Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Влияние амбиола на терапевтическую эффективность и токсичность противоопухолевой химиотерапии в эксперименте

КУЛИКОВ ОЛЕГ АЛЕКСАНДРОВИЧ

ВЛИЯНИЕ ЛМБИОЛЛ НА ТЕРАПЕВТИЧЕСКУЮ ЭФФЕКТИВНОСТЬ И ТОКСИЧНОСТЬ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ХИМИОТЕРАПИИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 О А П Р 2011

Саранск - 2011

4844793

Работа выполнена на кафедре фармакологии ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (г. Саранск)

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Сипров Александр Владимирович Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Марасанов Сергей Борисович ГОУВПО «Тверская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития России»

доктор медицинских наук, профессор Котляров Андрей Александрович ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.Н. Огарева»

Ведущая организация: ГОУВПО «Казанский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России», 420012, г. Казань, ул. Бутлерова, 49

Защита диссертации состоится «_»_2011 г. на заседании

диссертационного совета Д 212.117.08 при ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68)

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68). Автореферат размещен на сайте mrsu.ru

Автореферат разослан «_»_2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат медицинских наук, доцент

Голубев А.Г.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В современной терапии онкологических больных ведущее место занимает лекарственная терапия. Цитостатичсскис средства широко применяются при различных злокачественных новообразованиях, однако наряду с высокой эффективностью они обладают значительной токсичностью (Ратькин A.D. с соавт., 2005), что при современной дозоинтенсивпой и высокодозной химиотерапии, обеспечивающей значительный прогресс в лечении многих онкологических заболеваний, является лимитирующим фактором проведения эффективного лечения (Дыгай A.M., 2006).

В настоящее время проводятся многочисленные исследования по разным направлениям повышения эффективности лекарственного лечения злокачественных новообразований, снижения се агрессивности по отношению к здоровым клеткам и тканям. Одним из таких направлений является изучение эффективности включения антиоксидантов в схему антибластомной терапии в качестве вспомогательных средств, учитывая патогенетическую значимость активации псрекисного окисления липидов в развитии многих осложнений противоопухолевой терапии и самой оикопатологии (Mostafa M.G., Mima Т., Ohnishi S.T., 2000; Лушникова Е.М., Толстикова Т.Г., Непомнящих Л.М., 2007).

В ранее проведенных исследованиях (Сипров A.B., 2009) доказана эффективность и целесообразность включения антиоксидантов -производных 3-оксипиридина - в схему противоопухолевой химиотерапии с целью снижения основных проявлений побочных эффектов и повышения антиметастатической эффективности цитостатичсской терапии апкилирующими агентами.

Однако и производные 3-оксипиридина не позволяют в полной мере корригировать побочные эффекты цитостатиков и усилить специфическую эффективность противоопухолевой химиотерапии. В связи с этим, по-прежнему актуальным является поиск наиболее эффективных средств снижения токсичности и повышения терапевтической эффективности противоопухолевой терапии в ряду антиоксидантов иной химической структуры (Грек О.Р. с соавт., 2005). Это продиктовано усилением свободнорадикальных процессов и развитием окислительного стресса с повреждением ДНК и клеточных мембран нормальных клеток, что лежит в основе большинства побочных эффектов цитостатиков, в том числе наиболее частых, таких как мислодспрессия и гепатотокснчность (Непомнящих Л.М. с соавт., 2010). Анемия, возникающая в процессе опухолевого роста и усиливаемая цитостатиками, сопряжена с развитием тканевой гипоксии, которая является одной из самостоятельных причин развития окислительного стресса с избыточным образованием свободнорадикальных форм кислорода (Карпова Г.В. с соавт., 2004). На фоне развивающейся гепатотоксичности возрастает токсическое влияние антибластомных агентов на весь организм в

целом (Непомнящих Л.М. с соавт., 2010). Эти побочные эффекты, несомненно, ограничивают терапевтическую эффективность противоопухолевой химиотерапии.

Среди известных синтетических антиокемдаптов значительный интерес вызывают производные 5-гидроксибснзимидазола, ингибирующие реакции свободнорадикального окисления, изменяющие структурно-функциональное состояние мембран, рецепторов, мембраносвязашнлх ферментов и др. (Борышева с соавт., 2006). Одним из наиболее перспективных соединений этого ряда является амбиол, фармакодинамика которого мало изучена, что и определило его выбор для проведения наших исследований.

Цель работы: провести сравнительное исследование влияния антиоксидапта амбиола и З-окснннридинацстнлцистсината на противоопухолевую и аптиметастатическую эффективность циклофосфана с оценкой их миело- и гспатопротскторной активности.

Задачи исследовании. Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1) Изучить влияние амбиола на противоопухолевую и аптиметастатическую эффективность циклофосфана (ЦФ) у мышей с карциномой легкого Лыоис.

2) Исследовать влияние амбиола на процессы перекисного окисления липидов в сыворотке крови, гомогенатах первичного опухолевого узла, легких и печени экспериментальных мышей при терапии циклофосфаном.

3) Оцепить влияние амбиола на клеточный состав периферической крови и костного мозга мышей с карциномой лёгкого Льюис при терапии циклофосфаном.

4) Исследовать морфофуикциопалыюе состояние печени и морфологические изменения первичного опухолевого узла под влиянием амбиола у мышей с карциномой легкого Лыоис при терапии циклофосфаном.

5) Сравнить терапевтическую эффективность комбинаций циклофосфана с амбиолом и препаратом сравнения З-оксипиридипацетилцистеинагом (3-ОПЦ), а также миело- и гепатопротекторные свойства этих антиоксидантов у мышей с карциномой легкого Лыоис при терапии циклофосфаном.

Научная новизна работы В работе показано, что амбиол не влияет на противоопухолевый эффект циклофосфана в отношении первичного опухолевого узла. Сочетанное применение амбиола с циклофосфаном оказалось более эффективным в предупреждении развития метастазов, по сравнению с терапией одним цитостатиком. Сочетание амбиола и циклофосфана приводило к снижению активности ПОЛ в сыворотке крови и усилению антиоксидантной активности в ткани печени. Амбиол снижал степень тяжести лейкопении, увеличивая общее число лейкоцитов крови, а также количество гранулоцитов и лимфоцитов костного мозга (на 14-е сутки эксперимента), уровень гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов (на 22-е сутки эксперимента). Амбиол оказывал гепатопротекторное действие.

Амбиол в дозе 25мг/кг эффективнее 3-ОПЦ в обеих изучаемых дозах усиливал антимстастатическое действие циклофосфана. Амбиол и 3-ОПЦ в

сопоставимой степени увеличивали антиоксидантиый потенциал печени. На фоне химиотерапии циклофосфаном амбиол эффективнее 3-ОПЦ восстанавливал общее число лейкоцитов крови и лимфоцитов костного мозга. Амбиол эффективнее 3-ОПЦ оказывал мислоиротскторпое действие в отношении лимфоцитов и мегакариоцитов костного мозга, однако не проявлял протекторных свойств в отношении эритроидного ростка. Амбиол превосходит 3-ОПЦ по гепатонротекторным свойствам при химиотерапии циклофосфаном.

Научно-практическая ценность и внедрение результатов исследования. Полученные данные свидетельствуют о перспективности дальнейшего исследования эффективности применения антиоксидантов разных классов при комбинированном и комплексном лечении злокачественных новообразований с целью повышения эффективности и снижения токсичности противоопухолевой терапии. Результаты исследования углубляют представления о фармакодинамике производных 5-гидрокепбензимидазола и внедрены в научно-исследовательскую работу кафедры фармакологии с курсом клинической фармакологии, а также используются в системе послевузовского профессионального образования при подготовке аспирантов и клинических ординаторов по фармакологии и онкологии ГОУВПО «МГУ им. Н.П. Огарева».

Положения, выносимые на защиту.

1. Амбиол не снижает противоопухолевую активность циклофосфана в отношении первичного опухолевого узла. Сочетанное применение амбиола в дозе 25мг/кг с циклофосфаном вызывает более выраженное антиметастатическое действие по сравнению с терапией одним цитостатиком.

2. Амбиол проявляет миело- и гепатопротекторное действие и снижает интенсивность процессов ПОЛ у животных с карциномой лёгкого Лыоис при химиотерапии циклофосфаном.

3. Амбиол в дозе 25мг/кг эффективнее 3-оксипиридинацетилцистеината в обеих изучаемых дозах усиливает антиметастатичсское действие циклофосфана. Амбиол эффективнее 3-оксипиридинацетилцистеината восстанавливает общее число лейкоцитов крови, содержание лимфоцитов костного мозга и снижает явления цитолиза гепатоцитов.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториалыюй патологии» (Курск, 2006), XI научной конференции молодых учёных, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского государственного университета (Саранск, 2006), I региональной научно-практической конференции «Научный потенциал молодёжи - будущему Мордовии»; «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2009), XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 3 научные работы в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура н объем диссертации. Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 151 источник (122 отечественных и 29 зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 14 рисунками и 12 таблицами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Опыты выполнялись на 150 мышах-самках линии С57В1/6 массой 1820 г. разводки питомника ГУ НЦБМТ РАМН «Столбовая». Все экспериментальные животные содержались в стандартных условиях вивария ГОУВПО «МГУ им. П.П. Огарева» со свободным доступом к питьевой воде на стандартном рационе брикетированных кормов. В каждую экспериментальную группу входило от 20 до 25 мышей. Использовали готовую лекарственную форму цитостатика - циклофосфана (АО «Биохимик», Россия); антиоксидантов - субстанции амбиола, 3-оксипиридинацетилцистеината были предоставлены профессором Ю.В. Кузнецовым и профессором Л.Д. Смирновым (ИБФ им. Н.М. Эмануэля РАН).

Эффективность комбинаций ЦФ с амбиолом и 3-ОПЦ изучали на сингенной опухолевой системе из банка опухолевых штаммов РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН - карциноме легкого Лыоис (LLC). Опухолевую ткань LLC трансплантировали животным внутримышечно в бедро задней лапки слева в количестве 1 х 106 клеток в растворе Хенкса (ООО «Биолот», Россия). Характеристика экспериментального раздела представлена в таблице 1.

Материалами исследования явились костный мозг, кровь, ткани первичного опухолевого узла, печени, легких мышей.

Для оценки гематологической токсичности дважды производился забор крови под эфирным наркозом: на 14-е сутки опыта (у 6-ти мышей из каждой группы) и в конце эксперимента на 22-е сутки, также у 6 мышей в каждой группе, с последующим определением содержания эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов и лейкоцитов (с помощью камеры Горясва, подсчет лейкоформулы производили в мазках крови, которые фиксировали в растворе Май-Грюнвальда, затем окрашивали по методу Романовского).

На 22-е сутки после трансплантации опухолевых клеток животные выводились из эксперимента под эфирным наркозом. У животных выделяли костный мозг из бедренной кости и на предметном стекле приготавливали мазок костного мозга с последующей оценкой миелограмм. Фиксацию и окраску препаратов проводили по Паппснгсйму-Крюкову.

Характеристика экспериментального раздела

Таблица!.

№ Экспериментальные группы Вид и количество животных Схема введения препаратов

1 Ннтактпые жнвотные Мыши линии С5ПШ\п=20 Препараты не вводили и опухолевые клетки LLC не перевивали

2 Животные с LLC (контроль) Мыши линии С57Ш/6, п=20 1х106 опухолевых клеток LLC внутримышечно

3 LLC + ншслофосфан (ЦФ) 200 мг/кг Мыши линии С57В1/6, и=20 1х106 опухолевых клеток LLC внутримышечно, циклофосфап в/бр, 2 раза с интервалом 96 часов, в дозе 100 мг/кг, начиная с 1-х суток

4 LLC + ЦФ 200 .мг/кг + амбиол 25 мг/кг Мыши линии С57В1/6, п=25 так же, как и в III гр., амбиол ежедневно, в/м, в дозе 25 мг/кг, начиная с 7-х суток после имплантации опухолевых клеток в течение 14 дней

5 LLC + ЦФ 200 мг/кг + амбиол 50 мг/кг Мыши линии С57В1/6,л=25 так же, как и в III гр., амбиол ежедневно, в/м, в дозе 50 мг/кг, начиная с 7-х суток в течение 14 дней

6 LLC + ЦФ 200 мг/кг + З-ОНЦ 25 мг/кг Мыши линии С57В1/6, п=20 так же, как и в III гр., З-ОПЦ ежедневно, в/м, в дозе 25 мг/кг, начиная с 7-х суток после имплантации опухолевых клеток в течение 14 дней

7 I.LC + ЦФ 200 мг/кг + З-ОНЦ 50 мг/кг Мьшш линии С57В1/6, и=20 так же, как и в III гр., З-ОПЦ ежедневно, в/м, в дозе 50 мг/кг, начиная с 7-х суток после имплантации опухолевых клеток в течение 14 дней

В сыворотке крови определяли содержание АлТ и АсТ (по Райтману-Френкелю), общего белка (биурстовой реакцией), альбуминов (по реакции с бромкрезоловым зеленым), креатинина (по цветной реакции Яффе), мочевины (по реакции с диацетилмонооксимом), а также уровень МДА, Рс-МДА с использованием набора реактивов для определения ТБК-активных продуктов фирмы «Агат-Мед» (Москва), активность каталазы (по М.А. Королюк), а в гомогенатах тканей - МДА, Ре-МДА, активность каталазы и СОД (по С. Чсвари).

Гистологическую структуру печени и опухолевого узла исследовали светооптическим методом в световом микроскопе "Микмед II" при увеличении х 100 и х400.

Противоопухолевое действие цитостатнка и его антимстастатическис свойства оценивали в соответствии с существующими "Методическими рекомендациями по изучению специфической активности противоопухолевых препаратов, предлагаемых для испытания в клинике" (М., 2005) и "Методическими рекомендациями по доклиническому изучению средств, обладающих способностью ингибировать процесс метастазирования

и повышать эффективность цитостатической терапии злокачественных опухолей" (М., 1992).

Противоопухолевый эффект оценивали по объему первичного опухолевого узла и в конце эксперимента - по его массе. Антиметастатический эффект оценивали по следующим показателям: процент животных с метастазами, среднее число поверхностных метастазов на одно животное, степень метастатического поражения легких в зависимости от количества и размеров метастазов. Вычисляли индекс ннгибирования процесса метастазирования (НИМ).

Статистическую обработку полученных результатов проводили на персональном компьютере Pentium IV с помощью пакета прикладных программ «Microsoft Excel». Статистическая обработка включала расчет средних арифметических значений (М), ошибок средних арифметических (±т), определение достоверности различий средних арифметических (р) с помощью t-критерия Стьюделта и у\ Различия считались достоверными при значении р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Объём первичного опухолевого узла на 9-е сутки эксперимента при использовании ЦФ с амбиолом 25мг/кг составил 2475±163 мм3. Объём опухоли в группе с ЦФ и амбиолом 50мг/кг составил 2757,4±35,7 мм3, что достоверно больше, чем при монотерапии ЦФ (р<0,05, рис. 1). мм3 8000 7000 6000 5000 4000 3000 2000 1000

7 9 12

—О— Контроль(ЬЬС) • ■■д.- LLC+ЦФ+амбиол 25мг/кг —Ж— LLC+ЦФ+З-ОПЦ 25мг/кг

16 18

—в— LLC+ЦФ

—о— LLC+ЦФ+амбиол 50мг/кг --»-- LLC+ЦФ+З-ОПЦ 50мг/кг

Примечание:

*- различия достоверны относительно группы LLC + ЦФ (р<0,05); Р и с. 1. Влияние амбиола и препарата сравнения З-оксипиридинацетилцистсината на динамику роста первичного опухолевого узла у мышей с карциномой лёгкого Льюис при терапии циклофосфаном.

В группах с амбиолом 25 и 50мг/кг размер опухоли на 12-е сутки составил 2306±133 мм3 и 2372±191мм3 соответственно, а па 14-е сутки составил 2535±220 мм3 и 2481±219 мм3, что не отличалось от монотерапии ЦФ. На 16-е сутки в группах с амбиолом 25мг/кг и 50мг/кг объём опухолевого узла составил 3639±165 мм3 и 3770±347 мм3 соответственно, что достоверно не отличалось от монотерапии ЦФ. Размер опухоли на 18-е сутки составил в группе с амбиолом 25мг/кг 3978±244 мм3, а в группе с амбиолом 50мг/кг 4634±510 мм3. На 20-е сутки эксперимента объем опухолевого узла в группе с амбиолом 25мг/кг составил 4792±481мм3, а в группе с амбиолом 50мг/кг 5304,7±203мм3. Размеры опухоли в группах с амбиолом на 18-е и 20-е сутки не отличались достоверно от показателей в группе с одним ЦФ. В группах с амбиолом на 12-е, 14-е, 16-е, 18-е, 20-е и 22-е сутки размер опухоли был достоверно меньше, чем в контрольной группе и не отличался от такового в группах с 3-ОПЦ (р<0,05, рис. 1).

Масса первичного опухолевого узла на фоне монотерапии ЦФ достоверно снижалась с 9,18±0,19г у животных без лечения до 6,45±0,18г. Масса опухоли в группах с амбиолом 25 и 50мг/кг была ниже, чем в контрольной группе и составила 6,38±0,32 и 7,095±0,47г соответственно (р<0,05). В группах с комбинациями ЦФ и 3-ОПЦ 25 и 50мг/кг масса опухоли составила 7±0,17г и 6,95±0,2г соответственно. Масса опухоли при применении амбиола и 3-ОПЦ в обеих изучаемых дозах не отличалась от таковой в группе с одним ЦФ.

ЦФ выраженно ингибирует процесс метастазирования. По сравнению с контрольной группой, в лёгких животных, получавших лечение ЦФ, снижалось общее число метастазов на 94,78%, не определялись крупные (> 1,5мм) метастатические узлы (р<0,05, табл. 1). При использовании амбиола 25мг/кг в сочетании с ЦФ процесс метастазирования резко угнетался по отношению к монотерапин ЦФ на 96%. Размер всех метастазов в обеих изучаемых группах с амбиолом был менее 1 мм в диаметре. В группах с амбиолом 25 и 50мг/кг частота метастазирования снижалась на 80% и 75% соответственно по сравнению с группой с ЦФ (р<0,05, табл. 1). Индекс иигибирования метастазирования в группах с амбиолом 25 и 50мг/кг был значительно выше такового при монотерапии ЦФ на 5,16% и 4,74% соответственно (р<0,05, табл. 1). Добавление к терапии ЦФ 3-ОПЦ в дозе 25мг/кг привело к усилению аптиметастатического эффекта цитостатика, что проявилось достоверным снижением общего числа метастазов в легких на 73,4% (р<0,05, табл. 1). ИИМ при этом увеличился на 4,04% (р<0,05, табл. 1). Среднее число метастазов в группе с 3-ОПЦ 25мг/кг в 6,6 раза превышало таковое в группе с амбиолом 25мг/кг, а частота метастазирования - в 4,17 раза (р<0,05, табл. 1). В условиях опухолевого роста в крови подопытных животных наблюдалось усиление процессов ПОЛ на фоне истощения антиоксидантной защиты организма. Так, в сыворотке крови наблюдалось повышение содержания МДА на 73,15% при сохранении концентрации Ре-МДА па уровне интактных животных.

Таблица 1.

Показатели аитиметастати ческой эффективности сочстапного применения циклофосфана и антиоксидаитов у мышей с карциномой лёгкого Лыоис

Группа Процент мышей с метастазами Среднее число 1стастазов Количество животных с 0-5 стснсныо поражения легких, % НИМ, %

0 1 2 3 4 5

LLC 100 95,7+8,2 - - . 20,0 133 66,7

LLC+ЦФ 100 5,0 ±1,2 р, <0,05 - 90,0 Pi<0,05 10,0 Pi<0,05 - - - 94,8

LLC+ЦФ +амбиол 25мг/кг 20 0,2 ±0,13 р2 <0,05 80 Pu<0,05 20 р2<0,05 99,96 р2<0,05

LLC+ЦФ +амбиол 50мг/кг 25 1,75±0,85 р,<0,05 75 PU<0,05 25 р2<0,05 99,54 р2<0,05

LLC+ЦФ +3-ОПЦ 25мг/кг 83,33 рз<0,05 1,33±0,56 р2<0,05 16,67 PU„i<0,05 83,33 Риз<0,05 98,84 р2<0,05

LLC+ЦФ +3-ОИЦ 50мг/кг 83,33 рз<0,05 1,67 ±0,5 р,<0,05 16,67 PiA3<0,05 83,33 Puj<0,05 98,55 pi<0,05

Примечание: pi -достоверность различий рассчитана по отношению к группе LLC;

P2- к группе LLC+ЦФ; рз-к группе LLC+ЦФ+амбиол 25мг/кг.

Активность катапазы достоверно снижалась на 59,1% (р<0,05, табл. 2). Терапия ЦФ приводила к росту активности катапазы в сыворотке крови на 193,4% по отношению к группе LLC (р<0,05). Амбиол в обеих изучаемых дозах статистически значимо снижал возросшую интенсивность процессов перскисного окисления липидов при опухолевом процессе. Так, амбиол в дозах 25 и 50мг/кг снижал уровень МДА на 54,5% и 68,23% соответственно при высокой активности каталазы сыворотки крови. Количество МДА сыворотки в группе с 3-ОПЦ 50мг/кг превышало на 116% значение соответствующего показателя у мышей, получавших ЦФ в комбинации с амбиолом 50мг/кг (р<0,05, табл. 2). При этом величина Fe-МДА при использовании 3-ОПЦ 25мг/кг превышала на 62,2% и 44% указанный показатель в группах с использованием амбиола в дозах 25 и 50мг/кг соответственно (р<0,05). Активность каталазы в группе ЦФ+З-ОПЦ 25мг/кг достоверно превышала таковую в группах с амбиолом 25 и 50мг/кг па 255,8% и 105% соответственно. Уровень каталазы при использовании 3-ОПЦ 50мг/кг был выше такового в группе с амбиолом 25мг/кг на 69,11% (р<0,05, табл. 2). Введение ЦФ вызывало истощение антиоксидантной защиты в ткани опухолевого узла по сравнению с контролем, что проявлялось достоверным снижением активности каталазы с 0,889±0,018 до 0,353±0,023 мккат/л и СОД с 13,4±1,19 до 4,82±0,37 ед. ак./г. ткани. В ткани опухолевого узла амбиол и 3-ОПЦ не оказывали существенного влияния на интенсивность процессов ПОЛ при сочстанном введении с ЦФ.

Таблица 2.

Влияние амбиола и 3-ОПЦ па некоторые показатели ПОЛ сыворотки крови у

Группы животных Показатели

МДА мкмоль/л Fc-МДЛ мкмоль/л Ка гал аза мккаг/л

Иптактные 3,52+0,38 4,69+0,48 0,408+0,08

Коитроль(1ХС) 6,095+0,44 pi<0,05 4,6±0,63 0,167+0,01 pi<0,05

LLC+ЦФ 6,705±0,42 pi<0,05 9,364+1,11 pii<0,05 0,49±0,05 рг<0,05

LLC+ЦФ+амбиол 25мг/кг 3,05+1,34 ри<0,05 4,56+0,456 pj<0,05 0,34+0,09

LLC+ЦФ+амбиол 50мг/кг 2,13±0,46 piw<0,05 5,13+0,205 рз<0,05 0,59+0,09 рг<0,05

LLC+ЦФ+З-ОПЦ 25мг/кг 3,4+0,5 p2„i<0,05 7,4+0,53 ри,4,5<0,05 1,217+0,14 puj,4i<0,05

LLC+ЦФ+З-ОПЦ 50мг/кг 4,61±0,47 Р2,1,5<(),05 5,2+0,59 p.i,6<0,05 0,575+0,02 P2,4,t<0,05

Примечание: достоверность отличий pi рассчитана к интактной группе;

р2-к контрольной группе (LLC);

рз-к группе LLC+ЦФ;

р4- к группе LLC+ЦФ+амбиол 25мг/кг;

р5-к группе LLC+ЦФ+амбиол 50мг/кг;

рб-к группе LLC+ЦФ+З-ОПЦ 25мг/кг.

В группе с 3-ОПЦ 25мг/кг уровень МДА составил 5,54±0,б мкмоль/л, а в дозе 50мг/кг - 7,25±0,82 мкмоль/л, что достоверно больше, чем при ионотерапии ЦФ. 3-ОПЦ в обеих изучаемых дозах увеличивал активность каталазы до 0,783±0,05 мккат/л при дозе 25мг/кг и до 0,565±0,03 мккат/л при дозе 50мг/кг по сравнению с монотерапией ЦФ.

В условиях опухолевого роста в ткани лёгкого резко возрастала активность СОД до 21,7± 1,34 ед. ак./г. ткани по сравнению с интактными животными (5,3±0,75 ед. ак./r. ткани) (р<0,05). В группе с ЦФ отмечалось снижение активности каталазы и СОД до 0,194±0,02 мккат/л и 12,06±1,74 ед. ак./г. ткани по сравнению с опухолсносителями без лечения (р<0,05). В группе с амбиолом 50мг/кг уровень МДА был выше, чем в группе с одним ЦФ (3,12±0,43 мкмоль/л) и составил 5,09±0,63 мкмоль/л. При этом антиоксидантный статус характеризовался более низкой активностью СОД (3,46±1,75 сд. ак./г. ткани) и более высокой активностью каталазы (0,89±0,08 мккат/л) при использовании амбиола 25мг/кг. В группах с 3-ОПЦ 25 и 50мг/кг активность каталазы возросла на 460,7% и 139,1%, активность СОД -на 47,7% и 67,6% соответственно, по сравнению с монотерапией ЦФ. При этом в лёгочной ткани усиливались и процессы ПОЛ.

Количество МДА в ткани печени на фоне опухолевого роста увеличивалось на 112,7% по сравнению с интактными животными (р<0,05,

и

табл. 3). Уровень Бе-МДЛ при этом увеличивался на 170,9% (р<0,05). Терапия ЦФ приводила к достоверному снижению на 43,8% активности каталазы по отношению к контрольной группе (табл. 3). Уровень СОД под действием ЦФ снижался но отношению к таковому у интактных мышей на 49,2%, а по отношению к животным опухоленоситслям - на 44,2% (р<0,05).

'Г а б л н ц а 3.

Влияние амбиола и 3-ОГЩ на некоторые показатели ПОЛ в ткани печени у мышеи с

Группы животных Показатели

МДА мкм оль/л Fc-МДЛ мкмоль/л Каталаза мккат/л сод ед.ак./г.тканн

Интактные 8,668*0,96 8,82+1,64 0,186+0,017 39,41+2,9

Коитроль(ЬЬС) 18,43+0,93 pi<0,05 23,9+2,3 pi<0,05 0,785+0,03 pi<0,05 35,9+0,48

LLC+ЦФ 5,19+0,62 pi,2<0,05 3,725+0,52 ри<0,05 0,44+0,015 pi,2<0,05 20,025+1,12 pi,2<0,05

LLC+ЦФ+амбиол 25мг/кг 8,27+0,91 P2„I<0,05 10,79+1,82 P2j<0,05 0,994+0,044 pi,2„i<0,05 30+2,39 pi,2..i<0,05

LLC+ЦФ+амбиол 50мг/кг 21,74+3,54 р1„М<0,05 6,3+1,7 рг<0,05 0,324+0,04 pi,2.i,i<0,05 30,3+2,43 pi,2..i<0,05

LLC+ЦФ+З-ОПЦ 25мг/кг 9,89+0,92 Р2„1,5<0,05 13,82+2,1 P2J,5<0,05 1,305+0,15 pi,2„1,5<0,05 27,43+1,4 pi,2,.i<0,05

LLC+ЦФ+З-ОПЦ 50мг/кг 15,18+0,81 pi,2J,4,6<0,05 17,77+1,03 pi,.i,i,5<0,05 0,72+0,036 pu,4,5,6<0,05 31,42+2,28 p.i<0,05

Примечание: достоверность отличий pi рассчитана к цитатной группе;

р2-к контрольной группе (LLC);

рз-к группе LLC+ЦФ;

р4-к группе LLC+ЦФ+амбиол 25мг/кг;

р5-к группе LLC+ЦФ+амбиол 50мг/кг;

рб-к группе LLC+ЦФ+З-ОПЦ 25мг/кг.

Амбиол 25мг/кг эффективно повышал активность каталазы (па 125%) и СОД (на 49,8%) в сравнении с ионотерапией ЦФ, а амбиол 50мг/кг лишь повышал активность СОД (на 51,3%) (р<0,05, табл. 3). 3-ОГЩ 25мг/кг также корригировал процессы ПОЛ печени, повышая активность антиоксидантных ферментов: каталазы на 196% и СОД на 37% по отношению к монотерапии ЦФ. 3-ОПЦ 50мг/кг повышал активность каталазы на 63,6% и СОД - на 56,9% по отношению к монотерапии ЦФ (р<0,05), по при этом уровень МДА оставался достаточно высоким (табл. 3). Амбиол и 3-ОПЦ в сопоставимой степени корригировали изменения ПОЛ в ткани печени при химиотерапии.

Таким образом, амбиол и 3-ОПЦ в обеих изучаемых дозах достоверно угнетают интенсивность процессов Г10Л в сыворотке крови и в сопоставимой степени корригируют процессы Г10Л в печени.

В условиях опухолевого роста у животных на 14-е сутки эксперимента развивалась анемия за счет снижения уровня гемоглобина и числа эритроцитов и лейкопения. На фоне монотерапии ЦФ явления анемии

усугублялись за счёт достоверного снижения уровня гемоглобина на 17,2% и числа эритроцитов на 24% по сравнению с контролем (рис. 2).

4 5

□ тромбоциты

6 7

□ лейкоциты

5- LLC + ЦФ + амбиол 50мг/кг;

6-LLC + ЦФ + 3-ОПЦ 25мг/кг;

7-LLC + ЦФ + 3-ОПЦ 50мг/кг;

Примечание:

1-интактные животные;

2-животные с LLC (контроль);

3-LLC + ЦФ;

4-LLC + ЦФ + амбиол 25мг/кг;

*- достоверность отличий по отношению к интактной группе при р<0,05; **- достоверность отличий по отношению к группе с LLC при р<0,05; ***-достоверность отличий по отношению к группе с ЦФ при р<0,05. Р и с. 2. Влияние амбиола и 3-оксиниридинацетилцистеината на показатели периферической крови у мышей е карциномой легкого Лыочс на фоне терапии циклофосфаном (14-е сутки эксперимента).

Лейкопения также усиливалась: число нейтрофилов и лимфоцитов снижалось на 57,7% и 80,9% соответственно по сравнению с контролем. Амбиол в дозах 25 и 50мг/кг на 14-е сутки эксперимента уменьшал степень лейкопении, увеличивая количество лейкоцитов на 164% и 194% соответственно по отношению к монотерапии ЦФ (р<0,05, рис. 2). Использование комбинации ЦФ и 3-ОПЦ 25мг/кг приводило к достоверному по сравнению с монотерапией ЦФ увеличению числа лимфоцитов на 73,4% при сохранении выраженной лейко- и нейтропении (р<0,05). 3-ОПЦ 50мг/кг вызывал по сравнению с монотерапией ЦФ достоверное увеличение концентрации гемоглобина на 23,9% при сохранявшейся эритропении (рис. 2.). В группе с ЦФ на 14-е сутки эксперимента наблюдалось угнетение процесса дифференцировки и усиление пролиферации клеток гранулоцитарного ряда. В костном мозге под влиянием амбиола 50мг/кг снижалось количество бластных клеток на 76,7% и миэлоцитов на 53% по сравнению с одним ЦФ (р<0,05). При этом число сегментоядерных нейтрофилов возрастало на 314% и 102% в группах с амбиолом 25 и 50мг/кг соответственно, по сравнению с монотерапией ЦФ (р<0,05). Амбиол 25мг/кг вызывал рост уровня лимфоцитов костного мозга на 141,6% по сравнению с группой, где применялся один ЦФ (р<0,05). 3-ОПЦ в обеих изучаемых дозах также вызывал достоверное по отношению к монотерапии ЦФ уменьшение

числа бластных форм гранулоцитов и увеличение ссгмснтоядсрпых нейтрофилов, однако в дозе 50мг/кг З-ОПЦ эффективнее амбиола восстанавливал эритроидный росток кроветворения, приводя к достоверному увеличению уровня базофильных нормоцитов.

В крови подопытных животных в условиях опухолевого роста на 22-е сутки эксперимента наблюдалась анемия и тромбоцитонения. При этом в лейкоформуле преобладали пейтрофилы. Мопотерапия ЦФ приводила к развитию выраженного нейтрофилыюго лейкоцитоза и усилению эритро- и тромбоцитопении. Лмбиол в дозах 25 и 50мг/кг повышал уровень гемоглобина на 86% и 41,4%, а количество эритроцитов - на 68,7% и 76% (р<0,05) соответственно, но сравнению с группой с ЦФ. Лмбиол 25мг/кг увеличивал содержание мсгакариоцитов в костном мозге на 175% по отношению к ионотерапии ЦФ, что проявлялось увеличением на 151 % числа тромбоцитов в периферической крови по сравнению с таковым в группе с одним ЦФ (р<0,05). В группе с амбиолом в дозе 50мг/кг наблюдалось увеличение общего числа лейкоцитов (на 80%) и лимфоцитов (на 173%) по сравнению с монотерапией ЦФ (р<0,05). З-ОПЦ в дозах 25 и 50мг/кг также достоверно корригировал эритро- и тромбоцитонепию: количество эритроцитов возрастало па 73% и 36,1%, тромбоцитов - на 105,8% и 108,3% соответственно, по сравнению с монотерапией ЦФ. На 22-е сутки эксперимента в эритроидном ростке кроветворения под действием ЦФ отмечалось значительное снижение числа полихроматофильных нормоцитов. Уровень базофильных и полихроматофильных нормоцитов при введении амбиола в обеих изучаемых дозах не отличался от такового при моиотсрапии ЦФ. При этом амбиол вызывал достоверный рост числа лимфоцитов в костном мозге по отношению к моиотсрапии ЦФ на 400% и 301,5% соответственно дозам 25 и 50мг/кг. З-ОПЦ в дозах 25 и 50мг/кг восстанавливал эритропоэз, достоверно повышая число полихроматофильных нормоцитов на 292% и 222% соответственно, по сравнению с монотерапией ЦФ.

Таким образом, амбиол обладает более выраженным миелопротскторным действием по сравнению с З-ОПЦ, уменьшая тяжесть лейкопении и увеличивая в костном мозге количество гранулоцитов, лимфоцитов и мсгакариоцитов. Однако З-ОПЦ эффективнее амбиола корригировал клеточный состав эритроидного ростка кроветворения.

У животных с LLC без лечения в печени гистологически отмечалось увеличение в размерах ядер клеток, дистрофические изменения в гепатоцитах, клеточная инфильтрация перипортальных трактов и перисинусойдальных пространств лимфойдными элементами. Введение ЦФ усиливало дистрофические изменения в печени: цитоплазма гепатоцитов становилась пенистой и разряженной, перипортальпые тракты обильно инфильтрированы полиморфноядерными клеточными элементами. Балочная система долек нарушена. При использовании амбиола 25 и 50мг/кг в печени сохранялась балочная система строения долек, значительно уменьшалась инфильтрация перипортальных трактов, а при дозе амбиола 50мг/кг

практически не определялась. В группах с 3-ОПЦ отмечалось уменьшение дистрофических изменений гепатоцитов, однако контуры клеток были нечеткие и отмечалась клеточная инфильтрация перипортальных трактов.

При оценке морфологической картины первичного опухолевого узла у нелеченных животных с LLC отмечался инфильтративный рост опухоли, собственная капсула опухоли отсутствовала, паренхима представлена массивом округлых, полигональных крупных клеток с выраженным клеточным полиморфизмом. В ткани новообразований отмечались вторичные опухолевые изменения в виде обширных очагов некроза. В группе с моиотерапией ЦФ большая часть опухолевой ткани представлена некротическими массами. Отмечалось усиление дистрофических изменений в опухолевых клетках, сохранившихся преимущественно по периферии узлов. В группах с сочстаиным введением ЦФ и изучаемых антиокендантов гистологическая картина опухолевого узла не отличалась от таковой при моиотерашш ЦФ.

Таким образом, амбиол в обеих изучаемых дозах оказывает гепатопротекторный эффект. Изучаемые антиоксиданты не оказывают цнтопротскторнос действие на опухолевую ткань при терапии ЦФ.

Рост опухоли без лечения вызывал снижение в сыворотке крови общего белка на 22% и альбуминов на 30% по сравнению с интактнымн мышами (р<0,05, табл. 4).

Т а б л и ц а 4.

Влияние амбиола и З-окснинридинацетнлцистеината на биохимические показатели сыворотки крови у мышей с карциномой легкого Лыоис при терапии циклофосфаном

Группы животных Показатели

Общин белок г/л Лльбумн н ы г/л Мочевина ммоль/л Креатнпип ммоль/л ЛлТ м км оль/л ЛсТ мкмоль/л

Интактные 47,3±1,41 30,8±1,93 6,46±0,23 0,05±0,004 1,07±0,052 0,88±0,09

Контроль (LLC) 37,1±1 pi<0,05 21,3±1,02 pi<0,05 7,1±0,46 0,022±0,002 pi<0,05 1,74±0,14 pi<0,05 1,498*0,06 pi<0,05

LLC+ЦФ 38,6±1,95 pi <0,05 23,5±1,8 pi<0,05 5,25±0,54 рм<0,05 0,013±0,002 pi,2<0,05 2,03±0,2 pi<0,05 1,54±0,075 pi<0,05

LLC+HO+ амбиол 25мг/кг 43±3,96 27,2±2,8 рг<0,05 3,05±0,39 pi^<0,05 0,037±0,002 p2j<0,05 0,967±0,1 P2j<0,05 1,03±0,067 p2j<0,05

LLC+U®+ амбиол 50.мг/кг 40,2±0,05 pi<0,05 23,8±2 рк0,05 5,4±0,3 Р1,2,4<0,05 0,03±0,004 РМД4<0,05 1,175±0,05 p2j<0,05 1,2±0,1 ргз<0,05

LLC+LJO+ 3-ОПЦ 25мг/кг 44±1,02 р2Д5<0,05 31±1,6 Р2Д5<0,05 5,01±0,6 ри,4<0,05 0,06±0,0046 р2Д4<0,05 1,85*0,15 pi,4^<0,05 1,483±0,11 pi,4<0,05

LLC+ЦФН-3-ОПЦ 50 м г/кг 44,6±4,13 20,2±1,27 pi,4,6<0,05 5,5±0,7 р4<0,05 0,058±0,003 р2Д4,5<0,05 1,62±0,23 pi,4<0,05 1,22±0,1 рмз<0,05

Примечание:

достоверность отличий pi рассчитана по отношению к интактной группе;

р2 - по отношению к контролю;

рз - по отношению к группе LLC+ЦФ;

р4 - по отношению к группе I.LC+ЦФ+амбиол 25мг/кг;

рз - по отношению к группе LLC+ЦФ+амбиол 50мг/кг;

рб - по отношению к группе LLC+ЦФ+З-ОПЦ 25мг/кг.

При этом росло содержание аспарагиновой и алаииновой трансаминаз па 62,6% и 70,2% соответственно, что свидетельствует о деструктивных процессах в печени (табл. 4) (Jwai М. ct al., 2000).

При лечении ЦФ содержание общего белка, альбуминов, ДлТ и ЛсТ не отличалось от соответствующих значений в контрольной группе, однако достоверно уменьшалось содержание мочевины и креатинииа, что может быть связано с уменьшением превращения аммиака в печени, то есть снижением образования остаточного азота (Лбдрешов С.П., Демченко Г.Л, 2009).

Амбиол 25мг/кг вызывал достоверное повышение уровня альбуминов на 27,7% по сравнению с мышами - опухоленосителями, при этом снижалась концентрация АлТ на 44% в сравнении с животными без лечения и на 52,3% по отношению к группе с одним ЦФ (табл. 4).

Активность АсТ также достоверно снижалась на 30,7% и 33% по отношению к контролю и группе с монотерапией ЦФ. Амбиол в дозе 50мг/кг снижал активность АлТ и АсТ в сравнении с контролем на 32,5% и 19,5% соответственно. При этом уровни алаииновой и аспарагиновой трансаминаз снижались и по отношению к группе с одним ЦФ на 42% и 22% соответственно (табл. 4). Амбиол эффективнее З-ОПЦ ограничивал рост активности АлТ и АсТ у животных с LLC при лечении ЦФ.

Таким образом, амбиол в обеих изучаемых дозах наиболее эффективно снижает явления цитолиза клеток печени, так как выражеиио снижает уровни алаииновой и аспарагиновой трансаминаз. Однако, белоксинтетическую функцию печени более эффективно восстанавливает 3-ОГЩ в дозе 25мг/кг, увеличивая содержание общего белка, альбуминов, также мочевины и креатинииа.

ВЫВОДЫ

1. Амбиол не снижает противоопухолевую активность циклофосфана в отношении первичного опухолевого узла. Сочетанное применение амбиола в дозе 25мг/кг с циклофосфаном оказалось более эффективным в предупреждении развития метастазов по сравнению с терапией одним цитостатиком, а также его комбинацией с 3-оксипиридинацстил-цистеинатом, что проявляется достоверным снижением общего числа метастазов, уменьшением частоты и степени метастатического поражения легких.

2. Амбиол в обеих изученных дозах снижает уровень МДА в сыворотке крови при лечении циклофосфаном и не влияет на интенсивность процессов ПОЛ в первичном опухолевом узле. Амбиол в дозе 25мг/кг и 3-оксипиридинацетилцистеинат в дозе 25мг/кг в сопоставимой степени

повышают аптиоксидантный потенциал ткани печени, приводя к повышению активности каталазы и СОД па фоне проводимой противоопухолевой химиотерапии.

3. При терапии циклофосфаном амбиол обладает более выраженным миелопротскторным эффектом но сравнению с 3-оксиниридин-ацетилцистеинатом, уменьшая степень тяжести лейкопении, тромбоцитопенни и увеличивая в костном мозге количество граиулоцитов, лимфоцитов и мсгакариоцнтов. Однако амбиол уступает З-оксипирпдин-ацстилннстсинату в коррекции клеточного состава эритроидпого ростка кроветворения.

4. Амбиол оказывает гспатопротскторное действие, предупреждая развитие синдрома цитолиза, при терапии циклофосфаном. Амбиол превосходит 3-оксипиридииацсгнлцнстсинат по гепатопротскторным свойствам. 3-оксипиридппацетилцистеинат эффективнее амбиола улучшает белоксинтетическую функцию печени.

5. Амбиол эффективнее З-оксипнридпиацетилцистсипата уменьшает структурные изменения в печени и инфильтрацию перипортальных трактов лимфогистиоцитарпыми элементами. Амбиол п З-оксипиридин-ацетилцнетеинат не оказывают цитопротекторное действие на первичный опухолевый узел при терапии циклофосфаном.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные данные являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего исследования фармакодинамики амбиола и терапевтической эффективности противоопухолевых препаратов в комбинации с антиоксидантами разных классов с целью снижения токсичности и повышения эффективности проводимой терапии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сипров A.B. Влияние З-оксипнридинацетилцистеината и его комбинации с циклофосфаном на рост, метастатическую активность опухоли и динамику процессов перекисного окисления липидов у мышеи с карциномой легкого Лыоие / A.B. Сипров, O.A. Куликов, H.A. Липатова, В.А. Кузнецова // Материалы Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториалыюй патологии». В 2-х томах. Том 2. - Курск: КГМУ, 2006. С. 373-376.

2. Куликов O.A. Влияние циклофосфана в комбинации с 3-оксипиридинаце-тилцистеинатом на клеточный состав костного мозга мышей линии С57В1/6 с карциномой легкого Лыоие / O.A. Куликов, A.B. Сипров // Материалы XI научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского госуниверситета «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте». Вып.4. - Саранск, 2006. С.3-5.

3. Сипров A.B. Активность свободнорадикальных процессов и макро- и микроскопические изменения в легких у мышей с карциномой легкого Льюис на фоне сочетанпой терапии циклофосфаном и 3-оксипиридинаце-тилцистеипатом / A.B. Сипров, В.И. Инчипа, O.A. Куликов, Ю.А. Костина,

B.А. Кузнецова // Естествознание и гуманизм: Межвузовский сборник научных трудов «Современный мир, природа и человек». - Том 4, №3. -Томск, 2007. С.75-76.

4. Куликов O.A. Сравнительная характеристика мислонротекторнон активности некоторых производных З-окснииридина при проведении химиотерапии на модели перевиваемой опухоли мышей / O.A. Куликов, A.B. Сипров, В.А. Кузнецова, A.B. Ельмеев // Вестник РУДН. - 2008. -Серия «Медицина». - №6. - С. 584-588.

5. Куликов O.A. Фармакологическая коррекция гематотоксичности алкилирующего цитостатика у животных с неоплазией / O.A. Куликов // Применение цитопротекторов метаболического действия в лечении соматических заболеваний. Сборник научных работ. - Саранск: изд-во Мордов. Ун-та, 2008. С. 37-42.

6. Куликов O.A. Сравнительная оценка влияния 3-оксипиридинацетилцистеината и амбиола па некоторые показатели псрекисного окисления липидов у мышей с карциномой легкого Лыоис на фоне терапии циклофосфаном / O.A. Куликов, A.B. Сипров // Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте. Материалы 1 региональной научно-практической конференции «Научный потенциал молодёжи - будущему Мордовии». - Выпуск 10. - Саранск 2009.

C. 71-75.

7. Куликов O.A. Сравнительная оценка влияния 3-оксипиридииацстилцистеината и амбиола на миелотоксичность циклофосфана у мышеи с карциномой легкого Лыоис / O.A. Куликов, A.B. Сипров, В.А. Кузнецова // Вестник РУДН. - 2009. - Серия «Медицина». - №4. - С. 417 - 420.

8. Куликов O.A. Оценка влияния З-оксипиридинацстилцистсината и амбиола на состояние процессов псрекисного окисления липидов и морфофуикциоиальные изменения печени у мышей с карциномой лёгкого Лыоис на фоне терапии циклофосфаном / O.A. Куликов // Морфологические ведомости, - 2010. - №1. - С. 49-53.

9. Куликов O.A. Терапевтическая эффективность комбинации циклофосфана и антиоксиданта амбиола в эксперименте / O.A. Куликов, A.B. Сипров, В.И. Инчипа, В.А. Кузнецова, Н.Д. Волкова//XVII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» : тез. докл. - М., 2010. - С. 657.

Подписано а печать 06.04.11. Объем 1,0 п. л. Тираж 100 экз. Заказ .V» 472. Типография Издательства Мордовского ушшсрситста 430005, г. Саранск, ул. Советская, 24

Актуальность темы

В современной терапии онкологических больных ведущее место занимает лекарственная терапия. Цитостатические средства широко применяются при различных злокачественных новообразованиях, однако наряду с высокой эффективностью они обладают значительной токсичностью (Ратькин A.B. с соавт., 2005), что при современной дозоинтенсивной и высокодозной химиотерапии, обеспечивающей значительный прогресс в лечении многих онкологических заболеваний, является лимитирующим фактором проведения эффективного лечения (Дыгай A.M., 2006). В настоящее время проводятся многочисленные исследования по разным направлениям повышения эффективности лекарственного лечения злокачественных новообразований, снижения ее агрессивности по отношению к здоровым клеткам и тканям. Одним из таких направлений является изучение эффективности включения антиоксидантов в схему антибластомной терапии в качестве вспомогательных средств, учитывая патогенетическую значимость активации перекисного окисления липидов в развитии многих осложнений противоопухолевой терапии и самой онкопатологии (Mostafa M.G., Mima Т., Ohnishi S.T., 2000; Лушникова Е.М., Толстикова Т.Г., Непомнящих Л.М., 2007).

В ранее проведенных исследованиях (Сипров A.B., 2009) доказана эффективность и целесообразность включения антиоксидантов производных 3-оксипиридина - в схему противоопухолевой химиотерапии с целью снижения основных проявлений побочных эффектов и повышения антиметастатической эффективности цитостатической терапии алкили-рующими агентами.

Однако и производные 3-оксипиридина не позволяют в полной мере корригировать побочные эффекты цитостатиков и усилить специфическую эффективность противоопухолевой химиотерапии. В связи с этим, по-прежнему актуальным является поиск наиболее эффективных средств снижения токсичности и повышения терапевтической эффективности противоопухолевой терапии в ряду антиоксидантов иной химической структуры (Грек О.Р. с соавт., 2005). Это продиктовано усилением свободнорадикаль-ных процессов и развитием окислительного стресса с повреждением ДНК и клеточных мембран нормальных клеток, что лежит в основе большинства побочных эффектов цитостатиков, в том числе наиболее частых, таких как миелодепрессия и гепатотоксичность (Непомнящих Л.М. с соавт., 2010). Анемия, возникающая в процессе опухолевого роста и усиливаемая цито-статиками, сопряжена с развитием тканевой гипоксии, которая является одной из самостоятельных причин развития окислительного стресса с избыточным образованием свободнорадикальных форм кислорода (Карпова Г.В. с соавт., 2004). На фоне развивающейся гепатотоксичности возрастает токсическое влияние антибластомных агентов на весь организм в целом (Непомнящих Л.М. с соавт., 2010). Эти побочные эффекты, несомненно, ограничивают терапевтическую эффективность противоопухолевой химиотерапии.

Среди известных синтетических антиоксидантов значительный интерес вызывают производные 5-гидроксибензимидазола, ингибирующие реакции свободнорадикального окисления, изменяющие структурно-функциональное состояние мембран, рецепторов, мембраносвязанных ферментов и др. (Бо-рышева с соавт., 2006). Одним из наиболее перспективных соединений этого ряда является амбиол, фармакодинамика которого мало изучена, что и определило его выбор для проведения наших исследований.

Цель работы: провести сравнительное исследование влияния ан-тиоксиданта амбиола и 3-оксипиридинацетилцистеината на противоопухолевую и антиметастатическую эффективность циклофосфана с оценкой их миело- и гепатопротекторной активности.

Задачи исследования. Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1) Изучить влияние амбиола на противоопухолевую и антиметастатическую эффективность циклофосфана (ЦФ) у мышей с карциномой легкого Льюис.

2) Исследовать влияние амбиола на процессы перекисного окисления липидов в сыворотке крови, гомогенатах первичного опухолевого узла, легких и печени экспериментальных мышей при терапии циклофосфаном.

3) Оценить влияние амбиола на клеточный состав периферической крови и костного мозга мышей с карциномой лёгкого Льюис при терапии циклофосфаном.

4) Исследовать морфофункциональное состояние печени и морфологические изменения первичного опухолевого узла под влиянием амбиола у мышей с карциномой лёгкого Льюис при терапии циклофосфаном.

5) Сравнить терапевтическую эффективность комбинаций циклофосфана с амбиолом и препаратом сравнения 3-оксипиридинацетилцистеинатом (3-ОПЦ), а также миело- и гепатопротекторные свойства этих антиоксидантов у мышей с карциномой лёгкого Льюис при терапии циклофосфаном.

Научная новизна работы В работе показано, что амбиол не влияет на противоопухолевый эффект циклофосфана в отношении первичного опухолевого узла. Сочетанное применение амбиола с циклофосфаном оказалось более эффективным в предупреждении развития метастазов, по сравнению с терапией одним цитостати-ком. Сочетание амбиола и циклофосфана приводило к снижению активности ПОЛ в сыворотке крови и усилению антиоксидантной активности в ткани печени. Амбиол снижал степень тяжести лейкопении, увеличивая общее число лейкоцитов крови, а также количество гранулоцитов и лимфоцитов костного мозга (на 14-е сутки эксперимента), уровень гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов (на 22-е сутки эксперимента). Амбиол оказывал гепатопротекторное действие.

Амбиол в дозе 25мг/кг эффективнее 3-ОПЦ в обеих изучаемых дозах усиливал антиметастатическое действие циклофосфана. Амбиол и 3-ОПЦ в сопоставимой степени увеличивали антиоксидантный потенциал печени. На фоне химиотерапии циклофосфаном амбиол эффективнее 3-ОПЦ восстанавливал общее число лейкоцитов крови и лимфоцитов костного мозга. Амбиол эффективнее 3-ОПЦ оказывал миелопротекторное действие в отношении лимфоцитов и мегакариоцитов костного мозга, однако не проявлял протекторных свойств в отношении эритроидного ростка. Амбиол превосходит 3-ОПЦ по гепатопротекторным свойствам при химиотерапии циклофосфаном.

Научно-практическая ценность и внедрение результатов исследования. Полученные данные свидетельствуют о перспективности дальнейшего исследования эффективности применения антиоксидантов разных классов при комбинированном и комплексном лечении злокачественных новообразований с целью повышения эффективности и снижения токсичности противоопухолевой терапии. Результаты исследования углубляют представления о фармакодинамике производных 5-гидроксибензимидазола и внедрены в научно-исследовательскую работу кафедры фармакологии с курсом клинической фармакологии, а также используются в системе послевузовского профессионального образования при подготовке аспирантов и клинических ординаторов по фармакологии и онкологии.

Положения, выносимые на защиту.

1. Амбиол не снижает противоопухолевую активность циклофосфана в отношении первичного опухолевого узла. Сочетанное применение амбиола в дозе 25мг/кг с циклофосфаном вызывает более выраженное антиметастатическое действие по сравнению с терапией одним цитостатиком.

2. Амбиол проявляет миело- и гепатопротекторное действие и снижает интенсивность процессов ПОЛ у животных с карциномой лёгкого Льюис при химиотерапии циклофосфаном.

3. Амбиол в дозе 25мг/кг эффективнее 3-оксипиридинацетилцистеината в обеих изучаемых дозах усиливает антиметастатическое действие циклофосфана. Амбиол эффективнее 3-оксипиридинацетилцистеината восстанавливает общее число лейкоцитов крови, содержание лимфоцитов костного мозга и снижает явления цитолиза гепатоцитов.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» (Курск, 2006), XI научной конференции молодых учёных, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского государственного университета (Саранск, 2006), I региональной научно-практической конференции «Научный потенциал молодёжи - будущему Мордовии»; «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2009), XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 3 научные работы в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 151 источник (122 отечественных и 29 зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 14 рисунками и 12 таблицами.

выводы

1. Амбиол не снижает противоопухолевую эффективность циклофосфана в отношении первичного опухолевого узла. Сочетанное применение амбиола в дозе 25мг/кг с циклофосфаном оказалось более эффективным в предупреждении развития метастазов, по сравнению с терапией одним цитостатиком, а также его комбинацией с 3-оксипиридинацетилцистеинатом, что проявляется достоверным снижением общего числа метастазов, уменьшением частоты и степени метастатического поражения легких.

2. Амбиол в обеих изучаемых дозах снижает уровень МДА в сыворотке крови при лечении циклофосфаном и не влияет на интенсивность свободноради-кальных процессов в первичном опухолевом узле. Амбиол 25мг/кг и 3-оксипиридинацетилцистеинат 25 в сопоставимой степени повышают антиок-сидантный статус ткани печени, приводя к повышению активности каталазы и СОД на фоне проводимой противоопухолевой химиотерапии.

3. При терапии циклофосфаном амбиол обладает более выраженным миелопротекторным эффектом по сравнению с 3-оксипиридинацетилцистеинатом, уменьшая степень тяжести лейкопении, тромбоцитопении и увеличивая в костном мозге количество гранулоцитов, лимфоцитов и мегакариоцитов. Однако амбиол уступает 3-оксипиридин-ацетилцистеинату в коррекции клеточного состава эритроидного ростка кроветворения.

4. Амбиол оказывает гепатопротекторное действие, предупреждая развитие синдрома цитолиза. Амбиол превосходит 3-оксипиридинацетилцистеинат по гепатопротекторным свойствам. 3-оксипиридинацетилцистеинат эффективнее амбиола улучшает белоксинтетическую функцию печени.

5. Амбиол эффективнее 3-оксипиридинацетилцистеината уменьшает структурные изменения в печени и инфильтрацию перипортальных трактов лим-фогистиоцитарными элементами. Амбиол и 3-оксипиридинацетилцистеинат не оказывают цитопротекторное действие на первичный опухолевый узел при терапии циклофосфаном.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные данные являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего исследования фармакодинамики амбиола и терапевтической эффективности противоопухолевых препаратов в комбинации с антиокси-дантами разных классов с целью снижения токсичности и повышения эффективности проводимой терапии.