Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Влияние длительности перенесенного терминального состояния на структурно-функциональные изменения аденогипофиза( экспериментальное исследование)

^ л

^С^ На правах рукописи '■С* гк

«V* УДК:616-036.882:612.432/434

ЕРЕМИНА Вера Карловна

ВЛИЯНИЕ ДЛИТЕЛЬНОС'Ш ПЕРЕНЕСЕННОГО ТЕРМИНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ НА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ АДЕНОГИНОФИЗА

(экспериментальное исследование)

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Акмола - 1997

Работа выполнена в Акмолинской государственной медицинской академии

Научный руководитель

кандидат медицинских наук Лебедев А.С.

Научный консультант доктор медицинских наук, академик АЕН РК, профессор,

заслуженный деятель науки РК Корпачев ВТ.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

член-корреспондент АМН РК, профессор Лысенков СЛ.,

кандидат медицинских наук Кабдуалиев АЛ С.

Ведущая организация

Карагандинская государственная медицинская академия

Защита состоится 1997 г. в ^ часов на заседании диссертационного

совета К 09.06.01 при Акмолинской государственной медицинской академии (473000, Акмола, ул. Сары-Арка, 95).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Акмолинской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат медицинских наук - Кабдуалиева 11Б.

Отпечатано в рекламно-полиграфическом центре ТОО «Акмола - Риэл», 1997г.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

После перенесенной клинической смерти в организме развивается нейрогуморальный дисбаланс, определяющий течение постреанимационного периода и полноту восстановления неврологического статуса (Неговский В.А., 1988). Центральным звеном стресс-лимитирующей системы организма является, наряду с гипоталамусом, аденогипофиз. Изучение состояния гормонального статуса в патологических условиях однозначно указывает на высокую чувствительность передней доли гипофиза к повреждающему действию внутренних и внешних факторов физической, химической и биологической природы. Одним из важнейших факторов в этиологии и патогенезе повреждения аденогипофиза и снижения эндокринных функций является гипоксия (Хмельницкий O.K., 1992).

В последнее время получило широкое распространение изучение функции и взаимоотношения компонентов эндокринной системы в условиях постреанимационной болезни (Волков A.B., 1985, 1987; Лебедев A.C. и соавт., 1990; Сочнева E.H., 1994; Попова Н.В., 1996; Korpatchov V.G. et al., 1991). В работах Волкова A.B. впервые было сформулировано представление о существенной роли постреанимационного соотношения гормонов в организме для конечного приспособительного ответа (Волков A.B., 1985; 1990). Доказано так же благоприятное влияние экзогенного введения нейропептидов АКТГ4 , а-МСГ на восстановление витальных функций (Байбакова М.К., 1993).

В настоящее время отсутствуют точные сведения о максимальной продолжительности остановки кровообращения передней доли гипофиза, после которой возможно восстановление гормональной функции железы, нет единства мнений о механизмах повреждения аденоцитов, о наиболее уязвимых и наиболее резистентных к гипоксии элементах передней доли (Монастырская Б.И., 1974). Так же недостаточно известно об изменениях клеточного состава аденогипофиза в зависимости от вида и длительности перенесенной клинической смерти, так как в основном исследовались функциональные показатели гормонального статуса.

На наш взгляд представлялось актуальным изучение роли функционально-структурных изменений аденогипофиза в условиях реанимации, когда генерализованная гипоксия является одним из патологических механизмов постреанимационной эндокринопатии с нарушением или полным выпадением центральных механизмов эндокринной регуляции (Пермяков Н.К., 1990).

Цель работы.

Цель исследования состояла в изучении изменений функциональной активности аденогипофиза и структурной организации железы в зависимости от тяжести перенесенного терминального состояния.

Задачи исследования.

1. Изучить динамику концентрации тропных гормонов аденогипофиза животных, перенесших клиническую смерть различной продолжительности.

2. Выявить степень нарушения структурно-функциональной специализации гипофиза в зависимости от длительности остановки системного кровообращения в разные сроки постреанимационного периода.

3. Сопоставить состояние аденогипофиза в восстановительном периоде с функциональными нарушениями центральной нервной системы.

Научная новизна.

Экспериментальные данные, полученные в ходе настоящего исследования, впервые характеризуют нарушения, происходящие в аденогипофизе в определенные сроки после перенесенной клинической смерти различной продолжительности. Новизной отличаются результаты сопоставления динамики восстановления неврологического статуса и секреции тропных гормонов гипофиза обусловленные временем перенесенного терминального периода. Новыми являются данные о взаимосвязи функциональной активности аденогипофиза и структурных изменений тропоцитов, вызванных клинической смертью. Доказано также, что восстановление функциональной активности центральной нервной системы зависит от фазы секреции адренокортикотропного гормона. Высказано предположение о том, что с увеличением длительности клинической смерти изменения в железе носят необратимый характер.

Теоретическая и практическая значимость работы.

В работе дано патофизиологическое и патоморфологическое обоснование целесообразности применения гормональной терапии для профилактики и лечения постреанимационной болезни, с учетом волнообразного характера секреции тропных гормонов аденогипофиза. Результаты данного исследования могут быть использованы в клинической практике, а так же в лабораториях, занимающихся изучением патогенеза и интенсивной терапией терминальных состояний. Полученные данные

могут быть использованы в учебном процессе на кафедрах патофизиологии и патологической анатомии при рассмотрении раздела "Постреанимационная болезнь".

По материалам работы опубликовано 6 научных статей. Результаты работы доложены на Международном симпозиуме "Реаниматология на рубеже XXI века" г.Москва (1996), на 30-й институтской конференции молодых ученых в г. Акмоле (1996), основные положения диссертации обсуждены в Центральной научно-исследовательской лаборатории Акмолинской государственной медицинской академии (1996,1997), на межкафедральном заседании АкмолГМА (1997).

Структура и объем диссертации

Материалы диссертации изложены на/^страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, 5 глав, обсуждения результатов и заключения, выводов, указателя литературы, включающего //^отечественных и// иностранных источников. Диссертация документирована 6 таблицами, 11 рисунками и фотографиями.

Положения, выносимые на защиту

1. Клиническая смерть вызывает изменения уровня концентрации тропных гормонов гипофиза, зависящие от длительности клинической смерти.

2. Глубина и обратимость функциональных нарушений аденогипофиза в восстановительном периоде предопределена структурными изменениями стромально-паренхиматозных элементов железы.

3. Постреанимационный гормональный профиль является одним из факторов, лежащих в основе полноценного восстановления неврологического статуса и функциональной активности головного мозга оживленного организма.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования.

Эксперименты выполнены на 412 половозрелых белых крысах самцах. Общая характеристика экспериментального материала представлена в таблице 1.

Клиническая смерть длительностью 10, 15, 20 минут выполнена по методу предложенному Корпачевым В.Г., Лысенковым С.П., Телем Л.З. (1982). Часть работы по моделированию 20-минутной клинической смерти выполнена совместно с к.м.н. Хамзиной Н.К. Реанимационные мероприятия включали в себя непрямой массаж сердца и искусственную вентиляцию легких. Динамику восстановления функциональной активности централь

ной нервной системы определяли с помощью 100-балльной шкалы показателя общего состояния, разработанной Лысенковым С.П. и соавт. (1982) и модифицированной Лебедевым A.C. и соавт. (1995).

Таблица! - Общая характеристика экспериментального материала

N/n Название серии Количес meo крыс

1 Интактные животные

а) изучение содержания АКТГ и ТТГ 12

б) гистохимические и морфологические исследования 26

в) исследование динамики УРПИ 26

2 Животные, перенесшие 10-минутную клиническую смерть

а) изучение содержания АКТГ и ТТГ 149

б) гистохимические и морфологические исследования 45

в)исследование динамики УРПИ, выработанного до клинической смерти 20

3 Животные, перенесшие 15-минутную остановку кровообращения

а) изучение содержания АКТГ и ТТГ 44

б) гистохимические и морфологические исследования 45

в) исследование динамики УРПИ, выработанного до клинической смерти 13

4 Животные, перенесшие 20-минутную клиническую смерть

а) гистохимические и морфологические исследования 32

Всего 412

Моделирование клинической смерти, а так же забор крови на радиоиммуннологическое исследование у реанимированных крыс в постреанимационном периоде производились нами в одни и те же сроки, то есть в 8-9 часов утра. С целью исследования уровня адренокортикотропного гормона (АКТГ) и тиреотропного гормона (ТТГ) использовали радиоиммунный метод определения гормонов в сывортке крови животных, полученной пункцией сердца (Славнов В.И., 1978). Определяли концентрацию адренокортикотропного гормона (АКТГ) с помощью набора ACTK-PR фирмы "CIS INTERNACIONAL" (Франция) и тиреотропного гормона (ТТГ) набором RIA-MAT TSH фирмы "BIK-MALLINCRODT" (ФРГ). Уровень гормонов исследовался на 10-й, 15-й минуте терминального состояния, через 24 часа, а также на 3-й, 5-е, 7-е, 30-е сутки после оживления.

Для выявления морфофункциональной специализации аденогипофиза ткань железы фиксировалась в 10% нейтральном формалине и жидкости Буэна. Срезы толщиной 5 мкм окрашивались для обзорной микроскопии гематоксилином и эозином, а для определения дифференцированной принадлежности эндокриноцитов органа был применен метод Вильсона-Эзрина (Пирс Э., 1962). Обнаружение тропоцитов, содержащих гранулы АКТГ, достигалось при импрегнации ткани железы серебром по Гримелиусу (Меркулов Г.А., 1969), с дополнительной окраской базофильных клеток реактивом-красителем "Фенаф" (Жарков В.П. и соавт., 1990).

Для изучения влияния структурно-функциональных изменений аденогипофиза на мнестические функции головного мозга в постреанимационном периоде исследовали воспроизведение и сохранение временных связей, образованных на базе условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ). Рефлекс вырабатывали на основе однократного электрокожного подкрепления по модифицированной методике Bures I., Buresova О. (1963) за двое суток до начала моделирования клинической смерти.

Полученные данные были статистически обработаны на ЭВМ "Kenitec 286 Plus" с использованием t-критерия Стьюдента (Ойвин И.А.,1960) и непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни для малого числа выборок (Гублер Е.В., 1978). Изучена база данных MEDLEIN за 19961997 год по ключевым словам "adenohypophysis", "endocrinology", "stress", было обработано 369 источников из стран Америки, Европы и Азии.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Одной из главных проблем реаниматологии является восстановление функций эндокринной системы, а в частности - уровня тропных гормонов, избыток или недостаток которых в постреанимационном периоде определяет течение и исход постреанимационной болезни (Волков В.А., 1987; Вишневский А.А. и соавт., 1995).

Нами установлено, что тяжесть перенесенного терминального состояния в определенной степени зависит от характера нарушений гормонального профиля, относящегося к экстрацеребральным патогенным факторам, играющим существенную роль в развитии неврологических нарушений, что согласуется с работами ряда авторов (Волков А.В., 1985; Неговский В.А. и соавт., 1987; Лебедев А.С. и соавт., 1990).

Исследуя уровень гормонов в периферической крови у животных, перенесших 10-минутную клиническую смерть, была обнаружена определенная закономерность секреции адренокортикотропного гормона (АКТГ). Постреанимационная динамика гормона представляла волнообразную кривую с постепенным чередованием максимальных и минимальных значений и возвращением к исходным цифрам. Первое снижение концентрации АКТГ до 61% (р<0,01) от исходного уровня

Таблица 2- Влияние 10-минутной клинической смерти на концентрацию АКТГ иТТГ

Изуч. показ Стат. показ. Исход Юмик. клин, смерть Часы Сутки

1 3 6 24 3 5 7 30

АКТГ пмоль/л М 75,90 46,05 192,43 113,78 55,24 131,60 61,31 40,68 67,34 77,01

±ш 6,03 8,34 28,38 16,87 6,03 15,82 11,99 5,19 16,19 12,74

п 12 7 18 19 15 27 8 12 7 7

Р <0,01 <0,001 <0,05 <0,05 <0,01 <0,5 <0,001 >0,5 >0,5

ТТГ пмоль/л М 4,59 1,79 5,24 5,81 5,17 4,45 5,67 4,73 5,31 4,59

+ш 0,71 0,43 0,79 0,79 0,64 0,43 1,00 0,71 0,93 0,57

п 12 10 11 18 15 18 8 6 6 33

р <0,01 >0,5 <0,5 >0,5 >0,5 <0,5 >0,5 >0,5 >0,5

р - достоверность различий по сравнению с исходным показателем

наблюдалось на 10-й минуте терминального состояния, что отражало разрушение гормона пептидазами крови (Лабори А., 1970; Тепперман, 1992) (таблица 2). Увеличение содержания АКТГ в крови в 2,5 раза по сравнению с интактными животными (р<0,001) регистрировали через час после реанимации, что сочеталось с повышением двигательной активности, когда крысы пытались принять физиологическую позу. Однако к шести часам постреанимационного периода мы вновь отмечали снижение уровня данного гормона до 73% от контрольных величин (р<0,05), и общее состояние у отдельных особей имело тенденцию к утяжелению. Следующий подъем концентрации АКТГ был более умеренным и к концу 1-х суток в 1,7 раза (р<0,05) превосходил контрольные значения. Постепенное снижение на 46% от исходной величины (р<0,001) мы определяли к концу 5-х суток после реанимации. Через 7 суток восстановительного периода уровень АКТГ возвращался к исходным значениям 67,34 + 16,19 пмоль/л (р>0,5) и оставался таковым до конца наблюдения.

Наши данные согласуются с исследованиями Волкова A.B. (1980), в которых показано, что темпы первоначального восстановления функций ЦНС, сроки исчезновения неврологического дефицита и выживаемость тесно коррелируют с изменениями содержания 17-оксикортикостероидов (17-ОКС) в артериальной плазме. Тяжелые неврологические расстройства, высокая летальность животных наблюдались при относительно низких уровнях 17-ОКС в начале оживления и последующем их увеличении. В то время как благоприятное течение постреанимационного периода, быстрое внешнее полное восстановление отмечалось при высоком уровне 17-ОКС в начале оживления с последующим их уменьшением. При этом большое значение имеет изменение взаимосоотношения гормонов (Волков A.B., 1985; Неговский В.А. и соавт., 1987). Известно, что нейропептиды оказывают существенное влияние на синтез и освобождение многих гормонов. Так, АКТГ индуцирует секрецию соматотропного гормона и инсулина, тормозит выход пролактина и липотропина, тиреотропного гормона (Ашмарин И.П., Каменская М.А., 1988).

Однако как показали наши исследования существенного изменения концентрации ТТГ у животных, перенесших 10-минутную клиническую смерть не происходило. Так, его количество значительно уменьшалось к 10-й минуте клинической смерти (в 2,6 раза), а с началом реанимации уровень тиреотропного гормона быстро восстанавливался до значений близких к контрольным показателям 5,24 + 0,79 пмоль/л (р>0,5).

Сравнивая динамику адренокортикотропного гормона в постреанимационном периоде после 10-минутной клинической смерти с уровнем тиреотропина можно предположить, что после оживления происходит активация адаптационных реакций организма, направленных на синтез аденогипофизом АКТГ и временным ограничением синтеза других тропных гормонов: соматотропного (СТГ), пролактина (ПРЛ), меланоцит-стимулирующего (МСГ) и других (Пермяков Н.К., 1990).

Отчасти это можно объяснить тем, что в постреанимационном периоде создаются условия для нарушения трансмембранной передачи гормонального сигнала из-за снижения в раннем постреанимационном периоде внутриклеточного цАМФ (Лебедев A.C., 1989), расстройства микроциркуляторного русла (Пермяков Н.К., 1985; Золотокрылина Е.С., 1995,1996). В тоже время, по мнению Шхинек Э.Х. (1993), в условиях стресса АКТГ может синтезироваться тканевыми макрофагами. Кроме того, на процессы синтеза и экструзии секреторных продуктов у недифференцированных кортикотироцитов оказывает стимулирующее действие вазопрессин (Стадников A.A., 1995). Это подтверждается исследованиями у животных морфологической структуры паравентрикулярных ядер гипоталамуса, где происходило накопление вазопрессина (Даленов Е.Д., 1992) после клинической смерти.

Способность аденогипофиза к адекватным компенсаторным и регенераторным процессам определяется анатомическими особенностями строения органа. Доказательством устойчивости периферического отдела передней главной части аденогипофиза к гипоксии является наличие особенностей кровообращения железы. Исследования Акмаева И.Г. (1979) показывают, что насыщение портальных сосудов гипофиза кислородом в 1,5 раза ниже, чем в ткани, стоящей первой по ходу артериального русла. Следовательно, насыщение крови кислородом в портальном русле гипофиза снижается в направлении от первичной сети капилляров ко вторичной, в силу чего метаболизм тканей, локализованных в области вторичной сети капилляров, в меньшей степени зависит от недостатка кислорода.

Выполненные нами гистохимические реакции с использованием ткани аденогипофиза крыс, полученной в разные сроки постреанимационного периода после перенесенной клинической смерти длительностью 10 минут, показали, что наряду с нарушениями кровообращения и гипоксическими поражениями тропоцитов отмечается сохранение структурных элементов на периферии органа, то есть зон ответственных за синтез ТТГ и АКТГ. В первые сутки после реанимации, мы отмечали расширение базофильных зон от периферии к центру, а к третьим суткам - появление многочисленных участков больших размеров, содержащих АКТГ, причем локализация этих ячеек определялась вокруг крупных сосудов. Интересно отметить, что у животных, которым проводилась эвтаназия на фоне высоких показателей ПОС, при аутопсийном наблюдении определялся распространенный красный инфаркт аденогипофиза и увеличение массы железы до 7-8 мг (нормальные показатели массы органа 4-5 мг). При гистохимическом исследовании была выявлена еще более интенсивная реакция железы на восстановление нитрата серебра. Через месяц после перенесенной клинической смерти при микроскопическом изучении наблюдались множественные базофильные ячейки периферических отделов передней

главной доли аденогипофиза и единичные ячейки, синтезирующие АКТГ, что в определенной степени свидетельствует о возможном переключении на синтез базофильными элементами железы адренокортикотропного гормона.

Наши результаты согласуются с работами Монастырской Б.И. (1974), когда впервые была доказана возможность переключения синтеза гормонов при чрезвычайных воздействиях, в частности при электронной микроскопии тканей аденогипофизов было зарегистрировано появление в тиреотропоцитах гранул АКТГ у умерших больных с гипертонической болезнью и у животных, которым моделировалась длительная высотная гипоксия и ожоговая болезнь.

С удлинением времени клинической смерти до 15 минут концентрация АКТГ (таблица 3) во время терминального состояния имела тенденцию к понижению на 21% (ри>0,05), что также отражало процесс разрушения гормона в крови. Эффективные реанимационные мероприятия сопровождались нарастанием уровня АКТГ в крови, который достигал максимального значения к 1-му часу поле оживления и был в 2,7 раза (ри=0,01) выше исходных величин (75,90 + 6,03 пмоль/л). В динамике концентрация гормона удерживалась на высоких цифрах до 3 часов постреанимационного периода, когда была в 2,4 раза выше, чем у интакт-ных животных (ри<0,001), и в 1,6 раза превышала значения у животных перенесших 10-минутную клиническую смерть (р<0,001). Однако через 6 часов концентрация гормона снижалась до исходных значений. Следующий выброс АКТГ наблюдался к концу 1-х суток, когда его концентрация в крови была на 45% выше контрольных значений (ри>0,05). На 3-й сутки после оживления уровень гормона возвращался к исходным цифрам.

Таблица 3 - Влияние 15-мннутной клинической смерти на концентрацию АКТГ и ТТГ

Изуч. показ Стат. показ. Исход 15мин КЛИН. смерть Часы Сутки

1 3 6 24 3 30

АКТГ пмоль/л м 75,90 59,67 203,02 183,96 75,61 110,70 82,35 -

±ш 6,03 12,12 39,84 3,98 22,57 27,17 12,14 -

п 12 4 4 5 3 9 5 -

р„ >0,05 =0,01 <0,001 >0,05 >0,05 >0,5 -

ТТГ пмоль/л М 4,57 3,72 4,59 5,84 - 13,74 - 6,83

+ш 0,71 0,49 1,42 1,13 - 5,74 - 0,68

п 12 10 7 5 - 4 - 5

Ри >0,05 >0,5 >0,05 <0,01 =0,05

ри - достоверность различий по сравнению с исходным показателем

Динамика тиреотропного гормона в постреанимационном периоде была следующей: к 15-й минуте терминального состояния концентрация гормона снижалась на 19% от исходных значений, однако через час от начала реанимации содержание гормона возвращалось к начальным величинам. В это время мы отмечали уменьшение соотношения АКТГ/ ТТГ в отличие от животных, перенесших 10-минутную клиническую смерть. К 3-му часу отмечалось увеличение ТТГ в 1,3 раза (ри>0,05), а к концу первых суток его концентрация была максимально высокой - в 3 раза (ри<0,01) по сравнению с интактными животными. Необходимо отметить, что повышенное содержание гормона сохранялось и на 30-е сутки, когда уровень ТТГ был выше исходных цифр в 1,5 раза (ри=0,05), в то время как у животных после 10-минутной остановки системного кровообращения концентрация ТТГ не отличалась от фоновых показателей.

При исследовании структурного состава железы определялась гибель преимущественно центральных отделов органа и расширение к 3-м суткам базофильных зон железы. Постановка реакции Гримелиуса выявила некоторое увеличение АКТГ-продуцирующих зон на 3-5-е сутки. Через месяц наблюдения были видны расширенные участки базофильных элементов железы, но зон, синтезирующих кортикотропин, практически не было заметно. Сравнивая динамику АКТГ и ТТГ в постреанимационном периоде после 15-минутной клинической смерти видно, что повышение уровня ТТГ указывало на отсутствие переключения синтеза гормонов и на большую устойчивость тиротропоцитов к аноксии. Однако сохранявшаяся высокая концентрация АКТГ объясняется тем, что адренокортикотропоциты синтезируют не только АКТГ. По данным Теппермана (1992 ) эти клетки синтезируют ß-липотропин и ß-эндорфин, которые представляют нейропептиды, являющиеся фрагментами АКТГ, функция которых заключается в высвобождении кортикотропин-рилизинг-гормона, и других нейромедиаторов. Поэтому, вследствие разрыва короткой петли регуляции аденогипофизарных функций после глубокой ишемии и нарушения кровообращения происходит изменение регуляции синтеза и секреции АКТГ. Кроме прямого пути регуляции функции аденогипофиза существует экстрагипофизарный путь, поскольку эндорфины секретируются и в коре головного мозга. В тоже время, вследствие патологии структурных и метаболических элементов головного мозга в постреанимационном периоде (Семченко В.В., 1995, 1996; Ган O.A., Гладилина И.И., 1996) нарушается и регуляции функции аденогипофиза в раннем восстановительном периоде.

Необходимо отметить, что 20-минутная клиническая смерть приводила к полной рассогласованности и гибели регулирующих систем аденогипофиза. Так, выполненное окрашивание гистологического материала по методу Вильсона-Эзрина при исследовании в сроки 6, 24, 48 часов после реанимации не позволило отчетливо выявить отдельные гормон-продуцирующие зоны железы. При микроскопическом

исследовании гистопрепаратов скопление ацидо- и базофильных гранул можно было определить в различных отделах аденогипофиза, вплоть до миграции гранул в среднюю долю и нейрогипофиз; в отдельных случаях определялась смешанная ацидобазофильная зернистость. Аналогичная картина наблюдалась у животных, с тяжелым течением постреанимационного периода после 10- и 15-минутной клинической смерти на фоне высоких значений показателя общего состояния (ПОС). Применение реакции Гримелиуса для выявления в передней доле гипофиза АКТГ-содержащих гранул в гистологических препаратах животных в ранние сроки после реанимации показало отсутствие реакции ткани аденогипофиза на чрезвычайное воздействие вследствие гибели тропоцитов под действием длительной аноксии и последующей неполноценной рециркуляции.

В своей совокупности полученные нами результаты позволяют оценить значение тропных гормонов в осуществление адаптивных реакций организма. Можно думать, что в критических, аварийных ситуациях, как известно сопровождающихся резкой активизацией гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы, эта сторона влияния будет иметь существенное значение в обеспечении долговременной (структурной) адаптации клеток и тканей. Физиологические данные свидетельствуют о том, что пептидные висцеротропные гормоны, в больших количествах поступающие в кровь, возможно оказывают тормозящее, охранительное влияние на функции органов с целью "экономии" материальных ресурсов и защитных потенций организма по принципу, сходному с запредельным торможением ЦНС (Поленов А.Л., 1983).

Таким образом, в результате проведенных нами исследований было обнаружено, что течение восстановительного периода после перенесенной клинической смерти осложняется нарушением структурно-функциональной организации аденогипофиза.

С другой стороны благоприятное течение раннего восстановительного периода у животных связано с тем, что более высокий уровень нейропептидов может оказывать положительное влияние на скорость восстановления жизненно важных функций организма (Байбакова М.К., 1993). Нам представлялось интересным изучить динамику восстановления центральной нервной системы на примере исследования показателя общего состояния (ПОС) животных и условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ).

Как показали наши исследования, процент животных, неоживших при проведении реанимации с длительностью аноксии 10 минут составил 10%. У крыс, подвергшихся 15- и 20-минутной остановке кровообращения, этот показатель был значительно выше и составил соответственно 26,2% (р<0,05) и 42,9% (р<0,01) умерших особей. Далее, при изучении общего состояния животных, было отмечено неблагоприятное воздействие на

организм перенесенной гипоксии. Если у оживленных крыс, переживших ранний постреанимационный период, после 10- и 15-минутной клинической смерти 39 (86,7%) и 37 (82,3%) особей неврологические показатели восстанавливались к концу первой недели, то у 4 (12,5%) животных, выживших после 20-минутной клинической смерти, полного восстановления неврологического статуса не наблюдалось весь изучаемый период до 30-х суток.

С целью получения наиболее полной информации о функциональном состоянии ЦНС в постишемическом периоде и выявления возможной зависимости процессов восстановления функций ЦНС от гормонального статуса оживленного организма, помимо изучения показателя общего состояния оживленных животных исследовали процессы обучения и памяти, которые составляют основное содержание когнетивной деятельности мозга. Как известно мнестические нарушения являются частыми и длительно сохраняющимися осложнениями у животных, переживших тотальную ишемию (Неговский В.А., 1986; Незлина Н.И., 1987; Куттыбадамов Н.К., 1988; Чехович Г.И., 1988, 1994).

Изучение мнестических функций ЦНС с помощью условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) показало, что у животных отмечались выраженные нарушения сохранения и воспроизведения навыка, приобретенного до клинической смерти (таблица 4). Таблица 4 - Динамика УРПИ, выработанного до 10-мипутпой клинической смерти (с)

Группа животных Стат. показат Фон Время наблюдения (сутки)

1 3 5 7 14 20 30

Интакт-ные М 34,58 177,5 177,50 177,08 174,00 107,33 61,00 45,92

крысы ±т 2,90 1,15 1,15 1,29 1,87 12,98 4,27 4,93

п 12 12 12 12 12 12 12 12

Р <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001

Крысы М 36,95 133,75 116,80 49,15 38,80 18,55 17,80 11,25

после 10-мин. ±т 1,99 7,19 8,58 11,19 7,99 4,79 5,74 3,05

клин. п 20 20 20 20 20 20 20 20

смерти Р <0,001 <0,001 <0,5 >0,5 <0,001 <0,01 <0,001

Р1 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001

р - достоверность различий по сравнению с фоном

р1- достоверность различий по сравнению с интактными животными

Угашение условного рефлекса, выработанного за двое суток до моделирования 10-минутной клинической смерти , наблюдалось на 5-е сутки восстановительного периода, когда время пребывания в светлом отсеке составило 49,15 + 11,19 с и не отличалось от фонового показателя 36,95 + 1,99 с (р<0,5). Нарушение мнестических функций на 5-е сутки после реанимации совпадало со снижением концентрации АКТГ, которая была в 1,8 ниже исходного уровня (р<0,001).

Таблица 5 - Дипамика УРПИ, выработанного до 15-минутной клинической смерти (с)

Группа животных Стат. показат. Фон Время наблюдения (сутки)

1 3 5 7 14 20 30

И1гтактные крысы м 53.50 172,50 173,43 168,14 167,07 124,06 116,14 86,93

±т 5,35 1,85 1,29 2,20 1,93 12,31 12,59 11,48

п 14 14 14 14 14 14 14 14

Р <0,001 <0.001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,02

Крысы после 15-мин. клин, смерти м 64,92 80,00 79,92 62,69 48,33 32,92 33,42 29,67

±га 6,66 22,33 23,11 22,53 22,94 19,86 19,79 17,43

п 13 13 13 13 12 12 12 12

Р >0,5 >0,5 >0,5 >0,5 <0,2 <0,2 <0,1

Р1 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001

р - достоверность различий по сравнению с фоном

р1-достоверность различий по сравнению с интактными животными

У крыс, перенесших 15-минутную клиническую смерть, нарушения мнестических функций носили более выраженный характер. В данной серии экспериментов угашение УРПИ наблюдалось начиная с первых суток восстановительного периода (таблица 5).

Время пребывания в светлом отсеке камеры составляло 80,00 + 22,33 с и достоверно не отличалось от фонового 64,92 + 6,66 с, (р>0,5), и было в 2,2 раза ниже (р1<0,001), чем у животных интактной группы (172,50 ± 1,85 с), в то время как уровень АКТГ к концу 1-х суток оставался еще выше контрольных цифр.

Учитывая тяжелое течение постреанимационного периода (энцефалопатия, высыхание роговицы, вынужденное положение, дезориентация) и высокую летальность реанимированных животных в первые двое суток (84%) после 20-минутной клинической смерти нам не представлялось возможным изучить у этих животных УРПИ в постреанимационном периоде. Поэтому в качестве подтверждения тяжелых нарушений функций центральной нервной и эндокринной систем нами были проведены морфологические исследования коры мозжечка.

Изучение морфологических изменений грушевидных нейронов коры мозжечка проводилось через 3 часа после оживления, поскольку в этот период формируется начальный этап выпадения нейронов, который прогрессирует до первых суток восстановительного периода и его можно определить микроскопически на светооптическом уровне (Неговский В.А., 1986).

Через 3 часа после оживления в экспериментальной группе были выявлены структурные изменения во всех отделах КМ: резкое увеличение капиллярной сети, набухание эндотелиоцитов, в просвете сосудов сладжированные эритроциты, а так же большое количество спавшихся капилляров. Выявлено полнокровие крупных сосудов и единичные диапедезные кровоизлияния в периваскулярную ткань. Реакция глии на чрезвычайный раздражитель заключалась в значительном расширении и генерализованном набухании астроцитарных отростков вокруг нейроцитов с формированием периневронального и периваскулярного отека, что являлось свидетельством некробиотических изменений ткани мозга. Наряду с неизмененными грушевидными клетками определялись гомогенизирующие нарушения КП. В популяции обнаруживались также набухшие и сморщенные грушевидные нейроны, что свидетельствовало о дистрофических процессах в КП в ответ на перенесенное терминальное состояние. Цитоплазма большинства гипоксически измененных нейронов бледно окрашена, наблюдался периферический и центральный хроматолиз, вплоть до исчезновения хромофильного вещества, а так же центральная околоядерная эозинофилия. Обращали на себя внимание эксцентрично расположенные ядра неправильной формы, в кариоплазме которых находились интенсивно окрашенные ядрышки, в некоторых нейронах они отсутствовали. В латеральных отделах коры мозжечка были выявлены погибшие нейроны, так называемые клетки-тени, что также свидетельствовало о наличии коагуляционного ишемического некроза КП, вследствие недостаточной рециркуляции крови в мозге и энергетической недостаточности нервных клеток.

Вышеперечисленное свидетельствует, что в ранние сроки постреанимационного периода после 20-минутной клинической смерти развиваются неспецифические морфологические изменения коры

мозжечка, представляющие собой последовательные стадии постишемических изменений нейронов, сосудистых и стромальных элементов ткани мозга.

Таким образом, в ходе проведенных нами исследований было обнаружено, что соотношение концентрации адренокортикотропного гормона в сыворотке крови и тиреотропного гормона зависит от продолжительности аноксии и времени после перенесенного терминального состояния. В раннем постреанимационном периоде выявленные нами пики содержания АКТГ в сыворотке крови подтверждаются морфологическими исследованиями ткани аденогипофиза, переспециализацией тропоцитов на усиленный синтез АКТГ как "ключевого" гормона стресс-реакции, а так же могут быть результатом "аварийного" выброса гормона железой, либо результатом нарушения трансмембранной передачи гормонального сигнала в клетке. В отсроченный период после оживления мы наблюдали регенеративные процессы в аденогипофизе, которые, однако, оказываются недостаточными для полноценного функционирования железы. Полнота восстановления неврологического статуса и функциональной активности головного мозга, как показали наши исследования, в раннем постреанимационном периоде обусловлена высокой концентрацией в сыворотке крови АКТГ.

ВЫВОДЫ

1. Восстановительный период после перенесенной клинической смерти сопровождается волнообразным изменением концентрации адренокортикотропного гормона в сыворотке крови: независимо от длительности терминального состояния к 1-3 часу после реанимации отмечается увеличение концентрации нейрогормона, которое сменяется его снижением к 6-му часу и последующим подъемом к 24 часам постреанимационного периода. Наряду с этим повышение концентрации адренокортикотропного гормона к исходу первых суток после 15-минутной клинической смерти сопровождается увеличением в 3 раза концентрации тиреотропного гормона по сравнению с тем же периодом после перенесенной 10-минутной клинической смерти.

2. В раннем постреанимационном периоде можно выделить три варианта нарушений структурно-функциональной организации аденогипофиза. Благоприятный исход постреанимационного периода отмечается при усиленной регенерации железы с перераспределением гормон-продуцирующих зон в пользу кортикотропоцитов, что наиболее характерно для животных после 10-минутной клинической смерти

(I вариант). Для животных, преренесших 15-минутную гипоксическую агрессию, благоприятным считали также увеличение в органе секреторных гранул с адренокортикотропным гормоном в межклеточном

и периваскулярном пространствах, несмотря на затруднение элиминации гормона в кровеносное русло (II вариант). Неблагоприятное течение восстановительного периода характеризуется развитием обширных деструктивных изменений в аденогипофизе, что преобладало в группе животных после 20-минутной остановки системного кровообращения (III вариант).

3. Степень нарушения морфофункциональной специализации передней главной доли аденогипофиза влияет на сохранность условного рефлекса пассивного избегания. Угасание временной связи у животных с изменение структуры аденогипофиза по I варианту происходит в 4-5 раз медленнее, по сравнению с крысами, у которых преобладал II вариант постреанимационных нарушений в железе.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Лебедев A.C., Еремина В.К., Сочнева E.H. Характер изменения структуры и секреции тропных гормонов аденогипофиза в постреанимационном периоде // Проблемы экспериментальной реаниматологии. - Акмола, 1996. - С. 57-60.

2. Еремина В.К. Возможности применения красителя "Фенаф" для определения эндокриноцитов аденогипофиза в постреанимационном периоде // Иммунопатология и иммунорегуляция. - Алматы, 1996. - С. 18.

3. Еремина В.К., Лебедев A.C. Морфология аденогипофиза в постреанимационном периоде// Иммунопатология и иммунорегуляция.

- Алматы, 1996. - С. 24.

4. Еремина В.К. Морфофункциональная характеристика аденогипофиза в постреанимационном периоде// Иммунопатология и иммунорегуляция.

- Алматы, 1996. - С. 44-47.

5. Еремина В.К, Хамзина Н.К. Патоморфологическая характеристика аденогипофиза в постреанимационном периоде// Тез. докл. Материалы межд.симп. поев.60-летию НИИ Общей реаниматологии РАМН "Реаниматология на рубеже XXI века" 2-4/-12. - 1996.- Москва, 1996.

- С.133-134.

6. Еремина В.К., Зуева О.М., Сочнева E.H. Динамика содержания адренокортикотропного гормона гипофиза и УРПИ после 15-минутной клинической смерти // Экстремальные и терминальные состояния организма. Патогенез, клиника, лечение. - Акмола, 1997. - С. 51-54.

t г

M A 3 M ¥ H Ы

Авторы: Еремина Вера Карловна

Мамандык,: Патологиялык, физиология - 14.00.16.

Днссертациянын такырыбы: Узакда созылган терминалдык, жагдайдыц аденогипоиздш к,урь1лыс-кызметшщ озгер1сше типзетш осер! (тежфнбелк ¡здешс).

Назарларынызга усынылып отырган жумыс реаниматологиянын непзп носершш б1рше, ягни мидын кызметтж белсендшгш толык; калыпка келуше гуморалдык. механзмшш зерттеуге арналган. Теж1рибе 412 еркек жынысты ак, егеукуйрыктарда жасалып, 10-, 15-, 20-минутк;а созылган клинк,алык, шпм к,олданылды.

Т1рйтпршгеннен кейшп ор уак,ытта орталык, нерв жуйесшш мнестикалык, к,ызмет1 жоне каедагы троптык гормондардыц жиынтыгы аденогипофиздш к,урылыс б1рлестт зерттедщ.

Былыми 1здетстш нэтижеынде байкалганы реанимациянын салдары жоне неврологиялык, статустыц толык, к,алыпк,а келу1 аденошпофиздеп курылысты - кызметпк бузылыстардыц ерекшелжтерш аньщталатындыгы. Реанимацнядан кейшп кезендеп аурудыц салдарыныц колайлы болуы гипофиздщ алдыцгы бол1МШШ паренхиматозды-стромалды элементтершш регенерацнясыныц к,ушеклмен аныцталады.

Аденогипофиздш морфофункционалдык. бузылыстары пассивт! кашу шартты рефлексшш сактауына осерш типзедь

Author: Eremina Vera Karlovna

Speciality: pathologic physiology - 14.00.16.

The theme at the work: The influence of terminal condition duration on the structural-functional changes at adenohypophisis. (exsperimehtal research).

The work is devented to the one of the actual problem reanimatology, - investigation of humoral mechanisms of the cerebral functional activity restoration.

The investigation was performed on 412 albino male rats using the model of 10, 15 and 20-minute clinical daeth.

Mnestic functions of the central nervous system hypophysiotropic hormones concentretion in blood and structural organization of adenohypophysis were tested and various terms after resustitaition.

It was found that the end of reanimation and recovery of neurologic status is depended on particular ties of structural fuctional changes in adenohypophysis. Succeessfull outcome of postreanimation period depends on increased regeneration of adenohypophysis parenchymal-stromal elements. Adenohypophisis disorders degree infuences on passive avoidance acquired reflex presvation in postresuscitation period.

SUMMARY