Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние актопротекторных препаратов на постнатальное развитие потомства

На правах рукописи

Денисова Татьяна Дмитриевна

Влияние актопротекторных препаратов на постнатальное развитие потомства

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Волгоград 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Волгоградского государственного медицинского университета Министерства Здравоохранения Российской Федерации"

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

Член - корреспондент РАМН, Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Спасов Александр Алексеевич

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ:

Доктор биологических наук, Бугаева Любовь Ивановна ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

1. Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Жердсв Владимир Павлович

2. Доктор медицинских наук, профессор Тюренков Иван Николаевич ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный медицинский стоматологический университет Министерства Здравоохранения Российской Федерации"

Защита состоится «_»_2004г.

в_часов на заседании Диссертационного совета Д 208. 008.02

при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Волгоградском государственном медицинском университете Минестерст-ва Здравоохранения Российской Федерации" (400066, Волгоград, пл.Павших борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке университета

Автореферат разослан «_»_2004г.

Ученый секретарь Диссертационного совета д.м.н, профессор

А.Р.Бабаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

До настоящего времени проблема употребления лекарственных препаратов женщинами детородного возраста остается малоизученной и актуальной. Показано (Савельева Г.М., 2003; Фролова О.Г. и соавт., 2003; Арушаанян Э.Б., 2003; Кеппа К., et al 2004), что назначение женщинам в периоды беременности и молочного вскармливания многих психотропных препаратов, таких как производных бензодиазепинов, барбитуровой кислоты, препаратов лития, производных ксантина сопряжено с их проникновением в организм ребенка и влиянием на процессы его антенатального и постнатального развития (Петров В.И. и соавт., 1992; Дубовицки М. и соавт., 1996; Лаакман Г. и соавт., 1998; Birnbaum C.S., 1999; Arnon J., 2000; Burt V.K., 2001).

В последние десятилетия в клиническую практику была внедрена новая группа психотропных средств с актопротекторным типом действия. В данную группу вошли препараты «бемитил» (производное бензимидазола) и «бромантан» (производное адамантана). Указанные препараты обладают специфическим мембранопротекторным действием (Морозов И.С. и соавт., 1999; 2001), используются в лечении и коррекции психического и физического состояния человека, находящегося в стрессорных условиях, хорошо переносятся при длительном приеме. Известно, что бемитил и броман-тан малотоксичны (Бугаева Л.И. и соавт., 2000), липоидотропны, способны накапливаться в ЦНС и гонадах (Сергеева С.А. и соавт., 1995;2000), стимулируют половую активность у крыс, влияют на процессы зачатия (Иежица И.Н., 1998; Спасов А.А. и соавт., 2000; Кузубова Е.А., 2001).

Учитывая вышеприведенные сведения, сочли целесообразным исследовать особенности эмбрионального и постнатального развития крысят, матерям которых бемитил и бромантан вводили в периоды беременности и молочного вскармливания своего потомства.

Настоящая работа выполнялась в рамках научно-исследовательской темы «Изучение общетоксических и эмбриотоксических свойств новых веществ с целью определения безопасности их применения», которая входит в основной план Волгоградского государственного медицинского университета. Тема работы утверждена на Заседании Совета Волгоградской медицинской академии 14 января 1998 года (протокол №7).

Цель исследования

Целью настоящей работы явилось исследование ранних и отдаленных эффектов бемитила и бромантана, при введении беременным и лактирующим самкам на эмбриональное и постнаталыюе развитие потомства.

Задачи исследования

1.Изучить влияние бемитила и бромантана при антенатальном введении беременным самкам на эмбриональное и постнатальное развитие потомства.

2.Исследовать особенности действия бемитила и бромантана, при введении лактирующим крысам метерям на физическое и половое развитие потомства.

3.Установить возможность проникновения препаратов с молоком матери в организм молочных крысят.

4.Исследовать возможное отдаленное действие бемитила и бромантана на физическое и половое развитие крысят.

5.Определить особенности дозозависимого действия препаратов на постна-тальное развитие крысят, в ранние и поздние

Научная новизна

Впервые исследованы эффекты влияния актопротекторных препаратов беми-тила и бромантана на эмбриональное и постнатальное развитие крысят. На примере бемитила изучена возможность проникновения препаратов с молоком матери в организм крысят. Определена степень дозозависимого влияния актопротекторных препаратов на состояние кормящей самки и ее потомства. Установлено отсутствие повреждающего действия бемитила и бромантана на крыс матерей в период беременности и молочного вскармливания потомства. Выявлено стимулирующее влияние препаратов на формирование сенсорно-двигательных рефлексов, мышечной силы и полового развития крысят.

Научно-практическая ценность

Изучены ранние и отдаленные эффекты влияния актопротекторных препаратов бемитила и бромантана на эмбриональное развитие и постнатальное формирование крысят, матерям которых препараты вводили в период беременности и молочного вскармливания своего потомства. Полученные данные можно использовать в планировании клинических исследований и прогнозе возможных эффектов препаратов.

Реализация результатов исследования

Полученные данные при изучении действия препаратов бемитила и бромантана на лактацию, выделение их с молоком матери, и влияние на постнатальное развитие крысят, вошли в пакет документов представленных в ФК МЗ РФ и будут использованы в коррекции показаний и противопоказаний при клиническом использовании. Данные, полученные по действию актопротекторных препаратов на постнатальное развитие потомства, используются в научно-исследовательской работе НИИ фармакологии ВолГМУ и НИИ фармакологии РАМН, а также в лекционном материале кафедры фармакологии Волгоградского медицинского университета, Кубанской медицинской академии и Воронежской медицинской академии.

Основные положения, выносимые на защиту

1 .Препарат бемитил и бромантан, при введении крысам самкам в период беременности и молочного вскармливания потомства, оказывают раннее и отдаленное стимулирующее влияние на физическое развитие крысят.

2.Препарат бемитил с грудным молоком попадает в организм вскармливаемых крысят.

3.Препараты бемитил и бромантан, при антенатальном введении беременным крысам самкам в период органогенеза снижают постимплантационную гибель плодов и оказывают благоприятное влияние на эмбриогенез.

4.Препараты бемитил и бромантан при введении лактирующим матерям самкам оказывают стимулирующее влияние на физическое и половое созревание крысят в инфантильный, ювенильный и пубертатный периоды развития.

Апробация работы

Основные результаты диссертационной работы представлены на научных сессиях молодых ученых Волгоградского медицинского университета (Волгоград, 19972004), Научной конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», посвященной 240-летию ММА им. И.М.Сеченова (Москва, 1998), Всероссийской научной конференции «От Materia medica к современным медицинским технологиям» (Санкт-Петербург, 1998), Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Санкт-Петербург, 1999), Научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств «Лекарства-человеку» (Харьков, 1999), «55-й и 56-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров» (Пятигорск, 2000; 2001), Научно-

практической конференции, посвященной 35-летию фармацевтического факультета «Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики» (Курск, 2001), Научно-практической конференции, посвященной 150-летию со дня рождения Н.Е.Веденского (Волгоград, 2002), И-го съезда Российского Научного Общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии» (Москва, 2003).

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов, изложения экспериментальной части (главы 3-5), обсуждения, выводов и литературного указателя. Диссертация напечатана на 216 страницах машинописного текста и проиллюстрирована 76 таблицами и 2 рисунками. Список литературы содержит 362 источника, из которых 277 отечественных и 85 зарубежных.

Материалы и методы исследования

Эксперименты выполнены на 45 половозрелых лабораторных беременных крысах-самках, на 121 лактирующих крысах-матерей с пометами крысят и на 1328 крысятах. В период проведения исследований, содержание животных и их эвтаназию осуществляли в соответствии с правилами принятыми Международной конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (Страсбург, 1986). В исследованиях использовали препараты бемитил, изготовленный химфармобъединением "Дарница" (Украина) и бромантан, синтезированный в НИИ фармакологии РАМН.*

Проводимые исследования подразделили на два этапа. На первом этапе изучали влияние бемитила и бромантана при введении беременным самкам на эмбриональное и постнатальное развитие крысят. На втором этапе исследовали особенности постнатального развития потомства крысят, матерям которых препараты бемитил и бромантан вводили в период их молочного вскармливания.

На первом этапе - бемитил и бромантан вводили внутрижелудочно металлическим зондом беременным самкам в период органогенеза (6-16 дни беременности) в терапевтических дозах. Бемитил в дозе 20 мг/кг (Бобков Ю.Г., Виноградов В.М., 1982), бромантаи в дозе 30 мг/кг (Морозов И.С. и др., 1995). Во время экспериментов следили за состоянием, массой тела и поведением крыс. На двадцатый день беременности половину беременных самок забивали методом декапитации под эфирным наркозом, вторую половину беременных самок оставляли для получения потомства. На вскрытии у первой половины беременных самок выделяли рога матки с эмбрионами и яичники. В рогах матки подсчитывали количество живых, мертвых и резорбирован-ных плодов, в яичниках - количество желтых тел беременности. На основании полученных данных, вычисляли показатель эмбриональной (пред - и постимплантацион-ной) гибели. Выделенные плоды взвешивали (гр.), измеряли краниохаудальные размеры (см.) и определяли пол. После специфической фиксации и окраски у эмбрионов исследовали состояние внутренних органов (метод Вильсона) и точек оссификаций (метод Доусона). Исследования проводили в соответствии с методическими рекомендациями доклинического изучения безопасности фармакологических средств, утвержденным Фармакологическим комитетом МЗ РФ (2000 г).

Наблюдения за потомством крысят, полученных от второй половины наблюдаемых, беременных самок проводили от рождения до трехмесячного возраста. В день родов определяли величину и состояние помета.

* - Выражаем искреннюю признательность зав. отделом НИИ фармакологии РАМН проф. Б.М. Пятину за синтез и предоставление веществ для исследования.

Последующая программа наблюдений соответствовала рекомендациям Фармакологического комитета МЗ РФ от 2000г.

Для проведения второго этапа исследований, бемитил в дозах 20 и 100 мг/кг и бромантан в дозах 30 и 150 мг/кг вводили внутрижелудочно лактирующим крысам самкам с 3 по 16 дни молочного вскармливания своего потомства. Наблюдения за состоянием потомства проводили в период молочного вскармливания, а также после перехода их на дефинитивное питание. В зависимости от возраста крысят, периоды наблюдения за ними подразделили на инфантильный (от рождения до трех недельного возраста), ювенильный (ранний с 20 по 28 день жизни и поздний с 28 дня до двухмесячного возраста) и пубертатный (от двухмесячного до трехмесячного возраста).

В период инфантильного развития, у молочных крысят измеряли массу тела (гр.), отмечали (в днях) время отлипания ушной раковины, появление первичного волосяного покрова, прорезывание резцов, открытие глаз, а также - координационную способность, поведение их на плоскости (поднятия головы, опоры на передние лапки, ползания и опору на задние конечности, подъем всего тела). Скорость созревания сенсорно-двигательных рефлексов (сек.) крысят оценивали в тестах "отрицательный геотаксис", "избегание обрыва", "переворачивание на плоскости и в воздухе", измеряли мышечную силу. У 10-ти дневных крысят исследовали двигательную активность в тесте "открытое поле".

В период ювенилъного и пубертатного развития у крысят, матерям которых вводили бемитил и бромантан в период молочного вскармливания, измеряли прирост массы тела, исследовали поведенческую активность ( тест "открытое поле"). О способности ювенильных крысят к обучению и запоминанию, судили по тесту "УРПИ" (Крауклис Л.Л., 1964; в модификации Буреш Ян., Бурешова О., 1991). О половом развитии крысят судили по срокам (в днях) опущения яичек в мошонку у самцов и открытия вагины у самок, половому поведению (Бабичев В.Н., 1981; Смольникова Н.М., 1982; Пошивалов В.П., 1987) и астральному циклу (Боровая Т.Г., Волкова О.В., 1994). О влиянии бемитила и бромантана на органы и ткани, судили по весовым коэффициентам и обзорной микроскопии внутренних органов крысят.

В отдельной серии экспериментов, изучали возможность проникновения беми-тила через лактационный барьер крыс.* В этих экспериментах, после внутрижелу-дочного введения лактирующим матерям препарата в дозе 20 мг/кг, определяли его содержание в крови и молочных железах этих самок, а также в содержимом желудка у вскармливаемого ими потомства. Тканевую биодоступность бемитила, оценивали по отношению площадей фармакокинетических кривых (AUC) в крови и молочных железах лактирующих крыс, а также по коэффициенту его распределения, рассчитанному как соотношения максимальных концентраций препарата в крови и ткани.

Фармакокинетические параметры рассчитывались модельно независимым методом статистических моментов в программе Ехе1-97.

Статистическую обработку результатов проводили в программе Microsoft Excel 1997 с использованием t - критерия Стьюдента (Венчиков Л.И., Венчиков В.А., 1974).

*- Выражаем искреннюю признательность завлабораторией фармакологической кинетики ВолГМУ, к.б.н. Л.С. Смирновой за помощь в проведении исследований

Результаты исследований и их обсуждение

На основании проведеного первого этапа исследований установлено, что бе-митил и бромантан при внутрижелудочном введении беременным крысам в период органогенеза не оказывают существенного влияния на общее состояние этих самок, но влияют на их прирост массы тела. Так, у беременных самок, получавших бемитил в дозе 20 мг/кг (1 группа) и бромантан в дозе 30 мг/кг (2 группа), наблюдалось ускорение прироста массы тела относительно контрольной (3 группы) в среднем на 36% (Р<0,05) и 29% (Р>0,05) соответственно.

После эвтаназии у беременных самок в 1-ой группе выявлено недостоверное повышение (в среднем на 18%) числа желтых тел беременности. При этом число мест имплантаций и количество живых плодов у этих самок соответствовало контрольным величинам. В связи с этим, у данной группы крыс предимплантационная гибель плодов оказалась выше контрольных величин в среднем на (34%), а постимплантацион-ная гибель наоборот в 2 раза (Р<0,05) снижена. При осмотре, выделенных у самок 1-ой группы 20-ти дневных плодов, установлено достоверное увеличение массы тела и краниокаудальных размеров относительно контроля в среднем 11 и 9 % соответственно. Кроме того, у этих плодов достоверно снизились (в 2 раза) подкожные и паренхиматозные геморрагии, возросло число точек оссификаций в грудном отделе и конечностях. При микроскопическом обследовании плодов 1-ой группы крысят аномалий развития и уродств не обнаружено (таблица 1.).

Таким образом, из результатов исследований можно предположить, что беми-тил в дозе 20 мг/кг при внутрижелудочном введении беременным самкам в период органогенеза вмешивается в процессы эмбриогенеза. При этом препарат не оказывает негативного влияния на состояние беременных самок, но положительно влияет на качество внутриутробного развития эмбрионов, а именно способствует снижению их постимплантационной гибели, стимулирует прирост массы тела и процессы оссифи-каций у плодов, уменьшает число кровоизлияний во внутренние органы.

Таблица 1.

Влияние препарата бемитил (20 мг/кг внутрижелудочно, с 6 по 16 дни беременности) на эмбриогенез____

Исследуемые пара^^ЁШ: контроль Бемитил 20 мг/кг

Число желтых тел 12,2±0,46 14,4±0,66

Число мест имплантаций 9,8+0,37 9,5±0,37

Число живых эмбрионов в помете (ед.) 9,2+0,34 9,2+0,39

Количество резорбций (%) 0,58±0,03 0,42+0,02*

Предимплантационная гибель (%) 19,8 34,0

Постимплантационная гибель (%) 5,9 3,0*

Масса плодов (г.) 2,7+0,06 3,0+0,07*

Краниокаудальный размер плодов (см.) 3,3 ±0,04 3,б±0,04*

Внешние аномалии развития (%) 0 0

Подкожные геморрагии (%) 7,2 3,6*

Примечание: * - результаты достоверны относительно контроля при Р<0,05;

В аналогичных исследованиях с бромантаном, у беременных самок во 2-ой группе не обнаружено значимых различий с контролем по числу мест имплантаций и живых плодов. При этом относительно контрольных величин, число желгых тел беременности у самок 2-ой группы оказалось повышенным в среднем на 13% (Р>0,05). Однако у данных крыс, также как и в экспериментах с бемитилом, недостоверно увеличивалась предимплантационная гибель (30%), но в 2 раза (Р<0,05) снижалась пост-

имплантационная табель плодов. При этом 20-ти дневные плоды относительно контрольных значений оказались больше и по массе тела, и по краниокаудальным размерам в среднем на 22 и 6% (Р<0,05) соответственно. Кроме того, у плодов крысят от самок 2-ой группы в 2 раза снизилось число подкожных и паренхиматозных геморрагии и увеличилось количество точек оссификаций в грудном отделе и конечностях. При микроскопическом обследовании этих плодов аномалий развития и уродств не обнаружено (таблица 2.).

Таблица 2.

Влияние препарата бромантан (30 мг/кг внутрижелудочно, с 6 по 16 дни бере-

менности) на эмбриогенез (М±т).

Исследуемые параметры Контроль Бромантан 30 мг/кг

Число желтых тел 12,2+0,44 13,8±0,51

Число мест имплантаций 9,8±0,37 9,6±0,59

Число живых эмбрионов в помете (ед.) 9,2±0,34 9,3±0,49

Количество резорбций (%) 0,58±0,03 0,68±0,02

Предимплантационная гибель (%) 19,8 30,0

Постимплантационная гибель (%) 5,9 3,0*

Масса плодов (г.) 2,7±0,06 3,3±0,09*

Краниокаудальный размер плодов (см.) 3,3±0,04 3,5±0,05*

Внешние аномалии развития (%) 0 0

Подкожные геморрагии (%) 7,2 2,9*

Примечание: * - результаты достоверны относительно контроля при Р<0,05;

Таким образом, из представленных данных можно заключить, что бромантан в дозе 30 мг/кг, при внутрижелудочном введении беременным самкам в период органогенеза не оказывает существенного влияния на их общее состояние, но вмешивается в процессы эмбрионального развития плодов. Под действием бромантана у беременных самок повышается предимплантационная и снижается постимплантационная эмбриональная гибель. При этом относительно контроля не изменяется общая численность живых плодов в помете, у которых эмбриональное развитие ускоряется.

В следующей серии первого этапа исследований проанализировали отдаленное влияние бемитила в дозе 20 мг/кг (1 группа самок) и бромантана - 30 мг/кг (2 группа самок), вводимых внутрижелудочно беременным самкам в период органогенеза, на постнатальное развитие потомств крысят. В экспериментах с бемитилом было установлено, что у потомства крысят, полученных от 1-ой группы беременных крыс самок, прирост массы тела опережал контрольные величины в среднем на 17% (Р>0,05) во все периоды трехмесячных наблюдений. Вместе с тем, у данных крысят сроки обрастания шерстным покровом, прорезывания резцов, поднятия головы, ползания и открытия глаз были сопоставимы таковым показателям контрольных животных (3 группа). При этом у крысят 1-ой группы опушение яичек в мошонку у самцов и открытие вагины у самок относительно контрольных значений достоверно отставали в среднем на один день. Выявлено также, что у потомства крысят 1-ой группы повышалась мышечная сила (в среднем на 11%, Р>0,05) и сокращались интервалы времени по выполнению сенсорно-двигательных рефлексов. Так, у этих крысят выполнение теста "отрицательный геотаксис" и "переворачивание в воздухе" достоверно опережали контрольные значения в среднем на 16,7% и 11% соответственно. При исследовании у этих крысят поведенческой активности в тесте "открытое поле" отмечено угнетение горизонтальных перемещений (23%, Р<0,05), но интенсифицирование исследовательской активности (37%, при Р<0,05). В тесте "УРПИ", у наблюдаемых крысят 1-ой

группы, отчетливо улучшались элементы обучения и запоминания памятного следа. При этом в период обучения, прослеживалась тенденция повышения порогов чувствительности (25%) и вокализации (27%) к электроболевому раздражению, а также увеличите периода времени захода в темную камеру (59%, при Р<0,05). При воспроизведении выработанного навыка у обучаемых крысят 1 группы, латентный период захода в темную камеру удлинялся в среднем на 51% (Р<0,05), тогда как время нахождения и число заходов в нее сокращалось в среднем на 18% и 25% соответственно.

В серии исследований с бромантаном, у постнатальных крысят 2-ой группы . выявлено достоверное увеличение прибавки массы тела во все периоды трех месячных наблюдений. При этом, у крысят 2-ой группы ускорялось физическое и половое развитие. Так, у крысят достоверно сокращались сроки отлипания ушной раковины, обрастания шерстным покровом, прорезывания резцов, поднятия головы, тела, ползания, открытия глаз, опущения яичек в мошонку у самцов и открытия вагины у самок. Кроме того, у данных крысят повышалась мышечная сила (14%, Р>0,05), ускорялись сенсорно-двигательные рефлексы в тестах "отрицательный геотаксис" (20%, Р<0,05), "избегание обрыва" (9%, Р>0,05), "переворачивание на плоскости и в воздухе" (11%, Р>0,05). В поведенческих реакциях тестируемых в "открытом поле", у крысят 2-ой группы достоверно повышалось количество горизонтальных перемещений (16%) и заглядывания в норки (25%), тогда как эмоциональность у этих крысят снижалась (44%, Р<0,05). В тесте "УРПИ" при обучении, у крысят 2 группы повышались пороги чувствительности и вокализации, а также увеличивался (в 2 раза, Р<0,05) латентный период захода в темную камеру. При воспроизведении выработанного навыка у крысят 2 группы значимых различий с контролем не обнаружено. У этих крысят установлено лишь недостоверное снижение количества заходов в темную камеру и времени нахождения в ней соответственно на 50 и 38%.

Таким образом, из результатов проведенных исследований можно заключить, что препараты бемитил (20 мг/кг) и бромаптан (30 мг/кг), вводимые беременным самкам в период органогенеза (с 6 по 16 день беременности), оказывают раннее и отдаленное влияние на эмбриональное и постнатальное развитие плодов. В профиле ранних антенатальных эффектов у указанных препаратов превалируют положительные влияния на качество эмбрионального развития плодов. При этом у беременных самок снижается постимплантационная эмбриональная гибель, а у развившихся плодов увеличивается масса тела, размеры, ускоряются процессы формирования скелета, снижается количество подкожных и паренхиматозных геморрагий. Из полученных данных можно предположить, что исследуемые препараты могут оказывать стимулирующее влияние на процессы эмбриогенеза у беременных крыс. Такое предположение отчасти согласуется с другими исследованиями, в которых бемитил и бромантан вводили курсом крысам-самкам до спаривания с интактными самцами (А.А. Спасов и соавт., 2002). С другой стороны, учитывая фармакокинетические свойства бемитила и бро-мантана (С.С. Бойко и соавт., 1989; И.С. Морозов и соавт., 2001) не исключается возможность проникновения их через плаценту беременных самок и непосредственного влияния на внутриутробное развитие эмбрионов. Данное предположение также в какой то степени согласуется и с результатами последующих исследований настоящей работы. В них было проанализировано отдаленное влияние бемитила и бромантана на качество физического постнаталыюго созревания потомств крысят, матерям которых указанные препараты вводили в период органогенеза. Было установлено, что у полученных потомств крысят активируется физическое развитие и сенсорно-двигательные рефлексы. Подобные эффекты были обнаружены в экспериментах на потомствах крысят, полученных от крыс матерей, которым бемитил и бромантан вводили курсом до спаривания (Иежина И.Н. и соавт., 1999). Авторы этих исследований предположи-

ли, что выявленные отдаленные эффекты вероятно обусловлены не только фармако-кинетическими особенностями, но и вмешательством бемитила и бромантана в секрецию пролактина, и, соответственно влиянием на качество молока. Учитывая сведения литературы и вышеприведенные результаты наблюдений, сочли целесообразным на следующем этапе работы изучить особенности постнатального развития крысят, матерям которых бемитил и бромантан вводили в период молочного вскармливания своего потомства.

При проведении второго этапа исследований, бемитил в дозах 20 и 100 мг/кг и бромантан - 30 и 150 мг/кг, вводили внутрижелудочно лактирующим крысам матерям с 3 по 16 дни молочного вскармливания потомства. В экспериментах с бемити-лом выявлена дозозависимая тенденция меньшего прироста массы тела у кормящим молоком крыс матерей. Однако обозначенная тенденция у крыс самок выравнялась до уровня контрольных значений после перехода крысят на дефинитивное питание.

По результатам наблюдений за молочными крысятами в инфажильном возрасте (от рождения до 3-х недельного возраста) установлено, что бемитил в дозе 20 и 100 мг/кг (соответственно 1 и 2 группа), вводимый кормящим крысам самкам, влияет на прирост массы тела вскармливаемого ею потомства. При этом на 14-й день жизни прирост массы тела в сравнении с контролем, у крысят в 1-ой группе оказался ниже в среднем на 18% (Р>0,05), а во 2-ой группе наоборот выше в среднем на 20%. Указанные различия в 1-ой и 2-ой группах крысят восстановились до контрольных значений к окончанию периода их молочного вскармливания.

В наблюдениях за физическим развитием у инфантильных крысят 1-ой группы обнаружена тенденция опережения сроков появления первичного волосяного покрова и недостоверное запаздывание сроков прорезывания резцов и открытия глаз. Значимых же различий с контролем по срокам формирования ушной раковины, подъема головы, тела и ползания не обнаружено. У этой же 1-ой группы крысят интенсифицировались процессы выполнения сенсорно-двигательных рефлексов в тесте "отрицательный геотаксис" (30%, Р<0,05), тогда как скорость выполнения рефлекса в тесте "избегание обрыва" замедлялась в среднем на 20% (Р<0,05). В поведенческой активности (тест "открытое поле") у крысят 1-ой группы увеличивался интервал выхода из центра и снижалось число пересеченных квадратов в среднем соответственно на 17% и 42%(Р<0,05).

В наблюдениях за физическим развитием крысят 2-ой группы изменения были более существенными. У этих крысят наблюдалась отчетливая тенденция запаздывания сроков отлипания ушной раковины, появления первичного волосяного покрова, подъема головы и тела, ползания, а также прорезывания резцов и открытия глаз (в среднем на 1,4 и 1 дня, Р<0,05). Вместе с тем у них интенсифицировались и процессы формирования сенсорно-двигательных рефлексов. Так, скорость выполнения сенсорно-двигательных рефлексов опережалась в тестах "отрицательный геотаксис" (17%), "избегание обрыва" (9%). По другим координаторным параметрам в тестах "переворачивание на плоскости" и в "воздухе" различий с контролем не обнаружено. При этом в тесте "открытое поле", у крысят 2-ой группы выявлено также удлинение времени выхода из центра в среднем на 30% (Р<0,05), тогда как количество пересеченных ими квадратов соответствовало контрольным величинам.

В дальнейших исследованиях, также было установлено влияние бемитила на мышечную силу инфантильных крысят. При этом у крысят 1-ой и 2-ой группы недостоверно (в среднем на 11%) увеличивалось время удерживания за металическую сетку.

мкг/мл

0 1 2 3 4 5 6 7

час

Рис.1. Содержание препарата бемитил в крови и молочных железах лактирую-щих крыс

Кровь матери молочные железы содержимое желудка

крысят

Рис.2 Содержание препарата бемитил в крови и молочных железах крысы-матери и содержимом желудка крысенка

Таким образом из приведенных результатов исследований видно, что бемитил вводимый лактирующим крысам самкам оказывает влияние на физическое формирование молочных крысят. Из этого можно предположить, что препарат вероятно проникает с молоком матери организм крысят.

Для подтверждения чпотезы проникновения бемитила с молоком матери в организм вскармливаемых крысят, были проведены серии исследований, в которых с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), определяли наличие бемитила в крон и молоке матери и содержимом желудка крысенка. В этой серии установлено, что п еле введения бемитила лактирующей самки, он через 30 минут обнаруживается в ее крови в концентрации 2 мкг/мл и через 60 минут в молочных железах в концентрации 1 мкг/мл. В последующие два - три часа концентрация бемитила в крови и молочных железах достигает максимальных значений (5,5 мкг/мл и 4 мкг/мл соответственно, В этот же промежуток времени, препарат обнаруживался и в содержимом желудка вскармливаемых молочных крысят. При этом содержание препарата в желудке крысенка составило 63% от его концентрации в крови крысы матери (Рис. 1 и Рис.2).

Таким образом, можно заключить, что выявленные ранее особенности физического развития инфантильных крысят, матерям которых в период лактации вводили бемитил, обусловлены проникновением препарата через грудное молоко в организм крысят. Учитывая работы С.С.Бойко и Ю.Г.Бобкова (1985; 1995) о высокой способности бемитила к распределению во внутренние органы и ткани, сочли целесообразным провести морфологические исследования.

При вскрытии и макроскопическом обзоре внутренних органов инфантильных крысят относительно контрольной группы, выявлены достоверные изменения в коэффициентах масс иммунокомпетентных и половых органах. Установлено, что у крысят в 1 и 2 группах достоверно увеличивались коэффициенты масс селезенки, надпочечников и гонад, и снижалась масса тимуса (таблица 3).

В аналогичной серии исследований с препаратом бромантан, который вводили лактирующим самкам в дозах 30 и 150 мг/кг (соответственно 1 и 2 группа), выявлено также, как и в серии с бемитилом, снижение темпов прироста массы тела у крыс самок в период вскармливания своего потомства.

При этом в наблюдениях за молочными крысятами в 1-ой и 2-ой группах обнаружены неоднозначные изменения в темпах прироста их массы тела. Прирост массы тела на 14 день жизни у крысят в 1-ой группе несколько (16%, Р<0,05) опережал контрольные величины, тогда как у крысят во 2-ой группе наоборот отставал (12%). Указанные изменения нивелировались к окончанию периода молочного вскармливания потомств.

При исследовании влияния бромантана на физическое развитие у инфантильных крысят 1-ой группы обнаружена недостоверная тенденция опережения сроков отлипания ушной раковины, прорезывания резцов, ползания, подъема головы и тела и запаздывания сроков появления первичного волосяного покрова. При этом, у этих же крысят активизировались процессы формирования сенсорно-двигательных рефлексов. Так, скорость выполнения сенсорно-двигательных рефлексов опережалась в тесте "отрицательный геотаксис" в среднем на 34% (Р<0,05). Скорость выполнения рефлекса в тесте "избегание обрыва" замедлялась в среднем на 22% (Р<0,05). По другим координаторным параметрам, исследуемых в тестах "переворачивание на плоскости" и в "воздухе", различий с контролем не обнаружено. При этом поведенческая активность в тесте "открытое поле" у этих крысят была недостоверно снижена. Данные изменения проявлялись в виде тенденции удлинения времени выхода из центра и снижения количества пересеченных квадратов в среднем соответственно на 5% и 30%.

Таблица 3.

Влияние препаратов бемитил и бромантан на физическое развитие инфантильных крысят_

1 Параметры Бемитил, мг/кг Бромантан, мг/кг

20 100 30 150

I Масса тела матерей крыс в период вскармливания потомства 0,5+ 0,5- 0,5+ 0,5-

| Масса тела инфантильных крысят - + 0,5+ 0,5-

1 Обрастание шерстным покровом 0,5+ 0,5- 0,5- +*

! Прорезывание резцов 0,5- 0,5+

| Открытие глаз 0,5- 0,5+ -

1 Мышечная сила + + + +

1 Отрицательный геотаксис 3+* 2+ 3+* 3+*

) Избегание обрыва 2-* + 2-* 0

1 Выход в центральную зону - 2-* 0,5- 2+

I Горизонтальная активность _* 0 2- 2+

1 Тимус 3-* 2-* 0,5- 0,5+

| Селезенка 4+* 4+* 4+* 2+

Надпочечники 3+* 3+* 3+* 2+»

(Гонады 3+* 3+* 2+* 2+

Примечание: * - результаты достоверны относительно контроля при Р<0,05; Значения "+"или "-"представленные в таблице, приравниваются к изменениям равным 10%;

Значения "0,5+" или "0,5-" приравниваются к недостоверной тенденции изменений; Значение "0" обозначает отсутствие эффекта.

В экспериментах на крысятах 2-ой группы, установлено достоверное опережение сроков появления первичного волосяного покрова. Кроме того, у данных крысят прослеживалась тенденция запаздывания ползания, подъема головы и тела, а также прорезывания резцов и открытия глаз (в среднем соответственно на 1,6 и 1,7 дня, при Р<0,05), тогда как сроки отлипания ушной раковины не отличались от контрольных величин. У этих же крысят интенсифицировались и процессы формирования сенсорно-двигательных рефлексов. Так, скорость выполнения сенсорно-двигательных рефлексов опережалась в тесте "отрицательный геотаксис" в среднем на 29% (Р<0,05). По другим координаторным параметрам в тестах "избегание обрыва" "переворачивание на плоскости" и в "воздухе" различий с контролем не обнаружено. При этом в поведенческой активности тест "открытое поле", у этих крысят выявлено укорочение времени выхода из центра в среднем на 20% и недостоверное увеличение количества пересеченных ими квадратов в среднем на 24%.

В тесте "мышечная сила" у крысят 1-ой и 2-ой группы выявлена незначимая тенденция (15-20%) увеличения периода времени удерживания лапками крысенка за металлическую сетку. Подобное действие бромантана, но только в экспериментах на половозрелых животных было установлено И.С.Морозовым (1995), С.А.Сергсевой и соавт., (1995).

Таким образом, из результатов проведенных исследований можно заключить, что препарат бромантан, при введении лактирующим крысам самкам проникает с молоком матери в организм крысят и оказывает влияние на прирост их массы тела, формирование мышечной силы, сенсорно-двигательных рефлексов и поведенческую активность.

При вскрытии и микроскопическом обзоре внутренних органов инфантильных крысят, матерям которых в период лактации вводили бромантан, патологических изменений не обнаружено. Вместе с тем, у данных крысят выявлены отчетливые тенденции повышения коэффициентов масс селезенки, надпочечников, гонад и снижения массы тимуса (таблица 3).

В последующем, учитывая фармакокинетические особенности всасывания, распределения и кумуляции в жировых тканях препаратов (Морозов И.С. и соавт, 1995; Кудрин B.C. и соавт., 1995; Сергеева С.А. и соавт., 1995) сочли целесообразным проследить за физическим и половым развитием крысят в ювенильный и пубертатный периоды.

В данных исследованиях у крысят, перешедших на дефинитивное питание, выявлены сдвиги в темпах прироста массы тела, сроках полового созревания и поведения. При этом у крысят в 1-ой и 2-ой группах отмечена тенденция опережения прироста массы тела во все сроки наблюдений. Наиболее выраженный прирост массы тела зафиксирован у крысят в 1-ой группе, который составил в ювенильный период (с 28-го по 60-й дни наблюдений) - 35% и в пубертатный период (с 75-го по 90-й дни жизни) - 50%. В сравнении с контролем у крысят 2-ой группы тенденция опережения прироста массы тела в ювенильный и пубертатный период была ровной и менее выраженной и составила в среднем 20%.

Из результатов морфологических исследований внутренних органов ювениль-ных и пубертатных крысят 1-ой и 2-ой группы значимых микроскопических изменений в паренхиматозных органах не обнаружено. При этом, у ювенильных крысят 1-ой группы оказались сниженными коэффициенты масс селезенки (24%, Р<0,05), печени (11%, Р>0,05), почек (8%, Р>0,05) и надпочечников (29%, Р<0,05), но увеличивались коэффициенты масс гонад 22% (Р<0,05) и тимуса (10%, Р>0,05). В пубертатный период у указанной группы крысят, обнаружена тенденция снижения коэффициентов массы гонад в среднем на 11%, тогда как масса тимуса существенно возрастала в среднем на 31% (Р<0,05). Коэффициенты же масс печени и почек выравнились до контрольных величин. Подобные результаты были обнаружены и у крысят во 2-ой группе. При этом у них в ювенильном возрасте повышались коэффициенты массы гонад в среднем на 26% (Р<0.05), тогда как в пубертатном возрасте масса гонад снижалась в среднем на 10%. При этом, коэффициенты масс почек и надпочечников выранились до контрольных значений.

При тестировании поведенческой активности (тест "открытое поле") у крысят 1-ой группы в ювенильный период развития (1 и 2 месяцы жизни) отмечено угнетение горизонтальных перемещений (17%) и эмоциональности (30%), но увеличение количества заглядываний в норки (20%). В пубертатный период развития (3 месяц жизни) у указанной группы крысят достоверно повышалась эмоциональность (в 2,5 раза), тогда как двигательная активность в "открытом поле" не отличалась от контрольной группы животных.

В поведенческой активности ювенильных крысят 2-ой группы (матерям в период лактации вводили бемитил в дозе 100 мг/кг) отмечалось недостоверное повышение числа горизонтальных перемещений (16%) и заглядываний в норки (26%). При этом у них достоверно снижалась эмоциональность (55%). В пубертатный период развития у данной группы крысят сохранялась тенденция активации подвижности (43%, Р<0,05) и повышалась эмоциональность (29%).

По результатам отдаленного влияния препарата бемитил на способность юве-нильных крысят к обучению и запоминанию (тест "УРПИ"), выявлены положительные сдвиги в мнестических реакциях. Так, при обучении у крысят в 1-ой группе удлинялся латентный период захода в темную камеру в среднем на 58% (Р<0,05) и по-

вышались пороги чувствительности (24%) и вокализации (26%) к электроболсвому раздражению. При воспроизведении данного навыка, у этих крысят снижалось время нахождения в темной камере (23%) и количество заходов в нее (33%), тогда как латентное период захода в эту камеру не изменялся. У крысят во 2-ой группе при обучении также удлинялся латентный период захода в темную камеру (в 3 раза, Р<0,05), тогда как пороги чувствительности (11%) и вокализации (14%) к электороболевому раздражению наоборот снижались. При воспроизведении данного навыка, у эти крысят укорачивался латентный период захода в темную камеру (32%), уменьшалось время нахождения в темной камере (54%, Р<0,05) и количество заходов в нее (49%, Р<0,05).

Таким образом, на основании проведенных исследований можно заключить о наличии отдаленного влияния бемитила вводимого лактирующим крысам матерям на физическое созревание и поведенческую активность ювенильных и пубертатных крысят.

При этом в экспериментах по оценке полового созревания у крысят в 1-ой группе обнаружено запаздывание сроков опущения яичек в мошонку у самцов и открытия вагины у самок в среднем на 1,3 дня, а у крысят во 2-ой группе, указанные параметры полового созревания достоверно опережались в среднем на 2,8 дня у самцов и на 3,1 дня у самок (таблица 4).

В исследованиях эстрального цикла у крысят самок 1-ой группы наблюдалось достоверное увеличение частоты встречаемости стадий проэструса (40%) и тенденция снижения встречаемости стадий диэструса (8%) и метаэструса (11%), тогда как стадии эструса соответствовали контрольным значениям. У 2-ой группы самок частота встречаемости проэструса увеличивалась более существенно (59%, Р<0,05), тогда как частота диэструса и эструса достоверно снижалась на 17 и 18% соответственно.

Таблица 4

Отдаленное влияние препарата бемитил на постнатальное развитие крысят.

Исследуемые параметры

бемитил 20 мг/кг

Бемитил 100 мг/кг

Периоды наблюдений

1 месяц

з месяца

1 месяц

3 месяца

Масса тела крысят

4+

4+

0,5

0,5

Горизонтальная активность

2-

3+*

Исследовательская активность

2+

2+

Эмоциональная активность

2-

4+*

Опущение яичек в мошонку у самцов

Открытие вагины у самок

Половое поведение

2-

Коэффициенты гонад

2+*

3+»

Коэффициенты тимуса

2+*

2+*

Коэффициенты печени

0,5+

0,5-

0,5+

Коэффициенты селезенки

3-*

3-*

Коэффициенты надпочечников

2-

0,5-

Примечание: * - результаты достоверны относительно контроля при Р<0,05; Значения " +" или " -" представленные в таблице, приравниваются к изменениям равным 10%;

Значения "0,5 + " или "0,5-" приравниваются к недостоверной тенденции изменений; Значение "О" обозначает отсутствие эффекта.

При тестировании полового поведения у пубертатных крысят в 1-ой и 2-ой группах выявлено достоверное угнетение половых мотиваций к спариванию, проявляющихся в виде обнюхивания, взаимного груминга, характерных поз: - лордозов у самок и покрытия и интрамиссий у самцов. Полученные данные согласуются с результатами исследований Л.И. Бугаевой и соавт., (2001) в которых также было установлено наличие отдаленного угнетающего влияния бемитила на половое поведение животных. Авторы работы полагают, что выявленные эффекты у препарата обусловлены его стимулирующим центральным вмешательством в выработку гонадотропи-нов.

Таким образом, из представленных результатов можно заключить, что в отдаленные сроки бемитил также отчетливо влияет не только на физическое, но и на половое созревание крысят. Возможно, указанное влияние у препарата, обусловленно его первоначальным вмешательством в гипоталамо-гипофизарную функцию выработки гонадотропинов у развивающихся крысят. Данное заключение в какой-то степени согласуется и с выше приведенными результатами на пометах крысятах, матерям которых препарат вводили в период органогенеза.

В другой серии исследований на ювенильных и пубертатных крысятах, лакти-рующим матерям которых вводили бромантан в дозах 30 и 150 мг/кг (1 и 2 группа соответственно) также выявлены изменения в темпах прироста массы тела, сроках полового созревания и поведения. При этом, прирост массы тела в сравнении с контролем, у крысят в 1-ой и 2-ой группах несущественно опережал контрольные значения во все сроки наблюдений. В ювенильный период опережение прироста массы тела крысят 1-ой группы составило в среднем 20% и в пубертатный период - в среднем 31%. У крысят во 2-ой группе опережение прироста массы тела в ювенильный период составило в среднем 35% и в пубертатный период - 16%.

Из результатов морфологических исследований внутренних органов у крысят в 1-ой и 2-ой группах значимых изменений в архитектонике кровенаполнения тканей исследуемых паренхиматозных органов не обнаружено. При этом, у крысят в юве-нильный период достоверно повышались коэффициенты масс селезенки (35%) и гонад (17%), и недостоверно снижались коэффициенты массы тимуса (17%), надпочечников (28%, Р<0,05) и печени (5%). В пубертатный период у крысят наблюдалось выравнивание до контрольного уровня коэффициентов масс иммунокомпетентных и половых органов.

В дальнейших исследованиях по изучению отдаленного влияния препарата бромантан на поведение (тест "открытое поле") у крысят в 1-ой группе (матерям в период лактации вводили бромантан в дозе 30 мг/кг) отмечено увеличение горизонтальных перемещений (22%), исследовательской активности (40%, Р<0,05) и эмоциональности (29%). Указанные изменения нивелировались до уровня контрольных значений в пубертатном возрасте.

В поведенческой активности ювенильных крысят 2-ой группы (матерям в период лактации вводили бромантан в дозе 150 мг/кг) отмечено достоверное увеличение эмоциональности (63%) и недостоверное снижение горизонтальных перемещений (22%). В пубертатный же период развития у этой группы также наблюдалось выравнивание тестируемых параметров до контрольных величин.

По результатам исследований отдаленного влияния препарата бромантан на процессы обучения и запоминания (тест "УРПИ") ювенильных крысят выявлено, что при обучении 1-ой группы крысят удлинялся латентный период захода в темную камеру (в среднем на 24%), повышались пороги чувствительности (11%) и вокализации (19%) к элсктроболевому раздражению. При воспроизведении данною навыка, количество заходов в темную камеру соответствовало контрольным величинам, тогда как

время нахождения в ней у крысят самцов увеличивалось (в 2,5 раза, при Р<0,05), а у самок снижалось (35%).

У крысят во 2-ой группе, при обучении также удлинялся латентный период захода в темную камеру (17%), пороги чувствительности (9%) и вокализации (18%) к элсктороболевому раздражению. При воспроизведении данного навыка, у этой группы крысят удлинялся латентный период захода в темную камеру (25%, при Р<0,05), увеличивалось время нахождения в темной камере (в 2,5 раза, при Р<0,05) и количество заходов в нес (50%).

Таким образом, можно предположить, что бромантан при введении крысам самкам в период молочного вскармливания потомства, в отдаленный период времени оказывает незначительное влияние на процессы усвоения информации и ее консолидации у крысят самцов и самок.

При оценке возможного отдаленного влияния бромантана на половое созревание, у крысят в 1-ой группе установлено опережение сроков опущения яичек в мошонку у самцов в среднем на 2,2 дня и открытия вагины у самок - на 1,8 дня (Р<0,05). У крысят во 2-ой группе указанные параметры полового созревания опережались в среднем на 0,2 дня у самцов и на 1,4 дня у самок (таблица 5).

Таблица 5.

Отдаленное влияние препарата бромантан на постнатальное развитие крысят.

Исследуемые параметры Бромантан 30 мг/кг Бромантан 150 мг/кг

Периоды наблюдений 1 месяц 3 месяца 1 месяц 3 месяца

Масса тела крысят 2+ 2+ 4+ 2+

Горизонтальная активность + 0,5+ 2- 0,5+

Исследовательская активность 3+* 0 0 0.5+

Эмоциональная активность 2+ + 4+* +

Опущение яичек в мошонку у самцов +* +

Открытие вагины у самок +* +

Половое поведение 2+ 2+*

Коэффициенты гонад 2+* 0,5+ 2+* 0,5+

Коэффициенты тимуса 2- 0,5+ 2- 0,5+

Коэффициенты печени 0,5- 0,5+ 0,5- 0,5+

Коэффициенты селезенки 3+» 0,5+ 4+* 0,5+

Коэффициенты надпочечников 2-* 0 2- 0

Примечание: * - результаты достоверны относительно контроля при Р<0,05; Значения " +" или " -" представленные в таблице, приравниваются к изменениям равным 10%;

Значения "0,5 + " или "0,5-" приравниваются к недостоверной тенденции изменений;

Значение "О" обозначает отсутствие эффекта.

При исследовании эстрального цикла у крысят самок в 1-ой группе выявлено укорочение частоты встречаемости стадий эструса (27%, Р<0,05) и тенденция удлинения встречаемости стадий диэструса (14%) и метаэструса (8%). Встречаемость про-эструса соответствовала контрольным значениям. У крысят самок 2-ой группы также укорачивалась частота встречаемости стадий эструса (35%, Р<0,05), диэструса (14%), метаэструса (25%), тогда как встречаемость проэструса соответствовала контрольным значениям.

При тестировании у трех месячных крысят полового поведения, выявлены эффекты свидетельствующие о наличии отдаленного стимулирующего влияния броман-

тана на половые мотивации животных. Так, у крысят в 1-ой группе выявлено повышение половых мотиваций к ухаживанию и спариванию, проявляющиеся в виде взаимного груминга, облизывания, характерных поз: - лордозов у самок (в среднем на 12%) и попыток покрытия у самцов (в среднем на 31%). У крысят во 2-ой группе также повышалось количество подходов самки к самцу (18%, Р<0,05) и самца к самке (21%, Р<0,05). Учитывая, наличие дофаминергического механизма у бромантана (Бугаева Л.И., Иежица И.Н., 1998; 2001) и то, что половые мотивации животных во многом зависят от дофамин-, серотонин- и холинергических структур (Йен С.С.К. и со-авт., 1998), можно предположить, что повышение половой активности у крысят под влиянием препарата бромантан, связано с его ранним дофаминопозитивным действием на функцию центральной выработки гонадотропных гормонов. Данное предположение согласуется и с исследованиями на взрослых половозрелых крысах (Спасов Л.А. и соавт., 2001), в которых выявлено стимулирующее действие бромантана после его отмены на половые мотивации и спаривающую активность крыс.

Таким образом, на основании проведенных исследований можно заключить, что препараты бемитил и бромантан, вводимые беременным крысам самкам в период органогенеза, а также лактирующим крысам матерям, вскармливающих молоком свое потомство, проникают в организм крысят и оказывают при этом раннее и отдаленное влияние на процессы эмбрионального и постнатального физического развития.

ВЫВОДЫ

1. Актопротекторные препараты бемитил и бромантан, при введении крысам самкам в период беременности и молочного вскармливания потомства, оказывают раннее и отдаленное влияние на физическое развитие крысят.

2. Препараты бемитил и бромантан, при антенатальном введении беременным крысам самкам в период органогенеза стимулируют эмбриональное развитие плодов и снижают их гибель в постимплантационнный период.

3. У постнатальных крысят, матерям которых в период органогенеза вводили бемитил и бромантан ускорялись прирост массы тела, сенсорно-двигательные рефлексы, увеличивалась мышечная сила. Кроме того, у пометов крысят, матерям которых в период беременности вводили бемитил, улучшались процессы обучения, но снижалась двигательная активность и запаздывали сроки полового созревания. У по-томств крысят, матерям которых в период беременности вводили бромантан, ускорялись сроки полового созревания, повышалась двигательная активность, но угнетались процессы обучения и запоминания.

4. Препарат бемитил, через два часа после введения лактирующим матерям обнаруживается в крови и молочных железах этих крыс самок, а также и в содержимом желудка вскармливаемых ею крысят.

5. Бемитил и бромантан, при введении лактирующим крысам матерям оказывают, зависимые от дозы, ранние и отдаленные эффекты на физическое и половое развитие вскармливаемых крысят.

6. У потомства инфантильных крысят, матери которых в период их молочного вскармливания получали бемитил стимулировались процессы формирования мышечной силы и сенсорно-двигательных рефлексов. У этих крысят повышались коэффициенты масс селезенки, надпочечников и гонад. У потомств ювенильных и пубертатных крысят, матерям которых в период лактации вводили бемитил, снижалась двигательная и половая активности, а также коэффициенты масс селезенки, надпочечников и гонад, сдвигались сроки полового созревания: запаздывали у крысят, матерям которых в период лактации вводили бемитил в дозе 20 мг/кг и ускорялись - у крысят, матерям которых в период лактации бемитил вводили в дозе 100 мг/кг.

7. У потомств инфантильных крысят, матери которых в период их молочного вскармливания получали бромантан ускорялся прирост массы тела, стимулировались процессы формирования резцов, открытия глаз, мышечной силы и сенсорно-двигательных рефлексов. У данных крысят повышались коэффициенты масс селезенки и гонад. У потомств ювенильных и пубертатных крысят, матерям которых в период лактации вводили бромантан, стимулировался прирост массы тела, повышались двигательная и исследовательская активности, увеличивалась эмоциональность и половое поведение, ускорялись сроки полового созревания, повышались коэффициенты масс гонад.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Денисова Т.Д. Влияние препарата бемитил на развитие крысят в постнаталь-ном периоде /Т.Д. Денисова, С.Р. Скрипник //Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины, посвященной 240-летию ММА им. И.М.Сеченова: Тез. докл. Материалы конф. молодых ученых России с международным участием. - М, 1998. -С.302-303

2. Бугаева Л.И. Влияние препарата бемитил на постнатальное развитие потомства /Л.И. Бугаева, А.А. Спасов, Т.Д. Денисова //От Materia medica к современным медицинским технологиям: Тез. докл. Всерос. науч. конф., 13-15 мая 1998, СПб., 1998.-С.29-30

3. Денисова Т.Д. Влияние препарата бромантан на физическое развитие крысят /Т.Д. Денисова, Л.И. Бугаева //Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии: Тез. докл. Всерос. науч. конф. 2-5 июня 1999, СПб., 1999. -С.61

4. Денисова Т.Д. Аспекты влияния препарата бемитил на половое созревание крысят /Т.Д. Денисова, Л.И. Бугаева //Материалы 55-й региональной конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров: Сб. науч. труд. - Пятигорск, 2000. -С.185-186

5. Колебошина А.А. Влияние препарата бромантан на половое созревание крысят /А.А. Колебошина, Т.Д. Денисова //Материалы 58-й итоговой науч. конф. студентов и молодых ученых, посвященной 65-летшо Волгоградской медицинской академии: Тез. докл. 13-14 апреля 2000, Волгоград, 2000. - С.41

6. Арькова Н.В. Проницаемость препарата бемитил через лактационный барьер /Н.В. Арькова, Т.Д. Денисова //Материалы 58-й итоговой науч. конф. студентов и молодых ученых, посвященной 65-летию Волгоградской медицинской академии: Тез. докл. 13-14 апреля 2000, Волгоград, 2000. - С.6-7

7. Бугаева Л.И. Влияние препарата бромантан на развитие крысят в онтогенезе /Л.И. Бугаева, А.А. Спасов, Т.Д. Денисова //Вестник Волгоградской медицинской академии: Сб. науч. трудов. - Волгоград, 2000. - N6, Т.56. - Вып.6.-С.49-52

8. Денисова Т.Д. Влияние препаратов бемитил и бромантан на развитие мышечной силы у развивающегося потомства /Т.Д. Денисова //V региональная конф. молодых исследователей Волгоградской области: Тез. докл. 21-24 ноября 2000, Волгоград, 2000.-С.249

9. Денисова Т.Д. Влияние препарата бромантан на половое развитие потомства /Т.Д. Денисова, Л.И. Бугаева, А.А. Спасов //Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики: Тез. докл. Материалы науч.-практ. конф. посвященной 35-летию фармацевтического факультета. - Курск, 2001.-С.241-243

10. Денисова Т.Д. Влияние бемитила на неврологический статус развивающихся крысят /Т.Д. Денисова, Л.А. Смирнова, Л.И. Бугаева, Л.А. Спасов //Материалы 56-й региональной конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров: Сб. науч. тр. - Пятигорск, 2001.-С. 186-187

11. Спасов Л.Л. Раннее и отдаленное влияние препарата бромантан на физическое и половое созревание крысят /Л.А. Спасов, Л.И. Бугаева, Т.Д. Денисова //Вестник Волгоградской медицинской академии: Сб. науч. тр. - Волгоград, 2001.-N7, Т.57.-С.39-43

12. Денисова Т.Д. Влияние токсических доз бемитила и бромантана на половое развитие крысят /Т.Д. Денисова //Материалы 59-й итоговой науч. конф. студентов и молодых ученых Волгоградской медицинской академии: Тез. докл. 9-20 апреля 2001. - Волгоград, 2001.-С.26

13. Бугаева Л.И. Влияние препаратов бемитил и бромантан на развитие крысят в онтогенезе /Л.И. Бугаева, Т.Д. Денисова //Медицина в начале нового века: Достижения и перспективы: Тез. докл. Материалы 60-й юбилейной открытой итоговой науч. конф. студентов и молодых ученых Волгоградской медицинской академии. 23-26 апреля 2002. - Волгоград, 2002.-С. 140

14. Денисова Т.Д. Влияние препаратов бемитил и бромантан на развитие крысят в онтогенезе /Т.Д. Денисова //Материалы науч.-практ. конф., посвященной 150-летию со дня рождения Н.Е.Веденского: Тез. докл. - Волгоград, 2002.-С.10-11

15. Спасов А.Л. Способы влияния актопротекторных препаратов на развитие инфантильных крысят /Л.А. Спасов, Л.И. Бугаева, Т.Д. Денисова, Л.А. Смирнова //Фундаментальные проблемы фармакологии: Сб. тезисов 2-го съезда Рос. науч. о-ва фармакологов, 21-25 апреля 2003. - М, 2003.-Ч.2.-С.188

Автореферат

Формат 60x84 '/ц. Бумага офсетная №1-65 гр. Печать офсетная. Гарнитура Таймс Тираж 100 экз. Заказ № 1607

Отпечатано ООО «Бланк». Лиц. № 3550 г. Волгоград, ул. Скосырева, 2а

f13329

Актуальность проблемы. До настоящего времени проблема употребления лекарственных препаратов женщинами детородного возраста остается малоизученной и актуальной. Показано (Савельева Г.М., 2003; Фролова О.Г. и соавт., 2003; Арушанян Э.Б., 2003; Кеппа К., et al 2004), что назначение женщинам в периоды беременности и молочного вскармливания многих психотропных препаратов, таких как производных бензодиазепинов, барбитуровой кислоты, препаратов лития, производных ксантина сопряжено с их проникновением в организм ребенка и влиянием на процессы его антенатального и постнатального развития (Петров В.И. и соавт., 1992; Дубовицки М. и соавт., 1996; Лаакман Г. и соавт., 1998; Birnbaum C.S., 1999; Arnon J., 2000; Burt V.K., et al 2001).

В последние десятилетия в клиническую практику была внедрена новая группа психотропных средств, с актопротекторным типом действия. В данную группу вошли препараты "бемитил" (производное бензимидазола) и "бромантан" (производное адамантана). Указанные препараты обладают специфическим мембранопротекторным действием (Морозов И.С. и соавт., 1999; 2001), используются в лечении и коррекции психического и физического состояния человека, находящегося в стрессорных условиях, хорошо переносятся при длительном приеме. Известно, что бемитил и бромантан малотоксичны (Бугаева Л.И. и соавт., 2000), липоидотропны, способны накапливаться в ЦНС и гонадах (Сергеева С.А. и соавт., 1995; 2000), стимулируют половую активность у крыс, влияют на процессы зачатия (Иежица И.Н., 1998; Спасов A.A. и соавт., 2000; Кузубова Е.В., 2001).

Учитывая вышеприведенные сведения, сочли целесообразным исследовать особенности эмбрионального и постнатального развития крысят, матерям которых бемитил и бромантан вводили в периоды беременности и молочного вскармливания своего потомства.

Настоящая работа выполнялась в рамках научно-исследовательской темы "Изучение общетоксических и эмбриотоксических свойств новых веществ с целью определения безопасности их применения", которая входит в основной план Волгогрдского Государственного медицинского университета. Тема работы утверждена на Заседании Совета Волгоградской медицинской академии 14 января 1998 года (протокол N 7).

Целью настоящей работы явилось исследование ранних и отдаленных эффектов бемитила и бромантана, при введении беременным и лактирующим самкам на эмбриональное и постнатальное развитие потомства.

В соответствии с поставленной целью предусматривалось решение следующих задач:

1.Изучить влияние бемитила и бромантана при антенатальном введении беременным самкам на эмбриональное и постнатальное развитие потомства.

2.Исследовать особенности действия бемитила и бромантана, при введении лактирующим крысам матерям на физическое и половое развитие потомства.

3.Установить возможность проникновения препаратов с молоком матери в организм молочных крысят.

4.Исследовать возможное отдаленное действие бемитила и бромантана на физическое и половое развитие крысят.

5.Определить особенности дозозависимого действия препаратов на постнатальное развитие крысят, в ранние и поздние сроки.

Научная новизна. Впервые исследованы эффекты влияния актопротекторных препаратов бемитила и бромантана на эмбриональное и постнатальное развитие крысят. На примере бемитила изучена возможность проникновения препаратов с молоком матери в организм крысят. Определена степень дозозависимого влияния актопротекторных препаратов на состояние кормящей самки и ее потомства. Установлено отсутствие повреждающего действия бемитила и бромантана на крыс матерей в периоды беременности и молочного вскармливания потомства. Выявлено стимулирующее влияние препаратов на мышечную силу, на формирование сенсорно-двигательных рефлексов и половое развитие крысят.

Научно-практическая ценность. Изучены ранние и отдаленные эффекты влияния актопротекторных препаратов бемитила и бромантана на эмбриональное развитие и постнатальное формирование крысят, матерям которых препараты вводили в периоды беременности и молочного вскармливания своего потомства. Полученные данные можно использовать в планировании клинических исследований и прогнозе возможных эффектов препаратов.

Реализация результатов исследования. Полученные данные при изучении действия препаратов бемитила и бромантана на лактацию, выделение их с молоком матери, и влияние на постнатальное развитие крысят, вошли в пакет документов представленных в ФК МЗ РФ, и будут использованы в коррекции показаний и противопоказаний при клиническом использовании. Данные, полученные по действию актопротекторных препаратов на постнатальное развитие потомства, используются в научно-исследовательской работе НИИ фармакологии ВолГМУ и НИИ фармакологии РАМН, а также в лекционном материале кафедры фармакологии Волгоградского медицинского Университета, Кубанской медицинской академии и Воронежской медицинской академии.

Основные положения, выносимые на защиту.

1.Препараты бемитил и бромантан при введении крысам самкам в период беременности и молочного вскармливания потомства, оказывают раннее и отдаленное стимулирующее влияние на физическое развитие крысят.

2.Препарат бемитил с грудным молоком попадает в организм вскармливаемых крысят.

3.Препараты бемитил и бромантан при антенатальном введении беременным крысам самкам в период органогенеза снижают постимплантационную гибель плодов и оказывают благоприятное влияние на эмбриогенез.

4.Препараты бемитил и бромантан при введении лактирующим матерям самкам оказывают стимулирующее влияние на физическое и половое созревание крысят в инфантильный, ювенильный и пубертатный периоды развития.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы представлены на научных сессиях молодых ученых Волгоградского медицинского Университета (1997-2003), Научной конференции молодых ученых России с международным участием "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины", посвященной 240-летию ММА им. И.М.Сеченова (Москва, 1998), Всероссийской научной конференции "От Materia medica к современным медицинским технологиям" (Санкт-Петербург, 1998), Всероссийской научной конференции "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии" (Санкт-Петербург, 1999), Научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств "Лекарства-человеку" (Харьков, 1999), "55-й и 56-й региональной конференции по фармации, ф фармакологии и подготовке кадров" (Пятигорск, 2000; 2001), Научнопрактической конференции, посвященной 35-летию фармацевтического факультета "Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики" (Курск, 2001), Научно-практической конференции, посвященной 150-летию со дня рождения Н.Е.Веденского (Волгоград,

2002), 2-го съезда Российского Научного Общества фармакологов "Фундаментальные проблемы фармакологии" (Москва, 2003).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 218 страницах машинописного текста и проиллюстрирована 76 таблицами и 2 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (главы 2-5), обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 277 отечественных и 85 зарубежных источников.

Выводы

1 Актопротекторные препараты бемитил и бромантан, при введении крысам самкам в период беременности и молочного вскармливания потомства, оказывают раннее и отдаленное влияние на физическое развитие крысят.

2 Препараты бемитил и бромантан, при антенатальном введении беременным крысам самкам в период органогенеза стимулируют эмбриональное развитие плодов и снижают их гибель в постимплантационный период.

3 У постнатальных крысят, матерям которых в период органогенеза вводили бемитил и бромантан ускорялись прирост массы тела, сенсорно-двигательные рефлексы, увеличивалась мышечная сила. Кроме того, у пометов крысят, матерям которых в период беременности вводили бемитил, улучшались процессы обучения, но снижалась двигательная активность и запаздывали сроки полового созревания. У потомств крысят, матерям которых в период беременности вводили бромантан, ускорялись сроки полового созревания, повышалась двигательная активность, но угнетались процессы обучения и запоминания.

4 Препарат бемитил, через два часа после введения лактирующим матерям обнаруживается в крови и молочных железах этих крыс самок, а также и в содержимом желудка вскармливаемых ею крысят.

5 Бемитил и бромантан, при введении лактирующим крысам матерям оказывают, зависимые от дозы, ранние и отдаленные эффекты на физическое и половое развитие вскармливаемых крысят.

6 У потомства инфантильных крысят, матери которых в период их молочного вскармливания получали бемитил стимулировались процессы формирования мышечной силы и сенсорно-двигательных рефлексов. У этих крысят повышались коэффициенты масс селезенки, надпочечников и гонад.

У потомств ювенильных и пубертатных крысят, матерям которых в период лактации вводили бемитил, снижалась двигательная и половая активности, а также коэффициенты масс селезенки, надпочечников и гонад, сдвигались сроки полового созревания: запаздывали у крысят, матерям которых в период лактации вводили бемитил в дозе 20 мг/кг и ускорялись - у крысят, матерям которых в период лактации бемитил вводили в дозе 100 мг/кг.

7 У потомства инфантильных крысят, матери которых в период их молочного вскармливания получали бромантан ускорялся прирост массы тела, стимулировались процессы формирования резцов, открытия глаз, мышечной силы и сенсорно-двигательных рефлексов. У данных крысят повышались коэффициенты масс селезенки и гонад. У потомств ювенильных и пубертатных крысят, матерям которых в период лактации вводили бромантан, стимулировался прирост массы тела, повышались двигательная и исследовательская активности, увеличивалась эмоциональность и половое поведение, ускорялись сроки полового созревания, повышались коэффициенты масс гонад.

5.2.5. Заключение.

Проведенные исследования по изучению состояния развивающихся крысят, матерям которых в период лактации вводили препарат бромантан в дозах 30 и 150 мг/кг, позволили выявить существенные с контрольной (интактной) группой отличия в параметрах физического и полового созревания. Обобщенные данные о влияние препарата бромантан на постнатальное развитие крысят представлено в таблице 5.24. Из представленной таблицы видно, что у развивающихся крысят 2 группы (бромантан в дозе 30 мг/кг), в период их ювенильного и пубертатного созревания активировались процессы физического развития. Выявлено, что в указанные периоды развития, у этих животных повышался прирост массы тела как у самцов, так и у самок. У них же, в зависимости от выделенных периодов развития, неоднозначно изменялись коэффициенты массы внутренних органов. Так, в возрасте 30-ти дней, у крысят достоверно повышались коэффициенты масс селезенки и гонад. Одновременно с этим, у них снижались коэффициенты масс тимуса и надпочечников. У крысят в 60-ти дневном возрасте также были повышены коэффициенты масс селезенки и гонад. При этом фиксировалось выравнивание масс тимуса и надпочечников. К окончанию трех месячного возраста, у крысят этой группы наблюдалось выравнивание всех коэффициентов масс внутренних органов до контрольных величин.

У развивающихся крысят 3 группы (бромантан в дозе 150 мг/кг), также фиксировались ранние изменения в ювенильном и его отдаленные последствия в пубертатном периодах постнатального развития. Так, у тестируемых крысят этой группы наблюдалось опережение прироста массы тела как у самцов, так и у самок. У этих подопытных крысят в разные возрастные периоды повышались и коэффициенты масс внутренних органов. При этом, в 30-ти дневном возрасте у крысят дозозависимо повышались коэффициенты масс селезенки и гонад. Одновременно с этим, у них снижались коэффициенты масс тимуса и надпочечников. В 60-ти дневном возрасте у этих же крысят также повышались коэффициенты масс селезенки и гонад, тогда как коэффициенты масс тимуса и надпочечников выравнивались до контрольных величин. К окончанию пубертатного периода у тестируемых животных прослеживалось выравнивание коэффициентов масс внутренних органов до контрольных значений.

Ранние и отдаленные эффекты у препарата бромантан обнаружены у животных и в исследованиях поведенческой активности, тестируемых в "открытом поле". Отмечено, что у крысят 2 группы (матери которых в период молочного вскармливания своего потомства, получали бромантан в дозе 30 мг/кг) в 30-ти дневном возрасте, повышалась горизонтальная подвижность, иследовательская активность, а также число груминга и боллюсов. К двух-месячному возрасту, у этих же крысят наблюдалось снижение актов груминга и дефекаций. Вместе с тем, к трех-месячному возрасту все изменения в поведенческой активности у обозначенных животных нивелировались до уровня контрольных величин.

У крысят 3 группы (матери которых в период лактации, получали бромантан в дозе 150 мг/кг), в 30-ти дневном возрасте снижалась горизонтальная подвижность и фиксировалась тенденция снижения исследовательской активности, но повышалось число груминга и боллюсов. К двух-месячному возрасту, у этих же крысят активировались процессы обследования норок и вертикальных стоек. В возрасте трех месяцев у этих крысят наблюдалось выравнивание с контролем по параметрам горизонтальной активности. Вместе с тем, по числу вертикальных стоек и груминга, крысята 3 группы (как самцы, так и самки) отчетливо опережали контроль.

При исследование способности у ювенильных крысят к обучению и запоминанию (тест "УРПИ"), также обнаружены отдаленные эффекты препарата бромантан на формирование памятного следа. Установлено, что при обучение, у крысят 2-й группы (бромантан в дозе 30 мг/кг) и 3-й группы (бромантан в дозе 150 мг/кг) групп, повышался латентный период захода в темную камеру, а также порог чуствительности и вокализации к электроболевому раздражению. Повторно, при воспроизведение эксперимента, у крысят 3 группы достоверно повышался латентный период захода в эту темную камеру, тогда как нахождение в ней было увеличено в 2,5-3 раза. У крысят же 2 группы, латентный период захода в темную камеру практически не изменялся. При воспроизведение условий эксперимента, время нахождения в темной камере не изменялось у самок и достоверно повышалось в 2,5 раза у самцов.

Отдаленные эффекты влияния препарата бромантан выявлены и в серии наблюдений за половым созреванием крысят. Так, у крысят 2 группы (бромантан в дозе 30 мг/кг), сроки опущения яичек в мошонку у самцов и открытие вагины у самок достоверно опережали контрольные величины, тогда как у крысят 3 группы (бромантан в дозе 150 мг/кг) были менее выражены. При этом, у наблюдаемых животных 2 и 3 группы, повышалась половая активность, что проявлялось в повышении числа эмоциональных подходов друг к другу, и попыток покрытия. При исследование эстрального цикла у трех месячных самок 2 группы, увеличивалась встречаемость стадий диэструса и метаэструса, тогда как встречаемость эструса снижалась. Фаза проэструса не изменялась. У трехмесячных крыс самок 3 группы, недостоверно снижалась встречаемость стадий диэструса, метаэструса и достоверно эструса. Фаза проэструса не изменялась.