭTIDH3ГТЕТРЛ1.Т1ПI) КОБАЛЬТА IIA ЭРШР0П0ЭЗ 14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

У<1а - 1993

Работа юшолнешщ в Институте Органической химии Уфимского научного центра РАН, г.Уфа.

Научный руководитель - доктор медицинских наук,

профессор Ф.С.Зарудий Научный консультант - заслукошшй деятель наука РФ и

Официаль ные оппоненты:

- доктор медицинских наук, профессор Р.Н.Абдуллина;

- доктор медицинских наук, профессор Р.А.Гараев. Ведущая организация - Институт фармакологии Российской

Акадешш наук.

в часов на заседашш специализированного совета К С84.35.02 при Башкирском государственном медицинском институте ( г.Уфа, ул.Ленина, 3).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Башкирского государственного медицинского института.

Автореферат разослан " " 1993 г.

Башкортостана, доктор медицинских наук, профессор Д.Н.Лазарева

Защита диссертации состоится

Учений секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук, профессор

Э.Г.Давлетов

ОВЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблема. Среди (¿акторов о кружащей сре-н, неблагоприятно влияющих на организм, сникающих его внут-ешше резерв», большое значение имеют анемизирующне агенты, пни относятся травма, сопровождающаяся кровопотерей, отрав-ешш промышленными ядами, обуслогаешюе неблагоприятной эко-огаческой обстановкой, бесконтрольное пргалонешш лекарствен-!сс средств, обладающих побочными действиями на кроветвор1ую истому. Новое и весьма значительное увеличение интереса к зучению фармакологических средств защиты и лечения анемий, 1звашшх облучением, связано с рядом аварий на АЭС и с об-эй неблагоприятной радиацпошгой обстановкой з ряде районов -раны.

В то же время, арсенал гемостнмулирующих средств, при-¡няемый d клинике, весьма новели::. Известно, что соединения бальта являются признанными стимуляторами кроветворения, и способствуют регенеративным процесса!.! в организме п сталируют иммунную систему. В медицине, ветеринарии п зоотех-и препараты кобальта нашли широкое применение как противо-емические средства и факторы роста. К шш относятся циан-Зал амин , коакид, кобазол я нокоторив другие комплексные эдшюния кобальта (Азкзов !,!.А., 1963; Иванова B.C., 1983'; псов H.H., 1909; Нанаева U.T. и др. 1982).

Однако, комплексные соединения кобальта не лишены ряда ючыых эффектов. Применение же цианокобаламцна целесообраз-лишь при наличия В^-нодостаточности.

Поиск стимуляторов эритропоэза среди органических произ-

водных кобальта и других микроэлементов является перспектив-ним, т.к. органические лпганды в составе комплексов, а тагам способ координации атома металла, способны модифицировать токсико-фармакологаческио свойства соединений (Азизов U.A., Шусходааов A.I.I., 1988).

Цель работа. На основании скрининга комплексных соединений кобальта выявить наиболее эффективный препарат для дальнеГшего углебленного исследования. Определить его фармакологическую активность при различных формах анемий л механизм его влияния на эритропоэз, а также выявить возможность использования данного соединения в медицине и ветеринарии в качестве стимулятора гемопоэза.

Основные задачи исследования. Провести скрининг 21-го комплексного соединения кобальта на модели фенилгидразиновой анемии, определить их острую токсичность, определить связь химической структуры и биологического действия, выявить наиболее активный препарат. Изучить:

- влияние наиболее активного соединения на эритропоэз (¡при анемиях, вызванных фенилгидразином, кровопотерей, бензолом, ионизирующей радиацией и сравнить его действие о эффективностью коамида;

- влияние активного соединения на костный мозг и стволовые кроветворные клетки;

- эритропоэтическую активность;

- влияние на стабилизацию мембран эритроцитов;

- влияние на первичный иммунный ответ.

Определить острую токсичность на разных видах животных и эффективную дозу, а также его влияние на системное артери-

альное давление.

Научная новизна. Впервые проведено исследование новых оригинальных комплексных соединений кобальта с полиамидами, полиамидами и импдазолииами и их влияние на эритропоэз у ане-мязированных ::швотннх.

йзявлено наиболее активное соединение - КЭТ-122 и изучено его воздействие на состояние периферической крови и кост -ного мозга при различных видах анемий по сравнению с коаыпдом.

Изучено влияние состп'иилш КЭТ-122 на первичный иммунный ответ и системное артериальное давление.

Практическая ценность. Полученные экспериментальные данные расширяют и углубляют имеющиеся сведения о комплексных соединениях кобальта и позволяют наметить пути использования наиболее эффективного препарата в качестве лекарственного средства, стимулирующего эритропоэз при анемиях различного генеза.

Результаты используются Институтом органической химии ■• Уральского отделения РАН для дальнейшего направленного синтеза комплексных органических соединений с микроэлементами. 1зучается возможность применения препарата при лечении ане-пш в скотоводстве.

БЯецрешш в практику. Методики исследования костнсмоз-'ового кроветворения п эрптпопозтической активности соедине-шй используются при изучении еловых стимуляторов эритропооза I лаборатории новых лекарствешшх средств КОХ УрО РАН.

Результаты исследований внедрены з учебный процесс ка-едр фармакологии I и II Болгарского государственного медицин-кого института.

Положения, выносимые на защиту:

1. Соединение КЭТ-122 обладает наименьшей токсичностью и наибольшей биологической активностью по сравнению с изучен ными новыми комплексными соединениями кобальта.

2. Эритропоэз-стимулирущео действие соединения КЭТ-122 не уступает и (или) превосходит эффект коашда.

3. Соединение КЭТ-122 повышает резистентность мембран эритроцитов.

4. Соединение КЭТ-122 умеренно токсичное вещество. В эф фективинх дозах оно не оказывает влияния на артериальное дав ление и стимулирует первпчный иммунный ответ.

Апробация работы. Осиошше результаты экспериментальной работы были доложены на Всесоюзных конференциях ^'Активация кроветворения и радиорезистентность организма" (Обнинск, 1990) и "Поражение и восстановление кроветворения при острой лучевой болезни" (Москва, 1990), а также на заседании Башкир ского общества фармакологов и на научном семинаре лаборатори: новых лекарствошшх средств ПОХ УрО РАН; на межкафедралыюм совещании кофедр фармакологии I и 2 ЕХШ и лаборатории новых лекарственных средств ИОХ УрО РАН.

По темо диссертации опубликовано 9 работ.

Структура и объем тоботн. Диссертация состоит из введения, аналитического обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 14 разделов результатов собственных экспериментов, их обсуждения, выводов, практических рекомендаций и указателя цитированной литературы.

Работа изложена на 187 страницах машинописного текста, содержит 19'таблиц и 35 рисунков. Библиографп'^склл указа-

голь включает ^^наименования печатных работ, из них 18О-этечествсшпвс и 169 - иностранных.

I.iATEKiAJiU И ОСНОНШЕ МЕТОДЫ 11ССВД0ВЛНКЯ

Проведен скрининг 21 комплексного соединения кобальта с полиамшгами, полиамидами ч кмидазолннами, синтезированными в институте органической химии УрО РАН в лаборатории координационной химии к.х.н., с.н.с. И Л'.Кошенной.

Исследования проведены па 800 беспородных белых крысах эбоего пола, 550 красах-самцах линии Вистар, 990 белых беспородных шшах, 530 мигах линии СБА х Сг-г,В1)Г^ и 25 кроликах юроды "Шиншилла".

Действие препаратов исследовалось при внутримышечном ле-гебном режиме введения через день.

Постгеморрагическая и гемолитическая анемия у крыс вос-[роизводшшсь общепринятыми методами (Лазарев Н.Б., 1957).

Бензольная гипопластическая апегжя воспроизводилась под-:сяншл введениям! кроликам бензола в дозе I мл/кг ежедневно в еченло 4 дней (Михайлец Г.А., Моисеева 0.11., 1978).

Острую лучевую болезнь у крыс вызывали однократным то-апышм гамма-облучениом в дозе 6,0 Гр на аппаратах "РОКУС-i.f АГАТ-Р (60Со, моищость дозы 0,45 Гр/мин).

Показатели периферической крови (число эритроцитов, лей-эцитов, ретикулоцитов, уровень гемоглобина, гемдтокрит, лей-зцитарнал формула) исследовались в динамике общеприняты;,га гнездами. Рассчитывались показатели времени созревания ретикуло-лтов,интенсивности эрвтропоээа.интенсивности гемолиза и эритро-!тов (Мосягнна E.H., 1962,1976{Назаров С.Б.,1988), а также цвет-

но»! показатель., сродное содержание и средняя концентрация гемоглобина в эр;:тро131тс (.'.¡еныппков Н.Б„,, 19Ь7). Исследования костного мозга проводили с .помощью мстодшси эритробластичес-ких островков (ЭО) (Захаров ПЛ. п др*., 1904.; Рассохин Л.Г.» 19Ь9) п подсчета парциальной эритробластограм.ц . Цитохимическая идентификация зритробластических клеток в мазках костного мозга производилась при иомощ; качественной реакции внутриклеточного гемоглобина на бсизидш; (Назаров С.Б.,' 1988) Исследование эндогенных колош:;! в селезонке (К03--С) проводилось по методу М^Е.ТШ ; Е.А. ГПсСаИос/, цУ64) в модификации Ал*коношшн1шкова (1975).

Изучение эритропаэтпческой активности проводили по методическим рекомендациям ПИЛ уды.; и др. (1932) па пол Пштемп-ческих трансфузиошизх тлшах на основании ретпкулоци-

тариой реакции в периферическом русле»

ыСкбраЕиостабилизиругащая активность изучалась по методам кислотной (Терсков И.Л.. Гптсяьзон II.И., 1957) и осмотической (Идельсон 1ь70) .эрптрограмм на (Тоне гемолитической анемии. При .этом препарата вводились одновременно с инъекциями (] енклпщрагкнэ,.

Нлиянке на первичный иммушшн ответ .определял]' методом подсчета антптслообразущих единиц (АОК) в селезенке иг^ей по У-к- Мсг^/л, Д./и<еме в модификации ¿¡.£м<пмпдЬап (1905).

На некаркотизировашшх кроликах изучалось действие сое динения КЭТ-122 при внутривенном введении на артериальное давление.

Острая токсичность и эффективная доза препаратов опре-

делилась по Лкчфидду и Уилкоксону к по Керберу, соответственно, на нпмах и крысах.

При статической обработке результатов вероятность различий считали достоверной при Р < 0,,0о.. Средш:е данные оценивали с помощью t -критерия Стыэдеита,. а альтерцатинше реакции по X2 (Соленые:!! М.Л., 1963)..

0СН01ШЕ РЮУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСЗДИШ

Острая токсичность г.оолрдовашшх соединений варьировала от 68 до 250 да/кг (табл.. I) при внутримышечном введении на мышах и ирисах.. Для большинства соединений, кроме КЭТ-122 и коампда,, видовой специфичности обнару>;;о:1о не било. С целью проведения исследований в адекватных условиях была определена величина ЛЛ-д для ко амида,, т.;:- в литературных источниках дшпшх о введении его внутри.?лпечно обнаружено не било. Рее соединения принадлежат к 3 классу токсичности и являются умо-ршшо' опасными веществами по классификация К.К.Сидорова (Из— моров' Пий* и др..„ 1977)..

В> качестве с: к: р и н и ц; г о в о й модели- была выбрана* фенилшдразшювая: анемия.. Препаратами сравнения служили цпонкобплш.шн: И' коакнд.. Как' показали наши: исследования,, новые синтетические производнно'кобальта,, В) той или иной степени,, стимулировали кроветворение.. Наибольшее влянпо на зрлт-ропоэз. обладала 6 соединений по сразиони» с коа'.шдом: КЭТ-122,, КВ-4 „ КВ-5 „ 103-16 и Иг-2Б^ Повышений числа лейкоцитов способствовали без' исключения! все: вещества.. Циалкобаламин уступал по- своей активности: всем исследованным препарата.'«:,, а тон числе и коамвду..

Таблица I

Острая токсичность комплексных соединений кобальта с полиаминами, полиамидами и ими д£3. слипами

Химическое назвалио Химическая Величина мг/кг

и шифр соединения формула на~к^с а^ ~

III ГС 111111111211111 131 ШИШ

Ко амид СоС122С6Н6 И20 165(1^,5+ 125+4,6

Комплексные соединения на основе тетраминов

КЭТ-122 Со2(СбН1502)х 164(122,4+ 250+13,2 х2(С6Н18 N 4) 219'8)

К В - I 4 С18Н6Н 4'2СоС12 143,6+

152»б)

Комплексные соединения на основе диачпноз

К В С - I С4Н12Ы 2-СоСГ2Х 200 (М2,0+

хН20 260,0)

К В ф - 2 С6Н16^ г'00"^ 200(156,6+247,8) -

ХН20

К Б А - С С51114Н 2хСоС12х 92(46,9+121,4) -

хН20

Комплексные соединения на осново триамидов

КА- 14 гО^Н^КоОх 104(101,4+110,2)

хСоС12 3 87,5+12,4

К А - 2 I З°'2СоС12 ^15( 197,6+ 250+10,2

233)У)

- э -

Продолжение таблицы I

"2----------Т Z ~ ZZZZCZ

Комплексные соединения на основе трг.гшдов

С А - I 4 BGjgH^H 3ü-CoCI2 IC4( 101,4+ 87,5+12,4

U-2 I СтоНог, N oO-2GoCïo 215 Ç197,6+ 250+10,2 U 27 О 2 23?)9)

Комплексные соединения на основе гетрамидов

С в - 8 с13н30 ^ a0.3C0CL>-2HO0 127 4 ¿ ( III,4+144,7) -

; в - i GI7H38N и 0« 3CoCIo" 2Hp0 164 4 ¿ П 158,7+169,4) -

; в - 5 cI9ii42n ,0.3CoCIo'2H90 92 4 4 4 82,3+95,8 ) -

; в - 4 C2IH48N лО»ЗСоС1о'2НрО 105 4 4 ¿( 84,6+130,2) 108,4+8,4

: в - i i • °23%oN ¿0.3CoCI9-2H?0 107 4 ¿ 4( 87,7+130,0) -

: в - 2 C25H54 11 л0.3СоСЬ>-2Н?0 159 4 ¿ ¿(126,2+200,3) -

в - I 5 CI5%M dO-3CoCIo-2HpO 88 4 ¿ 74,6+103,8) -

Комплексные соединения на основе имидазоллнов

И - I СГ9Н9с H о* 2СоС1~-Е,0 164

L4T.¿j ó <, ¿ (122,4+219,76)

В- 10 C^II—N ..3CoJIo-2H90 135

¿' 4 * 2 (131,3+138,8)

В - I 6 CrcKqpH 4-3CoCIo-2 HoO 159 133,4+13,8 io 4 ¿ ¿ (143,2+176,5)

В - I 7 CrfkoK 4-3CoCI2.2H20 ( ö? 74,

£ - 231 C23H47"R 4'3COCI2-2II20 123 -

( 68,3+221,4)

- 10 -' - 2 ~

Продолжение таблицы I

::::з----? - -

Комплексные соединения на основе амидов и амндозолинов

К И Б Р

2СоС12хС63П128 Ы41

Ы,0х2Но0 142 4 г (48,3+121,44)

Токсичност ь

активность иссле-

дованных соединений связана со способом координации кобальта и длиной углеводородного радикала, который влияет на стабильность комплексаI На основании анализа структуры,токсичности и активности соединений был шбран препарат КЭТ-122 для более глубокого изучения. Его химическая формула:

Препарат представляет собой сбалансировшшое вещество, обладающее наибольшей фармакологической активностью, неболь-пиь: процентным соотношением кобальта (9,9 %) в шхекуле»отно-

ЕЬ

с.

ч_/ О

о=<^ч/ч

зительно небольшой молекулярной массой, а также октаэдричес-:сой координацией металла и небольпл.т углсводородопм радикаднл, что обеспечивает прочность хелатного комплекса. Ползжктель-[1шл »актом, выгодно отличащнм соединение КЭТ-122 от всех нагл известных по литературе комплексных соединений кобальта, шляется отсутствие в структуре молекулы ионов мора.

Л а модели го м о л и т и ч е с к о й анемии изучалось действие соединения КЭТ-122 и коашда на эрнтропсэз ю изменениям показателей периферической крови. Соединение СОТ—122 способствовало более раннему достоверному по отношения к коитго.'т и коамиду ( ? < 0,01) восстановлении количе-¡тва эритроцитов (на 7 день) и лешеоцитов (на 14 день), а •акже показателен гемоглобина и ге-.атокрита, уровни которых жо на 7 день опыта достигали и превосходили «сходные покя-ателп. По концентрации гемоглобина в эритроците действие репаратов также превосходили показатели таковых в контроле ли не уступали им. Резкий подъем цветного показателя л сред-его содержания гемоглобина в эритроците на 21 день объяснятся но иовипением уровня rei.roглобина и гематокрша, что чело место при лечении КЭТ-122, а резким снижением числа ритроцитов на 26 % ниже исходного уровня (100 %), тогда как ж лечении ЮТ-122 и коамидом их число было соответственно К и 87 ,э. По показателю г^тнкулоцитов, который после введе-1Я фенилгкдразина достигал 1оМ ?>, действие соедине:тя ¡Т-122 тагс:е превосходило в контроле и при введении крысам .амида на 7 и 27 сутки (Р <С 0,01), способствовал поддерза-ю их числа, начиная с 14 дня, в пределах норкн, тогда как других группах на 14-21 дни отмечалось падение их ниже из-

ходных значений. Интенсивность эрптропоэза при введении соединений КЭТ-122 на протяжении 21 дня оставалась близкой к исходным показателям. На 27 день она возрастала до Г/,7 г/л сут за счет небольшого сокращения времени созревания ретикулоци-тов. Коамид оказывал менее выраженный эффект.

Кровопускание вызывало резкое снижение всех показателей периферической крови. Соединение КЭТ-122 способствовало увеличению числа эритроцитов адекватно коаыа-ду и контролю и позниепию числа регикулоцитов достоверно выше, чем в сравниваемых группах (Р< 0,01). В то время, гак на 14 день в контроле и при лечении коамидом дшпшй показатель снижался на 10 % юхе исходного, соединешш КЭТ-122 удерживало его уровень в пределах нор.и. Уровень гемоглобина (рис. I) и гематокрита гри введении крысам соединения КЭТ-122 были достоверно (Р< 0,01) вше таковы:; в других группах и восстановление их происходило в более ранние сроки. Время созрсвакия ретпкулоцптов во всех группах животных увеличивалось, причем'в контроле - в 2,3 раза, а интенсивность эрптропоэза падала, как и при введении коамида. Лечение же КЭТ-122 увеличивало значение этого показателя по сравнении с контролем на 3,5 и 5,8 (г/л сут) на 7 и 14 дай, соответственно. Показатели среднего содержания к концентрации гемоглобина в эритроците ы цветной показатель при лечении КЗТ-122 превосходили таковые г сравниваемых группах. По этому можно судить о Еыражышой гемоглобикизацпи эритроцитов под алиякиеи соединения КЭТ-122 при острой хровопотеро и при гемолитической анемии.

Кровопускание у крыс способствовало шбросу лейкоцитов

сутки

Рис. 1. Вл]таю соодшю/шя КЭТ-122 и коакпда на иг»

:е<гсшо

показателя гемоглобина кровопотере Обозначения:

о

—3— - соединение КЗГ-122 —О— - ко амид —х-— - контроль

у крас при острой

к - достоверность с

контролем £ - достоверность с коамидом

в кровь, который на 7 день сменялся резким падением их на 40 % киле исходных значений в контрольной и леченной коами-дом группах, тогда гак введение КОТ-122 заметно одерживало падение этого показателя (10 % ниде нормы, Р< 0,001). 3 остальные дни стимуляция лелкопоэза соединением КЭТ-122 такие была достоверно!! по отношению со сравниваемыми группами.

И pi: бензольной г с м о и а т и и отмечалась лейко- з; эрлтропения. При этом число ретпкулоци-тов падало на 175 Число лейкоцитов и эритроцитов нормализовалось к 30 дню, количество ке эритроцитов на этот день было на 30 ,г' нине исходного уровня. Уровни гемоглобина и ге-матокрита так и не достигали нормы. Лечение препаратами кобальта способствовало заметно.\:у улучшению карттпш крови. Соединение КЭТ-122 более выраженно стимулировало -эритропоэз, начиная с 6 дня и в течение всего опыта, достоверно увеличивая число эритроцитов.и ретикулоцитов по сравнению с контролем и коамидом (Р < 0,001, Р< 0,02). Восстановление начиналось уяе на 6 день дачи испытуемого соединения. По влиянию на уровни гемоглобина и гематокрита действие сравнивае-

г

мых препаратов было аналогичным, но показатели насыщенности гемоглобином эритроцитов при введении КЭТ-122 по сравнению с коамидом были выше. Эти яе показатели в контроле, в свою очередь, превышали таковые при лечении препарата™. Это объясняется эритропенией у полеченных кроликов.

Состояние белой крови характеризовалось нейтрофилышм лейкоцитозом во всех ipyimax, эозинопенией в контроле и мо-ноцитозоы в пределах нормальных значений (около 2 %) в группе кроликов, леченных КЭТ-122. Препараты стимулировали лей-

копоэз, щяЛем на 2й и 30 сутки KÜT-I22 превосходил э&'гект

коамида ( Р < 0,001). а

На 3 сутки после воздействия и о н и з и р у ю ц е й р а д г. а ц н с й в контрольной группе животных наблюдалась картина, соответствующая первичному клеточному опустошению, списанному при развитии костномозгового синдрома. После îicKoroiioro абортншохч) подъема числа эрнтролдних клеток и уровней гемоглобина и гематокрита имело место вторичное опустоионис lia И день после облучения, за которым следовал период регенерации и истинного восстанс ■ --чш.

Лочение соединением КЭТ-122 заметно улучшало картину крови и сглатлвало пострадиационные э^Ьекты в периода кле-точшх опустошений. Все показатели периферической крови крыс в динамике били достоверно выше при лочении КЭТ-122, чем у контрольных животных и при введении ко амида. В контрольной группе лпмфопеническое состояние первых 7 дней сменялось лейкопенией и стойкой панцитопенпеЛ. Введение КЭТ-122 не оказывало заметного влияния на соотношение нейтрофплов и 'лимфоцитов. Между тем, в теченио всего периода наблюдения количество лейкоцитов било достоверно шше такового в других группах ( Р < 0,001) (рис. 2), а содержание эозннофилов" и моноцитов оставалось в пределах исходных значений и выше, в отличие от осталыпос групп животных, особенно в контроле, где наблвдалась шраженнал эозинопения и моноцитопения. Такое состояние характерно для пострадиационного эффекта ле-тальгаос и сублеталыок доз. Защитное влияние КЭТ-122 на элементы грануло- и моноцитарного ростка, возможно, связанного со снижением инторфазной гибели клеток, чему свидетельству-

сутки

сутки

Рис.2, влияние соадинения КоТ -122 и коаиида на Рис.З. алияяке соединения КЪТ-122 и коами-

изменение числа лейкоцитов у крыс при да изменение числа эритроцитов у

острой лучевой болезни. крыс при острой лучевой болезни. Ойоэначвния - аналогично рис.1.

ст более высокое соотносите лейкоцитарных клеток в костном

мозге (индекс Л : Э гавен 2,4 и I,G на 14 и 30 сутки) по а

сравнению с другими rpynnai.ni (1,1 и 1,2 в контроле и при лечении коамидом).

Судя по показателям красной крови периферического русла (рис. 3, 4), пострадиационное воздействие было более тараненным в контроле. Лечение коа\здо:л при остро;"; лучевой патология било таксе мало э-жектг.вжм, в отлпчзе от соединения КЭТ-122. Интенсивность эрнтропоэза в группах коррелировала со временем созревания ретякулоцптов, их числом и интенсивностью гемолиза эритроцитов. Последи::;"! протег- - "бкее интенсивно при лечен:;;: КЭТ-122, а время созревания рстнкулоцитоз было близко к норме, тогда как интенсивность эентропозза возрастала.

Известно, что созревание зрзтрогдаях кхеток прет:. -.. в морфо- функциокаяьшзс образованиях - эритробластичсс:"::: островках (30) костного мозга. Соединенно КЭТ-122 способствовало угелпешпо кхсточиостз 30 з течение гсете дней наб падения (рис. 5). Изг.гснеаяе морфологического состава происходило за счет увеличения :.:олод:к (I класс зрелости) и обков-ляптихся (ÜI рекснструтфуюэдйся класс) Э0.(табл, 2). Действие т:оа:.з:да бкдо значительно мене.а зф^зктигно • При отс:л доля зрелых (П класс) и старекзпх (Ш чнголпкглруял?.'! -стасс) • ¿ща ипо. В то времл, как соединения кобальте. з той яля иной степени, стимулировали щи подстсраагата костномозговой зрнтропоэЗр з контрольной "группе наблюдалось его прогрзоси-рукгцео угнетение, о чем судили по ¿поточности ЭО и их мофо-логическое составу, содерглзему, з основном, стареюще ::

Рис.4. &шяниз соединения КЭТ-122 и коамида Рис,5. слияние соединения КЗТ-122 и коа-

на изиенени е числа ретикулоцитов у крыс иида иа изменение числа эритробла-

при острой лучгвой болезни. стических островков костного мозга

при острой лучевой болезни. Обозначения - аналогично рис.1.

Т.'Л'Шц;: 2

Клотичноеть и н'яч-сккЯ "01 -тми ^ритролластич'.-ских

остронков костного мо:-<.'я у крьс, л^чвшх с:с>е.'ищ^ни^м КОТ-!;?? И КОПМИДоМ, При ОС'фиА лучньой СОЛ>'ЪНИ

Соод-е; сутки поело облучения

исх.данные КЭТ- 3

I класс

Уритроолэстиче екке островки класс

И

122

коа-

кон-

троль

7 14 30

14 30 3 7 14 30

111 KJK.CC

иньолюц. 1 роконетр.

56.211.2 3(>.911.3 5.710.7 1 .?±0.9

60.-ПО.7(1-:*) 38.1Л0.9 6.410.8 З.ЗЮ.Пк»)

59.711.1 (к*) 31.311.2(к*) 6.¿Ю.2 2.410.1(к) 60.311 .4(К*) "31 . Ш .4(1:*) 5.2Ю.4(К*) 3.4К).2<к*) 6?.711.0(к*) 27.811 .3(1:«) 5.9Ю.6(к) 3.610.1 (]-■*) 51 .710.9 39.011 .3 8.0И..-: 0.710.1

51 .1 + 1 .1 (к) 40.1±1.Цк) 7.211.0 1.610.4(к)

54.б±1.3(к) 36.0±1.0(к) 7.3±0.7(к) 2.0^0."(к)

52.5Н.2(к) 38.21.1.4 (к) 6.9Ю.6 2.4Ю.1(к)

49.211.2 42.4И.2 7.4±0.7 I .0Ю.02 42.511.6 413.1 ±1.4 8.8Ю.5 0.6Ю.1 36.812.1 52.810.9 Ю.ОЮ.З 0.4±0.2 34.ОН.О 56.6Н.0 9.2Ю.9 0.2Ю.4

ПРИМЕЧАНИЕ:

* - достоверное различие ,по сраёнению с коамидом, к - достоверное различие по сравнению с контролем.

распадающиеся островки.

Анализ парциальной эритроб.г;-- -> граммы показал, что соединение КЗТ-122 и, в меньшей ст'::.епИ, коамид стимулировали дифференциацию эритробластическгос клеток, почти не изменяя индекса созревания эрг.тробластов (0,7). Доказательством стимуляции эритропоэза служило снижение индекса Л:Э до 1,4-1,6 против 2,7 в норме. Причем, введение соединения КЭТ-122, наряду о активацией костномозгового эритропоэза, способствовало увеличению числа ретпкулоцитов в периферическом русле с первых же дней опыта, тогда как в остальных .группах: подобный эффект отмечался лишь на 30 день, что свидетельствует о неэффективности эритропоэза в контрольной группе и при лечении крыс хоами-дом в наблюдаемом периоде.

Таким образом, ка фоне развития костномозгового радиационного совдрома у крыс, введение сое.динешш КЭТ-122 препятствовало развитию лучевой патологии, снижало уровень лейкопении и способствовало регенерации г. активации косткомоз-гового эритропоэза в белее рашше сро:а1. Эффект коамлда в этих условиях был слабо выражен и значительно уступал испытуемому препарату.

Колониеобразушцие едпшпда в селозенке (КОЕ-С) представляют собой гетерогенные популяции, содержание и полипотент-ныо стволовые клетки, дающие в селезенке, в основном, только эрптроидные колонии. Соедините КЭТ-122 достоверно по отношении к контролю и действию коамида стимулировало образе-' вание эндогенных КОЭ-С на В день на Гона утнетенпя кроветворения облучением (табл. 3). При этом для адекватного угнетения эвдоКОЕ-С в группе, получаше:;; КЭТ-1Й2, тг ^овэлось б о-

лее высокая доза облучения (7,5 Гр), чем в контроле (6,8 Гр) и при лечении кх>а»,гадом (6,9 Гр). Таким образотл, соедннетюе КЭТ-122 болео активно стимулировало образование селезеночных эндоколоний, чем коамид. В связи с тем, что у крыс, получ: виях КЭТ-122, при увеличении дозы облучения 31Д ( фактор изменения дозы) снижается (1,11-1,1), можно считать это соединение эдаектив-шм лечебнш средством при острой лучевой бо-лезш! в костномозговом диапазоне доз (1-10 Гр). В далны:: ус-лоенях кошащ лечебзшм действием не обладал. Оба препарата не влияют на радиорезистентность данной субпопуляцпп стволовых клеток.

Таблица 3

Число эндогенных КОЕ-С в контроле и при действ:::! препаратов КЭТ-122 и коамида

Доза

облучения, Контроль Коамид КЭТ-122

6.1 7,5+1,76 II,3-5-2,25 Ю>,8+2,22 (к)

6.3 6,8+1,76 7,5+1,34 12,8+2,17 (к*)

6.5 5,4+1,06 6,2+1,42 10,5+1,65 (к)

6.7 4,0+0,96 , 4,5+0,93 7,9+1,06 (к54)

6.9 3,0+0,64 4,0+0,75 6,9+1,16 (к35)

В0 0,85+0,084 0,77+0,07 9 0,88+0,058

Примечание:^ - радиочувствительность, эндоКОЕ-С

н - достоверное различие по сравнению с коамядом к - достоверное различие по сравнению с контролем.

3 р и т р о п о э т к ч о с к а я активность препаратов исследовалась па полпцитемических трансфузношшх шшах. Обнаружена высокая эффек- -. ->сть соединения КЭТ-122 (Р< 0,С01) по отношению к коамиду. Изучаемое соединение способствовало достоверному увеличению числа ретикулоцптов в крови (121,5-163,7 %) в дозах, равных 1/10-1/40 от Щ^,. по сравнению с коашдом (5,0-14,2 %). IIа основании этой серии опытов можно опосредованно судить о повышении уровня эндогенного ЗЛ, что характерно для всех солей кобальта: и дохсазано) многими исследователями.

Известно, что фенилгидразнн повышает проницаемость мембран для катионов. Это приводит к нарушению- осмотического» равновесия, сферуляции и последующему гемолизу эритроцитов.. Для выяснения причины эффективности соединения; КЭТ-122 нами* изучалась м е м б р а поставил и. з-. и: р у, ю> щ: я; активность препарата, на: мадашсс кислотной и-. ос!м>-ткческой эрптрограмм в. опытах: ш> я к/¿'го на фоне,

гемолитической анемии-.. Мш кошшагирэвали повышение резистентности мембран эритроцитов-. к: разрушающим агентам: и сдвиг кривой кислотной резистентносзи: вправо при введении. испытуемого; препарата. Причем аффекишнаегь соединения КЭТ-122 была: боло выраженной (Р< 0,01)'„ чем; при. действии коамида,, за. исключением результатов осмотической резистентности на 7 день эксперимента, когда действий- препаратов было аналогичным,.

Соединения- кобальта, известны' как- вещества,, благотворно влияющие на иммунную систему, организма.. Б сьчзи с этим,, изуг чалось влияние соединения КЭТ-322:на1 п е; р в И'ч н. Ы- й . и -м м у н н и й ответ..

Показано, что изучаемое соединение,, аналогично коамиду

увеличивало число АО К (антителообразукгаис клеток) в селезен-тсе зтглг.тзтшзпговаинкх meücí; ( Р ^ 0,05).

Многие кобал£содержи::е соединения, в том числе и коа-мпд., обладает тагрэлгегошьт гипотензивным действие:.!. Соединенно КЭТ-122 при внутривенном введении кроликам в дозах 0,5-10 мг/кг, что во inoro таз превосходит терапевтическую, но влияет на системное артериальное давление и частоту сердечных сокращений.

ВЫВОДЫ

1. БослсдоЕаннпе комплексные соединения кобальта с поли-ar.mnaiai и имидазолннами стимулируют эритро- и лей2:опозз при гемолитической анегз:и, вызванной феннлгпдразипоп.

2. Острая токсичность исследованных соединений кобальта зависит от содержания мз таяла в комплексе, длины метилеповых цепочек в лиганде, от характера и прочности самого лиганда, наличия конов хлора и способа координации металла в молекуле. Соединения относятся к 3 классу токсичности и являются умеренно опасшяш веществами.

3. Соединенно КЭТ-122 актигно стимулирует эритропоэз и гемоглобпнпзацпю эритроцитов у пивотшк с постгеморрагической, гемолитической, гипопгястлчсагой анемии и при острой лучевой болезни. КЭТ-122 кв уступает, а во многих случаях превосходит по активности действие коамида. Относнтель-izm активность соединения K3T-I22 при вгиятга на ярытрояозз выпе коамида в 1,7 раз, по терапевтической апрото - в 3,0 и

1хо относительной широте действия - в 3,2 раза.

Повышение биологической активности соединения КЭТ-122 обеспечивалось относительно небольшой молекулярной массой, октаэдрической координац!;ей металла в хелатном комплехссе.

5. Эффективность соединен'.. ЛЛ-122 при анемиях различного геноза (постгеморрагической, гемолитической, пшоплас-тической и вызванной облучением) связана со стимуляцией костномозгового эритропоэза (увеличение эндогешшх колош1й

в селезенке, числа эритробластических островков и эндогенного уровня эрптропоэтпна) и стабилизацией эритроцитарных кембран.

6. Соединение КЭТ-122 стимулирует первичный иммунный ответ, увеличивая число АОК в селезенке, и по своему действию не уступает эффекту коамида. Оно не обладает гипотензивным эффектом в терапевтических дозах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ '

Предлагается продолжить доклиническое исследование соединения Е:;с (2-этилгексаноато)да(этилентвтрамин)кобальт (П) (ЮТ-122) согласно требования;,! Фармакологического комитета МЗ России с целые получения разрешения на клиническую апробации препарата как сродства, стимулирующего эритропоэз при анемиях различной этиологии.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЖЕ , ДИССЕРТАЦИИ

1. Попова И.Ю., Кошаша И.Г., Лазарева Д.Г.1., Мурпнов Ю.И., Зарудий Ф.С., Лисицкнй В.В. Острая токсичность комплексных соединений кобольта. //Вопроси mгасни и охрани здоровья населения с развитой но(1я,епорерас*ат11Еа.щой и нефтехимической промышленностью. Сб.тр. Башкир.прапл.Союза научн. и инженер, обществ - Уфа, 1909. - с. 71-72.

2. Попова И.Ю., Толстихсова Т.Г., Лазарева Д.Н., Зарудий Ф.С. 1й::.и1ио комплексных соединений кобальта на экспериментальную анемию //Патология дыхания, крови и регулирующих систем организма и принципы коррекции нарушений. Тез.докл. XIII научн.конф.патфпзиологов Урала. - Илсвск, 1909. - С. 84.

3. Попова И.Ю., Лазарева Д.Н., Зарудий Ф.С. Стимуляция эритропозза к01.тлексн1пл1 соединениями хлорида кобальта.'' //Фармакология и токсикология природных и синтетических соединений. Тез.дом. У съезда фармацевтов, фармакологов и ток-сиколох^ов. - Минск, 1909. - С. 97.

4. Попова И.Ю., Конкина И.Г., Пуринов Ю.И., Зарудий Ф.А., Лазарева Д.Н. и др. Химические свойства и физиологическая активность комплексов кобальта (П) с продуктами конденсации d -разветвленных нг.ёгот и полимеров. //Химия физиологически актив1шх соединений. Всесоюзн.семинар, тез. докл.-Черноголовка, 1909. - С. 190.

5. Хлсамова U.K., Громова Г.Н., Попова И.Ю., Еарудий Ф.С., Еадрстдннов П.А. О возг.та.шом загштном действии ко-

бальтосодерзхащих препаратов на систему крови. //Ш Всесоюзн. конф. по хронобиологии и хрономедиципе. Тез.докл. - Москва, Ташкент, 1990. - С. Ь2.

6. Попова И.Ю., Конкина И.Г., Зарудий Ф.С., Муринов Ю.И., Лазарева Д.Н. Стимуляция кроветворения новыми соединениями кобальта. //Активация кроветворения и радиорезистентность организма. Тез.докл. Всесозн.научн.конф. - Обнинск, 1990. - С. 64.

7. Попова И.Ю., Конкина И.Г., Зарудий O.G., Муринов Ю.И., Лазарева Д.Н. Антианемическое действие новых комплексных производных кобальта. //Поразите и восстановление кроветворения при острой лучевой болезни. Тез.докл.Всесоюзн. научк.конф. - М., 1990. - С. 23.

8. Громова Г.Н., Хисаыова Н.К., Попова И.Ю., Зарудий '¿.С., Бадретдшов U.A. Хронофармакологическое действие кобальтсодерлсащих соединений на кроветворение. //Временная организация чувствительности организма к биологически активным веществам. Тез.докл.совещания Пробл.комиссии АМН СССР по хронобиол. и хрономедищш. - Свердловск, 1991. - С. 37.

9. Попова И.Ю., Исмагилова А.Ф., Лиховских В.В., Лазарева Д.И., Зарудий Ф.С. Действие комплексных соединс1шй кобальта на кроветворение. //Создание лекарственных средств. Тез.докл.Российской научн.коиф. - М., 1992. - С. 151.